JP2002234884A - スチルベン８量体化合物、その製造方法及びそれを含む製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 高い抗酸化作用を発揮することができる新規
なスチルベン８量体化合物、その製造方法及びそれを含
む製剤を提供する。 【解決手段】 スチルベン８量体化合物は、下記化学式
（１）に示される有機化合物である。このスチルベン８
量体化合物は、フタバガキ科植物の樹皮を粉砕し、有機
溶媒で抽出処理を行った後、分子排除クロマトグラフィ
ーと吸着クロマトグラフィーとを組み合わせて精製する
ことによって製造されるのが好ましい。健康食品製剤、
美容製剤及び医薬品製剤はいずれも、前記スチルベン８
量体化合物を有効成分として含有している。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、分子式Ｃ₁₁₂Ｈ
₈₄Ｏ₂₄、分子量１８１２の有機化合物であり、１分子中
に８個のレスベラトロール(Resveratrol)骨格を有する
スチルベン・オクタマーである新規なスチルベン８量体
化合物及びその製造方法、並びに前記スチルベン８量体
化合物を有効成分として含有する健康食品製剤及び美容
製剤に関するものである。より詳しくは、ヴァテリア・
インディカ（Vateria indica）等のフタバガキ科植物の
樹皮から単離精製されたスチルベン８量体化合物、その
製造方法及びそれを含む製剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来より、ブドウ科、フタバガキ科、マ
メ科又はカヤツリグサ科の植物から、レスベラトロール
骨格（３，５，４’−トリヒドロキシスチルベン(trihy
droxystilbene)骨格）を基本単位とする種々のスチルベ
ン・オリゴマーが単離されている。これらのスチルベン
化合物はポリフェノール類に分類され、抗酸化作用、抗
炎症作用、抗ガン作用等の様々な生理活性を有している
ことが知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】この発明の目的とする
ところは、高い抗酸化作用を発揮することができる新規
なスチルベン８量体化合物、その製造方法及びそれを含
む製剤を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
めに、請求項１に記載の発明のスチルベン８量体化合物
は、下記化学式（１）に記載のものである。

【０００５】

【化２】 請求項２に記載の発明のスチルベン８量体化合物の製造
方法は、フタバガキ科植物の樹皮を粉砕し、有機溶媒で
抽出処理を行った後、吸着クロマトグラフィーを用いて
請求項１に記載のスチルベン８量体化合物を精製するこ
とを特徴とするものである。

【０００６】請求項３に記載の発明の健康食品製剤は、
有効成分として請求項１に記載のスチルベン８量体化合
物を含有することを特徴とするものである。請求項４に
記載の発明の美容製剤は、有効成分として請求項１に記
載のスチルベン８量体化合物を含有することを特徴とす
るものである。

【０００７】請求項５に記載の発明の医薬品製剤は、有
効成分として請求項１に記載のスチルベン８量体化合物
を含有することを特徴とするものである。

【０００８】

【発明の実施の形態】以下、この発明を具体化した実施
形態を図面に基づいて詳細に説明する。本実施形態のス
チルベン８量体化合物は、下記化学式（１）に示される
有機化合物である。このスチルベン８量体化合物は、分
子式Ｃ₁₁₂Ｈ₈₄Ｏ₂₄、分子量１８１２であり、１つの分
子中に８個のレスベラトロール（Resveratrol）（３，
５，４’−トリヒドロキシスチルベン）骨格を有するス
チルベン・オクタマーである。

【０００９】

【化３】 このスチルベン８量体化合物は、フタバガキ科植物の樹
皮を原料として単離精製された天然有機化合物であるの
が好ましく、フタバガキ科植物であるヴァテリア・イン
ディカ（Vateria indica）の樹皮を原料として単離精製
された天然有機化合物であるのがより好ましい。また、
化学的に合成されたものであってもよい。このスチルベ
ン８量体化合物は、高い抗酸化作用を発揮することがで
きるうえ、抗炎症作用（抗菌作用）や抗ガン作用も発揮
することができる。

【００１０】次に、上記スチルベン８量体化合物の製造
方法について記載する。上記スチルベン８量体化合物を
製造する際には、まず、原料としてのフタバガキ科植物
の樹皮を粉砕する。このとき、前記粉砕を容易に行うた
めに、フタバガキ科植物の樹皮を乾燥した後に粉砕する
のが好ましい。

【００１１】次に、前記粉砕された樹皮をメタノール、
エタノール、ブタノール等のアルコール、アセトン、酢
酸エチル等の有機溶媒を用いて抽出処理を行うことによ
り有機溶媒抽出画分を得る。前記有機溶媒としては、ス
チルベン８量体化合物が抽出されやすいことからアセト
ンを用いるのがより好ましい。また、この抽出処理にお
いては、１種類の有機溶媒で抽出処理を行ってもよく、
２種類以上の有機溶媒での抽出処理を適宜組み合わせて
行ってもよい。さらに、その後の精製過程をより円滑に
進行させるために、前記抽出処理後の抽出液から溶媒を
除去した残渣に、上記有機溶媒を添加して再度抽出処理
を行うことによって、不溶性画分を充分に除去するのが
好ましい。

【００１２】なお、前記抽出処理における有機溶媒の添
加量は、樹皮の重量（生木の重量）に対して５〜５０倍
量（ｗ／ｖ）であるのが好ましい。この添加量が樹皮の
重量の５倍量未満の場合には、充分な量のスチルベン８
量体化合物を抽出することができない。逆に５０倍量を
越える場合には、抽出処理に用いられる設備が巨大にな
るうえ、溶媒の除去作業の効率が低下することから好ま
しくない。

【００１３】次に、前記有機溶媒抽出画分を公知の分画
方法に従って精製する。前記分画方法としては、分子排
除クロマトグラフィー及び吸着クロマトグラフィーから
選ばれる少なくとも１種が好適に使用される。さらに、
前記分子排除クロマトグラフィーと吸着クロマトグラフ
ィーとを組み合わせて精製するのがより好ましい。

【００１４】前記分子排除クロマトグラフィーとして
は、種々のゲル濾過カラムクロマトグラフィーが挙げら
れる。また、前記吸着クロマトグラフィーとしては、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（順相系又は逆相
系）、疎水クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィ
ー（ＴＬＣ）等が好適に使用される。

【００１５】また、スチルベン８量体化合物に対するモ
ノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を作製し、そ
れらの抗体を結合させたクロマトグラフィー担体を用い
てアフィニティークロマトグラフィーを行ってもよい。
その他、公知のイオン交換クロマトグラフィー（陽イオ
ン交換クロマトグラフィー又は陰イオン交換クロマトグ
ラフィー）、ろ紙クロマトグラフィー、アルミナ吸着ク
ロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイト吸着クロマト
グラフィー等の吸着クロマトグラフィー、ガスクロマト
グラフィーを適用してもよい。

【００１６】さらに、前記分画方法としては、一度に大
量の処理を行うことができることから、分取用の（Prep
arative）クロマトグラフィーを使用するのが好まし
い。また、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を
使用してもよい。

【００１７】本実施形態の健康食品製剤は、上記スチル
ベン８量体化合物を有効成分として含有するものであ
る。この健康食品製剤としては、上記スチルベン８量体
化合物を種々の食品素材又は飲料品素材に添加すること
によって、例えば、粉末状、錠剤状、液状（ドリンク剤
等）、カプセル状等の形状の健康食品製剤として使用さ
れる。また、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤等
を適宜添加してもよい。

【００１８】本実施形態の美容製剤は、上記スチルベン
８量体化合物を有効成分として含有するものである。こ
の美容製剤としては、上記スチルベン８量体化合物を食
品素材、飲料品素材又は化粧品素材に添加することによ
って、例えば、液状、乳液状、半固形状（クリーム
状）、粉末状等の形状の美容食品、美容飲料又は化粧品
として使用される。また、これらの美容製剤は、目的や
用途に応じて、経口又は経皮投与することによって使用
される。前記化粧品は、化粧の種類に応じて、アルコー
ル類、油脂類界面活性剤、精製水等が適宜添加される。

【００１９】本実施形態の医薬品製剤は、上記スチルベ
ン８量体化合物を有効成分として含有するものである。
この医薬品製剤は、抗酸化剤、抗炎症剤又は抗ガン剤と
して、常法に従って医薬品又は医薬部外品として利用さ
れる。医薬品としては、経口剤又は非経口剤として利用
され、医薬部外品としては、ドリンク剤、石鹸、歯磨き
粉等に配合されて利用される。

【００２０】経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散
剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記錠剤
及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形
剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いる
ことができる。前記錠剤は、シェラック又は砂糖で被覆
することもできる。また、カプセル剤の場合には、上記
の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることがで
きる。シロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、
防腐剤、色素香味剤等を含有させることができる。

【００２１】非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、
水剤等の外用剤が挙げられる。この外用剤の基材として
は、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロ
ゴールド等が好適に用いられ、通常の方法によって軟膏
剤やクリーム剤等とすることができる。

【００２２】これらの医薬品製剤中におけるスチルベン
８量体化合物の含有量としては、０．０１〜２０重量％
であるのが好ましい。このスチルベン化合物の含有量が
０．０１重量％未満の場合には、含有量が少なすぎるこ
とから必要量を摂取するのに非常に骨が折れる。逆に２
０重量％を越える場合には、医薬品製剤の安定性に寄与
している成分の含有量が相対的に低下することから、医
薬品製剤の安定性が低下する。一方、患者に投与する場
合には、１〜５００ｍｇを１日に１回又は数回投与する
のが好ましく、全日量（一日に摂取する総量）として２
〜１０００ｍｇを投与するのが好ましい。

【００２３】上記実施形態によって発揮される効果につ
いて、以下に記載する。 ・ 実施形態のスチルベン８量体化合物は、上記化学式
（１）に示されるものである。このスチルベン８量体化
合物は、高い抗酸化作用を発揮することができる。ま
た、高い抗炎症作用（抗菌作用）及び抗ガン作用も発揮
することができる。

【００２４】・ フタバガキ科植物の樹皮を粉砕し、有
機溶媒で抽出処理を行った後、吸着クロマトグラフィー
を用いてスチルベン８量体化合物を精製することによっ
て、高い抗酸化作用を発揮することができるスチルベン
８量体化合物を容易かつ確実に製造することができる。

【００２５】・ 実施形態の健康食品製剤は、スチルベ
ン８量体化合物を有効成分として含有するものである。
このため、高い抗酸化作用を発揮することができること
から、体内での過酸化物質の生成を抑制して老化の進行
を抑えることができる。また、脳卒中、心筋梗塞、ガン
等の生活習慣病の予防効果も発揮することができる。

【００２６】一方、実施形態の美容製剤及び医薬品製剤
は、いずれもスチルベン８量体化合物を有効成分として
含有していることから、前記健康食品製剤と同様の効果
を発揮することができる。

【００２７】

【実施例】以下、前記実施形態を具体化した実施例につ
いて説明する。 ＜スチルベン８量体化合物の単離精製＞ （実施例１）インドにて採取したヴァテリア・インディ
カの樹皮１．０ｋｇを乾燥した後に粉砕し、アセトン８
リットルを加え常温で１２時間抽出処理を行った後にそ
の上清を分取した。続いて、前記上清を分取した後の残
渣にアセトン８リットルを加えて同様に抽出処理を行っ
た。そして、このアセトンによる抽出処理を合計５回行
った後のアセトン分取液を１つにまとめた。

【００２８】次に、前記アセトンによる５回目の抽出処
理後の残渣に、メタノール８リットルを加え常温で１２
時間抽出処理を行った後、その上清であるメタノール分
取液を得た。さらに、前記メタノールによる抽出処理後
の残渣に、７０％メタノール８リットルを加え常温で１
２時間抽出処理を行った後、その上清である含水メタノ
ール分取液を得た。

【００２９】次に、上記アセトン分取液、メタノール分
取液及び含水メタノール分取液をそれぞれ減圧下濃縮す
ることによって、アセトンエキス１８５ｇ、メタノール
エキス８０ｇ及び含水メタノールエキス１５ｇを得た
（いずれも粉末状）。これら各エキスを後述するリノー
ル酸モデル系による抗酸化活性試験に従って抗酸化活性
を測定することによりスクリーニングしたところ、全て
のエキスで抗酸化活性が発揮されたが、アセトンエキス
で最も高い抗酸化活性が発揮された。なお、以下の精製
過程においても同様のスクリーニング方法が適用され
る。

【００３０】次に、前記アセトンエキス１８５ｇをアセ
トンに再溶解して可溶部と不溶部とに分離させた後、可
溶部１３０ｇについてのみ、乾式シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーによる分画を行ったところ、１〜１８の
フラクションが得られた。なお、前記カラムクロマトグ
ラフィーは、展開溶媒中のメタノール濃度を段階的に高
めることによって溶出させる方法を採用した。前記展開
溶媒としては、クロロフォルム：メタノールの量比を溶
出させる順に、１０：０、１０：１、５：１、０：１０
と段階的に変化させた。

【００３１】この得られた各フラクションについてスク
リーニングを行ったところ、フラクション１７に最も高
い抗酸化活性が確認された。次に、このフラクション１
７を用いて、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア
社製）ゲル濾過担体によりゲル濾過カラムクロマトグラ
フィー（展開溶媒はメタノール）を行った後にスクリー
ニングを行った。

【００３２】このゲル濾過カラムクロマトグラフィー及
びスクリーニングを合計３回行った後、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（メルク(Merck)社製）及びスク
リーニングを行った。なお、前記カラムクロマトグラフ
ィーは、展開溶媒中のメタノール濃度を徐々に上昇させ
る（濃度勾配をかけて溶出させる）ことによって溶出さ
せる方法を採用した。溶出開始時点での展開溶媒はクロ
ロフォルム：メタノールの量比が１０：１であり、溶出
終了時点での展開溶媒はクロロフォルム：メタノールの
量比が１：１０である。

【００３３】最後に、分取用ＴＬＣ（メルク社製のカイ
ゼルゲル（Kisel-gel 60 F254）、展開溶媒は酢酸エチ
ル）と、オクタデシル（ＯＤＳ）カラムクロマトグラフ
ィー(富士シリシア社製)とを用いて、スクリーニングを
行いながら抗酸化活性成分を精製することによって、褐
色粉末状の化合物９６ｍｇが得られた。

【００３４】さらに、この得られた化合物を分析用ＴＬ
Ｃ（展開溶媒は、酢酸エチル：クロロフォルム：メタノ
ール＝２０：１１：６）により分析することによって、
Ｒｆ値がほぼ０．３の位置に単一のスポットが確認され
た。また、この化合物は、後述するＮＭＲやマススペク
トロメトリーにても夾雑物が含まれていないことが確認
された。

【００３５】（実施例２）インドにて採取したヴァテリ
ア・インディカの樹皮１．０ｋｇを乾燥した後に粉砕
し、エタノール１０リットルを加え常温で１２時間抽出
処理を行った後にその上清を分取した。続いて、前記上
清を分取した後の残渣にエタノール１０リットルを加え
て同様に抽出処理を行った。そして、このエタノールに
よる抽出処理を合計６回行った後のエタノール分取液を
１つにまとめ、減圧下濃縮することによってエタノール
エキス１５５ｇ（粉末状）を得た。

【００３６】このエタノールエキスには抗酸化活性が確
認された。この得られたエタノールエキスの一部約２０
ｇをセファデックスＬＨ−２０（展開溶媒はエタノー
ル）により分画及びスクリーニングを合計５回行ったと
ころ、褐色粉末状の化合物１０ｍｇが得られた。さら
に、この得られた化合物を実施例１と同様に、分析用Ｔ
ＬＣ、ＮＭＲ及びマススペクトロメトリーを行った結
果、実施例１と同じ結果が得られたことから、実施例１
と同じ化合物が単離されたことが確認された。

【００３７】＜スチルベン８量体化合物の構造決定＞上
記実施例１で単離精製された化合物について、質量分析
計（ＪＥＯＬ社製のJMS-DX-300,JMA3500system）を使用
した高速原子衝突イオン化法による質量分析法でその分
子量を測定した。その結果、この化合物の分子量は１８
１２であった。

【００３８】続いて、測定装置（ＪＥＯＬ社製のα-50
0、EX-400、γ-300）を使用した核磁気共鳴分光法によ
り、プロトン及び¹³Ｃの核磁気共鳴スペクトル、Ｈ−Ｈ
ｃｏｓｙスペクトル、ＨＭＢＣスペクトル及びＨＭＱＣ
スペクトルを測定した。そして、核磁気共鳴スペクトル
を他のスペクトルと組み合わせて解析し、化合物の構造
決定を行った。化合物のケミカルシフトを表１及び表２
に、化合物の構造を図１に示す。なお、表１及び表２に
おいては、核磁気共鳴スペクトルのケミカルシフトはδ
で示し、このときの内部標準にはテトラメチルシラン
（ＴＭＳ）を使用した。

【００３９】

【表１】

【００４０】

【表２】 構造決定においては、まずプロトン及び¹³Ｃの核磁気共
鳴スペクトルをＨ−Ｈｃｏｓｙスペクトル及びＨＭＱＣ
スペクトルと組み合わせて解析した。その結果、芳香族
を示す領域においては、８個の4-hydroxyphenyl基の存
在を示すシグナルが観測された。これは、図１に示した
化合物中におけるＡ１，Ｂ１，Ｃ１，Ｄ１，Ｅ１，Ｆ
１，Ｇ１及びＨ１の各芳香環を示すものである。同様に
して、3.5-dihydroxyphenyl基であるＦ２及びＨ２、3,5
-dioxygenated-1,2,4-trisubstituted benzene ringで
あるＣ２、3,5-dioxygenated-1,2,6-4-trisubstituted
benzene ringであるＥ２の各芳香環が示された。

【００４１】脂肪族を示す領域においては、7b-8b-8c-7
c及び7e-8e-7g-8gの各位間にalphatic proton sequenc
e、7a-8a、7d-8d、7f-8f及び7h-8hの各位間にalphatic
methine protonの存在が示された。これに加え、ケミカ
ルシフトから見て、7a、7ｄ、7ｆ及び7ｈの各位の炭素
が酸素官能基に結合していると考えられる。そして、上
記の各部分構造は、レスベラトロール（resveratorol）
の８量体に相当するものであり、化合物の分子式として
Ｃ₁₁₂Ｈ₈₄Ｏ₂₄が示された。

【００４２】Ａ１〜Ｈ１と、Ａ２〜Ｈ２の各芳香環にお
ける４級炭素の帰属及び水酸基の帰属はＨＭＢＣスペク
トルの解析によって行った。例えば、芳香環Ａ１におけ
る2a(6a)位の水素と脂肪族中における7a位の炭素との間
にはＨＭＢＣスペクトルによるシグナルの相関が観察さ
れた。同様に、2b(6b)位と7b位、14b位と8b位、2c(6c)
位と7c位、14c位と8c位、2d(6d)位と7d位、14d位と8d
位、2f(6f)位と7f位、10f位と8f位、2g(6g)位と7g位、1
4g位と8ｇ位、2h(6h)位と7h位及び10h(14h)位と8h位の
これら全てに、水素と炭素のシグナルの相関が観察され
た。特に、Ｅ１及びＥ２の両芳香環においては、7e位と
1e位、8e位と1e位、8e位と10e位及び8e位と14e位の間に
水素と炭素のシグナルの相関が観察され、1e,10e及び14
e位の芳香族炭素と、7e及び8e位の脂肪族プロトンとの
関係が示された。

【００４３】上記した水素と炭素のシグナルの相関によ
りＡ１及びＡ２の芳香環と、それらの間に位置する7a及
び8a位のalphalic methine unitとによりレスベラトロ
ール（resveratrol）のＡ骨格が、同様にしてＢ１〜Ｈ
１及びＢ２〜Ｈ２の各芳香環と、それらの間のalphalic
methine unitとがレスベラトロール（resveratrol）の
B〜H骨格に帰属されるものと考えられる。

【００４４】芳香環Ｂ２において、9b及び11b位の２個
の芳香族炭素に対して、8a位の水素から相関が観測され
たことにより、8a位の炭素は芳香環Ｂ２の10b位に結合
しており、Ａ骨格は、芳香環Ｂ２と、dihydrobenzofura
n ringを形成するものと考えられる。また、芳香環Ａ２
の9a及び11a位とＢ骨格の7b位、芳香環Ｄ２の9ｄ及び11
ｄ位と、Ｃ骨格の7c位で相関が観察され、7b及び7c位の
炭素はそれぞれ芳香環Ａ２の10a位及び芳香環Ｄ２の10d
位に結合している。従って、Ａ〜Ｄの４つの骨格によ
り、４量体（tetramer1）を形成していると考えられ
る。同様にして、Ｅ〜Ｈの４つの骨格により、４量体
（tetramer2）を形成していると考えられる。

【００４５】上記のtetramer1及びtetramer2において、
tetramer1の13c位の炭素と、tetramer2の7e位の水素の
間にはシグナルの相関が観察された。同様に、tetramer
1の11c位の炭素と、tetramer2の7e位の水素の間にもシ
グナルの相関が観察された。このことから、tetramer1
の12c位と、tetramer2の7e位の間が結合していると決定
した。

【００４６】また、ＮＯＥＳＹスペクトル及びＨ−Ｈの
結合定数により、化合物内におけるtetramer1及びtetra
mer2の相対的な立体配置を決定した。これを図２に示
す。 ＜リノール酸モデル系による抗酸化活性試験＞１．３％
リノール酸水溶液２．５ｍｌ、５０ｍＭリン酸緩衝液
２．５ｍｌ、実施例１のスチルベン８量体化合物を含む
エタノール溶液の各種濃度試料０．２５ｍｌ、蒸留水
０．７５ｍｌ及び４６．６ｍＭ ＡＡＰＨ（２，２’−
アゾビス（２−アミジノプロパン）２塩酸塩）水溶液
０．２５ｍｌを混合した反応液を栓付き試験管中でイン
キュベート（４０℃、暗所）した。

【００４７】２４時間後、前記反応液を０．１ｍｌと
り、これに７５％エタノール４．７ｍｌ、３０％チオシ
アン酸アンモニウム溶液０．１ｍｌ及び０．０２Ｍ Ｆ
ｅＣｌ₂−３．５％塩酸水溶液０．１ｍｌを加えてよく
撹拌し、４分後に５００ｎｍにおける吸光度を測定し
た。（ロダン鉄法） ロダン鉄法により５００ｎｍにおける吸光度を測定し、
コントロールに対する５０％阻害濃度ＩＣ₅₀（ｍＭ）を
求めた。また、上記実施例１のスチルベン８量体化合物
の代わりにアスコルビン酸を用いて、同様に５０％阻害
濃度ＩＣ₅₀（ｍＭ）を求めた。

【００４８】その結果、実施例１のスチルベン８量体化
合物とアスコルビン酸の５０％阻害濃度ＩＣ₅₀は、それ
ぞれ０．０３０ｍＭと０．１６０ｍＭであった。従っ
て、実施例１のスチルベン８量体化合物は、公知の抗酸
化作用を有する比較対象物としてのアスコルビン酸と比
べて、５倍以上の抗酸化活性が発揮されたことが確認さ
れた。

【００４９】＜ＳＯＤ活性測定による抗酸化活性試験＞
スーパーオキシド・ジスムターゼ（ＳＯＤ）測定用キッ
ト（ＳＯＤテストワコー（和光純薬製））を用いて、実
施例１のスチルベン８量体化合物及びアスコルビン酸の
ＳＯＤ活性を測定した。

【００５０】すなわち、本検として、実施例１のスチル
ベン８量体化合物の各種濃度試料０．１ｍｌ、発色試薬
｛０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）、０．４０ｍＭ
キサンチン、０．２４ｍＭニトロブルーテトラゾリウム
（ＮＯ₂−ＴＢ）｝１．０ｍｌ及び酵素液（０．０４９
ユニット／ｍｌキサンチンオキシダーゼ）１．０ｍｌを
混合することによって反応液（Ｅ_s）を調製した。ま
た、本検ブランクとして、前記本検に加えられた試料の
代わりに、蒸留水０．１ｍｌを加えることによって反応
液（Ｅ_bl）を調製した。

【００５１】さらに、比検として、前記本検に加えられ
た実施例１のスチルベン８量体化合物の各種濃度試料の
代わりに、アスコルビン酸の各種濃度試料０．１ｍｌを
加えることによって反応液（Ｅ_s）を調製した。また、
比検ブランクは前記本検ブランクと同じものが使用され
た。

【００５２】一方、コントロールとして、前記本検に加
えられた酵素液の代わりに、０．１Ｍリン酸緩衝液１．
０ｍｌを加えることによって反応液（Ｅ_s-BL）を調製し
た。また、コントロール・ブランクとして、前記コント
ロールに加えられた試料の代わりに、蒸留水０．１ｍｌ
を加えることによって反応液（Ｅ_bl-bl）を調製した。

【００５３】これら各反応液を３７℃で２０分間インキ
ュベートした後、６９ｍＭドデシル硫酸ナトリウム（反
応停止液）２．０ｍｌを加えて反応を停止させた。これ
ら反応が停止された反応液について、蒸留水を対照とし
て５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。

【００５４】そして、前記測定された吸光度より、以下
に示される計算式（１）を用いてＳＯＤ活性値（％）を
計算した。

【００５５】

【数１】 さらに、前記計算されたＳＯＤ活性値を用いて、実施例
１のスチルベン８量体化合物及びアスコルビン酸につい
て、コントロールに対する５０％阻害濃度ＩＣ ₅₀（ｍ
Ｍ）を求めた。

【００５６】その結果、実施例１のスチルベン８量体化
合物とアスコルビン酸の５０％阻害濃度ＩＣ₅₀は、それ
ぞれ０．０２９ｍＭと０．０５１ｍＭであった。従っ
て、実施例１のスチルベン８量体化合物は、公知の抗酸
化作用を有する比較対象物としてのアスコルビン酸と比
較して、約１.８倍高いＳＯＤ活性が発揮されたことが
確認された。

【００５７】＜抗ヒアルロニダーゼ活性測定による抗炎
症活性試験＞本検として、実施例１のスチルベン８量体
化合物を０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）に溶解した
各種濃度試料０．１２５ｍｌと、ヒアルロニダーゼ０．
１２５ｍｌ（１１００ユニット）とを混合した反応液を
３７℃で２０分間インキュベートした。続いて、この反
応液に、ヒアルロニダーゼの反応基質としての化合物４
８／８０（1ｍｇ/ｍｌ）を含む酢酸緩衝液を加え、３７
℃でさらに２０分間インキュベートした。次に、ヒアル
ロン酸カリウム（１．５ｍｇ/ｍｌ）を含む酢酸緩衝液
を加えて３７℃で４０分間反応させ、その反応を停止さ
せた後に発色させ、５８５ｎｍにおける吸光度を測定し
た。

【００５８】一方、比検として、前記実施例１のスチル
ベン８量体化合物の代わりに、公知の抗炎症作用を有す
るグロモグリク酸ナトリウム（ＤＳＣＧ）を加えた反応
液について、同様に吸光度を測定した。

【００５９】また、コントロールとして、前記試料０．
１２５ｍｌを加える代わりに、０．１２５ｍｌの蒸留水
を加えた反応液について、同様に吸光度を測定した。こ
れら各反応液について、以下に示す計算式（２）により
ヒアルロニダーゼ活性の阻害率（％）を算出した。

【００６０】

【数２】 さらに、算出された阻害率から５０％阻害濃度ＩＣ
₅₀（ｍＭ）を求めた。

【００６１】その結果、実施例１のスチルベン８量体化
合物とＤＳＣＧの５０％阻害濃度ＩＣ₅₀は、それぞれ
０．００４ｍＭと０．０５ｍＭであった。従って、実施
例１のスチルベン８量体化合物は、公知の抗炎症作用を
有する比較対象物としてのＤＳＣＧと比較して、１２．
５倍の抗ヒアルロニダーゼ活性が発揮されたことが確認
された。

【００６２】＜トポイソメラーゼII活性阻害測定による
抗ガン活性試験＞トポイソメラーゼIIを０．７５ユニッ
ト／ｍｌとなるように、２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８．０）、０．３Ｍ塩化ナトリウム、１４０ｍＭ
２−メルカプトエタノール、５０μｇ／ｍｌウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ）で希釈した。

【００６３】エッペンドルフチューブに、水１１μｌ、
５倍のトポIIバッファー｛５×TopoII buffer：２５０
ｍＭトリス塩酸（ｐＨ７．９）、６００ｍＭ ＫＣｌ、
５０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、２．５ｍ
Ｍ ＡＴＰ、２．５ｍＭ ＤＴＴ、１５０μｌ／ｍｌ Ｂ
ＳＡ｝４．０μｌ及びキネトプラストＤＮＡ（２５０ｎ
ｇ）４μｌを入れて混合した。

【００６４】本検として、エッペンドルフチューブに、
実施例１のスチルベン８量体化合物の各種濃度試料１．
０μｌを加えて混合させた後、上記希釈された０．７５
ユニット／μｌトポイソメラーゼIIを１．０μｌ加えて
充分に混合した。本検ブランクとして、エッペンドルフ
チューブに、ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）１．
０μｌを加えて混合させた後、上記希釈された０．７５
ユニット／μｌトポイソメラーゼIIを１．０μｌ加えて
充分に混合した。

【００６５】比検として、エッペンドルフチューブに、
ケルセチンの各種濃度試料１．０μｌを加えて混合させ
た後、上記希釈された０．７５ユニット／μｌトポイソ
メラーゼIIを１．０μｌ加えて充分に混合した。比検ブ
ランクは、前記本検ブランクと同じものが使用される。

【００６６】コントロールとして、エッペンドルフチュ
ーブに、ＤＭＳＯ１．０μｌを加えて混合させた後、水
１．０μｌ加えて充分に混合した。これらのチューブを
３７℃で３０分間インキュベートした後、氷中でラウリ
ル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、プロテインキナーゼ（Ｐ
Ｋ）、ブロモフェノールブルー（ＢＰＢ）をそれぞれ４
μｌずつ加えた。その後、５０℃で５分間インキュベー
トしてからボルテックス遠心後、再び５０℃で５分間イ
ンキュベートし、アガロースゲル電気泳動用の試料を作
製した。そして、各電気泳動用試料１８μｌを用いてア
ガロースゲル電気泳動を行った。

【００６７】最後に、電気泳動の結果を解析することに
より、トポイソメラーゼIIの活性を５０％阻害する濃度
ＩＣ₅₀（μＭ）を求めた。その結果、実施例１のスチル
ベン８量体化合物とケルセチンの５０％阻害濃度ＩＣ₅₀
は、それぞれ０．１７μＭと２．１μＭであった。従っ
て、実施例１のスチルベン８量体化合物は、公知のトポ
イソメラーゼII活性抑制作用を有する比較対象物として
のケルセチンと比べて、１２倍以上のトポイソメラーゼ
II活性抑制効果が発揮されたことが確認された。

【００６８】＜抗ウィルス活性測定による抗ガン活性試
験＞Ｒａｊｉ細胞（５×１０⁵個）を含む新しい完全培
地１ｍｌに、ＴＰＡ（１２−０−テトラデカノイルホル
ボール−１３−アセテート：２ｎｇ／５μｌエタノー
ル）、ｎ−酪酸ナトリウム（３３０μｇ／５μｌ滅菌
水）及び被験サンプル（５μｌＤＭＳＯ溶液）を加え、
炭酸ガスインキュベータ内で、３７℃、４８時間細胞培
養した。

【００６９】ピペットマンを用いて、細胞懸濁液をガラ
ス遠心管内に収容した後、その一部（５０μｌ）を別の
遠心管に移して細胞密度と生存率を計測する。すなわ
ち、前記細胞懸濁液５０μｌに０．２％トリパンブルー
・リン酸緩衝液５０μｌを加え、充分にボルテックス混
合させる。死滅した細胞は青色に染色されることから、
顕微鏡下で全細胞数に対する染色細胞数の割合を計測
し、細胞密度と合わせて細胞生存率を求め、被験サンプ
ルの細胞毒性の指標とする。

【００７０】前記残った大部分の細胞懸濁液が収容され
た遠心管を１５００r.p.m.、５分間遠心することにより
細胞を集めるとともに、上清を一部廃棄し、残った培養
液で再懸濁する。この濃縮された懸濁液をピペットで採
取し、スライドグラス上に滴下する。１時間風乾後、ア
セトンにて固定して塗沫標本とする。

【００７１】次に、エプスタイン・バール（ＥＢ）ウィ
ルスのアーリイ・アンチジェン（Early Antigen；以下
ＥＡと記載する）に対する１次抗体を滴下し、３７℃で
３０分間インキュベートする。染色バットにスライドグ
ラスを移し、リン酸緩衝液にて５分間２回洗浄する。続
いて、前記１次抗体と同様に２次抗体処理を行った後に
洗浄し、ＥＢウイルス活性化により生じたＥＡの蛍光染
色を完成させる。

【００７２】封入剤を標本部位に滴下した後、カバーグ
ラスをのせ、顕微鏡観察する。各種濃度の被験サンプル
について、全細胞中のＥＡ産生細胞の割合を算出した結
果から、Ｒａｊｉ細胞表面におけるＥＡの発現を５０％
阻害する濃度ＩＣ₅₀（μＭ）を求めた。

【００７３】その結果、実施例１のスチルベン８量体化
合物とケルセチンの５０％阻害濃度ＩＣ₅₀は、それぞれ
１．１μＭと２１．０μＭであった。従って、実施例１
のスチルベン８量体化合物は、公知の抗ガン活性を有す
る比較対象物としてのケルセチンと比べて、約２０倍高
い抗ガン活性が発揮されたことが確認された。

【００７４】＜健康食品製剤、美容製剤又は医薬品製剤
の作製＞ （実施例３）実施例１のスチルベン８量体化合物を含む
エタノールエキス８．９ｇ、粉砂糖２０ｇ及びシュガー
エステル１．１ｇを混合、打錠し、常法により直径１０
ｍｍ、１錠３００ｍｇの健康食品製剤を得た。

【００７５】（実施例４）実施例１のスチルベン８量体
化合物を含むエタノールエキス４．０ｇ、アスコルビン
酸２．８ｇ及び粉砂糖２３．２ｇを加え、混合、打錠
し、３００ｍｇの健康食品製剤を得た。

【００７６】（実施例５）実施例１のスチルベン８量体
化合物２０ｍｇ、乳糖５．０ｇ及びステアリン酸マグネ
シウム５．０ｇを原料とし、この混合物を常法によりハ
ードカプセルに充填し、１粒５１２ｍｇのハードカプセ
ル剤を製造した。

【００７７】（実施例６）実施例１のスチルベン８量体
化合物０．３ｇ、オリーブ油１０．５ｇ及びレシチン
０．５ｇを混合し、常法により１錠５００ｍｇのソフト
カプセル錠を調製した。

【００７８】（実施例７）モノステアリン酸ポリエチレ
ングリコール１．０ｇ、親油型モノステアリン酸グリセ
リン２．０ｇ、オリーブ油５．０ｇ及びオレイン酸２．
０ｇを混合した後に加熱溶解した。得られた加熱溶解溶
液に、実施例１のスチルベン８量体化合物を０．５ｇ、
ヒドロキシエチルセルロース０．２ｇ、プロピレングリ
コール２．０ｇ、グリチルリチン酸ジカリウム０．１ｇ
及び精製水８７．２ｇを混合した後、冷却することによ
って乳液を調製した。

【００７９】（実施例８）スクワラン２．０ｇ、みつろ
う８．０ｇ、ワセリン０．５ｇ、ソルビタンセスキオレ
ート０．８ｇ及びポリオキシエチレンオレイルエーテル
１．２ｇを混合した後に加熱溶解した。得られた加熱溶
解溶液に、実施例１のスチルベン８量体化合物０．５
ｇ、カルボキシビニルポリマー０．２ｇ、プロピレング
リコール５．０ｇ、水酸化カリウム溶解溶液０．１ｇ及
び精製水７８．７ｇを混合した後、冷却することによっ
て乳液を調製した。

【００８０】（実施例９）ステアリン酸４．０ｇ、セチ
ルアルコール３．０ｇ、ステアリルアルコール１．０
ｇ、流動パラフィン６．５ｇ、ワセリン１０ｇ、ソルビ
タンモノステアレート１．５ｇ及びポリオキシエチレン
モノステアレート３．０ｇを混合した後に加熱溶解し
た。得られた加熱溶解溶液に、実施例１のスチルベン８
量体化合物０．２５ｇ、 １，３−ブチレングリコール
５．０ｇ、水酸化カリウム１．０ｇ及び精製水６５．２
ｍｇを混合した後、冷却することによってクリームを得
た。

【００８１】（実施例１０）実施例１のスチルベン８量
体化合物１．０ｇ、固体パラフィン１０．０ｇ、ビース
ワックス１０．０ｇ、スクワラン１０．０ｇ及びワセリ
ンを混合することによって１００ｇの抗炎症剤を作製し
た。

【００８２】＜経皮投与試験＞実施例７で得られた乳
液、実施例９で得られたクリーム及び実施例１０で得ら
れた抗炎症剤を用いて、皮膚のかゆみを訴えるアレルギ
ー体質の被験者を対象に経皮投与試験を行った。すなわ
ち、それぞれ１例ずつを対象に、原則として他の外用剤
を使用せず、患部に１日１〜３回、１週間連続して塗布
するように指示して経過を見た。

【００８３】１週間後、自覚症状として掻痒の改善効果
について聞き取り調査を行ったところ、全ての例におい
て症状の改善が認められたことが分かった。特に、抗炎
症剤においては顕著な改善効果が認められた。さらに、
全ての例において、使用感についての苦情は全く聞かれ
なかった。

【００８４】なお、本実施形態は、次のように変更して
具体化することも可能である。・ 上記実施形態のスチ
ルベン８量体化合物を、染料、漂白剤の製造、蛍リン光
体に用いること。或いは、上記実施形態のスチルベン８
量体化合物を、電子写真感光体に用いること。

【００８５】さらに、前記実施形態より把握できる技術
的思想について以下に記載する。 （１） フタバガキ科植物の樹皮を粉砕し、有機溶媒で
抽出処理を行った後、吸着クロマトグラフィーとゲル濾
過クロマトグラフィーとを組み合わせて請求項１に記載
のスチルベン８量体化合物を精製することを特徴とする
スチルベン８量体化合物の製造方法。

【００８６】（２） 前記フタバガキ科植物はヴァテリ
ア・インディカであることを特徴とする請求項２又は前
記（１）に記載のスチルベン８量体化合物の製造方法。

【００８７】

【発明の効果】以上詳述したように、この発明によれ
ば、次のような効果を奏する。請求項１に記載の発明の
スチルベン８量体化合物によれば、高い抗酸化作用を発
揮することができる。

【００８８】請求項２に記載の発明のスチルベン８量体
化合物の製造方法によれば、高い抗酸化作用を発揮する
ことができるスチルベン８量体化合物を容易に製造する
ことができる。

【００８９】請求項３に記載の発明の健康食品製剤、請
求項４に記載の発明の美容製剤及び請求項５に記載の発
明の医薬品製剤によれば、高い抗酸化作用を発揮させる
ことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例のスチルベン８量体化合物の構造決定
における参考図。

【図２】 実施例のスチルベン８量体化合物の構造決定
における参考図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 稔幸 岐阜県各務原市那加不動丘１丁目１番地 岐阜県保健環境研究所 内 (72)発明者 中屋 謙一 岐阜県各務原市那加不動丘１丁目１番地 岐阜県保健環境研究所 内 (72)発明者 丸山 広恵 岐阜県岐阜市加納桜田町１丁目１番地 ア ピ 株式会社内 (72)発明者 荒木 陽子 岐阜県岐阜市加納桜田町１丁目１番地 ア ピ 株式会社内 (72)発明者 坂本 貴 岐阜県岐阜市加納桜田町１丁目１番地 ア ピ 株式会社内 (72)発明者 三島 敏 岐阜県岐阜市加納桜田町１丁目１番地 ア ピ 株式会社内 Ｆターム(参考） 4C037 UA08 4C086 AA01 AA03 BA10 NA14 ZB11 ZB26 ZC02

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記化学式（１）に記載のスチルベン８
   量体化合物。 【化１】
2. 【請求項２】 フタバガキ科植物の樹皮を粉砕し、有機
   溶媒で抽出処理を行った後、吸着クロマトグラフィーを
   用いて請求項１に記載のスチルベン８量体化合物を精製
   することを特徴とするスチルベン８量体化合物の製造方
   法。
3. 【請求項３】 有効成分として請求項１に記載のスチル
   ベン８量体化合物を含有することを特徴とする健康食品
   製剤。
4. 【請求項４】 有効成分として請求項１に記載のスチル
   ベン８量体化合物を含有することを特徴とする美容製
   剤。
5. 【請求項５】 有効成分として請求項１に記載のスチル
   ベン８量体化合物を含有することを特徴とする医薬品製
   剤。