JP2002176981A

JP2002176981A - Ｔ細胞分化調節因子

Info

Publication number: JP2002176981A
Application number: JP2000377898A
Authority: JP
Inventors: Yujiro Tanaka; 裕二郎田中; Katsu Taniguchi; 克谷口
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2000-12-12
Filing date: 2000-12-12
Publication date: 2002-06-25

Abstract

(57)【要約】【課題】未分化な胸腺細胞で発現され、末梢の成熟Ｔ
細胞には発現されない、未分化な胸腺細胞に特異的なＴ
細胞分化調節因子を提供する。【解決手段】ショウジョウバエの転写因子ＡＳＨ１に
高い相同性のある遺伝子ＳＡＢ１をマウスからクローニ
ングし、その断片であるＳＥＴドメイン及びＰＨＤドメ
インを得る。【効果】ＳＥＴ及びＰＨＤドメインがＴ細胞又はＮＫ
Ｔ細胞の分化を抑制する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はＴ細胞若しくはＮＫ
Ｔ細胞、血液細胞又は神経細胞の分化調節因子に関す
る。より詳細には本発明は、未分化な胸腺細胞で特異的
に発現される遺伝子調節因子の一部の構造を有する分化
調節因子に関する。

【０００２】

【従来の技術】抗原提示細胞や標的細胞中で抗原プロセ
シングを受け細胞内で分解されたペプチド断片は、ＭＨ
Ｃ分子（主要組織適合抗原）に結合して、細胞の表面に
抗原−ＭＨＣ複合体として提示される（抗原提示）。Ｔ
細胞はこの抗原−ＭＨＣ複合体を認識するが、その認識
を担い抗原特異性を決定するのが、Ｔ細胞受容体（ＴＣ
Ｒ）である。このＴＣＲの抗原認識に伴う活性化の結
果、未熟Ｔ細胞においては分化、選択が、成熟Ｔ細胞に
おいては増殖、不応答状態、細胞死が誘導される。さら
にＴＣＲは遺伝子再編成に基づいて抗原認識に膨大な多
様性を発揮する。

【０００３】細胞系譜決定及び細胞分化の過程には高次
クロマチン構造の後成的調節が基礎にあると考えられて
いる（Ｆｅｓｔｅｎｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ，２７１，１１２３−１１２５（１９９
６））。初期のＴ細胞発生においては、分化の進行は再
編成されたＴＣＲ遺伝子産物によって構成されるプレＴ
細胞受容体及びＴ細胞受容体を介したフィードバックシ
グナル（ＴＣＲシグナル）によって調節されるが、これ
はｒａｓ−ＭＡＰキナーゼ系のシグナル伝達機構に依存
していることが知られている（Ｔａｎａｋａｅｔａ
ｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１４８，７１−１９
９（１９９５））。このようなフィードバックシグナル
がないと、組換え活性化遺伝子（ＲＡＧ）−１欠損マウ
スやＴＣＲα欠損マウスのように、Ｔ細胞の分化がＣＤ
４^-ＣＤ８^-又はＣＤ４⁺ＣＤ８⁺段階で止まってしまうこ
とになる（図１Ａ）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】リンパ球や血液細胞等
がその未分化な前駆細胞から形成されるためには、細胞
分化に伴ってそれぞれ特異的な遺伝子発現パターンを確
立する必要がある。従来、遺伝子の発現調節については
プロモーターの特異的な配列を認識しＲＮＡポリメラー
ゼによる転写活性を高める因子が詳細に解析されてきた
が、これらの転写因子が細胞核の中でクロマチンと呼ば
れる複雑な高次構造を保っている標的遺伝子をどのよう
に認識するかという機序に関しては、分子レベルでの解
明が待たれていた。

【０００５】本発明は、胸腺・骨髄・中枢神経などでそ
れぞれＴ細胞・血液細胞・神経細胞などに分化する前駆
細胞においてクロマチン構造を調節し、クロマチンレベ
ルでの遺伝子制御によって細胞の分化を調節する因子を
提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者はＴ細胞又はＮ
ＫＴ細胞の分化調節因子を探索する目的で、未分化な胸
腺細胞（Ｔ細胞又はＮＫＴ細胞の前駆細胞を含むと考え
られる）に特異的に発現される遺伝子調節因子をスクリ
ーニングし、ショウジョウバエでクロマチンの高次構造
を制御することが知られている転写因子ＡＳＨ１に高い
相同性のある遺伝子ＳＡＢ１（配列番号３）を発見し、
その一部分であるＳＥＴドメイン（配列番号２）又はＰ
ＨＤドメイン（配列番号１）がＴ細胞又はＮＫＴ細胞の
分化を調節する重要な因子であることを見出し、本発明
をなすに至った。

【０００７】本発明は、配列番号１若しくは２のアミノ
酸配列、又は一個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＴ細胞分化調
節因子に関する。

【０００８】本発明はまた、配列番号１若しくは２のア
ミノ酸配列、又は一個若しくは数個のアミノ酸が欠失、
置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＴ細胞分
化調節因子を含むＴ細胞分化阻害剤に関する。

【０００９】本発明はさらにまた、配列番号１若しくは
２のアミノ酸配列、又は一個若しくは数個のアミノ酸が
欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＴ
細胞分化調節因子を含むＨＯＸＡ５遺伝子発現阻害剤に
関する。

【００１０】本発明はさらにまた、以下の（ａ）又は
（ｂ）のタンパク質：（ａ）配列番号３のアミノ酸配列からなるタンパク質、
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列において一個又は数個
のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列か
らなり、かつＴ細胞分化促進活性を有するタンパク質に
関する。

【００１１】本発明はさらにまた、上記（ａ）又は
（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子に関する。本発
明はさらにまた、以下の（ｃ）又は（ｄ）からなる遺伝
子：（ｃ）配列番号４の塩基配列からなるＤＮＡ、（ｄ）配
列番号４の塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェント
な条件でハイブリダイズし、かつＴ細胞分化促進活性を
有するタンパク質をコードするＤＮＡ、に関する。

【００１２】本発明はさらにまた、上記（ａ）又は
（ｂ）のタンパク質のタンパク質を含むＴ細胞分化調節
因子に関する。本発明はさらにまた、上記（ａ）又は
（ｂ）のタンパク質を含むＴ細胞分化促進剤に関する。

【００１３】

【発明の実施の形態】ＣＤ４^-ＣＤ８^-段階以降の、Ｔ細
胞分化のための新規な後成的遺伝子調節因子を同定する
ために、本発明者はマウスから、サプレッションサブト
ラクティブＰＣＲにより分化が阻止されたＲＡＧ１^-/-
胸腺細胞において優先的に発現される遺伝子をスクリー
ニングしたところ、単離されたクローンのうち、或るク
ローン（Ａ２５）が、ショウジョウバエのトリソラック
スグループ（ｔｒｘ−Ｇ）の一員であるＡＳＨ１（ａｂ
ｓｅｎｔ，ｓｍａｌｌ，ｏｒｈｏｍｅｏｔｉｃｄｉ
ｓｃｓ−１）（Ｔｒｉｐｏｕｌａｓｅｔａｌ．，Ｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ，１４３，９１３−９２８（１９９
６））のＰＨＤフィンガーと高い相同性を示すことを見
出した。

【００１４】本発明のＴ細胞分化調節因子は、未分化な
胸腺細胞で特異的に発現されるが、末梢の成熟Ｔ細胞で
は発現されない。図１Ｂに示すように、Ａ２５由来のプ
ライマーセットにより増幅したｍＲＮＡは野生種の胸腺
細胞よりもＲＡＧ１^-/-及びＴＣＲα^-/-胸腺細胞の方が
約十倍も多く存在する。このことはＡ２５がβ−選択又
はポジティブ選択をこれから受ける細胞中に蓄積するこ
とを示唆している。ここでＴＣＲα^-/-の胸腺細胞と野
生種の胸腺細胞との間の定量的な差は、野生種の胸腺細
胞の一分画のみを代表するにすぎない成熟ＣＤ４及びＣ
Ｄ８Ｔ細胞によって説明できるほど単純ではなく、むし
ろ、この定量的な差はＴＣＲα^-/-胸腺細胞におけるＣ
Ｄ４⁺ＣＤ８⁺細胞と野生種胸腺におけるＣＤ４⁺ＣＤ８⁺
細胞との間の定性的な差を強調しているといえる。

【００１５】Ａ２５クローンのための完全長ｃＤＮＡを
ｃＤＮＡ末端の急速増幅（ＲＡＣＥ）とｃＤＮＡライブ
ラリースクリーニングにより単離し、ｓａｂ１と命名し
た。マウスのｓａｂ１ｃＤＮＡ（配列番号４）は、新
規な２６６９個のアミノ酸からなる蛋白質（配列番号
３）をコードしており（配列番号９）、ヒトＳＥＢやシ
ョウジョウバエＡＳＨ１に高い相同性を有している。Ｓ
ＩＭアラインメントの結果、ＳＡＢ１^672-1564対ＳＥＢ
^591-1407で３９．３％、ＳＡＢ１^1692-2529対ＡＳＨ１
^1221-2086で４２．１％であった。マウスのＳＡＢ１
（ｍＳＡＢ１；配列番号３）は二つの部分からなる核局
在化シグナルを７つ有し、Ｎ末端からＣ末端の順にＡＴ
フックモチーフ、拡張ＳＥＴ（Su（var）3−９，E
（z），and trxhomologyの略）ドメイン、ブロモドメ
イン、ＰＨＤフィンガー、及びＢＡＨ（bromo−adjacen
t homologyの略）ドメインの組合せを有する（図２
Ａ）。

【００１６】クローン化されたｓａｂ１ｃＤＮＡは長
さ１０．５ｋｂで胸腺における転写産物サイズにほぼ匹
敵している（図１Ｃ）。未熟Ｔ細胞においてｓａｂ１が
優先的に発現するということと一致してｓａｂ１転写産
物はリンパ節においてはほとんど検出できない。特にｓ
ａｂ１はまた脳（大脳）において高濃度で発現する。脳
における転写産物サイズは１３ｋｂであり、このことは
異なる態様でスプライシングを受けるエクソンが存在す
ることを示唆している。

【００１７】ＳＡＢ１はＰＨＤ（配列番号１）と呼ばれ
るＣ₄ＨＣ₃型亜鉛結合モチーフを有している。このＰＨ
ＤドメインはＳＡＢ１のアミノ酸配列（配列番号３）の
残基２２８５〜２３３１に相当し、その対応ＤＮＡはｓ
ａｂ１ｃＤＮＡ（配列番号４）の塩基７３９６〜７５
３６に相当する。このＰＨＤはＡＳＨ１（７０．２%の
同一性）やＣ．ｅｌｅｇａｎｓＬＩＮ−５９（３３．
１％の同一性）において見出されるタンパク質と高度な
相同性を有しており、またヒストンデアセチラーゼと相
互作用することが知られているＭｉ−２（Ｚｈａｎｇ
ｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ，９５，２７９−２８９（１９９
８））やＡＴＲＸ（ＭｃＤｏｗｅｌｌｅｔａｌ，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９６，１
３９８３−１３９８８（１９９９））とも高度な相同性
を有している（図２Ｂ）。ＳＡＢ１のＰＨＤフィンガー
は、非メチル化ＣｐＧに結合し得るＤｎｍｔ（ＤＮＡメ
チルトランスフェラーゼ）及びＡＬＬ１に存在するシス
テインリッチ（ＣＸＸＣ）転写抑制ドメイン（Ｃｒｏｓ
ｓｅｔａｌ，ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔ．，１６，
２５６−２５９（１９９７），ＳｈｉｎＶｏｏｅｔ
ａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，２０，２１０
８−２１２１（２０００））に整列している。ＳＡＢ１
のＰＨＤに隣接してＢＡＨドメインが存在し、これはＯ
ｒｃ１ＢＡＨドメインの場合（Ｔｒｉｏｌｏｅｔ
ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ３８１，２５１−２５２（１９９
６）及びＰａｋｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ９１，３１１
−３２３（１９９７））と同様に遺伝子サイレンシング
に密接な関係のあると思われるＡＳＨ１及びＬＩＮ−５
９に対してそれぞれ４７．７％及び３３．１％の同一性
を有している。

【００１８】ＳＡＢ１はホメオティック遺伝子のポジテ
ィブレギュレーター（ｔｒｘ−Ｇ）及びネガティブレギ
ュレーター（Ｐｃ−Ｇ）の両方に見出し得るＳＥＴドメ
イン（配列番号２）を有している。このＳＥＴドメイン
はＳＡＢ１のアミノ酸配列（配列番号３）の残基１８３
８〜１９８６に相当し、その対応ＤＮＡはｓａｂ１ｃＤ
ＮＡ（配列番号４）の塩基６０５５〜６５０１に相当す
る。

【００１９】ＳＡＢ１のＳＥＴドメインはショウジョウ
バエのｔｒｘとともにホモ二量化及びヘテロ二量化を仲
介することが示されているＡＳＨ１の一つ（Ｒａｚｏｖ
ｓｋａｉａｅｔａｌ，Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏ
ｌ．，１９，６４４１−６４４７（１９９９），Ｒａｚ
ｏｖｓｋａｉａｅｔａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１
９，３５１−３５７（２０００））と４９．３％の同一
性を共有している。ＳＥＴ−ＰＨＤ−ＢＡＨドメインの
進化的保存とともに、ＳＡＢ１の組織特異的及び発生段
階特異的な発現は、このようなドメインが初期Ｔ細胞発
生において重要な役割を演じることを強く示唆するもの
である。

【００２０】本発明者は優性ネガティブコンペティター
としてＳＡＢ１（配列番号３）のＳＥＴドメイン（配列
番号２）又はＰＨＤドメイン（配列番号１）のいずれか
を発現させることにより、Ｔ細胞の内在的ＳＡＢ１の機
能を阻害することを試みたところ、Ｔ細胞発生の特定の
段階において要求されるＳＡＢ１の重要な機能的ドメイ
ンを決定することができた。すなわち、ＳＡＢ１だけで
なく、ＳＡＢ１の一部分であるＳＥＴ又はＰＨＤドメイ
ンがＴ細胞又はＮＫＴ細胞の分化を調節する重要な因子
であることを見出し、本発明がなされたのである。

【００２１】本発明において、Ｔ細胞分化促進活性と
は、ある検出系でＴ細胞を一段階上のより成熟した段階
に向かわせる作用をいい、例えばＣＤ４^-ＣＤ８^-からＣ
Ｄ４⁺ＣＤ８⁺細胞へ向かわせる作用をいう。

【００２２】得られたｓａｂ１遺伝子等の遺伝子治療等
への応用は、ｓａｂ１に異常のある患者から細胞を取り
だし、細胞にｓａｂ１を投与し、その細胞を培養した
後、再び生体内に導入することにより行うことができ
る。遺伝子の投与は、遺伝子をベクターＤＮＡに組み込
み導入することにより細胞内で発現させる方法がある。
ここで使用できるベクターとしては、病原性をなくした
ウイルス（ウイルスベクター法など）やウイルスベクタ
ーの副作用を避けた人工ベクター（リポフェクション法
など）を挙げることができる。

【００２３】ＳＡＢ１はクロマチンの高次構造を制御す
る遺伝子群に特徴的な五つのドメインを有している。こ
れらのドメインの正確な機能は現時点では不明である
が、既知のタンパク質との相同性から推察するとＮ末端
から順に、（１）ＡＴフックモチーフを多く含み、ＳＥ
Ｔ／ＮＡＰ１（ヒストンシャペロン）に結合すると予想
される領域、（２）トリソラックスやポリコムなどのク
ロマチン制御因子との相互作用に関与すると思われるＳ
ＥＴドメイン、（３）アセチル化ヒストンに結合する可
能性のあるブロモドメイン、（４）ＣＢＰ／ｐ３００な
どの転写活性化因子と反応するＰＨＤフィンガー、及び
（５）遺伝子発現抑制との関連が示唆されているＢＡＨ
ドメインが並んでいる。この中で、ヒストンシャペロン
結合ドメイン、ブロモドメイン、ＰＨＤドメインの三つ
は、いずれもクロマチンの基本単位であるヌクレオソー
ムとその構成分子ヒストンの動態に深い関わりを持って
いることが予想される。

【００２４】特にＳＡＢ１の一部分であるＰＨＤドメイ
ン（配列番号１）は、レトロウイルスを用いて未分化な
胸腺細胞に導入すると、内因性ＳＡＢ１タンパク質と競
合してＴ細胞の分化を阻害する。また、ＳＥＴドメイン
（配列番号２）も程度は落ちるものの同様にＴ細胞の分
化を阻害する。即ち、ＳＡＢ１は胸腺のＣＤ４^-ＣＤ８^-
及びＣＤ４⁺ＣＤ８⁺細胞に特異的に発現されており、Ｃ
Ｄ４^-ＣＤ８^-においてその機能を競合的に阻害するとＣ
Ｄ４⁺ＣＤ８⁺細胞への分化が抑制され、従ってより成熟
したＣＤ４細胞又はＣＤ８細胞の産生も起こらなくな
る。

【００２５】さらに、ＳＡＢ１のＰＨＤドメイン（配列
番号１）は、前骨髄性白血病細胞であるＨＬ６０に発現
させると、血液幹細胞の増殖と分化に重要な役割を持っ
ているＨＯＸＡ５遺伝子の発現をも抑制する。ヒトＳＡ
Ｂ１のプロモーターには普遍的な転写因子であるＳｐ１
に加えて血液細胞やリンパ球に特異的なｃ−Ｍｙｂ及び
Ｃ／ＥＢＰαなどの認識部位があり、ＳＡＢ１はこれら
の転写因子の制御下にあってＨＯＸ遺伝子などを介して
血液細胞やＴ細胞の前駆細胞がそれぞれどのような分化
経路を選択するかを決定する機構に関わっていると考え
られる。

【００２６】ＰＨＤドメインを介するＳＡＢ１と他のタ
ンパク質との相互作用がＣＤ４^-ＣＤ８^-細胞の分化に極
めて重要であり、結果としてＳＡＢ１がＣＤ４^-ＣＤ８^-
細胞の分化においてスイッチの役割を担っている。ま
た、ＳＡＢ１が図２Ｃ（Ｍｕｃｈａｒｄｔｅｔａ
ｌ，ＥＭＢＯＪ．１２，４２７９−４２９０（１９９
３）；Ｋｈａｖａｒｉｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ
３６６，１７０−１７４（１９９３）；Ｉｔｏｅｔ
ａｌ．，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．１３，１５２９−１５３
９（１９９９））に示すように、ＢＲＭ及びＢＲＧ１
（酵母ＳＷＩ２／ＳＮＦ２の哺乳類ホモログ）及びＷＳ
ＴＦ（ショウジョウバエＡｃｆ１の哺乳類ホモログ）の
ようなクロマチン再構成因子に特徴的なブロモドメイン
を有していることから、高次のクロマチン構造の調節に
直接関与していることが考えられる。

【００２７】酵母ＧＣＮ５及びヒトＰ／ＣＡＦ中のブロ
モドメインはヒストンＨ３及びＨ４のＮ末端尾部に結合
することが示されているので（Ｏｒｎａｇｈｉｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７，１−７（１
９９９）；Ｄｈａｌｌｕｉｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒ
ｅ３９９，４９１−４９６（１９９９））、ＳＡＢ１
がヒストン上の後成的遺伝子マーク（アセチル化ヒスト
ンなど生化学的に修飾されたクロマチンの構造）を認識
している可能性がある。ショウジョウバエＡＳＨ１は、
ショウジョウバエゲノム中のメチルＣｐＧの欠失のよう
な基本的な生物学的相違を反映していると考えられる偽
ブロモドメイン（図２Ｃ及び図２ＡにおけるΨＢＲＯ
Ｍ）を有している。

【００２８】高度に保存されたＣ末端とは対照的に、Ｓ
ＡＢ１とＡＳＨ１のＮ末端の間にはほとんどホモロジー
はない（図２Ａ）。機能的類似性が依然として観察され
るのは、ＳＡＢ１Ｎ末端がヒトタンパク質（ＳＥＢ）
に高度に相同であり、これがＳＥＴ／ＮＡＰファミリー
ヒストンシャペロンに結合するからであり（ｖｏｎＬｉ
ｎｄｅｒｎｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏ
ｌ．１２，３３４６−３３５５（１９９２））、一方
ＡＳＨ１Ｎ末端はＳＥＴ／ＮＡＰに相同な領域を含ん
でいるからである。ＳＥＴは細胞周期におけるＧ２／Ｍ
遷移を調節する分子であるタンパク質フォスファターゼ
２Ａの阻害剤であり、ヒトＡＬＬ１のＡＴフックトリプ
レットとＳＥＴとの相互作用はヒトの白血病発生に関与
していると考えられる（Ａｄｌｅｒｅｔａｌ．，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２８４０７−２８
４１４（１９９７））。染色体１ｑ２１（これは様々な
リンパ腫においてしばしば転座することが知られてい
る）上のヒトｓａｂ１遺伝子のマッピングによりｓａｂ
１を含む染色体転座がヒトの悪性腫瘍に関連していると
いう見解が指示される。

【００２９】ＳＡＢ１のＮ末端は上述のようにＳＥＴタ
ンパク質を介して細胞周期調節因子であるＰＰ２Ａの活
性を制御している可能性が高い。ここで注目されるの
は、ＳＡＢ１と相同性のあるＡＬＬ１やＭＭＳＥＴ（い
ずれもトリソラックスグループに属する）ばかりでな
く、ｓｅｔ遺伝子自体も白血病で転座を起こすことであ
る。ＰＰ２Ａ活性の制御不全が多くの白血病の原因の一
つとなっているという可能性は、やはり白血病で転座す
ることのあるＨＯＸ１１がＳＥＴタンパク質と同様ＰＰ
２Ａ活性を抑制するということからも支持される。ＡＬ
Ｌ１ではＳＥＴ結合ドメインを含むＮ末端が白血病の発
生に十分であることから、染色体１ｑ２１上のｓａｂ１
遺伝子が転座を起こしてＳＡＢ１のN末端が発現された
場合、ＰＰ２Ａ活性の制御不全から細胞の増殖異常を引
き起こす可能性が高いと考えられる。

【００３０】本発明において、アミノ酸の欠失、置換又
は付加は、出願前周知技術である部位特定変異誘発（Ｎ
ｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓｅａｒｃｈ、１０（２
０）、６４８７−６５００（１９８２）等参照）により
実施することができ、アミノ酸の欠失、置換又は付加に
関し、１個又は数個のアミノ酸とは、部位特定変異誘発
法により欠失、置換又は付加できる程度の数のアミノ酸
を意味する。

【００３１】また、遺伝子ｓａｂ１とハイブリダイズす
る程度としては、通常の条件下（例えばＤＩＧＤＮＡ
Ｌａｂｅｌｉｎｇｋｉｔ（ベーリンガー・マンハイ
ム社製ＣａｔＮｏ．１１７５０３３）でプローブをラ
ベルした場合に、３２℃のＤＩＧＥａｓｙＨｙｂ溶
液（ベーリンガー・マンハイム社製ＣａｔＮｏ．１６
０３５５８）中でハイブリダイズさせ、５０℃の０．５
ｘＳＳＣ溶液（０．１％［ｗ／ｖ］ＳＤＳを含む）中で
メンブレンを洗浄する条件（１ｘＳＳＣは０．１５Ｍ
ＮａＣｌ、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウムである）
でのサザンハイブリダイゼーションで、遺伝子ｓａｂ１
にハイブリダイズする程度であればよい。

【００３２】

【実施例】本発明を以下の例によりさらに具体的に説明
するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるこ
とはないと解されるべきである。

【００３３】例１ＳＡＢ１遺伝子は、Ｔ細胞受容体欠損マウスと正常マウ
スの胸腺において、前者に多く、後者に少なく発現する
遺伝子であり、ＣＤ４^-ＣＤ８^-段階以降の、Ｔ細胞分化
のための新規な後成的調節因子として、ディファレンシ
ャルスクリーニング法によってクローニングした。ま
ず、マウスからサプレッションサブトラクティブＰＣＲ
により、分化が阻止されたＲＡＧ１^-/-胸腺細胞におい
て優先的に発現される遺伝子をスクリーニングした。野
生型、Ｃ５７ＢＬ／６、ＲＡＧ１^-/-、及びＴＣＲα^-/-
マウス（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂ．，ＵＳＡ）の胸腺か
ら、ＭＡＣＳビーズ分離カラム（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢ
ｉｏｔｅｃｈ）を用いて製造者のプロトコルに従って、
ポリ（Ａ）尾部ｍＲＮＡを単離した。サプレッションサ
ブトラクティブＰＣＲを、ＣＬＯＮＴＥＣＨＰＣＲ−
Ｓｅｌｅｃｔ（商標）ｃＤＮＡサブトラクションキット
（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて製造者のプロトコルに従
い、サーマルサイクラー（ＭＪＲｅｓｅａｒｃｈ）を
用いて行った。

【００３４】単離されたクローンのうち、或るクローン
（Ａ２５）が、ショウジョウバエｔｒｘ−Ｇの一つのメ
ンバーであるＡＳＨ１のＰＨＤフィンガーと高い相同性
を示すことを見出した。このＡ２５及びＧ３ＰＤＨプラ
イマーセットを用いて等量の逆転写産物を増幅した。増
幅のための反応は９４℃、１分の１サイクル、９４℃、
１０秒、５９℃、１５秒及び７２℃、１分の３０サイク
ルとした。産物を電気泳動後、臭化エチジウムで標識
し、標識強度をＮＩＨ−イメージソフトウェアを用いて
定量した。使用したプライマーは、Ａ２５センス：５’
−ＡＧＴＧＡＧＧＣＣＧＡＣＡＧＣＡＧＣＧＡ−３’
（配列番号５）、Ａ２５アンチセンス：５’−ＡＣＡＣ
ＴＧＣＴＣＡＣＡＡＡＧＧＴＡＧＴＧ−３’（配列番号
６）、Ｇ３ＰＤＨセンス：５’−ＡＣＣＡＣＡＧＴＣＣ
ＡＴＧＣＣＡＴＣＡＣ−３’（配列番号７）、Ｇ３ＰＤ
Ｈアンチセンス：５’−ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴ
ＴＧＣＴＧＴＡ−３’（配列番号８）とした。

【００３５】図１Ｂに示すように、Ａ２５由来のプライ
マーセットにより増幅したｍＲＮＡは野生種の胸腺細胞
よりもＲＡＧ１^-/-及びＴＣＲα^-/-胸腺細胞の方が約十
倍も多く存在した。全長ｃＤＮＡをＲＡＧ１^-/-マウス
の胸腺のｍＲＮＡから５’及び３’ＲＡＣＥを行い、並
びに１１日目の胚のλｇｔ１１ｃＤＮＡライブラリーの
スクリーニングを３回行うことにより、ｓａｂ１をクロ
ーニングした（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）。マウスのｓａｂ１
ｃＤＮＡ（配列番号４）は新規な２６６９個のアミノ
酸からなる蛋白質（配列番号３）をコードしており（配
列番号９）、ヒトＳＥＢやショウジョウバエＡＳＨ１に
高い相同性を有している。ＳＩＭアラインメントの結
果、ＳＡＢ１^672-1564対ＳＥＢ^591-1407で３９．３％、
ＳＡＢ１^1692-2529対ＡＳＨ１^1221-2086で４２．１％で
あった。マウスのＳＡＢ１（ｍＳＡＢ１；配列番号３）
は二つの部分からなる核局在化シグナルを７つ有し、Ｎ
末端からＣ末端の順にＡＴフックモチーフ、拡張ＳＥＴ
ドメイン、ブロモドメイン、ＰＨＤフィンガー、及びＢ
ＡＨドメインの組合せを有する（図２Ａ）。クローン化
されたｓａｂ１ｃＤＮＡは長さ１０．５ｋｂで胸腺に
おける転写産物サイズにほぼ匹敵していた（図１Ｃ）。
未熟Ｔ細胞においてｓａｂ１が優先的に発現するという
ことと一致してｓａｂ１転写産物はリンパ節においては
ほとんど検出できなかった。特にｓａｂ１はまた脳（大
脳）において高濃度で発現した。脳における転写産物サ
イズは１３ｋｂであった。

【００３６】ＳＡＢ１はＰＨＤ（配列番号１）と呼ばれ
るＣ₄ＨＣ₃型亜鉛結合モチーフを有している。このＰＨ
ＤドメインはＳＡＢ１のアミノ酸配列（配列番号３）の
残基２２８５〜２３３１に相当し、その対応ＤＮＡはｓ
ａｂ１ｃＤＮＡ（配列番号４）の塩基７３９６〜７５
３６に相当する。ＰＨＤはＡＳＨ１（７０．２%の同一
性）やＣ．ｅｌｅｇａｎｓＬＩＮ−５９（３３．１％
の同一性）において見出されるタンパク質と高度な相同
性を有しており、またヒストンデアセチラーゼと相互作
用することが知られているＭｉ−２やＡＴＲＸとも高度
な相同性を有している（図２Ｂ）。ＳＡＢ１のＰＨＤフ
ィンガーは、非メチル化ＣｐＧに結合し得るＤｎｍｔ
（ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ）及びＡＬＬ１に存
在するシステインリッチ（ＣＸＸＣ）転写抑制ドメイン
に整列している。ＳＡＢ１ＰＨＤに隣接してＢＡＨド
メインが存在し、これはＯｒｃ１ＢＡＨドメインの場
合と同様に遺伝子サイレンシングに密接な関係のあると
思われるＡＳＨ１及びＬＩＮ−５９に対してそれぞれ４
７．７％及び３３．１％の同一性を有している。

【００３７】ＳＡＢ１はホメオティック遺伝子のポジテ
ィブレギュレーター（ｔｒｘ−Ｇ）及びネガティブレギ
ュレーター（Ｐｃ−Ｇ）の両方に見出し得るＳＥＴドメ
イン（配列番号２）を有している。このＳＥＴドメイン
はＳＡＢ１のアミノ酸配列（配列番号３）の残基１８３
８〜１９８６に相当し、その対応ＤＮＡはｓａｂ１ｃＤ
ＮＡ（配列番号４）の塩基６０５５〜６５０１に相当す
る。ＳＥＴはショウジョウバエのｔｒｘとともにホモ二
量化及びヘテロ二量化を仲介することが示されているＡ
ＳＨ１の一つと４９．３％の同一性を共有している。

【００３８】例２田中ら、「疾患へのアプローチ」（仁保編），第１３−
２６頁、九州大学出版社、福岡（１９９６年）に記載し
たように、関心のあるタンパク質を発現するバイシスト
ロン性の（二つのシストロンを持つ）レトロウイルスベ
クターをグリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）とともに構
築した。同じ転写産物上で内部リボソームエントリーサ
イト（ＩＲＥＳ）から翻訳されたＧＦＰは発現レベルの
指標として役立った（図３Ａ）。種々の構築体の転写効
率を初めＮＩＨ３Ｔ３フィブロブラスト細胞系を用いて
評価した（図３Ｂ−Ｄ）。ＳＡＢ１断片はまず三つの核
局在化シグナル（ＮＬＳ）とｍｙｃエピトープを含むｐ
ＣＭＶ／ｍｙｃ／ｎｕｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にク
ローニングし、次いでｃＤＮＡ／ＮＬＳ／ｍｙｃ−ｔａ
ｇ断片を、オランダ癌研究所のＴ．Ｎ．Ｓｃｈｕｍａｃ
ｈｅｒ博士から提供されたｐＭＸ．ＩＲＥＳ．ＧＦＰベ
クターにサブクローニングした。

【００３９】バイシストロン性のＳＥＴ−ＧＦＲ及びＰ
ＨＤ−ＧＦＰベクターは、モノシストロン性のＧＦＰベ
クターと比較してＧＦＰの発現量が低かったが、充分検
知できる程度の発現量が認められた。レトロウイルスパ
ッケージ細胞系（Ｐｈｏｅｎｉｘ）はＧ．Ｎｏｒａｎ博
士（スタンフォード大学）により提供されたものを用い
た。レトロウイルス構築体は標準的な燐酸カルシウム法
によりフェニックス細胞中に一時的にトランスフェクト
され、レトロウイルスの上澄液を３６時間と７２時間の
間に集めた。胎生１４日の胸腺由来のＣＤ４^-ＣＤ８^-細
胞を、１００ｎｇ／ｍｌＳＣＦ及び２０ｎｇ／ｍｌＩＬ
−７（共にＧｅｎｚｙｍｅ）を含むレトロウイルスカク
テルで４８時間培養した。レトロウイルスによって形質
導入された胸腺細胞を、次いで胸腺間質細胞と共に再凝
集し、さらに７日間培養した。Ｔ細胞の分化を、ＦＡＣ
Ｓｃａｎ（ＢｅｃｋｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ）及び
ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を用
いてＣＤ８ｂ−ＰＥ及びＣＤ４−Ｃｙ（共にＰｈａｒｍ
ｉｎｇｅｎ）で標識した後、ＦＡＣＳ分析により評価し
た。ＧＦＰ又はＳＥＴ−ＧＦＰで形質導入された細胞は
ＮＩＨ３Ｔ３細胞におけるレベルに比例したレベルでレ
ポーター遺伝子を発現することができた（図３Ｅ−
Ｇ）。

【００４０】これとは対照的に、ＰＨＤ−ＧＦＰがＮＩ
Ｈ３Ｔ３細胞中では低いレベルでしか発現されないとい
うことを考慮に入れても、ＰＨＤ−ＧＦＰのより高いレ
ベルを発現する細胞は十分には表現されなかった（図３
Ｇ）。ＳＥＴ又はＰＨＤドメインがＴ細胞分化に影響を
与えたのかどうかをさらに決定するために、全細胞をＧ
ＦＰの発現が陰性又は陽性の細胞群に分け（図３Ｅ、Ｆ
及びＧの点線で示した）、ＣＤ４／ＣＤ８発現プロファ
イルをそれぞれの集団について分析した。レトロウイル
ス的に形質導入した細胞（ＧＦＰ⁺；Ｋ−Ｍ）と形質導
入していない細胞（ＧＦＰ^-；Ｈ−Ｊ）との比較によ
り、ＰＨＤ−ＧＦＰの発現及びより低い範囲ではあるが
ＳＥＴ−ＧＦＰの発現が分化したＣＤ４⁺ＣＤ８⁺細胞の
数の減少を引き起こしたことがわかる。したがって、Ｓ
ＡＢ１とそのＰＨＤドメインを介した他のタンパク質と
の相互作用がＣＤ４^-ＣＤ８^-細胞の分化に極めて重要で
あることがわかった。

【００４１】

【発明の効果】ショウジョウバエの転写因子ＡＳＨ１に
高い相同性のある遺伝子ＳＡＢ１の断片であるＳＥＴ及
びＰＨＤドメインがＴ細胞又はＮＫＴ細胞の分化を抑制
する。

【００４２】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> TAISHO PHARMACEUTICAL CO.LTD.<120> T CELL DIFFERENTIATION-REGULATI NG FACTOR<130> DA-2938<160> 9<210> 1<211> 4７<212> PRT<213> MOUSE<400> 1 Val Ile Arg Cys Ile Cys Gly Leu Tyr Lys Asp Glu Gly Leu Met 5 10 15 Ile Gln Cys Asp Lys Cys Met Val Trp Gln His Cys Asp Cys Met 20 25 30 Gly Val Asn Thr Asp Val Glu His Tyr Leu Cys Glu Gln Cys Asp 35 40 45 Pro Arg <210> 2 <211> 149 <212> PRT <213> MOUSE <400> 2 Arg Ile Gln Arg His Glu Trp Val Gln Cys Leu Glu Arg Phe Arg 5 10 15 Ala Glu Glu Lys Gly Trp Gly Ile Arg Thr Lys Glu Pro Leu Lys 20 25 30 Ala Gly Gln Phe Ile Ile Glu Tyr Leu Gly Glu Val Val Ser Glu 35 40 45 Gln Glu Phe Arg Asn Arg Met Ile Glu Gln Tyr His Asn His Ser 50 55 60 Asp His Tyr Cys Leu Asn Leu Asp Ser Gly Met Val Ile Asp Ser 65 70 75 Tyr Arg Met Gly Asn Glu Ala Arg Phe Ile Asn His Ser Cys Asp 80 85 90 Pro Asn Cys Glu Met Gln Lys Trp Ser Val Asn Gly Val Tyr Arg 95 100 105 Ile Gly Leu Tyr Ala Leu Lys Asp Met Pro Ala Gly Thr Glu Leu 110 115 120 Thr Tyr Asp Tyr Asn Phe His Ser Phe Asn Val Glu Lys Gln Gln 125 130 135 Leu Cys Lys Cys Gly Phe Glu Lys Cys Arg Gly Ile Ile Gly 140 145 <210> 3 <211> 2669 <212> PRT <213> MOUSE <400> 3 Met Phe Asn Ala Ala Val Gly Leu Ile Asn Lys Asp Ser Val Lys 5 10 15 Lys Leu Gly Thr Gly Thr Thr Ala Val Phe Ile Asn Lys Asp Leu 20 25 30 Gly Lys Lys Pro Gly Ala Ile Thr Thr Val Gly Leu Leu Ser Lys 35 40 45Glu Ser Gly Lys Lys Leu Gl y Ile Gly Ile Val Pro Gly Leu Val 50 55 60 Asn Lys Glu Ser Gly Lys Lys Leu Gly Leu Gly Thr Val Val Gly 65 70 75 Leu Val Asn Lys Glu Leu Gly Lys Lys Leu Ser Ser Thr Val Gly 80 85 90 Leu Val Ala Lys Asp Val Thr Lys Lys Ile Val Ala Ser Ser Ala 95 100 105 Met Gly Leu Val Asn Lys Asp Ile Gly Lys Lys Leu Leu Asn Cys 110 115 120 Pro Met Ala Gly Gln Leu Gly Ser Lys Asp Ala Leu Asn Leu Lys 125 130 135 Ser Glu Ala Leu Leu Pro Thr Gln Glu Gln Leu Lys Ala Ser Cys 140 145 150 Ser Ala Asn Ile Ser Asn His Asp Ser Gln Glu Leu Pro Glu Ser 155 160 165 Leu Lys Asp Ser Ala Thr Gly Lys Ala Phe Glu Lys Ser Val Met 170 175 180 Arg His Ser Lys Glu Ser Met Leu Glu Lys Phe Ser Val Arg Lys 185 190 195 Glu Ile Thr Asn Leu Glu Lys Glu Met Phe Asn Glu Gly Thr Cys 200 205 210 Ile Gln Gln Asp Asn Phe Ser Ser Ser Glu Arg Gly Ala Phe Glu 215 220 225 Thr Ser Lys His Glu Lys Gln Pro Pro Val Tyr Cys Thr Ser Pro 230 235 240 Asp Phe Gln Ile Gly Gly Ala Ser Asp Ala Ser Thr Ala Lys Ser 245 250 255 Pro Phe Ser Ala Val Gly Glu Ser Asn Leu Pro Ser Ser Ser Pro 260 265 270 Thr Val Ser Val Asn Pro Val Thr Arg Ser Pro Pro Glu Ala Ser 275 280 285 Ser Gln Leu Val Pro Asn Pro Leu Leu Leu Asn Ser Thr Ala Glu 290 295 300 Gln Met Glu Glu Ile Ser Glu Ser Ile Gly Lys Ser Gln Phe Thr 305 310 315 Ala Glu Ser Thr His Leu Asn Val Gly His Arg Ser Leu Gly His 320 325 330 Ser Leu Ser Ile Glu Cys Lys Gly Ile Asp Lys Glu Leu Asn Glu 335 340 345 Ser Lys Asn Thr His Leu Asp Ile Pro Arg Ile Ser Ser Ser Leu 350 355 360 Gly Lys Lys Pro Ser Leu Thr Ser Asp Ser Gly Ile His Ala Ile 365 370 375 Thr Pro Ser Val Val Asn Phe Thr Ser Leu Phe Ser Asn Lys Pro 380 385 390 Phe Leu Lys Leu Gly Ala Val Thr Ala Pro Asp Lys His Cys Gln 395 400 405 Val Ala Glu Ser Leu Ser Ser Ser Phe Gln Ser Lys Pro Leu Lys 410 415 420 Lys Glu Lys Glu Glu Lys Pro Arg Trp Thr Lys Val Val Ala Arg 425 430 435 Ser Thr Cys Arg Ser Pro Lys Gly Leu Asp Leu Glu Arg Ser Glu 440 445 450 Leu Phe Lys Asn Val Ser Cys Ser Ser Leu Ser Asn Ser Ser Glu 455 460 465 Pro Ala Lys Phe Met Lys Thr Ile Gly Ala Ser Ser Phe Val Asp 470 475 480 His Asp Phe Leu Lys Arg Arg Leu Pro Lys Leu Ser Lys Ser Ser 485 490 495 Ala Pro Ser Leu Ala Leu Leu Thr Asp Ser Glu Lys Pro Ser His 500 505 510 Lys Ser Phe Ile Thr His Lys Leu Ser Ser Ser Met Cys Val Thr 515 520 525 Ser Asp Leu Leu Ser Asp Ile Tyr Lys Pro Lys Arg Gly Arg Pro 530 535 540 Lys Ser Lys Glu Met Pro Gln Leu Glu Gly Pro Pro Lys Arg Thr 545 550 555 Leu Lys Ile Pro Ala Ser Lys Val Phe Ser Leu Gln Ser Lys Glu 560 565 570 Glu Gln Glu Pro Pro Ile Leu Gln Pro Glu Ile Glu Ile Pro Ser 575 580 585 Phe Lys Gln Ser Leu Ser Val Ser Pro Phe Pro Lys Lys Arg Gly 590 595 600 Arg Pro Lys Arg Gln Met Arg Ser Pro Val Lys Met Lys Pro Pro 605 610 615 Val Leu Ser Val Ala Pro Phe Val Ala Thr Glu Ser Pro Ser Lys 620 625 630 Leu Glu Ser Glu Ser Glu Asn His Arg Ser Ser Ser Asp Phe Phe 635 640 645 Glu Ser Glu Asp Gln Leu Gln Asp Thr Asp Asp Leu Asp Asp Ser 650 655 660 His Arg Gln Ser Val Cys Ser Met Ser Asp Leu Glu Met Glu Pro 665 670 675 Asp Lys Lys Ile Ser Lys Arg Asn Asn Gly Gln Leu Met Lys Thr 680 685 690 Ile Ile Arg Lys Ile Asn Lys Met Lys Thr Leu Lys Arg Lys Lys 695 700 705 Leu Leu Asn Gln Ile Leu Ser Ser Ser Val Glu Ser Ser Asn Lys 710 715 720 Gly Lys Val Gln Ser Lys Leu His Asn Thr Val Ser Ser Leu Ala 725 730 735 Ala Thr Phe Gly Ser Lys Leu Gly Gln Gln Ile Asn Val Ser Lys 740 745 750 Lys Gly Thr Ile Tyr Ile Gly Lys Arg Arg Gly Arg Lys Pro Lys 755 760 765 Thr Val Leu Asn Gly Leu Leu Ser Gly Ser Pro Ala Ser Leu Ala 770 775 780 Val Leu Glu Lys Thr Ala Gln Gln Ala Ala Gly Ser Ala Leu Gly 785 790 795 Gln Ile Leu Pro Pro Leu Leu Pro Ser Pro Val Ser Ser Ser Glu 800 805 810 Ile Leu Pro Ser Pro Ile Cys Ser Gln Ser Ser Gly Thr Ser Gly 815 820 825 Gly Gln Ser Pro Val Ser Ser Asp Ala Gly Phe Val Glu Pro Ser 830 835 840 Ser Val Pro Tyr Leu His Val His Ser Arg Gln Gly Ser Met Ile 845 850 855 Gln Thr Leu Ala Met Lys Lys Ala Ser Lys Gly Arg Arg Arg Leu 860 865 870 Ser Pro Pro Thr Leu Leu Pro Asn Ser Pro Ser His Leu Ser Glu 875 880 885 Leu Thr Ser Leu Lys Glu Ala Thr Pro Ser Pro Val Ser Glu Ser 890 895 900 His Ser Asp Glu Thr Ile Pro Ser Asp Ser Gly Ile Gly Thr Asp 905 910 915 Asn Asn Ser Thr Ser Asp Arg Ala Glu Lys Phe Cys Gly Gln Lys 920 925 930 Lys Arg Arg His Ser Phe Glu His Ile Ser Leu Ile Pro Pro Glu 935 940 945 Thr Ser Thr Val Leu Asn Ser Leu Lys Glu Lys His Lys His Lys 950 955 960 Cys Lys Arg Arg Ser His Asp Tyr Leu Ser Tyr Asp Lys Met Lys 965 970 975 Arg Gln Lys Arg Lys Arg Lys Lys Lys Tyr Pro Gln Leu Arg Asn 980 985 990 Arg Gln Asp Pro Asp Phe Ile Ala Glu Leu Glu Glu Leu Ile Ser 995 1000 1005 Arg Leu Ser Glu Ile Arg Ile Thr His Arg Ser His His Phe Ile 1010 1015 1020 Pro Arg Asp Leu Leu Pro Thr Ile Phe Arg Ile Asn Phe Asn Ser 1025 1030 1035 Phe Tyr Thr His Pro Ser Phe Pro Leu Asp Pro Leu His Tyr Ile 1040 1045 1050 Arg Lys Pro Asp Leu Lys Lys Lys Arg Gly Arg Pro Pro Lys Met 1055 1060 1065 Arg Glu Ala Met Ala Glu Met Pro Phe Met His Ser Leu Ser Phe 1070 1075 1080 Pro Leu Ser Ser Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Tyr Gly Met Pro Tyr 1085 1090 1095 Ser Pro Ser Pro Leu Thr Ala Ala Pro Ile Gly Leu Gly Tyr Tyr 1100 1105 1110 Gly Arg Tyr Pro Pro Thr Leu Tyr Pro Pro Pro Pro Ser Pro Ser 1115 1120 1125 Phe Thr Thr Pro Leu Pro Pro Pro Ser Tyr Met His Ala Gly His 1130 1135 1140 Leu Leu Leu Asn Pro Thr Lys Tyr His Lys Lys Lys His Lys Leu 1145 1150 1155 Leu Arg Gln Glu Ala Phe Leu Thr Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu 1160 1165 1170 Ser Met Ser Thr Tyr Pro Ser Val Pro Pro Glu Met Ala Tyr Gly 1175 1180 1185 Trp Met Val Glu His Lys His Arg His Arg His Lys His Arg Glu 1190 1195 1200 His Arg Ser Glu Gln Pro Gln Val Ser Met Asp Ser Gly Ser Ser 1205 1210 1215 Arg Ser Val Leu Glu Ser Leu Lys Arg Tyr Arg Phe Gly Lys Asp 1220 1225 1230 Thr Val Gly Asp Arg Tyr Lys His Lys Glu Lys His Arg Cys His 1235 1240 1245 Met Ser Cys Pro His Leu Ser Pro Ser Lys Asn Leu Ile Asn Arg 1250 1255 1260 Glu Glu Gln Trp Val Ser Arg Glu Pro Ser Glu Ser Ser Ser Leu 1265 1270 1275 Ala Leu Gly Leu Gln Thr Pro Leu Gln Ile Asp Cys Ser Glu Ser 1280 1285 1290 Ser Pro Ser Leu Ser Leu Gly Gly Phe Thr Pro Asn Ser Glu Pro 1295 1300 1305 Ala Ser Ser Asp Glu His Met Asn Leu Phe Thr Ser Ala Ile Gly 1310 1315 1320 Ser Cys Arg Val Ser Asn Pro Asn Ser Ser Cys Arg Lys Lys Leu 1325 1330 1335 Thr Asp Ser Pro Gly Leu Phe Pro Val Gln Asp Thr Ala Leu Asn 1340 1345 1350 Arg Pro His Arg Lys Glu Pro Leu Pro Ser Ser Glu Arg Ala Ile 1355 1360 1365 Gln Ser Leu Ala Gly Ser Gln Ser Ala Ser Asp Lys Pro Ser Gln 1370 1375 1380 Arg Ser Ser Glu Ser Thr Asn Cys Ser Pro Thr Arg Lys Arg Ser 1385 1390 1395 Ser Ser Glu Ser Thr Ser Ser Thr Val Asn Gly Val Pro Ser Arg 1400 1405 1410 Ser Pro Arg Leu Val Ala Ser Met Asp Asp Ser Val Asp Ser Leu 1415 1420 1425 Leu Gln Arg Ile Val His His Asp Glu Gln Glu Ser Met Glu Lys 1430 1435 1440 Asn Gly Asp Ala Ser Ile Thr Thr Val Ser Ala Pro Pro Ser Ser 1445 1450 1455 Ser Pro Gly His Ser Tyr Ser Lys Glu Arg Ala Leu Gly Lys Ser 1460 1465 1470 Asp Ser Leu Leu Val Pro Ala Val Pro Asn Asp Ser Cys Ser Asn 1475 1480 1485 Ile Pro Leu Leu Ser Glu Lys Ser Ala Ser Arg Cys Ser Pro His 1490 1495 1500 His Ile Lys Arg Ser Val Val Glu Ala Met Gln Arg Gln Ala Arg 1505 1510 1515 Lys Met Cys Asn Tyr Asp Lys Ile Leu Ala Thr Lys Lys Asn Leu 1520 1525 1530 Asp His Val Asn Lys Ile Leu Lys Ala Lys Lys Leu Gln Arg Gln 1535 1540 1545 Ala Arg Thr Gly Asn Asn Phe Val Lys Arg Arg Pro Gly Arg Pro 1550 1555 1560 Arg Lys Cys Pro Leu Gln Ala Val Val Ser Met Gln Ala Phe Gln 1565 1570 1575 Ala Ala Gln Phe Val Ser Pro Glu Leu Asn Glu Gly Glu Asp Met 1580 1585 1590 Ser Leu His Leu Ser Pro Asp Thr Val Thr Asp Val Ile Glu Ala 1595 1600 1605 Val Val Gln Ser Val Asn Leu Thr Ser Glu His Lys Lys Gly Val 1610 1615 1620 Lys Arg Lys Asn Trp Leu Leu Glu Glu Gln Thr Arg Lys Lys Gln 1625 1630 1635 Lys Thr Val Pro Glu Glu Glu Glu Gln Glu Asn Asn Lys Ser Phe 1640 1645 1650 Ile Glu Thr Pro Val Glu Ile Pro Ser Pro Leu Glu Thr Pro Ala 1655 1660 1665 Glu Pro Ser Glu Pro Glu Asn Thr Leu Gln Pro Val Leu Ala Leu 1670 1675 1680 Ile Pro Arg Glu Lys Lys Ala Pro Arg Pro Pro Lys Lys Lys Tyr 1685 1690 1695 Gln Arg Ala Gly Leu Tyr Ser Asp Val Ser Lys Thr Ile Asp Pro 1700 1705 1710 Lys Ser Arg Leu Ile Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Glu Tyr Thr 1715 1720 1725 Pro Gly Glu His Glu Tyr Gly Leu Phe Pro Ala Pro Ile His Val 1730 1735 1740 Gly Lys Tyr Leu Arg Gln Lys Arg Ile Asp Phe Gln Leu Pro Tyr 1745 1750 1755 Asp Ile Leu Trp Gln Trp Lys His Asn Gln Leu Tyr Lys Lys Pro 1760 1765 1770 Asp Val Pro Leu Tyr Lys Lys Ile Arg Ser Asn Val Tyr Val Asp 1775 1780 1785 Val Lys Pro Leu Ser Gly Tyr Glu Ala Thr Thr Cys Asn Cys Lys 1790 1795 1800 Lys Pro Asp Asp Asp Thr Arg Lys Gly Cys Gly Asp Asp Cys Leu 1805 1810 1815 Asn Arg Met Ile Phe Ala Glu Cys Ser Pro Asn Thr Cys Pro Cys 1820 1825 1830 Gly Glu Gln Cys Cys Asn Gln Arg Ile Gln Arg His Glu Trp Val 1835 1840 1845 Gln Cys Leu Glu Arg Phe Arg Ala Glu Glu Lys Gly Trp Gly Ile 1850 1855 1860 Arg Thr Lys Glu Pro Leu Lys Ala Gly Gln Phe Ile Ile Glu Tyr 1865 1870 1875 Leu Gly Glu Val Val Ser Glu Gln Glu Phe Arg Asn Arg Met Ile 1880 1885 1890 Glu Gln Tyr His Asn His Ser Asp His Tyr Cys Leu Asn Leu Asp 1895 1900 1905 Ser Gly Met Val Ile Asp Ser Tyr Arg Met Gly Asn Glu Ala Arg 1910 1915 1920 Phe Ile Asn His Ser Cys Asp Pro Asn Cys Glu Met Gln Lys Trp 1925 1930 1935 Ser Val Asn Gly Val Tyr Arg Ile Gly Leu Tyr Ala Leu Lys Asp 1940 1945 1950 Met Pro Ala Gly Thr Glu Leu Thr Tyr Asp Tyr Asn Phe His Ser 1955 1960 1965 Phe Asn Val Glu Lys Gln Gln Leu Cys Lys Cys Gly Phe Glu Lys 1970 1975 1980 Cys Arg Gly Ile Ile Gly Gly Lys Ser Gln Arg Met Asn Gly Leu 1985 1990 1995 Pro Ser His Lys Gly Ser Gln Ser Ser Ser Thr His Arg Lys Ser 2000 2005 2010 Ala Arg Ala Lys Glu Lys Arg Lys Ser Lys His Lys Leu Lys Lys 2015 2020 2025 Arg Lys Gly His Pro Ser Glu Glu Pro Ser Glu Asn Ile Asn Thr 2030 2035 2040 Pro Thr Arg Leu Thr Pro Gln Leu Gln Met Lys Pro Met Ser Asn 2045 2050 2055 Arg Glu Arg Asn Phe Val Leu Lys His His Val Phe Leu Val Arg 2060 2065 2070 Asn Trp Glu Lys Ile His Gln Lys Gln Glu Glu Val Lys His Thr 2075 2080 2085 Arg Asp Ile His Ser Ala Ser Leu Tyr Thr Arg Trp Asn Gly Leu 2090 2095 2100 Cys Arg Asp Asp Gly Asn Ile Lys Ser Asp Val Phe Met Thr Gln 2105 2110 2115 Phe Ser Ala Leu Gln Thr Ala Arg Ser Val Arg Thr Arg Arg Leu 2120 2125 2130 Ala Ala Ala Glu Glu Asn Leu Glu Val Ala Arg Ala Ala Arg Leu 2135 2140 2145 Ala Gln Ile Phe Lys Glu Ile Cys Asp Gly Ile Ile Ser Tyr Arg 2150 2155 2160 Asp Ser Ser Gln Gln Thr Leu Ala Ala Pro Leu Leu Asn Leu Pro 2165 2170 2175 Pro Lys Lys Lys Asn Ala Asp Tyr Tyr Glu Lys Ile Ser Asp Pro 2180 2185 2190 Leu Asp Leu Ser Thr Ile Glu Lys Gln Ile Leu Ile Gly Tyr Tyr 2195 2200 2205 Lys Thr Val Glu Ala Phe Asp Ala Asp Met Leu Lys Val Phe Arg 2210 2215 2220 Asn Ala Glu Lys Tyr Tyr Gly Arg Lys Ser Pro Ile Gly Arg Asp 2225 2230 2235 Val Cys Arg Leu Arg Lys Ala Tyr Tyr Ser Ala Arg His Glu Ala 2240 2245 2250 Ser Ala Gln Ile Asp Glu Ile Val Gly Glu Thr Ala Ser Glu Ala 2255 2260 2265 Asp Ser Ser Glu Thr Ser Val Ser Glu Lys Glu Ser Gly His Glu 2270 2275 2280 Lys Asp Asp Asp Val Ile Arg Cys Ile Cys Gly Leu Tyr Lys Asp 2285 2290 2295 Glu Gly Leu Met Ile Gln Cys Asp Lys Cys Met Val Trp Gln His 2300 2305 2310 Cys Asp Cys Met Gly Val Asn Thr Asp Val Glu His Tyr Leu Cys 2315 2320 2325 Glu Gln Cys Asp Pro Arg Pro Val Asp Arg Glu Val Pro Met Ile 2330 2335 2340 Pro Arg Pro His Tyr Ala Gln Pro Gly Cys Val Tyr Phe Ile Cys 2345 2350 2355 Leu Leu Arg Asp Asp Leu Leu Leu Arg Gln Gly His Cys Val Tyr 2360 2365 2370 Leu Met Arg Asp Ser Arg Arg Thr Pro Asp Gly His Pro Val Arg 2375 2380 2385 Gln Ser Tyr Arg Leu Leu Ser His Ile Asn Arg Asp Lys Leu Asp 2390 2395 2400 Ile Phe Arg Ile Glu Lys Leu Trp Lys Asn Glu Lys Glu Glu Arg 2405 2410 2415 Phe Ala Phe Gly His His Tyr Phe Arg Pro His Glu Thr His His 2420 2425 2430 Ser Pro Ser Arg Arg Phe Tyr His Asn Glu Leu Phe Arg Val Pro 2435 2440 2445 Leu Tyr Glu Ile Ile Pro Leu Glu Ala Val Val Gly Thr Cys Cys 2450 2455 2460 Val Leu Asp Leu Tyr Thr Tyr Cys Lys Gly Arg Pro Lys Gly Ile 2465 2470 2475 Lys Glu Gln Asp Val Tyr Ile Cys Asp Tyr Arg Leu Asp Lys Ser 2480 2485 2490 Ala His Leu Phe Tyr Lys Ile His Arg Asn Arg Tyr Pro Val Cys 2495 2500 2505 Thr Lys Pro Tyr Ala Phe Asp His Phe Pro Lys Lys Leu Thr Pro 2510 2515 2520 Lys Arg Asp Phe Ser Pro His Tyr Val Pro Asp Asn Tyr Lys Arg 2525 2530 2535 Asn Gly Gly Arg Ser Ser Trp Lys Ser Glu Arg Ser Lys Pro Pro 2540 2545 2550 Leu Lys Asp Leu Gly Gln Glu Asp Asp Ala Leu Pro Leu Ile Glu 2555 2560 2565 Glu Val Leu Ala Ser Gln Glu Gln Ala Ala Arg Glu Val Pro Ser 2570 2575 2580 Pro Glu Glu Pro Asp Gln Glu Arg Ala Thr Gly Asp Ile Gly Asp 2585 2590 2595 Ala Glu Lys Lys Pro Glu Glu Ser Ser Gln Glu Ala Gln Leu Ala 2600 2605 2610 Ser Thr Pro Glu Glu Arg Arg His Ser Gln Arg Glu Arg Leu Asn 2615 2620 2625 Gln Ile Leu Leu Asn Leu Leu Glu Lys Ile Pro Gly Lys Asn Ala 2630 2635 2640 Ile Asp Val Thr Tyr Leu Leu Glu Glu Gly Ser Gly Arg Lys Leu 2645 2650 2655 Arg Arg Arg Thr Leu Phe Ile Pro Glu Asn Ser Phe Arg Lys 2660 2665 2669 <210> 4 <211> 10069 <212> DNA <213> MOUSE <400> 4 10 20 30 40 50 60 cggattcctt agatgttatt tgcttaaaaa caaacgacaa accaagtaca gcggtacctc 60 tgatcaaaat ctgaaactag ttaacacgtt ttctcttccc acatctacaa acctcgttcc 120 taacctcttg ctgttgcctt ctcgagtttg ggggagaaaa gaaaatcaat ggatacagac 180 tgttatttat gaaaagaggc atattctaat agtcataagg caatgtgttt aagagctgca 240 cctgaacaaa tcttctccaa gctgaagatg gtcaccaact ctgtaatctg tagagtggat 300 ccacttgctc gagtcactgg gtcacacgaa tagcttcact atgccttaag gaggcatgtt 360 acatctatgg gatgtacaag tatttgaaaa gaataacatt aagaggaaaa ggacagcctt 420 gcaaatatca gtttcttata taaatgacaa cagtggcatg tggccccctt ttaatacccc 480 aacaattgta caagagtggg agaagttgtt gttgttgata accattatct ttcaggtgag 540 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Glu Lys Phe Ser Val Arg Lys 185 190 195 gaa att act aat ttg gag aaa gaa atg ttt aat gaa gga aca tgc 1173 Glu Ile Thr Asn Leu Glu Lys Glu Met Phe Asn Glu Gly Thr Cys 200 205 210 att cag caa gac aat ttc tca tct agt gaa agg gga gcc ttt gaa 1218 Ile Gln Gln Asp Asn Phe Ser Ser Ser Glu Arg Gly Ala Phe Glu 215 220 225 acc tca aaa cat gaa aag cag cct cct gtg tat tgc act tct cct 1263 Thr Ser Lys His Glu Lys Gln Pro Pro Val Tyr Cys Thr Ser Pro 230 235 240 gac ttt caa ata gga ggt gcc tct gat gcc tct aca gct aaa tct 1308 Asp Phe Gln Ile Gly Gly Ala Ser Asp Ala Ser Thr Ala Lys Ser 245 250 255 ccc ttc agt gca gta ggc gaa agc aac ctt cct tcc tcg tca cct 1353 Pro Phe Ser Ala Val Gly Glu Ser Asn Leu Pro Ser Ser Ser Pro 260 265 270 act gta tct gtt aat cct gta acc agg agt ccc cct gaa gct tct 1398 Thr Val Ser Val Asn Pro Val Thr Arg Ser Pro Pro Glu Ala Ser 275 280 285 tca cag ttg gtt cca aac cca tta ctt tta aat tct aca gca gaa 1443 Ser Gln Leu Val Pro Asn Pro Leu Leu Leu Asn Ser Thr Ala Glu 290 295 300 caa atg gaa gaa atc tct gaa tct att gga aag agc cag ttt act 1488 Gln Met Glu Glu Ile Ser Glu Ser Ile Gly Lys Ser Gln Phe Thr 305 310 315 gct gaa agt acc cac ttg aat gtt ggt cac aga tca tta ggt cat 1533 Ala Glu Ser Thr His Leu Asn Val Gly His Arg Ser Leu Gly His 320 325 330 agc tta agt att gag tgt aaa gga att gat aaa gaa cta aat gaa 1578 Ser Leu Ser Ile Glu Cys Lys Gly Ile Asp Lys Glu Leu Asn Glu 335 340 345 tca aaa aat aca cat cta gat att cct aga ata agt tct tcc ttg 1623 Ser Lys Asn Thr His Leu Asp Ile Pro Arg Ile Ser Ser Ser Leu 350 355 360 gga aaa aag cca agt ttg act tct gac tct ggt att cat gca att 1668 Gly Lys Lys Pro Ser Leu Thr Ser Asp Ser Gly Ile His Ala Ile 365 370 375 act cct tcc gtt gtt aat ttt act agt ttg ttt agt aac aaa cct 1713 Thr Pro Ser Val Val Asn Phe Thr Ser Leu Phe Ser Asn Lys Pro 380 385 390 ttt tta aag ctt ggt gca gtc act gca cca gac aaa cac tgc cag 1758 Phe Leu Lys Leu Gly Ala Val Thr Ala Pro Asp Lys His Cys Gln 395 400 405 gtt gct gaa agc cta agc tcg agt ttc cag tcc aaa cca ttg aaa 1803 Val Ala Glu Ser Leu Ser Ser Ser Phe Gln Ser Lys Pro Leu Lys 410 415 420 aaa gaa aag gaa gaa aaa cct cgg tgg act aaa gtg gtg gca aga 1848 Lys Glu Lys Glu Glu Lys Pro Arg Trp Thr Lys Val Val Ala Arg 425 430 435 agc aca tgc cgg tct cca aaa gga cta gac tta gaa aga tca gag 1893 Ser Thr Cys Arg Ser Pro Lys Gly Leu Asp Leu Glu Arg Ser Glu 440 445 450 ctt ttt aag aat gtt tct tgt agc tca cta tca aat agt tct gag 1938 Leu Phe Lys Asn Val Ser Cys Ser Ser Leu Ser Asn Ser Ser Glu 455 460 465 cca gcg aag ttt atg aaa act atc gga gca tca tca ttc gtc gat 1983 Pro Ala Lys Phe Met Lys Thr Ile Gly Ala Ser Ser Phe Val Asp 470 475 480 cat gac ttc ctt aaa cgc cga ttg cca aag ttg agt aag tct tca 2028 His Asp Phe Leu Lys Arg Arg Leu Pro Lys Leu Ser Lys Ser Ser 485 490 495 gct cca tct ctt gct ctt tta acc gac agc gag aaa cca tct cat 2073 Ala Pro Ser Leu Ala Leu Leu Thr Asp Ser Glu Lys Pro Ser His 500 505 510 aag tct ttt att act cac aaa ctg tcc tcc agt atg tgt gtc act 2118 Lys Ser Phe Ile Thr His Lys Leu Ser Ser Ser Met Cys Val Thr 515 520 525 agc gat ctt ttg tcg gat att tat aag ccc aag aga gga aga cct 2163 Ser Asp Leu Leu Ser Asp Ile Tyr Lys Pro Lys Arg Gly Arg Pro 530 535 540 aaa tcc aag gaa atg cct cag cta gaa ggt cca cct aaa agg act 2208 Lys Ser Lys Glu Met Pro Gln Leu Glu Gly Pro Pro Lys Arg Thr 545 550 555 tta aaa ata cct gcc tct aaa gtt ttt tct tta cag tct aaa gaa 2253 Leu Lys Ile Pro Ala Ser Lys Val Phe Ser Leu Gln Ser Lys Glu 560 565 570 gag caa gaa ccc cca att tta caa cca gaa att gaa att cct tcc 2298 Glu Gln Glu Pro Pro Ile Leu Gln Pro Glu Ile Glu Ile Pro Ser 575 580 585 ttc aag caa agt ttg tct gta tct cct ttt cca aaa aaa aga ggc 2343 Phe Lys Gln Ser Leu Ser Val Ser Pro Phe Pro Lys Lys Arg Gly 590 595 600 agg cct aaa agg cag atg agg tct cca gtg aag atg aaa ccc cct 2388 Arg Pro Lys Arg Gln Met Arg Ser Pro Val Lys Met Lys Pro Pro 605 610 615 gtc ctg tca gtg gct cca ttt gtt gcc act gaa agt cca agt aag 2433 Val Leu Ser Val Ala Pro Phe Val Ala Thr Glu Ser Pro Ser Lys 620 625 630 ctc gag tct gaa agt gag aac cat aga agt agc agt gac ttt ttt 2478 Leu Glu Ser Glu Ser Glu Asn His Arg Ser Ser Ser Asp Phe Phe 635 640 645 gag agt gag gac cag ctt cag gac aca gac gac tta gat gac agt 2523 Glu Ser Glu Asp Gln Leu Gln Asp Thr Asp Asp Leu Asp Asp Ser 650 655 660 cac agg caa agt gtc tgt agt atg agt gac ctt gag atg gaa cca 2568 His Arg Gln Ser Val Cys Ser Met Ser Asp Leu Glu Met Glu Pro 665 670 675 gat aaa aaa att agc aag cga aac aat gga caa tta atg aaa aca 2613 Asp Lys Lys Ile Ser Lys Arg Asn Asn Gly Gln Leu Met Lys Thr 680 685 690 att atc cga aaa ata aat aaa atg aag act tta aag aga aaa aaa 2658 Ile Ile Arg Lys Ile Asn Lys Met Lys Thr Leu Lys Arg Lys Lys 695 700 705 ctg ttg aat cag att ctt tcg agt tct gta gaa tca agt aat aaa 2703 Leu Leu Asn Gln Ile Leu Ser Ser Ser Val Glu Ser Ser Asn Lys 710 715 720 gga aaa gtg cag tcc aag ctt cac aat aca gtc tca agt ctt gct 2748 Gly Lys Val Gln Ser Lys Leu His Asn Thr Val Ser Ser Leu Ala 725 730 735 gcc aca ttt ggc tct aaa ttg ggg caa caa atc aat gtc agc aag 2793 Ala Thr Phe Gly Ser Lys Leu Gly Gln Gln Ile Asn Val Ser Lys 740 745 750 aaa gga acc att tac ata ggg aag aga agg ggg cgg aaa cca aaa 2838 Lys Gly Thr Ile Tyr Ile Gly Lys Arg Arg Gly Arg Lys Pro Lys 755 760 765 acc gtc tta aat ggc ctg ctt tct ggt agc cct gcc agc ctt gct 2883 Thr Val Leu Asn Gly Leu Leu Ser Gly Ser Pro Ala Ser Leu Ala 770 775 780 gtg ctt gaa aaa aca gct cag cag gca gct ggg tca gca tta gga 2928 Val Leu Glu Lys Thr Ala Gln Gln Ala Ala Gly Ser Ala Leu Gly 785 790 795 cag atc ctc ccc cct tta ctg cca tca cct gtt agt agc tct gag 2973 Gln Ile Leu Pro Pro Leu Leu Pro Ser Pro Val Ser Ser Ser Glu 800 805 810 atc ctt cca tca cct att tgc tct cag tct tct ggg act agt gga 3018 Ile Leu Pro Ser Pro Ile Cys Ser Gln Ser Ser Gly Thr Ser Gly 815 820 825 ggt cag agc cct gtt agt agt gac gca ggc ttt gtt gaa cct agc 3063 Gly Gln Ser Pro Val Ser Ser Asp Ala Gly Phe Val Glu Pro Ser 830 835 840 tca gtg cca tat ttg cat gtg cac tcc aga cag ggc agt atg att 3108 Ser Val Pro Tyr Leu His Val His Ser Arg Gln Gly Ser Met Ile 845 850 855 cag act ctt gca atg aag aag gct tcc aag ggc aga agg cgg ctc 3153 Gln Thr Leu Ala Met Lys Lys Ala Ser Lys Gly Arg Arg Arg Leu 860 865 870 tct cct cct act ttg ttg cca aat tct cct tct cat ttg agt gaa 3198 Ser Pro Pro Thr Leu Leu Pro Asn Ser Pro Ser His Leu Ser Glu 875 880 885 ctc aca tcc ctg aaa gaa gcc act cct tcc cca gtt agt gag tct 3243 Leu Thr Ser Leu Lys Glu Ala Thr Pro Ser Pro Val Ser Glu Ser 890 895 900 cat agt gac gag acc att ccc agt gac agt ggc att ggg aca gat 3288 His Ser Asp Glu Thr Ile Pro Ser Asp Ser Gly Ile Gly Thr Asp 905 910 915 aat aat agc aca tca gac agg gca gag aag ttt tgt gga cag aaa 3333 Asn Asn Ser Thr Ser Asp Arg Ala Glu Lys Phe Cys Gly Gln Lys 920 925 930 aag agg aga cat tct ttt gag cac att tct ctg att ccc cct gaa 3378 Lys Arg Arg His Ser Phe Glu His Ile Ser Leu Ile Pro Pro Glu 935 940 945 act tct acc gtc cta aac agt ctc aaa gaa aaa cac aaa cac aaa 3423 Thr Ser Thr Val Leu Asn Ser Leu Lys Glu Lys His Lys His Lys 950 955 960 tgt aag cgc agg agt cac gat tac ctc agc tat gac aag atg aaa 3468 Cys Lys Arg Arg Ser His Asp Tyr Leu Ser Tyr Asp Lys Met Lys 965 970 975 aga cag aag cga aaa cgg aaa aag aaa tat ccc cag ctt cga aat 3513 Arg Gln Lys Arg Lys Arg Lys Lys Lys Tyr Pro Gln Leu Arg Asn 980 985 990 agg cag gat cca gac ttc atc gca gaa cta gag gag ctg ata agt 3558 Arg Gln Asp Pro Asp Phe Ile Ala Glu Leu Glu Glu Leu Ile Ser 995 1000 1005 cgt cta agt gag att cgg atc acc cat cga agc cat cat ttt att 3603 Arg Leu Ser Glu Ile Arg Ile Thr His Arg Ser His His Phe Ile 1010 1015 1020 ccc cga gac ctc ctg cca act att ttt cga atc aac ttt aat agt 3648 Pro Arg Asp Leu Leu Pro Thr Ile Phe Arg Ile Asn Phe Asn Ser 1025 1030 1035 ttc tat aca cat cct tct ttt ccc tta gac cca ttg cac tac att 3693 Phe Tyr Thr His Pro Ser Phe Pro Leu Asp Pro Leu His Tyr Ile 1040 1045 1050 cgg aaa cct gac tta aaa aag aaa cga ggg agg ccc cct aag atg 3738 Arg Lys Pro Asp Leu Lys Lys Lys Arg Gly Arg Pro Pro Lys Met 1055 1060 1065 agg gag gca atg gca gaa atg cct ttt atg cac agc ctt agt ttt 3783 Arg Glu Ala Met Ala Glu Met Pro Phe Met His Ser Leu Ser Phe 1070 1075 1080 cct tta tct agt act gga ttt tat cct tct tat ggc atg cct tac 3828 Pro Leu Ser Ser Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Tyr Gly Met Pro Tyr 1085 1090 1095 tct ccc tca ccc ctt aca gct gct cca ata gga tta ggg tat tat 3873 Ser Pro Ser Pro Leu Thr Ala Ala Pro Ile Gly Leu Gly Tyr Tyr 1100 1105 1110 gga agg tat ccc ccc act ctt tat cca ccg cca cca tct cct tca 3918 Gly Arg Tyr Pro Pro Thr Leu Tyr Pro Pro Pro Pro Ser Pro Ser 1115 1120 1125 ttc acc act cca ctg cca cct ccc tcc tat atg cat gct ggt cat 3963 Phe Thr Thr Pro Leu Pro Pro Pro Ser Tyr Met His Ala Gly His 1130 1135 1140 tta ttg ctc aat cct acc aaa tat cat aag aaa aag cat aag ctg 4008 Leu Leu Leu Asn Pro Thr Lys Tyr His Lys Lys Lys His Lys Leu 1145 1150 1155 ctt aga cag gag gct ttt ctt aca acc agc agg acc cct ctc ctt 4053 Leu Arg Gln Glu Ala Phe Leu Thr Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu 1160 1165 1170 tcc atg agc acc tac ccc agc gta cct cca gag atg gct tat ggt 4098 Ser Met Ser Thr Tyr Pro Ser Val Pro Pro Glu Met Ala Tyr Gly 1175 1180 1185 tgg atg gtg gag cac aaa cac aga cac cgt cac aaa cac aga gag 4143 Trp Met Val Glu His Lys His Arg His Arg His Lys His Arg Glu 1190 1195 1200 cac cgt tct gaa cag ccc cag gtt tcc atg gat agt ggc tct tcc 4188 His Arg Ser Glu Gln Pro Gln Val Ser Met Asp Ser Gly Ser Ser 1205 1210 1215 aga tcc gtc ttg gag tct ttg aaa cgt tac cga ttt ggt aag gat 4233 Arg Ser Val Leu Glu Ser Leu Lys Arg Tyr Arg Phe Gly Lys Asp 1220 1225 1230 act gtt gga gat cga tat aag cat aag gaa aag cac agg tgt cac 4278 Thr Val Gly Asp Arg Tyr Lys His Lys Glu Lys His Arg Cys His 1235 1240 1245 atg tcc tgc cct cat ctc tct cct tca aag aac tta ata aac aga 4323 Met Ser Cys Pro His Leu Ser Pro Ser Lys Asn Leu Ile Asn Arg 1250 1255 1260 gaa gaa cag tgg gtt tct cga gag cct tca gaa tca agt tct tta 4368 Glu Glu Gln Trp Val Ser Arg Glu Pro Ser Glu Ser Ser Ser Leu 1265 1270 1275 gcc ttg gga ttg caa aca cct tta caa att gac tgc tca gaa agt 4413 Ala Leu Gly Leu Gln Thr Pro Leu Gln Ile Asp Cys Ser Glu Ser 1280 1285 1290 tct ccc agt ttg tcc ctt gga gga ttt act ccc aat tct gag cca 4458 Ser Pro Ser Leu Ser Leu Gly Gly Phe Thr Pro Asn Ser Glu Pro 1295 1300 1305 gcc agc agt gat gaa cat atg aac ctt ttt aca agt gca ata ggc 4503 Ala Ser Ser Asp Glu His Met Asn Leu Phe Thr Ser Ala Ile Gly 1310 1315 1320 agc tgc aga gtt tca aac cct aac tcc agt tgc cgg aag aaa tta 4548 Ser Cys Arg Val Ser Asn Pro Asn Ser Ser Cys Arg Lys Lys Leu 1325 1330 1335 act gac agc ccc ggg ctc ttt cct gta caa gat act gca cta aat 4593 Thr Asp Ser Pro Gly Leu Phe Pro Val Gln Asp Thr Ala Leu Asn 1340 1345 1350 cgg cct cac aga aag gaa cca tta cct tcc agt gaa agg gca ata 4638 Arg Pro His Arg Lys Glu Pro Leu Pro Ser Ser Glu Arg Ala Ile 1355 1360 1365 cag tcg ttg gca ggt tcc cag tca gct tcc gat aaa cct tcc cag 4683 Gln Ser Leu Ala Gly Ser Gln Ser Ala Ser Asp Lys Pro Ser Gln 1370 1375 1380 cga tca tca gaa agc aca aat tgt agc cct act cgt aaa agg 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Leu Ser Glu Lys Ser Ala Ser Arg Cys Ser Pro His 1490 1495 1500 cac atc aag aga agt gta gtt gaa gct atg caa cgc caa gct cgg 5088 His Ile Lys Arg Ser Val Val Glu Ala Met Gln Arg Gln Ala Arg 1505 1510 1515 aaa atg tgc aat tat gac aaa atc ttg gcc acc aag aaa aac ctg 5133 Lys Met Cys Asn Tyr Asp Lys Ile Leu Ala Thr Lys Lys Asn Leu 1520 1525 1530 gac cat gtt aat aaa att tta aaa gcc aaa aaa ctt caa agg cag 5178 Asp His Val Asn Lys Ile Leu Lys Ala Lys Lys Leu Gln Arg Gln 1535 1540 1545 gcc agg aca gga aac aat ttt gtg aaa cgc aga cca ggt cga cct 5223 Ala Arg Thr Gly Asn Asn Phe Val Lys Arg Arg Pro Gly Arg Pro 1550 1555 1560 cgg aaa tgc ccc ctc caa gca gtg gtg tca atg caa gcc ttc cag 5268 Arg Lys Cys Pro Leu Gln Ala Val Val Ser Met Gln Ala Phe Gln 1565 1570 1575 gcc gcc cag ttt gtc agc ccg gaa ttg aat gaa ggc gaa gac atg 5313 Ala Ala Gln Phe Val Ser Pro Glu Leu Asn Glu Gly Glu Asp Met 1580 1585 1590 tcc ctg cac cta agt cca gac aca gtc act gat gtg atc gag gct 5358 Ser Leu His Leu Ser Pro Asp Thr Val Thr Asp Val Ile Glu Ala 1595 1600 1605 gtg gtt cag agt gtg aac ctc act tca gaa cat aag aag ggg gtg 5403 Val Val Gln Ser Val Asn Leu Thr Ser Glu His Lys Lys Gly Val 1610 1615 1620 aag agg aaa aat tgg ctg tta gaa gaa cag act agg aaa aag cag 5448 Lys Arg Lys Asn Trp Leu Leu Glu Glu Gln Thr Arg Lys Lys Gln 1625 1630 1635 aag aca gta cca gag gaa gaa gag caa gaa aac aat aaa agc ttt 5493 Lys Thr Val Pro Glu Glu Glu Glu Gln Glu Asn Asn Lys Ser Phe 1640 1645 1650 ata gaa aca cca gtt gaa att ccc agt cct ctt gaa acg cct gct 5538 Ile Glu Thr Pro Val Glu Ile Pro Ser Pro Leu Glu Thr Pro Ala 1655 1660 1665 gaa cct tct gaa cct gaa aat acc ttg caa cct gtg ctg gct ctc 5583 Glu Pro Ser Glu Pro Glu Asn Thr Leu Gln Pro Val Leu Ala Leu 1670 1675 1680 atc cca cga gaa aag aag gcc cca cgt cct cca aag aag aaa tac 5628 Ile Pro Arg Glu Lys Lys Ala Pro Arg Pro Pro Lys Lys Lys Tyr 1685 1690 1695 cag aga gct ggg ctg tat tct gat gtt tcc aaa aca ata gac cca 5673 Gln Arg Ala Gly Leu Tyr Ser Asp Val Ser Lys Thr Ile Asp Pro 1700 1705 1710 aag agc cga tta atc caa tta aag aaa gaa aag ttg gag tat act 5718 Lys Ser Arg Leu Ile Gln Leu Lys Lys Glu Lys Leu Glu Tyr Thr 1715 1720 1725 cca gga gag cac gag tat ggg ttg ttc cca gcg ccc att cat gtt 5763 Pro Gly Glu His Glu Tyr Gly Leu Phe Pro Ala Pro Ile His Val 1730 1735 1740 gga aag tat ctc aga cag aag aga att gac ttc cag ctt ccc tat 5808 Gly Lys Tyr Leu Arg Gln Lys Arg Ile Asp Phe Gln Leu Pro Tyr 1745 1750 1755 gat att ctc tgg cag tgg aaa cac aat cag cta tac aaa aag cca 5853 Asp Ile Leu Trp Gln Trp Lys His Asn Gln Leu Tyr Lys Lys Pro 1760 1765 1770 gat gtc ccc ctg tat aaa aaa atc cgt tca aat gtc tat gtt gat 5898 Asp Val Pro Leu Tyr Lys Lys Ile Arg Ser Asn Val Tyr Val Asp 1775 1780 1785 gtc aaa cca ctt tct ggt tat gag gct acc acc tgt aat tgt aag 5943 Val Lys Pro Leu Ser Gly Tyr Glu Ala Thr Thr Cys Asn Cys Lys 1790 1795 1800 aag cca gat gac gac acc agg aag ggc tgt ggg gat gac tgc cta 5988 Lys Pro Asp Asp Asp Thr Arg Lys Gly Cys Gly Asp Asp Cys Leu 1805 1810 1815 aat aga atg atc ttt gct gag tgt tcc cct aac act tgc ccc tgt 6033 Asn Arg Met Ile Phe Ala Glu Cys Ser Pro Asn Thr Cys Pro Cys 1820 1825 1830 ggt gag cag tgc tgt aac cag agg ata cag agg cat gag tgg gtg 6078 Gly Glu Gln Cys Cys Asn Gln Arg Ile Gln Arg His Glu Trp Val 1835 1840 1845 cag tgt ctg gaa cga ttt cga gct gag gaa aaa ggt tgg gga att 6123 Gln Cys Leu Glu Arg Phe Arg Ala Glu Glu Lys Gly Trp Gly Ile 1850 1855 1860 aga acc aaa gaa ccc cta aaa gct ggc cag ttc atc att gaa tac 6168 Arg Thr Lys Glu Pro Leu Lys Ala Gly Gln Phe Ile Ile Glu Tyr 1865 1870 1875 cta ggg gaa gtt gtc agc gaa caa gaa ttc agg aac agg atg att 6213 Leu Gly Glu Val Val Ser Glu Gln Glu Phe Arg Asn Arg Met Ile 1880 1885 1890 gag caa tat cat aat cac agt gac cac tac tgt tta aac ctg gat 6258 Glu Gln Tyr His Asn His Ser Asp His Tyr Cys Leu Asn Leu Asp 1895 1900 1905 agc gga atg gtg att gac agt tac cgc atg gga aat gag gcc aga 6303 Ser Gly Met Val Ile Asp Ser Tyr Arg Met Gly Asn Glu Ala Arg 1910 1915 1920 ttc atc aac cac agc tgt gac cca aat tgt gaa atg cag aaa tgg 6348 Phe Ile Asn His Ser Cys Asp Pro Asn Cys Glu Met Gln Lys Trp 1925 1930 1935 tct gtt aat gga gtg tac cgt att gga ctg tat gca ctt aag gat 6393 Ser Val Asn Gly Val Tyr Arg Ile Gly Leu Tyr Ala Leu Lys Asp 1940 1945 1950 atg cca gct ggg aca gag ctt acc tat gat tac aac ttt cat tcc 6438 Met Pro Ala Gly Thr Glu Leu Thr Tyr Asp Tyr Asn Phe His Ser 1955 1960 1965 ttc aat gta gaa aaa cag caa ctt tgt aaa tgt ggt ttt gag aag 6483 Phe Asn Val Glu Lys Gln Gln Leu Cys Lys Cys Gly Phe Glu Lys 1970 1975 1980 tgt cga gga atc att gga ggc aag agt caa cgg atg aac gga ctc 6528 Cys Arg Gly Ile Ile Gly Gly Lys Ser Gln Arg Met Asn Gly Leu 1985 1990 1995 cct agc cat aaa ggt agc cag tct tca agc acg cat aga aag tct 6573 Pro Ser His Lys Gly Ser Gln Ser Ser Ser Thr His Arg Lys Ser 2000 2005 2010 gca cgg gcg aaa gag aag cgg aag tcc aag cac aag ctg aag aaa 6618 Ala Arg Ala Lys Glu Lys Arg Lys Ser Lys His Lys Leu Lys Lys 2015 2020 2025 agg aaa ggc cat ccc tct gaa gag ccc agt gaa aac atc aac acc 6663 Arg Lys Gly His Pro Ser Glu Glu Pro Ser Glu Asn Ile Asn Thr 2030 2035 2040 cca aca aga ttg act cca cag tta cag atg aag cca atg tcc aac 6708 Pro Thr Arg Leu Thr Pro Gln Leu Gln Met Lys Pro Met Ser Asn 2045 2050 2055 aga gag agg aac ttc gtg cta aag cac cat gtg ttc ttg gtg cga 6753 Arg Glu Arg Asn Phe Val Leu Lys His His Val Phe Leu Val Arg 2060 2065 2070 aac tgg gaa aag atc cat cag aag cag gag gag gtg aag cac acc 6798 Asn Trp Glu Lys Ile His Gln Lys Gln Glu Glu Val Lys His Thr 2075 2080 2085 cgt gac atc cac tca gca tcg ctg tac acc cgc tgg aac ggc ctc 6843 Arg Asp Ile His Ser Ala Ser Leu Tyr Thr Arg Trp Asn Gly Leu 2090 2095 2100 tgt cgg gac gac ggg aac att aag tct gat gtc ttc atg acc cag 6888 Cys Arg Asp Asp Gly Asn Ile Lys Ser Asp Val Phe Met Thr Gln 2105 2110 2115 ttc tct gcc ctg cag aca gct aga tct gtt cga aca aga cgc ttg 6933 Phe Ser Ala Leu Gln Thr Ala Arg Ser Val Arg Thr Arg Arg Leu 2120 2125 2130 gca gct gca gag gaa aac ctg gaa gtg gct cgg gca gcg cgc cta 6978 Ala Ala Ala Glu Glu Asn Leu Glu Val Ala Arg Ala Ala Arg Leu 2135 2140 2145 gca cag atc ttc aaa gag atc tgt gat ggc atc atc tcc tac aga 7023 Ala Gln Ile Phe Lys Glu Ile Cys Asp Gly Ile Ile Ser Tyr Arg 2150 2155 2160 gac tct tcc cag caa acc ctt gca gct cca ctt ttg aat ctt ccc 7068 Asp Ser Ser Gln Gln Thr Leu Ala Ala Pro Leu Leu Asn Leu Pro 2165 2170 2175 cca aag aaa aaa aat gct gac tat tat gag aag atc tct gac ccc 7113 Pro Lys Lys Lys Asn Ala Asp Tyr Tyr Glu Lys Ile Ser Asp Pro 2180 2185 2190 ctg gat ctc agc acc ata gag aag cag atc ctc att ggg tat tac 7158 Leu Asp Leu Ser Thr Ile Glu Lys Gln Ile Leu Ile Gly Tyr Tyr 2195 2200 2205 aaa aca gtg gag gct ttc gat gct gac atg ctt aag gtc ttt cgg 7203 Lys Thr Val Glu Ala Phe Asp Ala Asp Met Leu Lys Val Phe Arg 2210 2215 2220 aat gct gag aag tac tat ggg cgt aaa tcc cca att ggg aga gat 7248 Asn Ala Glu Lys Tyr Tyr Gly Arg Lys Ser Pro Ile Gly Arg Asp 2225 2230 2235 gtt tgc cgc tta cga aag gcc tat tac agc gcc cgg cat gaa gct 7293 Val Cys Arg Leu Arg Lys Ala Tyr Tyr Ser Ala Arg His Glu Ala 2240 2245 2250 tcg gct cag atc gat gag att gtg gga gaa acg gcc agt gag gcc 7338 Ser Ala Gln Ile Asp Glu Ile Val Gly Glu Thr Ala Ser Glu Ala 2255 2260 2265 gac agc agc gag acc tca gtc tcc gag aag gag agc ggg cac gag 7383 Asp Ser Ser Glu Thr Ser Val Ser Glu Lys Glu Ser Gly His Glu 2270 2275 2280 aag gat gat gat gtt atc cgc tgc atc tgc ggc ctc tat aaa gat 7428 Lys Asp Asp Asp Val Ile Arg Cys Ile Cys Gly Leu Tyr Lys Asp 2285 2290 2295 gaa ggc ctc atg atc cag tgt gac aag tgc atg gtg tgg cag cac 7473 Glu Gly Leu Met Ile Gln Cys Asp Lys Cys Met Val Trp Gln His 2300 2305 2310 tgc gac tgc atg ggt gtg aac acg gat gtg gag cac tac ctt tgt 7518 Cys Asp Cys Met Gly Val Asn Thr Asp Val Glu His Tyr Leu Cys 2315 2320 2325 gag cag tgt gac cct cgg cct gtg gac agg gag gta ccc atg atc 7563 Glu Gln Cys Asp Pro Arg Pro Val Asp Arg Glu Val Pro Met Ile 2330 2335 2340 cct agg ccc cac tat gcc cag ccc ggc tgt gtc tac ttc atc tgt 7608 Pro Arg Pro His Tyr Ala Gln Pro Gly Cys Val Tyr Phe Ile Cys 2345 2350 2355 tta ctc cga gat gac ttg ctg ctt cgt cag ggt cat tgt gtg tac 7653 Leu Leu Arg Asp Asp Leu Leu Leu Arg Gln Gly His Cys Val Tyr 2360 2365 2370 ctg atg agg gac agt cgg cgc acg cct gat ggc cac cca gtc cgt 7698 Leu Met Arg Asp Ser Arg Arg Thr Pro Asp Gly His Pro Val Arg 2375 2380 2385 cag tcc tac aga ctc tta tct cac att aac cga gat aaa ctt gac 7743 Gln Ser Tyr Arg Leu Leu Ser His Ile Asn Arg Asp Lys Leu Asp 2390 2395 2400 atc ttt aga atc gag aag ctc tgg aag aat gaa aaa gaa gaa cgg 7788 Ile Phe Arg Ile Glu Lys Leu Trp Lys Asn Glu Lys Glu Glu Arg 2405 2410 2415 ttt gcc ttt ggt cac cat tat ttc cgc cca cat gag act cat cac 7833 Phe Ala Phe Gly His His Tyr Phe Arg Pro His Glu Thr His His 2420 2425 2430 tct cca tcc cgt cgg ttc tat cac aac gag ctg ttc cgg gtg ccc 7878 Ser Pro Ser Arg Arg Phe Tyr His Asn Glu Leu Phe Arg Val Pro 2435 2440 2445 ctc tat gag atc att ccc ttg gag gcc gta gtt ggg acc tgc tgt 7923 Leu Tyr Glu Ile Ile Pro Leu Glu Ala Val Val Gly Thr Cys Cys 2450 2455 2460 gtg ttg gac ctt tat aca tac tgt aaa ggg aga ccc aaa gga ata 7968 Val Leu Asp Leu Tyr Thr Tyr Cys Lys Gly Arg Pro Lys Gly Ile 2465 2470 2475 aag gaa caa gat gtg tat atc tgt gat tat cgg ctt gac aag tca 8013 Lys Glu Gln Asp Val Tyr Ile Cys Asp Tyr Arg Leu Asp Lys Ser 2480 2485 2490 gca cac ctt ttt tac aag att cat cgg aat cga tat ccg gtc tgc 8058 Ala His Leu Phe Tyr Lys Ile His Arg Asn Arg Tyr Pro Val Cys 2495 2500 2505 acc aag ccc tat gcc ttt gat cat ttc ccc aag aag ctc act ccc 8103 Thr Lys Pro Tyr Ala Phe Asp His Phe Pro Lys Lys Leu Thr Pro 2510 2515 2520 aaa aga gac ttc tca cct cat tat gtc cca gac aac tac aag agg 8148 Lys Arg Asp Phe Ser Pro His Tyr Val Pro Asp Asn Tyr Lys Arg 2525 2530 2535 aac gga gga cga tca tcc tgg aag tct gaa cgc tca aag cca ccc 8193 Asn Gly Gly Arg Ser Ser Trp Lys Ser Glu Arg Ser Lys Pro Pro 2540 2545 2550 cta aaa gac cta gga caa gaa gat gat gct ttg ccc ttg att gaa 8238 Leu Lys Asp Leu Gly Gln Glu Asp Asp Ala Leu Pro Leu Ile Glu 2555 2560 2565 gag gta ctg gct agt cag gag caa gca gcc agg gaa gtg ccc agc 8283 Glu Val Leu Ala Ser Gln Glu Gln Ala Ala Arg Glu Val Pro Ser 2570 2575 2580 cct gag gag cca gac cag gaa aga gcc act ggg gac att ggg gac 8328 Pro Glu Glu Pro Asp Gln Glu Arg Ala Thr Gly Asp Ile Gly Asp 2585 2590 2595 gct gaa aag aaa cca gag gag agc agt caa gaa gcc cag tta gcc 8373 Ala Glu Lys Lys Pro Glu Glu Ser Ser Gln Glu Ala Gln Leu Ala 2600 2605 2610 agc aca cct gag gag cga agg cac agc cag agg gaa cgg ctc aac 8418 Ser Thr Pro Glu Glu Arg Arg His Ser Gln Arg Glu Arg Leu Asn 2615 2620 2625 cag atc ctg ctc aac ctc ctt gag aaa ata cct ggg aaa aat gcc 8463 Gln Ile Leu Leu Asn Leu Leu Glu Lys Ile Pro Gly Lys Asn Ala 2630 2635 2640 att gac gtg acc tac ctg ctg gag gaa ggg tcc ggc agg aaa ctg 8508 Ile Asp Val Thr Tyr Leu Leu Glu Glu Gly Ser Gly Arg Lys Leu 2645 2650 2655 cga agg cgc act ttg ttt ata cca gaa aat agc ttt cgg aag tga 8553 Arg Arg Arg Thr Leu Phe Ile Pro Glu Asn Ser Phe Arg Lys 2660 2665 2669 ctctcaaaag gatgagaacc gcgagcgagc acctgggatc caacggcacc atcaagtcca 8613 gcctcttgct ctctggacat ggactggggc agaaaagttc tgttcaggca aggggggtgg 8673 ggtcacgttt ctgacatggt actttctaaa gctcggagct agtggaaagg gaaaggaagt 8733 aggcttgtct gagacgggtg cgtttacttc tctctctggc ttctcctgag ggttaacaga 8793 gacaggagga ctacacttgg agtagccaga agctactggt actttccagc acttccaaag 8853 ggaagggtcc ggacccagcc tgccccgttt atctcttagc tctaagagct acgtcagaga 8913 cctaaacagg tcagtagctg aggcctcttt taagttcctt taacgggaaa gttctttctc 8973 ccttcttgcc caaccaggtc aaagtactag aacatgaatc agctgctcag agcacttaga 9033 actgctgcca ctctccctac ctctgttccc agagtagagt cagtagaacc agggaggcgg 9093 agaggccccc atggggtccg aagggcagta ttggtaatta tttttggttt acccttcata 9153 acctgccgaa catacttttt cctcctgaga aagcccagcc cccgccagca cacatgctgc 9213 ttctcttcct gtgtgtctgc tgtgcaaaag attcacgtcc aagaaagaaa aacggtttgt 9273 aaaactgcat aaaccctcat acacttctcc cctaacaaaa ctcactacag aactgttgag 9333 cagtgttcac tctcggagtg tttgttctaa gtgtaggtta ccgagtgaaa cactactctt 9393 attttcttaa ctgtatagtt ccggtgtccg tccctcccac gagtcccatt ttccttccac 9453 ctttctgaat gacttcatca tcaggaggta tagccagggt caccttctca cccagtctct 9513 tgaccagaag ttaccagacc atactgtctc tttacaagta aaattcaaaa agctttgctt 9573 tgtcttctca gacatacata tgcatatgaa aagatggttt ttaaatgtgc caagtttatg 9633 tgtgtgtata aatatatata tgtgtgtgtg tgcgtgtata tatatatgtg tgtgtgtgta 9693 tgtgtatata tatatgtgtg tgtgggtgcg agtgtgcgag tatgtgtatg tgggggtggg 9753 tgcgcgtgtg tgtgtgtgtg tgtatgctgt gagattggta agcaatacat tagtaaacac 9813 atcttcatta ctcttttcca atactggacc aatgatgtcc taactgtaca tttccttccc 9873 cttatgatga cgacgctctg actcatttag gtagagacat ttgaccacct tcattccatt 9933 gatttttttt tttctccttt ctgtgttatt cttaagggaa aagagagaga gagaaagagg 9993 ggatggcata gatccccttg agcagagaaa aagcaaaata ttttattaaa aaaaaaaaaa 10053 aaaaaaaaaa aaaaaa 10069& #26;

【図面の簡単な説明】

【図１】Ｔ細胞欠損マウスを用いたディファレンシャル
スクリーニング。（Ａ）ＲＡＧ１及びＴＣＲα遺伝子ノックアウトにより
影響されるＴ細胞分化チェックポイントのスキーム図。（Ｂ）ＲＡＧ１^-/-、ＴＣＲα^-/-及び野生型マウス由来
の胸腺におけるクローンＡ２５及びＧ３ＰＤＨのＲＴ−
ＰＣＲ分析。数値は臭化エチジウムで標識したＡ２５Ｐ
ＣＲ断片の、Ｇ３ＰＤＨに対して規格化した相対強度。（Ｃ）胸腺（Ｔｈ）、リンパ節（ＬＮ）、睾丸（Ｔ
ｅ）、卵巣（Ｏｖ）、脳（Ｂｒ）、肝（Ｌｖ）、心臓
（Ｈｔ）、及び肺（Ｌｇ）におけるｓａｂ１発現のノー
ザンブロット分析。ＲＮＡサイズマーカーも示す。

【図２】ＳＡＢ１とクロマチン調節タンパク質のホモロ
ジー。（Ａ）クロマチン再構築因子とｔｒｘ−Ｇタンパク質の
Ｐｆａｍドメインのスキーム図。付加的なモチーフを注
釈付の白枠で示す。（Ｂ）ＳＡＢ１、ＡＳＨ１、及びＭＴＤＭ及びＡＬＬ１
のＣＸＸＣモチーフを有するＬＩＮ−５９のＰＨＤフィ
ンガー（上部の黒丸は保存されたシステイン残基を示
す）と、他のタンパク質のＰＨＤフィンガー（下部の白
丸は保存されたＣ₄ＨＣ₃モチーフを示す）の整列。（Ｃ）Ｐ／ＣＡＦ（ＰＤＢ受託番号、１Ｂ９１）の構造
データに従ったブロモドメインの整列。ＤＤＢＪ／ＥＭ
ＢＬ／ジーンバンク受託番号：Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎ
ｓＰ／ＣＡＦ（ｈＰ／ＣＡＦ，ＡＡＣ５０８９０），Ｂ
ＲＭ（ｈＢＲＭ，Ｓ４５２５１），ＢＲＧ１（ｈＢＲＧ
１，Ｓ３９０５９），ＷＳＴＦ（ｈＷＳＴＦ，ＡＡＤ０
８６７５），ＡＬＬ１（ｈＡＬＬ１，Ｑ０３１６４），
ＡＣ００５０６５（ｈＡＣ００５０６５，ＡＡＤ０４７
２１），ＳＥＢ（ｈＳＥＢ，ＢＡＡ８２４４４）及びＭ
ＴＤＭ（ｈＭＴＤＭ，ＡＡＤ５４０５７）；Ｇａｌｌｕ
ｓｇａｌｌｕｓＰｏｌｙｂｒｏｍｏ−１（ｇＰＢ１，
ＣＡＡ６２３５３）；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａ
ｎｏｇａｓｔｅｒＡｓｈ１（ｄＡＳＨ１，ＡＡＢ０１
１００）；Ｃａｅｎｏｒａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎ
ｓＬＩＮ−５９（ｎＬＩＮ−５９，ＡＡＤ４９３２
４）；及びＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｐｏｍｂｅＲｓｃ１（ｙＲｓｃ１，ＮＰ＿０１１５７
０）。

【図３】Ｔ細胞発生に対するＳＡＢ１断片の優勢ネガテ
ィブ効果。（Ａ）ｐＭＸベクターに基づくバイシストロン性のレト
ロウイルス構築体。（Ｂ−Ｄ）ＧＦＰのみ（Ｂ）、ＳＥＴ−ＧＦＰ（Ｃ）又
はＰＨＤ−ＧＦＰ（Ｄ）で形質導入されたＮＩＨ３Ｔ３
フィブロブラストにおけるＧＦＰ発現のヒストグラム。（Ｅ−Ｆ）ＧＦＰのみ（Ｅ）、ＳＥＴ−ＧＦＰ（Ｆ）又
はＰＨＤ−ＧＦＰ（Ｇ）での形質導入後の培養胸腺細胞
におけるＧＦＰの発現。（Ｈ−Ｊ）ＧＦＰのみ（Ｈ）、ＳＥＴ−ＧＦＰ（Ｉ）又
はＰＨＤ−ＧＦＰ（Ｊ）での形質導入後のＧＦＰ^-細胞
におけるＣＤ４及びＣＤ８の発現。（Ｋ−Ｍ）ＧＦＰのみ（Ｋ）、ＳＥＴ−ＧＦＰ（Ｌ）又
はＰＨＤ−ＧＦＰ（Ｍ）での形質導入後のＧＦＰ⁺細胞
におけるＣＤ４及びＣＤ８の発現。

フロントページの続きＦターム(参考） 4B024 BA21 BA80 CA04 DA02 EA02 GA11 HA11 4C084 AA01 AA07 BA01 BA02 BA08 BA19 BA21 BA22 DC50 4H045 AA10 AA30 BA10 CA40 DA01 EA20 EA50 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号１若しくは２のアミノ酸配列、
又は一個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは
付加されたアミノ酸配列からなるＴ細胞分化調節因子。
【請求項２】請求項１のＴ細胞分化調節因子を含むＴ
細胞分化阻害剤。
【請求項３】請求項１のＴ細胞分化調節因子を含むＨ
ＯＸＡ５遺伝子発現阻害剤。
【請求項４】以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質：（ａ）配列番号３のアミノ酸配列からなるタンパク質、
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列において一個又は数個
のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列か
らなり、かつＴ細胞分化促進活性を有するタンパク質。
【請求項５】請求項４の（ａ）又は（ｂ）のタンパク
質をコードする遺伝子。
【請求項６】以下の（ｃ）又は（ｄ）からなる遺伝
子：（ｃ）配列番号４の塩基配列からなるＤＮＡ、（ｄ）配
列番号４の塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェント
な条件でハイブリダイズし、かつＴ細胞分化促進活性を
有するタンパク質をコードするＤＮＡ。
【請求項７】請求項４のタンパク質を含むＴ細胞分化
調節因子。
【請求項８】請求項４のタンパク質を含むＴ細胞分化
促進剤。