JP2002142792A - 光学活性シアノヒドリンおよび二次生成物の製造法 - Google Patents
光学活性シアノヒドリンおよび二次生成物の製造法Info
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- C12P13/004—Cyanohydrins
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 光学活性シアノヒドリンおよび二次生成物の
製造法 【解決手段】 式（Ｉ）のアルデヒドをＨＣＮと、水と
混和し得ない有機溶剤中、水の存在下、緩衝剤の不存在
下または存在下、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ
の存在下で反応させて、式(II)の光学活性シアノヒドリ
ンを製造する方法。 【化１】 ここでＸ、ＹおよびＺは、互いに独立して、同一である
か、または異なるものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキルであ
る。
製造法 【解決手段】 式（Ｉ）のアルデヒドをＨＣＮと、水と
混和し得ない有機溶剤中、水の存在下、緩衝剤の不存在
下または存在下、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ
の存在下で反応させて、式(II)の光学活性シアノヒドリ
ンを製造する方法。 【化１】 ここでＸ、ＹおよびＺは、互いに独立して、同一である
か、または異なるものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキルであ
る。
Description
【０００１】本発明は、高活性（Ｒ）−ヒドロキシニト
リルリアーゼ抽出物を使用する光学活性シアノヒドリン
の製造法に関するものである。
リルリアーゼ抽出物を使用する光学活性シアノヒドリン
の製造法に関するものである。
【０００２】光学活性シアノヒドリンおよびそれらの二
次生成物、例えば光学活性α−ヒドロキシカルボン酸、
は、例えばF. Effenberger: Hydroxynitrile Lyases in
Stereoselective Synthesis(R.N. Patel編集のStereos
elective Biocatalysis、Marcel Dekker Inc. New York
- Basle 2000, 321〜342頁）に記載されている様に、製
薬および農薬工業で使用される生物学的に活性な物質を
製造するための構築ブロックとして役立つ。
次生成物、例えば光学活性α−ヒドロキシカルボン酸、
は、例えばF. Effenberger: Hydroxynitrile Lyases in
Stereoselective Synthesis(R.N. Patel編集のStereos
elective Biocatalysis、Marcel Dekker Inc. New York
- Basle 2000, 321〜342頁）に記載されている様に、製
薬および農薬工業で使用される生物学的に活性な物質を
製造するための構築ブロックとして役立つ。
【０００３】光学活性シアノヒドリンを合成するための
可能な方法は、天然物質から製造されるヒドロキシニト
リルリアーゼの使用であり、このヒドロキシニトリルリ
アーゼは、その天然物質に応じてＲまたはＳ形態で製造
することができ、青酸の存在下で、アルデヒドを対応す
る（Ｒ）−または（Ｓ）−シアノヒドリンに転化する。
この酵素の基質は、天然物質に応じて異なる。（Ｒ）−
ヒドロキシニトリルリアーゼは、アーモンド粉末から最
も簡単に、従って、最も頻繁に製造される。
可能な方法は、天然物質から製造されるヒドロキシニト
リルリアーゼの使用であり、このヒドロキシニトリルリ
アーゼは、その天然物質に応じてＲまたはＳ形態で製造
することができ、青酸の存在下で、アルデヒドを対応す
る（Ｒ）−または（Ｓ）−シアノヒドリンに転化する。
この酵素の基質は、天然物質に応じて異なる。（Ｒ）−
ヒドロキシニトリルリアーゼは、アーモンド粉末から最
も簡単に、従って、最も頻繁に製造される。
【０００４】芳香族アルデヒド系列の中で、特にベンズ
アルデヒドおよび３−および４−置換されたベンズアル
デヒドが、天然物質としてのアーモンド粉末から、また
は他の天然物質から得られる（Ｒ）−ヒドロキシニトリ
ルリアーゼを使用して非常に効果的に光学活性シアノヒ
ドリンに転化できる基質の中に含まれる。対照的に、４
−ヒドロキシベンズアルデヒドおよび３，４−ジヒドロ
キシベンズアルデヒドは、アーモンド粉末から、または
他の天然物質から製造される（Ｒ）−ヒドロキシニトリ
ルリアーゼを使用しても、対応する光学活性シアノヒド
リンに転化するのが困難な出発材料である。２−置換さ
れたベンズアルデヒドは、（Ｒ）−ヒドロキシニトリル
リアーゼを使用する反応のための基質としてはあまり適
当ではない。
アルデヒドおよび３−および４−置換されたベンズアル
デヒドが、天然物質としてのアーモンド粉末から、また
は他の天然物質から得られる（Ｒ）−ヒドロキシニトリ
ルリアーゼを使用して非常に効果的に光学活性シアノヒ
ドリンに転化できる基質の中に含まれる。対照的に、４
−ヒドロキシベンズアルデヒドおよび３，４−ジヒドロ
キシベンズアルデヒドは、アーモンド粉末から、または
他の天然物質から製造される（Ｒ）−ヒドロキシニトリ
ルリアーゼを使用しても、対応する光学活性シアノヒド
リンに転化するのが困難な出発材料である。２−置換さ
れたベンズアルデヒドは、（Ｒ）−ヒドロキシニトリル
リアーゼを使用する反応のための基質としてはあまり適
当ではない。
【０００５】公知の製法の欠点は、（Ｒ）−ヒドロキシ
ニトリルリアーゼの存在下で対応する光学活性シアノヒ
ドリンを得るためのアルデヒドとＨＣＮまたはＫＣＮの
反応において、アルデヒドが通常低濃度の希釈溶液の形
態で使用されることである。そのため、使用するアルデ
ヒドに対する空時収量が低下する。
ニトリルリアーゼの存在下で対応する光学活性シアノヒ
ドリンを得るためのアルデヒドとＨＣＮまたはＫＣＮの
反応において、アルデヒドが通常低濃度の希釈溶液の形
態で使用されることである。そのため、使用するアルデ
ヒドに対する空時収量が低下する。
【０００６】上記の使用するアルデヒドによる制限およ
び空時収量が低いという欠点を考え、これらの制限およ
び欠点を回避し、さらに、高額な経費を必要とせずに簡
単な様式で工業化できる製法が必要とされている。
び空時収量が低いという欠点を考え、これらの制限およ
び欠点を回避し、さらに、高額な経費を必要とせずに簡
単な様式で工業化できる製法が必要とされている。
【０００７】この目的は、驚くべきことに、式(II)の光
学活性シアノヒドリンの製造法により達成される。
学活性シアノヒドリンの製造法により達成される。
【化６】
【０００８】この方法は、式（Ｉ）
【化７】 のアルデヒドをＨＣＮと、水と混和し得ない有機溶剤
中、水の存在下、緩衝剤の不存在下または存在下、
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの存在下で反応さ
せることを含んでなり、式(II)のＸ、ＹおよびＺは、式
（Ｉ）と同じ意味を有し、互いに独立して、同一である
か、または異なるものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキルであ
る。
中、水の存在下、緩衝剤の不存在下または存在下、
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの存在下で反応さ
せることを含んでなり、式(II)のＸ、ＹおよびＺは、式
（Ｉ）と同じ意味を有し、互いに独立して、同一である
か、または異なるものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキルであ
る。
【０００９】ＨＣＮとの反応全体にわたって、通常、ｐ
Ｈを０〜８、特に２〜７、好ましくは３〜６、に維持す
る。多くの場合、ｐＨを３．３〜５．５、特に４．０〜
５．５、好ましくは４．５〜５．３、に維持するのが有
利であることが立証されている。
Ｈを０〜８、特に２〜７、好ましくは３〜６、に維持す
る。多くの場合、ｐＨを３．３〜５．５、特に４．０〜
５．５、好ましくは４．５〜５．３、に維持するのが有
利であることが立証されている。
【００１０】通常、反応は０〜６０℃で強く攪拌しなが
ら行う。式(II)のシアノヒドリンは必要に応じて、加水
分解により、対応するカルボン酸に転化させることがで
きる。
ら行う。式(II)のシアノヒドリンは必要に応じて、加水
分解により、対応するカルボン酸に転化させることがで
きる。
【００１１】水性（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ
抽出物を使用する手順にも関連する下記の詳細な説明
は、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの存在下にお
ける上記の手順にも関連する。以下に記載する水性
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ抽出物の存在下に
おける手順は、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの
存在下における本発明の製法の特殊な変形を代表する。
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼは純粋な形態で
も、抽出物の形態でも使用することができる。（Ｒ）−
ヒドロキシニトリルリアーゼは、例えば純粋な形態で、
または精製された形態で市販されている。
抽出物を使用する手順にも関連する下記の詳細な説明
は、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの存在下にお
ける上記の手順にも関連する。以下に記載する水性
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ抽出物の存在下に
おける手順は、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの
存在下における本発明の製法の特殊な変形を代表する。
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼは純粋な形態で
も、抽出物の形態でも使用することができる。（Ｒ）−
ヒドロキシニトリルリアーゼは、例えば純粋な形態で、
または精製された形態で市販されている。
【００１２】反応は通常、（Ｒ）−ヒドロキシニトリル
リアーゼ２０〜１０００単位／ミリモルアルデヒド、特
に（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ５０〜５００単
位／ミリモルアルデヒド、好ましくは（Ｒ）−ヒドロキ
シニトリルリアーゼ８０〜４００単位／ミリモルアルデ
ヒドの存在下で行う。アルデヒドの反応に必要とされる
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの単位数は、アル
デヒドの種類によっても異なる。容易に反応し得るアル
デヒドは、比較的低い数の（Ｒ）−ヒドロキシニトリル
リアーゼ単位／ミリモルアルデヒドと反応し得るのに対
し、反応性の低いアルデヒドは、高い数の（Ｒ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼ単位／ミリモルアルデヒドを必
要とする。単位（略号Ｕ）は（Ｒ）−ヒドロキシニトリ
ルリアーゼの活性の尺度である。
リアーゼ２０〜１０００単位／ミリモルアルデヒド、特
に（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ５０〜５００単
位／ミリモルアルデヒド、好ましくは（Ｒ）−ヒドロキ
シニトリルリアーゼ８０〜４００単位／ミリモルアルデ
ヒドの存在下で行う。アルデヒドの反応に必要とされる
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの単位数は、アル
デヒドの種類によっても異なる。容易に反応し得るアル
デヒドは、比較的低い数の（Ｒ）−ヒドロキシニトリル
リアーゼ単位／ミリモルアルデヒドと反応し得るのに対
し、反応性の低いアルデヒドは、高い数の（Ｒ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼ単位／ミリモルアルデヒドを必
要とする。単位（略号Ｕ）は（Ｒ）−ヒドロキシニトリ
ルリアーゼの活性の尺度である。
【００１３】すでに述べた様に、反応は緩衝剤の不存在
下で、または存在下で行う。緩衝剤の不存在下における
反応は、本発明の製法の特に簡単な変形である。
下で、または存在下で行う。緩衝剤の不存在下における
反応は、本発明の製法の特に簡単な変形である。
【００１４】多くの場合、本発明のアルデヒドとＨＣＮ
の反応を緩衝剤の存在下で効果的に行うことができる。
特に適当な緩衝剤または緩衝剤混合物は、特定のｐＨ範
囲内でそれらの緩衝作用を発揮し、反応中にｐＨをこの
範囲内に維持する緩衝剤である。緩衝剤の緩衝作用が、
反応中にｐＨを予め決められた範囲内に維持するのに不
十分である場合、必要であれば、酸を加えるか、または
塩基を加えることにより、ｐＨを調整すべきである。
の反応を緩衝剤の存在下で効果的に行うことができる。
特に適当な緩衝剤または緩衝剤混合物は、特定のｐＨ範
囲内でそれらの緩衝作用を発揮し、反応中にｐＨをこの
範囲内に維持する緩衝剤である。緩衝剤の緩衝作用が、
反応中にｐＨを予め決められた範囲内に維持するのに不
十分である場合、必要であれば、酸を加えるか、または
塩基を加えることにより、ｐＨを調整すべきである。
【００１５】適当な緩衝剤は、例えばグルタミン酸−グ
ルタミン酸塩、リン酸−リン酸塩、酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤、特に酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤である。
ルタミン酸塩、リン酸−リン酸塩、酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤、特に酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤である。
【００１６】２０〜５００ミリモル緩衝剤／リットル、
特に４０〜３００ミリモル緩衝剤／リットル、好ましく
は８０〜１６０ミリモル緩衝剤／リットル、の存在下で
反応を行うのが有利であることが立証されている。通
常、緩衝剤は水に溶解させ、１リットルあたり２０〜５
００ミリモル、特に４０〜３００ミリモル、好ましくは
８０〜１６０ミリモル、の緩衝剤を含んでなる水溶液の
形態で使用する。
特に４０〜３００ミリモル緩衝剤／リットル、好ましく
は８０〜１６０ミリモル緩衝剤／リットル、の存在下で
反応を行うのが有利であることが立証されている。通
常、緩衝剤は水に溶解させ、１リットルあたり２０〜５
００ミリモル、特に４０〜３００ミリモル、好ましくは
８０〜１６０ミリモル、の緩衝剤を含んでなる水溶液の
形態で使用する。
【００１７】本発明は、特別な実施態様により、式(II)
の光学活性シアノヒドリンの製造法に関する。
の光学活性シアノヒドリンの製造法に関する。
【化８】
【００１８】この方法は、０〜６０℃で強く攪拌しなが
ら、式（Ｉ）
ら、式（Ｉ）
【化９】 のアルデヒドをＨＣＮと、水と混和し得ない有機溶剤
中、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然物
質をｐＨ３．３〜５．５で水で抽出することにより製造
した（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ抽出物の存在
下で、緩衝剤の不存在下または存在下で反応させ、有機
相を水相から分離し、必要に応じて、式(II)のシアノヒ
ドリンを加水分解により対応するカルボン酸に転化させ
ることを含んでなり、式(II)のＸ、ＹおよびＺは、式
（Ｉ）と同じ意味を有し、互いに独立して、同一である
か、または異なるものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ １〜Ｃ４アルキルであ
る。
中、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然物
質をｐＨ３．３〜５．５で水で抽出することにより製造
した（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ抽出物の存在
下で、緩衝剤の不存在下または存在下で反応させ、有機
相を水相から分離し、必要に応じて、式(II)のシアノヒ
ドリンを加水分解により対応するカルボン酸に転化させ
ることを含んでなり、式(II)のＸ、ＹおよびＺは、式
（Ｉ）と同じ意味を有し、互いに独立して、同一である
か、または異なるものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ １〜Ｃ４アルキルであ
る。
【００１９】本発明の方法により、驚くべきことに、反
応性の低いアルデヒド、例えば４−ヒドロキシベンズア
ルデヒドや３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド、で
も、光学活性シアノヒドリンに高収率および良好なｅｅ
値で転化させることができる。さらに、２−置換された
ベンズアルデヒド、例えば２−クロロベンズアルデヒ
ド、も本発明の製法により非常に効率的に反応させ、対
応する光学活性シアノヒドリンを製造することができ
る。立体的な条件のために、光学活性シアノヒドリンを
形成する２−置換されたベンズアルデヒドの反応の際に
は著しい困難が予測されることから、２−置換されたベ
ンズアルデヒドでも光学活性シアノヒドリンに転化させ
得ることは非常に驚くべきことである。本発明の製法の
別の優位性は、アルデヒドを、今日一般的である様に比
較的低い濃度、例えば０．１モルアルデヒド／リット
ル、で使用できるのみならず、著しく高いアルデヒド濃
度、例えば１．０モルアルデヒド／リットル以上、でも
反応を実行できることである。従って、空時収量も高
く、酵素反応には予期せぬ程高い値を達成する。
応性の低いアルデヒド、例えば４−ヒドロキシベンズア
ルデヒドや３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド、で
も、光学活性シアノヒドリンに高収率および良好なｅｅ
値で転化させることができる。さらに、２−置換された
ベンズアルデヒド、例えば２−クロロベンズアルデヒ
ド、も本発明の製法により非常に効率的に反応させ、対
応する光学活性シアノヒドリンを製造することができ
る。立体的な条件のために、光学活性シアノヒドリンを
形成する２−置換されたベンズアルデヒドの反応の際に
は著しい困難が予測されることから、２−置換されたベ
ンズアルデヒドでも光学活性シアノヒドリンに転化させ
得ることは非常に驚くべきことである。本発明の製法の
別の優位性は、アルデヒドを、今日一般的である様に比
較的低い濃度、例えば０．１モルアルデヒド／リット
ル、で使用できるのみならず、著しく高いアルデヒド濃
度、例えば１．０モルアルデヒド／リットル以上、でも
反応を実行できることである。従って、空時収量も高
く、酵素反応には予期せぬ程高い値を達成する。
【００２０】本製法では、式(Ia)
【化１０】 のアルデヒドを非常に効果的に使用することができ、式
中、Ｘ、ＹおよびＺは、式（Ｉ）および(II)と同じ意味
を有する。
中、Ｘ、ＹおよびＺは、式（Ｉ）および(II)と同じ意味
を有する。
【００２１】特に、式(Ia)の、ＸがＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキル、特
にＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）ま
たはＣ１〜Ｃ４アルキル、好ましくはＦ、Ｃｌ、ＯＨ、
Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）またはＣ１〜Ｃ４アルキルで
あり、ＹおよびＺがそれぞれＨであるか、またはＸおよ
びＹがそれぞれＨであり、ＺがＯＨであるか、またはＸ
がＨであり、ＹおよびＺがそれぞれＯＨであるアルデヒ
ドを使用することができる。
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキル、特
にＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）ま
たはＣ１〜Ｃ４アルキル、好ましくはＦ、Ｃｌ、ＯＨ、
Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）またはＣ１〜Ｃ４アルキルで
あり、ＹおよびＺがそれぞれＨであるか、またはＸおよ
びＹがそれぞれＨであり、ＺがＯＨであるか、またはＸ
がＨであり、ＹおよびＺがそれぞれＯＨであるアルデヒ
ドを使用することができる。
【００２２】式(Ia)の、ＸがＦ、Ｃｌ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１
〜Ｃ２アルキル）またはＣ１〜Ｃ２アルキルであり、Ｙ
およびＺがそれぞれＨであるか、またはＸおよびＹがそ
れぞれＨであり、ＺがＯＨであるか、またはＸがＨであ
り、ＹおよびＺがそれぞれＯＨであるアルデヒドが重要
である。
〜Ｃ２アルキル）またはＣ１〜Ｃ２アルキルであり、Ｙ
およびＺがそれぞれＨであるか、またはＸおよびＹがそ
れぞれＨであり、ＺがＯＨであるか、またはＸがＨであ
り、ＹおよびＺがそれぞれＯＨであるアルデヒドが重要
である。
【００２３】ＨＣＮとの反応は、水と混和し得ない有機
溶剤中で行う。これに適当な溶剤は、原則的に、反応条
件下で不活性なすべての有機溶剤である。特に適当な溶
剤は、少量の水、例えば有機溶剤に対して０．３〜５．
０重量％、特に０．５〜３．０重量％、好ましくは０．
６〜２．５重量％の水、を溶解させる溶剤または溶剤混
合物である。
溶剤中で行う。これに適当な溶剤は、原則的に、反応条
件下で不活性なすべての有機溶剤である。特に適当な溶
剤は、少量の水、例えば有機溶剤に対して０．３〜５．
０重量％、特に０．５〜３．０重量％、好ましくは０．
６〜２．５重量％の水、を溶解させる溶剤または溶剤混
合物である。
【００２４】使用する水と混和し得ない有機溶剤は、脂
肪族エーテル、特にアルキル基１個あたり１〜５個、好
ましくは２〜４個、の炭素原子を有するジアルキルエー
テル、１〜６個、特に１〜４個、の炭素原子を有するカ
ルボン酸、特に脂肪族カルボン酸、および１〜４個、特
に１〜２個、の炭素原子を有する脂肪族アルコールのエ
ステル、合計４〜８個、特に４〜６個、の炭素原子を有
する脂肪族ケトンまたはそれらの混合物、またはこれら
の溶剤と非極性有機溶剤、例えば４〜８個、特に４〜６
個、の炭素原子を有する脂肪族炭化水素、７〜１０個、
特に７〜９個、の炭素原子を有する芳香族炭化水素、例
えばトルエン、オルト−、メタ−および／またはパラ−
キシレン、塩素化脂肪族または芳香族炭化水素、例えば
塩化メチレン、ジクロロエタン、トリクロロエタン、ク
ロロホルム、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンおよび
トリクロロベンゼンとの希釈溶液、でよい。
肪族エーテル、特にアルキル基１個あたり１〜５個、好
ましくは２〜４個、の炭素原子を有するジアルキルエー
テル、１〜６個、特に１〜４個、の炭素原子を有するカ
ルボン酸、特に脂肪族カルボン酸、および１〜４個、特
に１〜２個、の炭素原子を有する脂肪族アルコールのエ
ステル、合計４〜８個、特に４〜６個、の炭素原子を有
する脂肪族ケトンまたはそれらの混合物、またはこれら
の溶剤と非極性有機溶剤、例えば４〜８個、特に４〜６
個、の炭素原子を有する脂肪族炭化水素、７〜１０個、
特に７〜９個、の炭素原子を有する芳香族炭化水素、例
えばトルエン、オルト−、メタ−および／またはパラ−
キシレン、塩素化脂肪族または芳香族炭化水素、例えば
塩化メチレン、ジクロロエタン、トリクロロエタン、ク
ロロホルム、クロロベンゼン、ジクロロベンゼンおよび
トリクロロベンゼンとの希釈溶液、でよい。
【００２５】非常に効果的に使用できる水と混和し得な
い溶剤は、ジエチルエーテル、ジ−ｎ−プロピルエーテ
ル、ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチル
エーテル、ジ−ｎ−ブチルエーテル、ジイソブチルエー
テルまたはそれらの混合物、特にジエチルエーテル、ジ
−ｎ−プロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メ
チルｔｅｒｔ−ブチルエーテルまたはそれらの混合物、
好ましくはジイソプロピルエーテルまたはメチルｔｅｒ
ｔ−ブチルエーテルでよい。
い溶剤は、ジエチルエーテル、ジ−ｎ−プロピルエーテ
ル、ジイソプロピルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチル
エーテル、ジ−ｎ−ブチルエーテル、ジイソブチルエー
テルまたはそれらの混合物、特にジエチルエーテル、ジ
−ｎ−プロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メ
チルｔｅｒｔ−ブチルエーテルまたはそれらの混合物、
好ましくはジイソプロピルエーテルまたはメチルｔｅｒ
ｔ−ブチルエーテルでよい。
【００２６】式（Ｉ）または(Ia)のアルデヒド１モルあ
たり、０．８〜１０．０モル、特に１．０〜５．０モ
ル、好ましくは１．２〜２．０モル、特に好ましくは
１．３〜１．７モル、のＨＣＮを使用する。しかし、
０．５〜２０モルＨＣＮ／１モルアルデヒドで反応を行
うこともできる。
たり、０．８〜１０．０モル、特に１．０〜５．０モ
ル、好ましくは１．２〜２．０モル、特に好ましくは
１．３〜１．７モル、のＨＣＮを使用する。しかし、
０．５〜２０モルＨＣＮ／１モルアルデヒドで反応を行
うこともできる。
【００２７】すでに上に述べた様に、反応は、（Ｒ）−
ヒドロキシニトリルリアーゼの存在下で、または（Ｒ）
−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然物質をｐＨ
３．３〜５．５で、緩衝剤の不存在下または存在下で、
水で抽出することにより製造した（Ｒ）−ヒドロキシニ
トリルリアーゼ抽出物の存在下でおこなう。
ヒドロキシニトリルリアーゼの存在下で、または（Ｒ）
−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然物質をｐＨ
３．３〜５．５で、緩衝剤の不存在下または存在下で、
水で抽出することにより製造した（Ｒ）−ヒドロキシニ
トリルリアーゼ抽出物の存在下でおこなう。
【００２８】完璧を期すために、（Ｒ）−ヒドロキシニ
トリルリアーゼ抽出物の製造を、この時点でより詳細に
説明する。
トリルリアーゼ抽出物の製造を、この時点でより詳細に
説明する。
【００２９】（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ抽出
物は、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然
物質をｐＨ３．３〜５．５で、緩衝剤の不存在下または
存在下で、水で抽出することにより（Ｒ）−ヒドロキシ
ニトリルリアーゼ抽出物を製造する製法により得られ
る。
物は、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然
物質をｐＨ３．３〜５．５で、緩衝剤の不存在下または
存在下で、水で抽出することにより（Ｒ）−ヒドロキシ
ニトリルリアーゼ抽出物を製造する製法により得られ
る。
【００３０】この製法は、簡単で、特別な必要条件なし
に工業的に実行できる（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリア
ーゼ抽出物の製造法である。非常に効果的に使用される
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然物質
は、粉砕された果実の芯、特に粉砕され、脱脂された果
実の芯、である。果実の芯とは、果実の芯および果実の
堅い種を意味する。特に適当な変形では、（Ｒ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼを含む天然物質は、粉砕し、脱
脂したリンゴの芯またはアーモンドの種である。しか
し、他の、好ましくは粉砕され、脱脂された（Ｒ）−ヒ
ドロキシニトリルリアーゼを含む果実の芯または果実の
種もこの製法で使用できる。この製法は、好ましい変形
では、アーモンド油の製造で廃棄物として生じる、脱脂
したアーモンド粉を使用する。
に工業的に実行できる（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリア
ーゼ抽出物の製造法である。非常に効果的に使用される
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼを含む天然物質
は、粉砕された果実の芯、特に粉砕され、脱脂された果
実の芯、である。果実の芯とは、果実の芯および果実の
堅い種を意味する。特に適当な変形では、（Ｒ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼを含む天然物質は、粉砕し、脱
脂したリンゴの芯またはアーモンドの種である。しか
し、他の、好ましくは粉砕され、脱脂された（Ｒ）−ヒ
ドロキシニトリルリアーゼを含む果実の芯または果実の
種もこの製法で使用できる。この製法は、好ましい変形
では、アーモンド油の製造で廃棄物として生じる、脱脂
したアーモンド粉を使用する。
【００３１】酵素抽出は温度０〜６０℃、好ましくは１
０〜５０℃、特に２０〜４０℃、で行う。
０〜５０℃、特に２０〜４０℃、で行う。
【００３２】すでに上に述べた様に、（Ｒ）−ヒドロキ
シニトリルリアーゼを含む天然物質を、緩衝剤の不存在
下または存在下で、水で抽出する。緩衝剤を使用しない
場合、反応全体を通して、予め決められた３．３〜５．
５のｐＨを確実に維持するように注意しなければならな
い。反応中にｐＨは５．５を超える値に増加するので、
抽出の際に酸、例えば鉱酸、を加減しながら加えること
により、これを達成する。抽出に使用する水も、酸を加
えることにより、前もって適当なｐＨに設定する。その
様な手順は例５に記載する。ｐＨが５．５を超えると、
抽出物の鏡像異性体選択性シアノヒドリン反応における
活性が低下する（例４ａ、比較例、参照）。
シニトリルリアーゼを含む天然物質を、緩衝剤の不存在
下または存在下で、水で抽出する。緩衝剤を使用しない
場合、反応全体を通して、予め決められた３．３〜５．
５のｐＨを確実に維持するように注意しなければならな
い。反応中にｐＨは５．５を超える値に増加するので、
抽出の際に酸、例えば鉱酸、を加減しながら加えること
により、これを達成する。抽出に使用する水も、酸を加
えることにより、前もって適当なｐＨに設定する。その
様な手順は例５に記載する。ｐＨが５．５を超えると、
抽出物の鏡像異性体選択性シアノヒドリン反応における
活性が低下する（例４ａ、比較例、参照）。
【００３３】通常、（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアー
ゼを含む天然物質および水または緩衝剤水溶液を１：
（１〜５０）、特に１：（２〜２０）、好ましくは１：
（２．５〜１０）、の重量比で使用する。
ゼを含む天然物質および水または緩衝剤水溶液を１：
（１〜５０）、特に１：（２〜２０）、好ましくは１：
（２．５〜１０）、の重量比で使用する。
【００３４】多くの場合、（Ｒ）−ヒドロキシニトリル
リアーゼを含む天然物質の抽出を、緩衝剤の存在下で行
うのが有利である。緩衝活性を３．３〜５．５の特定の
ｐＨ範囲内で発揮し、抽出の間、この範囲内にｐＨを維
持する緩衝剤または緩衝剤混合物が特に適当である。緩
衝剤の緩衝作用が、抽出の間にｐＨを予め決められた範
囲内に維持するのに不十分である場合、酸を加えること
によりｐＨを調節しなければならない。
リアーゼを含む天然物質の抽出を、緩衝剤の存在下で行
うのが有利である。緩衝活性を３．３〜５．５の特定の
ｐＨ範囲内で発揮し、抽出の間、この範囲内にｐＨを維
持する緩衝剤または緩衝剤混合物が特に適当である。緩
衝剤の緩衝作用が、抽出の間にｐＨを予め決められた範
囲内に維持するのに不十分である場合、酸を加えること
によりｐＨを調節しなければならない。
【００３５】適当な緩衝剤は、例えばグルタミン酸−グ
ルタミン酸塩、リン酸−リン酸塩、酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤、特に酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤である。
ルタミン酸塩、リン酸−リン酸塩、酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤、特に酢酸−酢酸塩および
クエン酸−クエン酸塩緩衝剤である。
【００３６】２０〜５００ミリモル緩衝剤／リットル、
特に４０〜３００ミリモル緩衝剤／リットル、好ましく
は８０〜１６０ミリモル緩衝剤／リットル、の存在下で
抽出を行うのが有利であることが立証されている。通
常、緩衝剤は水に溶解させ、１リットルあたり２０〜５
００，特に４０〜３００ミリモル、好ましくは８０〜１
６０ミリモルの緩衝剤を含んでなる水溶液の形態で使用
する。
特に４０〜３００ミリモル緩衝剤／リットル、好ましく
は８０〜１６０ミリモル緩衝剤／リットル、の存在下で
抽出を行うのが有利であることが立証されている。通
常、緩衝剤は水に溶解させ、１リットルあたり２０〜５
００，特に４０〜３００ミリモル、好ましくは８０〜１
６０ミリモルの緩衝剤を含んでなる水溶液の形態で使用
する。
【００３７】抽出全体にわたって予め決められたｐＨ範
囲が確実に維持される様に緩衝剤のｐＨおよび緩衝剤の
量を選択した場合、抽出は特に簡単である。
囲が確実に維持される様に緩衝剤のｐＨおよび緩衝剤の
量を選択した場合、抽出は特に簡単である。
【００３８】天然物質は、脱脂していない形態で使用す
ることもできる。この場合、緩衝剤溶液に対する比率
を、脂肪の含有量に応じて増加させなければならない。
ることもできる。この場合、緩衝剤溶液に対する比率
を、脂肪の含有量に応じて増加させなければならない。
【００３９】天然物質に対して水または緩衝剤溶液を適
当な時間、例えば０．５〜２４時間、特に２〜２０時
間、好ましくは３〜１８時間、作用させた後、通常、適
当なフィルター装置を使用し、酵素抽出物を天然物質か
ら濾別する。
当な時間、例えば０．５〜２４時間、特に２〜２０時
間、好ましくは３〜１８時間、作用させた後、通常、適
当なフィルター装置を使用し、酵素抽出物を天然物質か
ら濾別する。
【００４０】鏡像異性体選択的なＨＣＮ付加には、水性
酵素抽出物を、抽出された天然物質と共に使用すること
ができる。しかし、抽出された天然物質を除去し、天然
物質を含まない水性酵素抽出物を使用するのが適当であ
る。この様にして、廃棄物として、ＨＣＮ汚染された天
然物質を避けることができる。
酵素抽出物を、抽出された天然物質と共に使用すること
ができる。しかし、抽出された天然物質を除去し、天然
物質を含まない水性酵素抽出物を使用するのが適当であ
る。この様にして、廃棄物として、ＨＣＮ汚染された天
然物質を避けることができる。
【００４１】本発明の製法を実行するには、（Ｒ）−ヒ
ドロキシニトリルリアーゼまたは（Ｒ）−ヒドロキシニ
トリルリアーゼ抽出物を含んでなる水相を、式（Ｉ）ま
たは(Ia)のアルデヒドが溶解している有機相と強く混合
する。ＨＣＮは、溶解度に応じて、水相および有機相の
両方に配分される。混合により、アルデヒドが確実に
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼと接触し、所望通
りにＨＣＮと反応して対応する光学活性アルデヒドを形
成する。
ドロキシニトリルリアーゼまたは（Ｒ）−ヒドロキシニ
トリルリアーゼ抽出物を含んでなる水相を、式（Ｉ）ま
たは(Ia)のアルデヒドが溶解している有機相と強く混合
する。ＨＣＮは、溶解度に応じて、水相および有機相の
両方に配分される。混合により、アルデヒドが確実に
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼと接触し、所望通
りにＨＣＮと反応して対応する光学活性アルデヒドを形
成する。
【００４２】反応は、冒頭に述べた様に、０〜６０℃、
特に１０〜５０℃、好ましくは２０〜４０℃、で行われ
る。多くの場合、反応を室温で進行させるのが有利であ
ることが立証されている。
特に１０〜５０℃、好ましくは２０〜４０℃、で行われ
る。多くの場合、反応を室温で進行させるのが有利であ
ることが立証されている。
【００４３】式（Ｉ）または(Ia)のアルデヒドは、０．
１〜３．０モルアルデヒド／リットル、特に０．５〜
３．０モルアルデヒド／リットル、好ましくは１．０〜
３．０モルアルデヒド／リットル、の濃度で使用する。
多くの場合、ＨＣＮとの反応はアルデヒド濃度１．５〜
２．５モル／リットルで行う。
１〜３．０モルアルデヒド／リットル、特に０．５〜
３．０モルアルデヒド／リットル、好ましくは１．０〜
３．０モルアルデヒド／リットル、の濃度で使用する。
多くの場合、ＨＣＮとの反応はアルデヒド濃度１．５〜
２．５モル／リットルで行う。
【００４４】（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼまた
は（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ抽出物の存在下
におけるアルデヒドとＨＣＮの反応全体にわたって、
３．３〜５．５、特に４．０〜５．５、好ましくは４．
５〜５．３、のｐＨを、必要であれば酸または塩基を加
えて、維持する。
は（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ抽出物の存在下
におけるアルデヒドとＨＣＮの反応全体にわたって、
３．３〜５．５、特に４．０〜５．５、好ましくは４．
５〜５．３、のｐＨを、必要であれば酸または塩基を加
えて、維持する。
【００４５】有機相と水相（酵素抽出物）の重量比は、
通常２０：１〜１：２０、特に１０：１〜１：１０、好
ましくは５：１〜１：５、特に好ましくは２：１〜１：
２、である。
通常２０：１〜１：２０、特に１０：１〜１：１０、好
ましくは５：１〜１：５、特に好ましくは２：１〜１：
２、である。
【００４６】反応終了後、各相を分離することができ
る。有機相は光学活性シアノヒドリンを含んでなり、水
相中には、反応に循環させることができる（Ｒ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼが存在する。次いで、必要に応
じて、光学活性シアノヒドリンを有機相から分離し、適
宜、さらに精製することができる。しかし、光学活性シ
アノヒドリンは、必要に応じて、有機相の形態で、例え
ば酸加水分解により、対応する光学活性α−ヒドロキシ
カルボン酸（α−ヒドロキシフェニル酢酸＝マンデル
酸）に転化することもできる。酸加水分解には、通常、
強酸、例えば濃ＨＣｌまたは水性硫酸、を使用する。加
水分解の際、酸が存在する水相および光学活性シアノヒ
ドリンが存在する有機相を十分に混合しなければならな
い。
る。有機相は光学活性シアノヒドリンを含んでなり、水
相中には、反応に循環させることができる（Ｒ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼが存在する。次いで、必要に応
じて、光学活性シアノヒドリンを有機相から分離し、適
宜、さらに精製することができる。しかし、光学活性シ
アノヒドリンは、必要に応じて、有機相の形態で、例え
ば酸加水分解により、対応する光学活性α−ヒドロキシ
カルボン酸（α−ヒドロキシフェニル酢酸＝マンデル
酸）に転化することもできる。酸加水分解には、通常、
強酸、例えば濃ＨＣｌまたは水性硫酸、を使用する。加
水分解の際、酸が存在する水相および光学活性シアノヒ
ドリンが存在する有機相を十分に混合しなければならな
い。
【００４７】下記の諸例は本発明をより詳細に説明する
ためのものであるが、本発明を制限するものではない。
ためのものであるが、本発明を制限するものではない。
【００４８】製造した酵素抽出物の活性は、M. Bauer,
H. GrienglおよびW. Steiner Biotechnol. Bioeng. 199
9, 62, 23の方法により測定した。得られたシアノヒド
リンのｅｅ値は、無水酢酸／ピリジンで誘導体形成した
後、β−シクロデキストリンカラム上でガスクロマトグ
ラフィーにより測定した。（１単位の定義に関しては、
K. Drauz, H. Waldmann Enzyme Catalysis in Organic
Synthesis, Vol.I, Verlag Chemie, Weinheim, 1995,
p.22参照）
H. GrienglおよびW. Steiner Biotechnol. Bioeng. 199
9, 62, 23の方法により測定した。得られたシアノヒド
リンのｅｅ値は、無水酢酸／ピリジンで誘導体形成した
後、β−シクロデキストリンカラム上でガスクロマトグ
ラフィーにより測定した。（１単位の定義に関しては、
K. Drauz, H. Waldmann Enzyme Catalysis in Organic
Synthesis, Vol.I, Verlag Chemie, Weinheim, 1995,
p.22参照）
【００４９】実験項 下記の酵素は常に（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼ
を意味する。 例１ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．８
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを４．８に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ
５．２、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物
約４００ｍｌが得られる。
を意味する。 例１ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．８
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを４．８に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ
５．２、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物
約４００ｍｌが得られる。
【００５０】（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒドシア
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド５６．２ｇ（０．４モル）
をジイソプロピルエーテル２００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２００ｍｌ（４０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ１６．２ｇ（０．６モル）を加える。反応混合
物を室温で４５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９９％）を
含む。
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド５６．２ｇ（０．４モル）
をジイソプロピルエーテル２００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２００ｍｌ（４０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ１６．２ｇ（０．６モル）を加える。反応混合
物を室温で４５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９９％）を
含む。
【００５１】例２ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ３．３
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを３．３に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ
４．４、活性約７５Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物約
４００ｍｌが得られる。
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを３．３に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ
４．４、活性約７５Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物約
４００ｍｌが得られる。
【００５２】（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒドシア
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２７０ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で９０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８２％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９５％）を
含む。
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２７０ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で９０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８２％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９５％）を
含む。
【００５３】例３ １６０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．
８を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物１６．８ｇに脱イオン水を加えて５０
０ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを４．８
に調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエ
ン酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌
する。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐ
Ｈ５．０、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出
物約４００ｍｌが得られる。
８を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物１６．８ｇに脱イオン水を加えて５０
０ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを４．８
に調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエ
ン酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌
する。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐ
Ｈ５．０、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出
物約４００ｍｌが得られる。
【００５４】（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒドシア
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で４５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９８％）を
含む。
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で４５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９８％）を
含む。
【００５５】例４ ２０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ３．３
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物２．１ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを３．３に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ
５．０、活性約７０Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物約
４００ｍｌが得られる。
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物２．１ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを３．３に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ
５．０、活性約７０Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物約
４００ｍｌが得られる。
【００５６】（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒドシア
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２８５ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で６０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９８％）を
含む。
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２８５ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で６０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９８％）を
含む。
【００５７】例４ａ（比較例） ２０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ５．５
を使用する酵素抽出物の製造（Synth. Commun. 1991,
21, 1388頁に記載されている方法により、ただしア
ーモンド粉の抽出および除去による） クエン酸一水和物２．１ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを５．５に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。得られた酵素抽出物で以下に示す様に、反応中にｐ
Ｈが大きく増加する。懸濁液を、ガラスフリットを通し
て濾過する。ｐＨ６．０、活性約７０Ｕ／ｍｌを有する
水性酵素抽出物約４００ｍｌが得られる。
を使用する酵素抽出物の製造（Synth. Commun. 1991,
21, 1388頁に記載されている方法により、ただしア
ーモンド粉の抽出および除去による） クエン酸一水和物２．１ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを５．５に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこのクエン
酸塩緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌す
る。得られた酵素抽出物で以下に示す様に、反応中にｐ
Ｈが大きく増加する。懸濁液を、ガラスフリットを通し
て濾過する。ｐＨ６．０、活性約７０Ｕ／ｍｌを有する
水性酵素抽出物約４００ｍｌが得られる。
【００５８】（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒドシア
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２８５ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で６０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。有機相はｅｅ５５％の（Ｒ）−２−ク
ロロベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化
率９９％）を含む。
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物２８５ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で６０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。有機相はｅｅ５５％の（Ｒ）−２−ク
ロロベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化
率９９％）を含む。
【００５９】この酵素抽出物の活性は、例４の（Ｒ）−
２−クロロベンズアルデヒドシアノヒドリンの製造にお
けるｅｅ値（ｅｅ＝鏡像異性体過剰）との簡単な比較に
より明らかな様に、本発明により製造された酵素抽出物
を使用した場合よりも著しく低い。
２−クロロベンズアルデヒドシアノヒドリンの製造にお
けるｅｅ値（ｅｅ＝鏡像異性体過剰）との簡単な比較に
より明らかな様に、本発明により製造された酵素抽出物
を使用した場合よりも著しく低い。
【００６０】例５ 水溶液、ｐＨ４．５〜５．２（緩衝剤無し）を使用する
酵素抽出物の製造 濃ＨＣｌ数滴を使用して脱イオン水５００ｍｌをｐＨ
４．５に調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこ
の溶液と混合し、濃ＨＣｌを連続的に加えることにより
ｐＨを４．５〜５．２に維持しながら、室温で１６時間
攪拌する。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過す
る。ｐＨ４．８、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵
素抽出物約４００ｍｌが得られる。
酵素抽出物の製造 濃ＨＣｌ数滴を使用して脱イオン水５００ｍｌをｐＨ
４．５に調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをこ
の溶液と混合し、濃ＨＣｌを連続的に加えることにより
ｐＨを４．５〜５．２に維持しながら、室温で１６時間
攪拌する。懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過す
る。ｐＨ４．８、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵
素抽出物約４００ｍｌが得られる。
【００６１】（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒドシア
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で６０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９９％）を
含む。
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド２８．１ｇ（０．２モル）
をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、上で
製造した酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）およ
びＨＣＮ８．１ｇ（０．３モル）を加える。反応混合物
を室温で６０分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９９％）を
含む。
【００６２】例６ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．８
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
【００６３】（Ｒ）−ベンズアルデヒドシアノヒドリン
の製造 ベンズアルデヒド７４．３ｇ（０．７モル）をジイソプ
ロピルエーテル２５０ｍｌに溶解させ、上記の酵素抽出
物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）およびＨＣＮ２７ｇ
（１．０モル）を加える。反応混合物を室温で１８０分
間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。攪拌終了後、
最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％を分離する。
この抽出物はその後の反応に使用できる。有機相はｅｅ
９８％の（Ｒ）ベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣ
による転化率は定量的である）を含む。
の製造 ベンズアルデヒド７４．３ｇ（０．７モル）をジイソプ
ロピルエーテル２５０ｍｌに溶解させ、上記の酵素抽出
物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）およびＨＣＮ２７ｇ
（１．０モル）を加える。反応混合物を室温で１８０分
間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。攪拌終了後、
最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％を分離する。
この抽出物はその後の反応に使用できる。有機相はｅｅ
９８％の（Ｒ）ベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣ
による転化率は定量的である）を含む。
【００６４】例７ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．８
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
【００６５】（Ｒ）−３−ヒドロキシベンズアルデヒド
シアノヒドリンの製造 ３−ヒドロキシベンズアルデヒド１２．２ｇ（０．１モ
ル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、
上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）および
ＨＣＮ４ｇ（０．１５モル）を加える。反応混合物を室
温で１０５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。
攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％
を分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。
有機相はｅｅ９７％の（Ｒ）−３−ヒドロキシベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９６％）を
含む。
シアノヒドリンの製造 ３−ヒドロキシベンズアルデヒド１２．２ｇ（０．１モ
ル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、
上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）および
ＨＣＮ４ｇ（０．１５モル）を加える。反応混合物を室
温で１０５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。
攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％
を分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。
有機相はｅｅ９７％の（Ｒ）−３−ヒドロキシベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９６％）を
含む。
【００６６】例８ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．８
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
【００６７】（Ｒ）−３−ヒドロキシベンズアルデヒド
シアノヒドリンの製造 ３−ヒドロキシベンズアルデヒド４８．８ｇ（０．４モ
ル）をジイソプロピルエーテル２００ｍｌに溶解させ、
上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）および
ＨＣＮ１６ｇ（０．６モル）を加える。反応混合物を室
温で２２５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。
攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％
を分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。
有機相はｅｅ９２％の（Ｒ）−３−ヒドロキシベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９４％）を
含む。
シアノヒドリンの製造 ３−ヒドロキシベンズアルデヒド４８．８ｇ（０．４モ
ル）をジイソプロピルエーテル２００ｍｌに溶解させ、
上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）および
ＨＣＮ１６ｇ（０．６モル）を加える。反応混合物を室
温で２２５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。
攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％
を分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。
有機相はｅｅ９２％の（Ｒ）−３−ヒドロキシベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９４％）を
含む。
【００６８】例９ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．８
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
【００６９】（Ｒ）−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
シアノヒドリンの製造 ４−ヒドロキシベンズアルデヒド１２．２ｇ（０．１モ
ル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、
上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）および
ＨＣＮ４ｇ（０．１５モル）を加える。反応混合物を室
温で１６５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。
攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％
を分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。
有機相はｅｅ９２％の（Ｒ）−４−ヒドロキシベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率７０％）を
含む。
シアノヒドリンの製造 ４−ヒドロキシベンズアルデヒド１２．２ｇ（０．１モ
ル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、
上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）および
ＨＣＮ４ｇ（０．１５モル）を加える。反応混合物を室
温で１６５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。
攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％
を分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。
有機相はｅｅ９２％の（Ｒ）−４−ヒドロキシベンズア
ルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率７０％）を
含む。
【００７０】例９ａ（比較例） ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ５．３
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを５．３に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをクエン酸塩
緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌する。
懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ５．
７、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物約４
００ｍｌが得られる。
を使用する酵素抽出物の製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを５．３に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをクエン酸塩
緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌する。
懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ５．
７、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性酵素抽出物約４
００ｍｌが得られる。
【００７１】（Ｒ）−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
シアノヒドリンの製造 ４−ヒドロキシベンズアルデヒド１２．２ｇ（０．１モ
ル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、
上で製造した酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）
およびＨＣＮ４ｇ（０．１５モル）を加える。反応混合
物を室温で１６５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成
する。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約
７０％を分離する。有機相はｅｅ７０％の（Ｒ）−４−
ヒドロキシベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによ
る転化率６３％）を含む。
シアノヒドリンの製造 ４−ヒドロキシベンズアルデヒド１２．２ｇ（０．１モ
ル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解させ、
上で製造した酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）
およびＨＣＮ４ｇ（０．１５モル）を加える。反応混合
物を室温で１６５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成
する。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約
７０％を分離する。有機相はｅｅ７０％の（Ｒ）−４−
ヒドロキシベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによ
る転化率６３％）を含む。
【００７２】例１０ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤／リットル、ｐＨ４．８
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
を使用する酵素抽出物の製造 酵素抽出物は例１に記載する様にして製造する。
【００７３】（Ｒ）−３，４−ジヒドロキシベンズアル
デヒドシアノヒドリンの製造 ３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド６．９ｇ（０．
０５モル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解
させ、上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）
およびＨＣＮ３ｇ（０．１モル）を加える。反応混合物
を室温で１６５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ７６％の（Ｒ）−３，４−ジヒドロキ
シベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率
６５％）を含む。
デヒドシアノヒドリンの製造 ３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド６．９ｇ（０．
０５モル）をジイソプロピルエーテル１００ｍｌに溶解
させ、上記の酵素抽出物１００ｍｌ（２０、０００Ｕ）
およびＨＣＮ３ｇ（０．１モル）を加える。反応混合物
を室温で１６５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成す
る。攪拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７
０％を分離する。この抽出物はその後の反応に使用でき
る。有機相はｅｅ７６％の（Ｒ）−３，４−ジヒドロキ
シベンズアルデヒドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率
６５％）を含む。
【００７４】例１１ ８０ミリモルクエン酸塩緩衝剤を使用する酵素抽出物の
製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを４．８に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをクエン酸塩
緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌する。
懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ５．
２、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性抽出物約４００
ｍｌが得られる。
製造 クエン酸一水和物８．４ｇに脱イオン水を加えて５００
ｍｌにする。５０％ＮａＯＨ溶液数滴でｐＨを４．８に
調節する。脱脂したアーモンド粉１００ｇをクエン酸塩
緩衝剤５００ｍｌと混合し、室温で１６時間攪拌する。
懸濁液を、ガラスフリットを通して濾過する。ｐＨ５．
２、活性約２００Ｕ／ｍｌを有する水性抽出物約４００
ｍｌが得られる。
【００７５】（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒドシア
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド５６．２ｇ（０．４モル）
をジイソプロピルエーテル２００ｍｌに溶解させ、上記
の酵素抽出物２００ｍｌ（４０、０００Ｕ）およびＨＣ
Ｎ１６．２ｇ（０．６モル）を加える。反応混合物を室
温で４５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。攪
拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％を
分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。有
機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒ
ドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９９％）を含む。
ノヒドリンの製造 ２−クロロベンズアルデヒド５６．２ｇ（０．４モル）
をジイソプロピルエーテル２００ｍｌに溶解させ、上記
の酵素抽出物２００ｍｌ（４０、０００Ｕ）およびＨＣ
Ｎ１６．２ｇ（０．６モル）を加える。反応混合物を室
温で４５分間強く攪拌し、エマルジョンを形成する。攪
拌終了後、最初に使用した水性酵素抽出物の約７０％を
分離する。この抽出物はその後の反応に使用できる。有
機相はｅｅ８３％の（Ｒ）−２−クロロベンズアルデヒ
ドシアノヒドリン（ＧＣによる転化率９９％）を含む。
【００７６】例１２ （Ｒ）−２−クロロマンデル酸の製造 例１１から得たジイソプロピルエーテル相を１３５ｇの
濃ＨＣｌと混合し、良く攪拌しながら、６０℃で６時間
加熱する。この加水分解の際に、塩化アンモニウムが沈
殿するので、これを冷却後に少量の水で溶解させる。各
相を分離し、水相を、それぞれ５０ｍｌのジイソプロピ
ルエーテルで２回さらに抽出する。有機相を一つにあわ
せて濃縮し、残留物をトルエン２００ｍｌに入れ、短時
間加熱して沸騰させる。冷却により、（Ｒ）−２−クロ
ロマンデル酸の結晶が析出する（５８．２ｇ、理論値の
７８％、ｅｅ９２％）。
濃ＨＣｌと混合し、良く攪拌しながら、６０℃で６時間
加熱する。この加水分解の際に、塩化アンモニウムが沈
殿するので、これを冷却後に少量の水で溶解させる。各
相を分離し、水相を、それぞれ５０ｍｌのジイソプロピ
ルエーテルで２回さらに抽出する。有機相を一つにあわ
せて濃縮し、残留物をトルエン２００ｍｌに入れ、短時
間加熱して沸騰させる。冷却により、（Ｒ）−２−クロ
ロマンデル酸の結晶が析出する（５８．２ｇ、理論値の
７８％、ｅｅ９２％）。
【００７７】生成物は、トルエンからさらに結晶化させ
ることにより、＞９９％の光学純度にすることもでき
る。
ることにより、＞９９％の光学純度にすることもでき
る。
【００７８】例１３ （Ｒ）−２−フルオロマンデル酸の製造 例１１により、ジイソプロピルエーテル（５０ｍｌ）中
の２−フルオロベンズアルデヒド（１２．４ｇ、０．１
０モル）を、例１１から得た酵素抽出物（５０ｍｌ）お
よびＨＣＮ（４．０ｇ、０．１５モル）で処理する。６
０分後の転化率は＞９９％である。例１２により、ジイ
ソプロピル相を濃ＨＣｌ（３５ｍｌ）で処理する。分離
精製後、（Ｒ）−２−フルオロマンデル酸（１３．４
ｇ、理論値の８１％、ｅｅ９３％）が得られる。
の２−フルオロベンズアルデヒド（１２．４ｇ、０．１
０モル）を、例１１から得た酵素抽出物（５０ｍｌ）お
よびＨＣＮ（４．０ｇ、０．１５モル）で処理する。６
０分後の転化率は＞９９％である。例１２により、ジイ
ソプロピル相を濃ＨＣｌ（３５ｍｌ）で処理する。分離
精製後、（Ｒ）−２−フルオロマンデル酸（１３．４
ｇ、理論値の８１％、ｅｅ９３％）が得られる。
【００７９】例１４ （Ｒ）−２−ブロモマンデル酸の製造 例１１により、ジイソプロピルエーテル（５０ｍｌ）中
の２−ブロモベンズアルデヒド（１８．５ｇ、０．１０
モル）を、例１１から得た酵素抽出物（５０ｍｌ）およ
びＨＣＮ（４．０ｇ、０．１５モル）で処理する。６０
分後の転化率は＞９５％である。例１２により、ジイソ
プロピル相を濃ＨＣｌ（３５ｍｌ）で処理する。分離精
製後、（Ｒ）−２−ブロモマンデル酸（１５．１ｇ、理
論値の６３％、ｅｅ９１％）が得られる。
の２−ブロモベンズアルデヒド（１８．５ｇ、０．１０
モル）を、例１１から得た酵素抽出物（５０ｍｌ）およ
びＨＣＮ（４．０ｇ、０．１５モル）で処理する。６０
分後の転化率は＞９５％である。例１２により、ジイソ
プロピル相を濃ＨＣｌ（３５ｍｌ）で処理する。分離精
製後、（Ｒ）−２−ブロモマンデル酸（１５．１ｇ、理
論値の６３％、ｅｅ９１％）が得られる。
フロントページの続き (72)発明者 フランツ、エッフェンバーガー ドイツ連邦共和国シュトゥットガルト、シ ァツベーク、５ Ｆターム(参考） 4B064 AE01 CA21 CB30 CD01 CD05 DA01 DA11
Claims (15)
- 【請求項１】式(II) 【化１】 の光学活性シアノヒドリンの製造法であって、 式（Ｉ） 【化２】 のアルデヒドをＨＣＮと、水と混和し得ない有機溶剤
中、水の存在下、緩衝剤の不存在下または存在下、
（Ｒ）−ヒドロキシニトリルリアーゼの存在下で反応さ
せることを含んでなり、式(II)のＸ、ＹおよびＺが、式
（Ｉ）と同じ意味を有し、互いに独立して、同一である
か、または異なるものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、
Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、
ＮＨＣＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキルであ
る、光学活性シアノヒドリンの製造法。 - 【請求項２】ＨＣＮとの反応全体にわたって、ｐＨが０
〜８に維持される、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】ＨＣＮとの反応全体にわたって、ｐＨが２
〜７に維持される、請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】反応が０〜６０℃で行われる 、請求項１
〜３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項５】反応が、２０〜１０００単位の（Ｒ）−ヒ
ドロキシニトリルリアーゼ／ミリモルアルデヒドの存在
下で行われる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方
法。 - 【請求項６】式(II) 【化３】 の光学活性シアノヒドリンの製造法であって、式（Ｉ） 【化４】 のアルデヒドをＨＣＮと、水と混和し得ない有機溶剤
中、０〜６０℃で強く攪拌しながら、（Ｒ）−ヒドロキ
シニトリルリアーゼを含む天然物質をｐＨ３．３〜５．
５で水で抽出することにより製造した水性（Ｒ）−ヒド
ロキシニトリルリアーゼ抽出物の存在下で、緩衝剤の不
存在下または存在下で反応させ、有機相を水相から分離
し、必要に応じて、式(II)のシアノヒドリンを加水分解
により対応するカルボン酸に転化させることを含んでな
り、式(II)のＸ、ＹおよびＺは、式（Ｉ）と同じ意味を
有し、互いに独立して、 同一であるか、または異なる
ものであって、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ
１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、ＮＨＣＯＣＨ３、
ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキルであることを特徴とす
る方法。 - 【請求項７】式(Ia) 【化５】 の、Ｘ、ＹおよびＺが、上記の式（Ｉ）および(II)と同
じ意味を有するアルデヒドを使用する、請求項１〜６の
いずれか一項に記載の方法。 - 【請求項８】式(Ia)の、ＸがＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｏ
Ｈ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＯＣＯＣＨ３、ＮＨＣ
ＯＣＨ３、ＮＯ２またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｙ
およびＺがそれぞれＨであるか、またはＸおよびＹがそ
れぞれＨであり、ＺがＯＨであるか、またはＸがＨであ
り、ＹおよびＺがそれぞれＯＨであるアルデヒドを使用
する、請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】使用する水と混和し得ない有機溶剤が、脂
肪族エーテル、１〜６個の炭素原子を有するカルボン酸
と１〜４個の炭素原子を有する脂肪族アルコールのエス
テル、合計４〜８個の炭素原子を有する脂肪族ケトンま
たはそれらの混合物、またはこれらの溶剤と、４〜８個
の炭素原子を有する脂肪族炭化水素、７〜１０個の炭素
原子を有する芳香族炭化水素、または塩素化された脂肪
族または芳香族炭化水素との希釈溶液である、請求項１
〜８のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１０】使用する水と混和し得ない溶剤がジエチ
ルエーテル、ジ−ｎ−プロピルエーテル、ジイソプロピ
ルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジ−ｎ
−ブチルエーテル、ジイソブチルエーテルまたはそれら
の混合物である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の
方法。 - 【請求項１１】使用する水と混和し得ない溶剤がジエチ
ルエーテル、ジ−ｎ−プロピルエーテル、ジイソプロピ
ルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルまたはそ
れらの混合物である、請求項１〜１０のいずれか一項に
記載の方法。 - 【請求項１２】アルデヒド１モルあたり０．８〜１０モ
ルのＨＣＮが使用される、請求項１〜１１のいずれか一
項に記載の方法。 - 【請求項１３】アルデヒドが、０．１〜３．０モルアル
デヒド／リットルの濃度で使用される、請求項１〜１２
のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１４】ＨＣＮとの反応全体にわたってｐＨが
３．３〜５．５に維持される、請求項１〜１３のいずれ
か一項に記載の方法。 - 【請求項１５】有機相と水相の重量比が２０：１〜１：
２０、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
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