JP2002022749A - マイクロプレートのインキュベート方法 - Google Patents
マイクロプレートのインキュベート方法Info
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- JP2002022749A JP2002022749A JP2000206033A JP2000206033A JP2002022749A JP 2002022749 A JP2002022749 A JP 2002022749A JP 2000206033 A JP2000206033 A JP 2000206033A JP 2000206033 A JP2000206033 A JP 2000206033A JP 2002022749 A JP2002022749 A JP 2002022749A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ウェルの開口をシートで密閉したマイクロプ
レートを恒温室に収納した後に取り出しても、該シート
に結露しにくいマイクロプレートのインキュベート方法
を提供する。 【解決手段】 複数のウェルの開口が２次元に配列され
たマイクロプレート１０の各ウェルに溶液を分注し、前
記開口をシートで密閉したマイクロプレート１０をイン
キュベートする方法であって；前記密閉したシートに断
熱材２１、２２を重ねて、断熱材２１、２２でマイクロ
プレート１０を覆う工程と；断熱材２１、２２で覆った
マイクロプレート１０を恒温室に収納する工程と；恒温
室に収納されたマイクロプレート１０を、所定の時間だ
け恒温室に放置した後、恒温室から取り出す工程とを備
えるマイクロプレートのインキュベート方法。
レートを恒温室に収納した後に取り出しても、該シート
に結露しにくいマイクロプレートのインキュベート方法
を提供する。 【解決手段】 複数のウェルの開口が２次元に配列され
たマイクロプレート１０の各ウェルに溶液を分注し、前
記開口をシートで密閉したマイクロプレート１０をイン
キュベートする方法であって；前記密閉したシートに断
熱材２１、２２を重ねて、断熱材２１、２２でマイクロ
プレート１０を覆う工程と；断熱材２１、２２で覆った
マイクロプレート１０を恒温室に収納する工程と；恒温
室に収納されたマイクロプレート１０を、所定の時間だ
け恒温室に放置した後、恒温室から取り出す工程とを備
えるマイクロプレートのインキュベート方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、マイクロプレート
のインキュベート方法に関し、特にマイクロプレートの
各ウェルに溶液を分注し該ウェルの開口をシートで密閉
したマイクロプレートのインキュベート方法に関するも
のである。
のインキュベート方法に関し、特にマイクロプレートの
各ウェルに溶液を分注し該ウェルの開口をシートで密閉
したマイクロプレートのインキュベート方法に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】マイクロプレートのウェルに溶液を分注
して、該ウェル中で免疫反応等の反応を起こさせるため
に、従来から、溶液を分注したウェルの開口をシートで
密閉して、そのマイクロプレートを恒温室に収納し、イ
ンキュベートすることが行われていた。
して、該ウェル中で免疫反応等の反応を起こさせるため
に、従来から、溶液を分注したウェルの開口をシートで
密閉して、そのマイクロプレートを恒温室に収納し、イ
ンキュベートすることが行われていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】以上のような従来のイ
ンキュベート方法によれば、所定時間だけ恒温室に収納
した後にマイクロプレートを取り出すと、ウェルの開口
を密閉したシートの内側に結露が生じ、溶液の濃度が変
化するため、正常な測定ができないことがあった。
ンキュベート方法によれば、所定時間だけ恒温室に収納
した後にマイクロプレートを取り出すと、ウェルの開口
を密閉したシートの内側に結露が生じ、溶液の濃度が変
化するため、正常な測定ができないことがあった。
【０００４】そこで本発明は、ウェルの開口をシートで
密閉したマイクロプレートを恒温室に収納した後に取り
出しても、該シートに結露しにくいマイクロプレートの
インキュベート方法を提供することを目的としている。
密閉したマイクロプレートを恒温室に収納した後に取り
出しても、該シートに結露しにくいマイクロプレートの
インキュベート方法を提供することを目的としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明によるマイクロプレートのインキュベート方
法は、例えば図２、図３に示すように、複数のウェル１
の開口が２次元に配列されたマイクロプレート１０の各
ウェル１に溶液３を分注し、前記開口をシート２で密閉
したマイクロプレート１０をインキュベートする方法で
あって；前記密閉したシート２に断熱材４を重ねて、断
熱材４でマイクロプレート１０を覆う工程と；断熱材４
で覆ったマイクロプレート１０を恒温室１４（図４）に
収納する工程と；恒温室１４に収納されたマイクロプレ
ート１０を、所定の時間だけ恒温室１４に放置した後、
恒温室１４から取り出す工程とを備える。
に、本発明によるマイクロプレートのインキュベート方
法は、例えば図２、図３に示すように、複数のウェル１
の開口が２次元に配列されたマイクロプレート１０の各
ウェル１に溶液３を分注し、前記開口をシート２で密閉
したマイクロプレート１０をインキュベートする方法で
あって；前記密閉したシート２に断熱材４を重ねて、断
熱材４でマイクロプレート１０を覆う工程と；断熱材４
で覆ったマイクロプレート１０を恒温室１４（図４）に
収納する工程と；恒温室１４に収納されたマイクロプレ
ート１０を、所定の時間だけ恒温室１４に放置した後、
恒温室１４から取り出す工程とを備える。
【０００６】溶液は典型的には水溶液であるが、他の溶
液例えばアルコール溶液であってもよい。また断熱材で
覆うとは、別体の断熱材をシートに重ねる場合の他、シ
ートに断熱材を重ねて一体に加工した２重シートを用い
る場合も含む。各ウェルに液を分注するとは、マイクロ
プレートの複数のウェルのうち必要なウェルに分注する
ことであって必ずしも全てのウェルを意味するものでは
ない。
液例えばアルコール溶液であってもよい。また断熱材で
覆うとは、別体の断熱材をシートに重ねる場合の他、シ
ートに断熱材を重ねて一体に加工した２重シートを用い
る場合も含む。各ウェルに液を分注するとは、マイクロ
プレートの複数のウェルのうち必要なウェルに分注する
ことであって必ずしも全てのウェルを意味するものでは
ない。
【０００７】このように構成すると、密閉したシートに
断熱材を重ねて、断熱材でマイクロプレートを覆う工程
を備えるので、恒温室に収納されたマイクロプレート
を、所定の時間だけ恒温室に放置した後、恒温室から取
り出しても、シートの内面に液が結露するのを防止する
ことができる。
断熱材を重ねて、断熱材でマイクロプレートを覆う工程
を備えるので、恒温室に収納されたマイクロプレート
を、所定の時間だけ恒温室に放置した後、恒温室から取
り出しても、シートの内面に液が結露するのを防止する
ことができる。
【０００８】また以上の方法では、断熱材４が主として
輻射伝熱を防止する部材であるものとしてもよい。輻射
伝熱の断熱材は、例えば高い反射率を有する金属箔、例
えばアルミ箔である。このような金属箔は特に折り畳ん
で複数シートを重ねるようにするとよい。
輻射伝熱を防止する部材であるものとしてもよい。輻射
伝熱の断熱材は、例えば高い反射率を有する金属箔、例
えばアルミ箔である。このような金属箔は特に折り畳ん
で複数シートを重ねるようにするとよい。
【０００９】輻射伝熱を防止する部材、例えば金属箔を
用いると、覆いが容易に実行でき、覆ったマイクロプレ
ートの取り扱いも容易である。
用いると、覆いが容易に実行でき、覆ったマイクロプレ
ートの取り扱いも容易である。
【００１０】また前記方法では、断熱材４が主として伝
導伝熱を防止する部材であるものとしてもよい。伝導伝
熱の断熱材は、例えば空隙率の高い材料、例えば発泡ス
チロールである。また金属箔を複数枚重ねて用いる場合
は、重ねられた箔同士の間にできる空隙が伝導伝熱を遮
断する作用を発揮するので、輻射伝熱防止の他に、伝導
伝熱を防止する部材とも言うことが出来る。
導伝熱を防止する部材であるものとしてもよい。伝導伝
熱の断熱材は、例えば空隙率の高い材料、例えば発泡ス
チロールである。また金属箔を複数枚重ねて用いる場合
は、重ねられた箔同士の間にできる空隙が伝導伝熱を遮
断する作用を発揮するので、輻射伝熱防止の他に、伝導
伝熱を防止する部材とも言うことが出来る。
【００１１】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て、図面を参照して説明する。なお、各図において互い
に同一あるいは相当する部材には同一符号または類似符
号を付し、重複した説明は省略する。
て、図面を参照して説明する。なお、各図において互い
に同一あるいは相当する部材には同一符号または類似符
号を付し、重複した説明は省略する。
【００１２】図１は、本発明によるインキュベート方法
に用いる、断熱材を重ねたマイクロプレート１０を示す
斜視図である。図中、複数のウェルの開口が２次元に配
列されたマイクロプレート１０（個々のウェルは不図
示）の開口が、シート（不図示）で密閉されている。マ
イクロプレート１０の詳細構造の一例は後述する。
に用いる、断熱材を重ねたマイクロプレート１０を示す
斜視図である。図中、複数のウェルの開口が２次元に配
列されたマイクロプレート１０（個々のウェルは不図
示）の開口が、シート（不図示）で密閉されている。マ
イクロプレート１０の詳細構造の一例は後述する。
【００１３】（ａ）は、第１の実施の形態を示すもので
あり、開口がシートで密閉されたマイクロプレート１０
の各ウェル１の開口側（図中上面側）には、主として輻
射伝熱を防止する部材としての２枚重ねのアルミホイル
（アルミ箔）２１が重ねられている。したがって、マイ
クロプレート１０は、ウェル１の開口側がアルミホイル
２１で覆われていることになる。アルミホイル２１の厚
さは、市販の標準的アルミホイルを用いることができ、
その厚さは０．０１〜０．０５ｍｍ程度である。アルミ
ホイルは少なくとも片面は鏡面状に仕上げられており、
反射率が高いことが好ましい。反射率が高いとそれだけ
輻射伝熱を防止することができる。
あり、開口がシートで密閉されたマイクロプレート１０
の各ウェル１の開口側（図中上面側）には、主として輻
射伝熱を防止する部材としての２枚重ねのアルミホイル
（アルミ箔）２１が重ねられている。したがって、マイ
クロプレート１０は、ウェル１の開口側がアルミホイル
２１で覆われていることになる。アルミホイル２１の厚
さは、市販の標準的アルミホイルを用いることができ、
その厚さは０．０１〜０．０５ｍｍ程度である。アルミ
ホイルは少なくとも片面は鏡面状に仕上げられており、
反射率が高いことが好ましい。反射率が高いとそれだけ
輻射伝熱を防止することができる。
【００１４】この第１の実施の形態では、アルミホイル
は２枚重ねとしたが、１枚であっても輻射伝熱は防止す
ることができる。しかしながら、複数枚例えば２枚、４
枚と重ねて用いると、その重ねられたシート同士の間に
僅かながら空隙ができ、その空隙が伝導伝熱をある程度
防止することができ、また対流伝熱もある程度防止でき
るので好ましい。また２枚重ねとすると、反射率の高い
面が２面できるので、輻射伝熱を両面から防止すること
ができる。この効果は、反射率の高い面を外側にしても
内側にしても得られるが、外側にするのがより好まし
い。
は２枚重ねとしたが、１枚であっても輻射伝熱は防止す
ることができる。しかしながら、複数枚例えば２枚、４
枚と重ねて用いると、その重ねられたシート同士の間に
僅かながら空隙ができ、その空隙が伝導伝熱をある程度
防止することができ、また対流伝熱もある程度防止でき
るので好ましい。また２枚重ねとすると、反射率の高い
面が２面できるので、輻射伝熱を両面から防止すること
ができる。この効果は、反射率の高い面を外側にしても
内側にしても得られるが、外側にするのがより好まし
い。
【００１５】（ｂ）は、第２の実施の形態を示すもので
あり、マイクロプレート１０の各ウェル１の開口側（図
中上面側）には、伝導伝熱を防止する部材としての厚さ
約５ｍｍの発泡スチロール板２２が重ねられている。し
たがって、マイクロプレート１０は、ウェル１の開口側
が発泡スチロール板２２で覆われていることになる。発
泡スチロール板２２は、白色とするのが好ましい。白色
とすれば、輻射伝熱もある程度まで防止することができ
る。
あり、マイクロプレート１０の各ウェル１の開口側（図
中上面側）には、伝導伝熱を防止する部材としての厚さ
約５ｍｍの発泡スチロール板２２が重ねられている。し
たがって、マイクロプレート１０は、ウェル１の開口側
が発泡スチロール板２２で覆われていることになる。発
泡スチロール板２２は、白色とするのが好ましい。白色
とすれば、輻射伝熱もある程度まで防止することができ
る。
【００１６】図中発泡スチロール板２２は、単板に作製
されており、単にマイクロプレート１０上に載置されて
いるだけであるが、（ａ）にアルミホイルの場合で図示
してあるようにコの字形に縁を成形して、マイクロプレ
ートにかぶせることができるようにするとよい。コの字
に折り曲げた縁は矩形の発泡スチロール板の対向する２
辺（図中長辺）のみに形成されているが、４辺に縁を形
成すると、発泡スチロール板がマイクロプレート上で横
ズレも縦ズレもすることがないので好ましい。
されており、単にマイクロプレート１０上に載置されて
いるだけであるが、（ａ）にアルミホイルの場合で図示
してあるようにコの字形に縁を成形して、マイクロプレ
ートにかぶせることができるようにするとよい。コの字
に折り曲げた縁は矩形の発泡スチロール板の対向する２
辺（図中長辺）のみに形成されているが、４辺に縁を形
成すると、発泡スチロール板がマイクロプレート上で横
ズレも縦ズレもすることがないので好ましい。
【００１７】図２、図３を参照して本発明の実施の形態
に用いるマイクロプレートの典型例を説明する。
に用いるマイクロプレートの典型例を説明する。
【００１８】図２はマイクロプレート１０をウェル１の
開口を鉛直方向上方に向けて置いた場合の、開口側から
見た平面図である。図中ウェル１は水平面上に２次元に
配列されている。本実例では、ウェル１は幅方向（図中
上下方向）に８行、長手方向に１２列のマトリクス状に
配列されている。
開口を鉛直方向上方に向けて置いた場合の、開口側から
見た平面図である。図中ウェル１は水平面上に２次元に
配列されている。本実例では、ウェル１は幅方向（図中
上下方向）に８行、長手方向に１２列のマトリクス状に
配列されている。
【００１９】図３は図２のＡ−Ａ断面図であり、マイク
ロプレート１０のウェル１の１個を抽出して正面から見
た断面図である。
ロプレート１０のウェル１の１個を抽出して正面から見
た断面図である。
【００２０】（ａ）は、溶液３を分注したウェル１の開
口を、粘着面をもつビニール製シート２（住友ベークラ
イト社製；プレシール（商品名））で覆った状態を示
す。ビニールシートは粘着面側がマイクロプレートのウ
ェルの開口側に向けられ、粘着面がウェルの開口の縁に
粘着し、ウェルを密閉する。
口を、粘着面をもつビニール製シート２（住友ベークラ
イト社製；プレシール（商品名））で覆った状態を示
す。ビニールシートは粘着面側がマイクロプレートのウ
ェルの開口側に向けられ、粘着面がウェルの開口の縁に
粘着し、ウェルを密閉する。
【００２１】（ｂ）は、アルミ製シート４と密着した前
記ビニール製シート２で、シートの粘着面によって前記
マイクロプレート１０のウェル１を覆った状態を示す。
なお、前述のようにアルミ製シートの代わりにアルミホ
イルを特に２枚又は４枚重ねにして、ビニール製シート
を覆うようにしても、以下に説明するのと同様な効果が
得られるが、アルミ製シート４と密着した前記ビニール
製シート２を用いると、別途アルミホイルで覆いをする
手間が省ける。
記ビニール製シート２で、シートの粘着面によって前記
マイクロプレート１０のウェル１を覆った状態を示す。
なお、前述のようにアルミ製シートの代わりにアルミホ
イルを特に２枚又は４枚重ねにして、ビニール製シート
を覆うようにしても、以下に説明するのと同様な効果が
得られるが、アルミ製シート４と密着した前記ビニール
製シート２を用いると、別途アルミホイルで覆いをする
手間が省ける。
【００２２】図４は、本発明の実施に用いる恒温室１４
の一例を示す斜視図である。図中、全体として直方体状
の筺体に形成された恒温室本体１５の一面が開口されて
おり、恒温室本体１５にヒンジ（不図示）で開閉可能に
取り付けられた蓋１６が、前記開口を密閉することがで
きるように構成されている。恒温室本体１５の壁及び蓋
１６には、適切な断熱材が充填されている。したがって
蓋１６が本体１５の開口を閉じると、恒温室１４は、そ
の外部との間でほぼ完全に断熱される。恒温室本体１５
には、不図示の温度維持装置が具備されている。温度装
置は、例えばヒーターとサーモスタットを含んで構成さ
れる。また恒温室１４内は、全体が均一な温度となるよ
うに、室内空気は循環するように構成されている。
の一例を示す斜視図である。図中、全体として直方体状
の筺体に形成された恒温室本体１５の一面が開口されて
おり、恒温室本体１５にヒンジ（不図示）で開閉可能に
取り付けられた蓋１６が、前記開口を密閉することがで
きるように構成されている。恒温室本体１５の壁及び蓋
１６には、適切な断熱材が充填されている。したがって
蓋１６が本体１５の開口を閉じると、恒温室１４は、そ
の外部との間でほぼ完全に断熱される。恒温室本体１５
には、不図示の温度維持装置が具備されている。温度装
置は、例えばヒーターとサーモスタットを含んで構成さ
れる。また恒温室１４内は、全体が均一な温度となるよ
うに、室内空気は循環するように構成されている。
【００２３】恒温室本体１５の内部には、等間隔で鉛直
方向に複数の棚が装着されており、その上に多数のマイ
クロプレート１０を載置し収納することができる。
方向に複数の棚が装着されており、その上に多数のマイ
クロプレート１０を載置し収納することができる。
【００２４】恒温室１４内の温度は、インキュベートに
よって起こさせようとしている反応によって定まるが、
本発明が特に効果を発揮するのは、室温よりもある程度
高い場合である。例えば４５℃以上、さらには５０℃以
上の温度である。上限は通常は８０℃程度である。
よって起こさせようとしている反応によって定まるが、
本発明が特に効果を発揮するのは、室温よりもある程度
高い場合である。例えば４５℃以上、さらには５０℃以
上の温度である。上限は通常は８０℃程度である。
【００２５】図５、図６を参照して、本発明の実施例及
び比較例を説明する。
び比較例を説明する。
【００２６】マイクロプレート中のサンプル液の蒸発防
止対策の予備試験
止対策の予備試験
【００２７】実施例と比較例に共通な工程を先ず説明す
る。未感作マイクロプレート（Ｎｕｎｃ社製、フルオロ
Ｎｕｎｃモジュールプレート）に、６×ＳＳＣ（０．１
Ｍｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ， ０．９Ｍ ＮａＣ
ｌ（ｐＨ７））を１０５μｌ／ウェルで加え、５３℃恒
温室で３．５〜２４時間インキュベートした。マイクロ
プレートは、粘着面を持ったビニール製シート（住友ベ
ークライト社製；プレートシール）でシートの粘着面に
よって前記マイクロプレートのウェルを覆った。
る。未感作マイクロプレート（Ｎｕｎｃ社製、フルオロ
Ｎｕｎｃモジュールプレート）に、６×ＳＳＣ（０．１
Ｍｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ， ０．９Ｍ ＮａＣ
ｌ（ｐＨ７））を１０５μｌ／ウェルで加え、５３℃恒
温室で３．５〜２４時間インキュベートした。マイクロ
プレートは、粘着面を持ったビニール製シート（住友ベ
ークライト社製；プレートシール）でシートの粘着面に
よって前記マイクロプレートのウェルを覆った。
【００２８】実施例１では、前記ビニール製シートの上
を厚さ５ｍｍの発泡スチロール板で覆った。実施例２で
は、前記ビニール製シートの上をアルミ箔で覆った。比
較例１では、前記ビニール製シートの上をプラスチック
板で覆った。比較例２では、前記ビニール製シートの上
を厚さ１．５ｍｍガラス板で覆った。比較例３では、前
記ビニール製シートの上を厚さ１ｍｍの銅板で覆った。
比較例４では、前記ビニール製シートの上を他のもので
は覆わず、露出したままとした。
を厚さ５ｍｍの発泡スチロール板で覆った。実施例２で
は、前記ビニール製シートの上をアルミ箔で覆った。比
較例１では、前記ビニール製シートの上をプラスチック
板で覆った。比較例２では、前記ビニール製シートの上
を厚さ１．５ｍｍガラス板で覆った。比較例３では、前
記ビニール製シートの上を厚さ１ｍｍの銅板で覆った。
比較例４では、前記ビニール製シートの上を他のもので
は覆わず、露出したままとした。
【００２９】各々について、前記インキュベーションの
後、マイクロプレートを恒温室から取り出して、ウェル
を覆ったビニール製シートの内側に結露した水滴の有無
で蒸発の程度を判定した。その結果を図５の表に示す。
同表に示すように、発泡スチロールで覆ったものと、ア
ルミ箔で覆ったものには、ウェル中のサンプル液の蒸発
を防止する効果が認められた。言い換えれば、蒸発した
液が、ビニール製シートの内側に結露して、その分だけ
溶液の濃度が変化してしまうのを防止する効果が認めら
れた。
後、マイクロプレートを恒温室から取り出して、ウェル
を覆ったビニール製シートの内側に結露した水滴の有無
で蒸発の程度を判定した。その結果を図５の表に示す。
同表に示すように、発泡スチロールで覆ったものと、ア
ルミ箔で覆ったものには、ウェル中のサンプル液の蒸発
を防止する効果が認められた。言い換えれば、蒸発した
液が、ビニール製シートの内側に結露して、その分だけ
溶液の濃度が変化してしまうのを防止する効果が認めら
れた。
【００３０】実施例３ （１）プローブ結合マイクロプレートウェル１の作製 ６×ＳＳＣ（０．１Ｍ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔ
ｅ，０．９Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ７））中に溶解したＰｏ
ｌｙＬｙｓＰｈｅ（Ｓｉｇｍａ社）を３０μｇ／１５０
μｌ／ウエル量でマイクロプレート（Ｎｕｎｃ社製、フ
ルオロＮｕｎｃモジュールプレート）のウェル１に加
え、３７℃で１時間インキュベートし、５０ｍＭ Ｎａ
ＨＣＯ３（ｐＨ８．３）でウェル１を洗浄し、未吸着の
ＰｏｌｙＬｙｓＰｈｅを除いた。次いで、洗浄後のウェ
ル１に０．２Ｍ ＮａＨＣＯ３，１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐ
Ｈ８）中に溶解した２−イミノチオランを１３０ｎｍｏ
ｌ／２００μｌ量加え、室温で１時間インキュベート
し、１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ
７）でウェル１を洗浄し、未反応の２−イミノチオラン
を除いてチオール基を導入したウェル１を作製した。
ｅ，０．９Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ７））中に溶解したＰｏ
ｌｙＬｙｓＰｈｅ（Ｓｉｇｍａ社）を３０μｇ／１５０
μｌ／ウエル量でマイクロプレート（Ｎｕｎｃ社製、フ
ルオロＮｕｎｃモジュールプレート）のウェル１に加
え、３７℃で１時間インキュベートし、５０ｍＭ Ｎａ
ＨＣＯ３（ｐＨ８．３）でウェル１を洗浄し、未吸着の
ＰｏｌｙＬｙｓＰｈｅを除いた。次いで、洗浄後のウェ
ル１に０．２Ｍ ＮａＨＣＯ３，１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐ
Ｈ８）中に溶解した２−イミノチオランを１３０ｎｍｏ
ｌ／２００μｌ量加え、室温で１時間インキュベート
し、１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ
７）でウェル１を洗浄し、未反応の２−イミノチオラン
を除いてチオール基を導入したウェル１を作製した。
【００３１】また、図６に示す５‘末端がアミノ化され
た３０ｍｅｒの長さの任意配列を持つオリゴヌクレオチ
ド（以下、ＮＨ２プローブという）を化学合成した。１
分子内にマレイミド基とスクシンイミドエステル基を持
つ二価性の架橋試薬をジメチルホルムアミドに溶解し、
架橋試薬とＮＨ２プローブをモル比３００対１の割合で
混合後、３７℃で１時間インキュベートしてマレイミド
化プローブを作製した。次いで、マレイミド化プローブ
をセファデックスＧ−２５カラムで精製した。
た３０ｍｅｒの長さの任意配列を持つオリゴヌクレオチ
ド（以下、ＮＨ２プローブという）を化学合成した。１
分子内にマレイミド基とスクシンイミドエステル基を持
つ二価性の架橋試薬をジメチルホルムアミドに溶解し、
架橋試薬とＮＨ２プローブをモル比３００対１の割合で
混合後、３７℃で１時間インキュベートしてマレイミド
化プローブを作製した。次いで、マレイミド化プローブ
をセファデックスＧ−２５カラムで精製した。
【００３２】前記チオール基を導入したウェル１にマレ
イミド化プローブ２５ｐｍｏｌ／１００μｌを加え、室
温で２時間インキュベートし、プローブをウェル１に結
合させた。１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ
（ｐＨ７）でウェル１を洗浄し、未反応プローブを除去
した。
イミド化プローブ２５ｐｍｏｌ／１００μｌを加え、室
温で２時間インキュベートし、プローブをウェル１に結
合させた。１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ
（ｐＨ７）でウェル１を洗浄し、未反応プローブを除去
した。
【００３３】更に、ウェル１の未反応チオール基は、１
０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７）に
溶解したヨードアセトアミドを２００ｎｍｏｌ／２５０
μｌ加え、室温１時間インキュベートし、ブロックし
た。１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ
７）でウェル１を洗浄し、風乾後、プローブ結合マイク
ロプレートウェル１を得、室温暗所に保存した。
０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７）に
溶解したヨードアセトアミドを２００ｎｍｏｌ／２５０
μｌ加え、室温１時間インキュベートし、ブロックし
た。１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ
７）でウェル１を洗浄し、風乾後、プローブ結合マイク
ロプレートウェル１を得、室温暗所に保存した。
【００３４】（２）プローブハイブリダイズ試験 以下図７に示すような、ＮＨ２プローブと一部相補性の
配列を持つ２種の蛍光標識したプローブＡと蛍光標識し
たプローブＢの０〜２００ｆｍｏｌを７０μｌの１０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８），１ｍＭ ＥＤＴＡ（以下ＴＥ
ｂｕｆｆｅｒという）中に溶解し、１００℃５分間イン
キュベートした。急速氷冷後、３５μｌの１８×ＳＳＣ
（０．３Ｍ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ，２．７Ｍ
ＮａＣｌ（ｐＨ７））を加え終濃度６×ＳＳＣのプロ
ーブＡ又はプローブＢの試験サンプルとした。Ａプロー
ブ、Ｂプローブ共に、長さは２０ｍｅｒであった。
配列を持つ２種の蛍光標識したプローブＡと蛍光標識し
たプローブＢの０〜２００ｆｍｏｌを７０μｌの１０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８），１ｍＭ ＥＤＴＡ（以下ＴＥ
ｂｕｆｆｅｒという）中に溶解し、１００℃５分間イン
キュベートした。急速氷冷後、３５μｌの１８×ＳＳＣ
（０．３Ｍ ｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ，２．７Ｍ
ＮａＣｌ（ｐＨ７））を加え終濃度６×ＳＳＣのプロ
ーブＡ又はプローブＢの試験サンプルとした。Ａプロー
ブ、Ｂプローブ共に、長さは２０ｍｅｒであった。
【００３５】図３に示すように、各試験サンプル１０５
μｌを（１）「プローブ結合マイクロプレートウェル１
の作製」で作製したプローブ結合マイクロプレートウエ
ル１に加え、粘着面をもつビニール製シート２（住友ベ
ークライト社製；プレシール）で覆ったもの（ａ）（比
較例）と、アルミ製シート４と密着した前記ビニール製
シート２でシートの粘着面によってマイクロプレートの
ウェル１を覆ったもの（ｂ）（実施例３）とを用意し
た。
μｌを（１）「プローブ結合マイクロプレートウェル１
の作製」で作製したプローブ結合マイクロプレートウエ
ル１に加え、粘着面をもつビニール製シート２（住友ベ
ークライト社製；プレシール）で覆ったもの（ａ）（比
較例）と、アルミ製シート４と密着した前記ビニール製
シート２でシートの粘着面によってマイクロプレートの
ウェル１を覆ったもの（ｂ）（実施例３）とを用意し
た。
【００３６】次いで図３（ａ）、（ｂ）に示すような２
種のマイクロプレートを５３℃の恒温室で一晩インキュ
ベートした。ウェル１に未吸着のプローブを１×ＳＳＣ
で洗浄除去した後、ウェル１に結合したプローブを蛍光
プレート測定機（コロナ社製；コロナマイクロプレート
リーダ ＭＴＰ−Ｆ２）によって測定した。その測定結
果と検量線からウェル１に結合した試験サンプルの各プ
ローブＡ又はＢの量を測定した。
種のマイクロプレートを５３℃の恒温室で一晩インキュ
ベートした。ウェル１に未吸着のプローブを１×ＳＳＣ
で洗浄除去した後、ウェル１に結合したプローブを蛍光
プレート測定機（コロナ社製；コロナマイクロプレート
リーダ ＭＴＰ−Ｆ２）によって測定した。その測定結
果と検量線からウェル１に結合した試験サンプルの各プ
ローブＡ又はＢの量を測定した。
【００３７】図８のグラフを参照して、以上の実験の結
果を説明する。図中黒で塗りつぶした四角マーク（Ａプ
ローブ）及び黒で塗りつぶした丸マーク（Ｂプローブ）
で示すように、アルミ製シートを密着したビニール製シ
ートで覆った図３（ｂ）のウェル１では試験サンプル量
の減少が認められなかった。
果を説明する。図中黒で塗りつぶした四角マーク（Ａプ
ローブ）及び黒で塗りつぶした丸マーク（Ｂプローブ）
で示すように、アルミ製シートを密着したビニール製シ
ートで覆った図３（ｂ）のウェル１では試験サンプル量
の減少が認められなかった。
【００３８】一方、図中白抜きの四角マーク（Ａプロー
ブ）及び白抜きの丸マーク（Ｂプローブ）で示すよう
に、ビニール製シートだけで覆った図３（ａ）のウェル
１では試験サンプル量の減少が認められた。測定結果か
ら、ビニール製シートだけで覆った図３（ａ）のウェル
１ではプローブＡ及びＢの結合量はほぼ同じとなり非特
異反応による結合が認められた。また、アルミ製シート
を密着したビニール製シートで覆った図３（ｂ）のウェ
ル１ではプローブＡ及びＢの結合量には差が認められ、
正常な測定を行うことができた。
ブ）及び白抜きの丸マーク（Ｂプローブ）で示すよう
に、ビニール製シートだけで覆った図３（ａ）のウェル
１では試験サンプル量の減少が認められた。測定結果か
ら、ビニール製シートだけで覆った図３（ａ）のウェル
１ではプローブＡ及びＢの結合量はほぼ同じとなり非特
異反応による結合が認められた。また、アルミ製シート
を密着したビニール製シートで覆った図３（ｂ）のウェ
ル１ではプローブＡ及びＢの結合量には差が認められ、
正常な測定を行うことができた。
【００３９】
【発明の効果】以上のように本発明によれば、密閉した
シートに断熱材を重ねて、断熱材でマイクロプレートを
覆う工程を備えるので、恒温室に収納されたマイクロプ
レートを、所定の時間だけ恒温室に放置した後、恒温室
から取り出しても、シートの内面に液が結露するのを防
止することができるマイクロプレートのインキュベート
方法を提供することが可能となる。
シートに断熱材を重ねて、断熱材でマイクロプレートを
覆う工程を備えるので、恒温室に収納されたマイクロプ
レートを、所定の時間だけ恒温室に放置した後、恒温室
から取り出しても、シートの内面に液が結露するのを防
止することができるマイクロプレートのインキュベート
方法を提供することが可能となる。
【図１】本発明のインキュベート方法に用いる断熱材を
重ねたマイクロプレートを示す斜視図である。
重ねたマイクロプレートを示す斜視図である。
【図２】マイクロプレートをウェルの開口を鉛直方向上
方に向けて置いた場合の平面図である。
方に向けて置いた場合の平面図である。
【図３】図２のＡ−Ａ断面図である。
【図４】本発明の実施の形態に用いる恒温室の一例を示
す斜視図である。
す斜視図である。
【図５】実施例１、２と比較例の実験結果の表を示す図
である。
である。
【図６】実施例３の感作用オリゴプローブの配列を示す
図である。
図である。
【図７】ＡプローブとＢプローブの配列を示す図であ
る。
る。
【図８】実施例３と比較例の結果を示す線図である。
１ ウェル ２ ビニール製シート ３ 溶液 ４ 断熱材 １０ マイクロプレート １４ 恒温室 ２１ アルミ箔 ２２ 発泡スチロール板
Claims (3)
- 【請求項１】 複数のウェルの開口が２次元に配列され
たマイクロプレートの前記各ウェルに溶液を分注し、前
記開口をシートで密閉したマイクロプレートをインキュ
ベートする方法であって；前記密閉したシートに断熱材
を重ねて、該断熱材で前記マイクロプレートを覆う工程
と；前記断熱材で覆ったマイクロプレートを恒温室に収
納する工程と；前記恒温室に収納されたマイクロプレー
トを、所定の時間だけ前記恒温室に放置した後、前記恒
温室から取り出す工程とを備える；マイクロプレートの
インキュベート方法。 - 【請求項２】 前記断熱材が主として輻射伝熱を防止す
る部材である、請求項１に記載のマイクロプレートのイ
ンキュベート方法。 - 【請求項３】 前記断熱材が主として伝導伝熱を防止す
る部材である、請求項１に記載のマイクロプレートのイ
ンキュベート方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000206033A JP2002022749A (ja) | 2000-07-07 | 2000-07-07 | マイクロプレートのインキュベート方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000206033A JP2002022749A (ja) | 2000-07-07 | 2000-07-07 | マイクロプレートのインキュベート方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002022749A true JP2002022749A (ja) | 2002-01-23 |
Family
ID=18703023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000206033A Withdrawn JP2002022749A (ja) | 2000-07-07 | 2000-07-07 | マイクロプレートのインキュベート方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002022749A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006526134A (ja) * | 2003-05-19 | 2006-11-16 | ツィンフア ユニバーシティ | 微粒子ベースのバイオチップシステムおよびその使用 |
| JP2007212394A (ja) * | 2006-02-13 | 2007-08-23 | Eisai R & D Management Co Ltd | 液体の反応方法、反応容器及び反応容器の蓋体 |
-
2000
- 2000-07-07 JP JP2000206033A patent/JP2002022749A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006526134A (ja) * | 2003-05-19 | 2006-11-16 | ツィンフア ユニバーシティ | 微粒子ベースのバイオチップシステムおよびその使用 |
| JP4711687B2 (ja) * | 2003-05-19 | 2011-06-29 | ツィンファ ユニバーシティ | 微粒子ベースのバイオチップシステムおよびその使用 |
| JP2007212394A (ja) * | 2006-02-13 | 2007-08-23 | Eisai R & D Management Co Ltd | 液体の反応方法、反応容器及び反応容器の蓋体 |
| JP4701099B2 (ja) * | 2006-02-13 | 2011-06-15 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | 液体の反応方法 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20060324 |
|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20061120 |
|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20071002 |