JP2001524512A - リポソーム薬物およびサイトカインを用いた組み合せ化学免疫療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 リポソームに封入した化学療法薬物の投与に、免疫刺激サイトカインの投与を補充した、抗腫瘍治療の方法が記載される。サイトカインもまた、好ましくはリポソームに封入される。肺および結腸癌の腫瘍モデルで、生存率および腫瘍サイズで証明されたように、この方法は、遊離またはリポソームに封入された成分を個々に投与することによって産生された効果を合わせたよりも、有意に大きな治療効果を産生した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は抗腫瘍治療のための方法および組成物、ならびにより詳細には化学療
法薬物および免疫刺激サイトカインを用いた組み合せ療法に関する。両方ともリ
ポソームに封入されたこれら２つの成分を連続的に投与すると、個々の成分を遊
離形態またはリポソーム中で投与するのに比べて、有意な抗腫瘍効果を有するこ
とが示される。

【０００２】 （参考文献）

【０００３】

【数１】 （発明の背景） 癌化学療法の分野における多くの研究にもかかわらず、そのような処置は満足
のいくものではないままである。化学療法薬物が腫瘍部位に到達できないこと、
複数の化学療法薬剤に対する内因性および獲得性の交差耐性、および特に、これ
らの薬剤の多くが高い毒性を有することが、すべて処置の失敗の一因となってい
る。

【０００４】 ＩＬ−２およびインターフェロン−αのような免疫刺激サイトカインの使用が
、単独および他の治療薬と組み合せて、黒色腫および腎細胞癌のような悪性腫瘍
を有する一部の患者の処置に有効であることがわかっている。しかし、迅速な血
漿クリアランス、関係のない組織への体内分布、および高い毒性を含む大きな問
題が、それらが広く臨床で使用されることを制限する。さらに、最も一般的な腫
瘍、例えば結腸直腸、乳房、前立腺、および肺癌の処置においては、それらの有
効性は低い。

【０００５】 （発明の要旨） 本発明は、１つの局面では、そのような処置が必要な被験体に、治療的に有効
な量の化学療法薬物および免疫刺激サイトカインを組み合せて、どちらもリポソ
ームに封入して投与する工程を包含する抗腫瘍治療の方法を含む。別の局面では
、本発明は、どちらもリポソームに封入した化学療法薬物および免疫刺激サイト
カインのそのような組み合せを含む、抗腫瘍治療に使用する組成物を提供する。
この組み合せの投与は、リポソーム封入成分を個々に投与して産生される効果を
合わせたより、大きな治療的効果を産生する。

【０００６】 本発明はまた、リポソームに封入された化学療法薬物を、リポソームに封入さ
れ得るまたはされ得ないサイトカインと組み合せて投与する抗腫瘍治療の方法も
含む。この方法において、薬物は、７５０ダルトンと１０，０００ダルトンとの
間の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導体化した極性の
頭部を有する、約１〜１０モル％の脂質を含むリポソームに封入される。この組
み合せの治療的効果は、リポソーム封入薬剤およびサイトカインを個々に投与す
ることによって産生される効果を合わせたよりも大きい。

【０００７】 全ての場合で、サイトカインの投与は好ましくはリポソーム封入薬剤の投与の
次に行われる。

【０００８】 化学療法薬物は、好ましくはシスプラチン、化学療法剤アントラキノン、およ
びカンプトテシンまたはカンプトテシンアナログのようなトポイソメラーゼＩイ
ンヒビターから選択される。より好ましくは、薬剤はアドリアマイシン（ドキソ
ルビシン）であり、その場合薬剤のリポソーム封入体は好ましくはＤＯＸＩＬ（
登録商標）である。

【０００９】 免疫刺激サイトカインは好ましくは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、Ｉ
Ｌ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、Ｔ
ＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦからなる群より選択される。より好
ましくは、サイトカインはＩＬ−２である。

【００１０】 本組成物および方法で使用された封入リポソームは、好ましくはジミリストイ
ルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロ
ール（ＤＭＰＧ）、１，２−ジステアロイル（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌ）−３−ト
リメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミン、およびコレステロールから選択された、少なくとも
１つの脂質を含む。

【００１１】 リポソームは、平均の直径が約２０から１００ｎｍであるものとして定義され
る小さな単膜小胞（ＳＵＶ）、または平均の直径が約１００から２００ｎｍであ
るものとして定義される大きな単膜小胞（ＬＵＶ）であり得る。そのようなリポ
ソームは、好ましくは７５０ダルトンと１０，０００ダルトンとの間の分子量を
有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導体化した極性の頭部を有する
、約１〜１０モル％の脂質を含む。

【００１２】 あるいは、リポソームは、平均の直径が約２５０から２０００ｎｍである大き
な多重膜小胞（ＭＬＶ）であり得る。ＭＬＶもまた、上記で述べたようなＰＥＧ
−誘導体化脂質を含み得る。

【００１３】 好ましい実施態様では、化学療法薬物は、約５０から１２０ｎｍの平均の直径
を有し、上記で述べたようなポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導体化し
た極性の頭部を有する、約１〜１０モル％の脂質を含む小胞に封入される。別の
好ましい実施態様では、サイトカインは、ジミリストイルホスファチジルコリン
（ＤＭＰＣ）に加えて、０から５０モル％の、ジミリストイルホスファチジルグ
リセロール（ＤＭＰＧ）および１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモ
ニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）から選択される、少なくとも１つの脂質を含むリ
ポソームに封入される。

【００１４】 本発明の、これらおよび他の目的および特徴は、以下の本発明の詳細な説明を
添付した図とあわせて読む場合、より十分明らかとなる。

【００１５】 （発明の詳細な説明） （Ｉ．定義） 下記の用語は、他に示されなければ、次の意味を有する。

【００１６】 「小胞形成脂質」は、疎水性および極性の頭部部分を有する両親媒性の脂質を
いい、（ａ）リン脂質で例示されるように、水中で二重膜の小胞を形成し得、ま
たは（ｂ）疎水性の部分は二重膜の内部の疎水性領域と接触し、極性の頭部部分
を外側の膜の極性表面へ向けて、脂質二重膜に安定に組み込まれ得る。

【００１７】 この型の小胞形成脂質は代表的に１つまたは２つの疎水性アシル炭化水素鎖ま
たはステロイド基を含み、極性の頭部にアミン、酸、エステル、アルデヒド、ま
たはアルコールのような化学的に反応性の基を含み得る。このクラスに含まれる
のはリン脂質であり、２つの炭化水素鎖は代表的に約１４と２２との間の炭素原
子の長さで、様々な程度の不飽和度を有する。例示的な例はホスファチジルコリ
ン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジン酸（Ｐ
Ａ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ジ
ミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）のような負に荷電した脂
質、および１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（Ｄ
ＳＴＡＰ）のような正に荷電した脂質である。リポソームはコレステロールのよ
うなステロールも含み得る。それらはそれ自身ではリポソームを形成しないが、
上記で述べたような脂質を含むリポソームに組み込まれ得、そして安定化し得る
。

【００１８】 １「Ｃｅｔｕｓ単位」（ＣＵ）は、免疫学的活性の６国際単位（ＩＵ）と同じ
である。国際単位（ＩＵ）は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）の生物学的調
製物の国際的な参考基準である。サイトカインレベルに関して本明細書中で使用
される「単位」という用語は、Ｃｅｔｕｓ単位をいう。

【００１９】 （ＩＩ．リポソーム組成物） （Ａ．脂質成分） 上記で定義した様々な小胞形成脂質は、当該分野で周知の方法によって、本発
明のリポソーム組成物に使用され得る。本発明のために好ましい脂質は、リポソ
ーム補足薬剤の長期保存、および投与時にこれらの成分の効果的な放出を可能に
する。例示的な脂質は、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジ
ミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、コレステロール、卵ホ
スファチジルコリン（ｅｇｇＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）
、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ホスファチジ
ルイノシトール（ＰＩ）、１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウ
ムプロパン（ＤＳＴＡＰ）、１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニ
ウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）およびそれらの組み合せを含むがこれらに限定され
ない。

【００２０】 小胞形成脂質、好ましくはＳＵＶを作るものは、７５０ダルトンと１０，００
０ダルトンとの間の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導
体化された極性の頭部、代表的にはリン酸を含む頭部を有する、約１〜１０モル
％の脂質を含み得る。そのようなＰＥＧ誘導体化、または「ＰＥＧ化」脂質を使
用することによって、リポソームの循環からのクリアランス速度は、代表的に抑
制される。ＰＥＧコーティングは血清タンパク質の非特異的な吸収を阻害し、そ
れによってマクロファージによるリポソームの非特異的な認識を阻害すると考え
られる（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら、１９９１）。これらの長期間循環
するリポソームの別の利点は、その良好な管外遊出能および腫瘍への高い蓄積で
ある（ＬａｓｉｃおよびＭａｒｔｉｎ、１９９５；Ｇａｂｉｚｏｎら、１９９７
）。それらはまた、立体的（ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ）安定化リポソーム、ＳＳＬ
、またはＳｔｅａｌｔｈ（登録商標）リポソームとも呼ばれる。

【００２１】 そのような脂質の調製は、例えばＷｏｏｄｌｅら、１９９１；Ｓｅａｒｓ（１
９８４、１９８５）、Ｔｉｒｏｓｈら（１９９７）、または米国特許出願番号第
０８／５７０，４４０号を有する同時係属共出願に記載されている。ＰＥＧ鎖は
リン脂質のホスファチジン酸の頭部に直接結合し得る。様々なほかの結合が可能
である。例えば、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）または他のアミノ頭
部を含む脂質は、臭素化ＰＥＧを用いた反応によって、活性化ＰＥＧ鎖に都合よ
く結合し得る。ＰＥＧ−修飾脂質はまた市販されており、例えばＳｅｑｕｕｓ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡから入手可能である。

【００２２】 （Ｂ．リポソームおよびリポソーム組成物の調製） リポソームは、Ｓｚｏｋａら（１９８０ｂ）で詳述されているもののような、
様々な技術によって調製され得る。多重膜小胞（ＭＬＶ）を形成するために、適
切な溶媒に溶解した小胞形成脂質の混合物を、容器中でエバポレートさせて薄い
膜を作る。それを次に、水性の溶媒で水和して、代表的には約０．１ミクロンと
１０ミクロンとの間のサイズのＭＬＶを形成する。ｔｅｒｔ−ブタノールが処理
に好ましい溶媒である。ＭＬＶは次に、水性の懸濁液を、代表的には０．０５か
ら１．０ミクロンの選択された均一な大きさの孔を有するポリカーボネートの膜
を通して押し出すことによって、望ましい大きさの範囲まで小型化し得る。

【００２３】 ＭＬＶまたはＲＥＶ（下記で述べる）の調製物は、例えば押し出し、超音波処
理、または高圧ホモジネーションによって処理して、単膜小胞を生成し得る。小
さな単膜小胞（ＳＵＶ）は３０〜１００ｎｍの範囲の大きさであるという特徴が
あり、一方、大きな単膜小胞（ＬＵＶ）は平均の直径が約１００〜２００ｎｍで
あるものとして定義される。ＳＵＶはまた、脂質の水性分散液を高圧ホモジネー
ションすることによって、直接形成され得る。

【００２４】 他の薬剤をリポソーム中に封入するために、様々な方法が利用できる。ＳＳＬ
−封入ＩＬ−２の調製は、Ｋｅｄｅｒら（１９９４）に記載されている。この手
順では、一般的に、ＰＥＧで置換した脂質を含む脂質成分を、ｔ−ブタノールに
溶解する。溶液を超音波処理し、ＩＬ−２をさらに超音波処理しながら加える。
混合物を凍結乾燥し、再水和してＭＬＶを形成する。次にそれらは高圧ホモジネ
ーションまたは連続してポリカーボネートフィルターを通して押し出すことによ
って、小型化し得る。これらの小型化方法は、小胞をそれぞれ直径５０〜８０ｎ
ｍおよび約２００ｎｍにした。この手順は約８０〜９０％のＩＬ−２の封入を達
成した。

【００２５】 逆相エバポレーション法（Ｓｚｏｋａら、１９８０ａ）においては、小胞形成
脂質の非水性溶液を、より少量の水性媒体を用いて分散して、油中水型エマルシ
ョンを形成する。組み込まれる薬剤は、親油性の薬剤の場合は脂質溶液に、また
は水溶性の薬剤の場合は水性媒体に含まれる。脂質溶媒を除去した後、得られた
ゲルをリポソームに転換する。これらの逆相エバポレーション法小胞（ＲＥＶ）
は、一般的に平均の大きさは約０．２ミクロンと４ミクロンとの間であり、主に
少層状（ｏｌｉｇｏｌａｍｅｌｌａｒ）である。すなわち、１つまたは２〜３の
脂質二重膜の殻を含む。ＲＥＶは、所望であれば押し出しによって一定に大きさ
にし、選択された最大の大きさが約０．０５ミクロンと１．５ミクロンとの間の
、少層状小胞にし得る。

【００２６】 リポソーム組成物に追加の成分を加えるための他の方法は、他の成分と共に凍
結乾燥し、得られた固体を再分散してＭＬＶを形成することを含む。Ａｄｌｅｒ
ら（１９９５）によって記載された方法では、封入する薬剤の水性溶液を、脂質
のｔ−ブタノール溶液に加える。混合物を超音波処理して凍結乾燥し、そして得
られた粉末を再水和する。

【００２７】 捕捉した薬剤を含むリポソーム組成物は必要なら、最終的に大きさを一定にし
た後に処理して、遊離の（捕捉されていない）薬剤を除き得る。遠心分離、ダイ
アフィルトレーション、および分子ふるいクロマトグラフィーのような従来の分
離技術が、この目的のために適切である。組成物はまた、従来の０．２２または
０．４５ミクロンの厚さのフィルターを通して濾過することによって、滅菌され
得る。

【００２８】 本発明の組成物を形成するために、リポソーム中の薬物および／またはサイト
カインの濃度は、好ましくは約１：１００と１：１０００との間のタンパク質／
脂質重量比を与えるのに有効である。

【００２９】 安定化剤もまた、リポソーム組成物に加られ得る。例えば、Ｄｅｓｆｅｒａｌ ^TM またはジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）のような金属キレート剤を、
凍結乾燥媒体に１００μＭの濃度で加えると、リポソーム調製および４℃での保
存の間、捕捉されたＩＬ−２の失活を抑制することが示された。ＢＨＴまたはビ
タミンＥのような抗酸化剤も含み得る。

【００３０】 長期間の保存のために、組成物は乾燥した凍結乾燥粉末として保存され得る。
それは４℃で少なくとも１年間安定で、使用の前に水和して水性の懸濁液を形成
する。

【００３１】 （ＩＩＩ．組み合せ化学療法／サイトカイン療法） （Ａ．処方） 化学療法薬物の抗腫瘍活性を増強するのに有用なサイトカインは、ＩＬ−２、
ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、
ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦを含む。本発明に好ましいサイト
カインはＩＬ−２（インターロイキン−２）であり、それはＴリンパ球の成長お
よび成熟因子として作用する。

【００３２】 様々なリポソーム処方物をサイトカインの封入に使用し得る。これらは上記で
定義されたようなＭＬＶ、ＬＵＶ、またはＳＵＶ、および上記で述べたような小
胞形成脂質で構成されるＯＬＶ（少層状小胞）およびＭＶＶ（多小胞小胞）を含
む。脂質を組み合せることは一般的に最も有効である（例えば、Ｋｅｄａｒら、
１９９４を参照のこと）。１つの好ましい型の処方は、約５０から１２０ｎｍの
平均の直径を有し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導体化された極性
の頭部を有する、約１〜１０モル％の脂質（ＰＥＧ化脂質とも呼ばれる）を含む
、ＳＵＶまたはＬＵＶを使用する。下記の処方物Ａは１つの例である。他の好ま
しい処方物は、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）および、任意
でジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）および１，２−ジス
テアロイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）から選択され
る、少なくとも１つの脂質を５０モル％まで使用する。これらの処方物では、Ｄ
ＭＰＧおよび／またはＤＳＴＡＰの割合は、より好ましくは５〜２５モル％であ
る。下記の処方物Ｂは１つの例である。全ての場合で、少量（約１モル％まで）
の、トコフェロールまたはＤｅｓｆｅｒａｌ^TMのような安定化剤を含み得る。

【００３３】 下記に述べる実験のために、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅ
ｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）より入手したＩＬ−２を用いて、上記で述べたような公
知の方法によって、リポソームＩＬ−２を２つの処方で調製した。処方物Ａは、 ²⁰⁰⁰ ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（Ｎ−カルバミル−（ポリエチレングリコールメチルエー
テル）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミ
ントリエチルアンモニウム塩、Ｓｅｑｕｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより提供
）、卵ホスファチジルコリン、およびコレステロールから、モル比が約５：５５
：４０で構成される、立体的に安定化した（ＳＳＬ）小さな単膜小胞（ＳＵＶ）
を使用した。小胞は直径約５０〜７０ｎｍであった。ＩＬ−２の封入効率は、イ
ンビトロのＩＬ−２バイオアッセイに基づくと８０％を超えた（すなわち、最初
に加えた量のＩＬ−２の８０％を超えてリポソームに封入された）。

【００３４】 処方物Ｂは、モル比が９：１の、ＤＭＰＣ−ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスフ
ァチジルコリン−ジミリストイルホスファチジルグリセロール）から構成される
、多重膜小胞（ＭＬＶ）を使用した。この小胞は約５００〜１５００ｎｍの大き
さで、封入効率は約９０％以上を超えた。この高い封入効率は、脂質：ＩＬ−２
比（重量：重量）が、ＤＭＰＣ単独で１０００：１、およびＤＭＰＧまたはＤＳ
ＴＡＰを含むＤＭＰＣで１００：１の時達成された。

【００３５】 化学療法薬物は好ましくは、上記で述べたように、約１〜１０モル％のＰＥＧ
化脂質を有するリポソームに封入される。例えば、Ｓｔｅａｌｔｈ（登録商標）
リポソーム中のアドリアマイシンの安定な処方物であるＤＯＸＩＬ（登録商標）
は、ＳＥＱＵＵＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｅｎｌｏ
Ｐａｒｋ、ＣＡ）から入手可能である。遊離のアドリアマイシンは、例えばＣｅ
ｔｕｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐ．（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）から、
ドキソルビシン塩酸塩およびラクトースの処方物として入手可能である。

【００３６】 本方法に好ましい別の化学療法薬物は、エピルビシン、ダウノルビシン、およ
びミトザントロンのような他のアントラキノン、ならびにシスプラチンを含む。
カンプトテシンおよびそのアナログ、例えばトポテカンおよびＣＰＴ−１１とも
呼ばれるイリノテカンのような、トポイソメラーゼＩインヒビターも意図される
。カンプトテシンは中国産の樹木Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｉｍｉｎａｔａ
の木の幹から単離され、上記で言及したアナログの調製は、例えばＣｕｒｒａｎ
ら（１９９６）によって記載されている。

【００３７】 （Ｂ．リポソームアドリアマイシン−リポソームＩＬ−２） それぞれの成分が遊離またはリポソームに封入された形態である、単独または
インターロイキン−２（ＩＬ−２）を組み合せて使用したアドリアマイシンの、
腫瘍細胞を注射したＢＡＬＢ／ｃマウスの生存率に対する効果を、下記に述べた
ように試験した。

【００３８】 （Ｂ１．肺腺癌モデル：ＭＬＶ中のＩＬ−２） ６グループのＢＡＬＢ／ｃマ
ウスに５×１０⁵のＭ１０９腫瘍細胞を腹腔内に注射した（０日目）。遊離のア ドリアマイシンまたはＤＯＸＩＬ（登録商標）をそれぞれ、７日目に８ｍｇ／ｋ
ｇの用量を静脈内に投与し、腹腔内へのサイトカイン処置を３日後に開始した。
リポソームＩＬ−２（処方物Ｂ、ＩＬ−２を含むＭＬＶ ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ（
９：１モル比）リポソーム）を、１０、１３、および１６日目に、１日１回投与
した（５０，０００ＣＵ／マウス）。コントロールグループは処置を行わないか
、またはＩＬ−２処置のみを行った。

【００３９】 ８〜９匹のマウスからなるそれぞれのグループは、腫瘍接種後１００日目まで
の生存率を調べた。表１は実験終了時の生存個体の数、および得られた生存期間
の中央値を示す。図１は全てのグループの生存曲線を示す。

【００４０】

【表１】 表１に示すように、ＭＬＶ−ＩＬ−２（リポソームＩＬ−２、処方物Ｂ）と組
み合せたアドリアマイシン（ＡＤＲ）は、アドリアマイシン単独またはリポソー
ムＩＬ−２単独（どちらもコントロールよりも低い生存率を示した）のどちらよ
りも、非常に有効であった。リポソームアドリアマイシン（ＤＯＸＩＬ（登録商
標））を単独で投与すると、または非リポソームアドリアマイシンをリポソーム
ＩＬ−２と組み合せて投与すると、８匹のマウスのうち５匹が試験期間中生存し
た。

【００４１】 リポソームＩＬ−２とリポソームＡＤＲ（ＤＯＸＩＬ（登録商標））の組み合
せで、最もよい結果が見られた。すなわちすべての被験体が１００日以上生存し
た。生存個体の点から見ると、組み合せ処置の効果は個々の処置の効果を合わせ
たよりも大きかった。

【００４２】 （Ｂ２．転移肺腺癌モデル：ＭＬＶ（処方物Ｂ）およびＰＥＧ誘導体化ＳＵＶ
（ＳＳＬ）中のＩＬ−２） この実験では、ＢＡＬＢ／ｃマウスに５×１０⁵の Ｍ１０９腫瘍細胞を静脈内に注射した（０日目）。遊離のアドリアマイシンまた
はＤＯＸＩＬ（登録商標）をそれぞれ、７日目に静脈内に投与し（８ｍｇ／ｋｇ
）、次に３日後にサイトカイン処置を静脈内に行った。リポソームＩＬ−２（処
方物Ａ、ＩＬ−２を含むＰＥＧ化ＳＵＶ）を１１、１４、および１７日目に、１
日１回投与した（５０，０００ＣＵ／マウス）。コントロールグループは処置を
行わないか、またはＩＬ−２処置のみを行った。

【００４３】 ８〜９匹のマウスからなるそれぞれのグループは、腫瘍接種後１００日目まで
の生存率を調べた。結果を表２および図２に示す。

【００４４】

【表２】 グループ３〜５の比較が示すように、ＤＯＸＩＬ（登録商標）およびリポソー
ムＩＬ−２を組み合せた処置は、特に試験期間中、すなわち１００日間以上生存
した個体の数という点から見ると、リポソーム成分単独を用いた処置よりも有意
により有効である（８匹のうち０〜１匹に比べて９匹のうち７匹）。この局面に
おいて、組み合せ処置は、個々の治療で得られる効果を合わせたよりも有意によ
り有効であった。

【００４５】 ２番目のより広範囲の試験では、９グループのＢＡＬＢ／ｃマウスに５×１０ ⁵ のＭ１０９腫瘍細胞を腹腔内に注射した。遊離のアドリアマイシンまたはＤＯ ＸＩＬ（登録商標）（８ｍｇ／ｋｇ）を、７日後に腹腔内に投与し、次に３日後
にサイトカイン処置を静脈内に行った。１０、１３、および１６日目に、１日１
回投与した（５０，０００ＣＵ／マウス）サイトカインは、遊離ＩＬ−２、処方
物Ａ（Ｓｔｅａｌｔｈ（登録商標） ＰＥＧ化ＳＵＶ）中のＩＬ−２、または処
方物Ｂ（モル比９：１のＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ ＭＬＶ）中のＩＬ−２からなって
いた。

【００４６】 ８匹のマウスからなるそれぞれのグループ、および１１匹のマウスからなる未
処置のコントロールグループは、腫瘍接種後１２０日目までの生存率を調べた。
結果を表３に示す。

【００４７】

【表３】 この研究では、遊離ＡＤＲおよびＩＬ−２の投与は遊離ＡＤＲ単独に比べてわ
ずかな効果しかない、または全く効果がないことが示された（グループ２〜５）
。しかし、遊離またはリポソームＩＬ−２のどちらかをリポソーム中の化学療法
薬物（ＤＯＸＩＬ（登録商標））と組み合せると、薬物を単独で投与するよりも
明らかな効果を示した（グループ６〜９）。全体的に、リポソーム中の両方の成
分を組み合せて処置したグループ（８および９）は、より優れた結果を示した。
特にグループ８は高い生存率を示し、腫瘍がほとんど存在しなかった。

【００４８】 （Ｂ３．皮下結腸癌モデル：ＭＬＶ中のＩＬ−２） この試験では、７グルー
プのＢＡＬＢ／ｃマウスの足蹠に１０⁵個のＣ２６結腸癌細胞を注射した。７日 後、８ｍｇ／ｋｇの遊離またはリポソームアドリアマイシンをｉ．ｖ．で投与し
た。表ＩＶに示したように、上記で述べたスケジュールに従って、遊離またはリ
ポソームＩＬ−２をｉ．ｐ．で投与した。結果を表４に示す。

【００４９】

【表４】 データが示すように、リポソーム薬物単独の投与はいくらか有効であるが、組
み合せたリポソーム処置を受けたグループのみが、腫瘍からの有意な回復を示し
た。このグループ（グループ７）において、腫瘍が他のグループに比べて有意に
より小さいことも観察された。

【００５０】 （ＩＶ．投与） ヒトにおける使用では、組成物の治療的に有効な用量は、代表的に２０〜１０
０ｍｇアドリアマイシン／ｍ²体表面積に対応する。ＩＬ−２に関しては、好ま しい用量は５０，０００〜５００，０００ＣＵ／ｍ²体表面積に対応する。投与 は腹腔内（ｉｐ）、皮下（ｓｃ）、静脈内（ｉｖ）、動脈内（ｉａ）、または筋
肉内（ｉｍ）注射により得る。大きな多重膜小胞（ＭＬＶ）の形態のリポソーム
が腹腔内、皮下または筋肉内投与に好ましく、一方、ＳＵＶが静脈内および筋肉
内投与に好ましい。

【００５１】 上記で示したように、リポソーム封入化学療法薬物の投与の次に、リポソーム
封入サイトカインを投与する。処置の特定の時間間隔および過程を上記の実施例
で示したが、薬物およびサイトカインの両方に関して、投薬量、過程の間の時間
間隔、および処置過程の回数は、症状の程度および被験体の状態によって変化し
得ることが理解される。

【００５２】 本発明は特定の方法および実施態様に言及して記載したが、様々な改変が本発
明から逸脱することなく行われ得ることが理解される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、５×１０⁵のＭ１０９腫瘍細胞（肺腺癌）を腹腔内に注射し、次に遊 離のアドリアマイシンまたはＤＯＸＩＬ（登録商標）を用いて、それぞれ、単独
、もしくはＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ ＭＬＶリポソーム中のＩＬ−２の腹腔内投与と
組み合せて処置した、またはリポソームＩＬ−２単独を用いて処置したＢＡＬＢ
／ｃマウスの生存率を示している。

【図２】 図２は、５×１０⁵のＭ１０９腫瘍細胞を静脈内に注射し、次にＤＯＸＩＬ（ 登録商標）（７日目）で、単独、もしくはＳｔｅａｌｔｈ（登録商標） ＰＥＧ
化ＳＵＶリポソーム中のＩＬ−２の静脈内投与（１１、１４、および１７日目）
と組み合せて処置した、またはリポソームＩＬ−２単独（１１、１４、および１
７日目）で処置したＢＡＬＢ／ｃマウスの生存率を示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 33/24 Ａ６１Ｋ 45/00 45/00 47/10 47/10 47/16 47/16 47/24 47/24 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 46，Ｊａｂｏｔｉｎｓｋｙ Ｓｔｒｅｅ ｔ，Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ 91042 Ｉｓｒ ａｅｌ (71)出願人 ハダシット メディカル リサーチ サー ビシーズ アンド ディベロップメント リミテッド イスラエル国 エルサレム 91120， キ リャット ハダサー−ピー．オー．ビー． 12000 (72)発明者 ギャビゾン， アルバート エイ． イスラエル国 エルサレム 96920， バ ーンステイン ストリート 56／７ (72)発明者 ケダー， エリーザー イスラエル国 エルサレム 96920， カ ディッシュ ラズ ストリート 24／７ (72)発明者 バーレンホルズ， イェチェズケル イスラエル国 エルサレム 93707， ネ イブ シャナン ストリート 18 Ｆターム(参考） 4C076 AA19 BB11 CC27 CC29 DD37 DD49 DD63 DD70 EE23 FF68 GG08 4C084 AA02 AA03 AA27 BA44 DA01 DA14 DA19 DA22 DA23 DA24 DA25 MA02 MA24 MA66 NA05 NA10 ZB092 ZB261 ZB262 4C086 AA01 AA02 CB22 EA10 HA12 HA28 MA03 MA05 NA05 NA10 ZB09 ZB26 4C206 AA01 AA02 JB16 MA03 MA05 MA21 MA23 MA24 MA28 MA44 MA86 NA05 NA10 ZB09 ZB26

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 抗腫瘍治療の方法であって、そのような処置が必要な被験体
   に、治療的に有効な量の、リポソームに封入された成分の組み合せを投与する工
   程を包含し、ここで、該成分が化学療法薬物および免疫刺激サイトカインを含む
   、方法。
2. 【請求項２】 前記投与工程が、個々に投与されるリポソーム封入成分によ
   って産生される効果を合わせたよりも、大きな治療的効果を産生する、請求項１
   に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記リポソームが、７５０ダルトンと１０，０００ダルトン
   との間の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導体化した極
   性の頭部を有する、約１〜１０モル％の脂質を含む、請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記リポソームが、ジミリストイルホスファチジルコリン、
   ジミリストイルホスファチジルグリセロール、１，２−ジステアロイル−３−ト
   リメチルアンモニウムプロパン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノ
   ールアミン、およびコレステロールからなる群より選択される、少なくとも１つ
   の脂質を含む、請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記化学療法薬物が、約５０から１２０ｎｍの平均の直径を
   有し、７５０ダルトンと１０，０００ダルトンとの間の分子量を有するポリエチ
   レングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導体化した極性の頭部を有する、約１〜１０モ
   ル％の脂質を含む小胞に封入されている、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記化学療法薬物が、化学療法アントラキノン、シスプラチ
   ン、およびトポイソメラーゼＩインヒビターから選択される、請求項１に記載の
   方法。
7. 【請求項７】 前記化学療法アントラキノンがアドリアマイシンである、請
   求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記トポイソメラーゼＩインヒビターがカンプトテシンまた
   はカンプトテシンアナログである、請求項６に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記リポソームに封入された化学療法薬物がＤＯＸＩＬ（登
   録商標）である、請求項７に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記サイトカインが、インターロイキン−２（ＩＬ−２）
    、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β
    、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦからなる群より選択される、請
    求項１に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記サイトカインがＩＬ−２である、請求項１０に記載の
    方法。
12. 【請求項１２】 前記サイトカインが、ジミリストイルホスファチジルコリ
    ンに加えて、０〜５０モル％の、ジミリストイルホスファチジルグリセロールお
    よび１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウムプロパンから選択さ
    れた少なくとも１つの脂質を含むリポソームに封入されている、請求項１に記載
    の方法。
13. 【請求項１３】 前記リポソーム封入サイトカインの投与が、前記リポソー
    ム封入化学療法薬物の投与に次に行われる、請求項１に記載の方法。
14. 【請求項１４】 抗腫瘍治療の方法であって、そのような処置が必要な被験
    体に、治療的に有効な量の化学療法薬物および免疫刺激サイトカインの組み合せ
    を投与する工程を包含し、ここで該化学療法薬物が、７５０ダルトンと１０，０
    ００ダルトンとの間の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘
    導体化した極性の頭部を有する、約１〜１０モル％の脂質を含むリポソームに封
    入されている、方法。
15. 【請求項１５】 前記投与工程が、個々に投与されたリポソーム封入薬物お
    よびサイトカインによって産生される効果を合わせたよりも、大きな治療的効果
    を産生する、請求項１４に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記化学療法薬物が、化学療法アントラキノン、シスプラ
    チン、およびトポイソメラーゼＩインヒビターから選択される、請求項１４に記
    載の方法。
17. 【請求項１７】 前記化学療法アントラキノンがアドリアマイシンである、
    請求項１６に記載の方法。
18. 【請求項１８】 前記リポソームに封入された化学療法薬物がＤＯＸＩＬ（
    登録商標）である、請求項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 前記トポイソメラーゼＩインヒビターがカンプトテシンま
    たはカンプトテシンアナログである、請求項１４に記載の方法。
20. 【請求項２０】 前記サイトカインが、インターロイキン−２（ＩＬ−２）
    、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β
    、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦからなる群より選択される、請
    求項１４に記載の方法。
21. 【請求項２１】 前記サイトカインがＩＬ−２である、請求項２０に記載の
    方法。
22. 【請求項２２】 前記サイトカインの投与がリポソーム封入化学療法薬物の
    投与の次に行われる、請求項１４に記載の方法。
23. 【請求項２３】 抗腫瘍治療に使用する組成物であって、リポソームに封入
    された成分の組み合せを含み、ここで該成分が化学療法薬物および免疫刺激サイ
    トカインを含む、組成物。
24. 【請求項２４】 前記組み合せが、腫瘍に罹患した被験体において、個々に
    投与されたリポソーム封入成分によって産生される効果を合わせたよりも、大き
    な抗腫瘍効果を産生するのに有効な、請求項２３に記載の組成物。
25. 【請求項２５】 前記化学療法薬物が、７５０ダルトンと１０，０００ダル
    トンとの間の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で誘導体化し
    た極性の頭部を有する、約１〜１０モル％の脂質を含むリポソームに封入されて
    いる、請求項２３に記載の組成物。
26. 【請求項２６】 前記化学療法薬物が、化学療法アントラキノン、シスプラ
    チン、およびトポイソメラーゼＩインヒビターから選択される、請求項２３に記
    載の組成物。
27. 【請求項２７】 前記化学療法アントラキノンがアドリアマイシンである、
    請求項２６に記載の組成物。
28. 【請求項２８】 前記リポソームに封入された化学療法薬物がＤＯＸＩＬ（
    登録商標）である、請求項２７に記載の組成物。
29. 【請求項２９】 前記サイトカインが、インターロイキン−２（ＩＬ−２）
    、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β
    、ＴＮＦ−α、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦからなる群より選択される、請
    求項２３に記載の組成物。
30. 【請求項３０】 前記サイトカインがＩＬ−２である、請求項２９に記載の
    組成物。