JP2001523683A

JP2001523683A - 抗菌、抗ウイルス及び免疫調節作用を有する５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５ｄ’］ジピリミジン誘導体

Info

Publication number: JP2001523683A
Application number: JP2000521099A
Authority: JP
Inventors: イリーニチナアシキナジ，リムマ
Original assignee: テッツ，ビクトルベニアミノビチ
Priority date: 1997-11-19
Filing date: 1997-11-19
Publication date: 2001-11-27
Also published as: IL136181A0; US6340755B1; ATE231868T1; EP1033369B1; DE69718831D1; AU6125798A; EP1033369A4; CA2310398C; EP1033369A1; WO1999025718A1; DE69718831T2; CA2310398A1; AU739701B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、抗菌、抗ウイルス、免疫調節及び抗腫瘍活性を有する新しい物質の製造に関する。本発明は特に、一般化学式（Ｉ）の５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン誘導体の合成に関するが、ここで、Ｒ¹はヒドロキシ基、メルカプト基またはハロゲンを表し、Ｒ²はヒドロキシ基、アルコキシル基またはハロゲンを表し、Ｒ³は水素またはアリルを表す。上記の物質の好適実施形態では、Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨの時Ｒ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄（Ｉ）、Ｒ¹＝Ｒ ²＝Ｃｌの時Ｒ³＝Ｃ₆Ｈ₅（ＩＩ）、Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨの時Ｒ³＝４−ＩＣ₆Ｈ₄（ＩＩＩ）、Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨの時Ｒ³＝Ｈ（ＩＶ）、Ｒ¹＝ＯＨの時Ｒ²＝ＯＣＨ₃及びＲ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄（Ｖ）、Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨの時Ｒ³＝４−ＣｌＣ₆Ｈ₄（ＶＩ）、Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨの時Ｒ³＝４−ＢｒＣ₆Ｈ₄（ＶＩＩ）、Ｒ¹＝ＳＨの時Ｒ²＝ＯＨ及びＲ³＝４−ＣｌＣ₆Ｈ₄（ＶＩＩＩ）、及びＲ¹＝ＳＨの時Ｒ²＝ＯＨ及びＲ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄（ＩＸ）という条件が観察された。【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】技術の分野本発明は有機化学と医学の分野、特にバルビツール酸とその誘導体に関し、抗
ウイルス活性、抗クラミジア、免疫調節及び抗腫瘍活性を有する薬品として利用
される。

【０００２】技術の水準ピリミジン誘導体の多くは生物学的活性物質である。ピリミジン誘導体は、核
酸基（ウラシル、チミン、シトシン）、ビタミン（チアミン、ホスホチアミン）
、補酵素（コカルボキシラーゼ）であり、それらは催眠、抗痙攣（バルビツール
酸塩、ヘキサミジン、ベンゾナル）、利尿（マークサル）、抗炎症（ペントキシ
ル、メチルウラシル）、抗甲状腺（メチルチオウラシル）作用を有する薬剤とし
て利用され、それらはビタミンの合成類似物（ベフォチアミン）、同化（オロト
酸）、抗炎症及び抗菌（スルファジン、スルファジメメタジン、スルファモノメ
トキシン、スルファジメトキシン、バクトリム、サラゾジメトキシン）、抗マラ
リア（クロリジン）、抗癌（ドパン、ホスホアミド、エチミジド、フルオロウラ
シル、フルオロファー、シタラビン）薬品である［１、２］。

【０００３】最近１０年間、ピリミジン環が他の複素環と縮合されるシステムに対する大き
な関心が現れている。こうした複素環システムは自然の生物学的活性物質の類似
物であることが多い。これには、核酸（アデニン、グアニン）、ＡＴＰ、中枢神
経を興奮させる薬剤といった自然及び合成生物学的活性物質に含まれ、心臓血管
系に作用し（カフェイン、テオブロミン、テオフィリン、ニヘキシン、ジプロフ
ィリン、キサンチノールニコチン酸塩）、臓器移植の際組織の不適合を抑えるた
めに利用され（アザチオプリン）（細胞増殖抑制及び免疫抑制効果）、同化（イ
ノシン）、抗白血病（メルカプトプリン）作用を有するプリン、高尿酸血症に伴
う疾病の治療に利用されるピラゾノ［３，４−ｄ］ピリミジン（アロプリノール
）、利尿剤として利用されるプテリジン（トリアムテレン）、ビタミン（リボフ
ラビン、葉酸）、抗癌剤（メトトレキセート）、血管拡張作用を有するピリミド
［５，４−ｄ］ピリミジン（ジピリダモール）が関連する［１、２］。

【０００４】極めて多様な５−イリデンバルビツール酸誘導体の生物学的活性に関するデー
タは文献［３］に要約されているが、そこではこの物質の抗痙攣、抗菌、鎮痙、
解熱、抗腫瘍作用が指摘されている。ある種の５−アリリデンバルビツール酸［
４−１１］、５−アミノメチレンバルビツール酸［１２］、バルビツール酸とイ
ソシアン酸塩の相互作用生成物、イソシアン酸塩−５−アリールカルバモイルバ
ルビツール酸［１３−１６］、６−ヒドラジノウラシルとイソ（チオ）シアン酸
の縮合によって得られるピラゾノ［３，４−ｄ］ピリミジン［１７］、５−デア
ザフラビン［１８−２０］、６−アミノウラシルとニトロゾベンゾール−１０−
アルキル（ハロゲノフェニール）−３−メチルフラビンの縮合生成物［２１、２
２］、ピロ［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体［２３］、適当な６−ヒドラジノウ
ラシルにＷｉｌｓｍｅｙｅｒ試薬を作用させることで得られる７−メチル−５−
ヘキシル−１Ｈ−ピラゾノ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６（５Ｈ，７Ｈ）−
ジオン［２４］、ピラノ［２，３−ｄ］ピリミジン［２５−２７］、５−（３−
ニトロフェニール）−４−オキソ−２−チオキソ−１，３，７−トリフェニール
−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン「２８−３３
」、ピリミド［５，４−ｅ］［１，２，４］トリアジン−５，７（１Ｈ，６Ｈ）
−ジオン［３４］、５−ジアルキルアミノメチルウリジン［３５、３６］、及び
ピリミド［４，５−ｃ］ピリダジン［３７］の生物学的活性についてもデータが
得られている。列挙された化合物は、殺虫、抗腫瘍、抗菌、免疫抑制、精神向性
及び抗高血圧、及び抗アレルギー作用を有する。

【０００５】バルビツール酸と３−アシルクロモンの相互作用によるピラノ［２，３−ｄ：
６，５−ｄ’］ジピリミジン系の生成は少数の例しか知られていない［３８、３
９］。その生物学的活性に関する情報はない。同時に、ピリミジンイオンの一部
を含む５−置換バルビツール酸と縮合系に関する既存の情報は、上記で示したよ
うに、様々な生物学的活性を有している。しかし、検討された物質の多くの有効
性は不十分であり、その多くは有毒で、副作用を有する。また、細菌、ウイルス
及び腫瘍細胞には非常に急速に既存の薬剤に対する耐性が形成され、その使用は
効果がないものになる［４０−４６］。

【０００６】上記の資料は、特に、ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン誘導
体に帰結する、バルビツール酸とカルボニル化合物の縮合による新しい有効な生
物学的活性物質の合成の分野での科学的探求の可能性を証明している。

【０００７】発明の原型、すなわち、出願される物質に最も近い物質として１，３，７，９
−テトラメチル−５−（３−クロモニル）−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５
−ｄ’］ジピリミジノ−２，４，６，８（１Ｈ，３Ｈ，７Ｈ，９Ｈ）−テトラオ
ン［３８］が選択される。これは、初めピリジンとトリエチルアミンの混合物中
、その後硫酸を含む酢酸中で１，３−ジメチルバルビツール酸を３−クロモンカ
ルバアルデヒドと共に加熱することで得られる。前に指摘したように、入手可能
な情報源にはその生物学的活性に関する情報はない。

【０００８】発明の目的本発明の目的は、抗菌、抗ウイルス、免疫調節及び抗腫瘍作用を有する新しい
物質の生成である。

【０００９】発明の概要上記の目的は、下記の一般化学式の新しい物質である、ピラノ［２，３−ｄ：
６，５−ｄ’］ジピリミジン誘導体の合成によって解決される。

【化２】ここで、Ｒ¹は、ヒドロキシ基、メルカプト基、ハロゲンのグループから選択さ
れ、Ｒ²は、ヒドロキシ基、アルコキシル基、ハロゲンのグループから選択され、Ｒ³は、水素、アリルのグループから選択される。

【００１０】この際、出願される物質のバリエーションとして最良のものは以下の場合得ら
れる。Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄ （Ｉ）Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｃｌ、Ｒ³＝Ｃ₆Ｈ₅ （ＩＩ）Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＩＣ₆Ｈ₄ （ＩＩＩ）Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝Ｈ（ＩＶ）Ｒ¹＝ＯＨ、Ｒ²＝ＯＣＨ₃、Ｒ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄ （Ｖ）Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＣｌＣ₆Ｈ₄ （ＶＩ）Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＢｒＣ₆Ｈ₄ （ＶＩＩ）Ｒ¹＝ＳＨ、Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＣｌＣ₆Ｈ₄ （ＶＩＩＩ）Ｒ¹＝ＳＨ、Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄ （ＩＸ）直ちに認識されるように、アルコキシル基、メルカプト基、ハロゲン及びアリ
ルのその他の類似物を使用しても、合成の過程と、得られる物質の生物学的特性
に重要な差異はない。すなわち、本質的な意味を有するのは基Ｒ¹、Ｒ²及びＲ ³ の個々の要素ではなく、一般化学式で言及されたグループにそれらが属するこ
とである。

【００１１】提案された最良のバリエーションは、わかりやすくするため以下の表の形で示
される。

【表１】

【００１２】出願される化合物の一般化学式と個々の化合物の上記で列挙された全てのバリ
エーションは新しいものであり、入手可能な情報源からは知られていない。さら
に、それらの合成とそれらに顕著な生物学的活性があることは最新の技術水準か
らも明白になっておらず、専門家にも明らかではない。

【００１３】発明の開示本発明の本質は、下記の、出願される物質合成の５つの一般例、出願の時点で
著者に知られた３つの最良の合成のバリエーション、収率と溶解温度を示す出願
される物質の化学・物理的特性の３つの一覧表、及び出願される物質の相対的医
学・生物学的特性を判定する４つの一連の実験の結果（定量的測定の対応する表
が付属する）によって明らかにされる。

【００１４】例１５−アリール−２，４，６，８−テトラヒドロキシ−５Ｈ−ピラノ［２，
３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＶＩＩ）と５
−アリール−４，６−ジヒドロキシ−２，８−ジメルカプト−５Ｈ−ピラノ［２
，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＶＩＩＩ、ＩＸ）の合成のバリエーシ
ョン。

【００１５】例２５−アリール−２，４，６，８−テトラヒドロキシ−５Ｈ−ピラノ［２，
３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＶＩＩ）と５
−アリール−４，６−ジヒドロキシ−２，８−ジメルカプト−５Ｈ−ピラノ［２
，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＶＩＩＩ、ＩＸ）の合成のバリエーシ
ョン。

【００１６】例３２，４，６，８−テトラヒドロキシ−５−（ｐ−ニトロフェニル）−５Ｈ
−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｉ）の合成のバリエーシ
ョン。

【００１７】例４５Ｐ−フェニール−２，４，６，８−テトラクロロ−５Ｈ−ピラノ［２，
３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＩＩ）の合成のバリエーション。

【００１８】例５２，８−ジヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−５−（４−ニトロフェニル
）−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｖ）の合成のバ
リエーション。

【００１９】例６４，６−ジヒドロキシ−２，８−ジメルカプト−５−（ｐ−ニトロフェニ
ル）−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＩＸ）の著者
に知られた最良の合成のバリエーション。

【００２０】例７５−フェニール−２，４，６，８−テトラクロロ−５Ｈ−ピラノ［２，３
−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＩＩ）の著者に知られた最良の合成のバリ
エーション。

【００２１】例８２，８−ジヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−５−（４−ニトロフェニル
）−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｖ）の著者に知
られた最良の合成のバリエーション。

【００２２】表１ＤＭＳＯ−ｄ₆（δ．ｐｐｍ）中の出願される物質、５Ｈ−ピラノ［２，
３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン溶液のＰＭＲスペクトル。表２ＤＭＳＯ−ｄ₆（δ．ｐｐｍ）中の出願される物質、５Ｈ−ピラノ［２，
３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン溶液の¹³ＣＮＭＲスペクトル。表３出願される物質、５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジ
ンの収率、分解温度及び元素分析。実験１（表４が付属）ヘルペス単純ウイルスに対する出願される物質の作用の
判定。実験２（表５が付属）出願される物質のインターフェロン誘導活性の判定。実験３（表６が付属）Ｃ．トラコマチス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）に対
する出願される物質の作用の判定。実験４（表７が付属）出願される物質の急性毒性の判定。

【００２３】例１５−アリール−２，４，６，８−テトラヒドロキシ−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ
：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＶＩＩ）と５−アリ
ール−４，６−ジヒドロキシ−２，８−ジメルカプト−５Ｈ−ピラノ［２，３−
ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＶＩＩＩ、ＩＸ）の合成のバリエーション。５，５’−アリリデンビス（２−チオ）バルビツール酸のピリジン塩３ｍｍｏ
ｌとＰＯＣｌ₃５５ｍｍｏｌの混合物を攪拌しながら沸騰するまで加熱する。沈
殿物の溶解後（１時間までの時間の後）溶液にＰ₂Ｏ₅３．５ｍｍｏｌを加える
。沸騰する混合物を５〜７時間攪拌した後、冷水１５０〜２００ｍｌ中に注ぎ、
一晩放置する。析出した沈殿を濾過し、エタノールまたはアセトンで洗浄し、水
から再結晶させる。収率２０〜３０％。

【００２４】例２５−アリール−２，４，６，８−テトラヒドロキシ−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ
：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＶＩＩ）と５−アリ
ール−４，６−ジヒドロキシ−２，８−ジメルカプト−５Ｈ−ピラノ［２，３−
ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＶＩＩＩ、ＩＸ）の合成のバリエーション。５，５’−アリリデンビス（２−チオ）バルビツール酸のピリジン塩０．０４
モル、ＰＯＣｌ₃０．０３５モル、Ｐ₂Ｏ₅０．０２モル、及びクロロホルム７
〜１０ｍｌの混合物を４時間沸騰させて攪拌する。その後反応混合物を冷水１０
０ｍｌ中に注ぎ、一晩放置する。得られた物質の析出と精製を上記のように行う
。収率２３〜８６％。

【００２５】例３２，４，６，８−テトラヒドロキシ−５−（ｐ−ニトロフェニル）−５Ｈ−ピラ
ノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｉ）の合成のバリエーション。２，８ジヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−５−（ｐ−ニトロフェニル）−５
Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン３．４ｍｍｏｌ、酢酸１
０ｍｌ、及び無水酢酸１０ｍｌの混合物に濃硫酸８〜１２滴を加える。混合物を
８〜１０時間沸騰させて攪拌した後、冷水１５０ｍｌ中に注ぎ、一晩放置する。
物質の析出と精製を上記のように行う。収率２５〜３０％。

【００２６】例４５Ｐ−フェニル−２，４，６，８−テトラクロロ−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：
６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＩＩ）の合成のバリエーション。５，５’−ベンジリデンビスバルビツール酸のピリジン塩３ｍｍｏｌとＰＯＣ
ｌ₃５５ｍｍｏｌの混合物を攪拌しながら沸騰するまで加熱する。沈殿物の溶解
後（１時間までの時間の後）溶液にＰ₂Ｏ₅３．５ｍｍｏｌを加える。沸騰する
混合物を４時間攪拌した後、冷水１５０〜２００ｍｌ中に注ぎ、一晩放置する。
析出した沈殿を濾過し、エタノールまたはアセトンで洗浄する。収率１０％。

【００２７】例５２，８−ジヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−５−（４−ニトロフェニル）−５
Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｖ）の合成のバリエー
ション。６−メトキシウラシル１４ｍｍｏｌ、ｐ−ニトロベンズアルデヒド７ｍｍｏｌ
、酢酸１０ｍｌ、及び無水酢酸１０ｍｌの混合物を１１０〜１１５℃で３〜５時
間攪拌する。析出した沈殿を濾過し、エタノールで洗浄し乾燥する。

【００２８】化学式（Ｉ）の出願される物質の合成の著者に知られた最良のバリエーションの
例例６４，６−ジヒドロキシ−２，８−ジメルカプト−５−（ｐ−ニトロフェニール）
−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（ＩＸ）の合成の最
良のバリエーション。

【００２９】５，５’−（ｐ−ニトロベンジリデン）ビス（２−チオ−バルビツール）酸の
ピリジン塩０．０４モル、ＰＯＣｌ₃０．０３５モル、Ｐ₂Ｏ₅０．０２モル、
及びクロロホルム７〜１０ｍｌの混合物を４時間沸騰させて攪拌する。その後反
応混合物を冷水１００ｍｌ中に注ぎ、一晩放置する。得られた物質の析出と精製
を上記のように行う。収率８６％。

【００３０】例７５−フェニル−２，４，６，８−テトラクロロ−５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６
，５−ｄ’］ジピリミジン（ＩＩ）の合成の最良のバリエーション。５，５’−ベンジリデンビスバルビツール酸のピリジン塩３ｍｍｏｌとＰＯＣ
ｌ₃５５ｍｍｏｌの混合物を攪拌しながら沸騰するまで加熱する。沈殿物の溶解
後（１時間までの時間の後）溶液にＰ₂Ｏ₅３．５ｍｍｏｌを加える。沸騰する
混合物を４時間攪拌した後、冷水１５０〜２００ｍｌ中に注ぎ、一晩放置する。
析出した沈殿を濾過し、エタノールまたはアセトンで洗浄する。収率１０％。

【００３１】例８２，８−ジヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−５−（４−ニトロフェニル）−５
Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン（Ｖ）の合成の最良のバ
リエーション。６−メトキシウラシル１４ｍｍｏｌ、ｐ−ニトロベンズアルデヒド７ｍｍｏｌ
、酢酸１０ｍｌ、及び無水酢酸１０ｍｌの混合物を１１０〜１１５℃で３〜５時
間攪拌する。析出した沈殿を濾過し、エタノールで洗浄し乾燥する。収率４６％
。

【００３２】

【表２】

【００３３】

【表３】

【００３４】

【表４】

【００３５】実験部分実験１ヘルペス単純ウイルスに対する出願される化合物の作用の判定。１型ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１／レニングラード／２４８／８８）に関す
る抗ウイルス活性が周知の方法で検討された［４１、４２］。ウイルスは、ロシ
ア科学アカデミー細胞学研究所細胞培養バンクから得られた旋回培養Ｖｅｒｏ細
胞で培養された。

【００３６】実験法の概要子ウシ血清１０％を加えた培地ＲＰＭＩ−１６４０で培養され、９６の穴プレ
ートの穴に置かれた細胞に、最終濃度１０粒子／ｍｌのウイルスと、１００、１
０及び１ｍｇ／ｌの最終濃度でＤＭＳＯに溶解された出願される化合物を加えた
。実験対象の各製剤濃度について、５つの独立した穴を使用した。プレートをＣ
Ｏ₂培養器内、３８℃で６０分間保温した。保温後ウイルスを除去し、前に使用
された濃度の出願される化合物を含む新鮮な培地を再び導入した。

【００３７】ＣＯ₂培養器内、３８℃で３６時間保温した後、細胞に対するウイルスの細胞
病原性作用の存在について結果が評価された。

【００３８】実験では以下の対照実験が利用された。１．細胞培養の対照実験（正常に発達する能力）。２．ウイルスの対照実験（再生能力の評価）。３．抗ウイルス薬剤（アシクロビル）の抗ウイルス活性の対照実験。４．化合物の対照実験（化合物の毒性）。５．溶媒（ＤＭＳＯ）毒性の対照実験。

【００３９】ウイルスの細胞病理作用を評価するため、倒立顕微鏡接眼レンズの特製グリッ
ドによって形成された１００範囲中の変化していない細胞の数を調べた。得られ
た結果を表４に示す。

【００４０】

【表５】

【００４１】表４に示される、得られた結果が示すところによれば、全ての出願される化合
物は、アシクロビル標準製剤のものに匹敵する抗ウイルス活性を有する。残りの
出願される化合物が選択された実験条件でヘルペスウイルス再生抑圧の過程で示
した活性は小さかった。

【００４２】実験２出願される化合物のインターフェロン誘導活性の判定。一次培養ヒトリンパ球（この細胞はヒト組織内のインターフェロン主要生産者
である）において出願される薬剤によるインターフェロン合成の誘導が行われた
。培養リンパ球を得るために、（第２グループでない）健康なドナーの新鮮な（
採集後１２時間）血液を使用した。リンパ球を分離するために、健康なドナーか
ら得られたヘパリン化血液をｆｉｃｏｌｌ−ｖｅｒｏｇｒａｆｉｎ１．７１ｇ
／ｃｍ３密度勾配遠心分離にかけ、免疫適格細胞の分画を分離した。

【００４３】上記の分画は選別され、ウシ胚血清５％、Ｌ−グルタミン０．３ｍｇ／ｍｌ、
ペニシリン１００単位／ｍｌ、ストレプトマイシン５０ｍｇ／ｍｌを含むＲＰＭ
Ｉ−１６４０培地に入れられた。メチレンブルーで着色しＧｏｒｙａｅｖｃｈ
ａｍｂｅｒ内で細胞の数を調べた後リンパ球の濃度を調べた。この元になる溶液
がＲＰＭＩ−１６４０培地で希釈され、リンパ球懸濁液導入後の物質の最終濃度
は１００ｍｇ／ｌ、１０ｍｇ／ｌ、１ｍｇ／ｌとなった。誘導混合物中のリンパ
球の最終濃度は３＊１０６細胞／ｍｌであった。実験用試料と平行して以下の対
照実験が行われた。１）リンパ球インターフェロン（ＩＦＮ）の自然生成物の対照実験。２）ＩＦＮ標準誘導物質であるアクリジンのＮ−メチル−Ｎ−（ａ，Ｄ−グリコ
ピラノジル）アンモニウム−１０−メチレン−カルボキシル酸塩（ｃｙｃｌｏｆ
ｅｒｏｎ）の作用による経過の対照実験。３）ＩＦＮ標準誘導物質である、実験試料中に相当量のＤＭＳＯを含有するＮｅ
ｏｖｉｒの作用による経過の対照実験。４）実験される試料に対応する数の、ＤＭＳＯを含まないインターフェロン自然
生成物の対照実験。

【００４４】対照実験用及び実験用試料を３７℃で２４時間保温した。保温後、細胞要素を
沈殿させるため２０００ｇで遠心分離し、試料からＩＦＮ含有上清を取り出し、
ＩＦＮの定量的含有量について分析した。細胞の沈殿は以前の量の培地中に再懸
濁し、生体染色色素−トリパンブルーで染色し、薬剤の細胞毒性作用を判定する
ため（上記で説明したように）Ｇｏｒｙａｅｖｃｈａｍｂｅｒ内で細胞の数を
数えた。

【００４５】対照実験用及び実験用試料のＩＦＮ含有量の定量的判定は、“Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｏｖｙｉｋｏｎｔｕｒ”社製ＩＦＮ免疫酵素試験システムＰｒｏＣｏｎＩＦ
−２ｐｌｕｓを使用して行われた。試料中のインターフェロンの量を判定する
ため、指標酵素として西洋ワサビペルオキシダーゼを使用した固相免疫酵素法を
使用した。結合ペルオキシダーゼの活性を、波長４５０ｎｍで、マイクロプロセ
ッサ付きマイクロプロッタ用自動光度計を使用して測定した。結果を算定するた
め、平行して既知の量の薬剤を含む標準ＩＦＮ溶液のＩＦＮ活性を判定した。得
られた結果に基づいて較正曲線を設定し、自動光度計のマイクロプロセッサを使
用して、活性の国際単位（ＩＵ）で表されたデータが得られるようにした。分析
結果は、３×１０６リンパ球／ｍｌを含有する上記の誘導システム中のｍｌ当た
りＩＦＮ活性ＩＵで表される。各実験用及び対照実験用範囲について４つの試料
を平行して調査した。

【００４６】免疫酵素反応の対照実験。１．培地を加えたＤＭＳＯの対照実験。２．システム成分の対照実験（取扱説明書による）。全ての結果は、システムの
仕様書データに対照実験が適合したときのみ考慮された。

【００４７】得られた結果は、ｐ＝０．０５の信頼区間を考慮し、ｔ−基準による統計的分
析の対象になった。平行実験結果の収斂分析が行われた。行われた研究の結果、全ての出願される化合物は、周知のインターフェロン誘
導薬品に十分匹敵するＩＦＮ合成誘導能力を有することが確認されたが、これは
それらの化合物の抗ウイルス及び抗腫瘍効果を示している（表５）。

【００４８】

【表６】

【００４９】実験３トラコーマクラミジアに対する出願される化合物の作用の判定。出願される化合物の抗菌作用を、アカデミー会員Ｉ．Ｐ．パブロフ記念サンク
トペテルブルグ国立大学微生物講座所蔵のトラコーマクラミジアＤ３２３標準菌
株について調査した。この菌株はクラミジア尿道炎の患者から分離されたもので
、上記の標本に特徴的な形態と生理学的活性を有し、クラミジア感染治療に使用
される薬剤の作用に対する感受性を有する。

【００５０】この作業では、ロシア科学アカデミー細胞学研究所から入手したＭｃＣｏｙ及
びＬ９２９細胞培養が使用された。

【００５１】実験法の概要細胞は、中性ガラス製フラスコ内の、胚子ウシ血清１０％を加えたＲＰＭＩ−１
６４０培地中で培養された。実験はカバーガラスを有する（無毒の）ガラス製平
底フラスコ内で行われた。最終濃度１×１０細胞／ｍｌの細胞を培地に導入した
。単層を得た後、−７０℃の冷凍状態で保存された、標準感染量のクラミジアを
試験管に導入した。同時に、最終濃度１００ｍｇ／ｌの試験される化合物を細胞
に加えた。試料を室温で６０分間、２４００ｇで遠心分離し、３７℃で２時間保
温した。その後培地を、胚子ウシ血清５％とシクロヘクシミド（２μｇ／ｍｌ）
を含む新しいものに代え、同じ濃度の出願される化合物を再び導入した。平行し
て、調査される物質に対するシクロヘクシミドの影響を除外するため、シクロヘ
クシミドを除いた培地を使用する試料を複製した。試料をＣＯ₂培養器で４８時
間保温した。

【００５２】対照実験には、細胞培養の対照実験、溶媒の作用の対照実験、薬剤が一切存在
しない時のクラミジアの作用の対照実験、標準抗菌薬品シプロフロキサシン及び
ａｂａｋｔａｌ［４６］に対するクラミジアの感受性の対照実験、細胞培養に関
する実験される化合物の毒性の対照実験が含まれる。

【００５３】免疫蛍光法（ＭｉｃｒｏＴｒａｃトラコーマクラミジア直接標本試験）による
クラミジア細胞質封入体と、ＣｙｌａＭｏｎｏＳｃｒｅｅｎ（露英合弁事業、Ｎ
Ｗ１７ＳＸ、ロンドン、リージェンツパーク街６６）によるクラミジア抗原の
出現によって結果の評価を行った。対照実験（トラコーマクラミジアＤ３２３に
感染した細胞の培養）と比較した単層の状態と細胞質封入体を有する細胞の数を
分析し、薬剤の作用を判定したが、この際顕微鏡接眼レンズの専用目盛を使用し
て得られた視野の１００の範囲内で変化していない細胞の数を数えた。

【００５４】実験の要求を満足する対照実験試料の結果：細胞培養の対照実験−細胞の形態と単層の状態は所与の種類の細胞に一致する
。細胞培養中にクラミジアを成長させた対照実験−単層中に細胞質封入体が存在
する、標準抗菌薬剤の作用の対照実験−前の対照実験と比較して単層中の細胞質
封入体が減少している、出願される化合物の毒性の対照実験−毒性はない、溶媒
の作用の対照実験−細胞に対する毒性はない。行われた実験の結果は表６に示さ
れる。

【００５５】

【表７】

【００５６】得られたデータは、出願される物質がクラミジアに起因する疾病に治療に利用
しうるものであることを証明している。

【００５７】実験４急性毒性の判定。体重１８〜２０ｇの非優良種シロネズミで急性毒性の判定が行われた。１５０
０、７００、５００、１００、２０及び５ｍｇ／ｋｇといった様々な濃度のある
種の出願される化合物のエマルジョンを調合した。各濃度の化合物の調査のため
に、各５体の動物を使用した。薬剤を１日１回経口または腹膜内投与した。観察
期間は１４日とした。１、８及び１５日目に各グループの動物の計量を行った。
対照実験用に実験対象化合物を加えずに調合されたエマルジョンを投与した動物
を使用した。

【００５８】内部組織の顕微鏡研究のため、実験の過程で死亡、及び実験終了まで生存した
全ての動物の解剖を行った。調査を行う過程で、体重の減少、行動と外観の変化
、及び動物の死亡は観察されなかった。解剖の結果、実験用及び対照実験用両方
のグループの動物の内部組織には顕微鏡的病状はなかった（表７）。

【００５９】

【表８】

【００６０】得られた結果は、経口または腹膜内投与する場合、濃度１５００ｍｇ／ｋｇの
ある種の出願される化合物はマウスに対する急性毒性を有さないことを証明して
いる。

【００６１】産業への応用可能性出願される化合物の実際の合成の例１〜８と、表１〜３に示される科学物理的
分析は、最新の製剤産業によって開発された薬品による、出願される９つの化合
物全ての実験室内及び工業的合成の可能性と、従来の検査法によるそれらの正確
な同定を立証している。

【００６２】４つの提示された報告に示される、生物学的特性の判定に関する一連の実験は
、出願される化合物が、クラミジア、単純ヘルペスウイルスを含む様々な微生物
に関する生物学的活性と、さらにインターフェロン誘導活性を有することを示し
た。最後の項目はヘルペス、その他のウイルス性及びある種の腫瘍性疾病の治療
でそれらを使用する可能性を指摘している。

【００６３】示された情報は、本発明によって提起された課題が達成され、高度の広範な生
物学的活性、特に免疫促進、抗クラミジア及び抗ウイルス活性を有する新しい種
類の複素環式化合物が合成されたことを証明している。

【００６４】従って、我々の見解では、出願される薬品（新物質）は発明に要求される全て
の要求を満足しており、それらは新しく、非自明性で、産業への応用が可能であ
る。

【００６５】

【表９】

【００６６】

【表１０】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｐ 37/02 //(Ｃ０７Ｄ 491/147 (Ｃ０７Ｄ 491/147 239:28 239:28 309:32） 309:32） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般化学式【化１】の５Ｈ−ピラノ［２，３−ｄ：６，５−ｄ’］ジピリミジン誘導体であって、Ｒ¹が、ヒドロキシ基、メルカプト基、ハロゲンのグループから選択され、Ｒ²が、ヒドロキシ基、アルコキシル基、ハロゲンのグループから選択され、Ｒ³が、水素、アリールのグループから選択され、抗菌、抗ウイルス及び免疫調節作用を有する物質。
【請求項２】Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄（Ｉ）である
ことを特徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項３】Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｃｌ、Ｒ³＝Ｃ₆Ｈ₅（ＩＩ）であることを特
徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項４】Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＩＣ₆Ｈ₄（ＩＩＩ）である
ことを特徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項５】Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝Ｈ（ＩＶ）であることを特徴とす
る、請求項１に記載の物質。
【請求項６】Ｒ¹＝ＯＨ、Ｒ²＝ＯＣＨ₃、Ｒ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄（
Ｖ）であることを特徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項７】Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＣｌＣ₆Ｈ₄（ＶＩ）である
ことを特徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項８】Ｒ¹＝Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＢｒＣ₆Ｈ₄（ＶＩＩ）であ
ることを特徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項９】Ｒ¹＝ＳＨ、Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−ＣｌＣ₆Ｈ₄（ＶＩＩ
Ｉ）であることを特徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項１０】Ｒ¹＝ＳＨ、Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ³＝４−Ｏ₂ＮＣ₆Ｈ₄（Ｉ
Ｘ）であることを特徴とする、請求項１に記載の物質。