JP2001522221A - 腸内細菌におけるチトクロムp450の発現 - Google Patents
腸内細菌におけるチトクロムp450の発現Info
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 機能性チトクロムP450モノオキシゲナーゼ系を含む菌細胞であって、 該細胞がチトクロムP450を発現し得る遺伝子作成物と上記チトクロムP45 0とは別個にチトクロムP450レダクターゼを発現し得る遺伝子作成物を含み 、チトクロムP450のN末端とチトクロムP450レダクターゼのN末端がそ れぞれ上記細胞内において上記チトクロムP450と上記チトクロムP450レ ダクターゼの機能性カップリングを可能にするように適合された菌細胞。 2. 上記細胞が腸内細菌科の菌細胞である、請求項1に記載の菌細胞。 3. 上記チトクロムP450はチトクロムP450のCYP1、CYP2、C YP3又はCYP4ファミリーの何れかのメンバーである、請求項1又は2に記 載の菌細胞。 4. 上記チトクロムP450は、P450のCYP1A、CYP1B、CYP 2A、CYP2B、CYP2C、CYP2D、CYP2E、CYP3A、CYP 4A又はCYP4B亜科の何れかである、請求項1ないし3の何れか1項に記載 の菌細胞。 5. チトクロムP450は、チトクロムP450のCYP3A4、CYP2D 6、CYP2C9、CYP2D9、CYP2A6及びCYP2E1の何れかであ る、請求項4に記載の菌細胞。 6. チトクロムP450レダクターゼは、ヒトチトクロムP450レダクター ゼである、請求項1ないし5の何れか1項に記載の菌細胞。 7. 細胞は大腸菌細胞又はネズミチフス菌細胞である、請求項2ないし6の何 れか1項に記載の菌細胞。 8. チトクロムP450レダクターゼは、菌細胞の細胞区画又は膜にチトクロ ムP450レダクターゼを方向付けるN末端部分を含む、請求項1ないし7の何 れか1項に記載の菌細胞。 9. N末端部分がチトクロムP450レダクターゼを膜に方向付ける、請求項 8に記載の菌細胞。 10. N末端部分は、ompA、pelB、malE又はphoAシグナルペ プチド又はその機能的に等価な変異体の何れかを含む、請求項8又は9に記載の 菌細胞。 11. チトクロムP450は、上記菌細胞中における上記チトクロムP450 の翻訳性を増大させるように適合されたN末端部分を含む、請求項1ないし10 の何れか1項に記載の菌細胞。 12. チトクロムP450は、その天然配列に比較して、そのN末端部分にお いて修飾されている、請求項11に記載の菌細胞。 13. N末端は効果的な翻訳性をもたらすように修飾されている、請求項12 に記載の菌細胞。 14. チトクロムP450は、菌細胞の細胞区画又は膜にチトクロムP450 を方向付けるN末端部分を含む、請求項1ないし10の何れか1項に記載の菌細 胞。 15. N末端部分がチトクロムP450を膜に方向付ける、請求項14に記載 の菌細胞。 16. N末端部分は、ompA、pelB、malE又はphoAシグナルペ プチド又はその機能的に等価な変異体の何れかを含む、請求項9又は10に記載 の菌細胞。 17. チトクロムP450のN末端部分とチトクロムP450レダクターゼの N末端部分は、それぞれ、上記細胞区画又は膜に上記チトクロムP450又はチ トクロムP450レダクターゼを方向付ける、請求項8ないし10又は14ない し16の何れか1項に記載の菌細胞。 18. チトクロムP450のN末端部分はチトクロムP450レダクターゼの N末端部分と実質的に同じである、請求項17に記載の菌細胞。 19. チトクロムP450又はチトクロムP450レダクターゼの正しい折畳 みを助けるポリペプチド補助因子を発現し得る遺伝子作成物を更に含有する、請 求項1ないし18の何れか1項に記載の菌細胞。 20. 上記ポリペプチド補助因子は分子シャペロンである、請求項19に記載 の菌細胞。 21. チトクロムP450とチトクロムP450レダクターゼの間の電子の伝 達を助けるポリペプチド補助因子を発現し得る遺伝子作成物を更に含有する、請 求項1ないし20の何れか1項に記載の菌細胞。 22. チトクロムP450とチトクロムP450レダクターゼの間の電子の伝 達を助ける上記補助因子は、チトクロムb5又はチトクロムP450レダクター ゼのFMN領域である、請求項21に記載の菌細胞。 23. チトクロムP450とチトクロムP450レダクターゼの間の電子の伝 達を助ける上記補助因子は、菌細胞の細胞区画又は膜に補助因子を方向付けるN 末端部分を含む、請求項21又は22に記載の菌細胞。 24. チトクロムP450のN末端部分とチトクロムP450レダクターゼの N末端部分は、それぞれ、上記細胞区画又は膜に上記チトクロムP450又はチ トクロムP450レダクターゼを方向付ける、請求項8ないし10又は14ない し17の何れか1項に記載の菌細胞。 25. チトクロムP450とチトクロムP450レダクターゼのN末端部分と 補助因子は互いに実質的に同じである、請求項24に記載の菌細胞。 26. チトクロムP450モノオキシゲナーゼ系により触媒される反応生成物 を代謝し得る任意の酵素を発現し得る遺伝子作成物を更に含有する、請求項1な いし15の何れか1項に記載の菌細胞。 27. 上記酵素は、グルタチオンS-トランスフェラーゼ、エポキシドヒドロ ラーゼ又はUDP-グルクロノシルトランスフェラーゼの何れかである、請求項 26に記載の菌細胞。 28. チトクロムP450とチトクロムP450レダクターゼは異なる遺伝子 作成物によりコード化されている、請求項1ないし27の何れか1項に記載の菌 細胞。 29. チトクロムP450とチトクロムP450レダクターゼは同じ遺伝子作 成物によりコード化されている、請求項1ないし27の何れか1項に記載の菌細 胞。 30. 上記細胞は、チトクロムP450モノオキシゲナーゼ系の基質である化 合物に対して浸透性である、請求項1ないし29の何れか1項に記載の菌細胞。 31. チトクロムP450の基質を生成物に転換する方法であって、請求項1 ないし30の何れか1項に記載の菌細胞と上記基質を混合することを含み、上記 細胞が上記基質を転換し得る機能性チトクロムP450モノオキシゲナーゼ系を 含む方法。 32. チトクロムP450の基質を製品に転換するための、請求項1ないし3 0の何れか1項に記載の菌細胞の使用。 33. チトクロムP450を含む菌細胞において、上記チトクロムP450を コード化し、かつ発現し得る遺伝子作成物を含有し、チトクロムP450が、菌 細胞の細胞区画又は膜にチトクロムP450を方向付けるN末端部分を含む、菌 細胞。 34. N末端部分がチトクロムP450を膜に方向付ける、請求項33に記載 の菌細胞。 35. N末端部分は、ompA、pelB、malE又はphoAシグナルペ プチド又はその機能的に等価な変異体を含む、請求項33又は34に記載の菌細 胞。 36. チトクロムP450は、菌細胞からチトクロムP450の精製を助ける ペプチド配列を更に含む、請求項33ないし35の何れか1項に記載の菌細胞。 37. 上記ペプチド配列は化合物に対する結合部位を含む、請求項36に記載 の菌細胞。 38. 上記ペプチド配列が-(His)n(ここでn≧4)で、上記化合物がニッ ケルである、請求項37に記載の菌細胞。 39. チトクロムP450を調製する方法であって、(a)請求項33ないし 38の何れか1項に記載の細胞を充分な量提供する工程と、(b)他の細胞区画 からチトクロムP450を分離する工程を含んでなる方法。 40. チトクロムP450を発現し得る遺伝子作成物であって、チトクロムP 450が、チトクロムP450を菌細胞の細胞区画又は膜に方向付けるN末端部 分を含む遺伝子作成物。 41. 請求項1又は33に記載の複数の菌細胞であって、各細胞が異なるチト クロムP450を発現し得る遺伝子作成物を含むか、チトクロムP450とチト クロムP450レダクターゼの異なる組合せ又は他のポリペプチドの更なる組合 せをコード化する遺伝子作成物又は作成物群を含む菌細胞。
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