JP2001509023A - Cell culture system - Google Patents

Cell culture system

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JP2001509023A
JP2001509023A JP53393398A JP53393398A JP2001509023A JP 2001509023 A JP2001509023 A JP 2001509023A JP 53393398 A JP53393398 A JP 53393398A JP 53393398 A JP53393398 A JP 53393398A JP 2001509023 A JP2001509023 A JP 2001509023A
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frame
cells
culture substrate
cell culture
substrate
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JP53393398A
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Japanese (ja)
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ルイス ブロット，パトリック
プール，ドーン
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Smith and Nephew PLC
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Smith and Nephew PLC
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Abstract

(57)【要約】 枠と細胞培養基質材とを備えた細胞培養基質装置が開示されている。枠は、細胞の付着のために好ましくは平坦な形態で基質材に取り外し可能に取り付けるように適合されている。基質材はさらに支持層を備えていてもよい。この装置は、コンテナ、例えばペトリ皿の中に置かれる。 (57) [Summary] A cell culture substrate device including a frame and a cell culture substrate material is disclosed. The frame is adapted to removably attach to the substrate material, preferably in a flat configuration, for cell attachment. The substrate material may further include a support layer. The device is placed in a container, for example a petri dish.

Description

【発明の詳細な説明】 細胞培養システム この発明は、細胞培養法に用いられる基質及び容器に関するものである。この発 明は特に、細胞を増殖させ次いで細胞の層を必要とする患者へ移着するための基 質に関するものである。 国際特許出願第ＷＯ９１／１３６３８号公報には、１つの面に固着された培養 ずみ哺乳類細胞の層を有するポリマー材料層を備えた創傷被覆材に関する記載が ある。そのような被覆材は、火傷や皮膚供与部位のような、部分的に厚くなった 傷の治療に用いるのに適している。細胞は好ましくは、生検により得られた自家 皮膚細胞からまたは他の供給源から培養することのできる上皮細胞である。細胞 は、それが付着されるポリマー基質の存在下で培養されて増殖する。この基質が 患者の用意された部位に適用されると、その細胞は、基質から患者へ移着されて 、表皮細胞の層を形成するために増加し続ける。記載された被覆材は、ポリマー 被覆材基質の表面に接触している細胞を培養し、培養液からその基質を取り出し 、次いで、その細胞が患者の傷に接触するようにその被覆材を患者に施すように される。 この発明の１つの目的は、培養、基質への細胞の固着、続いて行われる患者へ の細胞の移着に用いるのに都合のよい、細胞培養基質装置の改良された形態を提 供することである。この発明のさらなる目的は、前記の目的もまた達成する細胞 培養シス テムを提供することである。 この発明によれば、細胞培養基質装置は、細胞に対する毒性がまったくないか あるいは毒性が低い材料から形成された枠と、細胞に対する毒性がなく、細胞が 付着するであろう少なくとも１つの面を有する細胞培養基質とを備え、その枠が 、前記の少なくとも１つの面への細胞の付着に適した形態で細胞培養基質に取り 外し可能に取り付けられるように適合されている。 枠は、細胞培養容器に嵌め込むのに適した形状及び大きさのものであるのが好 ましい。好ましい形態は、他の形状が同等に適しているかも知れないが、略正方 形、略長方形、あるいは略円形である。 枠は、その面への細胞の付着に適した形態で細胞培養基質を取り付けるように 適合されている。細胞培養基質は、細胞の付着に適した面を有するポリマーフィ ルムを備えているのが好ましい。このフィルムは親水性のものでもよく疎水性の ものでもよい。基質は２以上の材料層を備えていてもよい。 細胞培養基質に適した材料は、国際特許出願第ＷＯ９１／１３６３８号公報に 挙げられたもの、すなわち、ポリエステル、ポリプロピレン、例えばエチレン酢 酸ビニルコポリマーのような酢酸ビニルの混合物あるいはコポリマー、ポリ塩化 ビニリデン、ポリスチレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、例えばサーリン（ ＳＵＲＬＹＮ，登録商標）のようなイオノマー、またはこれらの化合物を含むコ ポリマー及び混合物を含んでいる。 この代わりに、親水性ポリウレタンのような親水性ポリマー が培養基質を形成してもよい。この培養基質は、培養された哺乳類細胞が付着す るであろう第１面を有している。この面は、その性質を改変するために、コラー ゲン基材料のような別の材料でコーティングすることにより、あるいは例えばコ ロナ放電やプラズマ処理のような他の手段により、処理される。基質材はポリマ ー材料のフィルムであるのが好ましい。基質材は、身体の輪郭に対して比較的、 寸法適合性のよいものが好ましい。基質材は、連続的なものでもよく、窓孔の開 いたものでもよい。 細胞培養基質材は、創傷被覆材として供するために創傷に適用するのに適した ものであるのが好ましい。したがって、細胞培養基質は、それが適用される創傷 の輪郭に沿うように、寸法適合性がよくかつエラストマー状のものであるのが好 ましい。その材料は呼吸可能なものであってもよい。細胞培養基質がその表面に 付着する上皮細胞を有しているときには、創傷の再上皮化を促進する目的でその 基質から創傷への細胞移着をもたらすためにその細胞が創傷に接触するように、 細胞培養基質が創傷に適用されてもよい。 基質がポリマーフィルムのような平面材からなるときには、枠は基質を実質的 に平坦な形態で取り付けるように適合されているのが好ましい。この方法では、 基質への細胞の溜まりを最小限にすることができ、それゆえ、細胞をそれが付着 する面の上に比較的一様に分布させることが可能になる。したがって、枠は次の ような平面部分を備えているのが好ましい。すなわち、平面部分は、その平面部 分に平行な面において前記細胞培養基 質を平坦な形態で取り外し可能に取り付けるためにその基質の少なくとも一部に 係合するものである。この平面部分は、開口した枠組あるいは連続した材料層を 備えていてもよい。好ましい形態では、この平面部分は、細胞培養基質が取り付 けられるであろう、周辺の、すなわち環状帯の枠を備えている開口した枠を具備 している。 細胞培養基質は例えば、接着剤による接合、ラミネート処理、熱溶接、高周波 溶接、あるいはクリップのような機械的手段で、枠に取り外し可能に取り付けら れてもよい。枠と細胞培養基質との間の接合は液密なものであるのが好ましい。 この代わりに、枠は、コンテナあるいは細胞培養容器の内面であってもよい別の 面に対して基質を平坦な形態に維持するために基質の一部または全部を圧迫する ように機能してもよい。 枠は、前記平面部分をめぐって連続的に延出してもよく延出しなくてもよい直 立した壁をさらに備えている。この壁は、前記枠をコンテナまたは容器の中で保 持するための手段を備えていてもよい。例えば、この壁は、ペトリ皿あるいは細 胞培養容器のようなコンテナの縁に係合するであろうリップあるいは窪みを含ん でいてもよい。この壁は枠の他の部分と一体であるのが好ましい。この壁が連続 的でありかつ枠の平面部分を取り囲んでおり、細胞培養基質がその枠に接合され ているときには、枠と基質とはともに、細胞が培養されるであろうコンテナを形 成する。 枠は、細胞に対して無毒かあるいは重大な毒性のない材料か ら作られている。適切な材料は、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタ レート、ポリエチレンナフタレート）、その混合物及びコポリマーを含んだもの 、ポリオレフィン、ポリスチレン、ポリカーボネート、アクリル性材料、ポリエ ーテルイミド、エチレン酢酸ビニルのコポリマー及び混合物、これらの材料また は他の適切な材料のいくつかを含むコポリマーを含んでいる。枠は、例えば、ブ ロー成形、熱成形、真空または圧力成形、あるいは射出成形のような成形法によ り形成されてもよい。枠は、ポリマーのフィルムから、所望形状を形成するため に真空成形及び加熱により形成されてもよい。 この装置は、例えばペトリ皿のような容器またはコンテナの内部に嵌まるよう に適合されているのが好ましい。したがって、この発明によれば、細胞培養シス テムは、細胞に対する毒性がまったくないか毒性が低い材料から形成された枠と 、細胞に対する毒性がなく細胞が付着するであろう少なくとも１つの面を有する 細胞培養基質とを備えている装置と、コンテナとを具備してなり、その枠は、前 記の面への細胞の付着に適した形態で前記細胞培養基質に取り外し可能に取り付 けられるように適合されており、その枠は、細胞培養基質が前記コンテナの１つ の内面に実質的に平行に保持されるように、前記コンテナの中に嵌まり込む形状 及び大きさのものである。 この培養基質は支持層をさらに備えていてもよい。培養基質は、その面の１つ の一部あるいは全部を覆ってその支持層に取り外し可能に取り付けられてもよい 。支持層が取り付けられる 面は細胞が付着する面の反対側にあるのが好ましい。この態様では、培養基質及 び支持層は平坦な形態で枠に取り付けられている。支持層は好ましくは、培養基 質よりも堅くしたがって培養基質を平坦にかつしわのないように維持するのを支 援するポリマーフィルム材からなる層を備えている。支持層は、枠を形成するの に適したのと同様な材料のフィルムを備えていてもよい。支持層は、細胞が付着 する面の反対側にある培養基質の残りの面全体を覆って、取り外し可能に取り付 けられているのが好ましい。支持層は、所望するときに剥離によって培養基質の 残り部分から取り外されるような方法で取り付けられているのが好ましい。 この発明の好ましい態様では、細胞培養基質材は、培養された哺乳類細胞が付 着するであろう第１面と、その反対側の第２面とを備えており、第２面が、その 第２面のうちの少なくともより大きい部分にわたって、培養基質の支持層を形成 する連続的なポリマーフィルムの第１面に取り外し可能に取り付けられている。 １つの実施態様では、細胞培養基質の第２面は、支持層の一部分、好ましくは その中央部分に取り外し可能に取り付けられている。 基質材の反対側の第２面に接触しない支持層の残り部分は、枠に取り外し可能 に取り付けられてもよくあるいは固定状に取り付けられてもよい。 この発明のさらなる目的によれば、細胞に対する毒性がまっ たくないかあるいは毒性が低い材料から形成された枠と、細胞に対する毒性がな く、細胞が付着するであろう少なくとも１つの面を有する細胞培養基質とを備え てなり、基質の一部分が基質の他の部分に取り外し可能に取り付けられており、 この他の部分が枠に固定状に取り付けられている。 この発明は、例示としてのみ添付図面を参照しながら、以下でさらに説明され る。 図１はこの発明に係る装置の斜視図である。 図２は図１に示された装置が容器内に置かれたときの断面図である。 図３はこの発明の第２実施態様の断面図である。 図４は容器内に置かれた、この発明の第３実施態様に係る装置の斜視図である 。 図５は図４に係る装置の断面図である。 図１は、枠１０と細胞培養基質１４とを備えた細胞培養装置を示す。枠１０は 、その平面部分を形成する開口した周辺枠１１と、直立した壁１３とを備えてい る。壁１３と周辺枠１１とは、２００μｍ厚さの１枚のポリエチレンテレフタレ ートフィルムを真空成形することで、一体に形成されている。壁１３はその上縁 をめぐって延出するリップ１２を有している。細胞培養基質フィルム１４は、ラ ミネート処理によって、周辺枠１１の下面に取り外し可能に取り付けられている 。細胞培養基質は、表面特性を最適な細胞付着のために改変する目的でコロナ放 電法によって上面が処理された、寸法適合性のよい１枚のエチレ ン酢酸ビニルフィルムを備えている。この上面の中央部分は、周辺枠１１の開口 部を通してアクセス可能である。この装置を形成する枠と培養基質とは、図２に 示されるようにペトリ皿１５の中に置かれてもよい。枠と培養基質とは好ましく は、殺菌したものであり、また耐細菌性包装の中で供給される。 この細胞培養装置を用いるために、細胞培養装置がペトリ皿または他のコンテ ナの中に置かれ、次いで、例えば人間の上皮ケラチン生成細胞を含んだ細胞培養 液が加えられる。細胞は３７℃で何日間か培養される。その期間、細胞層の集合 体が所望の細胞密度及び度合いになるまで、細胞は増加して基質に付着する。そ の後、培養液が取り除かれて、装置がコンテナから取り出される。その後、細胞 培養基質は、枠から剥がされて、細胞のある側を下にして、治療すべき傷の上に 置かれるであろう。 図３において、培養基質は、その下面が、１５０μｍ厚さの１枚のＰＥＴフィ ルムである支持層１６を覆って取り付けられている。支持層は、フィルム１４を 平坦でしわのない状態に維持するのを支援するためにそのフィルムに付加的な剛 性をもたらす。細胞が増殖して培養基質に付着すると、支持層及び基質は、いっ しょに枠から取り外されて患者の上に置かれる。その後、支持層は剥離によって 取り外されてもよい。 図４及び図５において、細胞培養基質材１４は、その下面が、周辺枠１１によ って区画された支持層１６の一部を覆って支持層１６に剥離可能に取り付けられ ている。剥離性を促進するた めに、基質材１４には、基質材１４の隅へ向かうつまみ部分１７が設けられてい る。支持層１６の残部は枠１１に固定状に取り付けられている。 Cell culture systems The present invention Detailed Description of the Invention is directed to a substrate and a container used for the cell culture method. The invention particularly relates to a substrate for growing cells and then transferring them to a patient in need of a layer of cells. International Patent Application No. WO 91/13638 describes a wound dressing comprising a layer of polymeric material having a layer of cultured mammalian cells affixed to one surface. Such dressings are suitable for use in treating partially thickened wounds, such as burns and skin donor sites. The cells are preferably epithelial cells that can be cultured from autologous skin cells obtained by biopsy or from other sources. Cells are cultured and grown in the presence of the polymer substrate to which they are attached. As the substrate is applied to the prepared site of the patient, the cells are transferred from the substrate to the patient and continue to grow to form a layer of epidermal cells. The dressing described describes culturing cells in contact with the surface of a polymeric dressing substrate, removing the substrate from the culture, and then applying the dressing to the patient so that the cells contact the patient's wound. To be applied. One object of the present invention is to provide an improved form of a cell culture substrate device that is convenient for use in culturing, attaching cells to a substrate, and subsequently transferring cells to a patient. is there. It is a further object of the present invention to provide a cell culture system that also achieves the above objects. In accordance with the present invention, a cell culture substrate device has a frame formed from a material that has no or low toxicity to cells and at least one surface that is non-toxic to cells and to which cells will attach. A cell culture substrate, the frame of which is adapted to be removably attached to the cell culture substrate in a form suitable for attaching cells to said at least one surface. The frame is preferably of a shape and size suitable for fitting into a cell culture vessel. Preferred forms are substantially square, substantially rectangular, or substantially circular, although other shapes may be equally suitable. The frame is adapted to mount the cell culture substrate in a form suitable for attaching cells to the surface. The cell culture substrate preferably comprises a polymer film having a surface suitable for cell attachment. This film may be hydrophilic or hydrophobic. The substrate may have more than one layer of material. Suitable materials for the cell culture substrate are those listed in International Patent Application No. WO 91/13638, ie polyesters, polypropylenes, mixtures or copolymers of vinyl acetate such as ethylene vinyl acetate copolymers, polyvinylidene chloride, polystyrene , Polybutadiene, polyethylene, ionomers such as, for example, SURLYN®, or copolymers and mixtures containing these compounds. Alternatively, a hydrophilic polymer such as a hydrophilic polyurethane may form the culture substrate. The culture substrate has a first surface to which the cultured mammalian cells will attach. This surface may be treated to modify its properties by coating it with another material, such as a collagen-based material, or by other means, for example, corona discharge or plasma treatment. Preferably, the substrate material is a film of a polymeric material. It is preferable that the substrate material has a relatively good dimensional compatibility with the contour of the body. The substrate material may be continuous or may have a window. Preferably, the cell culture matrix material is suitable for application to a wound to serve as a wound dressing. Thus, the cell culture substrate is preferably dimensionally conformable and elastomeric so as to follow the contours of the wound to which it is applied. The material may be breathable. When the cell culture substrate has epithelial cells attached to its surface, the cells are brought into contact with the wound to effect cell transfer from the substrate to the wound in order to promote re-epithelialization of the wound. A cell culture substrate may be applied to the wound. When the substrate comprises a flat material such as a polymer film, the frame is preferably adapted to mount the substrate in a substantially flat configuration. In this way, the accumulation of cells on the substrate can be minimized, thus allowing the cells to be distributed relatively uniformly on the surface to which they adhere. Therefore, the frame preferably has the following flat portions. That is, the planar portion engages at least a portion of the cell culture substrate to removably attach the cell culture substrate in a flat configuration in a plane parallel to the planar portion. This planar portion may comprise an open framework or a continuous layer of material. In a preferred form, this planar section comprises an open frame with a peripheral, ie annular, frame to which the cell culture substrate will be attached. The cell culture substrate may be removably attached to the frame by, for example, adhesive bonding, laminating, heat welding, high frequency welding, or mechanical means such as clips. Preferably, the junction between the frame and the cell culture substrate is liquid tight. Alternatively, the frame may function to compress some or all of the substrate to maintain the substrate in a flat configuration against another surface, which may be the interior surface of the container or cell culture vessel. Good. The frame further comprises an upright wall that may or may not extend continuously around the planar portion. The wall may comprise means for holding the frame in a container or container. For example, the wall may include a lip or depression that will engage the edge of a container such as a petri dish or cell culture vessel. This wall is preferably integral with the other parts of the frame. When the wall is continuous and surrounds a planar portion of the frame, and the cell culture substrate is joined to the frame, the frame and the substrate together form a container in which the cells will be cultured. The frame is made of a material that is non-toxic or non-toxic to cells. Suitable materials include polyesters (eg, polyethylene terephthalate, polyethylene naphthalate), including mixtures and copolymers thereof, polyolefins, polystyrenes, polycarbonates, acrylic materials, polyetherimides, copolymers and mixtures of ethylene vinyl acetate, and mixtures thereof. And copolymers comprising some of the materials or other suitable materials. The frame may be formed by a molding method such as, for example, blow molding, thermoforming, vacuum or pressure molding, or injection molding. The frame may be formed from a polymer film by vacuum forming and heating to form the desired shape. The device is preferably adapted to fit inside a container or container, for example a petri dish. Thus, according to the present invention, a cell culture system comprises a cell formed from a material having no or low toxicity to cells and a cell having at least one surface to which the cells will adhere without toxicity to the cells. A device comprising a culture substrate, and a container, the frame of which is adapted to be removably attached to said cell culture substrate in a form suitable for attaching cells to said surface. And the frame is shaped and sized to fit within the container such that the cell culture substrate is held substantially parallel to one interior surface of the container. The culture substrate may further include a support layer. The culture substrate may be removably attached to the support layer over part or all of one of its faces. The surface to which the support layer is attached is preferably on the opposite side of the surface to which cells are attached. In this embodiment, the culture substrate and the support layer are attached to the frame in a flat form. The support layer preferably comprises a layer of polymeric film material that is stiffer than the culture substrate and thus helps to keep the culture substrate flat and wrinkle-free. The support layer may comprise a film of a material similar to that suitable for forming the frame. The support layer is preferably removably attached over the remaining surface of the culture substrate opposite the surface to which the cells adhere. The support layer is preferably attached in such a way that it is detached from the rest of the culture substrate by detachment when desired. In a preferred aspect of the invention, the cell culture substrate material comprises a first surface to which the cultured mammalian cells will adhere and a second surface opposite the second surface, wherein the second surface is the second surface. Over at least a larger portion of the surface, it is removably attached to a first surface of a continuous polymer film that forms a support layer for the culture substrate. In one embodiment, the second side of the cell culture substrate is removably attached to a portion of the support layer, preferably a central portion thereof. The remaining portion of the support layer that does not contact the opposite second surface of the substrate material may be removably attached to the frame or may be fixedly attached. According to a further object of the present invention, a cell culture substrate having a frame formed from a material having no or low toxicity to cells, and having at least one surface to which the cells are non-toxic and to which the cells will adhere. A portion of the substrate is removably attached to another portion of the substrate, and the other portion is fixedly attached to the frame. The present invention is further described below, by way of example only, with reference to the accompanying drawings. FIG. 1 is a perspective view of an apparatus according to the present invention. FIG. 2 is a sectional view when the device shown in FIG. 1 is placed in a container. FIG. 3 is a sectional view of a second embodiment of the present invention. FIG. 4 is a perspective view of the device according to the third embodiment of the present invention, placed in a container. FIG. 5 is a sectional view of the device according to FIG. FIG. 1 shows a cell culture apparatus including a frame 10 and a cell culture substrate 14. The frame 10 includes an open peripheral frame 11 that forms a plane portion thereof, and an upright wall 13. The wall 13 and the peripheral frame 11 are integrally formed by vacuum forming a single polyethylene terephthalate film having a thickness of 200 μm. The wall 13 has a lip 12 extending around its upper edge. The cell culture substrate film 14 is detachably attached to the lower surface of the peripheral frame 11 by a laminating process. The cell culture substrate is provided with a single dimensionally compatible ethylene vinyl acetate film whose upper surface has been treated by corona discharge in order to modify the surface properties for optimal cell attachment. The central portion of this top surface is accessible through the opening in the peripheral frame 11. The frame and the culture substrate forming the device may be placed in a Petri dish 15 as shown in FIG. The frame and culture substrate are preferably sterile and supplied in a bacterial resistant package. To use the cell culture device, the cell culture device is placed in a Petri dish or other container, and then a cell culture solution containing, for example, human epithelial keratinocytes is added. Cells are cultured for several days at 37 ° C. During that time, the cells increase and attach to the substrate until the aggregate of the cell layer is at the desired cell density and degree. Thereafter, the culture solution is removed and the device is removed from the container. Thereafter, the cell culture substrate will be peeled from the frame and placed on one side of the cell, above the wound to be treated. In FIG. 3, the culture substrate is attached so that the lower surface thereof covers a support layer 16 which is a single PET film having a thickness of 150 μm. The support layer provides additional rigidity to the film 14 to help keep the film 14 flat and wrinkle-free. As the cells grow and attach to the culture substrate, the support layer and the substrate are removed together from the frame and placed on the patient. Thereafter, the support layer may be removed by peeling. In FIGS. 4 and 5, the cell culture substrate material 14 is detachably attached to the support layer 16 so that its lower surface covers a part of the support layer 16 partitioned by the peripheral frame 11. In order to promote the releasability, the substrate material 14 is provided with a knob portion 17 toward a corner of the substrate material 14. The rest of the support layer 16 is fixedly attached to the frame 11.

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】平成１１年２月１３日（１９９９．２．１３） 【補正内容】 テムを提供することである。 この発明によれば、細胞培養基質装置は、細胞に対する毒性がまったくないか あるいは毒性が低い材料から形成された枠と、細胞に対する毒性がなく、細胞が 付着するであろう少なくとも１つの面を有する細胞培養基質とを備え、その枠が 、前記の少なくとも１つの面への細胞の付着に適した形態で前記培養基質に取り 外し可能に取り付けられるように適合されていることと、その枠が、細胞の付着 するであろう前記の面をめぐって延出する直立した壁をさらに備え、その壁がコ ンテナの中でその枠を保持するための手段をさらに備えていることとを特徴とす る。 枠は、細胞培養容器に嵌め込むのに適した形状及び大きさのものであるのが好 ましい。好ましい形態は、他の形状が同等に適しているかも知れないが、略正方 形、略長方形、あるいは略円形である。 枠は、その面への細胞の付着に適した形態で細胞培養基質を取り付けるように 適合されている。細胞培養基質は、細胞の付着に適した面を有するポリマーフィ ルムを備えているのが好ましい。このフィルムは親水性のものでもよく疎水性の ものでもよい。基質は２以上の材料層を備えていてもよい。 細胞培養基質に適した材料は、国際特許出願第ＷＯ９１／１３６３８号公報に 挙げられたもの、すなわち、ポリエステル、ポリプロピレン、例えばエチレン酢 酸ビニルコポリマーのような酢酸ビニルの混合物あるいはコポリマー、ポリ塩化 ビニリデン、ポリスチレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、例えば サーリン（ＳＵＲＬＹＮ，登録商標）のようなイオノマー、またはこれらの化合 物を含むコポリマー及び混合物を含んでいる。 この代わりに、親水性ポリウレタンのような親水性ポリマー請求の範囲 １．細胞に対する毒性がまったくないかあるいは毒性が低い材料から形成された 枠と、細胞に対する毒性がなく、細胞が付着するであろう少なくとも１つの面を 有する細胞培養基質とを備え、その枠が、その少なくとも１つの面への細胞の付 着に適した形態で前記培養基質に取り外し可能に取り付けられるように適合され ていることと、その枠が、細胞の付着するであろう前記の面をめぐって延出する 直立した壁をさらに備え、その壁がコンテナの中でその枠を保持するための手段 をさらに備えていることとを特徴とする 細胞培養基質装置。 ２．培養基質が、細胞の付着に適した面を有するポリマー材料からなる請求項１ に記載の装置。 ３．基質が、フィルムからなる請求項１または２に記載の装置。 ４．その材料が、ポリエステル、ポリプロピレン、酢酸ビニルコポリマー、ポリ 塩化ビニリデン、ポリスチレン、ポリブタジエン、ポリエチレンイオノマーから なる群から選ばれている請求項２または３に記載の装置。 ５．枠が、培養基質を実質的に平坦な形態で取り付けるように適合されている先 行請求項のいずれか１つに記載の装置。 ６．枠が、平面部分を備え、この平面部分が、平面部分に平行な面において細胞 培養基質を平坦な形態で取り外し可能に取り付けるためにその基質の少なくとも 一部に係合する請求項５に記載の装置。 ７．枠が、周辺枠を備えている開口した枠である請求項５に記載の装置。８ ．保持するための手段が、コンテナの縁に係合するリップあるいは窪みを備え ている先行請求項のいずれか１つに記載の装置。９ ．培養基質が、接着剤による接合で、枠に取り外し可能に取り付けられている 先行請求項のいずれか１つに記載の装置。１０ ．細胞培養基質が、前記の少なくとも１つの面の反対側の面に取り外し可能 に取り付けられた支持層をさらに備えている先行請求項のいずれか１つに記載の 装置。１１ ．反対側の面が、支持層の一部を覆っている請求項１０に記載の装置。１２ ．反対側の面が、支持層の実質的に中央の部分を覆ってお り、それによってむき出しの外部周辺部分を規定している請求項１１に記載の装 置。１３ ．むき出しの外部周辺部分が、枠に固定状に取り付けられている請求項１２ に記載の装置。１４ ．前記の少なくとも１つの面が、つまみ部分をさらに備えている請求項１に 記載の装置。１５ ．一群の哺乳類細胞とともにある先行請求項のいずれか１つに記載の装置。１６ ．先行請求項のいずれか１つに記載の装置の使用。１７ ．細胞に対する毒性がまったくないか毒性が低い材料から形成された枠と、 細胞に対する毒性がなく、細胞が付着するであろう少なくとも１つの面を有する 細胞培養基質とを備えている装置と、コンテナとを備えてなり、その枠は、前記 の面への細胞の付着に適した形態で前記細胞培養基質に取り外し可能に取り付け られるように適合されており、その枠は、細胞培養基質が前記コンテナの１つの 内面に実質的に平行に保持されるように、前記コンテナの中に嵌め込まれる形状 及び大きさのものであり、かつコンテナの中で保持されるための手段を有してい る 細胞培養システム。[Procedure for Amendment] Article 184-8, Paragraph 1 of the Patent Act [Date of Submission] February 13, 1999 (Feb. 13, 1999) [Content of Amendment] To provide a system. In accordance with the present invention, a cell culture substrate device has a frame formed from a material that has no or low toxicity to cells and at least one surface that is non-toxic to cells and to which cells will attach. and a cell culture substrate, the frame is, with being adapted to be removably attached to the culture substrate on at least one form suitable for attachment of cells to the surface of the, is the frame, the cell further comprising an upstanding wall extending On the surface that will adhere to, it characterized and that the wall is further provided with means for retaining the frame within the container. The frame is preferably of a shape and size suitable for fitting into a cell culture vessel. Preferred forms are substantially square, substantially rectangular, or substantially circular, although other shapes may be equally suitable. The frame is adapted to mount the cell culture substrate in a form suitable for attaching cells to the surface. The cell culture substrate preferably comprises a polymer film having a surface suitable for cell attachment. This film may be hydrophilic or hydrophobic. The substrate may have more than one layer of material. Suitable materials for the cell culture substrate are those listed in International Patent Application No. WO 91/13638, ie polyesters, polypropylenes, mixtures or copolymers of vinyl acetate such as ethylene vinyl acetate copolymers, polyvinylidene chloride, polystyrene , Polybutadiene, polyethylene, ionomers such as SURLYN®, or copolymers and mixtures containing these compounds. Alternatively, range one hydrophilic polymer according, such as a hydrophilic polyurethane. A frame formed from a material having no or low toxicity to cells and a cell culture substrate having at least one surface to which cells are not toxic and to which cells are attached, the frame comprising and that it is adapted to be removably attached to the culture substrate on at least one form suitable for attachment of cells to the surface, the frame is, extends on the surface that will cell attachment further comprising, cell culture substrates device and in that the wall is further provided with means for retaining the frame within the container an upstanding wall. 2. The device according to claim 1, wherein the culture substrate comprises a polymer material having a surface suitable for cell attachment. 3. 3. The device according to claim 1, wherein the substrate comprises a film. 4. Apparatus according to claim 2 or 3, wherein the material is selected from the group consisting of polyester, polypropylene, vinyl acetate copolymer, polyvinylidene chloride, polystyrene, polybutadiene, polyethylene ionomer. 5. Apparatus according to any one of the preceding claims, wherein the frame is adapted to mount the culture substrate in a substantially flat configuration. 6. 6. The frame of claim 5, wherein the frame comprises a planar portion that engages at least a portion of the cell culture substrate in a plane parallel to the planar portion to removably attach the cell culture substrate in a planar configuration. apparatus. 7. 6. The device according to claim 5, wherein the frame is an open frame with a peripheral frame. <8 . Apparatus according to any one of the preceding claims , wherein the means for retaining comprises a lip or depression engaging the edge of the container. 9 . Apparatus according to any one of the preceding claims, wherein the culture substrate is removably attached to the frame by adhesive bonding. 10 ． The device of any one of the preceding claims, wherein the cell culture substrate further comprises a support layer removably attached to a surface opposite the at least one surface. 11 . 11. The device of claim 10 , wherein the opposite surface covers a portion of the support layer. 12 . The apparatus of claim 11 , wherein the opposite surface covers a substantially central portion of the support layer, thereby defining an exposed outer peripheral portion. 13 . 13. The device of claim 12 , wherein the exposed outer peripheral portion is fixedly attached to the frame. 14 . The device of claim 1, wherein the at least one surface further comprises a knob portion. 15 . The device according to any one of the preceding claims, wherein the device is with a group of mammalian cells. 16 . Use of the device according to any one of the preceding claims. 17 . An apparatus comprising a frame formed of a material having no or low toxicity to cells, a cell culture substrate having no toxicity to cells and having at least one surface to which cells may attach, and a container; The frame is adapted to be removably attached to the cell culture substrate in a form suitable for attachment of cells to the surface, the frame comprising a cell culture substrate of the container. as maintained substantially parallel to one of the inner surface, the shape and size are of, and the container cell culture system that has means for being held in the fitted in said container .

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，Ｍ Ｗ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，Ｅ Ｓ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page    (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF) , CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, GM, KE, LS, M W, SD, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY) , KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM , AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, E S, FI, GB, GE, GH, HU, IL, IS, JP , KE, KG, KP, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, S D, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR , TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．細胞に対する毒性がまったくないかあるいは毒性が低い材料から形成された 枠と、細胞に対する毒性がなく、細胞が付着するであろう少なくとも１つの面を 有する細胞培養基質とを備え、その枠が、その少なくとも１つの面への細胞の付 着に適した形態で培養基質に取り外し可能に取り付けられるように適合されてい る細胞培養基質装置。 ２．培養基質が、細胞の付着に適した面を有するポリマー材料からなる請求項１ に記載の装置。 ３．基質が、フィルムからなる請求項１または２に記載の装置。 ４．その材料が、ポリエステル、ポリプロピレン、酢酸ビニルコポリマー、ポリ 塩化ビニリデン、ポリスチレン、ポリブタジエン、ポリエチレンイオノマーから なる群から選ばれている請求項２または３に記載の装置。 ５．枠が、培養基質を実質的に平坦な形態で取り付けるように適合されている先 行請求項のいずれか１つに記載の装置。 ６．枠が、平面部分を備え、この平面部分が、平面部分に平行な面において細胞 培養基質を平坦な形態で取り外し可能に取り 付けるためにその基質の少なくとも一部に係合する請求項５に記載の装置。 ７．枠が、周辺枠を備えている開口した枠である請求項５に記載の装置。 ８．枠が、平面部分をめぐって延出する直立した壁をさらに備えている請求項６ または７に記載の装置。 ９．壁が、枠をコンテナの中で保持するための手段をさらに備えている請求項８ に記載の装置。 １０．保持するための手段が、コンテナの縁に係合するリップあるいは窪みを備 えている請求項８に記載の装置。 １１．培養基質が、接着剤による接合で、枠に取り外し可能に取り付けられてい る先行請求項のいずれか１つに記載の装置。 １２．細胞培養基質が、前記の少なくとも１つの面の反対側の面に取り外し可能 に取り付けられた支持層をさらに備えている先行請求項のいずれか１つに記載の 装置。 １３．反対側の面が、支持層の一部を覆っている請求項１２に記載の装置。 １４．反対側の面が、支持層の実質的に中央の部分を覆っており、それによって むき出しの外部周辺部分を規定している請求項１３に記載の装置。 １５．むき出しの外部周辺部分が、枠に固定状に取り付けられている請求項１４ に記載の装置。 １６．前記の少なくとも１つの面が、つまみ部分をさらに備えている請求項１に 記載の装置。 １７．一群の哺乳類細胞とともにある先行請求項のいずれか１つに記載の装置。 １８．先行請求項のいずれか１つに記載の装置の使用。 １９．細胞に対する毒性がまったくないか毒性が低い材料から形成された枠と、 細胞に対する毒性がなく、細胞が付着するであろう少なくとも１つの面を有する 細胞培養基質とを備えている装置と、コンテナとを具備してなり、その枠は、前 記の面への細胞の付着に適した形態で前記細胞培養基質に取り外し可能に取り付 けられるように適合されており、その枠は、細胞培養基質が前記コンテナの１つ の内面に実質的に平行に保持されるように、前記コンテナの中に嵌め込まれる形 状及び大きさのも のである細胞培養システム。[Claims] 1. Made from materials that have no or low toxicity to cells Frame and at least one surface to which the cells will attach without being toxic to the cells A cell culture substrate having the cell frame, wherein the frame is provided with cells on at least one surface thereof. Adapted to be removably attached to the culture substrate in a form suitable for attachment. Cell culture substrate device. 2. 2. A culture substrate comprising a polymer material having a surface suitable for cell attachment. An apparatus according to claim 1. 3. 3. The device according to claim 1, wherein the substrate comprises a film. 4. The material is polyester, polypropylene, vinyl acetate copolymer, poly From vinylidene chloride, polystyrene, polybutadiene, polyethylene ionomer The device according to claim 2 or 3, wherein the device is selected from the group consisting of: 5. Where the frame is adapted to mount the culture substrate in a substantially flat configuration. Apparatus according to any one of the preceding claims. 6. The frame has a flat part, and the flat part is a cell in a plane parallel to the flat part. Remove the culture substrate in a flat 6. The device of claim 5, wherein the device engages at least a portion of the substrate for attaching. 7. 6. The device according to claim 5, wherein the frame is an open frame with a peripheral frame. 8. 7. The frame of claim 6, further comprising an upright wall extending around the planar portion. Or the apparatus according to 7. 9. 9. The wall of claim 8, further comprising means for retaining the frame in the container. An apparatus according to claim 1. 10. The means for retaining comprises a lip or depression engaging the edge of the container. 9. The device according to claim 8, wherein 11. The culture substrate is detachably attached to the frame by adhesive bonding. Device according to any one of the preceding claims. 12. Cell culture substrate is removable on the side opposite said at least one side A support according to any one of the preceding claims, further comprising a support layer attached to the support. apparatus. 13. 13. The device of claim 12, wherein the opposing surface covers a portion of the support layer. 14． The opposite surface covers a substantially central portion of the support layer, thereby 14. The device of claim 13, wherein the device defines a bare outer peripheral portion. 15. 15. The exposed outer peripheral portion is fixedly attached to the frame. An apparatus according to claim 1. 16. The method of claim 1, wherein the at least one surface further comprises a knob portion. The described device. 17． The device according to any one of the preceding claims, wherein the device is with a group of mammalian cells. 18. Use of the device according to any one of the preceding claims. 19. A frame formed from a material that has no or low toxicity to cells, Non-toxic to cells and has at least one surface to which cells will attach An apparatus comprising a cell culture substrate and a container, the frame of which is Removably attached to the cell culture substrate in a form suitable for attaching cells to the surface The cell culture substrate is one of said containers. Fitted into said container so as to be held substantially parallel to the inner surface of the container Of shape and size The cell culture system.
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