JP2001506638A

JP2001506638A - 白内障の予防または制御方法

Info

Publication number: JP2001506638A
Application number: JP52712398A
Authority: JP
Inventors: チャンバーレイン、コーラル・グウェンダ; マカヴォイ、ジョンストン・ウィリアム; ヘイルズ、アンジェラ・マリア
Original assignee: University of Sydney
Current assignee: University of Sydney
Priority date: 1996-12-19
Filing date: 1997-12-19
Publication date: 2001-05-22
Also published as: EP1003522A4; EP1003522A1; DE69734677T2; AUPO427196A0; WO1998026784A1; US6258856B1; EP1003522B1; DE69734677D1; ATE309842T1

Abstract

(57)【要約】哺乳類の患者の眼のＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患を予防または制御する方法で、本方法は、当該患者に有効量のエストロゲンまたはエストロゲン様物質を投与することを含む。

Description

【発明の詳細な説明】白内障の予防または制御方法技術分野本発明は、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦβ）の白内障形成作用から水晶体細胞を保護することにより、哺乳類の眼の白内障形成に付随して生じる病理学的変化を予防または制御する方法に関する。特に本発明は、エストロゲンまたはエストロゲン様物質を哺乳類に投与することによって哺乳類の眼のＴＧＦβ誘発白内障形成を予防または制御する方法に関する。従来技術白内障は視界を妨害する水晶体の混濁である。それは最も普遍的な眼の疾患の１つであり、生涯のいずれの時期にも発生するがしばしば加齢に付随する。米国では、例えば７４歳から８９歳の人々の４５％が白内障を罹患している。罹患素因には加齢、糖尿病、ＵＶ／太陽光、眼の手術および栄養失調が含まれる。白内障はしばしば水晶体の混濁の場所によって分類される：すなわち、核性白内障、皮質部白内障、後嚢下白内障または前嚢下白内障（Tripathi & Tripathi，1983 ）である。現在最も普遍的に用いられる白内障治療は水晶体細胞の外科的除去およびそれに続く合成代用水晶体の残留水晶体嚢内への移植である。しかしながら、合成水晶体の移植は一時的に視力を回復させることができるだけである。なぜならば、水晶体嚢に付随する残留細胞はしばしば増殖して新しい混濁を生じるからである。後者の症状は二次性白内障として知られている白内障の形態で後嚢混濁としてもまた知られている(Green & McDonnell，1985;Kappelhof & Vrensen， 1992)。本発明者らは、ＴＧＦβは白内障形成性であることを以前に示した。本発明者らはまた、水晶体細胞に対するＴＧＦβ誘発変化は、例えば１つまたは２つ以上の有効量のＴＧＦβ抑制物質を投与することによりＴＧＦβの作用を減少または抑制することによって抑制または予防することができることを示した。このことはＰＣＴ／ＡＵ94／00694に開示されている(この完全な明細書は援用して本文の一部とする)。本発明者らの以前の研究によって、ＴＧＦβは、白内障（前および後嚢下白内障および二次性白内障を含む）に付随することが知られているある種の変化を誘発することが示された。これらの変化はＴＧＦβとともに培養されたラットの水晶体の外植片で示されたが、これら変化には細胞外マトリックスの蓄積、紡錘形細胞の形成、嚢の皺形成、およびアポプトシスの特徴をもつ細胞死が含まれる(L iuら、1994；Halesら、1994)。前嚢下白内障形成でのＴＧＦβの関わり合いの更なる証拠はラットの完全な水晶体に関する研究から得られた。これらの研究は、ＴＧＦβは、白内障の分子マーカーであるα−平滑筋アクチンおよびコラーゲンＩ型を含む嚢下プラークと同時に発生する前嚢下混濁を誘発することを示している(Halesら、1995)。これらのタンパク質は通常は水晶体内に見いだされないが、ヒトの白内障のある種の形態で認められる。上記で考察した他の変化はヒトの白内障のある種の形態に付随することが知られている。後嚢下白内障および皮質部白内障形成におけるＴＧＦβの関与のまた別の証拠は、実施例１および３に記載する研究から得られる。白内障形成に対する感受性における性による相違および女性ホルモンに関連する相違は疫学的研究で報告された。白内障の有病率と重篤度は男女ともに加齢にしたがって増加するが、一方、男性よりも女性で、性ホルモンの血清レベルが低下する後半生で顕著な増加が生じる(Kleinら、1992)。さらに、初潮の初期または閉経の遅れは、ある種の白内障形成を防御するようである(Klein，1993)。そのような研究では、観察された性（または性ホルモン）が関係する防御作用がエストロゲンによるものか否かは分からない。さらに、研究者らは、ホルモン代替療法（エストロゲン含有医薬品（プロジェステロンを含むかまたは含まない）の投与を伴う）を受けている閉経後の女性とホルモン療法を受けていない女性の核性白内障、皮質部白内障および後嚢白内障の有病率および重篤度について報告している(Klein，1993)。これら女性の２つの群間で統計的に有意な相違が核性白内障についてのみ認められ、観察されたホルモン代替療法の影響がエストロゲンによるものか否かは明らかではない。今日までのところ、エストロゲンそれ自体がＴＧＦβによって誘発される白内障形成に対して防御作用を有するか否か、またはＴＧＦβ連関過程が白内障に対する個体の防御に必要であるか否かはそのような研究では明らかではない。しかしながら、いくつかの動物実験は、エストロゲンが水晶体に白内障または白内障様変化を引き起こすことを示している。プロジェステロンおよびエストロゲンは、インビトロで培養水晶体の透明度の低下を伴うイオン透過性の増加をもたらすことが報告された(Lambert，1968)。さらにまた、エストロゲンの筋肉内注射は水晶体上皮の変化をもたらし、水晶体混濁の進行素因となる萎縮を生じることが報告された(Bisaria，1980)。シュタルカら（Starkaら、1976）は雌雄のウサギの眼の培養液中にエストロゲンを検出したことを報告したが、存在する活性ホルモンレベルは明らかではない。学術文献によれば、ＴＧＦβの生物学的活性に対するエストロゲンの作用は様々である。エストロゲンは、ＴＧＦβの生物学的活性を促進すると知られている。例えば、１７−β−エストラジオールは、ラットの顆粒層細胞培養に添加されたとき活性なＴＧＦβの遊離を刺激することが報告されている(Dorringtonら、1 993)。さらに、ハーマンら（Hermanら、1994）は、培養ヒト乳癌細胞の培養液からエストロゲンを除去することによってＴＧＦβの増殖抑制作用に対するそれら細胞の感受性が低下することを示し、ＴＧＦβ活性に対するエストロゲン強化作用を報告している。エストロゲンはまた、ＴＧＦβ活性に対して抑制作用をもつことまたは作用をもたないこともまた知られている。例えば、ラットの下垂体前葉のエストロゲン誘発腫瘍発生はＴＧＦβ１に対する感受性の低下に付随し(Pas torcicら、1995)、エストラジオールは肝細胞培養でＴＧＦβの増殖抑制作用を特異的にブロックしない(ただしこれらの細胞はその他の点ではエストラジオールに反応性を有する(Ni & Yager，1994))。同様に、ＴＧＦβのｍＲＮＡおよび蛋白質の発現に関する研究では一定の傾向は明らかではない。すなわち、関与する細胞タイプおよびＴＧＦβアイソフォームの両方に依存して、エストロゲンはＴＧＦβの発現に対してアップレギュレートされたり、ダウンレギュレートされたり、または全く影響をもたない。今では閉経後の女性の多くが、（適切な場合には）プロジェステロンと併用してエストロゲン代替療法を受けているが、これは普遍的に受け入れられているわけでもまた利用可能でもない。１９９４年には、米国の閉経後の女性の５から１０％のみがこの治療を受けている(Griffing & Allen，1994)。ＴＧＦβファミリーは関連する１群の蛋白質から成る。ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ ２およびＴＧＦβ３は哺乳類で見いだされるアイソフォームである。その生物学的な活性形である成熟ＴＧＦβは２５ｋＤａの二量体で、休止前駆体分子から切断される(Kingsleyら、1994)。発明の開示ある態様において、本発明は、有効量のエストロゲンを哺乳類対象者に投与することを含む、当該哺乳類対象者の眼のＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患の予防または制御方法を提供する。本発明の別の態様では、当該対象者の眼に直接または眼の近くに有効量のエストロゲンを投与することを含む、ＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患を予防または制御する方法が提供される。好ましくは当該哺乳類はヒトであるが、本発明はまた、他の動物（例えばウマ、ネコ、イヌなど）のＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患の治療にも適切である。本発明は天然のエストロゲンレベルに関係なくヒトの白内障の予防または治療に適しているが、本発明は、特に、エストロゲンレベルが低い女性（すなわち閉経期もしくは閉経後の女性または他の理由（例えば性機能低下、卵巣摘出もしくは原発性卵巣機能不全）のために低エストロゲン症を罹患している女性）を治療するために適している。本発明のまた別の態様では、眼科学的に許容できる担体中にエストロゲンを含む眼科用製剤が提供される。さらに別の態様では、本発明はエストロゲンを染み込ませた眼用膜性パッチを提供する。さらにまた別の態様では、本発明は、水晶体移植手術の後の哺乳類対象者の眼の二次性白内障を予防または制御する方法を提供する。当該方法は、対象者の眼にエストロゲンを被覆または染み込ませた水晶体または水晶体移植片を埋め込むことを含む。さらにまた別の態様では、本発明はエストロゲンを被覆または染み込ませた水晶体または水晶体移植片を提供する。本発明のさらにまたは別の態様では、ＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患を予防または制御する眼科用製剤の製造に際してエストロゲンの使用が提供される。エストロゲンは、一生にわたって男女ともに出現する哺乳類の性ホルモンである。それらの主要な役割が女性の生殖生物学に存在する一方で、それらはまた生殖系の一部分ではない種々の組織に影響を与える。ヒトでは、天然に存在するエストロゲンは、エストラジオール(１７−β−エストラジオール)、エストロンおよびエストロンスルフェートで、少量の共役または水酸化誘導体を含む。エストラジオールは、これらのうちで生物学的活性が最も高い(Lobo，1987)。それらの治療作用または生物学的作用を基に、多くの物質（天然および合成ともに）がエストロゲンとして分類されている(メルク・インデックス(12版、Merc k Research Laboratories，NJ，1969，ppTHER-22)の"治療用分類と生物学的活性（Therapeutic Category and Biological Activity Index）"中の"エストロゲン ”の項のリストを参照されたい)。本リストにしたがえば、エストロゲンはステロイド（例えばエストラジオール、エチニルエスタラジオール、コルポルモン、共役エストロゲン様ホルモン、エキレニン、エストリオール、エストロン、メストラノール、モキセストロール、ミタトリエンジオール、キネストラジオールおよびキネストロール）または非ステロイド（例えばジエチルスチルベストロール、ジエンストロール、ベンズエストロール、ブロパロエストロール、クロロトリアニセン、ジメストロール、フォスフェストロール、ヘキセストロール、メタレンストリル、メテストロール）であろう。リストに挙げられた物質は必ずしもそれらの生物学的作用を直接発揮するわけではない。すなわち、あるものは投与された後で活性形に代謝的に変換される必要がある。例えば、経口投与されたエストロンスルフェートは種々の経路で代謝され、より活性が高いエストラジオールの血清レベルを高め、一方、メストラノールは投与後に極めて強力なエチニルエストラジオールに変換される。他の非ステロイド性エストロゲンにはインデネストロールが含まれる。さらに別の多くの物質がエストロゲン様であることが分かっている。すなわち、それらは、細胞のエストロゲンレセプターと相互作用し、エストロゲンの作用を模倣する。多くの部類のそのようなエストロゲン様物質がそのエストロゲン様作用において組織選択性を有することが示された。多様な部類の分子がこのカテゴリーに分類される。例えば、ステロイドレセプター調節物質として作用するキノリンおよび融合キノリン、例えば３，９−ジヒドロキシ−５Ｈ−ベンゾフロ［３，２−ｃ］キノリン−６−オンおよびＷＯ96/19458号に開示されたようなもの；植物（例えば飼料植物、ダイズ、種子、ベリーおよびナッツ）に天然に存在するフィトエストロゲン(Jordanら、1985)、(イソフラボン（例えば、ジェニステインおよびジェニステインングリコシド、イークオール、Ｏ−デスメチル−アンゴレンシン、ビオカニン−Ａ、ダイゼイン並びにフオルモノネチンを含む)；フラボン（例えばフロレチン、４'−６−ジヒドロキシフラボン並びにトリシン）並びにクーメスタン(例えばクーメストロール、４'−オメチルクーメストロール、メジカゴールおよびサチボール)、リガンド(例えばマタイレシノール、エンテロジオール、エンテロラクトン、グアイアレチン酸、ノルジヒドログアイアレチン酸およびそれらの誘導体、β−シトステロール)；ミコエストロゲン(例えばゼラノール、ゼアラレノールおよびゼアラレノン)；エストロゲンレセプター作動薬／拮抗薬(例えばタモキシフェン、ヒドロキシタモキシフェン、ジンドキシフェンおよびその代謝物、ナフオキシデンおよび誘導体、クロミフェン、セントクロマン、ベンゾチオフェンおよび関連化合物(例えばベンゾチオフェン誘導ＬＹ1 39478(イーライリリー(Eli Lilly)社))、ラロキシフェンおよびドロロキシフェン(これらはある種のタイプの細胞でその作用がエストロゲンを模倣し、他の細胞ではエストロゲンの作用と対抗するかもしれない(Raisz,1996))；および多くのフェノール類（これらはオルト位でのアルキル置換によって損なわれない戦略的に配置されたフェノール性ヒドロキシルを含む(Jordanら(1985)を参照されたい)）でこれらにはオクチルフェニル、ノニルフェノール、ブチル化ヒドロキシアニゾール、ビスフェノールＡおよびトリヒドロキシ−８−プレニルフラボンが含まれる。この一般的カテゴリー中のエストロゲン様物質はまた"エストロゲン”として文献中に引用されていることに留意されたい(例えばJordanら( 1985)参照）。（メルクで定義された”エストロゲン”について）上記ですでに述べたように、エストロゲン様物質はそのエストロゲン様作用を直接発揮するか、または投与された後で活性形に代謝的に変換される必要がある。例えば、いくつかのフィトエストログンの代謝的活性化はフェノールへの脱メチル化を必要とする(Jordanら、1985)。さらにまた、ある物質は以下のようにしてエストロゲン様作用を発揮することができる。それは内在性エストロゲン（すなわち既に被投与者に存在するエストロゲン）の作用を強化（例えばエストロゲンレセプターの数を増すことによって）するかもしれないし、またはより強力な形態への変換を促進することにより、もしくはそれらの分解を抑制することにより内在性エストロゲンの生物学的作用を強化するかもしれない。請求の範囲を含む本明細書全体で用いられているように、エストロゲンなる用語は、上記で考察したようにエストロゲンおよびエストロゲン様物質の全ての形態を含む。エストロゲンまたはエストロゲン誘導体の治療作用もしくは生物学的作用を有する上記で考察した物質の全ての誘導体、前駆体、代謝物などもまた本発明に包含される。特に天然に存在するエストロゲン、合成エストロゲン、ステロイド性および非ステロイド性エストロゲン並びにエストロゲン様物質は全て、本発明での使用において適切な代表的なものである。２つまたは３つ以上のエストロゲンの組み合わせもまた本発明での使用において適切である。したがって、請求の範囲も含めて本明細書で用いられるように、エストロゲンなる用語はまた２つまたは３つ以上のエストロゲンの組み合わせを含む。図面の簡単な説明図１は雌雄のウィスターラットの水晶体の微細写真である。水晶体は０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２とともに培養し７日後に写真をとった。図１Ａは雄のラットの典型的な水晶体を示しているが、これは明瞭な前方混濁（矢印）を示している。図１Ｂは典型的な雌ラットの水晶体を示す。光源のいくらかの反射が各水晶体の右側上方１／４で明瞭である。縮尺表示棒は４００μｍである。図２は卵巣摘出ラットの水晶体の微細写真を示す。水晶体は０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２とともに培養し７日後に写真をとった。図２Ａは賦形剤のみを投与されたラットの水晶体を示す。図２Ｂはエストロゲン代替物を投与されたラットの水晶体を示す。図２Ｃはプロジェステロン代替物を投与されたラットの水晶体を示す。縮尺表示は４００μｍである。図３は、賦形剤のみ（図３Ａ、３Ｃおよび３Ｅ）またはエストロゲン代替物（図３Ｂ、３Ｄおよび３Ｆ）を投与された卵巣摘出ラットの水晶体の微細写真を示す。水晶体は０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２とともに培養し、７日間の培養の後で固定した。連続切片は、ヘマトキシリンおよびエオジン（図３Ａおよび３Ｂ）で染色するか、またはα−平滑筋アクチン（図３Ｃおよび３Ｄ）もしくはコラーゲンＩ型（図３Ｅおよび３Ｆ）の位置決定のために使用した。図３Ａの矢印は、多くの凝縮した核を含む大きな前嚢下プラーク内の紡錘形細胞を示している。星印は、プラーク周辺の膨れ上がった繊維細胞（空胞もまた存在する）を示している。図３Ｃおよび図３Ｅの矢じりは、それぞれα−平滑筋アクチンおよびコラーゲンＩ型を含む嚢に付着した細胞を示している。ｅｐは上皮細胞、ｃａは水晶体嚢、ｆｃは繊維細胞である。縮尺表示棒は４０μｍである。図４は、賦形剤のみ（図４Ａおよび４Ｃ）またはエストロゲン代替物（図４Ｂおよび４Ｅ）を投与された卵巣摘出ラットの水晶体を示す。水晶体は０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２とともに培養し、７日間の培養の後で固定した。連続切片は、日常的な組織学的検査のためにヘマトキシリンおよびエオジン（図４Ａおよび４Ｂ）で染色するか、またはコラーゲンＩ型（図４Ｃおよび４Ｄ）の免疫蛍光による位置決定のために使用した。水晶体の赤道は各微細写真の上部に位置している。図４Ａおよび４Ｃでは、矢じりは、水晶体嚢に沿って後極に向かって移動する有核細胞を示している。縮尺表示棒は４０μｍである。図５は、賦形剤のみ（図５Ａおよび５Ｃ）またはＴＧＦβ２（図５Ｂおよび５Ｄ）の硝子体内注射を受けたラットの水晶体の微細写真を示す。連続切片は、日常的な組織学的検査のためにヘマトキシリンおよびエオジン（図５Ａおよび５Ｂ）で染色するか、または未染色（左）および位相差顕微鏡（図５Ｃおよび５Ｄ）によって観察された。図５Ｂおよび５Ｄの矢じりは有核細胞を指し示しているが、これらの殆どは様々な程度の膨張を示している。ｃａは後水晶体嚢である。縮尺表示棒は４０μｍ(ズ５Ａおよび５Ｂ)、２５μｍ（図５Ｃおよび５Ｄ）である。図６は、未成熟雌ラットの水晶体のＴＧＦβ誘発白内障性変化を等級付けするために用いたカテゴリーに対応する水晶体の例を示す。等級１では水晶体は肉眼検査でわずかの濁りを示すが微細写真では明らかではない(Ａ)。等級２では水晶体は広範囲の粒状化を示す（Ｂ）か、または中心のただ１つの混濁（Ｃ）を示す。等級３では水晶体は２つまたは３つの混濁を含む(Ｄ)。等級４では水晶体は３つより多い別々に離れた混濁を含む。光源のいくらかの反射が特に各水晶体の下方部分で明瞭である。縮尺表示棒は４２０μｍである。図７は、未成熟雌ラットにタモキシフェンまたはナフォキシデンを投与した場合のインビボでのＴＧＦβ誘発白内障に対する影響を示す。ラットに水晶体除去３日前に被験物質または賦形剤のみ（コントロール）を注射し、続いて水晶体を０．４−０．７５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβとともに５日間培養して白内障性変化について等級付けした。等級０では水晶体は透明のままである。等級１−４では実施例５で規定するように白内障性変化の強さは増加する。データは２実験の総合結果を示している。星印は、処置に反応した等級０の水晶体の比率の増加の有意度を示している。＊ｐは＜０．０２；＊＊ｐは＜０．００３(フィッシャーの精密検査)。ｃｏｎはコントロール、ＴＡＭＯＸはタモキシフェンでＮＡＦＯＸはナフォキシデンである。図８は、（Ａ）クーメストロールまたはジェニステイン、および（Ｂ）α−ゼアラレノールまたはオクチルフェノールを未成熟雌ラットにインビトロで投与した場合のＴＧＦβ誘発白内障に対する影響を示す。水晶体は、培養液（被験物質を含む）を交換し、さらに０．４−０．７５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβを添加する前に予め被験物質とともにまたは被験物質の非存在下（コントロール）で１−２日間培養した。さらに５日間培養した後で、水晶体を白内障性変化について等級付けした。等級０では水晶体は透明のままである。等級１−４では実施例５で規定するように白内障性変化の強さは増加する。２実験のデータを各事例について総合した。星印は、処置に反応した等級０−１の水晶体の比率の増加の有意度を示している。＊ｐは＜０．０３；＊＊ｐは＜０．００１(フィッシャーの精密検査) 。ＣＯＮはコントロール、ＣＯＵＭはクーメストロール、ＧＥＮはジェニステイン、α−ＺＥＡＲはα−ゼアラレノール、ＯＣＴ−ＰＨＥはオクチルフェノールである。発明を実施するための最良の態様及び他の態様本発明にしたがって用いることができる市販のエストロゲンまたはエストロゲン様物質には、エストラジオール、エチニルエストラジオール、エキリン、エストリオール、エストロン、６−ヒドロキシキノリン、クーメストロール、フォルモノネチン、イークオール、ダイゼイン、ゼアラレノール、ナフォキシデン、オクチルフェノール、メストラノール、キネストロール、ジエチルスチルベストロール、ジェニステイン、ビオカニンＡ、フロレチンおよびタモキシフェンが含まれる。他のエストロゲンおよびエストロゲン様物質は文献の方法にしたがって容易に調製できる。エストロゲンは、本発明にしたがって１つまたは２つ以上の眼房（例えば前眼房）もしくは眼の近傍に導入することによって、または循環系を介してエストロゲンが容易に眼に輸送される部位に注射によって、または対象者への経口投与もしくは注射によって、またはクリームもしくは経鼻スプレーのような局所適用によって投与してもよい。エストロゲンはまた、皮膚用絆創膏の形態でまたは徐放性遊離のためにエストロゲン蓄積物を埋め込むことによって投与できる。エストロゲンはまた、眼の表面に直接適用される膜性眼用パッチによって投与してもよい。ロボ(Lobo，1987) が考察したようなエストロゲンの投与ルートが本発明に適している。本発明の治療で使用するために必要なエストロゲンの有効量は、使用されるエストロゲン、投与ルート、治療される症状のステージおよび治療を受ける対象者に応じて変動し、最終的には医師によって決定される。約１０^-9から１０^-11のモル濃度の１７−β−エストラジオールと生物等価量のエストロゲンに水晶体細胞を暴露させる投薬量が適切である。典型的にはエストロゲンは医薬製剤または眼科用製剤として存在する。エストロゲンによる治療は、外科的介入の結果として生じる白内障関連変化、例えば他の白内障の症状の治療のための外科手術に続く二次性白内障の発生を抑制するために、眼の手術に付随するものとして用いることができる。本発明は、また別に白内障発生リスクが通常より高い個体の治療、または水晶体近くで高いＴＧＦβレベルに暴露されている個体の治療について適切である。本発明の医薬製剤および眼科用製剤は通常の医薬の製剤化技術にしたがって調製される。担体は、投与しようとする調製物の形態に応じていずれの形状でも可能で、当該製剤は場合によって他の治療成分を含んでいてもよい。典型的にはエストロゲンは、眼の手術時に用いられる通常の洗浄溶液または粘弾性溶液に混合することができる(Black，1996)。エストロゲンで被覆するかまたはエストロゲンを染み込ませた水晶体移植片はまた他の治療剤を含んでいてもよく、通常の技術にしたがって調製できる。実施例１ＴＧＦβ誘発白内障に対するエストロゲンのインビトロでの影響方法１７−β−エストラジオール（１，３，５［１０］−エストラトリエン−３，１７β−ジオール）およびプロジェステロン（４−プレグネン−３，２０−ジオゥン）をシグマ社（Sigma、セントルイス、MO）から、さらにヒト組み換えＴＧＦβ２をジェンザイム社（Genzyme、ケンブリッジ、マサチューセッツ）から入手した。いくつかの実験では、水晶体は６から１０カ月齢ウィスターラットの成獣の雄および雌から得られた(眼の摘出前にＣＯ₂による窒息で殺処分した)。また別には、卵巣摘出は、文献（Murphy & Rogers，1981）に記載されたように麻酔下で３カ月齢の雌のウィスターラットで実施した。残留エストロゲンおよびプロジエステロンの除去を確認するために４から５週間待った後で、卵巣摘出ラットに毎日３回０．５μｇの１７−β−エストラジオールまたは５ｍｇのプロジェステロン（ベンジルアルコール／ピーナッツオイル（１：３）に溶解）を注射した。コントロールラットには賦形剤のみを投与した。１日して眼の摘出前に致死量のネンブタール（ベーリンガー(Boehringer、NSW、オーストラリア)）でラットを殺処分した。水晶体の培養文献（Halesら、1995）に記載されたように、眼の周辺組織から注意深く水晶体を培養液中に切り出し、最終濃度０．０２５−４ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２（直ちに添加）とともに培養した。組み換えヒトＴＧＦβ２はジェンザイム社（Genz yme、ケンブリッジ、マサチューセッツ、米国）から入手した。培養液としては文献（Halesら、1995）に既に記載されたように抗生物質および０．１％ウシ血清アルブミンを含む血清非含有培養液１９９を用いた。コントロールにはＴＧＦ βを投与しなかった。培養期間中は新たにＴＧＦβを添加することなく２日毎に培養液を新しいものと交換した。水晶体を７日間培養し、前方表面の写真を毎日撮影して混濁の進行を記録した。培養期間の終わりに、水晶体をカルノア(Carno y's)固定液(酢酸／エタノール、１：３(v/v))で固定してパラフィンで包埋した。混濁インデックスＴＧＦβ誘発水晶体混濁化は、水晶体の前方表面の散在性の曇りとして始まる。反応が進行するにつれ、これらの領域は凝縮して明瞭な混濁を形成し、曇りの領域が減少する。低濃度のＴＧＦβでは、わずかの明瞭な混濁が７日培養で観察され、水晶体表面の大部分は曇ったままである。対照的に、高濃度では初期に曇っていた領域の殆どは凝縮して多数の明瞭な混濁を形成する(図１Ａ)。これらの観察を基に、混濁度を測定する方法を開発した。７日培養の水晶体の微細写真を用いて水晶体の混濁度を決定した。各微細写真をアドーブフォトショップ(Adobe Photoshop)ソフトおよびＸＲＳオムニメディア（Omni Media）ソフトを用いて３ＣＸ−Ｘ線スキャナー（XRS Corporation，カリフォルニア、米国）で走査した。続いてＮＩＨイメージｖ１．５２を用いて一連の測定を実施した。いくつかの微細写真では、光源の輝いた反射がある領域の混濁度の測定を不可能にした(例えば図１Ｂ参照)。アクセス可能領域が総面積の７５％以上の写真だけを用いた。アクセス可能領域（Ａ）およびこの領域内の曇りの総面積（Ｂ）および明瞭な混濁総数（Ｃ）を測定した。続いて”混濁インデックス”を以下のように算出した：組織学および免疫組織化学文献（Halesら、1995）に記載されたように、パラフィン包埋水晶体の連続切片を常用的な組織学検査のためまたはα−平滑筋アクチンもしくはコラーゲンＩ型の免疫組織化学的位置決定のために処理した。各処置群の代表的な水晶体を常用的な組織学的検査（全てのＴＧＦβの濃度について）および免疫学的位置決定（０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβについて）によって調べた。結果ＴＧＦβに対する水晶体の反応性における雌雄の相違雄ラットの水晶体は、０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２とともに培養したとき明瞭な前方混濁を生じた(図１Ａ)。対照的に、雌ラットの水晶体はこのような条件下では透明を維持し(図１Ｂ)、雌雄のラットのコントロール水晶体をＴＧＦβ 非存在下で培養した場合と同じであった(そのデータは示されていない)。しかしながら、高濃度のＴＧＦβ２（１ｎｇ／ｍｌ）では、雌ラットの水晶体もまた混濁を生じた(表１)。両方の性別について、反応はＴＧＦβの濃度とともに顕著に増加した。０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２とともに培養した水晶体の組織学的検査は明瞭な嚢下プラークを示し、これは、雄の水晶体では紡錘形細胞および細胞外マトリックス含んでいた。対照的に、雌のラットおよびコントロールは正常な水晶体構造を維持し、繊維集合物を覆う単層の上皮細胞を有していた。α−平滑筋アクチンおよびコラーゲンＩ型の免疫的位置決定では、雄のラットについてこれら白内障マーカーの両方について強い反応性が、０．１５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ２とともに培養することによって誘発されたプラーク内に認められ、一方、雌の対応する水晶体は、α−平滑筋アクチンについては全く反応性を示さず、コラーゲンＩ型については上皮のわずかの細胞内に非常に弱い反応性が示されただけであった。これらのマーカーは、ＴＧＦβの非存在下で７日間培養した雌雄のコントロール水晶体の切片では検出できなかった。ＴＧＦβへの水晶体の反応性に対する卵巣摘出後のホルモン代替物の作用卵巣摘出ラットの水晶体（ホルモン代替物なし）は、雌ラットの水晶体では殆ど影響を与えないことが示された濃度である０．１５ｎｇ／ｍｌ（表１、図１Ｂ）のＴＧＦβとともに培養したとき混濁を生じた(表２；図２Ａ)。しかしながら、エストロゲンを投与された卵巣摘出ラットの水晶体は、このような条件下で混濁を生じず(表２；図２Ｂ)、一方、プロジェステロンで処置したラットの水晶体の反応性は賦形剤処置ラットの水晶体の反応性と同様であった(表２；図２Ｃ)。賦形剤のみを投与された卵巣摘出ラットで認められた混濁は、嚢下プラークまたは異常細胞塊と一致した(図３Ａ)。白内障マーカーであるα−平滑筋アクチンおよびコラーゲンＩ型に対する反応性はもっぱら嚢下プラーク内に認められた( 図３Ｃおよび３Ｅ)。対照的に、エストロゲン処置ラットの水晶体は正常な細胞形態を維持し(図３Ｂ)、α−平滑筋アクチンおよびコラーゲンＩ型に対する反応性は検出されなかった。これら全ての点に関して、プロジェステロン代替物を投与されたラットの水晶体は、賦形剤のみを投与されたラットの水晶体と区別できなかった。さらに微妙な種々の組織学的変化が、エストロゲンを与えられなかった卵巣摘出ラットの水晶体で観察された。変性を示す皮質部繊維細胞の膨張（皮質部白内障を思い起こさせるもの）が通常認められ(例えば図３Ａ参照)、これは赤道に対して水晶体前方領域に一般に認められる。さらに、有核細胞が後嚢に沿って後極に向かって移動しているのが観察された(例えば図４Ａ参照)。これらの細胞はコラーゲンＩ型に対して反応性を示すが(図４Ｃ)、α−平滑筋アクチンに対しては反応性を示さなかった。このような変化のいずれもエストロゲン処置卵巣摘出ラットの水晶体では観察されず、このような水晶体は透明を維持していた(図４ＢおよびＤ)。正常な雌雄のラットの水晶体では、０．１５ｎｇ／ｍｌより高い濃度のＴＧＦβの濃度が、図３Ａおよび４Ａで示された変化のように顕著な変化を誘発するために必要であった。したがって、いずれの性別でも正常なラットの水晶体は、エストロゲンを与えられなかった卵巣摘出ラットの水晶体よりもＴＧＦβの作用に対して抵抗性が強いように思われる。全てのＴＧＦβの哺乳類アイソフォームは水晶体体外移植片および培養水晶体で白内障性変化を誘発し、ＴＧＦβ２およびＴＧＦβ３はＴＧＦβ１よりも強カであることが以前に示された(de Ionghら、1997)。本実験は、卵巣エストロゲン、１７−β−エストラジオールはＴＧＦβ誘発白内障から水晶体を保護し、ＴＧＦβによって誘発される白内障性変化に対する感受性は性に依存することを示している。卵巣を摘出した雌の水晶体をＴＧＦβとともに培養することによって顕著な混濁化がもたらされた。インビボでのエストロゲン代替はこの反応を防止したが、プロジェステロン代替は防止しなかった(表２；図２)。さらに、雄ラットの水晶体は、正常な雌の水晶体よりもＴＧＦβの白内障誘発作用に感受性が高く (表１；図１)、いずれの性別の正常ラット由来の水晶体も卵巣摘出ラットの水晶体よりＴＧＦβの作用に高い抵抗性を有するらしいことが判明した(表１および表２参照)。循環エストロゲンは正常な雌よりもそのレベルははるかに低いが雄ラットにも存在するので、後者の結果はまたエストロゲンの防御的役割と矛盾しない。ＴＧＦβによって誘発される混濁は、紡錘形細胞（これは水晶体嚢のしわ形成にしばしば付随する）を含む異常細胞を有する嚢下プラークと一致した。異常な細胞外マトリックスの沈積もまた主としてこのプラーク内に生じた。これら全ての変化は、前および後嚢下白内障並びに二次性白内障に典型的である。さらに、ＴＧＦβは、体外移植片および培養水晶体の両方でα−平滑筋アクチンおよびコラーゲンＩ型の蓄積を誘発する(Halesら、1994;Halesら、1995)。一般に水晶体内に見いだされないこれらのタンパク質はヒトの前嚢下白内障および二次性白内障に存在する。本実験は、成獣ラット（特に若いラット）の水晶体では、ＴＧＦβは白内障の形態学的および分子的特徴を有する混濁を誘発することを示している。各事例で、混濁に付随するプラークは、初期段階のヒトの前嚢下白内障と形態学的に区別できない(Worgulら、1982)。ＴＧＦβとともに培養されたラット水晶体で形成される混濁は前嚢下白内障である。ＴＧＦβ誘発白内障と二次性白内障との間の顕著な類似性は既に記載されている(Liuら、1994;Halesら、1995)。後嚢下白内障および皮質部白内障に典型的な微妙な変化の証拠が本実験によって提供される。本実験は、異常細胞が後極に向かって水晶体嚢に沿って移動するのを、ＴＧＦβが誘発するという証拠を提供する(図４Ａ)。同様な有核細胞の後嚢に沿った異常な移動は、ヒトの後嚢下白内障形成の基礎であると考えられる(Eshagian，1982)。本実験でＴＧＦβ誘発白内障様変化のいくつかの証拠もまた皮質部繊維で観察された(図３Ａ)。天然のエストロゲンの状態および誘発されたエストロゲンの状態を変化させるこのラットの実験は、エストロゲンがＴＧＦβ誘発白内障を防御する証拠を提供する。実施例２卵巣摘出ラットモデル：ＴＧＦβ誘発白内障に対する１７−β−エストラジオールの水晶体への直接投与の影響方法卵巣摘出ラットの水晶体を１０^-10Ｍの１７−β−エストラジオールの存在下または非存在下で２日間前培養した。０．１％のウシ血清アルブミンおよび抗生物質含有最少必須培地（Sigma）(フェノールレッドを含まない)を用いた。続いてこの培養液を交換してＴＧＦβ（０．１５ｎｇ／ｍｌ）を直ちに添加した。さらに７日間培養した後、混濁インデックスを上記実施例１で述べた態様と同じ態様で求めた。結果エストロゲン処理水晶体はＴＧＦβに対する反応でほとんど混濁を示さなかった。一方、これらの水晶体のいくつかの中心部で小さな曇り領域がＴＧＦβ添加後６日以内に観察されたが、時間を経過しても明瞭な混濁として凝縮する傾向は認められなかった。エストロゲン無添加で平行して培養した対応する水晶体では、多数の明瞭な混濁が表３で示したように成長した。水晶体にエストロゲンをインビトロ投与することを含むこの実験は、エストロゲンは水晶体細胞に直接影響を及ぼすことによってＴＧＦβ誘発白内障を防ぐという証拠を提供する。したがって、エストロゲンはインビボで投与されたとき( 実施例１のように)、水晶体細胞を直接標的とすることによって白内障に対する防御を付与するであろうと思われる(ただしまた別の間接的な利点の可能性は排除できない)。実施例３インビボでＴＧＦβを投与することによる白内障の誘発方法３匹の９カ月齢雄ウィスターラット（雑系交配コロニー）を本実験に用いた。各ラットを７０％ＮＯ₂／３０％Ｏ₂中の５％ハロタンを用いて麻酔した。その後の全手術過程でハロタンの濃度を１．５％に減少させた。続いてラットをその左の眼が最も高くなるように切開用顕微鏡下に配置した。細い針（Beckton Dickin son，米国；外径３６０μｍ）を用いて小さな穿刺孔を辺縁領域に開けた。直ちに１０μｌの注射筒（Hamilton）に取り付けた非常に細い針（Hamilton，米国；外径２００μｍ）をこの穿刺孔から改造マイクロマニピュレーター（Narashige ，日本）を用いて硝子体に挿入した。続いて３μｌのＴＧＦβ２（Genzyme社から供給された２０ｎｇ／ｍｌ溶液を用いる）をゆっくりと硝子体に注射した。針を３０から６０秒その位置に置き、続いてゆっくりと引き出して眼から液が失われるのを最少にした。各注射工程は切開用顕微鏡下で実施し、針の正確な配置を確認し、眼から失われる液を完全にモニターした。注射の後、各動物を暖かい回復用箱に入れた。いったん全てのラットにＴＧＦβを注射したら、２回目のために各ラットを麻酔し、同じプロトコルを用いて右目に３μｌの賦形剤のみ（３０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸）を注射してコントロールとして用いた。注射後６、１２、または１５日後にＣＯ₂で窒息させてラットを殺処分して眼を取り出し、培養液１９９を含む培養皿に入れた。水晶体を周辺眼組織から注意深く切り出し、混濁の有無を調べ、写真撮影し、固定し常用的な組織学的検査および免疫的位置決定（実施例１に記載）のために処理した。結果ＴＧＦβを注射した眼から得た水晶体は全て混濁および細胞構造変化の証拠を示し、一方、コントロール水晶体は透明なままで正常な形態を維持していた。本実験の水晶体のいずれについても(すなわちコントロールまたはＴＧＦβ処置水晶体)、注射時に針が水晶体嚢に貫入した証拠はなかった。インビボでＴＧＦβに暴露された後、水晶体は、ＴＧＦβとともに培養した水晶体で認められたものと同様に（実施例１参照）異常な細胞の嚢下プラークを伴う混濁を成長させる傾向を示した。しかしながら、これらは、水晶体の前極および後極に向かってわずかに広がる水晶体の赤道の周辺領域に限定されているように見えた。より分散した曇りが水晶体の大半にわたって観察された。コントロールでは正常な水晶体の形態が認められた。例えば、後方領域では繊維細胞は水晶体嚢に対して平行に規則正しく並び、核は存在しなかった(図５Ａおよび５Ｃ)。インビボでＴＧＦβに暴露された水晶体では、繊維細胞は特異な状態で、すなわち、それらの核は崩壊せず、有核細胞が後水晶体嚢近辺および水晶体皮質部内にも普通に認められた(図５Ｂおよび５Ｄ)。これらの有核繊維細胞はしばしば膨張し、いくらかの領域では変性して均質で広い領域を形成するように見えた(図５Ｄ)。図５Ｂおよび５Ｄで報告したような変化は、ヒトの後嚢下白内障および皮質部白内障で認められる異常に典型的である。実施例４卵巣摘出ラットモデル：エキリン、クーメストロールまたは６−ヒドロキシキノリンを直接水晶体に投与した場合のＴＧＦβ誘発白内障への影響方法実施例１で述べたように雌のウィスターラット（１２−１４週齢）の卵巣を摘出した。エキリンはシグマ社(Sigma)から、クーメストロールはエイピンケミカル社（Apin Chemicals，Abingdon，Oxon，英国）から、６−ヒドロキシキノリンはアルドリッチ社（Aldrich，Milwaukee，ウィスコンシン、米国）から入手した。卵巣摘出後５から１１週して、水晶体を取り出し５ｍｌの培養液(抗生物質を含むフェノールレッド非含有最少必須培地(実施例２))に入れた。被験物質を以下の濃度となるように添加した後２日間水晶体を前培養した：エキリン、１０^-9 Ｍ；クーメストロール、１０^-6Ｍ；および６−ヒドロキシキノリン、５×１０^-7 Ｍ。コントロールには５μｌのエタノールのみを与えた。続いて、先で述べたように被験物質含有または非含有培養液と交換し、ＴＧＦβ（０．７５ｎｇ／ｍｌ）をほとんどの培養皿に加えた。いくつかはＴＧＦβを添加しないで培養し、コントロールとして用いた。培養液は、培養期間中ＴＧＦβまたは被験物質を再添加せずに２日毎に新しいものと交換した。水晶体は混濁について毎日モニターし、７日目に写真撮影して微細写真を各水晶体の明瞭な混濁数を決定するために用いた。統計分析はスタティスティクス(Statistix)ソフトを用いて実施した。結果ＴＧＦβに暴露する前に被験物質の非存在下で前培養した水晶体は広範囲の曇り領域を成長させ、培養期間の終わりまでに多数の明瞭な混濁が出現した。被験物質は、このような条件下でＴＧＦβによって誘発される混濁数を顕著に減少させ(表５)、ただ１つの水晶体でのみ曇りが広がった(エキリン処置群)。ＴＧＦβ を添加しないで培養したコントロール水晶体は、被験物質の存在下または非存在下で前培養した後培養期間中透明を維持した。したがって、エキリン(ステロイド性エストロゲン)、クーメストロール(フィトエストロゲン)、および６−ヒドロキシキノリン（キノリン誘導体）は全て、このような条件下でＴＧＦβの白内障誘発性作用から水晶体を保護した。実施例５未成熟ラットモデル：ＴＧＦβ誘発白内障に対するタモキシフェンおよびナフォキシデンのインビボ投与の影響方法雌の未成熟ウィスターラット（２６−２７日齢）の皮下に賦形剤（ベンジルアルコール／ピーナッツオイル、実施例１）のみ、または被験物質を１日当たり以下の用量で３日間注射した：タモキシフェン、７５μｇ；ナフォキシデン、５００μｇ(ともにSigmaから入手）。次の日にラットを殺処分し、水晶体を取り出し、４ｍｌの培養液を用いた点を除いて実施例４で述べたように５日間ＴＧＦβ２とともに培養した。ＴＧＦβ２の最終濃度は０．４ｎｇ／ｍｌ（実験１）または０．７５ｎｇ／ｍｌ（実験２）であった。培養の最終日に水晶体の写真を撮影し、以下のように混濁反応の重篤度にしたがって等級を付けた：等級０、透明な水晶体；等級１、肉眼観察で気付くが極めて弱いので写真では記録できない曇りまたは混濁の小さな中心領域；等級２、全体的な曇りまたはただ１つの明瞭な混濁；等級３、２つまたは３つの明瞭な混濁；等級４、明瞭な３つよりも多い混濁。カテゴリ−１−４に対応する水晶体の例は図６に示す。統計分析は、グラフパッドプリズムソフト(GraphPad Prism software)を用いて集合データで実施し、混濁を示さない水晶体（等級０）の比率がコントロールよりも処置ラットで高いか否かを決定した。結果各処置群の水晶体の反応の等級付けの結果は図７に示す。ＴＧＦβのみで培養した水晶体の大半は曇り領域を成長させ、ほとんどが培養期間の終りまでに明瞭な混濁を含んでいた。頻度分布で値が右から左に移動することによって示されるように、各被験物質はＴＧＦβの白内障誘発作用を低下させた。全ての水晶体は切り出しの際には透明で、さらに補充実験で、このような用量のタモキシフェンおよびナフォキシデンを注射されたラットの水晶体はＴＧＦβ非添加培養中は透明を維持することが確認された。したがって、タモキシフェンおよびナフォキシデン（エストロゲン作動薬／拮抗薬）は、このような条件下でＴＧＦβの白内障誘発作用から水晶体を保護する。実施例６未成熟ラットモデル：ＴＧＦβ誘発白内障に対する種々のエストロゲン様物質の水晶体への直接投与の影響方法クーメストロールはエイピンケミカル社（Apin Chemicals，Genistein）から、α−ゼアラレノールおよびオクチルフェノールはシグマ社(Sigma)から入手した。正常な２６−２７日齢の雌のウィスターラットの水晶体を４ｍｌの培養液（実施例５）に入れ、さらに被験物質（エタノール中で５μｌ）を以下の最終濃度で添加してから前培養した：ジェニステイン、５×１０^-6Ｍ；クーメストロール、１０^-6M(実験１)；ジェニステイン、５×１０^-6Ｍ；クーメストロール、１０^- ⁷ Ｍ(実験２)；およびα−ゼアラレノール、１０^-8Ｍ、オクチルフェノール、１０^-7Ｍ(実験３＆４)。コントロールには５μｌのエタノールのみを添加した。前培養の期間は１日（実験１、２＆３）または２日（実験４）であった。続いて前のように被験物質含有または非含有培養液を交換し、ＴＧＦβ２を加えた(０．７５ｎｇ／ｍｌ、実験１＆２；０．４ｎｇ／ｍｌ、実験３＆４)。各処置群の代表的な水晶体をＴＧＦβを添加しないで同じように処理して被験物質単独の作用を評価した。培養液は、ＴＧＦβまたは被験物質を再添加しないで培養期間中２日毎に更新した。水晶体を５日間培養し写真撮影し、さらに実施例５のように等級付けした。統計分析は集合データを基にグラフパッドプリズムソフトを用いて実施し、混濁を全くまたは殆ど示さない水晶体（等級０−１）の比率がコントロールよりも処置ラットで高いか否かを決定した。結果各処置群の水晶体の反応の等級付けの結果は図８に示す。ＴＧＦβのみで培養した水晶体の全ては曇り領域を成長させ、ほとんどが培養期間の終りまでに明瞭な混濁を含んでいた。頻度分布で値が右から左に移動することによって示されるように(図８)、各被験物質はＴＧＦβの白内障誘発作用を低下させた。ＴＧＦβ を添加せずに培養したコントロール水晶体は、被験物質の存在下または非存在下で前培養した後培養期間中は透明を維持した。したがって、クーメストロール( クーメスタンフィトエストロゲン)、ジェニステイン(イソフラボンフィトエストロゲン)、α−ゼアラレノール（ミコエストロゲン）およびオクチルフェノール（アルキルフェノール）は全て、このような条件下でＴＧＦβの白内障誘発作用から水晶体を保護した。工業的利用本発明の処置方法、製剤および水晶体移植物は、医療分野および獣医分野で広い用途をもつことは明瞭であろう。前述の記載は本発明のいくつかの実施態様を述べただけで、当業者にとって明白な改変を本発明の範囲内で実施できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ヘイルズ、アンジェラ・マリアオーストラリア国、ニュー・サウス・ウェイルズ 2048、スタンモア、ケンブリッジ・ストリート 11／58

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳類の患者に有効量のエストロゲンを投与することを含む、哺乳類患者の眼のＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患を予防または制御する方法。２．前記エストロゲンが患者の眼に直接または眼の近くに投与される請求項１に記載の方法。３．前記哺乳類の患者がヒトである請求項１または２に記載の方法。４．前記エストロゲンがステロイド性エストロゲンである請求項１から３のいずれかに記載の方法。５．前記エストロゲンが、ステロイドレセプター調節物質として作用するキノリンおよび融合キノリン、フィトエストロゲン、ミコエストロゲンおよびエストロゲンレセプター作動薬／拮抗薬並びにその治療的に有効な誘導体、前駆体および代謝産物から成る群から選ばれたものである請求項１から３のいずれかに記載の方法。６．前記フィトエストロゲンがイソフラボン、フラボンおよびクーメスタン並びにその治療的に有効な誘導体、前駆体および代謝産物から選ばれる請求項５に記載の方法。７．前記ＴＧＦβ誘発白内障が前嚢下白内障、後嚢下白内障、皮質部白内障または二次性白内障である請求項１から６のいずれかに記載の方法。８．眼科学的に許容できる担体中にエストロゲンを含むが、通常の医薬的に許容できる担体は除外される眼科用製剤。９．エストロゲンを染み込ませた膜性眼用パッチ。１０．水晶体移植手術の後での哺乳類の患者の眼の二次性白内障形成を予防または制御する方法であって、当該患者の眼にエストロゲンを被覆または染み込ませた水晶体または水晶体移植片を移植することを含む前記二次性白内障形成を予防または制御する方法。１１．エストロゲンを被覆または染み込ませた水晶体移植片。１２．前記エストロゲンがステロイド性エストロゲンである、請求項８の眼科用製剤、請求項９の膜性眼用パッチ、請求項１０の方法または請求項１１の水晶体移植片。１３．前記エストロゲンが、ステロイドレセプター調節物質として作用するキノリンおよび融合キノリン、フィトエストロゲン、ミコエストロゲンおよびエストロゲンレセプター作動薬／拮抗薬並びにその治療的に有効な誘導体、前駆体および代謝産物から成る群から選ばれたものである、請求項８の眼科用製剤、請求項９の膜性眼用パッチ、請求項１０の方法または請求項１１の水晶体移植片。１４．前記フィトエストロゲンがイソフラボン、フラボンおよびクーメスタン並びにその治療的に有効な誘導体、前駆体および代謝産物から選ばれる、請求項１３に記載の眼科用製剤、膜性眼用パッチ、方法または水晶体移植片。１５．ＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患を予防または制御する眼科用製剤の製造におけるエストロゲンの使用。１６．ＴＧＦβ誘発白内障または白内障様疾患を予防または制御するためのエストロゲンの使用。１７．前記エストロゲンがステロイド性エストロゲンである請求項１５または１６のいずれかに記載の使用。１８．前記エストロゲンが、ステロイドレセプター調節物質として作用するキノリンおよび融合キノリン、フィトエストロゲン、ミコエストロゲンおよびエストロゲンレセプター作動薬／拮抗薬並びにその治療的に有効な誘導体、前駆体および代謝産物から成る群から選ばれる請求項１５または１６のいずれかに記載の使用。１９．前記フィトエストロゲンがイソフラボン、フラボンおよびクーメスタン並びにその治療的に有効な誘導体、前駆体および代謝産物から選ばれる請求項１８に記載の使用。