JP2001505872A

JP2001505872A - Peptide prodrug containing α-hydroxy acid linker

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Publication number: JP2001505872A
Application number: JP51316798A
Authority: JP
Inventors: ラーセン，ベヤーネ，ドゥエ; ホルム，アーネ
Original assignee: ジーランドファーマシューティカルズアクティーゼルスカブ
Priority date: 1996-09-09
Filing date: 1997-09-09
Publication date: 2001-05-08
Also published as: EP0932614A1; KR20000036015A; NZ334595A; IL128828A0; AU724326B2; AU4199497A; CA2265454A1; WO1998011126A1

Abstract

(57)【要約】一般式（Ｉ）：Ｘ−Ｌ−Ｚ（式中、Ｘは医薬として活性なペプチド配列、例えばLeu−エンケファリンであり；Ｚは２〜20アミノ酸単位のペプチドプレ配列であって、好ましくはリシン及びグルタミン酸を含む配列であり；及びＬは３〜９の骨格原子を含むリンキング基であり、ここでＸのＣ末端カルボニルとＬとの間の結合はＣ−Ｎアミド結合でない）のペプチドプロドラッグ。好ましくは、ＸとＬとの間の結合はエステル結合である。医薬として活性なペプチドを式（Ｉ）のプロドラッグとしてマスキングした時、カルボキシペプチダーゼＡ、ペプシンＡ、ロイシンアミノペプチダーゼ、α−キモトリプシンのようなタンパク質分解酵素によるデグラデーションに対して耐性の著しい増加を得ることが可能である。式（Ｉ）のプロドラッグは血漿酵素ブチリルコリンエステラーゼにより開裂されて直ちに生物可逆性を示す。酵素開裂に対する安定性は誘導されるヘリックス様構造であると確信される。 (57) [Summary] Formula (I): X-L-Z, wherein X is a pharmaceutically active peptide sequence, such as Leu-enkephalin; Z is a peptide presequence of 2-20 amino acid units, preferably lysine and A peptide prodrug of the sequence comprising glutamic acid; and L is a linking group comprising 3 to 9 skeletal atoms, wherein the bond between the C-terminal carbonyl of X and L is not a C-N amide bond. Preferably, the bond between X and L is an ester bond. When the pharmaceutically active peptide is masked as a prodrug of formula (I), a significant increase in resistance to degradation by proteolytic enzymes such as carboxypeptidase A, pepsin A, leucine aminopeptidase, α-chymotrypsin is obtained. It is possible. The prodrug of formula (I) is bioreversible immediately upon cleavage by the plasma enzyme butyrylcholinesterase. Stability to enzyme cleavage is believed to be an induced helix-like structure.

Description

【発明の詳細な説明】 α−ヒドロキシ酸リンカーを含むペプチドプロドラッグ発明の分野本発明は、加水分解の傾向の少い医薬的に活性なペプチドのプロドラッグに関する。発明の背景多数の医薬的に活性なペプチド、例えばヒトもしくは動物において自然に存在するもの、又はこれらのペプチドの合成アナログが存在する。このようなペプチドの典型的な例は、極めて多くの合成アナログを生じさせる鎮痛に活性のあるペプチドエンケファリンである。しかしながら、まさにそれらのペプチド性質のため、その投与の経路はむしろ限られている。これにより、ペプチドは、一般に数分の範囲内の半減期で、酵素により迅速かつ極めて有効に分解される。プロテアーゼ及び他のタンパク質分解酵素は、特に胃腸管において、偏在しており、それゆえペプチドは通常、経口投与に基づき多数の部位で、及びある程度、血液、肝臓、腎臓、及び脈管の内皮で分解を受ける。更に、所定のペプチドは、通常、その骨格内の１超の連結部において分解をうけ；加水分解の各々の位置は特定のプロテアーゼにより媒介される。例えばペプチド構造の改変、プロテアーゼインヒビターの同時投与、又は特定の製剤ストラテジーにより、時期尚早の分解に対してペプチドを保護するいくつかの試みがあるが、それらは限られた成功例しかない。発明の概要驚くべきことに、医薬的に活性なペプチドに、そのＣ末端において、適切な生物可逆性アミノ酸プレ配列を加えることにより、そのペプチドがプロテアーゼによる分解をかなり受けにくくなることが見い出された。この効果についていずれのモデルにも結びつけるつもりはないが、プレ配列の存在は医薬的に活性なペプチドの所定の程度のヘリックス様性質の組織化を誘導し、それによりペプチドがランダムコイルコンホメーションにおけるペプチドと対照的にプロテアーゼに感受性が少い。その組織化の結果として、ペプチドは、プロテアーゼが分解するのがかなりより困難である。プレ配列の生物可逆特性は、ペプチドとプレ配列とを、通常のペプチド結合と異なる様式でペプチドに結合した連結基により得られる。これにより、本発明は、医薬的に活性なペプチド（Ｘ−OH）、ペプチドアミド (Ｘ−NH₂)、又はペプチドエステル（Ｘ−OR）のプロドラッグであって、該プロドラッグが、一般式Ｉ：Ｘ−Ｌ−Ｚ〔式中、ＸはＸのＣ末端カルボニル官能基においてＬに結合し；Ｌは３〜９の骨格原子を含む連結基であり、ここでＸのＣ末端カルボニルとＬとの間の結合はＣ−Ｎアミド結合でなく；そしてＺは２〜20のアミノ酸単位のペプチド配列でありＺのＮ末端窒素原子においてＬに結合し、ここで該各々のアミノ酸単位は独立して、Ala，Leu，Ser，Thr，Ty r，Asn，Gln，Asp，Glu，Lys，Arg，His，Met，Orn、及び式II： −NH−Ｃ（Ｒ³）(Ｒ⁴)−Ｃ（＝Ｏ）− （式中、Ｒ³及びＲ⁴は独立して、Ｃ_1-6−アルキル、フェニル、及びフェニル −メチルから選択され、ここでＣ_1-6−アルキルは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、スルホノ、及びカルボキシから選択される１〜３の置換基で任意に置換され、そしてフェニル及びフェニル−メチルは、Ｃ_1-6−アルキル、Ｃ_2-6−アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、スルホノ、及びカルボキシから選択される１〜３の置換基で任意に置換され、又はＲ³及びＲ⁴は、それらに結合した炭素原子と一緒に、シクロペンチル、シクロヘキシル、又はシクロヘプチル環を形成する）のアミノ酸単位から選択される〕；を有することを特徴とするプロドラッグ又はその塩に関する。本発明は、この治療における一般式Ｉのプロドラッグの使用；及び治療に用いるための組成物の調製における一般式Ｉのプロドラッグの使用、並びに一般式Ｉのプロドラッグを含む医薬組成物及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物にも関する。本発明の他の態様は、固定化されたリンカーペプチド配列Ｌ−Ｚ−SSM(式中、Ｌ及びＺは上述の通りであり、そしてSSMは固体支持材料をいう)、一般式Ｉのプロドラッグの調製のための固定化されたリンカーペプチド配列Ｌ−Ｚ−SSMの使用、及び、固定化されたリンカーペプチド配列Ｌ−Ｚ−SSMの使用を含む一般式Ｉのプロドラッグの調製のための方法に関する。一般式Ｉのプロドラッグはそれ自体新規であるので、本発明の更なる態様は一般式Ｉの化合物に関する。発明の詳細な説明ペプチドは、いくつかの過程、例えば細胞間伝達において利用され、そのいくつかは自律及び中枢神経系に存在する。後者のペプチドのいくつか、及びいくつかの他のペプチドは、脈管及び他の平滑筋に重要な効果を及ぼす。これらのペプチドは、例えば、血管収縮神経薬アンジオテンシンII、バソプレッシン、エンドセリン、ニューロペプチドＹ、血管作用性腸管ペプチド、物質Ｐ、ニューロテンシン、及びカルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド、及びカルシトニン遺伝子関連ペプチドIIを含む。他の医薬として関心のあるペプチドには、鎮痛薬、抗糖尿病薬、抗生物質、及び麻酔性ペプチド等があり、これにより、ペプチドは、エンドルフィン、エンケファリン、インスリン、グラミシジン、パラセルシン、デルタ− 睡眠誘導性ペプチド、ANF、バソトシン、ブラジキニン、ダイノルフィン、エンドセリン、成長ホルモン放出因子、成長ホルモン放出ペプチド、オキシトシン、タキキニン、ACTH、脳ナトリウム尿排泄亢進ポリペプチド、コレシストキニン、コルチコトロピン放出因子、ジアゼパン結合性インヒビターフラグメント、FMRF −アミド、ガラニン、胃の放出するポリペプチド、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド−１、グルカゴン様ペプチド−２、LHRH、メラニン濃縮化ホルモン、α−MSH、モルフィン調節ペプチド、モチリン、ニューロキニン類、ニューロメジン類、ニューロペプチドＫ、ニューロペプチドＹ、PALAP、膵臓ポリペプチド、ペプチドYY、PHM、セクレチン、ソマトスタチン、物質Ｋ、物質Ｐ、TRH、血管作用性腸管ポリペプチド、並びにH．L．Lee， “Peptide and Protein Drug Delivery”Marcel Dekker Inc．1991，Chapter 9 ，及びその引用文献、Phoenix Pharmaceuticals，Inc．“The Peptide Elite” ，1997-1998 Catalogue，並びにBachem，“Feinchemikalien AG”，Catalog S15 -1995．に記載されるような生物学的に活性なペプチドを暗示し、又は暗示し得る。上述のペプチド及びこれらのペプチドの医薬的に活性なペプチド配列を、本発明のプロドラッグ（及び化合物）に組み込むことができることが理解されるはずである。本文脈において、Ｘに適用される用語“医薬的に活性なペプチド配列”とは、２又はそれ超のアミノ酸単位（好ましくは３又はそれ超のアミノ酸単位）を有し、ヒトのような哺乳動物において医薬効果を発揮する天然又は合成のいずれかのペプチド又はペプチド含有構造を意味することを意図する。本文脈において、Ｘと一緒に用いられる用語“アミノ酸単位”は、いずれかの天然の又は合成のα，β、及びγ−アミノ酸、並びに側鎖を修飾したアミノ酸、例えば修飾したチロシンであってその芳香環が例えば１又は複数のハロゲン、スルホノ基、ニトロ基等により更に置換され、及び／又はそのフェノール基がエステル基に変換されたもの、例えばアミノ酸側鎖がペプチド化学の当業者に周知である方法、例えばＬ形態又は対応するＤ形態のいずれかにかかわらず、M．Bodanszky and A．Bodanszky，“The Practice of Peptide Synthesis”，2．Ed，Springer-Ve rlag，1994，and J．Jones，“The Chemical Synthesis of Peptides”，Claren don Press，1991に記載される方法に従って保護されている側鎖アミノ酸を意味する。医薬的に活性なペプチド配列Ｘは、好ましくは、２〜200アミノ酸単位、より好ましくは２〜100アミノ酸単位(例えば３〜100)、更により好ましくは２〜50アミノ酸単位（例えば３〜50又は４〜30）、特に２〜20アミノ酸単位（例えば３〜 20又は４〜20）、特に２〜10アミノ酸単位（例えば3〜10又は４〜10）、例えば２〜８アミノ酸単位（例えば３〜８又は４〜８）からなる。本文脈において、ネイティブ形態においてＣ末端の遊離カルボン酸として存在する医薬的に活性なペプチド配列Ｘ、例えばLeu−エンケファリン（H-Tyr-Gly-G ly-Phe-Leu-OH）は、Ｘ−OHで示す。同様、Ｃ末端アミド基を有する医薬的に活性なペプチド配列Ｘ、例えばオキシトシン(Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-G ly-NH₂)はＸ−NH₂で示し、そしてＣ末端にエステル基を有する医薬的に活性なペプチド配列ＸはＸ−ORで示す。ここで、ORは、例えば、医薬的に活性なペプチド配列Ｘと一緒にエステルを構成するアルコールのアルコキシ成分である。Ｒは、Ｃ_1-6−アルキル、アリール、例えばフェニル、アリール−Ｃ_1-6−アルキル、例えばベンジル等を示し得る。これにより、たとえ医薬的に活性なペプチド配列ＸがＣ末端のカルボニルによりリンカーに結合したとしても、遊離Ｃ末端カルボキシ基を有する医薬的に活性なペプチドに相当するいずかのペプチド配列（即ちＸ−OH）並びにＣ末端アミド (即ちＸ−NH₂)又はエステル基（即ちＸ−OR）を有する医薬的に活性なペプチドに相当するペプチドは、本発明の化合物及びプロドラッグに用いることができる。多くの生物学的に活性なペプチドが、修飾され又はトランケートされた形態で存在する時にそれらの要求される生物学的効果を発揮することも公知である。例えばインスリンの場合、ブタインスリンは、唯一１アミノ酸単位だけヒトインスリンと異なり、ブタインスリンのＢ30アミノ酸はAlaでありヒトインスリンのＢ3 0アミノ酸はThrである。この差にかかわらず、ブタインスリンは何年も有効な糖尿病剤として用いられている。同様に、ヘプタデカンペプチドブタガストリンＩにおける活性のための本質的な特徴は、全てＣ末端のテトラペプチド内に含まれていること及びニューロテンシンの本質的に全ての生物学的効果がＣ末端のヘキサペプチドに関連することが見い出されている。更に、１又は複数のアミド結合が修飾され、例えば削減されている医薬的に活性なペプチドは、しばしば、同様の又はより増強された生物活性を示し；例えばソマトスタチンのCys²Ψ〔CH₂NH 〕Tyr³アナログは、ソマトスタチン自体よりかなり能力のある成長ホルモン放出剤であることが見い出されており、また、アンジオテンシンの遷移状態アナログLeu¹⁰Ψ〔CH(OH)CH₂〕Val¹¹は、アスパラギン酸プロテアーゼレニンに対して強力な阻害効果を示すことが見い出されている。これにより、用語“その修飾され又はトランケートされたアナログ”は、個々のアミノ酸単位における側鎖、立体化学、及び骨格の改変を含む、ネイティブペプチドの配列中の１又は複数のアミノ酸単位を変化及び／又は欠失させることにより、例えば１又は複数のカルボキサミド結合（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−）を、例えば還元形態、例えば（−CH(OH)−Ｎ−）、（−CH₂−Ｎ−）、及び他のペプチド結合擬似物、例えば（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ）、（−Ｃ（＝Ｏ）−CH₂−）、（−CH＝CH−）、（−PO₂−NH−）、（SO−CH₂−）、（SO₂−Ｎ−）等に変えることにより修飾されたペプチドを意味することを意図する。上述の通り、問題のペプチド配列は、好ましくは、本発明を十分に利用するために酵素デグラデーションしやすい少くとも１のアミド結合(好ましくは２のアミド結合(これは、本来、ジペプチドに当たらない))を含むべきである。本発明の最も興味あることは、プロテアーゼによるデグラデーションに対して安定化され、ペプチドもしくは医薬的に活性なペプチド配列（Ｘ−OH）が医薬の作用を示すであろう又は要求される位置に輸送されるであろう環境において放出され得る、哺乳動物、例えばヒトの治療のための“ペプチドプロドラッグ”を調製することが可能であることである。医薬的に活性なペプチド配列Ｘは、好ましくは（例えばＸとＬとの間のエステル結合の分裂による）遊離酸として遊離されるが、その遊離酸は、ネイティブの医薬的に活性なペプチド配列Ｘがアミド(Ｘ −NH₂)又はエステル（Ｘ−OR）である場合において医薬的に関連のある効果も有し得ることも研究される。これにより、興味ある実施形態において、ＸのＣ末端カルボニル官能基とＬとの間の結合は、血漿酵素、例えばブチリルコリンエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ等により開裂され得る。特に、ＸのＣ末端カルボニル官能基とＬとの間の結合はチオールエステル結合又はエステル結合、好ましくはエステル結合である。医薬的に活性なペプチド配列Ｘ−OHを遊離するために、本発明のペプチドプロドラッグ内のＸとＬとの間の結合は、生体内で開裂されなければならない。（好ましくはエステル結合である）ＸとＬとの間の結合は酵素ブチリルコリンエステラーゼにより開裂され得ることが本明細書に供される実施例から理解されよう。これにより、本発明のペプチドプロドラッグが、例えば血漿中に存在するエステラーゼにより開裂され得、それにより要求される位置において要求される医薬的に活性なペプチドＸ−OHを遊離することが研究される。そのペプチドの酵素開裂の速度は、プロドラッグＩを含む薬剤が長期の又は遅延した効果を有するように調節することができる。開裂速度の調節は、例えば、Ｌ上の置換基のかさの大きさ及び／又は電子供与効果を増加又は減少させることにより行うことができる。本文脈において、単独で又は他の基の一部として用いられる用語“Ｃ_1-6−アルキル”とは、１〜６の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖又は環状の飽和炭化水素基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、シクロヘキシル等をいう。同様に、用語“Ｃ_1-5−アルキル”は、１〜５の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖又は環状の飽和炭化水素基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ −ペンチル、イソペンチル、シクロペンチル等を包含する。単独で又は他の基の一部として用いられる用語 “Ｃ_1-4−アルキル”は、１〜４の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の飽和した炭化水素基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル等をいい、同様に、用語“Ｃ_1-3−アルキル”は、１〜３の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の飽和炭化水素基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、及びイソプロピルを包含する。本文脈において、用語“Ｃ_2-6−アルケニル”は、直鎖、分枝鎖、又は環状であり得、１又は複数の二重結合を含み得る２〜６の炭素原子を有する炭化水素基、例えばビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、４−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２− ヘキセニル、５−ヘキセニル、シクロヘキセニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル等（シス及び／又はトランス型を有し得る）をいう。同様に、用語“Ｃ_2-5 −アルケニル”は、直鎖、分枝鎖、又は環状であり得、１又は複数の二重結合を含み得る２〜５の炭素原子を有する炭化水素基、例えばビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブテニル、１−ぺンテニル、２−ぺンテニル、４− ぺンテニル、３−メチル−１−ブテニル、シクロペンテニル等（シス及び／又はトランス型を有し得る）をいい、用語“Ｃ_2-4−アルケニル”は、直鎖又は分枝鎖であり得、１又は複数の二重結合を含み得る２〜４の炭素原子を有する炭化水素基、例えばビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブテニル等（シス及び／又はトランス型を有し得る）をいう。用語“アルコキシ”とはアルキル−オキシを意味する。用語“アリール”とは、芳香族の炭素環式基、例えばフェニル又はナフチルを意味することを意図する。用語“ハロゲン”は、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を含む。用語“ヘテロアリール”は、窒素、酸素及び硫黄から選択された１〜４のヘテロ原子を含む５又は６員芳香族単環式ヘテロ環式基、例えばピロリル、フリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ピリジル、並びに窒素、酸素及び硫黄から選択された１〜６のヘテロ原子を含む芳香族二環式ヘテロ環式基、例えばキノリニルを含む。ペプチド配列Ｚは、その化合物Ｉをプロテアーゼによるデグラデーションに対してより安定にするであろう分子への特定の二次構造の導入及び／又は安定化の原因となる化合物Ｉの一部であり、これにより、Ｚは、このような構造要素を単独で又はリンカ−Ｌと組み合わせて導入するために、少くとも２のアミノ酸単位（好ましくは少くとも３のアミノ酸単位）を含むことが必要であると確信される。他方、約20を超えるアミノ酸単位の配列は更に安定性を改善しないであろうとも確信される。これにより、Ｚは２〜20のアミノ酸単位（好ましくは３〜20）、好ましくは３〜15の範囲、より好ましくは３〜９（例えば４〜９）、特に３〜６アミノ酸単位、例えば４〜６アミノ酸単位のペプチド配列である。ペプチド配列Ｚ中のアミノ酸の各々は、独立して、Ala，Leu，Ser，Thr，Tyr ，Asn，Gln，Asp，Glu，Lys，Arg，His，Met，Orn、並びに本明細書に定義される式IIのアミノ酸から選択される。好ましくは、そのアミノ酸単位は、Ser，Thr ，Tyr，Asn，Gln，Asp，Glu，Lys，Arg，His、及びMetより好ましくはGlu，Lys 、及びMet、特にGlu及びLysから選択される。上述のアミノ酸は、Ｄ−又はＬ− コンフィグレーションのいずれを有してもよいが、好ましくは、上述のアミノ酸はＬ−コンフィグレーションを有する。医薬的に活性なペプチド配列Ｘは、通常、排他的にＬ−アミノ酸からなるので、全体のプロドラッグのヘリックス構造を保護するために、Ｌ−アミノ酸のみから又は主にそれからなるペプチド配列Ｚが、Ｄ−アミノ酸のみから又は主にそれからなるペプチド配列Ｚと比べて有利であろうことが予想されなければならない。更に、Ｄ−アミノ酸のみからなる又はそれから主になるペプチド配列Ｚは、バイオデグラデーションに対するＤ−ペプチド及びＤ−アミノ酸の耐性のため、毒性効果を生じ得ることが考えられる。Ｚのアミノ酸単位は、もちろん、全て異なっても全て同一でもよい。しかしながら、本発明の興味ある実施形態において、Ｚ中のアミノ酸単位は、３つの異なるアミノ酸からもしくは２つの異なるアミノ酸から選択されるか、又は同一のアミノ酸であり、好ましくは、Ｚ中のアミノ酸単位は同一、例えば(Lys)_nもしくは (Glu)_n（式中、ｎは４〜６の範囲の整数である）であるか、又は２つのアミノ酸単位の組合せ、例えば(LysGlu)₂，(LysGlu)₃，(GluLys)₂、もしくは(GluLys)₃であるか、又は３つのアミノ酸単位の組合せ、例えば、Xaa-(Lys)_x-(Glu)_y，Xaa-( Glu)_x-(Lys)_y，(Lys)_x-(Glu)_y-Xaa，(Glu)_x-(Lys)_y-Xaa，(Lys)_x-Xaa-(Glu)_y，( Glu)_x-Xaa-(Lys)_y，Xaa-Lys-Glu-Lys，Xaa-Lys-Glu-Lys-Glu，Xaa-Lys-Glu-Lys- Glu-Lys，Xaa-Glu-Lys-Glu，Xaa-Glu-Lys-Glu-Lys，Xaa-Glu-Lys-Glu-Lys-Glu， Lys-Glu-Lys-Xaa，Lys-Glu-Lys-Glu-Xaa，Lys-Glu-Lys-Glu-Lys-Xaa，Glu-Lys-G lu-Xaa，Glu-Lys-Glu-Lys-Xaa，Glu-Lys-Glu-Lys-Glu-Xaa、等（式中、ｘ及びｙは１〜４の範囲の整数であり、但しｘ＋ｙは多くとも５であり、そしてXaaは、A la，Leu，Ser，Thr，Tyr，Asn，Gln，Asp，Arg，His，Met，Orn、及び本明細書に記載される式IIのアミノ酸を示す）である。ペプチド配列Ｚに関して、ペプチド配列Ｚの構成成分として言及される特定のアミノ酸単位、即ちAla，Leu，Ser，Thr，Tyr，Asn, Gln，Asp，Glu，Lys，Arg，His，Met，Orn、及び式IIのアミノ酸単位は、それらの炭素原子の周囲の立体配置のため、及びおそらく特定の電子コンフィグレーションのため、ヘリックス様構造に関与し、又は安定化もしくは開始しやすいアミノ酸単位である。Chou-Fasmanアプローチ(Chou，P．Y．& Fasman，G．D．Ann．R ev．Biochem．47，251-276(1978))は、特定のアミノ酸単位が(“コンフィグレーションパラメータＰα”で表される)α−ヘリックス構造に関連する（経験的な）可能性を定量化する１つの試みである。しかしながら、Chou及びFasmanの研究及び関速する研究は、低いパラメータＰαを有するアミノ酸単位はα−ヘリックス内に見い出されるが、より高いＰαを有するアミノ酸単位ほどは現れないことを示す。これにより、ペプチド配列Ｚにおいて、Ｚの構成成分として先の選択されたアミノ酸単位以外のものであるアミノ酸単位を少い割合で含み、そしてなお、先の選択されるアミノ酸単位が前記の他のアミノ酸単位のいずれのネガティブな又はニュートラルな効果を補うと信じられる点において、ペプチド配列Ｚから要求される効果を得ることが可能であると考えられる。これにより、本発明の範囲内である実施形態において、Ｚの構成成分として好まれるアミノ酸以外のアミノ酸であるアミノ酸単位を25％まで含むことが実用的であり得る（“25％”とは、アミノ酸単位の数をいい、即ちジ−及びトリペプチドにおいては他のアミノ酸単位は許容されず、テトラー、ペンター、ヘキサー、及びヘプタペプチドにおいては１までの他のアミノ酸単位が許容され、オクタペプチド等においては２までの他のアミノ酸単位が許容される）。このような他のアミノ酸単位は、Val，Ile，Pro，Phe，Gly，Trp、及びＮ−メチルアミノ酸単位から選択することができるが、好ましくは、Pro，Gly及びＮ−メチルアミノ酸単位ではない。ペプチド配列Ｚの典型例は：である。ＺのＣ末端は、遊離酸、アミド、又はエステルの形態で、例えば当業者に明らかであろう固体支持材料の型及び合成と合わせて用いる開裂条件に依存し得ることが理解されるはずである。ＬはＺのＮ末端の窒素原子と結合し、即ちＬとＺとの間の可能な結合型は、窒素原子に関連するもの、例えばカルボキサミド結合（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−）、スルホンアミド結合（−SO₂−Ｎ−）、もしくはアルキルアミン結合（−Ｃ−Ｎ− ）、カルバメート結合（−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−）、チオカルバメート結合（− Ｓ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−）、尿素結合（−Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−）、チオウレア結合（−Ｎ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｎ−）、チオアミド結合（−Ｃ（＝Ｓ）−Ｎ−）、シアノメチレンアミノ結合（−Ｃ（CN）−Ｎ−）、又はＮ−メチルアミド結合（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−(CH₃)−）である。（これらの例において、（右側の）窒素原子はＺから生じ、“結合”の残りの部分はＬから生ずる。）好ましい結合は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−、−SO₂−Ｎ−、−Ｃ−Ｎ−、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｎ−、−Ｃ（CN） −Ｎ−、及び−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ−（CH₃）−であるが、とりわけ−Ｃ（＝Ｏ）−N H−及び−Ｃ（＝Ｓ）−NHが、通常のペプチド結合のジオメトリーを有するので好ましい。リンカーＬは、好ましくは、Ｚにより開始され又は安定化されるヘリックス様構造に関与することができる。ＸとＬとの間の結合がアミド結合でないという事実を別にして、Ｌのジオメトリーは、好ましくはアミノ酸（又は２又はそれ超のアミノ酸）のジオメトリーに対応するべきであり、即ちリンカ−Ｌは、好ましくは、３の骨格原子又はその多量体、例えば６もしくは９の骨格原子を含む。それゆえ、本文脈において、リンカ−Ｌに関連して用いられる場合の用語“骨格原子”は、医薬的に活性なペプチド配列Ｘとプレ配列Ｚとを直接連結するリンカーＬ内の原子をいう。これにより、Ｌは、好ましくは、ヒドロキシ−カルボン酸、特にα−ヒドロキシ−カルボン酸から得られる。より詳しくは、Ｌは、一般式HO−Ｃ（Ｒ¹）(Ｒ²) −COOH(式中、Ｒ¹及びＲ²は、独立して、Ｈ、Ｃ_1-6−アルキル、Ｃ_2-6−アルケニル、アリール、アリール−Ｃ_1-4−アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ_1-4−アルキルから選択されるか、又はＲ¹及びＲ²は、それらに結合した炭素原子と一緒に、シクロペンチル、シクロヘキシル、又はシクロヘプチル環を形成し、ここでアルキル又はアルケニル基は、アミノ、シアノ、ハロゲン、イソシアノ、イソチオシアノ、チオシアノ、スルファミル、Ｃ_1-4−アルキルチオ、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキルアミノ、ヒドロキシ、Ｃ_1-4−アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、アリーロキシ、カルボキシ、Ｃ_1-4−アルコキシカルボニル、Ｃ_1-4−アルキルカルボニロキシ、アミノカルボニル、モノもしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノカルボニル、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル −アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノ−Ｃ_1-4−アルキル、Ｃ_1-4 −アルキルカルボニルアミノ、スルホノ、及びスルフィノから選択される１〜３の置換基で置換することができ、そしてアリール又はヘテロアリール基は、Ｃ_1-4−アルキル、Ｃ_2-4−アルケニル、ニトロ、アミノ、シアノ、ハロゲン、イソシアノ、イソチオシアノ、チオシアノ、スルファミル、Ｃ_1-4−アルキルチオ、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノ、ヒドロキシ、Ｃ_1-4−アルコキシ、アリーロキシ、カルボキシ、Ｃ_1-4−アルコキシカルボニル、Ｃ_1-4−アルキルカルボニロキシ、アミノカルボニル、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノカルボニル、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ− Ｃ_1-4−アルキル−アミノ−Ｃ_1-4−アルキル、Ｃ_1-4−アルキルカルボニルアミノ、スルホノ、及びスルフィノから選択される１〜３の置換基で置換することができる）のα−ヒドロキシ−カルボン酸から得られる。本発明のプロドラッグの構造分析から、プロドラッグのヘリックス様構造の更なる安定化は、リンカ−Ｌが、α位にメチレン（−CH₂−）基も有するα−ヒドロキシ−カルボン酸から得られる場合に達成することができると予想される。これにより、興味ある実施形態において、リンカ−Ｌは、一般式HO−Ｃ(CH₂−Ｒ⁵) (Ｒ²)−COOH（式中、Ｒ⁵はＨ、Ｃ_1-5−アルキル、Ｃ_2-5−アルケニル、アリール、アリール−Ｃ_1-3−アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ_1-3−アルキルであり、ここでアルキル又はアルケニル基は、アミノ、ハロゲン、モノもしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノ、ヒドロキシ、Ｃ_1-4−アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、アリーロキシ、カルボキシ、Ｃ_1-4−アルコキシカルボニル、Ｃ_1-4−アルキルカルボニロキシ、及びアミノカルボニルから選択される１〜３の置換基で置換することができ、アリール又はヘテロアリールは、Ｃ_1-4−アルキル、Ｃ_2-4−アルケニル、ニトロ、アミノ、ハロゲン、モノもしくはジ−Ｃ₁ _-4 −アルキル−アミノ、ヒドロキシ、Ｃ_1-4−アルコキシ、カルボキシ、Ｃ_1-4− アルコキシカルボニル、Ｃ_1-4−アルキルカルボニロキシ、及びアミノカルボニルから選択される１〜３の置換基で置換することができ；Ｒ²は、上述の通り、好ましくはＨ、Ｃ_1-6−アルキル、Ｃ_2-6−アルケニル、アリール、アリール−Ｃ_1-4 −アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ_1-4−アルキルであり、ここで、アルキル又はアルケニル基は、アミノ、ハロゲン、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノ、ヒドロキシ、Ｃ_1-4−アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、アリーロキシ、カルボキシ、Ｃ_1-4−アルコキシカルボニル、Ｃ_1-4−アルキルカルボニロキシ、及びアミノカルボニルから選択された１〜３の置換基で置換することができ、アリール又はヘテロアリールは、Ｃ_1-4−アルキル、Ｃ_2-4−アルケニル、ニトロ、アミノ、ハロゲン、モノ−もしくはジ−Ｃ_1-4−アルキル−アミノ、ヒドロキシ、Ｃ_1-4− アルコキシ、カルボキシ、Ｃ_1-4−アルコキシカルボニル、Ｃ_1-4−アルキルカルボニロキシ、及びアミノカルボニルから選択された１〜３の置換基で置換することができる）のα−ヒドロキシ−カルボン酸から得られる。Ｌ上の置換基のかさの度合及び／又は電子供与効果を増加又は減少させることによる開裂速度の上述の調節は、例えば、Ｒ¹及び／又はＲ²(又はＲ⁵)のかさの度合及び／又は電子供与効果を増加又は減少させることにより行うことができる。特に興味ある実施形態において、Ｌは、ヒドロキシ酢酸、（Ｓ）−（＋）−マンデル酸、Ｌ−乳酸((Ｓ)−（＋）−２−ヒドロキシプロピオン酸)、Ｌ−α−ヒドロキシ−ブチル酸((Ｓ)−２−ヒドロキシブタン酸)、及びα−ヒドロキシ−イソブチル酸から得られる。本発明のプロドラッグは、その塩の形態であってもよいことが理解されるはずである。塩は、医薬として許容される塩、例えば酸付加塩及び塩基の塩を含む。酸付加塩の例は、塩酸塩、ナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩等である。塩基性塩の例は、その陽イオンがアルカリ金属、例えばナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属、例えばカルシウム、及びアンモニウムイオン⁺Ｎ(Ｒ⁶)₃( Ｒ⁷)（式中、Ｒ⁶及びＲ⁷は、独立して、任意に置換されたＣ_1-6−アルキル、Ｃ₂ _-6 −アルケニル、任意に置換されたアリール、又は任意に置換されたヘテロアリールを示す）から選択される塩である。医薬として許容される塩の他の例は、例えば、“Remington's Pharmaceutical Sciences”17．Ed．Alfonso R．Gennaro( Ed.)，Mark Publishing Company，Easton，PA，U.S.A.，1985及び近年の版並びに医薬の技術の専門辞典に記載されるものである。上述の通り、医薬的に活性なペプチドの投与の経路は、これまでは、キモトリプシン、トリプシン、カルボキシペプチダーゼＡ、ヘプシン、ロイシンアミノペプチダーゼ等のようなプロテアーゼによる迅速なバイオデグラデーションによりむしろ制限されていた。本明細書に供される実施例から理解されるであろうように、一般式Ｉ（Ｘ−Ｌ−Ｚ）のプロドラッグがプロテアーゼの触媒する加水分解に耐性である傾向は、実施例に示される試験管内酵素アッセイにより直接、測定することができる。Ｘ−Ｌ−Ｚがデグラデーションに耐性である傾向は、例えば、Ｘ−OH、Ｘ−NH₂、及び／又はＸ−ORの対応する値と比較することができる。擬似的一次速度定数として及び／又は前記プロドラッグの半減期として表すことができる。更に、本発明のプロドラッグが要求される生物効果を発揮する能力を、種々の試験管内及び生体内アッセイ手順においてテストした。上述のテストの詳細な記載を実施例１に示す。問題のペプチドを本発明によるプロドラッグとして保護することにより、ペプチド又は医薬的に活性なペプチド配列の半減期(ｔ_1/2)の著しい増加を得ることが可能であることが見い出された。これにより、本発明の好ましい実施形態において、本明細書に定義される“酵素溶液中の加水分解のテスト”における問題のプロドラッグの半減期と“酵素溶液中の加水分解のテスト”における対応するペプチド（Ｘ−OH）の半減期との間の比は、酵素カルボキシペプチダーゼＡ及びロイシンアミノペプチダーゼのうち一方を用いる場合、少くとも２、好ましくは少くとも５、より好ましくは少くとも10、特に少くとも20である。本発明は、医薬として許容される担体と組み合わせて上述の一般式Ｉのプロドラッグを含む医薬組成物にも関する。このような組成物は、経口、非経口（静脈内、腹腔内）、直腸、鼻内、皮膚、膣、頬内、眼内、又は肺投与に適合した形態であり得、このような組成物は、例えば一般的に、“Remington's Pharmaceutical Sciences”，17．Ed．Alfonso． R．Gennaro(Ed.)，Mark Publishing Company，Easton，PA，USA，1985及びより近年の版並びに“Drugs and the Pharmaceutical Sciences”シリーズ、Marcel Dekkerにおける研究論文に記載されるように、当業者に公知である方法で調製することができる。本発明は、治療、例えば中枢神経系の疾患の治療、ワクチン療法、及びHIV、癌、糖尿病、失禁、高血圧の治療に、並びに鎮痛剤及び避妊薬として、並びに医薬的に活性なペプチドの投与を含む治療により処置されることが知られている症状に用いるための組成物の調製における上述の一般式Ｉのプロドラッグ又はその塩の使用にも関する。本発明のプロドラッグは、当該分野でそれ自体周知である方法により調製することができる。これにより、ペプチド配列Ｘ及びＺは、溶液合成又はメリフィールド型固相合成のような標準的なペプチド調製技術により調製することができる。Boc（tert−ブチロキシカルボニル）及びFmoc（９−フルオレニルメチロキシカルボニル）ストラテジーが適用できると信じられる。１つの可能な合成ストラテジーにおいて、本発明のプロドラッグは、最初に公知の標準的な保護、カップリング及び脱保護を用いてペプチド配列Ｚを作製し、次にリンキング基Ｌをカップリングし、その後Ｚの作製と同様にリンキング基Ｌ上に医薬的に活性な配列Ｘを連続的にカップリングし、そして最後にその担体から完全なプロドラッグＸ−Ｌ−Ｚを開裂してとることにより調製することができる。他の可能なストラテジーは、溶液合成、固相合成、組換え技術、又は酵素合成により２つの配列Ｘ及びＺの一方又は両方を別個に調製し、その後それらの配列及びリンキング基Ｌを、公知であるセグメント縮合法により、溶液中で又は固相技術又はそれらの組合せを用いてカップリングすることである。更に、上述のストラテジーの組合せは、例えば還元されたペプチド結合を含む生物学的に活性なペプチドからの、改変されたペプチド配列をリンカーＬによりペプチド配列Ｚにカップリングする場合に特に適用できると予想される。この場合、最初にアミノ酸（及びリンカー）の連続的なカップリングにより固定化されたフラグメントＬ−Ｚを調製し、次に（溶液中で又は固相技術を全体的に又は部分的に用いて調製した）生物学的に活性なペプチド配列ＸをフラグメントＬ−Ｚに連結することが有利であり得る。これにより、本発明は、固定化されたリンカー−ペプチド配列Prot−Ｌ−Ｚ− SSM〔式中、Ｌは一般式−Ｏ−Ｃ（Ｒ¹）(Ｒ²)Ｃ(＝Ｏ)(式中、Ｒ¹及びＲ²は上述の通りである)であり、ProtはＨ又はヒドロキシ保護基であり、ここでヒドロキシ保護基は、ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、トリチル、９−（９ −フェニル）キサンテニル（ピキシル）、テトラヒドロピラノール、メトキシテトラヒドロピラノール、トリメチルシリル、トリイソプロピルシリル、tert−ブチルジメチルシリル、トリエチルシリル、フェニルジメチルシリル、ベンジロキシカルボニル、置換化ベンジロキシカルボニルエーテル類、例えば２−ブロモベンジロキシカルボニル、tert−ブチルエーテル、メチルエーテル、アセチル、ハロゲン置換化アセチル類、例えばクロロアセチル及びフルオロアセチル、イソブチリル、ピバロリル、ベンゾイル及び置換化ベンゾイル類、メトキシメチル、ベンジルエーテル及びベンジルエーテル類、例えば２，６−ジクロロベンジル等から選択され；SSMは、例えば官能化樹脂、例えばポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリエチレングリコール、セルロース、ポリエチレン、ポリスチレン上に融合されたポリエチレングリコール、ラテックス、ダイナビーズ等から選択される固体支持材料を示し；そしてＺは上述の通りである〕にも関する。プレ配列ＺのＣ末端アミノ酸が、一般的なリンカー、例えば２，４−ジメトキシ−４’−ヒドロキシ−ベンゾフェノン、４−（４−ヒドロキシ−メチル−３− メトキシフェノキシ）−ブチル酸、４−ヒドロキシ−メチル安息香酸、４−ヒドロキシメチル−フェノキシ酢酸、３−（４−ヒドロキシメチルフェノキシ）プロピオン酸、及びｐ−〔（Ｒ，Ｓ）−ａ〔１−（９Ｈ−フルオレニ−９−イル）メトキシホルムアミド〕−２，４−ジメトキシベンジル〕−フェノキシ−酢酸により、固体支持材料に結合することが必要であり又は要求されることが理解されるはずである。結果として、本発明は、本発明によるプロドラッグの調製のための固定化されたリンカーペプチド配列Prot−Ｌ−Ｚ−SSMの使用に、並びに固定化されたリンカーペプチド配列Ｈ−Ｌ−Ｚ−SSMに、Ｃ末端が活性化された形態(Ｘ−Act)の対応するペプチドを連結することを含む。ペプチド（Ｘ−OH）、ペプチドアミド( Ｘ−NH₂)、又はペプチドエステル（Ｘ−OR）のプロドラッグの調製のための方法にも関する。本発明は、ペプチド（Ｘ−OH）、ペプチドアミド(Ｘ−NH₂)、又はペプチドエステル（Ｘ−OR）のプロドラッグの調製のための更なる方法であって、ａ）カルボキシル活性化形態におけるＮ−α−保護化アミノ酸又はＣ末端活性化形態におけるＮ−α−保護化ジペプチドを、固定化されたリンカーペプチド配列Ｈ−Ｌ−Ｚ−SSMに連結し、それにより固定化されたＮ−α−保護化ペプチドフラグメントを形成し、ｂ）前記Ｎ−α−保護基を除去し、それにより保護されていないＮ末端を有する固定化されたペプチドフラグメントを形成し、ｃ）更なるカルボキシル活性化形態におけるＮ−α−保護化アミノ酸又は更なるＣ末端活性化形態におけるＮ−α−保護化ジペプチドを、前記固定化されたペプチドフラグメントの保護されていないＮ末端に連結し、そして要求されるペプチド配列Ｘが得られるまで、ステップｂ）及びｃ）の除去／連結手順をくり返し、そして次にｄ）前記固体支持材料からプロドラッグＸ−Ｌ−Ｚを取り離してＣ末端カルボン酸、アミド、又はエステルの形態における遊離プロドラッグを得ることを含む方法にも関する。連結、除去及び切断ステップは、保護ストラテジー及び選択された固相材料を考慮に入れて当業者に周知の方法により行われる。上述の型の、ＸとＬとの間の一方の手及びＬとＺとの間の他方の手における結合を確立することに関して、これらの結合は、チオールエステル、エステル、カルボキサミド、スルホンアミド、アルキルアミン、カルバメート、チオカルバメート、尿素、チオウレア、チオアミド、シアノメチレンアミノ、又はＮ−メチルアミド結合又はグルーピングを確立するためのそれ自体周知の方法により確立することができる。（例えば、J．March，“Advanced Organic Chemistry”3rd edition，John Wiley & Sons，1985及びその中の引用文献を参照のこと。これにより、例えば、エステルは、適切なカルボン酸の活性化誘導体（ハロゲン化酸、酸無水物、活性化エステル、例えばHObt−エステル等）から、関連するヒドロキシ化合物との反応により形成することができる。同様に、カルボキシアミドは、適切なカルボン酸の活性化誘導体（ハロゲン化酸、酸無水物、活性化エステル、例えばHObt−エステル等）を、関連するアミノ化合物と、ペプチド化学の当業者に周知であるように、反応させることにより形成することができ；スルホンアミドは、スルホニルクロライドを適切なアミノ化合物と反応させることにより形成することができ；アルキルアミン結合又はグルーピングは、問題の炭素原子上のトシル、ハロゲン、及びメシチルのような脱離基を有する適切な化合物を、関連するアミノ化合物と、求核置換反応において反応させることによって形成することができ；カルバメート結合又はグルーピングは、適切なアルコールをホスゲンで処理して対応するクロロカーボネートを供し、次にそれを関連するアミノ化合物と反応させることにより形成することができ；チオカルバメート結合又はグルーピングは、適切なアルコールをチオホスゲンで処理して対応するクロロチオカルボネートを供し、次にそれを関連するアミノ化合物と反応させることにより形成することができ；尿素結合又はグルーピングは、問題の炭素原子上にイソシアネート基を有する適切な化合物を関連するアミノ化合物と反応させることにより形成することができ；チオウレア結合又はグルーピングは、問題の炭素原子上にイソチオシアネート基を有する適切な化合物を関連するアミノ化合物と反応させることにより形成することができ；チオアミド結合又はグルーピングは、適切なカルボン酸のチオノエステルを関連するアミノ化合物と反応させることにより形成することができ、ここで、チオノエステルは、例えば対応するピペリジドから形成される。更に、広く行われる条件下で反応性である官能基を有するアミノ酸単位を用いる場合、側鎖保護基を含むことが必要とされ又は要求され得る。その必要な保護スキームは、当業者に周知であろう（例えば、M．Bodansky及びA．Bodanszky， “The Practice of Peptide Synthesis”，2．Ed，Springer-Verlag，1994及びJ ．Jones，“The Chemical Synthesis of Peptides”，Clarendon Press，1991を参照のこと）。これにより、本発明のペプチドプロドラッグは、酸、例えばトリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、臭化水素、塩化水素、フッ化水素等、又は塩基、例えばアンモニア、ヒドラジン、アルコキシド、例えばナトリウムエトキシド、ヒドロキシド、例えば水酸化ナトリウム等により固体支持体材料から開裂することができる。本発明のプロドラッグは新規なクラスの化合物を供するので、本発明のなお更なる態様は、一般式Ｉ：Ｘ−Ｌ−Ｚ（Ｉ）〔式中、Ｘは、ＸのＣ末端カルボニル官能基においてＬに結合したペプチド配列であり、Ｌは、ＸのＣ末端カルボニルとＬとの間の結合がＣ−Ｎアミド結合と異なる３〜９の骨格原子を含むリンキング基であり；並びにＺは、２〜20のアミノ酸単位のペプチド配列であり、ＺのＮ末端窒素原子においてＬに結合し、ここで各々のアミノ酸単位は、独立して、Ala，Leu，Ser，Thr ，Tyr，Asn，Gln，Asp，Glu，Lys，Arg,His，Met，Orn、及び式II： −NH−Ｃ（Ｒ³）(Ｒ⁴)−Ｃ（＝Ｏ）− （II）（式中、Ｒ³及びＲ⁴は、独立して、Ｃ_1-6−アルキル、フェニル、及びフェニル−メチルから選択され、ここでＣ_1-6−アルキルは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、スルホノ、及びカルボキシから選択される１〜３の置換基で任意に置換され、フェニル及びフェニル−メチルは、Ｃ_1-6−アルキル、Ｃ_2-6−アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、スルホノ、及びカルボキシから選択される１〜３の置換基で任意に置換され、又はＲ³ 及びＲ⁴はそれらに結合した炭素原子と一緒に、シクロペンチル、シクロヘキシル、又はシクロヘプチル環を形成する）のアミノ酸単位から選択される〕の化合物又はその塩に関する。本発明は、更に以下の実施例により更に詳述される。実験ペプチド合成一般的手順用いる略号： tBu＝tert−ブチル DAMGO＝Tyr-(D-Ala)-Gly-Ψ〔-C(=O)-N(CH₃)-〕Phe-NH-CH₂-CH₂OH DCC＝ジシクロヘキシルカルボジイミド DCM＝ジクロロメタン DIC＝ジイソプロピルカルボジイミド DIEA＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン DMAP＝４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ピリジン Dhbt−OH＝３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン DMF＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド DSIP＝デルタ睡眠誘導ペプチド、 H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH EDT＝エタンジチオール ES−MS＝エレクトロスプレー質量分析 Fmoc＝９−フルオレニルメチルオキシカルボニル cHex＝シクロヘキシル HAA＝ヒドロキシ酢酸 HMPA＝ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸 HObt＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール HPLC＝高性能液体クロマトグラフィー Ma＝マンデル酸 NHS＝Ｎ−ヒドロキシ−コハク酸イミドエステル PEG−PS＝ポリスチレン上に融合したポリエチレングリコール Pfp＝ペンタフルオロフェニル SEM＝平均の標準誤差 TFA＝トリフルオロ酢酸Ｚ＝ベンジロキシカルボニル装置及び合成ストラテジーペプチドは、Ｎ−α−アミノ保護基及び側鎖官能基のための適切な一般的保護基として９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）を用いて、ろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内でバッチ様に合成した（Dryland，A．及びSheppard，R．C．(1986)J．Chem．Soc.，Perkin Trans ．1，125-137）。溶媒 y)を、強陽イオン交換樹脂（Lewatit S 100 MB／Ｈ強酸、Bayer AGLeverkusen， Germany）を通すことにより精製し、そして遊離アミンが存在するなら黄色（Dhb t−Ｏ−アニオン）を生ず３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（Dhbt−OH）の添加により用いる前に、遊離アミンについて分析 Germany)を精製なしに直接用いた。アミノ酸及びジペプチド Fmoc−保護化アミノ酸は、適切な側鎖保護形態でMilliGen（UK）から購入した。さもなければ、保護されたアミノ酸(H-Glu(OtBu)-0tBu；H-Glu(cHex)-OH；Ｚ- Glu(OtBu)-OH)及びジペプチドFmoc-Phe-Gly-OH及びH-Phe-Leu-OHは、Bachem(Swi tzerland)から購入した。カップリング試薬 en(Germany)から購入し、作用の前に蒸留し、ジシクロヘキシルカ購入し、蒸留により精製した。リンカーリンカー（４−ヒドロキシメチルフェノキシ）酢酸(HMPA)、Novabiochem，Swi tzerland；ヒドロキシ酢酸、（Ｓ）−（＋）−マンデル酸99％純度、Aldrich，G ermany，及び（Ｒ）−（−）−マンデル酸98.5％純度、M&R，Englandを、樹脂に又はDICにより形成された予め形成した１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOb t）としてプレ配列ＺのＮ末端に連結した。固体支持体 Fmoc−ストラテジーにより合成されたペプチドを、0.05Ｍ又はそれより高濃度のDMF中Fmocで保護された活性化アミノ酸を用いて２つの異なる型の固体支持体上で合成した：１）ポリスチレン上に融合されたポリエチレングリコール；Nova Syn TG樹脂、0.29mmol/ｇ、Novabiochem，Switzerland)；２）NovaSyn K125(サルコシンメチルエステル0.11mmol／ｇで官能化されたKieselguhr支持ポリジメチルアクリルアミド樹脂；Novabiochem，Switzerland)。触媒及び他の試薬ジイソプロピルエチルアミン（DIEA）は、Aldrich，Germanyから購入し、エチレンジアミンはFlukaから購入し、ピペリジン及びピ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン（DMAP）はFluka，Switzerlandから購入し、対称な無水物に関するカップリング反応における触 t，Germanyから購入した。３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（Dhbt−OH）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（HObt）は、Fluka，Switzerlandから得た。Fmoc NHSはAldrich，Germanyから購入した。酵素ウシ膵臓からのカルボキシペプチダーゼＡ(EC．3．4．17．1)Ｉ型、ブタ腎臓からのロイシンアミノペプチダーゼ(EC．3．4．11．1)III−CP型、ウマ血清からのブチリルコリンエステラーゼ（EC．3.1．1．8)、ウシ膵臓からのα−キモトリプシン(EC．4．4．21．1)、及びブタ胃粘膜ウシ膵臓からのペプシンＡ(EC．3．4 ．23．1)は、Sigma，UKから得た。カップリング手順第１のアミノ酸を適切なＮ−α−保護化アミノ酸から形成したD MF及びDIC又はDCC中の対称な無水物として連結した。以下のアミノ酸を、DMF中のDICにより適切なＮ−α−保護化アミノ酸及びHObtから作った予め形成したHOb tエステルとして連結した。アシル化は、テスト中のFmoc脱保護を防ぐために80 ℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した(Latsen，B．P．及びHolm，A.，I nt．J．Peptide Protein Res．43，1994，1〜9)。Ｎ−α−アミノ保護基の脱保護 Fmoc基の脱保護は、DMF中20％のピペリジンでの処理（１×３及び１×７分）、次の、Dhbt−OHの水を切ったDMFへの添加の後に、黄色（Dhbt−Ｏ−）が検出されなくなるまでDMFで洗うことにより行った。樹脂からのペプチドの酸での開裂 kfurt，Germany)−水ｖ／ｖで又は95％TFA及び５％エタンジチオールｖ／ｖで、室温で２時間、処理することにより樹脂から切断した。そのろ過した樹脂を95％ TFA−水で洗い、ろ液及び洗浄物を減圧下でエパポレートした。その残基をエーテルで洗い、酢酸−水で凍結乾燥させた。その粗凍結乾燥産物を高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）により分析し、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ ESMS）により同定した。予め形成したHObt−エステル３等量のＮ−α−アミノ保護化アミノ酸又はヒドロキシ酢酸又は（Ｓ）−（＋）−マンデル酸を、３等量のHObt及び３等量のDICと一緒にDMFに溶かした。その溶液を10分、室温に放置し、次に樹脂に加え、それを予め活性化したアミノ酸の添加の前にDMF中0.2％のDhbt−OHの溶液で洗った。予め形成した対称の無水物６等量のＮ−α−アミノ保護化アミノ酸をDCMに溶かし、０℃に冷やした。DCC (３等量)を加え、その反応を10分、続けた。溶媒を真空で除去し、残留物をDMF に溶かした。その溶液をろ過し、直ちに樹脂に加え、次に0.1等量のDMAPを加えた。第１のＮ−α−アミノ保護化アミノ酸のカップリング収率の評価３〜５mgの乾燥Fmoc−保護化ペプチド−樹脂を室温で10分、DMF中20％ピペリジン５mlで処理し、ジベンゾフルベン−ピペリジンアダクトのUV吸光度を301nm で評価した。その収率を、Fmoc-Ala-OH標準に基づき計算した伸長係数ε₃₀₁を用いて決定した。 PepSyn Ｋ樹脂上でのペプチド合成乾燥PepSyn Ｋ（約500mg）をエチレンジアミンにより保護し、室温で一晩、放置した。その樹脂を水を切って各々５分、DMF 10×15mlで洗った。水を切った後、その樹脂をDMF ｖ／ｖ中10％のDIEAで洗い（２×15ml、各々15分）、最後に、その水を切ったDMFへのDhbt−OHの添加により黄色が検出できなくなるまでDMFで洗った。３等量のHMPA、３等量のHObt及び３等量のDICを10mlのDMFに溶かし、10 分、活性化し続け、その後、その混合物を樹脂に加え、そのカップリングを24時間、続けた。その樹脂を水を切り、DMFで洗い（10×15ml、各々５分）、そしてニンヒドリンテストによりアシル化を検査した。第１のアミノ酸を予め形成した対称の無水物（上記参照のこと）としてカップリングし、そしてそのカップリング収率を上述の通り評価した。全ての場合、70％より大きかった。次に合成を、 “バッチ様”に続けた。 PepSyn Ｋ上での連続的バッチ様ペプチド合成第１のアミノ酸が結合した樹脂（約500mg）を、ろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、そしてFmoc基を上述のように脱保護化した。その配列に従う残りのアミノ酸を、上述の通り調製したDMF(５ml)中の予め形成されたFmoc保護化、必要に応じて側鎖保護化したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。そのカップリングを、他に示さなければ２時間、続けた。次に過剰な試薬をDMF洗浄（1 2分、流速１ml／分）により除去した。全てのアシル化を、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を終えた後、ペプチド−樹脂をDMF(10分、流速１ml／分)、DCM(５×５ml、各々１分)、及び最後にジエチルエーテル（５×５ ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。 PEG −PS上でのバッチ様ペプチド合成 NovaSyn TG樹脂(250mg、0.27〜0.29mmol／g)をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れた。その樹脂をDMF(５ml)中で膨潤させ、DMF中20％ピペリジンで処理して樹脂上の非プロトン化アミノ基の存在を確保した。その樹脂を水を切り、その水を切ったDMFへのDhbt−OHの添加の後、黄色が検出できなくなるまで、DMFで洗った。HMPA（３等量）を上述のように予め形成したHObt−エステルとしてカップリングし、そのカップリングを24時間、続けた。その樹脂の水を切り、DMFで洗い（５×５ml、各々５分）、そしてアシル化をニンヒドリンテストにより検査した。第１のアミノ酸を上述の通り予め形成した対称無水物としてカップリングした。その第１のFmoc−保護化アミノ酸のカップリング収率を上述の通り評価した。それは全ての場合、60％を超えた。その配列に従う続くアミノ酸を、上述の通り、予め形成したFmoc−保護化し、必要に応じて側鎖保護したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。そのカップリングを、他に示さなければ、２時間、続けた。その樹脂を過剰な試薬を除去するために、水を切って、DMFで洗った（５×５ml、各々５分）。全てのアシル化を80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を完了した後、ペプチド−樹脂をDMF(３×５ml、各々５分)、DCM(３×５ml、各々１分)、及び最後にジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空下で乾燥させた。 HPLC 条件無勾配HPLC分析を、LC−6Aポンプ、215nmで動作させるMERCK HITACHI L−4000 UVディテクタ一及び２，20、又は100μｌループのRheodyne 7125注入バルブからなるShimadzuシステムで行った。無勾配分析のために用いたカラムはSpherisorb ODS−２(100×３mm；５−μｍ粒子)であった。勾配を用いるHPLC分析は、MERCK HITACHI L−6200 Intelligentポンプ、215nmで動作させるMERCK HITACHI L−40 00UVディテクター及び20μｌループのRheodyne 7125注入バルブで行った。用いたカラムはRescorce^TM RPC 1mlであった。緩衝液Ａは水中0.1容量％TFAであり、緩衝液Ｂは90容量％アセトニトリル、9. 9容量％水及び0.1容量％TFAであった。これら緩衝液は、ペプチド分析のために以下の勾配を用いて1.3〜1.5ml／分の流速でカラムを通してポンプした：１．酵素研究のための、０％−100％Ｂの直線勾配（30分）、２．40−100％Ｂの直線勾配（15分）、３．10−40％Ｂの直線勾配（15分）、又は４．０−50％Ｂの直線勾配（15分）。無勾配分析のために用いた移動相は、個々の実験の記載において言及されよう。質量分析法マス・スペクトルは、エレクトロスプレー(ESI)プローブ（ES−MS）を備えたF innigan Mat LCQ装置で得た。個々のペプチドのペプチド合成１．NovaSyn TentaGelでのH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Glu₆-OHのペプチド合成乾燥NovaSyn TG樹脂（0.29mmol／ｇ、250mg）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、プレ配列Glu₆を仕上げるまで“ PEG−PS上でのバッチ様ペプチド合成”下に記載されるように処理した。Leu−エンケファリンを形成する続くアミノ酸を、DICにより作ったDMF(５ml)中の予め形成したFmoc−保護した、必要に応じて側鎖保護したHObtエステルとしてカップリングした。最後の５回のカップリングの各々の前に、そのカップリング反応の進行に伴う黄色の消滅を追跡するために、その樹脂をDhbt−OHの溶液（25ml中80mg ）で洗った。その黄色がもはや見えなくなった時、その樹脂をDMFで洗う（５× ５ml、各々５分）ことによりカップリングを中止した。次にアシル化を、上述の通り80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を終えた後、そのペプチド−樹脂をDMF(３×５ml、各々１分)、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、酢酸エチルから凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、それは欠失及びFmoc保護化配列なしに均一であることが見い出された。その純度は90％より大きいことが見い出され、そのペプチドの同一性をES−MSにより確認した。収率：76％。２．PepSyn Ｋ樹脂上でのH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-HAA-Glu₆-OHの合成乾燥PepSyn Ｋ（約500mg、0.1mol／ｇ）を、ろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、上述のようにエチレンジアミンで処理した。プレ配列を形成する最初の６グルタミン酸単位をDhbt−OH（１等量）の添加と共にFmoc−保護化Pfpエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化は、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。Fmoc基を上述の通り脱保護化した。プレ配列を仕上げた後、その脱保護化したペプチド−樹脂を、上述のように予め活性化したHObt−エステルとして６等量のヒドロキシ酢酸と反応させ、そのカップリングを24時間、続けた。過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。アシル化をニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う次のアミノ酸（ロイシン）を、上述の通り、予め形成した対称無水物としてカップリングし、その反応を２時間、続けた。次に過剰な試薬を DMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。少量の樹脂サンプルを、カップリング収率を検査するために除去し、それを上述のように評価し、90％であることを見い出した。次に上述のようにFmoc基の開裂により合成を続けた。その配列に従う次のカップリングを、ジケトピペラジン形成を防ぐために、ジペプチドカップリングとして行った。これにより、Fmoc-Gly-Phe-OHを２時間、上述のように調製したDMF(５ml)中の予め形成したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。次に、過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、そのアシル化を、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。次に、Fmoc基を、上述の通り、DMF中20％ピペリジンでの処理により除去した。その配列に従う残りのアミノ酸を、２時間、DMF(２ml)中１等量のD hbt−OHの添加と共に、予め形成したFmoc−保護化し、必要に応じて側鎖保護化したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化を、上述の通り行ったニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う残りのアミノ酸を、DMF(２ml)中Dhbt−OH（１等量）の添加と共にFmoc−保護化したPfpエステル（３等量）としてカップリングした。過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、アシル化を、上述のように80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。Fmoc基を上述の通り脱保護化した。合成を完了した後、ペプチド−樹脂をDMF(10分、流速１ml／分) 、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空下で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、炭酸水素アンモニウム(0.1Ｍ)から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、均一であることを見い出し、その純度が80％を超えることを見い出し、そのペプチドの同一性をESMS により確認し、収率は58％であった。３．PepSyn Ｋ樹脂でのH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-Ma)-Glu₆-OHの合成乾燥PepSyn Ｋ（約500mg、0.1mmol／ｇ）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、上述の通りエチレンジアミンで処理した。プレ配列を形成する最初の６グルタミン酸を、Dhbt−OH（１等量）の添加と共にFmoc−保護化Pfpエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化を、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。Fmocを上述の通り脱保護化した。プレ配列を仕上げた後、その脱保護化したペプチド− 樹脂を、上述の通り、予め活性化したHObt−エステルとして６等量の（Ｓ）−（＋）−マンデル酸と反応させ、カップリングを24時間、続けた。過剰な試薬はDM F洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。そのアシル化をニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う次のアミノ酸（ロイシン）を、上述のように予め形成した対称無水物としてカップリングし、その反応を２時間、続けた。次に、過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。少量の樹脂サンプルをカップリング収率を検査するために除去し、それを上述のように評価し、85％であると見い出された。次にその合成を、上述の通り、Fmoc基の開裂により続けた。その配列に従う次のカップリングは、ジケトピペラジン形成を防ぐために、ジペプチドカップリングとして行った。これにより、２時間、上述の通り調製した DMF(５ml)中予め形成したHObtエステル（３等量）としてFmoc-Gly-Phe-OHをカップリングした。次に、過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、そのアシル化は、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。次にそのFmoc基を上述の通りDMF中20％ピペリジンでの処理により除去した。その配列に従う残りのアミノ酸を、２時間、DMF(２ml)中１等量のDhbt−OH の添加と共に予め形成したFmoc−保護化したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化を、上述の通り行ったニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う残りのアミノ酸を、DMF(２ml)中のDhbt−OH（１等量）の添加と共にFmoc−保護化したPfpエステルとしてカップリングした。過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、アシル化を、上述の通り、8 0℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。そのFmoc基を上述の通り脱保護化した。合成を完了した後、そのペプチド−樹脂を、DMF(10分、流速１ml／分 )、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを、上述の通り樹脂から開裂し、炭酸水素アンモニウム(0.1Ｍ) から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、均一であることを見い出し、その純度は80％を超えることを見い出し、そのペプチドの同一性をES MSにより確認し、そしてその収率は57％であった。プロドラッグH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((R)-(−)-Ma)-Glu₆-OHを３について上述されるように調製した。４．PepSyn Ｋ樹脂でのH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-Ma)-Lys₆-OHの合成乾燥PepSyn Ｋ（約500mg、0.1mmol／ｇ）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、上述の通りエチレンジアミンで処理した。プレ配列を形成する最初の６リジンを、Dhbt−OH（１等量）の添加と共に Fmoc−保護化Pfpエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化を、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。Fmocを上述の通り脱保護化した。プレ配列を仕上げた後、その脱保護化したペプチド−樹脂を、上述の通り、予め活性化したHObt−エステルとして６等量の（Ｓ）−（＋）− マンデル酸と反応させ、カップリングを24時間、続けた。過剰な試薬はDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。そのアシル化をニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う次のアミノ酸（ロイシン）を、上述のように予め形成した対称無水物としてカップリングし、その反応を２時間、続けた。次に、過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。少量の樹脂サンプルをカップリング収率を検査するために除去し、それを上述のように評価し、 85％であると見い出された。次にその合成を、上述の通り、Fmoc基の開裂により続けた。その配列に従う次のカップリングは、ジケトピペラジン形成を防ぐために、ジペプチドカップリングとして行った。これにより、２時間、上述の通り調製した DMF(５ml)中予め形成したHObtエステル（３等量）としてFmoc-Gly-Phe-OHをカップリングした。次に、過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、そのアシル化は、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。次にそのFmoc基を上述の通りDMF中20％ピペリジンでの処理により除去した。その配列に従う残りのアミノ酸を、２時間、DMF(２ml)中１等量のDhbt−OHの添加と共に予め形成したFmoc−保護化したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化を、上述の通り行ったニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う残りのアミノ酸を、DMF(２ml)中のDhbt −OH（１等量）の添加と共にFmoc−保護化したPfpエステルとしてカップリングした。過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、アシル化を、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。そのFmoc基を上述の通り脱保護化した。合成を完了した後、そのペプチド−樹脂を、DMF(10分、流速１ml／分)、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを、上述の通り樹脂から開裂し、炭酸水素アンモニウム(0.1Ｍ) から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、均一であることを見い出し、その純度は80％を超えることを見い出し、そのペプチドの同一性をES MSにより確認し、そしてその収率は57％であった。プロドラッグH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((R)-(−)-Ma)-Lys₆-OHを４について上述されるように調製した。５．PepSyn Ｋ樹脂でのH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-Ma)-(LysGlu)₃-OH の合成乾燥PepSyn Ｋ（約500mg、0.1mmol／ｇ）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、上述の通りエチレンジアミンで処理した。プレ配列を形成する最初の６アミノ酸を、Dhbt−OH（１等量）の添加と共にFmoc−保護化Pfpエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化を、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。Fmoc基を上述の通り脱保護化した。プレ配列を仕上げた後、その脱保護化したペプチド− 樹脂を、上述の通り、予め活性化したHObt−エステルとして６等量の（Ｓ）−（＋）−マンデル酸と反応させ、カップリングを24時間、続けた。過剰な試薬はDM F洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。そのアシル化をニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う次のアミノ酸（ロイシン）を、上述のように予め形成した対称無水物としてカップリングし、その反応を２時間、続けた。次に、過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。少量の樹脂サンプルをカップリング収率を検査するために除去し、それを上述のように評価し、85％であると見い出された。次にその合成を、上述の通り、Fmoc基の開裂により続けた。その配列に従う次のカップリングは、ジケトピペラジン形成を防ぐために、ジペプチドカップリングとして行った。これにより、２時間、上述の通り調製した DMF(５ml)中予め形成したHObtエステル（３等量）としてFmoc-Gly-Phe-OHをカップリングした。次に、過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、そのアシル化は、上述の通り、80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。次にそのFmoc基を上述の通りDMF中20％ピペリジンでの処理により除去した。その配列に従う残りのアミノ酸を、２時間、DMF(２ml)中１等量のDhbt−OH の添加と共に予め形成したFmoc−保護化したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。そのアシル化を、上述の通り行ったニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う残りのアミノ酸を、DMF(２ml)中のDhbt−OH（１等量）の添加と共にFmoc−保護化したPfpエステルとしてカップリングした。過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去し、アシル化を、上述の通り、8 0℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。そのFmoc基を上述の通り脱保護化した。合成を完了した後、そのペプチド−樹脂を、DMF(10分、流速１ml／分)、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを、上述の通り樹脂から開裂し、炭酸水素アンモニウム(0.1Ｍ) から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、均一であることを見い出し、その純度は80％を超えることを見い出し、そのペプチドの同一性をES MSにより確認し、そしてその収率は63％であった。プロドラッグH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((R)-(−)-Ma)-(LysGlu)₃-OHを５について上述されるように調製した。６．NovaSyn TentaGelでのFmoc-Phe-Leu-HAA-Glu₆-OHの合成乾燥NovaSyn TG樹脂（0.29mmol／ｇ、250mg）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、プレ配列Glu₆を仕上げるまで、 “PEG−PSでのバッチ様ペプチド合成”下に記載されるように処理した。次に、ペプチド−樹脂を上述の通り予め活性化したHObt−エステルとして６等量のヒドロキシ酢酸と反応させ、そのカップリングを24時間、続けた。過剰な試薬をDMF 洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。そのアシル化をニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う次のアミノ酸（ロイシン）を上述の通り予め形成した対称無水物としてカップリングし、その反応を２時間、続けた。次に過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。少量の樹脂−サンプルを、そのカップリング収率を検査するために除去し、それを上述の通り評価し、約100％であると見い出した。その配列に従う次のアミノ酸を、DICにより形成したDMF(５ml)中の予め形成したFmoc−保護化HObtエステル（３等量）としてカップリングした。最後の２つのカップリングの前に、その樹脂を、カップリング反応の進行に伴う黄色の消失を追跡するために、Dhbt−OH（25ml中80mg）の溶液で洗った。黄色がもはや見えなくなった時に、そのカップリングを、その樹脂をDMFで洗う（５×５ml、各々５分）ことにより中止した。次にそのアシル化を、上述のように80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を完了した後、ペプチド−樹脂をDMF(３×５ml、各々１分)、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、炭酸水素アンモニウム(0.1Ｍ)から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、欠失及びFmoc−保護化配列のない均一であることが見い出された。その純度は、90％を超え、そのペプチドの同一性をES−MSにより確認し、収率は83％であった。７．NovaSyn TentaGelでのFmoc-Phe-Leu-((S)-(＋)-Ma)-Glu₆-OHのペプチド合成乾燥NovaSyn TG樹脂（0.29mmol／ｇ、250mg）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、プレ配列Glu₆を仕上げるまで、 “PEG−PSでのバッチ様ペプチド合成”下に記載されるように処理した。次に、ペプチド−樹脂を上述の通り予め活性化したHObt−エステルとして６等量の（Ｓ）−（＋）−マンデル酸と反応させ、そのカップリングを24時間、続けた。過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。そのアシル化をニンヒドリンテストにより検査した。その配列に従う次のアミノ酸（ロイシン）を上述の通り予め形成した対称無水物としてカップリングし、その反応を２時間、続けた。次に過剰な試薬をDMF洗浄（12分、流速１ml／分）により除去した。少量の樹脂−サンプルを、そのカップリング収率を検査するために除去し、それを上述の通り評価し、90％であると見い出した。その配列に従う次のアミノ酸を、DIC により形成したDMF(５ml)中の予め形成したFmoc−保護化HObtエステル（３等量）としてカップリングした。最後の２つのカップリングの前に、その樹脂を、カップリング反応の進行に伴う黄色の消失を追跡するために、Dhbt−OH（25ml中80 mg）の溶液で洗った。黄色がもはや見えなくなった時に、そのカップリングを、その樹脂をDMFで洗う（５×５ml、各々５分）ことにより中止した。次にそのアシル化を、上述のように80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を完了した後、ペプチド−樹脂をDMF(３×５ml、各々１分)、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、炭酸水素アンモニウム(0.1Ｍ)から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、欠失及びFmoc−保護化配列のない均一であることが見い出された。その純度は、90％を超えることを見い出し、そのペプチドの同一性をES−MSにより確認し、収率は71％であった。８．NovaSyn TentaGelでのH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys₆-OHのペプチド合成乾燥NovaSyn TG樹脂（0.29mmol／ｇ、250mg）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、プレ配列Glu₆を仕上げるまで“ PEG−PS上でのバッチ様ペプチド合成”下に記載されるように処理した。Leu−エンケファリンを形成する続くアミノ酸を、DICにより作ったDMF(５ml)中の予め形成したFmoc−保護したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。最後の５回のカップリングの各々の前に、そのカップリング反応の進行に伴う黄色の消滅を追跡するために、その樹脂をDhbt−OHの溶液（25ml中80mg）で洗った。その黄色がもはや見えなくなった時、その樹脂をDMFで洗う（５×５ml、各々５分）ことによりカップリングを中止した。次にアシル化を、上述の通り80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を終えた後、そのペプチド−樹脂をDMF(３×５ml、各々１分)、DCM(３×５m l、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、酢酸から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、それは欠失及びFmoc保護化配列なしに均一であることが見い出された。その純度は98％より大きいことが見い出され、そのペプチドの同一性をES−MSにより確認した。収率：84％。９．NovaSyn TentaGelでのH-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-Glu₆-OH のペプチド合成乾燥NovaSyn TG樹脂（0.29mmol／ｇ、250mg）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、プレ配列Glu₆を仕上げるまで“ PEG−PS上でのバッチ様ペプチド合成”下に記載されるように処理した。DSIP配列を形成する続くアミノ酸を、DICにより作ったDMF(５ml)中の予め形成したFmoc −保護したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。最後の９回のカップリングの各々の前に、そのカップリング反応の進行に伴う黄色の消滅を追跡するために、その樹脂をDhbt−OHの溶液（25ml中80mg）で洗った。その黄色がもはや見えなくなった時、その樹脂をDMFで洗う（５×５ml、各々５分）ことによりカップリングを中止した。次にアシル化を、上述の通り80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を終えた後、そのペプチド−樹脂をDMF(３×５ml 、各々１分)、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、酢酸から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、それは欠失及びFmoc保護化配列なしに均一であることが見い出された。その純度は98％より大きいことが見い出され、そのペプチドの同一性をES−MSにより確認した。収率：80％。 10 ．NovaSyn TentaGelでのH-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(LysGlu) ₃-OHのペプチド合成乾燥NovaSyn TG樹脂（0.29mmol／ｇ、250mg）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、プレ配列(LysGlu)₃を仕上げるまで“PEG−PS上でのバッチ様ペプチド合成”下に記載されるように処理した。D SIP配列を形成する続くアミノ酸を、DICにより作ったDMF(５ml)中の予め形成したFmoc−保護したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。最後の９回のカップリングの各々の前に、そのカップリング反応の進行に伴う黄色の消滅を追跡するために、その樹脂をDhbt−OHの溶液（25ml中80mg）で洗った。その黄色がもはや見えなくなった時、その樹脂をDMFで洗う（５×５ml、各々５分）ことによりカップリングを中止した。次にアシル化を、上述の通り80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を終えた後、そのペプチド−樹脂をDMF(３ ×５ml、各々１分)、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、酢酸から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、それは欠失及びFmoc保護化配列なしに均一であることが見い出された。その純度は98％より大きいことが見い出され、そのペプチドの同一性をES−MSにより確認した。収率：91％。 11 ．NovaSyn TentaGelでのH-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH(DSIP) のペプチド合成乾燥NovaSyn TG樹脂（0.29mmol／ｇ、250mg）をろ過のためのポリプロピレンフィルターを備えたポリエチレン容器内に入れ、“PEG−PS上でのバッチ様ペプチド合成”下に記載されるように処理した。第１のアミノ酸を上述の通り予め形成した対称無水物としてカップリングした。その第１のFmoc−保護化アミノ酸のカップリング収率を上述の通り評価した。それは全ての場合、60％を超えた。DS IP配列を形成する続くアミノ酸を、DICにより作ったDMF(５ml)中の予め形成した Fmoc−保護したHObtエステル（３等量）としてカップリングした。最後の８回のカップリングの各々の前に、そのカップリング反応の進行に伴う黄色の消滅を追跡するために、その樹脂をDhbt−OHの溶液（25ml中80mg）で洗った。その黄色がもはや見えなくなった時、その樹脂をDMFで洗う（５×５ml、各々５分）ことによりカップリングを中止した。次にアシル化を、上述の通り80℃で行ったニンヒドリンテストにより検査した。合成を終えた後、そのペプチド−樹脂をDMF(３× ５ml、各々１分）、DCM(３×５ml、各々１分)、ジエチルエーテル（３×５ml、各々１分）で洗い、真空で乾燥させた。そのペプチドを上述の通り樹脂から開裂し、酢酸から凍結乾燥した。その粗凍結乾燥産物をHPLCにより分析し、それは欠失及びFmoc保護化配列なしに均一であることが見い出された。その純度は98％より大きいことが見い出され、そのペプチドの同一性をES−MSにより確認した。収率：78％。一般的合成 12 ．Fmoc-Phe-Phe-Leu-OHの合成： 1.0ｇ(3.6mmol)のH-Phe-Leu-OHを25mlの10％炭酸ナトリウムｗ／ｖに溶かし、 25mlのジオキサンを加えた。この混合物に、10mlのジオキサンに溶かした1.24ｇ（3.68mmol）FmocNHSを滴下して加えた。生じた混合物を室温で一晩、撹拌した。真空でのエパポレーションによりジオキサンを除去し、生じた塩基性水溶液をエーテルで３回、抽出した（各々５ml ）。そのpHを、HCl(1Ｍ)を加えることにより２に調節し、その水性相を３回、酢酸エチルで抽出した（各々20ml）。その組み合わせた酢酸エチル相を水で３回、洗い（各々10ml）、そして乾燥するまでエパポレートした。その残留物をペトロレウムエーテルを加えることにより結晶化した。収率：1.45ｇ（86％）、Mp．15 3〜158；MS計算値500.59、観測値MH＋：501.3。 13 ．Z-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBuの合成： 1.14ｇ（3.38mmol）のＺ-Glu(OtBu)-OH、0.457gのHOBt（3.38mmol）及び520μ ｌのDIC(3.38mmol)を10mlのTHFに溶かし、10分間、予め活性化し、そして10mlの THF中1.0ｇ（3.38mmol）のH-Glu(OtBu)-OtBu、HClの溶液に加えた。その混合物を室温で一晩、撹拌した。その溶媒を真空下でのエパポレーションにより除去し、その残留物をDCM(10ml)に溶かし、10％酢酸水ｖ／ｖで３回（各々10ml）、10 ％炭酸水素ナトリウム水ｗ／ｖで３回（各々10ml）そして最後に水で２回（各々 10ml）で抽出した。その有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させてろ過し、そしてエパポレートした。その残留物の無色の油を更なる精製なしに直接用いた。 14 ．Z-Glu-Glu-OHの合成： 13からの油を20mlの50％TFA−DCM ｖ／ｖに溶かし、室温で２時間、撹拌した。その溶液を乾燥するまでエパポレートし、その残留物をペトロレウムエーテルから結晶化した。収率1.2ｇ（86.5％）。Mp．174〜176℃；MS：計算値410.4、観測値MH＋411.0。酵素溶液テストにおける加水分解ペプチド−プロドラッグ（Ｘ−Ｌ−Ｚ）及び対応するペプチド（Ｘ−OH）の分解を0.05Ｍリン酸緩衝液中で37℃で研究する。その緩衝液はpH7.4でロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）、又はpH7.4でカルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）を含む。その分解は、各々ペプチド又はペプチドプロドラッグの保存溶液からのアリコート(約10^-7〜10^-8mol)の、テスト溶液への添加により全体の容量で約５mlの反応混合物を供し、それを37℃の水浴に維持する。適切な時間の間隔で、50plのサンプルをとり、タンパク質の先の沈殿なしに上述のように逆相HPLCにより分析する。ペプチドプロドラッグ（Ｘ−Ｌ−Ｚ）及び対応するペプチド（Ｘ−OH）の分解についての凝一次速度定数を、式ｔ_1/2 ＝（ln２）／(Ｋobs)を用いて、時間に対する残留誘導体の濃度（HPLCピークの高さ）に対する対数の直線プロットの傾き(即ちＫobs)から決定する。プロドラッグと対応するペプチドとの半減期間の比を、式：比＝(ｔ_1/2(プロドラッグ)) ／(ｔ_1/2(Ｘ−OH))に従って計算する。速度測定緩衝液中での加水分解いくつかのペプチドプロドラッグの分解を、0.1〜0.05Ｍの全緩衝液濃度でリン酸又は炭酸緩衝液中で研究した。0.5の一定のイオン強度（μ）を維持するために、他に示さなければ計算した量の塩化カリウムをその緩衝液に加えた。その温度は、分解研究の間、37℃に維持し、pHは、塩酸（４Ｍ）又は水酸化ナトリウム（２Ｍ）を加えることにより調節した。加水分解実験は、pH2，7.4及び11で行った。分解の速度は、逆相HPLCを用いることにより決定した。無勾配分離のために用いた移動相システムは、20％アセトニトリル、79.9％水、0.1％トリフルオロ酢酸又は10％アセトニトリル、89.9％水、0.1％トリフルオロ酢酸であった。直線勾配（30分で40−100％のＢ）を用いる場合、緩衝液Ａは水中0.1％TFA ｖ／ｖであり、緩衝液Ｂは90％アセトニトリル9.9％水0.1％TFA ｖ／ｖであった。酵素溶液中での加水分解ペプチド及びペプチドプロドラッグの分解を、pH7.4でロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）、pH7.4でカルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）、pH7.4で α−キモトリプシン（25ｕ／ml）、pH2.0でぺプシンＡ（25ｕ／ml）、又はpH7.4 でブチリルコリンエステラーゼ（２つの濃度：25及び50ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液中37℃で研究した。その分解は、ペプチド又はペプチドプロドラッグの保存溶液からのアリコート(約10^-7〜10^-8mol)をテスト溶液に加えて全部で約５mlの容量の反応混合物を供することにより開始し、それを37℃の水浴中に維持し、そして適当な間隔で、約50μｌのサンプルをとり、タンパク質の先の沈殿なしに上述のように逆相HPLCにより分析した。分解についての凝一次速度定数を、式ｔ_1/2＝（ln２）／(Ｋobs)を用いて、時間に対する残留誘導体の濃度（HPLCピークの高さ）に対する対数の直線プロットの傾き(即ちＫobs)から決定した。個々のアッセイ条件は以下の例に示す。血漿溶液中での加水分解ペプチド及びペプチドプロドラッグの分解を、80％ヒト血漿中で37℃で研究した。その分解は、ペプチドの保存溶液からのアリコート(約10^-7〜10^-8mol)をテスト溶液に加えて全量約５mlの反応混合物を供し、それを水浴中に37℃に維持することにより開始し、そして適切な間隔で、約50μｌのサンプルをとり、そのサンプルをメタノール−水（１：１ｖ／ｖ）中硫酸亜鉛の２％（ｗ／ｖ）溶液50μ ｌで処理してサンプルのタンパク質を除き、その反応を停止させた。13000rpmで３分、遠心した後、20μｌの透明な上清を上述のように逆相HPLCにより分析した。分解についての凝一次速度定数は、式ｔ_1/2＝（ln２）／(Ｋobs)を用いて時間に対する残留誘導体の濃度（HPLCピークの高さ）に対する対数の直線プロットの傾き(即ちＫobs)から決定した。個々のアッセイ条件を以下の例に示す。 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(Glu)₆-OH：緩衝液中での加水分解 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(Glu)₆-OH（約５×10^-6Ｍ）の分解を、上述の通り異なる水性緩衝液(0.1Ｍ)において研究した。次に、pH＝２、pH＝7.4及びpH＝11において分解を行った。そのペプチドは上述のpH値において安定であることが見い出され、これによりそのペプチドの約５％のみが24時間にわたって分解された。ロイシンアミノペプチダーゼにおける加水分解ロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4 )中のH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(Glu)₆-OH（約10^-5Ｍ）の分解を上述のように研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、5.2×10^-3min^-1であることが見い出された。その半減期は133分であると計算された。カルボキシペプチダーゼＡにおける加水分解カルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液中のH-Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-(Glu)₆-OH（約10^-5Ｍ）の分解を上述の通り研究した。そのペプチドは、安定であるとキャラクタライズされた。そのペプチドの約15％は24時間にわたって分解された。 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(Lys)₆-OH ロイシンアミノペプチダーゼにおける加水分解ロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液中H-Tyr- Gly-Gly-Phe-Leu-(Lys)₆-OH（約10^-5Ｍ）のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、3.6×10^-3min^-1であることが見い出された。半減期は191分であると計算された。ペプシンＡにおける加水分解ペプシンＡ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝2.0)中のH-Tyr-Gly-G ly-Phe-Leu-(Lys)₆-OH（約10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、1.2×10^-3min^-1であることを見い出した。半減期は580分であると計算された。 Fmoc-Phe-Leu-((S)-(＋)-マンデル酸)-(Glu)₆-OH：ブチリルコリンエステラーゼにおける加水分解ペプチドプロドラッグFmoc-Phe-Leu-((S)-(＋)-マンデル酸)-(Glu)₆-OH(約10^- ⁵ Ｍ)中のマンデル酸により形成されたエステル結合の加水分解を、上述の通りブチリルコリンエステラーゼ（50ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4)中で研究した。半減期は一般的手順に記載されるようにしてｔ_1/2＝212分と評価された。Fmoc-Phe-Leu-OHの回収に基づいて、その半減期はｔ_1/2＝164分であると評価された。それらの値の差はおそらくウレタンにおけるFmoc-Phe-Leu-OHの更なるデグラデーションによる、Fmoc保護基における結合である。 Fmoc-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OH：ブチリルコリンエステラーゼにおける加水分解ペプチドプロドラッグFmoc-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OH(約10^-5Ｍ) におけるヒドロキシ酢酸により作られたエステル結合の加水分解を、上述のように、ブチリルコリンエステラーゼ（50ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7 .4)中で研究した。Fmoc-Phe-Leu-OHの回収に基づき、その半減期をｔ_1/2＝144分であると評価した。 Fmoc-Phe-Leu-OH：ブチリルコリンエステラーゼにおける加水分解ブチリルコリンエステラーゼ（50ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4 )中のFmoc-Phe-Leu-OH(約５×10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。半減期をｔ_1/2＝25ｈであると評価した。 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-マンデル酸)-(Glu)₆-OH：緩衝液中での加水分解 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-マンデル酸)-(Glu)₆-OH(１×10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り異なる水性緩衝液(0.1Ｍ)中で研究した。その分解を、pH＝２、pH＝7.4及びpH＝11で行った。そのペプチドを上述のpH値で安定であるとキャラクタライズした。これにより、ペプチドの５％未満が24時間にわたって分解された。ロイシンアミノペプチダーゼにおける加水分解ロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4 )中でのH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-マンデル酸)-(Glu)₆-OH(１×10^-5Ｍ) のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述のように決定し、その半減期は93分であると計算された。カルボキシペプチダーゼＡにおける加水分解カルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4) 中のH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-マンデル酸)-(Glu)₆-OH(１×10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、その半減期を10.3分であると決定した。ブチリルコリンエステラーゼにおける加水分解ペプチドプロドラッグH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(＋)-マンデル酸)-(Glu)₆ -OH(1.75×10^-5Ｍ)中のマンデル酸により作られたエチル結合の加水分解を、上述の通りブチリルコリンエステラーゼ（50ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4)中で研究した。その半減期はｔ_1/2＝50.2分であると計算された。 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OH：緩衝液中での加水分解 H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OH(１×10^-5Ｍ)の分解を上述の通り異なる水性緩衝液中で研究した。その分解は、pH＝２、pH＝7.4及びpH ＝11で行った。そのペプチドは上述のpH値で安定であるとキャラクタライズされた。これにより、そのペプチドの５％未満が24時間で分解された。ロイシンアミノペプチダーゼにおける加水分解ロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4 )中のH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OH(１×10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、その半減期は16.1分であると計算された。カルボキシペプチダーゼＡにおける加水分解カルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4) 中のH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OH(１×10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。そのペプチドは安定であるとキャラクタライズされた。これにより、そのペプチドの13％未満が24時間で分解された。ブチリルコリンエステラーゼにおける加水分解ペプチドプロドラッグH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OH(1 .75×10^-5Ｍ)におけるヒドロキシ酢酸により形成されたエステル結合の加水分解を、上述の通りブチリルコリンエステラーゼ（25ｕ／ml又は50ｕ／ml）を含む0. 05Ｍリン酸緩衝液(pH＝ 7.4)中で研究した。その半減期を25ｕブチリルコリンエステラーゼを用いてｔ_1/ ₂ ＝119.3分及び50ｕ／mlを用いた場合ｔ_1/2＝86.6分であると評価した。ヒト血漿中での加水分解ペプチドプロドラッグH-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-(ヒドロキシ酢酸)-(Glu)₆-OHの分解を、37℃のペプチド（７×10^-5Ｍ）の0.05Ｍリン酸緩衝液１mlを４mlのヒト血漿に加え、上述のように処理した。凝一次速度定数を上述のように決定し、その半減期はｔ_1/2＝19.2分であると計算された。Ｚ-Glu-Glu-OH：カルボキシペプチダーゼＡにおける加水分解カルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4) におけるＺ-Glu-Glu-OH(１×10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述のように研究した。そのペプチドは24時間にわたって安定であるとキャラクタライズされた。 H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(Lys-Glu)₃-OH カルボキシペプチダーゼＡにおける加水分解カルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4) 中のH-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(Lys-Glu)₃-OH(約10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、その半減期を396分であると計算した。ロイシンアミノペプチダーゼにおける加水分解ロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）を含む0.05Mリン酸緩衝液(pH＝7.4) 中のH-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(Lys-Glu)₃-OH(約10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、その半減期を145分であると計算した。 α−キモトリプシンにおける加水分解 α−キモトリプシン（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4)中のH-T rp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(Lys-Glu)₃-OH(約10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、その半減期を 613分であると計算した。ペプシンＡにおける加水分解ペプシンＡ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝2.0)中でのH-Trp-Ala -Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(Lys-Glu)₃-OH(約10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。そのペプチドは安定であるとキャラクタライズされた。 H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(Glu)₆-OH α−キモトリプシンにおける加水分解 α−キモトリプシン（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4)中のH-T rp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-(Glu)₆-OH(約10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述のように研究した。凝一次速度定数を上述の通り決定し、その半減期を52 3分であると計算した。 H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH ロイシンアミノペプチダーゼにおける加水分解ロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）を含む0.05Ｍリン酸緩衝液(pH＝7.4 )中のH-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH(約10^-5Ｍ)のデグラデーションを上述の通り研究した。その半減期は20分未満であると計算された。試験管内研究 μ−オピオイドレセプター活性−１ウシの脳におけるμ−オピオイドレセプターのプロドラッグのアフィニティーを、Kristensenら（1994）〔K．Kristensen，C．B．Cristensen，L ．L．Christrup，and L．C．NieLsen(1994)．The mu₁，mu₂，delta，kappa opio id receptor binding profiles of methadone stereoisomers and morphine．Li fe Sci．56，PL45-PL50.〕により記載されるように決定した。そのプロドラッグの活性を、新しく作った溶液中及び室温で20時間、依存した溶液中で決定した。その実験データを表１に要約する。表１．Inhibition of 3H-DAMGOの阻害（２nM） μ−オピオイドレセプター活性−２ μ−オピオイドレセプターアゴニストとしての本発明のプロドラッグのアフィニティーを、Kramerら（1997）〔T．H．Kramer，H．B artosz-Bechowski，P．Davis，V．J．Hruby，and F．Porreca(1997)．Extraordi nary potency of a novel delta opioid receptor agonist is due in part to increased efficacy．Life Sci．61：2，129-135．〕により記載される単離したマウス精管試験管内モデルを用いて決定した。そのプロドラッグの活性を、新しく作った溶液中及び室温で48時間、保存した溶液中で決定した。その実験データを表２及び３に要約する。表２．精管活性 100nMにおける減少割合(％):a:＜25％；aa：＜50％；aaa:＜75％表３．精管活性生体内研究鎮痛活性マウスにおける生体内活性を決定する試みを、Swedberg（1994）〔M．D．Swed berg(1994)．The mouse grid-shock analgesia test：pharmacological charact erization of latency to vocalization threshold as an index of antinocice ption．J．pharmacol．Exp．Ther．269：3，1021-1028．〕により記載されるグリッド−ショックモデルを用いて行った。その実験結果を表４に要約する。表４．マウス鎮痛活性 NT：未測定． NA：活性なし． WA：20mg／kgで弱い活性結論ネイティブエンケファリンは、80％ヒト血漿中で6.0分の半減期で、アミノペプチダーゼ（20ｕ／ml）中で10.0分の半減期で、及びカルボキシペプチダーゼ（１ｕ／ml）中で2.0分の半減期で分解する(G．T．Rasmussen及びH．Bundgaard，I nt．J．Pharm.，79，ppll3-122(1991))ので、本発明はネイティブペプチド配列と比べて、ペプチド配列の大きな保護を供する。これは、DSIPについて得られた結果により更に確証され；ネイティブDSIPはロイシンアミノペプチダーゼ（25ｕ／ml）中で20分未満の半減期で分解するが、DSIP-(LysGlu)₃-OHは同一条件下で1 45分の半減期で分解する。一般に、α−キモトリプシン又はカルボキシペプチダーゼＡ（25ｕ／ml）を含む溶液中でのプレ配列含有DSIP分子の半減期は数時間のオーダーてある。ネイティブDSIPはこれらの条件下でテストされていないが、ネイティブDSIPは血漿及び組織抽出液中で迅速に分解されることが十分に検証されている（H．L．Lee，“Peptide and Protein Drug Delivery”，Marcel Dekker Inc．1991，Chapter 9）ので、対応する半減期は、プレ配列含有DSIP分子について得られた値よりかなり低いことが予想されるにちがいない。更に、テストしたペプチドは全てブチリルコリンエステラーゼにより開裂され、迅速な生物可逆性を示した。行った試験管内テストから、プレ配列は生物活性にかなり影響を与えると結論づけることができる。表１，２及び３に供される結果は、本発明のプロドラッグは、ネイティブLeu−エンケファリンと比べてμ−オピオイドレセプターに対してアフィニティーが減少していることを明らかに示す。これにより、要求される活性を発揮するために、この場合、μ−オピオイドレセプターに結合するために、プロドラッグは、例えばネイティブの医薬的に活性なペプチドを遊離するために、ブチリルコリンエステラーゼのような血漿酵素により加水分解されなければならない。新しく調製した溶液と20又は48時間、室温に維持した溶液との間の差は、２つの異なる要因のためであり得る：本発明のプロドラッグを含む溶液は、20又は48 時間、保存された時にある程度加水分解され、それによりネイティブLeu−エンカファリンを遊離し得る。しかしながら、速度測定により示されるように、本発明のプロドラッグは全pH域にわたって安定である。放置に対する最も顕著な効果はプレ配列(Glu)₆を適用する時に観察される。これにより、よりもっともらしい説明は、(Glu)₆含有プロドラッグのかなり低い水溶性である。低い溶液速度のため、プロドラッグの画分のみが新しく調製した溶液に溶けることが極めて可能性が高い。しかしながら、溶液中に20又は40時間、放置した時、その化合物はゆっくりと溶解し、それによりそのアッセイにおいて利用できる活性物質の量を増加させるであろう。生体内微麻酔活性研究から、プレ配列及びリンカーが重要であることを結論づけることができる。明らかに、マンデル酸の（Ｓ）エナンチオマーと組み合わせた正電荷のプレ配列(Lys)₆は要求される効果を示したが、マンデル酸の（Ｒ）エナンチオマーと組み合わせたプレ配列(Lys)₆を含むエンケファリンはいずれの活性も示さなかった。更に、電子中性プレ配列(LysGlu)₃ を伴うエンケファリンプロドラッグは、（Ｒ）又は（Ｓ）マンデル酸との組み合わせにかかわらず、要求される効果を示さなかった。結論として、リンカーとプレ配列との組合せは、本発明のプロドラッグが生物学的バリア、例えば脳血液関門を横切る能力において重要であり、本発明は、リンカーとプレ配列との適切な組合せを選択することにより要求される領域にプロドラッグを輸送する期待を広げる。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Peptide prodrug containing α-hydroxy acid linker Field of the invention The present invention relates to prodrugs of pharmaceutically active peptides that are less prone to hydrolysis. I do. Background of the Invention Numerous pharmaceutically active peptides, eg naturally occurring in humans or animals Or synthetic analogs of these peptides. Such a pepti A typical example of this is an analgesically active peptide that produces a large number of synthetic analogs. It is a peptide enkephalin. However, just because of their peptide properties Therefore, its route of administration is rather limited. This allows peptides to be generally numbered It is rapidly and very efficiently degraded by enzymes with a half-life in the range of minutes. Protea And other proteolytic enzymes are ubiquitous, especially in the gastrointestinal tract, Therefore, peptides are usually available at multiple sites on oral administration and to some extent It undergoes degradation in the kidney, and in the endothelium of the vessels. In addition, a given peptide is usually Degradation at more than one link in the backbone of each; each position of the hydrolysis is It is mediated by Rotase. For example, modification of peptide structure, simultaneous administration of protease inhibitor, or identification Strategy to protect peptides against premature degradation Attempts have been made with limited success. Summary of the Invention Surprisingly, the pharmaceutically active peptide, at its C-terminus, Adding a reversible amino acid presequence converts the peptide to a protease It has been found that they are considerably less susceptible to disassembly. Anyway about this effect The presence of the presequence is not intended to be Induces a degree of organization of the helical-like nature of the tide, whereby the peptide Sensitive to proteases as opposed to peptides in random coil conformations Poor receptivity. As a result of its organization, the peptide is degraded by proteases Is much more difficult. The bioreversible properties of the pre-sequences Obtained by a linking group attached to the peptide in a manner different from the normal peptide bond . Accordingly, the present invention provides a pharmaceutically active peptide (X-OH), a peptide amide (X-NH_Two) Or a prodrug of a peptide ester (X-OR), The drug has the general formula I: X-L-Z Wherein X is attached to L at the C-terminal carbonyl function of X; L is a linking group containing 3 to 9 skeletal atoms, wherein the C-terminal carbonyl of X and L Is not a C-N amide bond; and Z is a peptide sequence of 2 to 20 amino acid units and at the N-terminal nitrogen atom of Z L, wherein each amino acid unit is independently Ala, Leu, Ser, Thr, Ty r, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met, Orn, and Formula II: -NH-C (R^Three) (R^Four) -C (= O)- (Where R^ThreeAnd R^FourIs independently C_1-6-Alkyl, phenyl, and phenyl -Methyl, where C_1-6Alkyl is halogen, hydroxy, a Mino, cyano, nitro, sulfono, and Optionally substituted with one to three substituents selected from And phenyl-methyl are C_1-6-Alkyl, C_2-6Alkenyl, halogen, ar Selected from droxy, amino, cyano, nitro, sulfono, and carboxy Optionally substituted with 1 to 3 substituents, or R^ThreeAnd R^FourIs the carbon source attached to them Together with a cyclopentyl, cyclohexyl, or cycloheptyl ring Selected from the amino acid units of Or a salt thereof. The present invention relates to the use of a prodrug of the general formula I in this treatment; Of a prodrug of general formula I in the preparation of a composition for COMPOSITION CONTAINING PRODRUG OF PHARMACEUTICAL AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE CARRIER Related to things. Another embodiment of the present invention relates to an immobilized linker peptide sequence LZ-SSM, wherein L and Z are as described above, and SSM refers to a solid support material); Use of the immobilized linker peptide sequence LZ-SSM for the preparation of And the general formula including the use of the immobilized linker peptide sequence LZ-SSM A process for the preparation of a prodrug of I. Since the prodrugs of general formula I are novel per se, a further aspect of the present invention is It relates to compounds of general formula I. Detailed description of the invention Peptides are used in several processes, such as cell-cell communication, Some are found in the autonomic and central nervous systems. Some and some of the latter peptides These other peptides have important effects on vessels and other smooth muscle. These pep Tide is, for example, a vasoconstrictor drug angiotensin II, vasopressin, endo Serine, New Neuropeptide Y, vasoactive intestinal peptide, substance P, neurotensin, and Lucitonin, calcitonin gene-related peptide, and calcitonin gene-related peptide Contains Peptide II. Other peptides of interest as medicaments include analgesics, antidiabetic drugs , Antibiotics, and narcotic peptides, etc., whereby the peptides are Fin, enkephalin, insulin, gramicidin, paracelsin, delta- Sleep-inducing peptide, ANF, vasotocin, bradykinin, dynorphin, en Doceline, growth hormone releasing factor, growth hormone releasing peptide, oxytocin, Tachykinin, ACTH, brain natriuretic polypeptide, cholecystokinin, Corticotropin releasing factor, diazepan binding inhibitor fragment, FMRF Amide, galanin, gastric release polypeptide, gastrin, gastrin release Peptide, glucagon, glucagon-like peptide-1, glucagon-like peptide-2 , LHRH, melanin-concentrating hormone, α-MSH, morphine regulatory peptide, motil , Neurokinins, neuromedins, neuropeptide K, neuropep Pide Y, PALAP, pancreatic polypeptide, peptide YY, PHM, secretin, somatostat Chin, substance K, substance P, TRH, vasoactive intestinal polypeptide, and L. Lee, “Peptide and Protein Drug Delivery” Marcel Dekker Inc. 1991, Chapter 9 And its references, Phoenix Pharmaceuticals, Inc. “The Peptide Elite” , 1997-1998 Catalog, and Bachem, “Feinchemikalien AG”, Catalog S15 -1995. Implies or may imply a biologically active peptide as described in You. The peptides described above and the pharmaceutically active peptide sequences of these peptides were It should be understood that they can be incorporated into prodrugs (and compounds) It is. In this context, the term “pharmaceutically active peptide” applied to X The term "sequence" refers to two or more amino acid units (preferably three or more amino acids). Or a natural or synthetic compound having a pharmaceutical effect in mammals such as humans Is intended to mean any peptide or peptide-containing structure of Book context Wherein the term "amino acid unit" used with X is any natural or Are synthetic α, β, and γ-amino acids, and amino acids with modified side chains, such as Decorated tyrosine whose aromatic ring is, for example, one or more halogen, sulfono groups , A nitro group or the like, and / or the phenol group is converted to an ester group. Methods in which the conversion, eg, amino acid side chains, is well known to those skilled in peptide chemistry , For example, whether in the L form or the corresponding D form. Bodanszky and A. Bodanszky, “The Practice of Peptide Synthesis”, 2. Ed, Springer-Ve rlag, 1994, and J.S. Jones, “The Chemical Synthesis of Peptides”, Claren means side-chain amino acids protected according to the method described in don Press, 1991 I do. The pharmaceutically active peptide sequence X preferably has 2 to 200 amino acid units, Preferably 2-100 amino acid units (e.g. 3-100), even more preferably 2-50 amino acids. Amino acid units (e.g. 3-50 or 4-30), especially 2-20 amino acid units (e.g. 20 or 4-20), especially 2-10 amino acid units (e.g. 3-10 or 4-10), e.g. It consists of 2-8 amino acid units (e.g. 3-8 or 4-8). In the present context, exists as a C-terminal free carboxylic acid in its native form A pharmaceutically active peptide sequence X such as Leu-enkephalin (H-Tyr-Gly-G ly-Phe-Leu-OH) is indicated by X-OH. Similarly, pharmaceutically active compounds having a C-terminal amide group Peptide sequence X such as oxytocin (Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-G ly-NH_Two) Is X-NH_TwoAnd a pharmaceutically active compound having an ester group at the C-terminus. The peptide sequence X is indicated by X-OR. Here, OR is, for example, a pharmaceutically active peptide. This is an alkoxy component of an alcohol that forms an ester together with the lactone sequence X. R is , C_1-6-Alkyl, aryl, for example phenyl, aryl-C_1-6-Alkyl, For example, it may indicate benzyl or the like. This allows even the pharmaceutically active peptide sequence X to be linked to the C-terminal carbonyl. Pharmaceutically active with a free C-terminal carboxy group even when attached to a linker Peptide sequence (ie, X-OH) corresponding to a novel peptide and a C-terminal amide (I.e.X-NH_Two) Or a pharmaceutically active peptide having an ester group (ie, X-OR) Can be used for the compounds and prodrugs of the present invention. . Many biologically active peptides are available in modified or truncated form It is also known to exert their required biological effects when present. An example For example, in the case of insulin, porcine insulin is only one amino acid unit of human insulin. Unlike phosphorus, the B30 amino acid of porcine insulin is Ala and the B3 amino acid of human insulin is B3. The 0 amino acid is Thr. Despite this difference, porcine insulin is an effective sugar for years. It is used as a uremic agent. Similarly, the heptadecane peptide porgastrin I The essential features for activity in are all contained within the C-terminal tetrapeptide. And that essentially all biological effects of neurotensin are It has been found to be related to subpeptides. Further, one or more amide bonds Pharmaceutically active peptides that have been modified, e.g., reduced, are often Or more enhanced biological activity; eg, Cys of somatostatin^TwoΨ [CH_TwoNH ] Tyr^ThreeAnalogs release growth hormone much more potent than somatostatin itself Has been found to be The transition state analog Leu of angiotensin^TenΨ [CH (OH) CH_TwoVal¹¹The ass It has been found to show a strong inhibitory effect on the reductase protease ing. Thus, the term “the modified or truncated analog” becomes , Including side chain, stereochemistry, and backbone modifications at individual amino acid units Change and / or delete one or more amino acid units in the sequence of the peptide Thus, for example, one or more carboxamide bonds (—C (＝ O) —N—) , For example, in reduced form, for example (-CH (OH) -N-), (-CH_Two-N-) and other pairs Peptide bond mimics such as (-C (= O) -O), (-C (= O) -CH_Two−), (-CH = CH-), (-PO_Two-NH-), (SO-CH_Two−), (SO_Two-N-) It is intended to mean a peptide modified thereby. As mentioned above, the peptide sequence in question is preferably one that makes full use of the present invention. At least one amide bond (preferably two A mid bond (which does not naturally correspond to a dipeptide) should be included. Of most interest to the present invention is the degradation by proteases. The stabilized peptide or pharmaceutically active peptide sequence (X-OH) Released in an environment that will exhibit action or be transported to the required location A “peptide prodrug” for the treatment of mammals, eg, humans, It is possible to manufacture. A pharmaceutically active peptide sequence X is preferred. Or as a free acid (e.g., by splitting the ester bond between X and L) However, the free acid is an amide (X) −NH_Two) Or esters (X-OR) also have pharmaceutically relevant effects What can be done is also studied. Thus, in an embodiment of interest, the C-terminal carbonyl of X The linkage between the functional group and L can be established by a plasma enzyme such as butyrylcholinesterase, It can be cleaved by cetylcholinesterase and the like. In particular, the C-terminal carbonyl of X The bond between the functional group and L is a thiol ester bond or an ester bond, preferably It is an ester bond. In order to release the pharmaceutically active peptide sequence X-OH, the peptide The bond between X and L in the drug must be cleaved in vivo. (Good The bond between X and L is preferably the enzyme butyrylcholine ester. It will be appreciated from the examples provided herein that they can be cleaved by an enzyme. As a result, the peptide prodrug of the present invention can be used, for example, in the presence of an ester present in plasma. Pharmaceutical that can be cleaved by the The release of the highly active peptide X-OH is studied. The rate of enzymatic cleavage of the peptide may be prolonged or slow for drugs containing prodrug I. It can be adjusted to have an extended effect. Adjustment of the cleavage rate, for example, Increasing or decreasing the bulk and / or electron donating effect of the substituents on L Can be performed. In this context, the term "C" used alone or as part of another group_1-6-A "Alkyl" refers to a straight, branched or cyclic saturated hydrocarbon having from 1 to 6 carbon atoms. Groups such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobu Tyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, n-hexyl, cyclohexyl Refers to sill, etc. Similarly, the term "C_1-5“Alkyl” has 1 to 5 carbon atoms Linear, branched or cyclic saturated hydrocarbon groups such as methyl, ethyl, n-propyl Isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n -Pentyl, isopentyl, cyclopentyl and the like. Alone or in another group Terms used as part "C_1-4-Alkyl "is straight or branched, saturated, having 1 to 4 carbon atoms. Hydrocarbon groups such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl , Isobutyl, sec-butyl, tert-butyl and the like, and similarly, the term "C_1-3-A "Alkyl" is a straight or branched chain saturated hydrocarbon radical having 1 to 3 carbon atoms, e.g. For example, methyl, ethyl, n-propyl, and isopropyl. In the present context, the term "C_2-6“Alkenyl” is straight-chain, branched or cyclic Hydrocarbon groups having 2 to 6 carbon atoms, which may contain one or more double bonds For example, vinyl, allyl, 1-butenyl, 2-butenyl, isobutenyl, 1-pe Pentenyl, 2-pentenyl, 4-pentenyl, 3-methyl-1-butenyl, 2- Hexenyl, 5-hexenyl, cyclohexenyl, 2,3-dimethyl-2-bute Nil and the like (which may have cis and / or trans form). Similarly, the term "C_2-5 “Alkenyl” can be straight-chain, branched or cyclic, having one or more double bonds. Hydrocarbon groups having 2 to 5 carbon atoms which may be included, for example vinyl, allyl, 1-butane Thenyl, 2-butenyl, isobutenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 4- Pentenyl, 3-methyl-1-butenyl, cyclopentenyl and the like (cis and / or Trans form) and the term "C_2-4-Alkenyl "is straight-chain or branched Hydrocarbons having 2 to 4 carbon atoms which may be chain and may contain one or more double bonds Elemental groups such as vinyl, allyl, 1-butenyl, 2-butenyl, isobutenyl and the like ( Cis and / or trans form). The term "alkoxy" refers to alkyl-oxy. The term "aryl" refers to an aromatic carbocyclic group such as phenyl or naphthyl. Intended to mean. The term "halogen" includes fluorine, chlorine, bromine and iodine. The term "heteroaryl" refers to 1-4 hetero radicals selected from nitrogen, oxygen and sulfur. 5- or 6-membered aromatic monocyclic heterocyclic group containing a ro atom, such as pyrrolyl, furyl, Pyrazolyl, imidazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, iso Thiazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, triazolyl, pyridyl, average And aromatic bicyclic containing 1 to 6 heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and sulfur Heterocyclic groups include, for example, quinolinyl. Peptide sequence Z binds compound I to protease degradation. The introduction and / or stabilization of a particular secondary structure into a molecule that will make it more stable Is a part of the causative compound I, whereby Z At least two amino acid units for introduction alone or in combination with Linker-L (Preferably at least 3 amino acid units) . On the other hand, sequences of more than about 20 amino acid units may not improve stability further. Is also convinced. Thereby, Z is 2-20 amino acid units (preferably 3-20), Preferably it is in the range of 3 to 15, more preferably 3 to 9 (eg 4 to 9), especially 3 to 6 A peptide sequence of amino acid units, for example, 4 to 6 amino acid units. Each of the amino acids in peptide sequence Z is independently Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr , Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met, Orn, and as defined herein. Selected from amino acids of formula II: Preferably, the amino acid unit is Ser, Thr , Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, and Met, more preferably Glu, Lys , And Met, especially Glu and Lys. The above amino acids are D- or L- It may have any of the configurations, but preferably, the amino acids described above. Has an L-configuration. The pharmaceutically active peptide sequence X is usually , Exclusively consisting of L-amino acids, To protect the helical structure of the entire prodrug, only L-amino acids Or the peptide sequence Z consisting mainly of D-amino acids only or mainly It must be expected that this would be advantageous compared to the resulting peptide sequence Z. Furthermore, the peptide sequence Z consisting solely or consisting mainly of D-amino acids, Toxicity due to the resistance of D-peptides and D-amino acids to odegradation It is conceivable that an effect can occur. The amino acid units of Z may, of course, be all different or all the same. But However, in an interesting embodiment of the invention, the amino acid units in Z are three different Selected from two different amino acids or from two different amino acids, or Amino acid unit, preferably the amino acid units in Z are the same, for example (Lys)_nOr (Glu)_n(Wherein n is an integer in the range of 4-6) or two amino acids Combination of units, for example (LysGlu)_Two, (LysGlu)_Three, (GluLys)_TwoOr (GluLys)_Threeso A combination of three or three amino acid units, eg, Xaa- (Lys)_x-(Glu)_y, Xaa- ( Glu)_x-(Lys)_y, (Lys)_x-(Glu)_y-Xaa, (Glu)_x-(Lys)_y-Xaa, (Lys)_x-Xaa- (Glu)_y, ( Glu)_x-Xaa- (Lys)_y, Xaa-Lys-Glu-Lys, Xaa-Lys-Glu-Lys-Glu, Xaa-Lys-Glu-Lys- Glu-Lys, Xaa-Glu-Lys-Glu, Xaa-Glu-Lys-Glu-Lys, Xaa-Glu-Lys-Glu-Lys-Glu, Lys-Glu-Lys-Xaa, Lys-Glu-Lys-Glu-Xaa, Lys-Glu-Lys-Glu-Lys-Xaa, Glu-Lys-G lu-Xaa, Glu-Lys-Glu-Lys-Xaa, Glu-Lys-Glu-Lys-Glu-Xaa, etc. (where x and y Is an integer in the range of 1-4, wherein x + y is at most 5 and Xaa is A la, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Arg, His, Met, Orn, and the present specification Which shows the amino acids of formula II described in With respect to the peptide sequence Z, certain specifics referred to as constituents of the peptide sequence Z Amino acid units, ie Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met, Orn, and the amino acid units of formula II For the configuration around the carbon atoms of the Are involved in helix-like structures or are likely to stabilize or initiate No acid unit. Chou-Fasman approach (Chou, PY & Fasman, GD Ann. R ev. Biochem. 47, 251-276 (1978)) has specific amino acid units (" (Represented by the parameter αα) (experimental). ) One attempt to quantify the potential. However, the study of Chou and Fasman And related studies show that amino acid units with low parameter But not as high as the amino acid unit with higher Pα Is shown. As a result, in the peptide sequence Z, the previously selected Contain a small percentage of amino acid units other than the Wherein the selected amino acid unit is any negative of the other amino acid units From the peptide sequence Z in that it is believed to supplement a neutral or neutral effect. It is believed that the required effects can be obtained. Thereby, in the embodiment which is within the scope of the present invention, it is preferable that Z is a component. It is practical to contain up to 25% of amino acid units other than the amino acid ("25%" refers to the number of amino acid units, ie, di- and tripepti No other amino acid units are allowed in C, and tetra, pent, hexa, And heptapeptides, up to 1 other amino acid unit is allowed, In peptide and the like, up to 2 other amino acid units are allowed). Other like this Amino acid units are Val, Ile, Pro, Phe, Gly, Trp, and N-methyl amino acid units And preferably, Pro, Gly and N-methyl amino acid Not the rank. Typical examples of peptide sequence Z are: It is. The C-terminus of Z may be in the form of a free acid, amide, or ester, for example, as will be apparent to those skilled in the art. May depend on the type of solid support material and the cleavage conditions used in conjunction with the synthesis. It should be understood. L is linked to the nitrogen atom at the N-terminus of Z, ie a possible bond between L and Z is Related to elementary atoms, such as carboxamide bonds (-C (= O) -N-), Rufonamide bond (-SO_Two-N-) or an alkylamine bond (-CN- ), Carbamate bond (-OC (= O) -N-), thiocarbamate bond (- S—C (＝ O) —N—), urea bond (—NC (） O) —N—), thiourea bond (-NC (= S) -N-), thioamide bond (-C (= S) -N-), Nomethyleneamino bond (-C (CN) -N-) or N-methylamide bond (-C (= O) -N- (CH_Three)-). (In these examples, the nitrogen atom (on the right) Arises from Z and the remainder of the "bond" comes from L. ) Preferred linkages are-C (= O) -N-, -SO_Two-N-, -CN-, -C (= S) -N-, -C (CN) -N- and -C (= O) -N- (CH_Three)-, But especially -C (= O) -N Since H- and -C (= S) -NH have the usual peptide bond geometry preferable. The linker L is preferably a helix-like initiated or stabilized by Z Can be involved in the structure. That the bond between X and L is not an amide bond Apart from fact, the geometry of L is preferably amino acid (or 2 or more) Amino acid) geometry Ie, the linker L preferably has 3 skeletal atoms or Multimers, for example, containing 6 or 9 skeletal atoms. Therefore, in this context, The term "skeleton atom" when used in connection with anchor L is defined as a pharmaceutically active peptide. It refers to an atom in the linker L that directly connects the tide sequence X and the pre-sequence Z. Thereby, L is preferably a hydroxy-carboxylic acid, especially an α-hydroxy Obtained from c-carboxylic acid. More specifically, L is of the general formula HO-C (R¹) (R^Two) -COOH (where R¹And R^TwoIs independently H, C_1-6-Alkyl, C_2-6−Arche Nil, aryl, aryl-C_1-4-Alkyl, heteroaryl, heteroaryl Le-C_1-4-Selected from alkyl or R¹And R^TwoBound to them Together with a carbon atom a cyclopentyl, cyclohexyl or cycloheptyl ring Wherein the alkyl or alkenyl group is amino, cyano, halogen, iso Cyano, isothiocyano, thiocyano, sulfamyl, C_1-4-Alkylthio, Mono- or Di-C_1-4-Alkylamino, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, Aryl, heteroaryl, aryloxy, carboxy, C_1-4-Alkoxyka Rubonil, C_1-4-Alkylcarbonyloxy, aminocarbonyl, mono or Di-C_1-4-Alkyl-aminocarbonyl, mono- or di-C_1-4-Alkyl -Amino, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino-C_1-4-Alkyl, C_1-4 1 selected from alkylcarbonylamino, sulfono, and sulfino And 3 or more substituents, and the aryl or heteroaryl group is C_1-4-Alkyl, C_2-4Alkenyl, nitro, amino, cyano, halogen, i Socyano, isothiocyano, thiocyano, sulfamyl, C_1-4-Alkylthio , Mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino, hydroxy, C_1-4-Alkoki Ants, ants -Roxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkyl carbo Niloxy, aminocarbonyl, mono- or di-C_1-4-Alkyl-aminoka Rubonyl, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino, mono- or di- C_1-4-Alkyl-amino-C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkylcarbonylamido , Sulfono, and 1-3 of the substituents selected from sulfino Can be obtained from α-hydroxy-carboxylic acids. From the structural analysis of the prodrug of the present invention, the helical-like structure of the prodrug was updated. The stabilization is that the linker L has methylene (-CH_TwoΑ-hydrido also having a −) group It is expected that this can be achieved when obtained from roxy-carboxylic acid. This Thereby, in an interesting embodiment, Linker-L has the general formula HO-C (CH_Two-R^Five) (R^Two) -COOH (wherein R^FiveIs H, C_1-5-Alkyl, C_2-5-Alkenyl, aryl , Aryl-C_1-3-Alkyl, heteroaryl, heteroaryl-C_1-3-Al Where alkyl or alkenyl is amino, halogen, mono- or mono- Kuha-C_1-4-Alkyl-amino, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, aryl , Heteroaryl, aryloxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarbonyl , C_1-4-Alkylcarbonyloxy, and 1 to 1 selected from aminocarbonyl And aryl or heteroaryl can be substituted by C 3_1-4-A Luquil, C_2-4Alkenyl, nitro, amino, halogen, mono or di-C₁ _-Four -Alkyl-amino, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, carboxy, C_1-4− Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkyl carbonyloxy and amino carbonyl R can be substituted with 1-3 substituents selected from^TwoIs, as described above, Preferably H, C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, aryl, aryl-C_1-4 -Alkyl, heteroaryl, f Teloaryl-C_1-4-Alkyl, wherein the alkyl or alkenyl group is , Amino, halogen, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino, hydroxy Si, C_1-4-Alkoxy, aryl, heteroaryl, aryloxy, carboxy Si, C_1-4-Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkyl carbonyloxy and amino Substituted with 1 to 3 substituents selected from Is a heteroaryl, C is_1-4-Alkyl, C_2-4-Alkenyl, nitro, amino, Halogen, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino, hydroxy, C_1-4− Alkoxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkylcal Substitution with 1 to 3 substituents selected from boniloxy and aminocarbonyl Can be obtained from α-hydroxy-carboxylic acid. Increasing or decreasing the bulk of the substituents on L and / or the electron donating effect The above adjustment of the cleavage rate by¹And / or R^Two(Or R^Five) Can be done by increasing or decreasing the degree and / or electron donating effect . In a particularly interesting embodiment, L is hydroxyacetic acid, (S)-(+)- Ndelic acid, L-lactic acid ((S)-(+)-2-hydroxypropionic acid), L-α- Droxy-butyric acid ((S) -2-hydroxybutanoic acid) and α-hydroxy-y Obtained from sobutylic acid. It should be understood that the prodrugs of the present invention may be in the form of their salts. It is. Salts include pharmaceutically acceptable salts, such as acid addition salts and base salts. Examples of acid addition salts are hydrochlorides, sodium salts, calcium salts, potassium salts and the like. Examples of basic salts are those whose cations are alkali metals, such as sodium and potassium. , Alkaline earth metal, such as calcium, and ammonium ions⁺N (R⁶)_Three( R⁷) (Where R⁶And R⁷Is independently optionally substituted C_1-6-Alkyl, C_Two _-6 -Alkenyl, optionally substituted aryl, or optionally substituted heteroaryl The salt is selected from the following: Other examples of pharmaceutically acceptable salts are For example, “Remington's Pharmaceutical Sciences” 17. Ed. Alfonso R. Gennaro ( Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, U.S.A., 1985 and recent editions In the technical dictionary of pharmaceutical technology. As mentioned above, the route of administration of pharmaceutically active peptides has hitherto been Psin, trypsin, carboxypeptidase A, hepsin, leucine aminope Rapid biodegradation with proteases such as peptidases Rather, it was restricted. As will be appreciated from the examples provided herein. In addition, a prodrug of the general formula I (X-L-Z) is The tendency to be resistant to is directly measured by the in vitro enzyme assay shown in the Examples. can do. The tendency that X-L-Z is resistant to degradation is, for example, , X-OH, X-NH_Two, And / or the corresponding value of X-OR. Expressed as a pseudo-first-order rate constant and / or as the half-life of the prodrug Can be. Furthermore, the ability of the prodrug of the present invention to exert the required biological effects Tested in various in vitro and in vivo assay procedures. Of the above test A detailed description is given in Example 1. By protecting the peptide in question as a prodrug according to the invention, the peptide The half-life of the tide or pharmaceutically active peptide sequence (t_1/2Get a significant increase in Has been found to be possible. Thus, in a preferred embodiment of the present invention, the "enzyme" as defined herein Half-life of the prodrug in question in "Testing Hydrolysis in Hydrogen Solution" and "Enzyme Dissolution" In "Testing for Hydrolysis in Liquids" The ratio between the half-life of the developing peptide (X-OH) is determined by the enzyme carboxypeptidase A When using one of glycerol and leucine aminopeptidase, at least 2, At least 5, more preferably at least 10, especially at least 20. The present invention relates to a compound of the general formula I described above in combination with a pharmaceutically acceptable carrier. It also relates to a pharmaceutical composition comprising lag. Such compositions can be orally, parenterally (intravenously, intraperitoneally), rectally, intranasally, dermally, The composition may be in a form adapted for vaginal, buccal, ocular, or pulmonary administration, and such compositions may include, for example, See, for example, generally, “Remington's Pharmaceutical Sciences”, 17. Ed. Alfonso. R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985 and more Recent editions and the “Drugs and the Pharmaceutical Sciences” series, Marcel Prepared by methods known to those skilled in the art, as described in research papers at Dekker. Can be The present invention relates to treatments, such as treatment of diseases of the central nervous system, vaccination, and HIV, For the treatment of cancer, diabetes, incontinence, high blood pressure, and as an analgesic and contraceptive, Diseases known to be treated by therapy involving the administration of a pharmaceutically active peptide Or a prodrug thereof of the above general formula I in the preparation of a composition for use in a solid state It also concerns the use of salt. The prodrugs of the present invention are prepared by methods known per se in the art. be able to. Thus, the peptide sequences X and Z can be synthesized by solution synthesis or meriphy. Can be prepared by standard peptide preparation techniques such as solid-phase solid-phase synthesis . Boc (tert-butyloxycarbonyl) and Fmoc (9-fluorenylmethyloxy) It is believed that the carbonyl) strategy is applicable. In one possible synthetic strategy, the prodrugs of the invention The peptide sequence was first identified using standard known protection, coupling and deprotection. Z is prepared, and then the linking group L is coupled. Pharmaceutically active sequence X on the linking group L, and By cleaving the complete prodrug XLZ from the carrier. Can be Other possible strategies are solution synthesis, solid phase synthesis, recombinant technology, or enzyme synthesis Separately prepares one or both of the two sequences X and Z, And linking group L in solution or solid phase by known segment condensation method. Coupling using techniques or a combination thereof. Furthermore, combinations of the above strategies include, for example, reduced peptide bonds Modified peptide sequence from biologically active peptide by linker L It is expected that it will be particularly applicable when coupling to peptide sequence Z. This place Is first immobilized by sequential coupling of amino acids (and linkers) The prepared fragment LZ is then prepared (in solution or by solid-phase technique in whole or in part). Using the biologically active peptide sequence X (prepared separately) in fragments LZ May be advantageous. Thereby, the present invention provides an immobilized linker-peptide sequence Prot-LZ- SSM [where L is a general formula -OC (R¹) (R^Two) C (= O) (where R¹And R^TwoIs above Where Prot is H or a hydroxy protecting group, wherein hydroxy is The protecting groups are dimethoxytrityl, monomethoxytrityl, trityl, 9- (9 -Phenyl) xanthenyl (pixyl), tetrahydropyranol, methoxy Trahydropyranol, trimethylsilyl, triisopropylsilyl, tert-butyl Tyldimethylsilyl, triethylsilyl, phenyl Dimethylsilyl, benzyloxycarbonyl, substituted benzyloxycarbonyl Ethers such as 2-bromobenzyloxycarbonyl, tert-butyl ether, Methyl ether, acetyl, halogen-substituted acetyls such as chloroacetyl And fluoroacetyl, isobutyryl, pivalolyl, benzoyl and substituted Zoyls, methoxymethyl, benzyl ethers and benzyl ethers, such as Selected from 2,6-dichlorobenzyl and the like; SSM is, for example, a functionalized resin, for example, Polystyrene, polyacrylamide, polydimethylacrylamide, polyethylene Polyethylene fused on glycol, cellulose, polyethylene, polystyrene Solid support material selected from Tylene glycol, latex, Dynabeads, etc. And Z is as described above). The C-terminal amino acid of presequence Z is a common linker such as 2,4-dimethoxy. C-4'-hydroxy-benzophenone, 4- (4-hydroxy-methyl-3- Methoxyphenoxy) -butyric acid, 4-hydroxy-methylbenzoic acid, 4-hydrido Roxymethyl-phenoxyacetic acid, 3- (4-hydroxymethylphenoxy) pro Pionic acid and p-[(R, S) -a [1- (9H-fluoren-9-yl) me Toxiformamide] -2,4-dimethoxybenzyl] -phenoxy-acetic acid It is understood that it is necessary or required to bind to a solid support material Should be. As a result, the present invention provides an immobilized product for the preparation of a prodrug according to the invention. The use of the linker peptide sequence Prot-LZ-SSM as well as the immobilized linker The C-terminal activated form (X-Act) paired with the carpeptide sequence HLZ-SSM Linking the corresponding peptides. Peptide (X-OH), peptide amide ( X-NH_Two) Or a method for preparing prodrugs of peptide esters (X-OR) Regarding the law. The present invention relates to peptide (X-OH), peptide amide (X-NH)_Two) Or Peptide A further method for the preparation of a prodrug of stele (X-OR), comprising: a) N-α-protected amino acid or C-terminal activity in carboxyl activated form Of the N-α-protected dipeptide in the immobilized form N-α-protected peptide linked to column HLZ-SSM and thereby immobilized Form fragments, b) removing the N-α-protecting group, thereby having an unprotected N-terminus Forming an immobilized peptide fragment, c) N-α-protected amino acid or additional N-α in a further carboxyl activated form N-α-protected dipeptide in the C-terminal activated form Ligated to the unprotected N-terminus of the peptide fragment, and Removal / repetition of steps b) and c) until the required peptide sequence X is obtained Repeat the knotting procedure, and then d) removing the prodrug XLZ from the solid support material and Obtaining free prodrugs in the form of acid, amide or ester The method also includes: The concatenation, removal and cutting steps involve protection strategies and selected solid phase materials. This is done by methods well known to those skilled in the art. A connection of one type between X and L and the other hand between L and Z of the type described above. With respect to establishing union, these bonds can be thiol esters, esters, Luboxamide, sulfonamide, alkylamine, carbamate, thiocarbame Urea, thiourea, thioamide, cyanomethyleneamino, or N-methyl Amide bond or Can be established in a manner known per se for establishing groupings. You. (See, for example, J. March, “Advanced Organic Chemistry” 3rd edition, John See Wiley & Sons, 1985 and references therein. This allows, for example, Esters are activated derivatives of suitable carboxylic acids (halogenated acids, anhydrides, active Esterified compounds such as HObt-ester) to react with related hydroxy compounds. It can be formed in response. Similarly, carboxamides are Activated derivatives of acids (halogenated acids, acid anhydrides, activated esters such as HObt-d Stells, etc.) with related amino compounds, as is well known to those skilled in peptide chemistry. The sulfonamide can be formed by reacting Can be formed by reacting chlorochloride with the appropriate amino compound. Alkylamine linkages or groupings are tosyl, halogenated on the carbon atom in question; And suitable compounds having a leaving group such as mesityl, to the relevant amino compound. With a product in a nucleophilic substitution reaction; Bamate binding or grouping is handled by treating the appropriate alcohol with phosgene Chlorocarbonate, which is then reacted with the relevant amino compound Thiocarbamate linkages or groupings may be suitable. Treatment of the severe alcohol with thiophosgene to provide the corresponding chlorothiocarbonate. And then can be formed by reacting it with the relevant amino compound. Urea bond or grouping has an isocyanate group on the carbon atom in question Formed by reacting a suitable compound with the relevant amino compound. Yes; the thiourea bond or grouping can be achieved by isothiocyanate on the carbon atom in question. Forming by reacting a suitable compound having a salt group with a related amino compound A thioamide bond or Grouping involves combining the appropriate carboxylic acid thionoester with the related amino compound. Wherein the thionoester is, for example, Formed from the corresponding piperidide. Furthermore, using amino acid units having a functional group that is reactive under widely used conditions In some cases, it may or may not be necessary to include a side chain protecting group. Its necessary protection Schemes will be known to those skilled in the art (eg, M. Bodansky and A. Bodanszky, “The Practice of Peptide Synthesis”, 2. Ed, Springer-Verlag, 1994 and J . Jones, “The Chemical Synthesis of Peptides”, Clarendon Press, 1991. See). This allows the peptide prodrugs of the present invention to have an acid such as , Trifluoromethanesulfonic acid, hydrogen bromide, hydrogen chloride, hydrogen fluoride, etc., or salt Groups such as ammonia, hydrazine, alkoxides such as sodium ethoxy Cleaved from the solid support material with hydroxides, hydroxides, such as sodium hydroxide, etc. Can be Since the prodrugs of the present invention provide a new class of compounds, the An embodiment comprises a compound of general formula I: X-L-Z (I) Wherein X is a peptide sequence attached to L at the C-terminal carbonyl function of X And L is a group in which the bond between the C-terminal carbonyl of X and L is different from the C-N amide bond. A linking group comprising skeletal atoms of from 9 to 9; Z is a peptide sequence of 2 to 20 amino acid units, Where each amino acid unit is independently Ala, Leu, Ser, Thr , Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met, Orn, and Formula II: -NH-C (R^Three) (R^Four) -C (= O)-(II) (Where R^ThreeAnd R^FourIs independently C_1-6-Alkyl, phenyl and phenyl Selected from ru-methyl, where C_1-6-Alkyl is halogen, hydroxy, 1 to 3 positions selected from amino, cyano, nitro, sulfono, and carboxy Phenyl and phenyl-methyl are optionally substituted with_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, halogen, hydroxy, amino, cyano, nitro, sulfo And optionally substituted with 1 to 3 substituents selected from^Three And R^FourRepresents cyclopentyl, cyclohexyl, together with the carbon atoms attached to them. Or a cycloheptyl ring). object Or its salt About. The present invention is further described by the following examples. Experiment Peptide synthesis General procedure Abbreviations used: tBu = tert-butyl DAMGO = Tyr- (D-Ala) -Gly-Ψ [-C (= O) -N (CH_Three)-] Phe-NH-CH_Two-CH_TwoOH DCC = dicyclohexylcarbodiimide DCM = dichloromethane DIC = diisopropylcarbodiimide DIEA = N, N-diisopropylethylamine DMAP = 4- (N, N-dimethylamino) -pyridine Dhbt-OH = 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1 , 2,3-benzotriazine DMF = N, N-dimethylformamide DSIP = Delta sleep inducing peptide, H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH EDT = ethanedithiol ES-MS = electrospray mass spectrometry Fmoc = 9-fluorenylmethyloxycarbonyl cHex = cyclohexyl HAA = hydroxyacetic acid HMPA = hydroxymethylphenoxyacetic acid HObt = 1-hydroxybenzotriazole HPLC = high performance liquid chromatography Ma = mandelic acid NHS = N-hydroxy-succinimide ester PEG-PS = polyethylene glycol fused on polystyrene Pfp = pentafluorophenyl SEM = standard error of the mean TFA = trifluoroacetic acid Z= Benzyloxycarbonyl Equipment and synthesis strategy Peptides have suitable general protection for N-α-amino protecting groups and side chain functional groups. Using 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) as a protecting group, -Like synthesis in polyethylene containers with polypropylene filters for (Dryland, A. and Sheppard, RC (1986) J. Chem. Soc., Perkin Trans. . 1, 125-137). Solvent y) was replaced with a strong cation exchange resin (Lewatit S 100 MB / H strong acid, Bayer AGLeverkusen, Germany) and yellow if free amine is present (Dhb 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1 without producing t-O-anion) Before use by addition of 2,2,3-benzotriazine (Dhbt-OH) Analyze about Germany) was used directly without purification. Amino acids and dipeptides Fmoc-protected amino acids were purchased from MilliGen (UK) in appropriate side chain protected form . Otherwise, the protected amino acid (H-Glu (OtBu) -0tBu; H-Glu (cHex) -OH;Z- Glu (OtBu) -OH) and the dipeptides Fmoc-Phe-Gly-OH and H-Phe-Leu-OH were obtained from Bachem (Swi tzerland). Coupling reagent en (Germany), distill before action, dicyclohexylka Purchased and purified by distillation. Linker Linker (4-hydroxymethylphenoxy) acetic acid (HMPA), Novabiochem, Swi tzerland; hydroxyacetic acid, (S)-(+)-mandelic acid 99% purity, Aldrich, G ermany and (R)-(-)-mandelic acid 98.5% purity, M & R, England Or preformed 1-hydroxybenzotriazole (HOb) formed by DIC t) was linked to the N-terminus of pre-sequence Z. Solid support Fmoc-peptide synthesized at a concentration of 0.05 M or higher Different types of solid supports using Fmoc protected activated amino acids in DMF Synthesized above: 1) Polyethylene glycol fused onto polystyrene; Nova Syn TG resin, 0.29 mmol / g, Novabiochem, Switzerland); 2) NovaSyn K125 (sa Kieselguhr-supported polydimethylene functionalized with lucosine methyl ester 0.11 mmol / g Ruacrylamide resin; Novabiochem, Switzerland). Catalysts and other reagents Diisopropylethylamine (DIEA) was purchased from Aldrich, Germany and Diamines were purchased from Fluka and purchased from piperidine and piperidine. (N, N-dimethylamino) pyridine (DMAP) was purchased from Fluka, Switzerland. In the coupling reaction for symmetrical anhydrides t, purchased from Germany. 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1 , 2,3-benzotriazine (Dhbt-OH) and 1-hydroxybenzotriazole Le (HObt) was obtained from Fluka, Switzerland. Fmoc NHS from Aldrich, Germany Purchased. Yeast Carboxypeptidase A (EC 3.4.17.1) type I from bovine pancreas, pig kidney Leucine aminopeptidase (EC. 3.4.11.1) type III-CP from horse serum Butyrylcholinesterase (EC 3.1.1.8), α-chymotri from bovine pancreas Pepsin (EC 4.4.21.1) and pepsin A from porcine gastric mucosal bovine pancreas (EC 3.4). . 23.1) was obtained from Sigma, UK. Coupling procedure D, wherein the first amino acid is formed from a suitable N-α-protected amino acid Ligation as symmetric anhydrides in MF and DIC or DCC. The following amino acids in DMF Preformed HOb made from the appropriate N-α-protected amino acid and HObt by DIC Linked as t-ester. Acylation is used to prevent Fmoc deprotection during testing. The ninhydrin test was carried out at 30 ° C. (Latsen, BP and Holm, A., I. nt. J. Peptide Protein Res. 43, 1994, 1-9). Deprotection of N-α-amino protecting group Deprotection of the Fmoc group was performed by treatment with 20% piperidine in DMF (1 × 3 and 1 × 7 minutes) Yellow (Dhbt-O-) detected after subsequent addition of Dhbt-OH to drained DMF Performed by washing with DMF until no more. Acid cleavage of peptides from resins. kfurt, Germany)-with water v / v or with 95% TFA and 5% ethanedithiol v / v It was cut from the resin by treating at room temperature for 2 hours. 95% of the filtered resin After washing with TFA-water, the filtrate and the wash were evaporated under reduced pressure. That residue Washed with tel and lyophilized with acetic acid-water. High-performance liquid chromatography Analyze by chromatography (HPLC) and use electrospray ionization mass spectrometry ( ESMS). Preformed HObt-ester 3 equivalentsN-Α-amino protected amino acid or hydroxyacetic acid or (S)-(+ ) -Mandelic acid was dissolved in DMF with 3 equivalents of HObt and 3 equivalents of DIC. That The solution was left at room temperature for 10 minutes, then added to the resin, which was added to the preactivated amino acid. Washed with a solution of 0.2% Dhbt-OH in DMF before addition. Preformed symmetrical anhydride 6 equivalentsNThe -α-amino protected amino acid was dissolved in DCM and cooled to 0 ° C. DCC (3 equivalents) was added and the reaction continued for 10 minutes. The solvent is removed in vacuo and the residue in DMF Melted into. Filter the solution and immediately add to the resin, then add 0.1 equivalent of DMAP Was. Evaluation of the coupling yield of the first N-α-amino protected amino acid 3-5 mg of the dried Fmoc-protected peptide-resin at room temperature for 10 minutes, 20% piperi in DMF Treated with 5 ml of gin and the UV absorbance of the dibenzofulvene-piperidine adduct was measured at 301 nm. Was evaluated. The yield is calculated by the elongation coefficient ε calculated based on the Fmoc-Ala-OH standard.₃₀₁For And decided. PepSyn Peptide synthesis on K resin Dry PepSyn K (about 500 mg) is protected with ethylenediamine and released at room temperature overnight. Was placed. The resin was drained and washed with 10 × 15 ml DMF for 5 minutes each. After draining The resin is washed with 10% DIEA in DMF v / v (2 × 15 ml, 15 minutes each) and finally Add Dhbt-OH to the drained DMF until no yellow color can be detected. washed. Dissolve 3 equivalents of HMPA, 3 equivalents of HObt and 3 equivalents of DIC in 10 ml of DMF and add 10 equivalents. Minutes, continue to activate, then add the mixture to the resin and allow the coupling Meanwhile, continued. Drain the resin, wash with DMF (10 × 15 ml, 5 minutes each), and Acylation was checked by the ninhydrin test. Preformed first amino acid Coupling as a symmetrical anhydride (see above) and the coupling The yield was evaluated as described above. In all cases, it was greater than 70%. Next, synthesis, Continued "batch-like". PepSyn Continuous batch-like peptide synthesis on K The first amino acid-bound resin (about 500 mg) is converted to polypropylene for filtration. Place in a polyethylene container with a filter and remove the Fmoc group as described above. Protected. The remaining nets that follow that sequence Acid was added to a preformed Fmoc protected in DMF (5 ml) prepared as described above, Coupling was accordingly performed as a side chain protected HObt ester (3 equivalents). That mosquito Pulling was continued for 2 hours unless otherwise indicated. Then wash the excess reagent with DMF (1 (2 min, flow rate 1 ml / min). All acylations were performed at 80 ° C Inspection was performed by the drin test. After completion of the synthesis, the peptide-resin was added to DMF (10 min, Speed 1 ml / min), DCM (5 × 5 ml, 1 minute each), and finally diethyl ether (5 × 5 ml). ml, 1 minute each) and dried in vacuo. PEG -Batch-like peptide synthesis on PS NovaSyn TG resin (250 mg, 0.27-0.29 mmol / g) is filtered through a polypropylene filter for filtration. It was placed in a polyethylene container equipped with a filter. Swell the resin in DMF (5ml) And treated with 20% piperidine in DMF to determine the presence of unprotonated amino groups on the resin. Secured. After draining the resin and adding Dhbt-OH to the drained DMF, Washed with DMF until no yellow color could be detected. Reserve HMPA (3 equivalents) as described above. Coupled as the formed HObt-ester, and the coupling was allowed to proceed for 24 hours. Continued. Drain the resin, wash with DMF (5 × 5 ml, 5 minutes each), and rehydrate Was examined by the ninhydrin test. Preform the first amino acid as described above The resulting symmetrical anhydride was coupled. Of the first Fmoc-protected amino acid The coupling yield was evaluated as described above. It exceeded 60% in all cases. So Subsequent amino acids according to the sequence of Fmoc-protected pre-formed and The HObt ester (3 equivalents) with side chain protection according to was coupled. That mosquito Pulling was continued for 2 hours unless otherwise indicated. Remove the resin from excess reagent To remove, drain and wash with DMF (5 × 5 ml, 5 minutes each). All reeds The hydration was checked by the ninhydrin test performed at 80 ° C. After completing the synthesis, Peptide-resin was combined with DMF (3 x 5 ml, 5 min each), DCM (3 x 5 ml, 1 min each), and Afterwards it was washed with diethyl ether (3 × 5 ml, 1 minute each) and dried under vacuum. HPLC conditions MERCK HITACHI L-4000 running isocratic HPLC analysis with LC-6A pump, 215 nm From UV detector and Rheodyne 7125 injection valve with 2, 20, or 100 μl loop Made with the Shimadzu system. The column used for isocratic analysis was Spherisorb ODS-2 (100 × 3 mm; 5-μm particles). HPLC analysis using the gradient is MERCK HITACHI L-6200 Intelligent Pump, MERCK HITACHI L-40 Operating at 215nm This was performed with a Rheodyne 7125 injection valve with a 00 UV detector and a 20 μl loop. Use Column is Rescorce^TM RPC was 1 ml. Buffer A is 0.1% by volume TFA in water, Buffer B is 90% by volume acetonitrile, 9. 9% by volume water and 0.1% by volume TFA. These buffers are used for peptide analysis. Pumped through the column at a flow rate of 1.3-1.5 ml / min using the following gradient: Yeast 0% -100% B linear slope (30 minutes), 2.40-100% B linear slope for elementary studies Distribution (15 minutes), linear gradient of 3.10-40% B (15 minutes) or linear gradient of 4.0-50% B Delivery (15 minutes). The mobile phase used for isocratic analysis is described in the individual experiment description. Will be affected. Mass spectrometry Mass spectra were obtained using an electrospray (ESI) probe (ES-MS). Obtained on an innigan Mat LCQ instrument. Peptide synthesis of individual peptides 1. H-Tyr-Gly-Gly- Phe-Leu-Glu 6 -OH the peptide synthesis NovaSyn TentaGel Dry NovaSyn TG resin (0.29 mmol / g, 250 mg) polypropylene for filtration Place in pre-aligned Glu in polyethylene container with filter₆Until you finish Batch-like peptide synthesis on PEG-PS ". Subsequent amino acids forming nkephalin were pre-formed in DMF (5 ml) made by DIC. The resulting Fmoc-protected, optionally side-chain protected HObt ester coupled I did. Prior to each of the last five couplings, the progress of the coupling reaction To follow the disappearance of the yellow color with the line, the resin was added to a solution of Dhbt-OH (80 mg in 25 ml). Washed with). When the yellow is no longer visible, wash the resin with DMF (5 × (5 ml, 5 min each). The acylation is then performed as described above. Were tested by the ninhydrin test performed at 80 ° C. After finishing the synthesis, Peptide-resin was added to DMF (3 × 5 ml, 1 minute each), DCM (3 × 5 ml, 1 minute each), diethyl Washed with ether (3 × 5 ml, 1 minute each) and dried in vacuo. The peptide was cleaved from the resin as described above and lyophilized from ethyl acetate. So Of the crude lyophilized product was analyzed by HPLC, which averaged without deletion and Fmoc-protected sequences. Was found to be one. Its purity was found to be greater than 90%, Was confirmed by ES-MS. Yield: 76%. 2. Synthesis of H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-HAA-Glu ₆ -OH on PepSyn K resin Dry PepSyn K (approximately 500 mg, 0.1 mol / g) is passed through a polypropylene filter for filtration. Place in a polyethylene container equipped with a filter and treat with ethylenediamine as described above. I understood. The first 6 glutamate units forming the pre-sequence were replaced with Dhbt-OH (1 equivalent). Coupling as Fmoc-protected Pfp ester (3 equivalents) with addition. That Acylation is The ninhydrin test was performed at 80 ° C. as described above. Fmoc group described above Deprotected as described. After finishing the presequence, the deprotected peptide-resin Is converted to 6 equivalents of hydroxyacetic acid as the HObt-ester previously activated as described above. And the coupling was continued for 24 hours. Wash excess reagent with DMF (12 min (Flow rate 1 ml / min). Acylation is checked by the ninhydrin test. Was. The next amino acid (leucine) according to that sequence is replaced by a previously formed pair as described above. The reaction was continued for 2 hours. Next, remove excess reagent It was removed by DMF washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Remove a small amount of resin sample Remove to check the pulling yield and evaluate it as above, which is 90% I found something. Next, synthesis was continued by cleavage of the Fmoc group as described above. Subsequent couplings according to that sequence are used to prevent diketopiperazine formation. Performed as peptide coupling. Thereby, Fmoc-Gly-Phe-OH was added for 2 hours, As a preformed HObt ester (3 equivalents) in DMF (5 ml) prepared as described above And coupled. Next, the excess reagent was washed with DMF (12 minutes, flow rate 1 ml / min). And the acylation was determined by the ninhydrin test performed at 80 ° C as described above. Was inspected. Next, the Fmoc group was treated with 20% piperidine in DMF as described above. Removed. The remaining amino acids according to the sequence were replaced with one equivalent of D in DMF (2 ml) for 2 hours. With the addition of hbt-OH, preformed Fmoc-protection and, if necessary, side-chain protection HObt ester (3 equivalents). The acylation is carried out as described above. The ninhydrin test was performed as follows. The remaining amino acids according to that sequence Was added to the Fmoc-protected Pfp ester with the addition of Dhbt-OH (1 equivalent) in DMF (2 ml) (3 equivalents). Wash excess reagent with DMF (12 min, flow rate 1 ml / Min) and the acylation is carried out as described above. The ninhydrin test was performed at 80 ° C as described above. Fmoc group as described above Deprotected. After completion of the synthesis, the peptide-resin was washed with DMF (10 min, flow rate 1 ml / min) , DCM (3 × 5 ml, 1 minute each), diethyl ether (3 × 5 ml, 1 minute each) , Dried under vacuum. The peptide is cleaved from the resin as described above, and the ammonium bicarbonate (0.1 M) And freeze-dried. The crude lyophilized product was analyzed by HPLC and found to be homogeneous. And found that its purity exceeded 80%, and determined the identity of the peptide by ESMS. The yield was 58%. 3. Synthesis of H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-Ma) -Glu ₆ -OH on PepSyn K resin Dry PepSyn K (about 500 mg, 0.1 mmol / g) is filtered through a polypropylene filter for filtration. Put in a polyethylene container with a filter and treat with ethylenediamine as described above did. Add the first 6 glutamic acids that form the presequence to Dhbt-OH (1 equivalent) With Fmoc-protected Pfp ester (3 equivalents). That reed Hydrolysis was checked by the ninhydrin test performed at 80 ° C. as described above. Fmoc Deprotected as described above. After finishing the presequence, the deprotected peptide The resin was converted to 6 equivalents of (S)-( +)-Mandelic acid and the coupling continued for 24 hours. Excess reagent is DM It was removed by F washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Nylhydrinte the acylation Inspected by strike. The next amino acid (leucine) according to that sequence is And the reaction was continued for 2 hours. Next, excess reagent was removed by DMF washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Small amount of trees The fat sample was removed to check the coupling yield and it was evaluated as described above. Value, found to be 85% Was issued. The synthesis was then continued by cleavage of the Fmoc group as described above. Subsequent coupling according to that sequence will result in diketopiperazine formation to prevent diketopiperazine formation. Performed as peptide coupling. This was prepared for 2 hours as described above. Fmoc-Gly-Phe-OH was used as a preformed HObt ester (3 equivalents) in DMF (5 ml). Pulled. Next, excess reagent is removed by DMF washing (12 minutes, flow rate 1 ml / min) The acylation was tested by the ninhydrin test performed at 80 ° C as described above. did. The Fmoc group was then removed by treatment with 20% piperidine in DMF as described above. Was. The remaining amino acids according to the sequence were replaced with 1 equivalent of Dhbt-OH in DMF (2 ml) for 2 hours. As a preformed Fmoc-protected HObt ester (3 equivalents) with the addition of Pulled. The acylation was detected by the ninhydrin test performed as described above. Inspected. The remaining amino acids according to the sequence were replaced with Dhbt-OH (1 equivalent) in DMF (2 ml). And coupled as Fmoc-protected Pfp ester. Excessive trials The drug was removed by a DMF wash (12 min, flow rate 1 ml / min) and the acylation was The test was performed by the ninhydrin test performed at 0 ° C. Deprotect the Fmoc group as described above Protected. After completion of the synthesis, the peptide-resin was washed with DMF (10 min, flow rate 1 ml / min. ), DCM (3 × 5 ml, 1 minute each), wash with diethyl ether (3 × 5 ml, 1 minute each) , Dried in vacuo. The peptide is cleaved from the resin as described above and ammonium bicarbonate (0.1M) And freeze-dried. The crude freeze-dried product is analyzed by HPLC to confirm that it is homogeneous. And found that its purity was more than 80%. Confirmed by MS and the yield was 57%. Prodrug H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((R)-(-)-Ma) -Glu₆-OH 3 was prepared as described above. 4. Synthesis of H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-Ma) -Lys ₆ -OH on PepSyn K resin Dry PepSyn K (about 500 mg, 0.1 mmol / g) is filtered through a polypropylene filter for filtration. Put in a polyethylene container with a filter and treat with ethylenediamine as described above did. The first 6 lysines forming the presequence were added with the addition of Dhbt-OH (1 equivalent). Coupling as Fmoc-protected Pfp ester (3 equivalents). The acylation The ninhydrin test was performed at 80 ° C. as described above. Fmoc above Deprotected as follows. After finishing the presequence, the deprotected peptide-resin As described above, 6 equivalents of (S)-(+)-as preactivated HObt-ester Reaction with mandelic acid and coupling continued for 24 hours. Excess reagents are washed with DMF (12 min, flow rate 1 ml / min). The acylation for ninhydrin test More inspected. The next amino acid (leucine) according to the sequence is Coupling as the symmetrical anhydride formed and the reaction continued for 2 hours. next, Excess reagent was removed by a DMF wash (12 min, flow rate 1 ml / min). Small amount of resin sun The pull was removed to check the coupling yield, which was evaluated as described above, It was found to be 85%. The synthesis is then carried out by cleavage of the Fmoc group, as described above. Continued. Subsequent coupling according to that sequence will result in diketopiperazine formation to prevent diketopiperazine formation. Performed as peptide coupling. This was prepared for 2 hours as described above. Fmoc-Gly-Phe-OH was used as a preformed HObt ester (3 equivalents) in DMF (5 ml). Pulled. Next, excess reagent is removed by DMF washing (12 minutes, flow rate 1 ml / min) The acylation was tested by the ninhydrin test performed at 80 ° C as described above. did. The Fmoc group is then treated with 20% piperidine in DMF as described above. Removed. The remaining amino acids according to the sequence were converted to 1 in DMF (2 ml) for 2 hours. The preformed Fmoc-protected HObt ester (3 eq.) With the addition of an equal amount of Dhbt-OH Amount). The acylation was performed as described above for ninhydrin. Inspected by testing. The remaining amino acids according to the sequence were replaced with Dhbt in DMF (2 ml). Coupling as Fmoc-protected Pfp ester with the addition of -OH (1 equivalent) did. Excess reagents were removed by DMF washing (12 min, flow rate 1 ml / min) to remove acylation. The ninhydrin test was performed at 80 ° C. as described above. The Fmoc group Deprotected as described above. After completion of the synthesis, the peptide-resin was added to DMF (10 min. , Flow rate 1 ml / min), DCM (3 x 5 ml, 1 min each), diethyl ether (3 x 5 ml, each (1 min each) and dried in vacuo. The peptide is cleaved from the resin as described above and ammonium bicarbonate (0.1M) And freeze-dried. The crude freeze-dried product is analyzed by HPLC to confirm that it is homogeneous. And found that its purity was more than 80%. Confirmed by MS and the yield was 57%. Prodrug H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((R)-(−)-Ma) -Lys₆-OH on 4 Prepared as described. 5. H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-Ma)-(LysGlu) _3- OH on PepSyn K resin Synthesis of Dry PepSyn K (about 500 mg, 0.1 mmol / g) is filtered through a polypropylene filter for filtration. Put in a polyethylene container with a filter and treat with ethylenediamine as described above did. The first six amino acids forming the presequence are combined with the addition of Dhbt-OH (1 equivalent). Was coupled as Fmoc-protected Pfp ester (3 equivalents). Its acylation Was tested by the ninhydrin test performed at 80 ° C. as described above. Fmoc group Deprotected as described above. After finishing the presequence, the deprotected peptide The resin was converted to 6 equivalents of (S)-( +)-Mandelic acid and the coupling continued for 24 hours. Excess reagent is DM It was removed by F washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Nylhydrinte the acylation Inspected by strike. The next amino acid (leucine) according to that sequence is And the reaction was continued for 2 hours. Next, excess reagent was removed by DMF washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Small amount of trees The fat sample was removed to check the coupling yield and it was evaluated as described above. Value and found to be 85%. The synthesis is then followed by cleavage of the Fmoc group as described above. Continued by Subsequent coupling according to that sequence will result in diketopiperazine formation to prevent diketopiperazine formation. Performed as peptide coupling. This was prepared for 2 hours as described above. Fmoc-Gly-Phe-OH was used as a preformed HObt ester (3 equivalents) in DMF (5 ml). Pulled. Next, excess reagent is removed by DMF washing (12 minutes, flow rate 1 ml / min) The acylation was tested by the ninhydrin test performed at 80 ° C as described above. did. The Fmoc group was then removed by treatment with 20% piperidine in DMF as described above. Was. The remaining amino acids according to the sequence were replaced with 1 equivalent of Dhbt-OH in DMF (2 ml) for 2 hours. As a preformed Fmoc-protected HObt ester (3 equivalents) with the addition of Pulled. The acylation was detected by the ninhydrin test performed as described above. Inspected. The remaining amino acids according to the sequence were replaced with Dhbt-OH (1 equivalent) in DMF (2 ml). And coupled as Fmoc-protected Pfp ester. Excessive trials The drug was removed by a DMF wash (12 min, flow rate 1 ml / min) and the acylation was Ninhydrin test performed at 0 ° C Was inspected. The Fmoc group was deprotected as described above. After completing the synthesis, The peptide-resin was washed with DMF (10 min, flow rate 1 ml / min), DCM (3 × 5 ml, 1 min each), diethyl Washed with ether (3 × 5 ml, 1 minute each) and dried in vacuo. The peptide is cleaved from the resin as described above and ammonium bicarbonate (0.1M) And freeze-dried. The crude freeze-dried product is analyzed by HPLC to confirm that it is homogeneous. And found that its purity was more than 80%. Confirmed by MS and the yield was 63%. Prodrug H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((R)-(-)-Ma)-(LysGlu)_Three-OH about 5 And prepared as described above. 6. Synthesis of Fmoc-Phe-Leu-HAA-Glu ₆ -OH at NovaSyn TentaGel Dry NovaSyn TG resin (0.29 mmol / g, 250 mg) polypropylene for filtration Place in pre-aligned Glu in polyethylene container with filter₆Until you finish Worked up as described under "Batch-like peptide synthesis with PEG-PS". next, The peptide-resin was converted to 6 equivalents of hydr as the HObt-ester previously activated as described above. Reaction with roxyacetic acid and the coupling continued for 24 hours. Excess reagent in DMF It was removed by washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Ninhydrintes for its acylation Inspected by The next amino acid (leucine) according to that sequence is Coupling as the symmetrical anhydride formed and the reaction continued for 2 hours. Next Excess reagent was removed by DMF washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Small amount of resin-sun The pull was removed to check its coupling yield and it was evaluated as described above And found it to be about 100%. The next amino acid according to the sequence is formed by DIC As preformed Fmoc-protected HObt ester (3 equivalents) in DMF (5 ml) formed Coupled. Last two cups Before ringing, the resin is monitored for the disappearance of the yellow color as the coupling reaction proceeds. For washing with a solution of Dhbt-OH (80 mg in 25 ml). Yellow is no longer visible When the coupling is complete, wash the coupling with DMF (5 x 5 ml, 5 minutes each). And was canceled by Next, the acylation was carried out at 80 ° C. as described above. Inspection. After completion of the synthesis, the peptide-resin was combined with DMF (3 × 5 ml, 1 minute each), DCM (3 × 5 ml, 1 minute each), diethyl ether (3 × 5 ml, 1 minute each) ) And dried in vacuum. The peptide is cleaved from the resin as described above, and the ammonium bicarbonate (0.1 M) And freeze-dried. The crude lyophilized product was analyzed by HPLC and deleted and Fmoc-protected It was found to be homogenous with no sequence. Its purity exceeds 90% and its The identity of the peptide was confirmed by ES-MS, and the yield was 83%. 7. Peptide synthesis of Fmoc-Phe-Leu-((S)-(+)-Ma) -Glu ₆ -OH on NovaSyn TentaGel Success Dry NovaSyn TG resin (0.29 mmol / g, 250 mg) polypropylene for filtration Place in pre-aligned Glu in polyethylene container with filter₆Until you finish Worked up as described under "Batch-like peptide synthesis with PEG-PS". next, The peptide-resin was converted to 6 equivalents of (S )-(+)-Mandelic acid and the coupling continued for 24 hours. excess Reagents were removed by DMF washing (12 min, flow rate 1 ml / min). Nin the acylation Inspection was performed by the hydrin test. The next amino acid (leucine) according to the sequence Coupling as a preformed symmetrical anhydride as described and the reaction continued for 2 hours I did. Excess reagent was then removed by a DMF wash (12 min, flow 1 ml / min). Small amount Of the resin-sample was removed to check its coupling yield, and Statement And was found to be 90%. The next amino acid according to that sequence is DIC Preformed Fmoc-protected HObt ester (3 equivalents) in DMF (5 ml) formed by ). Before the last two couplings, remove the resin In order to follow the disappearance of the yellow color as the coupling reaction progressed, Dhbt-OH (80 ml in 25 ml) was used. mg). When the yellow color is no longer visible, the coupling The resin was stopped by washing with DMF (5 × 5 ml, 5 minutes each). Next, Silation was checked by the ninhydrin test performed at 80 ° C. as described above. Synthesis After completion of the procedure, the peptide-resin was combined with DMF (3 × 5 ml, 1 minute each), DCM (3 × 5 ml, each). 1 min), washed with diethyl ether (3 × 5 ml, 1 min each) and dried in vacuo . The peptide is cleaved from the resin as described above, and the ammonium bicarbonate (0.1 M) And freeze-dried. The crude lyophilized product was analyzed by HPLC and deleted and Fmoc-protected It was found to be homogenous with no sequence. Its purity must exceed 90% The identity of the peptide was confirmed by ES-MS and the yield was 71%. 8. H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys _6- OH peptide synthesis at NovaSyn TentaGel Dry NovaSyn TG resin (0.29 mmol / g, 250 mg) polypropylene for filtration Place in pre-aligned Glu in polyethylene container with filter₆Until you finish Batch-like peptide synthesis on PEG-PS ". Subsequent amino acids forming nkephalin were pre-formed in DMF (5 ml) made by DIC. Coupling as the resulting Fmoc-protected HObt ester (3 equivalents). Last Prior to each of the five couplings, the yellow disappearance as the coupling reaction proceeds. The resin was washed with a solution of Dhbt-OH (80 mg in 25 ml) to follow the decay. That When the yellow is no longer visible, The coupling was stopped by washing the resin with DMF (5 × 5 ml, 5 minutes each). The acylation was then checked by the ninhydrin test performed at 80 ° C. as described above. After completion of the synthesis, the peptide-resin was combined with DMF (3 × 5 ml, 1 minute each), DCM (3 × 5 ml). l, 1 minute each), washed with diethyl ether (3 x 5 ml, 1 minute each) and dried in vacuo I let you. The peptide was cleaved from the resin as described above and lyophilized from acetic acid. Its cryofreeze The dried product was analyzed by HPLC and found to be homogeneous without deletions and Fmoc protected sequences. Was found. Its purity was found to be greater than 98% and its pep The identity of the tide was confirmed by ES-MS. Yield: 84%. 9. H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-Glu ₆ -OH on NovaSyn TentaGel Peptide synthesis Dry NovaSyn TG resin (0.29 mmol / g, 250 mg) polypropylene for filtration Place in pre-aligned Glu in polyethylene container with filter₆Until you finish Batch-like peptide synthesis on PEG-PS "was processed as described below. Subsequent amino acids forming the sequence were replaced with preformed Fmoc in DMF (5 ml) made by DIC. -Coupling as protected HObt ester (3 equivalents). Last 9 cuts Before each coupling, track the disappearance of the yellow color as the coupling reaction proceeds. To this end, the resin was washed with a solution of Dhbt-OH (80 mg in 25 ml). The yellow peach When it is no longer visible, wash the resin with DMF (5 x 5 ml, 5 minutes each) Coupling was stopped. Next, acylation was performed at 80 ° C. as described above. Inspection. After the synthesis was completed, the peptide-resin was added to DMF (3 × 5 ml). , 1 min each), DCM (3 x 5 ml, 1 min each), diethyl ether (3 x 5 ml, 1 min each) Min) and dried in vacuo. The peptide is cleaved from the resin as described above and lyophilized from acetic acid. Was. The crude lyophilized product was analyzed by HPLC, indicating that the deletion and Fmoc-protected sequences It was found to be uniform. Its purity was found to be greater than 98% The identity of the peptide was confirmed by ES-MS. Yield: 80%. Ten . H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (LysGlu) on NovaSyn TentaGel _3- OH peptide synthesis Dry NovaSyn TG resin (0.29 mmol / g, 250 mg) polypropylene for filtration Put in a polyethylene container equipped with a filter, pre-sequence (LysGlu)_ThreeFinish Worked up as described under "Batch-like peptide synthesis on PEG-PS". D Subsequent amino acids forming the SIP sequence were previously formed in DMF (5 ml) made by DIC. Coupled as Fmoc-protected HObt ester (3 equivalents). Last 9 times Before each coupling, the disappearance of yellow as the coupling reaction proceeds For tracking, the resin was washed with a solution of Dhbt-OH (80 mg in 25 ml). That yellow When is no longer visible, wash the resin with DMF (5 x 5 ml, 5 minutes each) , The coupling was stopped. The acylation was then carried out at 80 ° C as described above. Inspection was performed by the hydrin test. After completion of the synthesis, the peptide-resin was converted to DMF (3 × 5 ml, 1 minute each), DCM (3 × 5 ml, 1 minute each), diethyl ether (3 × 5 ml, (1 min each) and dried in vacuo. The peptide was cleaved from the resin as described above and lyophilized from acetic acid. Its cryofreeze The dried product was analyzed by HPLC and found to be homogeneous without deletions and Fmoc protected sequences. Was found. Its purity was found to be greater than 98% and its pep The identity of the tide was confirmed by ES-MS. Yield: 91%. 11 . H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH (DSIP) on NovaSyn TentaGel Peptide synthesis Dry NovaSyn TG resin (0.29 mmol / g, 250 mg) polypropylene for filtration Put in a polyethylene container equipped with a filter, and place the batch-like peptide on PEG-PS. The first amino acid was previously formed as described above. The resulting symmetrical anhydride was coupled. Of the first Fmoc-protected amino acid The coupling yield was evaluated as described above. It exceeded 60% in all cases. DS Subsequent amino acids forming the IP sequence were preformed in DMF (5 ml) made by DIC. Coupling as Fmoc-protected HObt ester (3 equivalents). The last eight Before each coupling, observe the disappearance of yellow as the coupling reaction progresses. To mark, the resin was washed with a solution of Dhbt-OH (80 mg in 25 ml). That yellow When it is no longer visible, wash the resin with DMF (5 x 5 ml, 5 minutes each) More coupling was stopped. Next, acylation was performed at 80 ° C. as described above. Inspection was performed by the drin test. After completion of the synthesis, the peptide-resin was added to DMF (3 × 5 ml, 1 minute each), DCM (3 × 5 ml, 1 minute each), diethyl ether (3 × 5 ml, (1 min each) and dried in vacuo. The peptide was cleaved from the resin as described above and lyophilized from acetic acid. Its cryofreeze The dried product was analyzed by HPLC and found to be homogeneous without deletions and Fmoc protected sequences. Was found. Its purity was found to be greater than 98% and its pep The identity of the tide was confirmed by ES-MS. Yield: 78%. General synthesis 12 . Synthesis of Fmoc-Phe-Phe-Leu-OH: Dissolve 1.0 g (3.6 mmol) of H-Phe-Leu-OH in 25 ml of 10% sodium carbonate w / v, 25 ml of dioxane was added. To this mixture, 1.24 g dissolved in 10 ml of dioxane (3.68 mmol) FmocNHS was added dropwise. Was. The resulting mixture was stirred overnight at room temperature. Evaporation by vacuum The oxane was removed and the resulting basic aqueous solution was extracted three times with ether (5 ml each). ). The pH was adjusted to 2 by adding HCl (1M) and the aqueous phase was extracted three times with vinegar. Extracted with ethyl acid (20 ml each). The combined ethyl acetate phase with water three times, Washed (10 ml each) and evaporated to dryness. Petroleum residue Crystallized by adding rheum ether. Yield: 1.45 g (86%), Mp. Fifteen 3-158; MS calculated 500.59, observed MH +: 501.3. 13 . Synthesis of Z-Glu (OtBu) -Glu (OtBu) -OtBu: 1.14 g (3.38 mmol)Z-Glu (OtBu) -OH, 0.457g HOBt (3.38mmol) and 520μ of DIC (3.38 mmol) in 10 ml of THF, pre-activate for 10 minutes and add 10 ml of A solution of 1.0 g (3.38 mmol) of H-Glu (OtBu) -OtBu, HCl in THF was added. The mixture Was stirred at room temperature overnight. The solvent was removed by evaporation under vacuum The residue was dissolved in DCM (10 ml) and 3 times with 10% aqueous acetic acid v / v (10 ml each). 3% with 10% aqueous sodium bicarbonate (10 ml each) and finally twice with water (each 10 ml). The organic phase is dried over sodium sulfate, filtered, and dried. It was vaporized. The residue colorless oil was used directly without further purification. 14 . Synthesis of Z-Glu-Glu-OH: The oil from 13 was dissolved in 20 ml of 50% TFA-DCM v / v and stirred at room temperature for 2 hours . Evaporate the solution to dryness and remove the residue with petroleum ether. Crystallized from Yield 1.2 g (86.5%). Mp. 174-176 ° C; MS: calculated 410.4, observed MH + 411.0. Hydrolysis in enzyme solution test Peptide-prodrug (XLZ) and corresponding peptide (X-OH) The solution is studied at 37 ° C. in 0.05 M phosphate buffer. Its loose Impulse solution is leucine aminopeptidase (25u / ml) at pH 7.4 or carboxy at pH 7.4. Contains peptidase A (25 u / ml). The degradation of each peptide or peptide Aliquots from prodrug stock solutions (approximately 10^-7~Ten^-8mol) to the test solution To give a total volume of about 5 ml of the reaction mixture, which is maintained in a 37 ° C. water bath. I do. At appropriate time intervals, take 50 pl of sample, without precipitating the protein And analyzed by reverse phase HPLC as described above. Peptide prodrug (XLZ) And the first order rate constant for the degradation of the corresponding peptide (X-OH) is given by the formula t_1/2 = (Ln2) / (Kobs) using the concentration of residual derivative versus time (HPLC peak Height), determined from the slope of the logarithmic linear plot (ie, Kobs). Prodora The ratio of the half-life of the peptide to the corresponding peptide is given by the formula: ratio = (t_1/2(Prodrug)) / (T_1/2(X-OH)). Speed measurement Hydrolysis in buffer The degradation of some peptide prodrugs was reduced at a total buffer concentration of 0.1-0.05M. It was studied in acid or carbonate buffer. To maintain a constant ionic strength (μ) of 0.5 For this, a calculated amount of potassium chloride was added to the buffer unless otherwise indicated. That The temperature was maintained at 37 ° C during the degradation study and the pH was adjusted to hydrochloric acid (4M) or sodium hydroxide. Adjusted by adding a solution (2M). Hydrolysis experiments were performed at pH 2, 7.4 and 11. Was. The rate of degradation was determined by using reverse phase HPLC. For isocratic separation The mobile phase system was 20% acetonitrile, 79.9% water, 0.1% trifluorovinegar Acid or 10% acetonitrile, 89.9% water, 0.1% trifluoroacetic acid. Straight line When using a gradient (40-100% B in 30 minutes), buffer A is 0.1% TFA v / v in water. Yes, buffer Liquid B was 90% acetonitrile 9.9% water 0.1% TFA v / v. Hydrolysis in enzyme solution Degradation of peptides and peptide prodrugs at pH 7.4 with leucine aminopeptidic Carboxypeptidase A (25u / ml) at pH 7.4 at 25 u / ml, pH 7.4 α-chymotrypsin (25 u / ml), pepsin A (25 u / ml) at pH 2.0, or pH 7.4 With butyrylcholinesterase (2 concentrations: 25 and 50 u / ml) The study was carried out at 37 ° C. in a phosphate buffer. The degradation is a peptide or peptide prodrug Aliquots from the stock solution (about 10^-7~Ten^-8mol) to the test solution Begin by providing a 5 ml volume of the reaction mixture, which is maintained in a 37 ° C. water bath And, at appropriate intervals, take approximately 50 μl of the sample and remove any However, analysis was performed by reversed-phase HPLC as described above. The first-order rate constant for the decomposition is Equation t_1/2= (Ln2) / (Kobs) using the concentration of residual derivative versus time (HPLC peak Height (peak height) versus the slope (ie, Kobs) of a linear logarithmic plot. Pieces Various assay conditions are shown in the following examples. Hydrolysis in plasma solution The degradation of peptides and peptide prodrugs was studied in 80% human plasma at 37 ° C. Was. The degradation is achieved by aliquots (about 10^-7~Ten^-8mol) Provide a total of about 5 ml of the reaction mixture in addition to the strike solution, which is maintained at 37 ° C. in a water bath. By taking approximately 50 μl of the sample at appropriate intervals. The sample was treated with 50 μl of a 2% (w / v) solution of zinc sulfate in methanol-water (1: 1 v / v). The reaction was stopped by removing the protein from the sample by treatment with 1 l. At 13000 rpm After centrifugation for 3 minutes, 20 μl of the clear supernatant was analyzed by reverse phase HPLC as described above. . The first order rate constant for decomposition is given by the equation t_1/2= Time using (ln2) / (Kobs) Concentration of residual derivative with respect to Determined from the slope of the logarithmic linear plot (ie, Kobs) versus degree (the height of the HPLC peak). Specified. The individual assay conditions are shown in the following examples. H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (Glu)₆-OH: Hydrolysis in buffer H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (Glu)₆-OH (about 5 × 10^-6Decomposition of M) Were studied in different aqueous buffers (0.1 M). Next, pH = 2, pH = 7.4 and pH = 11 Was disassembled. The peptide is found to be stable at the above pH values Which caused only about 5% of the peptide to be degraded over 24 hours. Hydrolysis in leucine aminopeptidase 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing leucine aminopeptidase (25 u / ml) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (Glu) in₆-OH (about 10^-FiveStudy the decomposition of M) as described above did. The first-order rate constant was determined as described above, and 5.2 × 10^-3min^-1Found to be Was done. Its half-life was calculated to be 133 minutes. Hydrolysis in carboxypeptidase A H-Tyr- in 0.05 M phosphate buffer containing carboxypeptidase A (25 u / ml) Gly-Gly-Phe-Leu- (Glu)₆-OH (about 10^-FiveThe degradation of M) was studied as described above. That pe The peptide was characterized as stable. About 15% of that peptide is at 24:00 Decomposed over time. H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (Lys)₆-OH Hydrolysis in leucine aminopeptidase H-Tyr- in 0.05 M phosphate buffer containing leucine aminopeptidase (25 u / ml) Gly-Gly-Phe-Leu- (Lys)₆-OH (about 10^-FiveStudy the degradation of M) as described above did. The first order rate constant was determined as described above, and 3.6 × 10^-3min^-1Found to be Was done. The half-life was calculated to be 191 minutes. Hydrolysis in pepsin A H-Tyr-Gly-G in 0.05 M phosphate buffer (pH = 2.0) containing pepsin A (25 u / ml) ly-Phe-Leu- (Lys)₆-OH (about 10^-FiveThe degradation of M) was studied as described above. The first order rate constant was determined as described above and 1.2 × 10^-3min^-1It was found that. The half-life was calculated to be 580 minutes. Fmoc-Phe-Leu-((S)-(+)-mandelic acid)-(Glu)₆-OH: Hydrolysis in butyrylcholinesterase The peptide prodrug Fmoc-Phe-Leu-((S)-(+)-mandelic acid)-(Glu)₆-OH (about 10^- ^Five The hydrolysis of the ester bond formed by the mandelic acid in M) is carried out as described above. In a 0.05M phosphate buffer (pH = 7.4) containing tyrylcholinesterase (50u / ml) Researched. The half-life is calculated as described in the general procedure t_1/2= Evaluated as 212 minutes Was. Based on the recovery of Fmoc-Phe-Leu-OH, its half-life is t_1/2= 164 minutes Was evaluated. The difference between those values is probably due to the renewal of Fmoc-Phe-Leu-OH in urethane. The binding at the Fmoc protecting group due to the degradation. Fmoc-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH: Hydrolysis in butyrylcholinesterase Peptide prodrug Fmoc-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH (about 10^-FiveM) The hydrolysis of the ester bond made by hydroxyacetic acid in In a 0.05 M phosphate buffer (pH = 7) containing butyrylcholinesterase (50 u / ml). .4) studied in Based on the recovery of Fmoc-Phe-Leu-OH, its half-life is t_1/2= 144 minutes Was evaluated. Fmoc-Phe-Leu-OH: Hydrolysis in butyrylcholinesterase 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing butyrylcholinesterase (50 u / ml) Fmoc-Phe-Leu-OH (about 5 × 10^-FiveThe degradation of M) was studied as described above. . Half-life is t_1/2= 25h. H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-mandelic acid)-(Glu)₆-OH: Hydrolysis in buffer H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-mandelic acid)-(Glu)₆-OH (1 × 10^-FiveM) The gradation was studied in different aqueous buffers (0.1 M) as described above. Its decomposition Was carried out at pH = 2, pH = 7.4 and pH = 11. Makes the peptide stable at the above pH values Characterized that there is. This allows less than 5% of the peptide to be spread over 24 hours. Was disassembled. Hydrolysis in leucine aminopeptidase 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing leucine aminopeptidase (25 u / ml) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-mandelic acid)-(Glu)₆-OH (1 × 10^-FiveM) Was studied as described above. Determine the first order rate constant as described above. However, its half-life was calculated to be 93 minutes. Hydrolysis in carboxypeptidase A 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing carboxypeptidase A (25 u / ml) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-mandelic acid)-(Glu)₆-OH (1 × 10^-FiveM) The degradation was studied as described above. Determine the first order rate constant as described above, Its half-life was determined to be 10.3 minutes. Hydrolysis in butyrylcholinesterase Peptide prodrug H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-((S)-(+)-mandelic acid)-(Glu)₆ -OH (1.75 × 10^-FiveM) made by mandelic acid in The hydrolysis of the chill bond was carried out using butyrylcholinesterase (50 u / ml) as described above. The study was carried out in 0.05M phosphate buffer (pH = 7.4) containing 0.05M phosphate buffer. Its half-life is t_1/2= 50.2 minutes It was calculated to be. H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH: Hydrolysis in buffer H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH (1 × 10^-FiveDecomposition of M) The studies were performed in different aqueous buffers as described. The degradation is pH = 2, pH = 7.4 and pH = 11. The peptide is characterized as stable at the above pH values Was. This resulted in less than 5% of the peptide being degraded in 24 hours. Hydrolysis in leucine aminopeptidase 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing leucine aminopeptidase (25 u / ml) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH (1 × 10^-FiveM) deg The gradation was studied as described above. The first-order rate constant is determined as described above. The half-life was calculated to be 16.1 minutes. Hydrolysis in carboxypeptidase A 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing carboxypeptidase A (25 u / ml) H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH (1 × 10^-FiveM) Degra The dation was studied as described above. Characterize that the peptide is stable It was This resulted in less than 13% of the peptide being degraded in 24 hours. Hydrolysis in butyrylcholinesterase Peptide prodrug H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH (1 .75 × 10^-FiveHydrolysis of the ester bond formed by hydroxyacetic acid in M) Containing butyrylcholinesterase (25 u / ml or 50 u / ml) as described above. 05M phosphate buffer (pH = 7.4) was studied in. Its half-life is determined by using 25u butyrylcholinesterase to_{1 /} _Two = 119.3 minutes and using 50 u / ml t_1/2= 86.6 minutes. Hydrolysis in human plasma Peptide prodrug H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- (hydroxyacetic acid)-(Glu)₆-OH Decomposition was performed at 37 ° C for peptide (7 x 10^-FiveM) 1 ml of 0.05M phosphate buffer to 4 ml of human In addition to plasma, they were processed as described above. The first order rate constant is determined as described above and Has a half-life of t_1/2= 19.2 minutes. Z-Glu-Glu-OH: Hydrolysis in carboxypeptidase A 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing carboxypeptidase A (25 u / ml) InZ-Glu-Glu-OH (1 × 10^-FiveM) study the degradation as described above Was. The peptide was characterized as stable for 24 hours. H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (Lys-Glu)_Three-OH Hydrolysis in carboxypeptidase A 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing carboxypeptidase A (25 u / ml) H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (Lys-Glu) in_Three-OH (about 10^-FiveM) deg The gradation was studied as described above. The first-order rate constant is determined as described above. The half-life was calculated to be 396 minutes. Hydrolysis in leucine aminopeptidase 0.05M phosphate buffer (pH = 7.4) containing leucine aminopeptidase (25u / ml) H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (Lys-Glu) in_Three-OH (about 10^-FiveM) deg The gradation was studied as described above. The first-order rate constant is determined as described above. With a half-life of 145 minutes Calculated. Hydrolysis in α-chymotrypsin HT in 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing α-chymotrypsin (25 u / ml) rp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (Lys-Glu)_Three-OH (about 10^-FiveM) Degradation Was studied as described above. The first-order rate constant is determined as described above, and its half-life is Calculated to be 613 minutes. Hydrolysis in pepsin A H-Trp-Ala in 0.05 M phosphate buffer (pH = 2.0) containing pepsin A (25 u / ml) -Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (Lys-Glu)_Three-OH (about 10^-FiveM) The study was performed as described above. The peptide was characterized as stable. H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (Glu)₆-OH Hydrolysis in α-chymotrypsin HT in 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing α-chymotrypsin (25 u / ml) rp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu- (Glu)₆-OH (about 10^-FiveM) Degradation Was studied as described above. The first-order rate constant is determined as described above and its half-life is 52 Calculated to be 3 minutes. H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH Hydrolysis in leucine aminopeptidase 0.05 M phosphate buffer (pH = 7.4) containing leucine aminopeptidase (25 u / ml) ) In H-Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu-OH (about 10^-FiveM) Degradation Were studied as described above. Its half-life was calculated to be less than 20 minutes. In vitro research μ-opioid receptor activity-1 Pro-drug of μ-opioid receptor in bovine brain The affinity was determined by Kristensen et al. (1994) [K. Kristensen, C.E. B. Cristensen, L . L. Christrup, and L. C. NieLsen (1994). The mu₁, Mu_Two, Delta, kappa opio id receptor binding profiles of methadone stereoisomers and morphine. Li fe Sci. 56, PL45-PL50.]. The prodrug Was determined in freshly made solution and in the dependent solution for 20 hours at room temperature. The experimental data is summarized in Table 1. Table 1. Inhibition of 3H-DAMGO (2nM) μ-opioid receptor activity-2 Affinity of prodrug of the present invention as μ-opioid receptor agonist Nity, Kramer et al. (1997) [T. H. Kramer, H .; B artosz-Bechowski, p. Davis, V .; J. Hruby, and F. Porreca (1997). Extraordi nary potency of a novel delta opioid receptor agonist is due in part to increased efficacy. Life Sci. 61: 2, 129-135. ] The isolated It was determined using a mouse in vitro vas deferens model. New activity of the prodrug Determined in well made solution and in stored solution for 48 hours at room temperature. The experimental data Are summarized in Tables 2 and 3. Table 2. Vas deferens activity Reduction rate (%) at 100 nM: a: <25%; aa: <50%; aaa: <75% Table 3. Vas deferens activity In vivo research Analgesic activity Attempts to determine in vivo activity in mice have been described by Swedberg (1994) [M. D. Swed berg (1994). The mouse grid-shock analgesia test: pharmacological charact erization of latency to vocalization threshold as an index of antinocice ption. J. pharmacol. Exp. Ther. 269: 3, 1021-1028. ] Described by This was performed using a lid-shock model. Table 4 summarizes the experimental results. Table 4. Mouse analgesic activity NT: Not measured. NA: No activity. WA: weak activity at 20mg / kg Conclusion Native enkephalin has a half-life of 6.0 minutes in 80% human plasma, With a half-life of 10.0 minutes in peptidase (20 u / ml) and carboxypeptidase ( (GT / Rasmussen and H. Bundgaard, I. nt. J. Pharm., 79, ppll3-122 (1991)). Provides greater protection of the peptide sequence as compared to This was obtained about DSIP The results are further corroborated; native DSIP is leucine aminopeptidase (25u / Ml) with a half-life of less than 20 minutes in DSIP- (LysGlu)_Three-OH is 1 under the same conditions Decomposes with a half-life of 45 minutes. Generally, α-chymotrypsin or carboxypeptida The half-life of pre-sequence-containing DSIP molecules in a solution containing I have ordered. Native DSIP has not been tested under these conditions, but Has been fully verified to be rapidly degraded in plasma and tissue extracts (HL Lee, “Peptide and Protein Drug Delivery”, Marcel Dekker Inc. Since 1991, Chapter 9), the corresponding half-life for presequence-containing DSIP molecules is Much more than the value obtained Must be expected to be low. In addition, all tested peptides were butyryl It was cleaved by cholinesterase and showed rapid bioreversibility. In vitro tests conclude that presequencing has a significant effect on biological activity It can be attached. The results provided in Tables 1, 2 and 3 show the prodrugs of the present invention. Is more sensitive to μ-opioid receptors than native Leu-enkephalin Clearly show that affinity is decreasing. This requires To exert its activity, in this case, to bind to the μ-opioid receptor. Prodrugs, for example, release native pharmaceutically active peptides Must be hydrolyzed by plasma enzymes such as butyrylcholinesterase No. The difference between the freshly prepared solution and the solution kept at room temperature for 20 or 48 hours is twofold. The solution containing the prodrug of the invention may be 20 or 48 It is hydrolyzed to some extent when stored for a time, thereby producing native Leu-ene Caffeine may be released. However, as shown by speed measurements, The light prodrug is stable over the entire pH range. The most noticeable effect on neglect Is the pre-array (Glu)₆Is observed when applying. This makes it more plausible The explanation is (Glu)₆Significantly lower water solubility of the contained prodrug. Low solution speed It is extremely possible that only the prodrug fraction is soluble in the freshly prepared solution Is high. However, when left in solution for 20 or 40 hours, the compound slowly Dissolves, thereby increasing the amount of active available in the assay Will do. Studies of microanaesthetic activity in vivo conclude that presequences and linkers are important Can be opened. Clearly, the (S) d of mandelic acid Positive presequence (Lys) combined with an enantiomer₆Showed the required effect Is the pre-sequence (Lys) in combination with the (R) enantiomer of mandelic acid₆Including d Nkephalin did not show any activity. Furthermore, electron neutral pre-sequence (LysGlu)_Three Is a combination with (R) or (S) mandelic acid Despite the fit, they did not show the required effect. In conclusion, the linker and The combination with the pre-sequence may be such that the prodrug of the present invention is Important in the ability to cross the barrier, the present invention Hope to transport prodrugs to the required area by selecting appropriate combinations spread.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF) , CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, S D, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG) , KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM, AT , AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, CZ, DE, DE, D K, DK, EE, ES, FI, FI, GB, GE, GH , HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, L V, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ , PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, U G, US, UZ, VN, YU, ZW

Claims

[Claims] 1. Pharmaceutically active peptides (X-OH), peptide amides (X-NH)_Two),or Is a prodrug of a peptide ester (X-OR), wherein the prodrug is General formula I: X-L-Z (I) Wherein X is attached to L at the C-terminal carbonyl function of X; L is a linking group containing 3 to 9 skeletal atoms, wherein the C-terminal carbonyl of X is The bond between R and L is not a C-N amide bond; Z is a peptide sequence of 2 to 20 amino acid units and is located at the N-terminal nitrogen atom of Z Where each amino acid unit is independently Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met, Orn, and Formula II -NH-C (R^Three) (R^Four) -C (= O)-(II) (Where R^ThreeAnd R^FourIs independently C_1-6-Alkyl, phenyl and phenyl Selected from ru-methyl, where C^1-6-Alkyl is halogen, hydroxy, 1 to 3 positions selected from amino, cyano, nitro, sulfono, and carboxy And phenyl and phenyl-methyl can be substituted by C_1-6 -Alkyl, C_2-6-Alkenyl, halogen, hydroxy, amino, cyano, Optionally substituted with 1 to 3 substituents selected from nitro, sulfono, and carboxy Or R^ThreeAnd R^FourTogether with the carbon atoms attached to them Forms a lopentyl, cyclohexyl, or cycloheptyl ring) Selected from the amino acid units of Or a salt thereof. 2. The amino acid unit in Z is selected from 3 or 2 different amino acids. The prodrug according to claim 1, wherein the amino acids are the same or the same amino acid. Egg. 3. The amino acid unit in Z is selected from Glu, Met and Lys, especially Glu and Ly. 3. The prodrug according to claim 1 or 2, wherein the prodrug is selected independently of s. G 4. The pharmaceutically active peptide (X-OH), peptide amide (X-NH)_Two) Or the peptide ester (XR) is composed of 2 to 200 amino acid units. A prodrug according to any of the preceding claims. 5. Any of the preceding claims, wherein Z comprises 3-15 amino acid units. A prodrug according to any of the above. 6. The bond between the C-terminal carbonyl function of X and L is opened by plasma enzymes. A prodrug according to any of the preceding claims, characterized in that it can be cleaved. 7. The bond between the C-terminal carbonyl function of X and L is a thiol ester A bond according to any of the preceding claims, which is a bond or an ester bond. Lodrug. 8. The bond between the N-terminal nitrogen in L and Z is a carboxamide bond ( -C (= O) -N-), a sulfonamide bond (-SO_Two-N-), alkylamine Bond (—C—N—), carbamate bond (—O—C (＝ O) —N—), thiocal Bamate bond (-SC (= O) -N-), urea bond (-NC (= O) -N- ), A thioamide bond (—C (＝ S) —N—), a cyanomethylene amino bond (—C (CN) -N-) or N-methylamide bond (-C (= O) -N (CH_Three)-) A prodrug according to any of the preceding claims, characterized in that: 9. The preceding claim, wherein said is obtained from a hydroxy-carboxylic acid The prodrug according to any one of the above items. Ten. Wherein L is obtained from α-hydroxy-carboxylic acid. The prodrug according to claim 10. 11． L is a general formula: HO-((R¹) (R^Two) -COOH (wherein R¹And R^TwoIs independent And H, C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, aryl, aryl-C_1-4− Alkyl, heteroaryl or heteroaryl-C_1-4-Is alkyl Or R¹And R^TwoTogether with the carbon atoms attached to them, Forms a rohexyl or cycloheptyl ring, wherein an alkyl or alkenyl Groups are amino, cyano, halogen, isocyano, isothiocyano, thiocyano , Sulfamyl, C_1-4-Alkylthio, mono- or di-C_1-4-Alkyl- Amino, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, aryl, heteroaryl, aryl Luoxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkyl carbo Nyloxy, aminocarbonyl, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino Carbonyl, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino, mono- or di- -C_1-4-Alkyl-amino-C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkylcarbonyla Substituting with 1 to 3 substituents selected from mino, sulfono, and sulfino Wherein the aryl or heteroaryl group is C_1-4-Alkyl, C_2-4Alkenyl , Nitro, amino, cyano, halogen, isocyano, isothiocyano, thiocyan No, Sulfamyl, C_1-4-Alkylthio, mono- or di-C_1-4-Alkyl -Amino, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, aryloxy, carboxy, C₁ _-Four -Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkylcarbonyloxy, aminocarbo Nil, mono- or di-C_1-4-Alkyl-aminocarbonyl, mono- Or di-C_1-4-Alkyl-amino, mono- or di-C_1-4-Alkyl- Amino-C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkylcarbonylamino, sulfono, and Which can be substituted with 1 to 3 substituents selected from sulfino) The prodrug according to claim 10, wherein the prodrug is obtained from roxycarboxylic acid. . 12． L is hydroxyacetic acid, (S)-(+)-mandelic acid, L-lactic acid ((S)- (+)-2-hydroxypropanoic acid), L-α-hydroxy-butyric acid ((S) -2 -Hydroxybutanoic acid) and α-hydroxy-isobutyric acid A prodrug according to any of the preceding claims, characterized in that: 13. L is a general formula: HO-C (CH_Two-R^Five) (R^Two) -COOH (wherein R^FiveIs H, C_1-5 -Alkyl, C_2-5-Alkenyl, aryl, aryl-C_1-3-Alkyl, hete Loaryl, heteroaryl-C_1-3Selected from alkyl, where alkyl Or an alkenyl group is amino, halogen, mono- or di-C_1-4-Alkyl -Amino, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, aryl, heteroaryl, ant Oxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkylcal Substitute with 1 to 3 substituents selected from bonyloxy and aminocarbonyl Aryl or heteroaryl can be C_1-4-Alkyl, C_2-4−Arche Nil, nitro, amino, halogen, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amido No, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarboni Le, C_1-4-Selected from alkylcarbonyloxy and aminocarbonyl 1-3 substituents; and R^TwoIs as described in claim 11. 12. The method according to claim 11, which is obtained from an α-hydroxycarboxylic acid. Prodrug. 14. X is enkephalin, angiotensin II, vasopressin, endothecin Phosphorus, neuropeptide Y, vasoactive intestinal peptide, substance P, neurotensin , Endorphin, insulin, gramicidin, paracelsin, delta-sleep induction Derived peptide, ANF, vasotocin, bradykinin, dynorphin, growth hormone Releasing factor, growth hormone releasing peptide, oxytocin, calcitonin, calcito Nin gene-related peptide, calcitonin gene-related peptide II, growth hormone release Derived peptide, tachykinin, ACTH, brain natriuretic excretion polypeptide, koreshi Stokinin, corticotropin releasing factor, diazepam binding inhibitor fragment , FMRF-amide, galanin, gastric release polypeptide, gastrin, gastrin Release peptide, glucagon, glucagon-like peptide-1, glucagon-like pepti C-2, LHRH, melanin-concentrating hormone, α-MSH, morphine regulatory peptide, Tillin, neurokinins, neuromedins, neuropeptide K, neuro Peptide Y, PALAP, pancreatic polypeptide, peptide YY, PHM, secretin, soma Tostatin, substance K, substance P, TRH, vasoactive intestinal polypeptide, or their Is the peptide sequence of any modified or truncated analog A prodrug according to any of the preceding claims, characterized in that: 15． Issues in "testing hydrolysis in enzyme solutions" as defined herein Half-lives of prodrugs and their corresponding counterparts in "Testing hydrolysis in enzyme solutions" The ratio between the half-life of the peptide (X-OH) is determined by the enzyme carboxypeptidase A. A plug according to any of the preceding claims, characterized in that when used it is at least 2. Lodrug. 16． 16. The prodrug according to claim 15, wherein said ratio is at least 5. G 17． 17.The method of claim 16, wherein the ratio is at least 10. Prodrug. 18． Issues in "testing hydrolysis in enzyme solutions" as defined herein Half-lives of prodrugs and their corresponding counterparts in "Testing hydrolysis in enzyme solutions" The ratio between the half-life of the peptide (X-OH) is determined by the enzyme leucine aminopeptidase. At least 2 when using Prodrug. 19. 19. The prodrug according to claim 18, wherein said ratio is at least 5. G 20. The prodrug according to claim 19, wherein the ratio is at least 10. G twenty one. A prodrug according to any of claims 1 to 20, and a pharmaceutically acceptable And a carrier. twenty two. 21. A prodrug according to any of claims 1 to 20 for use in therapy. twenty three. 21. Any of claims 1 to 20 for the preparation of a pharmaceutical composition for use in therapy. Use of the described prodrug. twenty four. Immobilized linker-peptide sequence Prot-L-Z-SSM wherein L is General formula: -O-((R¹) (R^Two) -C (= O)-(wherein, R¹And R^TwoIs independently H , C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, aryl, aryl-C_1-4-Archi , Heteroaryl or heteroaryl-C_1-4-Is alkyl, or R¹And R^TwoTogether with the carbon atoms attached to them, cyclopentyl, cyclohexyl Form a sil or cycloheptyl ring, wherein the alkyl or alkenyl group is , Amino, cyano, halogen, isocyano, isothiocyano, thiocyano, sulf Famil, C_1-4-Alkylthio, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino , Hydroxy, C_1-4 -Alkoxy, aryl, heteroaryl, aryloxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkylcarbonyloxy, aminocar Bonyl, mono- or di-C_1-4-Alkyl-aminocarbonyl, mono-if Kuha-C_1-4-Alkyl-amino, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amido No-C_1-4-Alkyl, C_1-4-Alkylcarbonylamino, sulfono, and sulfo Can be substituted with 1 to 3 substituents selected from fino, A loaryl group is represented by C_1-4-Alkyl, C_2-4Alkenyl, nitro, amino, cyano , Halogen, isocyano, isothiocyano, thiocyano, sulfamyl, C_1-4 -Alkylthio, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino, hydroxy, C_1-4-Alkoxy, aryloxy, carboxy, C_1-4-Alkoxycarboni Le, C_1-4-Alkylcarbonyloxy, aminocarbonyl, mono- or di- -C_1-4-Alkyl-aminocarbonyl, mono- or di-C_1-4-Alkyl- Amino, mono- or di-C_1-4-Alkyl-amino-C_1-4-Alkyl, C_1- _Four -Selected from alkylcarbonylamino, sulfono, and sulfino Z can be substituted with 3 substituents; Z is 2-20 amino A peptide sequence comprising an acid unit, wherein each amino acid unit is independently Al a, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His, Met, Orn, and Formula II -NH-C (R^Three) (R^Four) -C (= O)-(II) (Where R^ThreeAnd R^FourIs independently C_1-6-Alkyl, phenyl and phenyl Selected from ru-methyl, where C_1-6-Alkyl is halogen, hydroxy, 1 to 3 positions selected from amino, cyano, nitro, sulfono, and carboxy And phenyl and phenyl-methyl can be substituted by C_1-6 -Al Kill, C_2-6-Alkenyl, halogen, hydroxy, amino, cyano, nitro, Optionally substituted with 1 to 3 substituents selected from sulfono and carboxy Or R^ThreeAnd R^FourTogether with the carbon atoms attached to them , Cyclohexyl, or cycloheptyl ring) SSM denotes a solid support material; and Prot denotes H or a hydroxy protecting group. Shown]. twenty five. The solid support material (SSM) is made of polystyrene, polyacrylamide, Methylacrylamide, polyethylene glycol, cellulose, polyethylene, Polyethylene glycol, latex, and die grafted on polystyrene An immobilized linker according to claim 24, wherein the linker is selected from nabeads. --- Peptide sequence Prot-LZ-SSM. 26. Preparation of prodrugs of peptides, peptide amides, or peptide esters The use of the immobilized linker-peptide sequence Prot-LZ-SSM for the following. 27. Peptide (X-OH), Peptide amide (X-NH_Two) Or peptide ester A method for the preparation of a prodrug of (X-OR), wherein the C-terminus is activated The corresponding peptide in form (X-Act) is linked to the immobilized linker-peptide sequence H- A method comprising coupling to an LZ-SSM. 28. Peptide (X-OH), Peptide amide (X-NH_Two) Or peptide ester A method for preparing a prodrug of (X-OR), comprising: a) N-α-protected amino acid or C-terminal activated form of carboxyl activated form Of the N-α-protected dipeptide of the present invention is combined with the immobilized linker peptide sequence HLZ. -Linked to SSM, thereby immobilized Forming an N-α-protected peptide fragment, b) removing the N-α-protecting group, thereby having an unprotected N-terminus Forming an immobilized peptide fragment, c) a further carboxy-activated form of the N-α-protected amino acid or a further C-terminus An activated form of the N-α-protected dipeptide is purified using the immobilized peptide fragment Linked to the unprotected N-terminus of the Removal / repetition of steps b) and c) until the required peptide sequence X is obtained Repeating the tying procedure; d) removing the prodrug XLZ from the solid support material, Obtaining a free prodrug in the form of rubonic acid, amide, or ester; A method that includes 29. The N-α-protecting group is tert-butyloxycarbonyl and 9-fluorenyl. 29. The method according to claim 28, which is selected from dimethyloxycarbonyl. Law. 30. General formula I: X-L-Z (I) Wherein X is a peptide sequence attached to L at the C-terminal carbonyl function of X Yes; L is a linking group containing 3 to 9 skeletal atoms, wherein the C-terminal carbonyl of X is The bond between R and L is not a C-N amide bond; Z is a peptide sequence of 2 to 20 amino acid units and is located at the N-terminal nitrogen atom of Z Where each amino acid unit is independently Ala, Leu, Ser, Thr, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, H is, Met, Orn, and Formula II -NH-C (R^Three) (R^Four) -C (= O)-(II) (Where R^ThreeAnd R^FourIs independently C_1-6-Alkyl, phenyl and phenyl Selected from ru-methyl, where C_1-6-Alkyl is halogen, hydroxy, 1 to 3 positions selected from amino, cyano, nitro, sulfono, and carboxy And phenyl and phenyl-methyl can be substituted by C_1-6 -Alkyl, C_2-6-Alkenyl, halogen, hydroxy, amino, cyano, Optionally substituted with 1 to 3 substituents selected from nitro, sulfono, and carboxy Or R^ThreeAnd R^FourTogether with the carbon atoms attached to them Forms a lopentyl, cyclohexyl, or cycloheptyl ring) Selected from the amino acid units of Or a salt thereof.