JP2001504435A

JP2001504435A - 血管内膜過形成症およびその他の疾病を阻止する光活性化合物

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Publication number: JP2001504435A
Application number: JP50769197A
Authority: JP
Inventors: バイロンロビンソン; アレンアールモーガン; ヒューエルナーシソ
Original assignee: ミラヴァントファーマシューティカルズインコーポレイテッド
Priority date: 1995-07-27
Filing date: 1996-07-23
Publication date: 2001-04-03
Also published as: EP0862564A4; US6054449A; US5773609A; CA2227808A1; WO1997005127A1; US6008211A; AU726067B2; EP0862564A1; AU6594796A

Abstract

(57)【要約】光感作療法において、in vivoの標的組織に対する強い選択性と多様性をもった光感作物質の広範なクラス。ソラレンのような多数のフロクマリン化合物は、光活性化されると細胞増殖抑制活性を示すが、アテローム斑のような特定の標的組織への選択的蓄積についてin vivoにおける特異性をほとんど示さない。反応性酸素生成光感作物質（「ROPP」）は（アテローム斑細胞のような）過剰増殖している細胞に対して親和性のある光感作物質である。ポルフィリンのようなROPPの光活性はポルフィリンのメタル化によって低下するかもしれないが、メタル化ROPPの過剰増殖組織に対する選択的親和性は本質的に変化せずに残存する。フロクマリン化合物をROPPに結合させてF-ROPPを形成させると、F-ROPPのフロクマリン部分の細胞増殖抑制的性質を利用することができ、一方、アテローム斑のような過剰増殖細胞に対する当該化合物のROPP部分の選択的親和性は、細胞障害性の無い強い組織選択性を提供する。in vivoにおいて、あるF-ROPPはF-ROPPのＦ部分を光活性化し得る波長の光で標的組織を照射することによって標的組織中に選択的に蓄積し、それによってF-ROPPを標的組織の細胞ＤＮＡと単付加物を形成させ又は架橋させることができる。その後に第２の波長の光が標的組織に送出され、ROPP部分を光活性化して細胞活性を更に阻害し得る。

Description

【発明の詳細な説明】血管内膜過形成症およびその他の疾病を阻止する光活性化合物１．発明の分野本発明は光活性化合物および該化合物を、医学的状態の診断および治療のために使用する方法に関する。２．従来技術光力学療法（ＰＤＴ）は、癌、乾癬、血管系疾患や、良性前立腺肥大症、黄斑変性症、緑内症、およびある種のウイルス感染などの非癌性の過形成症、を含む種々の疾病の治療に用いられている。ＰＤＴは、光感作物質の標的組織中への濃縮と、その後の、特定の波長と出力で光を供給する光源を含む装置による当該化合物の光活性化を必要とする。ＰＤＴのために投与される薬剤は、光子を吸収しそのエネルギーを酸素に移し、その酸素を細胞障害性または細胞増殖抑制性分子に変化させる、という固有の性質のゆえに一般に光感作物質（ＰＳ）として知られている。表１はＰＤＴに一般的に用いられる光感作物質化合物のクラスのリストを示す。ここでＰＳは以下「ROPP」（反応性酸素生成光感作分子）および「 LEP」（発光光感作分子）とも別称される。排他的なものではないが、表１に示されたＰＤＴ光感作薬剤は現在の技術上用いられているROPPおよびLEPのバラエティの例である。ＰＤＴに用いられる光活性化装置は、通常その出力光を伝達し遠隔の標的組織へ送出するための侵入可能な光伝達カテーテルと組み合わされた、レーザーのような単色光源を含む。このような干渉性の光伝達カテーテルは技術的によく知られており、たとえば、米国特許5,169,395号；5,196,005号；および5,231,684号の各明細書に記載されている。光源と光伝達カテーテルとともによく利用される装置は、光感作物質のゆっくりとした局所的放出のための、ドラッグデリバリー装置および／またはバルーンパフュージョンカテーテル（balloon perfusion ca theter）（米国特許5,213,576号明細書）および／または種々の薬物投与用ステントを含む。ＰＤＴは種々の癌の治療のため現在カナダ、日本、およびオランダで認められている。癌の治療に加えて、ＰＤＴは乾癬の治療のための試験中である。血液の体外ＰＤＴは皮膚移植手術に伴う内膜過形成症の阻止に関して評価中である。ＰＤＴはまた血管疾病の治療、もっとも一般には血管形成術に伴う血管内膜過形成症の阻止に関しても評価中である。ROPPは現在、基底細胞癌、基底細胞母斑症候群、扁平上皮癌およびAIDS関連カポジ肉腫のような皮膚癌の治療に関して臨床試験中である。ROPPはまた、癌前駆体、バレット食道（Barre's esophagus）の治療のために研究されている。それに加えて、ROPPは浸潤性の癌、癌前駆体、乾癬、非癌性の尿路異常（non-cancerous urological disorders）、ウイルスの不活化、黄斑変性症、緑内症および種々の血管疾病の治療に対して有用であろう。表１：ROPPsおよびLEP＊（ｍ）は明細書中に（ｍ）で示した構造を有する化合物であり、ｍは１から２２の間の整数である。表１に示したような、かつ、図１−２３に例示したようなROPPおよびLEPは、ウサギおよびブタモデルにおいて、レーザー誘導蛍光および化学的抽出により証明されたように、in vitroとin vivoの双方でカテーテル誘導性アテローム斑に選択的に蓄積することが示されている（HL Narciso，et al，Retention fo tine thyl etiopurpurin(SnET2)by ahteromatous plaques:Studies in vitro & in vi vo rabbits，Proceedings of SPIE:Diagnosis and Therapeutic Cardiovascular Intervention IV，1994,2130:30-41）。ヒトの屍体の大動脈を用いたin vitro の研究によりROPPおよびLEPのような光感作物質の自発性アテローム斑への受動的な蓄積がおこることが明らかになった。ある種のROPPおよびLEPは細胞中の核膜へ侵入して核ＤＮＡにインターカレートすることができ、特に正の電荷を持つ（陽イオン性）ROPPはそうである。。ソラレン型の化合物もまた、血管内膜過形成症を阻止するその能力について研究されている。ソラレンおよび他のフロクマリン（クマリンに融合したフラン及びその誘導体）もまた40年以上の間、乾癬の治療に用いられてきた光感作物質である。このようなソラレンを基礎とする光感作療法はここではＰＵＶＡ（紫外Ａ光によって活性化されたソラレン）とも称する。いくつかのフロクマリン化合物の例示リストを表２に示した。系統的に投与されたソラレン型化合物は細胞の核膜を通過し標的組織の核ＤＮＡとインターカレートする。標的組織細胞のＤＮＡとのインターカレーションに続いて、ソラレン化合物は紫外線または短波長の可視光によって光活性化され、（たとえば、FP Gasparo，etal，The excitation o f 8-Methoxypsoralen with visible light:Reversed phase HPLC quantitation of monoadducts and cross-links ，Photochem．Photobiol.，1993，57(6):1007- 1010を参照のこと）、紫外線は好ましくは、光伝達カテーテルまたは類似の伝達装置によって標的組織にのみ送出され、ＤＮＡの架橋を引き起こし、ついには標的組織を含む細胞において変異原性の効果をあらわす(KL March，et al．8-Meth oxypsoralen and longwave ultraviolet irradiation are a novel antiprolife rative combination for vascular smooth muscle ，Circulation，1993，87:184 -91;BE Sumpio，et al．Control of smooth muscle cell proliferation by pso ralen photochemotherapy ，J．Vasc．Surg．1993，17:1010-1018:KW Gregory，et al，Photochemotherapy of intimal hyperplasia using psoralen activated by ultraviolet light in a porcine model ，Lasers in Surg．Med． 1994(Suppl6):12Abstact）。フロクマリンは光化学作用物質であり医学における診断及び治療への応用の可能性を示す。前述したようなフロクマリンによるＤＮＡの架橋は２段階の過程を経る。動物の体内にフロクマリンを注射すると、これに伴って（平面的な）フロクマリン分子は最初に細胞内のＤＮＡまたはＲＮＡの２本鎖中にインターカレートする。インターカレーションに続いて、ポリ核酸へのフロクマリンの共有結合的付加が、その特定のフロクマリンの吸収帯中の光のエネルギーが加わることによって起こる。フロクマリン−ＲＮＡまたはフロクマリン−ＤＮＡ単独付加物あるいは架橋物はいずれもインタカレートした分子の光照射によって生成することができる。塩基対構造を有する共有結合性の架橋を形成することにより、フロクマリンは細胞の代謝活性を変化させ細胞増殖の抑制を誘導することができる（GD Cimino，HB Gamper，ST Isaacs，JE Hearst，Psoralens as photoactive probe s of nucleic acid structures and function:Organic chemistry and biochemi stry ，Ann．Rev．Biochem.，1985，54:1154-93）。表２：フロクマリン類＊（ｍ）は添付の図面中の図ｍに示した構造を有する化合物に対応し、ｍは２３から２９の整数である。＊＊フロクマリンは天然であっても合成であってもよい冠状動脈疾患は生命の初期に血管壁に形成される脂肪線条の破壊によって開始されると考えられており、その破壊は次に血栓の形成を促進する。次第に血栓が形成され、脂肪脂質、泡沫細胞、コレステロール、カルシウム、フィブリンおよびコラーゲンの蓄積する構造を提供する。この脂質に富む物質の集まりの上に繊維状のキャップが形成される。一定期間ごとに、この繊維状のキャップは破裂して脂質に富む物質のいくらかを放出し、残ったプラーク物質を循環血にさらすことがある。血液中の増殖因子は中膜から内膜への平滑筋細胞（ＳＭＣ）の移動を開始させ、内膜でＳＭＣは増殖を開始する。潰瘍斑は「障害応答モード」で血小板の沈着および血栓形成を誘導する。このサイクルは最後にプラークが破裂し、末端冠状動脈が血栓によって詰まり心臓発作がおこるまで繰り返えされる。（V ．Fuster，et al,Clinical-Pathological Correlations of Coronary Disease P rogression and Regression ，Supplement to Circulation，Vol.86，No．6，199 2:III-1-III-11およびJJ Badimon,Coronary Atherosclerosis ，A Multifactoria l Disease ，Supplement to Circulation，Vol．87，No.3,1993:11-3-11-16）。経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）、あるいはアテレクトミー、またはレーザー血管形成術またはステント手術、あるいは無数のより新しい技術、のような介入的療法によって冠状動脈症が治療されたとき再狭窄が起こる。再狭窄は血管損傷に対する生体による過度の内因性の修復が原因である。血管内膜過形成症あるいは内膜側の（および、おそらくは外膜側の）平滑筋細胞の過剰増殖は再狭窄の主な寄与因子である。平滑筋細胞の過剰増殖は新生内膜を形成し、それが動脈管腔の穴を縮小し、その結果酸素に富む血液を送出する動脈の能力を低下させ得る。こうした管腔の断面積の減少は治療された元の狭窄領域よりも重大になりうる。上記の問題は、本発明の化合物が特に応用できる医学的状態の例である。フロクマリンによるＤＮＡ架橋は平滑筋細胞(ＳＭＣ)の増殖を低下させ、そのＤＮＡ架橋活性は細胞分裂抑制的であるため、March,et al．米国特許5,116,864 号明細書およびDeckelbaum，et al.,米国特許5,354,774号明細書に記載されているようにフロクマリンは血管内膜過形成症の阻止において細胞障害性の光感作物質（ROPPおよびLEP）よりもある種の利点を有するであろう。またこれらの特許の内容は本明細書中に含まれるものとする。ＰＤＴに現在用いられているROPP およびLEPの細胞障害性は細胞内器官、細胞質、サイトカインの血管外放出を引き起こし、それにより炎症性の応答を引き起こす。細胞内容物の血管外放出によって引き起こされた炎症性の応答は、再狭窄に寄与する鍵因子であると考えられている。再狭窄の阻止にソラレンを用いることによる（ROPPおよびLEPのような光感作物質に比較した場合の）不利益は、ソラレンが正常な脈管内膜組織に比べてアテローム斑に大きな選択的親和性を示さないことである。発明の概要本発明の第１の目的は種々の疾病の治療に利用できる光活性物資を提供することである。本発明の目的は、細胞に結合し光により活性化されたときに細胞分裂を抑制するが細胞溶解を引き起こさない、光活性治療剤を提供することである。本発明の別の目的は、急速に増殖する細胞に選択的な親和性を有する光活性化合物を提供することである。本発明の更なる目的は、アテローム斑の光線療法に伴う再狭窄の発生率を低下させる光活性化合物を提供することである。本発明の更なる目的は、特定の波長の光で活性化されたときに細胞分裂抑制を引き起こすことができる光活性化合物を提供することである。本発明の更なる目的は、ある特定の波長の光で活性化されたときには細胞分裂抑制を引き起こし、異なる波長の光で活性化されたときは細胞融解を引き起こす、光活性化合物を提供することである。本発明の更なる目的は、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、癌、癌前駆体、非癌性の過剰増殖疾病、乾癬、黄斑変性症、緑内症およびウイルスなどの疾病を光活性化合物を用いて治療するための方法を提供することである。本発明の更なる目的は、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、癌、癌前駆体、非癌性の過剰増殖疾病、乾癬、黄斑変性症、緑内症およびウイルスなどの疾病を診断するためにそのような光活性化合物を用いる方法を提供することである。本発明の新規であると思われる特徴は具体的に添付の請求の範囲に記載する。しかしながら、本発明自体は、組成物およびその使用法の双方に関して、それらの化合物のいっそうの利点とともに、以下の好ましい実施形態の記載を参照することにより最もよく理解されるであろう。図面の簡単な説明図１−２２は光活性ピロール誘導大員環化合物の化学構造を表すもので、以下のように示される。図１は、ポルフィリン核を有する光活性組成物の化学構造を示す。図２は、クロリン化合物を示す。図３は、バクテリオクロリン誘導化合物を示す。図４は、イソバクテリオクロリン化合物を示す。図５は、フタロシアニンを示す。図６は、ナフタロシアニン化合物を示す。図７は、ポルフィセン含有化合物を示す。図８は、ポルフィシアニン化合物を示す。図９は、ペンタフィリン誘導体を示す。図１０は、サフィリン（sapphyrins）およびその誘導体を示す。図１１は、テキサフィリンおよびその誘導体を示す。図１２は、フェノキサジン色素およびその誘導体の化学構造を示す。図１３は、フェノチアジンおよびその誘導体である。図１４は、カルコオルガナピリリウム色素を示す。図１５は、トリアリールメタン誘導体を示す。図１６は、ローダミンおよびその誘導体の構造を与える。図１７は、フルオレセン誘導体である。図１８は、アザポルフィリンおよびその誘導体を示す。図１９は、ベンゾクロリンおよびその誘導体を示す。図２０は、プルプリンおよびその誘導体の構造を示す。図２１は、クロロフィルおよびその誘導体を示す。図２２は、ベルディンおよびその誘導体を示す。図２３は、フロクマリンのサブコンポーネントを含む化合物の化学構造を示す。図２４は、ソラレンおよびその誘導体を示す。図２５は、イソソラレン（アンジェリシン）およびその誘導体の構造を示す。図２６は、シュードソラレンおよびその誘導体の化学構造を示す。図２７は、シュードイソソラレン化合物の化学構造を示す。図２８は、アロソラレンおよびその誘導体を示す。図２９は、シュードアロソラレンおよびその誘導体を示す。好ましい実施態様の説明表１に掲げたもののような、ＰＤＴのための従来の細胞障害性の光感作化合物を用いるときの問題点は、血管の再狭窄のような投与後の炎症性後遺症である。 ROPPおよびLEPのような光感作物質は、正常で、より静的な細胞との比較において、急速に増殖している細胞に対して強い選択性と結合活性を示すものの、そのような化合物の細胞障害性および細胞溶解活性は望ましくないであろう。過剰増殖状態の治療のためにＰＵＶＡを用いるときに出会う問題は、フロクマリンは過剰増殖している細胞に対して、正常細胞に対するのを上回る特異性と結合活性を、あるにしてもわずかしか示さないことである。上述のことにもかかわらずフロクマリンは光によって活性化されるとＤＮＡとの単一付加物を形成するかまたは核ＤＮＡを架橋し、細胞静止状態にするという利点を有する。このような細胞分裂抑制活性はROPPおよびLEPを用いたＰＤＴと同程度には炎症を作りださない。過剰増殖している細胞に対するROPPおよびLEPの強い特異性と、フロクマリン化合物の光細胞分裂抑制活性を持つ光感作物質化合物の新規なクラスを記述する。本発明の化合物は、フロクマリン化合物またはそのコンポーネントを以後「F 」とも記載するが、以下の１つまたはそれ以上の光感作物質分子と結合して、F- ROPPまたはF-LEPを形成するフロクマリン化合物またはそのコンポーネントによって特徴づけられる化合物のスーパークラスを形成する。ここで、光感作物質分子は（ａ）ROPP（反応性酸素生成光感作物質）またはそのコンポーネント、あるいは（ｂ）LEP（発光光感作物質）またはそのコンポーネントである。この化合物スーパークラス中の個々の化合物は前述したように無数の疾病の診断および治療に有用である。この化合物スーパークラスの中に含まれるF-ROPPは、表２に掲げた化合物に結合した、前期表1に記載したいずれの化合物とのすべての可能な組み合わせを含む化合物のクラスである。表1および表2に明示的に記載されていない更に他の化合物で、フロクマリンに結合したROPPまたはLEP(F-ROPP)に例示される光活性および／または組織特異的性質を示すものは、この化合物スーパークラスに含まれ、その一部であると解釈すべきである。化合物の各クラスには、基本構造に付加した特定の官能基のみに違いのある多数の具体的な化合物が含まれる。たとえば、フロクマリンおよびその誘導体はポルフィリン、クロリン、バクテリオクロリン、イソバクテリオクロリン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、ポルフィセン、ポルフィシアニン、ペンタフィリン、サフィリン、テキサフィリン、フェノキサジン色素、フェノチアジン、カロオルガナピリリウム色素、ローダミン、フルオレセン、アゾポルフィリン、ベンゾクロリン、プルプリン、クロロフィル、ベルディンおよびトリアリールメタンおよびそれらの誘導体と結合でき、その結果、２３の新しい化合物クラスを作り出す。各クラスの化合物は、便宜的に先に特定のフロクマリンで分類され続いて特定のROPPまたはLEPPで分類することによって参照される。たとえば、クロリンと結合したイソソラレンはイソソラクロリンと称される。さらに例をあげれば、天然または合成のソラレンのようなフロクマリンは、その誘導体も同様に、表1の中の以下の光感受性化合物の一つと結合できる。すなわち、ポルフィリン、クロリン、バクテリオクロリン、合成イソバクテリオクロリン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、ポルフィセン、ポルフィシアニン、ペンタフィリン、サフィリン、テキサフィリン、フェノキサジン色素、フェノチアジン、カロオルガナピリリウム色素、ローダミン、フルオレセン、アゾポルフィリン、ベンゾクロリン、プルプリン、クロロフィル、ベルディンおよびトリアリールメタン、およびこのような光感作物質の誘導体である。上述の結合体は新しい化合物クラスを形成し、便宜的に以下のように称される。たとえば、それぞれ、ソラポルフィリン、ソラクロリン、ソラバクテリオクロリン、ソライソバクテリオクロリン、ソラフタロシアニン、ソラナフタロシアニン、ソラポルフィセン、ソラポルフィシアニン、ソラペンタフィリン、ソラサフィリン（Psorasapph rins）、ソラテキサフィリン、ソラフェノキサジン色素、ソラフェノチアジン、ソラカロオルガナピリリウム色素（Psorachaloorgana-pyrylium dyes）、ソラローダミン、ソラフルオレセン(Psorafluorescenes)、ソラアザポルフイリン、ソラベンゾクロリン、ソラプルプリン、ソラクロロフィル、ソラベルディンおよびソラトリアリールメタンおよびその誘導体である。本発明に従って特定の光感作物質化合物の合成を例示する以下の実施例は、合成可能な光活性のフロクマリン−光感作物質結合体のバラエティおよびそれについての条件の典型例を示すものである。実施例１．８−MOPに結合したピロフェオフォルバイド（pyropheophorbide）（8-MOPPPhe ）ピロフェオフォルバイド(300mg)を乾燥テトラヒドロフラン（100ml）に溶解し 1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミド（100mg）およびジメチルアミノピリミジン（100mg）を加えた。室温で１５分間撹拌後、乾燥テトラヒドロフラン（60ml ）に溶かした5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（250mg）の溶液を加えた。その溶液を室温で一晩撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去し、残った固体をジクロロメタンに溶解し、希塩酸で、続いて炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。粗残渣をメタノール／ジクロロメタン（２％）を用いてシリカのクロマトグラフにかけ、主要な緑色のバンドを回収して蒸発させた。残渣、すなわち8-メトキシソラピロフェオフォリバイド（8-Methoxyp sorapyropheophoribide）（以下の構造Ｉ）をジクロロメタン／メタノールから結晶させた。実施例２ 8-MOP と結合したメソ−ピロフェオフォルバイド（Meso-Pyropheophorbide）（ 8-MOP MPPhe）メソ−ピロフェオフォルバイド（300mg）を乾燥テトラヒドロフラン（100ml）に溶解し、1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミド（100mg）およびジメチルアミノピリミジン（100mg）を加えた。室温で１５分間撹拌後、乾燥テトラヒドロフラン（60ml）に溶かした5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（250mg）溶液を加えた。その溶液を室温で一晩撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去し、残った固体をジクロロメタンに溶解し、希塩酸に続いて炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターによって乾燥させた。粗残渣をメタノール／ジクロロメタン（２％）を用いてシリカのクロマトグラフにかけ、主要な緑色のバンドを回収して蒸発させた。残渣、すなわち8-メトキシメソピロフェオフォリバイド（8- Methoxymesopyropheophoribide）（以下の構造II）をジクロロメタン／メタノールから結晶させた。実施例３． 8-MOPに結合した2-(1-ヘキシロキシエチル)ピロフェオフォルバイド（2-(1-He xyloxyethyl)pyropheophorbide）（8-MOPHPPhe） 2-(1-ヘキシロキシエチル)ピロフェオフォルバイド（200mg）を乾燥テトラヒドロフラン（100ml）に溶解し1,3−ジシクロヘキシルカルボジイミド（100mg）およびジメチルアミノピリミジン（100mg）を加えた。室温で１５分間撹拌後、乾燥テトラヒドロフラン（60ml）に溶かした5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（170mg）溶液を加えた。その溶液を室温で一晩撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去し、残った固体をジクロロメタンに溶解し、希塩酸で、続いて炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過しロータリーエバポレーターによって蒸発乾固させた。粗残渣をメタノール／ジクロロメタン（２％）を用いてシリカのクロマトグラフにかけ、主要な緑色のバンドを回収して乾燥させた。残渣、すなわち8-MOP HPPhe（構造III）をジクロロメタン／メタノールから結晶させた。実施例４． 8-MOPに結合したオクタエチルベンゾクロリン（8-MOP OEBCS）乾燥ジクロロメタン（50ml）に溶かしたオクタエチルベンゾクロリン塩化スルホニル（300mg）を撹拌した中に、乾燥ジクロロメタン（20ml）に溶解した5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（170mg）および乾燥トリエチルアミン（0.1ml ）を加えた。生じた溶液を室温で１時間撹拌し、ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去した。粗残渣をジクロロメタンを用いたシリカのクロマトグラフにかけ、主要な灰色のバンドを回収し、ジクロロメタン／メタノールから再結晶させ、表題の化合物を得た（以下の構造IV）。実施例５． 8-MOP に結合した亜鉛オクタエチルベンゾクロリン（Zinc octaethylbenzochlo rin）（8-MOP ZnOEBCS）乾燥ジクロロメタン（50ml）に溶かしたオクタエチルベンゾクロリン塩化スルホニル（300mg）を撹拌し、ジクロロメタン（20ml）に溶かした5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（150mg）および乾燥トリエチルアミン（0.1ml）を加えた。生じた溶液を室温で１時間撹拌した。メタノール（10ml）に溶解した酢酸亜鉛（200mg）を反応液に加え、その溶液を、（673nmにおけるバンドＩの吸収で判断して）Uv/vis分光法でベンゾクロリンのメタレーションが完了するまで温水槽で加温した。溶媒をロータリエバポレーションによって除去し、粗残渣をジクロロメタン（5ml）に再溶解してジクロロメタンを用いたシリカのクロマトグラフにかけた。主要な緑色のバンドを回収しジクロロメタン／メタノールから再結晶させ、表題の化合物を得た（以下の構造V）。実施例６． 8-MOP に結合した銅イミニウムオクタエチルベンゾクロリン（Cu iminium octa ethylbenzochlorin）（8-MOP Cu Im OEBCS）ジクロロメタン（100ml）に溶解した銅オクタエチルベンゾクロリンスルホン酸（copper octaethylbenzochlorin sulfonic acid）（300mg）に（クロロメチレン）ジメチル塩化アンモニウム（500mg）を加え、その溶液を湿気がはいらないようにして室温で一晩撹拌した。その溶液を手早く氷冷却水中に注ぎ、有機層を水で素早く洗浄し、分離して硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液を濾過して硫酸ナトリウムを除き、ジクロロメタン（20ml）に溶解した5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（200mg）を加えた。その溶液を室温で20分間撹拌した後、水中に注いだ。有機層を希塩酸で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。その溶液を濾過し、蒸発乾固させた。生じた残渣を２％メタノール／ジクロロメタンを用いたシリカのクロマトグラフにかけ、主要な緑色のバンドを回収して乾燥させた。ジクロロメタン／ヘキサンから沈殿させることによって表題の化合物（以下の構造VI）を緑色の粉末として得た。実施例７． 8-MOP に結合したインジウムテキサフィリン（8-M0P InT）乾燥テトラヒドロフラン（50ml）に溶解したテキサフィリン-16-カルボン酸インジウム（200mg）の溶液に、1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミド（50mg）およびジメチルアミノピリミジン（50mg）を加えた。室温で１５分間撹拌後、乾燥テトラヒドロフラン（20ml）に溶解した5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（1 00mg）溶液を加えた。その溶液をアルゴンの下、室温で一晩撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去し、残った固体をジクロロメタンに溶解し、希塩酸で洗浄し、最後に水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で再乾燥させメタノール／ジクロロメタン（２％）を用いてシリカのクロマトグラフにかけた。主要な緑色のバンドを回収して蒸発させた。残渣、すなわち8-MOP InT（以下の構造VIII）をジクロロメタン／ヘキサンからの結晶化によって得た。実施例８． 8-MOP に結合したプロトポルフィリン（8-MOP PP）プロトポルフィリン（200mg）を塩化オキサリル（3ml）に溶解し、その溶液を４０℃で１時間加温し、その間湿気から保護した。過剰の塩化オキサリルを高真空下で除去し乾燥ジクロロメタン（5ml）を加えた。これを同様に高真空下で除去し、紫色の残渣を得、乾燥管により湿気から保護した。乾燥ジクロロメタン（10ml）および乾燥トリエチルアミン（1ml）をその残渣に加え、続いて乾燥ジクロロメタン（20ml）に溶かした5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（160mg）を加えた。乾燥管によって湿気から保護しながら、その溶液を一晩撹拌た。その後、その溶液を水中に注ぎ、有機層を水でよく洗浄し、回収して硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過し蒸発乾固したのち、生じた残渣は2％アセトン／ジクロロメタンを溶離液としてシリカのカラムを通した。主要な赤色のバンドを回収し、ジクロロメタン／メタノールから再結晶させ、表題の化合物VIIIを得た。実施例９． 8-MOP に結合したテトラフェニルポルフィリン（8-MOP TPP）メソ-テラキス-（4'-カルボキシフェニル）ポルフィリン(Meso-terakis-(4'-c arboxyphenyl)porphyrin)（200mg）を塩化オキサリル（5ml）に溶解し、その溶液を40℃で１時間加温し、その間湿気から保護した。過剰の塩化オキサリルは高真空下で除去し、乾燥ジクロロメタン（5ml）を加えた。これもまた高真空下で除去し、緑色の残渣を得、乾燥管により湿気から保護した。乾燥ジクロロメタン（10ml）および乾燥トリエチルアミン（1ml）を残渣に加え、乾燥ジクロロメタン（20ml）に溶解した5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（400mg）の溶液を加えた。その溶液を乾燥管により湿気から保護しながら一晩撹拌した。その後、その溶液を水中に注ぎ、有機層を水でよく洗浄し、回収して硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過および蒸発乾固の後、生じた残渣を２％アセトン／ジクロロメタンを溶離液として用いてシリカのカラムを通した。主要な赤いバンドは8-MOP TPP （構造IX）を含むものであり、これを回収しジクロロメタン／メタノールから再結晶させた。実施例１０． 2,3,12,18- テトラエチル-3,7,13,17-テトラメチル-5,15-ビス（2'-フラン）ポルフィリン（5,15-DFP） 4,4'-ジエチル-3,3'-ジメチル-2,2'-ジピリルメタン（4.0g）および2-フルアルデヒド（1.67g）をメタノール（100ml）に溶解しその溶液にアルゴンを15分間通気させて脱気した。4-トルエンスルホン酸（0.95g）を加え、その溶液を暗所で２時間撹拌し、その後一晩冷却した。沈殿したポルフィリノーゲンを回収し、氷冷却メタノール（20ml）で洗浄し、メタノール（100ml）に再懸濁した。ｏ-クロラニル（6.0g）を加えその溶液を暗所で２時間撹拌した。トリエチルアミン（ 2ml）を加え、沈殿したポルフィリンを濾過により回収し、メタノールでよく洗浄し、高真空下で乾燥させた。ポルフィリンをジクロロメタン／メタノールから再結晶させ、表題の化合物（X）を得た。実施例１１． 8-MOP に結合したテキサスレッド（8-MOP ＴＲ）スルホローダミン101酸クロリド（200mg）を乾燥テトラヒドロフラン（100ml ）に溶解し、5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（100mg）を加え、続いてトリエチルアミン（0.1ml）を加えた。その溶液を室温で一晩放置した。翌日、その溶液を蒸発乾固させ、ジクロロメタンに再溶解して、２％メタノール／ジクロロメタンを溶離液として用いてシリカのカラムにかけた。蛍光を出す主要な赤い画分を回収して蒸発乾固させた。残渣は8-MOPTR（構造XI）を含みジクロロメタン／ヘキサンから再結晶させた。実施例１２． 8-MOP に結合したローダミンB（8-MOP ＲＢ）スルホローダミンＢ酸クロリド（200mg）を乾燥テトラヒドロフラン（100ml）に溶解し、5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（100mg）を加え、続いて乾燥トリエチルアミン（0.1ml）を加えた。その溶液を室温で一晩放置した。翌日その溶液を蒸発乾固させ、ジクロロメタンに再溶解し、２％メタノール／ジクロロメタンを溶離液として用いてシリカのカラムにかけた。主要な、蛍光を出す赤い画分を回収して蒸発乾固させた。残渣（構造XII）はジクロロメタン／ヘキサンから再結晶させた。実施例１３． 8-MOP に結合したポルフォシアニン（8-MOP Pocy） 2,3,21,22-テトラエチル-12-（4'-カルボキシルフェニル）ポルフォシアニン（200mg）を乾燥テトラヒドロフラン（100ml）に溶解し、1,3-ジシクロヘキシルカルボジイミド（100mg）およびジメチルアミノピリミジン（100mg）を加えた。室温で15分間撹拌後、無水テトラヒドロフラン（60ml）に溶かした5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（300mg）の溶液を加えた。その溶液を室温で一晩撹拌した。ロータリーエバポレーションにより溶媒を除去し、残った固体をジクロロメタンに溶解し、希塩酸で、続いて炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過してロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。粗残渣をメタノール／ジクロロメタン（２％）を用いてシリカのクロマトグラフにかけ、主要な緑色のバンドを回収して乾燥させた。残渣（構造XIII）をジクロロメタン／メタノールから結晶させた。実施例１４． 8-MOP に結合したフタロシアニン（8-MOP Pth）フタロシアニンテトラスルホネート（200mg）をオキシ塩化リン（20ml）に溶解し、その溶液を２時間還流した。過剰なオキシ塩化リンをロータリーエバポレーションにより除去し、残渣を冷却した乾燥ピリジン（10ml）に溶解した。乾燥ピリジン（60ml）に溶解した5-アミノメチル-8-メトキシソラレン（300mg）溶液を加えた。その溶液を一晩室温で撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーションで除去し、残った固体をジクロロメタンに溶解し、希塩酸で、続いて炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過してロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。粗残渣はメタノール／ジクロロメタン（２％）を用いたシリカのクロマトグラフにかけ、主要な緑色のバンドを回収し乾燥させた。残渣（構造XIV）をジクロロメタン／メタノールから結晶させた。光感作物質化合物の前述のスーパークラスは、以下のように特徴づけることができる。すなわち、ａ）反応性酸素生成光感作型物質結合したフロクマリン、すなわちF-ROPP、ｂ）ROPPに結合したフロクマリンのサブコンポーネント、すなわちFS-ROPP、ｃ）（中性または陽イオン）ROPPに結合した陽イオン化したフロクマリン、すなわち、CF-ROPPまたはCFS-ROPP、ｄ）（中性または陽イオン）フロクマリンに結合した陽イオン化したROPP、ｅ）ROPPが金属と結合している、上記いずれの化合物、および、ｆ）発光光感作物質と結合したフロクマリン、すなわちF-LEP。上述の結合化合物のスーパークラスはアテローム性動脈硬化症、再狭窄、癌、前癌、非癌性過形成疾患、乾癬、黄斑変性症、緑内症、およびある種のウイルスなどの種々の疾病を治療するために用いることができる。これらの化合物は光活性薬剤であって、光力学的に活性があるもの（すなわち、単原子酸素および／またはラジカル酸素を生成し細胞障害性を媒介する）も無いものもあり得るが、細胞の代謝活性を修飾することについて光活性（すなわち、ＤＮＡまたはＲＮＡと光化学的に架橋し、それとともにその化合物の単付加物を生成する）があり得る。より具体的には、これらの新規な光活性化合物は、標的組織中により大きな程度で局在するROPPあるいはLEPの能力と、標的組織のＤＮＡの中にインターカレーションして光のエネルギーが加わると架橋を形成し、かつ／または単付加物を形成する（ソラレンのような）フロクマリンの能力を維持するであろう。これまでの研究により、陽イオンROPPまたはLEPをCF-ROPPまたはCF-LEPの合成に用いると標的細胞ＤＮＡへの該化合物のインターカレーションを容易にすることが示されている。F-ROPPまたはCF-ROPPが一旦標的細胞に局在すれば、光活性化を治療的および／診断的に用いることができる。これらの新規な化合物を心臓移植手術（または透析のようなＡＶシャント処置）に伴う再狭窄および血管内膜過形成症の検出および／または治療および阻止のために利用することは、本発明の利用法を説明し例示するために特に詳細に論じる例示的な応用であり、そのような応用は例示的であり本発明を限定するものとして解釈してはならない。たとえば、ここで記載した光感作物質化合物の他の応用としては、ROPPあるいはフロクマリンのいずれも選択的に濃縮しない標的組織の光活性化治療がある。以下に記載するように、前記の化合物スーパークラスより選ばれたF-ROPPは生命体に系統的に投与することができ、その生命体は動物、植物または単一の細胞またはポリ核酸断片であってもよい。F-ROPPの系統的な投与に続いて、かつF-ROPP が動物の血清中に存在している間にF-ROPPのフロクマリン部の強い吸収波長による光源操作はF-ROPPの高濃縮が求められる標的細胞の塊へ直接向けられる。F-RO PPに用いられる、選ぶべき特定のフロクマリンは、好ましくはＵＶまたは短波長の可視光によって活性化されたときにポリ核酸と単付加物を形成する分子である。標的組織に活性化光を照射することにより、ＤＮＡまたはＲＮＡのF-ROPPの単付加物が形成される。標的組織へ送出する活性化光の強度を増すと細胞中のＤＮＡ結合F-ROPPが増加する。標的細胞中のF-ROPPが求める濃度に到達したとき、その標的細胞を選択的に破壊または修飾すべく、標的組織中の細胞に結合したF-RO PPを光活性化するため、F-ROPPのROPP部分を活性化する、より長い波長の光を用いることができる。要するに、F-ROPPは、標的細胞のＤＮＡ/ＲＮＡ中のF-ROPP のみに共有結合を生じさせる、より短い波長の光で標的細胞が照射されたという理由によってのみ標的細胞に結合するという、F-ROPPの光誘導選択性を作り出す。本発明の特定の実施態様を例示し記載したが、種々の変更および修飾が本発明の精神および範囲から逸脱することなくおこなうことができることは当業者にとって明らかであろう。従って、添付の請求の範囲においては、本発明の範囲の中にあるこれらの全ての変更および修飾を含む意図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｐ 9/10 17/06 17/06 27/06 27/06 35/00 35/00 Ｃ０７Ｄ 519/00 Ｃ０７Ｄ 519/00 // Ｃ０７Ｄ 487/22 487/22 493/04 １０６ 493/04 １０６Ｄ (72)発明者モーガンアレンアールアメリカ合衆国カリフォルニア州 93109 サンタバーバラミラモンテドライヴ 952−＃３ (72)発明者ナーシソヒューエルアメリカ合衆国カリフォルニア州 93109 サンタバーバラミラモンテドライヴ 990−＃２

Claims

【特許請求の範囲】１．光感受性ベンゾクロリン化合物と結合した、機能性フロクマリンを含む光活性化合物。２．光感受性ベンゾクロリン化合物が陽イオン化している、請求項１記載の光活性化合物。３．前記光感受性化合物が、ベンゾクロリン分子に配位した金属を含む、請求項１記載の光活性化合物。４．該金属が、銅、アルミニウム、スズ、亜鉛、ガドリニウム、マンガン、マグネシウムあるいは鉄からなる群より選ばれたものである、請求項３記載の光活性化合物。５．前記機能性フロクマリンがソラレンを含む、請求項１記載の光活性化合物。６．Ｒがフロクマリンを含み、Ｒ’が反応性酸素生成性ベンゾクロリン化合物である、Ｒ−Ｒ’構造を有する光活性化合物。７．Ｒ’が発光性ベンゾクロリン化合物である、請求項６記載の光活性化合物。８．上記フロクマリンが、イソソラレン、シュードソラレン、シュードイソソラレン、アロソラレンおよびシュードアロソラレンなる群から選ばれた化合物、または、その誘導体である、請求項６に従った光活性化合物。９．生体中の病変した標的組織細胞の治療のための光活性組成物であって、該光活性組成物がＲ−Ｒ’構造をもち、Ｒが、第１の波長の光で光活性化されたときにのみ標的組織細胞と共有結合する光活性フロクマリンであり、かつ、Ｒ’ が、第１の波長と異なる第２の波長の光によってフロクマリン化合物が光活性化されたときにのみ病変した標的組織中で正常細胞の活性を阻害する、光感受性ベンゾクロリンである光活性組成物。 10．光感受性ピロール誘導大員環化合物と結合した機能性フロクマリンを含む光活性化合物。