JP2001501181A

JP2001501181A - 抗微生物組成物

Info

Publication number: JP2001501181A
Application number: JP10512605A
Authority: JP
Inventors: エフ．アンドリューズ，ジェフリー
Original assignee: ミネソタマイニングアンドマニュファクチャリングカンパニー
Priority date: 1996-09-06
Filing date: 1997-01-07
Publication date: 2001-01-30
Also published as: EP0926954A1; CA2264286A1; WO1998009520A1; AU1530697A

Abstract

(57)【要約】本発明は、ポリヒドロキシアルコールの抗微生物脂肪酸モノエステル、キレート剤、およびペトロラタム等の水に不溶なビヒクル組成物を含む抗微生物組成物に関する。そのような組成物を作製する方法、および乳頭炎を防止するためのウシ乳頭の処置方法についても記載する。

Description

【発明の詳細な説明】抗微生物組成物発明の分野本発明は、感染性微生物を死滅させるため、および動物の皮膚を保湿するために動物の皮膚に局所的に塗布するのに有用な抗微生物組成物に関する。発明の背景様々な復元目的のために、ローション剤、膏薬等を塗布することができる。例えば、ローション剤は、乾燥肌の感触を調整し、保湿するために使用してもよく、あるいはそれらは、感染症を防止または治療するための抗細菌特性を有してもよい。それゆえ、広範な製品が、ヒトおよび家畜用途のために潜在的に利用可能である。ウシ乳腺炎の防止およびウシ乳頭の保湿は、家畜分野において特に重要である。ウシは乳腺炎にかかりやすく、ウシの乳頭の被不は乾燥しやすい。現在、細菌のコロニー化を防止するためにウシを処置するための様々な「乳頭浸漬物」が利用可能である。しかし、乳頭浸漬物は水性キャリア（またはビヒクル）を含み、このキャリアは気温の低い気候の場合に凍傷および皮膚の損傷を引き起こし得る。従って、気温の低い気候の間は乳頭浸漬物の使用がしばしば中断され、ウシ乳頭の細菌のコロニー化が増加し、ウシ乳腺炎が生じる。動物およびヒトの皮膚の処置、詳細には保湿および乳腺線を防止するためにウシ乳腺を処置するのに有用な有効かつ安価な保湿または抗細菌組成物が引き続き求められている。凍傷の危険性を伴うことなく気温の低い気候において使用され得るそのような組成物が求められている。発明の概要第１の局面において、本発明はポリヒドロキシアルコールの抗微生物性脂肪酸モノエステル、ペトロラタムを含む軟膏ビヒクル、およびキレート剤を含む抗微生物性軟膏に関する。抗微生物モノエステルを形成するために使用されるポリヒドロキシアルコールは、好ましくはグリセロール、プロピレンアルコールおよび糖類から成る群より選択される。抗微生物性のモノエステルを形成するために使用される脂肪酸は、好ましくはカプロン酸、ヘプタン酸、カプリル酸、カプリン酸、ウンデカン酸およびラウリル酸から成る群より選択される。特に好ましいモノエステルとしては、グリセロールモノラウレートおよびプロピレングリコールモノカプリレートが挙げられる。抗微生物軟膏は、好ましくは少なくとも約25重量％のペトロラタム、より好ましくは約50重量％のペトロラタムを含む。抗微生物軟膏は、好ましくは約0.1重量％〜約10重量％のポリヒドロキシアルコールの脂肪酸モノエステルを含む。本発明の好ましい抗微生物難航はまた、少なくとも約0.1重量％のキレート剤を含み、乳酸は好ましいキレート剤である。抗微生物軟膏は、少なくとも約１重量％の粘性改変剤を含み得る。抗微生物軟膏はまた、少なくとも約0.5重量％の不活性皮膚軟化剤を含み得る。抗微生物軟膏は、少なくとも約１重量％のろうを含み得る。抗微生物軟膏は同様に、少なくとも約0.5％重量のセチルアルコールを含む。本発明の好ましい抗微生物軟膏は、重量パーセントで、少なくとも約0.1％のグリセリルモノラウレート、少なくとも約0.1％のプロピレングリコールモノラウレート、少なくとも約0.1％の乳酸、および少なくとも約１％のろうを含む。本発明の好ましい抗微生物軟膏は、in vitroでの細菌死滅試験で細菌のコロニー形成単位を少なくとも約10⁵倍減少させる。同様に、本発明の好ましい抗微生物軟膏は、ウシ乳頭への塗布８時間後、Streptococcus uberisの混入を少なくとも10倍減少する。もう１つの局面において、本発明は、以下の工程を含む抗微生物組成物の製造法を含む:（ａ）ペトロラタム、ろうまたはそれらの混合物を含むビヒクル組成物を融解する工程；ならびに（ｂ）（１）ポリヒドロキシアルコールの抗微生物性脂肪酸モノエステル、および（２）融解混合物を形成するためのキレート剤を添加する工程であって、該融解混合物は冷却時に抗微生物軟膏を形成する。本方法によって製造される好ましい抗微生物難航は、少なくとも約25重量％のビヒクル組成物および約0.1重量％〜約10重量％のモノエステルを含む。ビヒクル組成物は、好ましくはペトロラタムを含む。もう１つの局面において、本発明は、以下の工程を含むウシ乳頭の処置方法を含む:（ａ）ポリヒドロキシアルコールの抗微生物性脂肪酸モノエステル;（ｂ）キレート剤；および（ｃ）ビヒクル組成物、ここで、ビヒクル組成物は効果的に水に不溶である、を含む抗微生物組成物をウシの皮膚に塗布する工程。処置方法は、一般に、ウシ乳頭の細菌コロニー化の防止および乳頭の皮膚の乾燥防止において有効である。処置方法において使用するための好ましい抗微生物組成物は、約0.1重量％〜約10重量％のモノエステルを含み、ここで、ポリヒドロキシアルコールは、グリセロール、プロピレングリコールおよび糖類から成る群より選択され、そして脂肪酸は、カプロン酸、ヘプタン酸、カプリル酸、ウンデカン酸およびラウリル酸から成る群より選択される。本発明の抗微生物組成物は、保湿および皮膚調整能の点において、ウシ乳腺炎を防止するための市販の水性乳頭浸漬物より顕著に有利である。抗微生物組成物は、細菌およびウイルスの両方に対して有効である。更に、本発明の生成物は、広範な粘稠度で製造され、生成物を塗布するために様々な選択を消費者に提供することができる。組成物の顕著な利点は、凍傷の危険性を伴うことなく気温の低い天候の間にそれらを畜産動物に塗布することができることである。他の利点については、詳細な説明および請求の範囲から明らかであろう。好適な実施態様の説明本発明は、感染症および／または乾燥を防止または治癒するために皮膚を処理するのに有用な抗微生物組成物を含む。１つの好ましい実施態様において、本発明は、軟膏ビヒクル内に、抗微生物剤とキレート剤とを組み合わせる。抗微生物軟膏は、抗微生物剤として少なくとも１つの抗微生物モノエステルを含む。キレート剤は、組成物の抗微生物特性について、更なる相乗成分として含まれる。皮膚軟化特性、レオロジー、美的特性および軟膏の他の局面を改変するために更なる化合物を添加してもよい。好ましい活性型抗微生物剤は、ポリヒドロキシアルコールの脂肪酸モノエステルである。抗微生物軟膏は、典型的に0.01重量％〜20重量％の抗微生物モノエステル、好ましくは0.1重量％〜10重量％、より好ましくは0.5重量％〜５重量％の抗微生物モノエステルを有する。抗微生物モノエステル内の成分として使用されるのに適した適切なポリヒドロキシアルコール（即ち、ポリオールまたは多価アルコール）としては、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコール等のポリアルキレングリコール、ポリグリセロール、および糖類が挙げられる。糖類としては、グルコース等の単糖類、ショ糖等の二糖類および澱粉等の多糖類が挙げられる。好ましいポリヒドロキシアルコールは、約８個未満の炭素原子を有する。グリセロールおよびプロピレングリコールは、本発明の軟膏において使用される抗微生物エステルの形成に特に好ましいポリハイドロキシアルコールである。抗微生物モノエステル内の成分として使用されるのに適した適切な脂肪酸としては、約６個の炭素原子を伴う直鎖および分岐したカルボン酸が挙げられる。脂肪酸の炭素鎖は、飽和、モノ不飽和またはポリ不飽和であってもよい。好ましい脂肪酸は、約６個の炭素原子〜約24個の炭素原子、好ましくは約８個〜約16個の炭素原子を有する。一般に、好ましい脂肪酸としては、直鎖の飽和脂肪酸が挙げられる。ポリヒドロキシアルコールの１つ以上の脂肪酸モノエステルの組み合わせを使用するのが望ましくあり得る。２つ以上のモノエステルを組み合わせると、単一のモノエステルと比較して、広範な抗微生物活性を提供することができる。好ましい組み合わせとしては、約６個の炭素原子〜約12個の炭素原子を伴う２つ以上の直鎖の飽和脂肪酸が挙げられる。モノエステルに取り込むために特に好ましい飽和脂肪酸としては、カプロン酸、ヘプタン酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸が挙げられる。有用な脂肪酸モノエステルについては、例えば、米国特許第5,378,731 号および該明細書に記載の参考文献に更に記載されている。本発明の抗微生物組成物は、非水性ビヒクル、またはキャリアを含有し、好ましくは水に不溶である。非水性ビヒクルは、一般に有機および無機のオイルおよびろうを含んでもよい。好ましい非水性ビヒクルとしては、炭化水素、具体的にはペトロラタム等の軟膏ビヒクルが挙げられる。好ましい項微生物難航は、少なくとも約25重量％のペトロラタム、より好ましくは少なくとも約 50重量％のペトロラタムを有する。本発明者は、抗微生物モノエステルは、ペトロラタムビヒクル中で使用される場合、一般に現在利用可能な水性生成物と同等の有効性を示すことを見出した。本発明の抗微生物組成物において使用するために適切なキレート剤としては、テトラジアミン四酢酸（EDTA）およびその塩、乳酸およびクエン酸等のアルカノン酸、ポリリン酸およびその塩、酸性ヘキサメタリン酸ナトリウム（SPORIX酸性ヘキサメタリン酸としてInternational Sourcing，Inc.，Upper Saddle River， N.J.より市販されている）およびそれらの混合物が挙げられる。乳酸は好ましいキレート剤である。何故なら、乳酸は、本発明の組成物においてキレーターおよび保湿剤の両方として有利に機能し得るからである。抗微生物組成物は、一般に抗微生物軟膏あたり約0.1重量％を超えるキレート剤、好ましくは0.1重量％〜５重量％、より好ましくは約0.5重量％〜約２重量％のキレート剤を含む。本発明の抗微生物組成物は、皮膚軟化剤または保湿剤と共に、皮膚軟化剤としても作用し得るポリヒドロキシアルコールの抗微生物脂肪酸モノエステル、および保湿剤としても作用し得るキレート剤（例えば、乳酸）を含有してもよい。様々な典型的な皮膚軟化剤は、本発明での使用に適切である。好ましい皮膚軟化剤としては、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ラノリン、ラノリン誘導体、イソステアリン酸、イソステアリン酸のエステル、イソステアリルアルコール、エチレングリコールエステル、プロピレングリコールエステル、皮膚軟化剤グリセリド等が挙げられる。本発明の抗微生物軟膏は、皮膚軟化剤を使用する場合、一般に、約１重量％を超える皮膚軟化剤、好ましくは約２重量％〜25重量％、より好ましくは約５重量％〜15重量％の皮膚軟化剤を含む。本発明の抗微生物組成物はまた、不活性成分として粘度改変剤を含んでもよい。粘度改変剤は、特定のアプリケーションにより適切になるように軟膏ビヒクルの特性を変更するために使用することができる。粘性改変剤の中には、軟膏ビヒクルとしての使用に適切なものもある。粘性改変剤は、粘度、およびより一般的には軟膏ビヒクルによって抗微生物軟膏に付与されるレオロジーを変更するために使用される。粘性改変剤として有機溶媒を使用してもよく、蜜ろう、パラフィン、カルナウバろう、ポリエチレングリコール、エチレングリコールモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、鉱油、および合成鯨ろうも同様である。抗微生物組成物は、粘性改変剤を含有する場合、一般に少なくとも約１重量％の粘性改変剤、好ましくは約２重量％〜約20重量％の粘性改変剤を含む。特定の望ましい方法におけるアプリケーションのための生成物を生成するために、そのような薬剤で粘性を調整してもよい。抗微生物軟膏は、軟膏の費用および美的要素を変更するために、任意に芳香剤、充填剤および他の化合物を含んでもよく、展開性および感触を改善するために有用なFINSOLV TN^TM等の材料を含む。本発明の抗微生物組成物（軟膏を含む）は、皮膚へのアプリケーションのための様々な用途を有する。例えば、皮膚を保湿する一方で感染症を防止するために抗微生物組成物をヒト皮膚に塗布してもよい。同様に、動物およびヒトにおける切り傷、かすり傷、擦傷等を治療するために、抗微生物組成物を応急手当製品として使用してもよい。ウマのひずめ保湿剤およびイヌの皮膚感染治療として、組成物を使用してもよい。抗微生物組成物の好ましい使用は、乳頭を保湿する一方で乳頭の皮膚の細菌コロニー化を防止するための抗微生物組成物のウシ乳頭への塗布を含む。細菌による乳頭皮膚のコロニー化は、ウシ乳腺炎の発症と関連する。本発明の抗微生物組成物の更なる好ましい使用は、ウイルス感染症であるウシのヘルペス乳頭炎を防止または治療するためのウシ皮膚への塗布を含む。以下の実施例により本発明を例示する。実施例以下の実施例は、本発明の生成物の抗微生物効果および皮膚の調整を示す。重量％で示された以下の成分より試験軟膏（非水性乳頭浸漬物）を調製する：成分％／重量 Lauricidin^TM 1.0 プロピレングリコールモノカプリレート 1.0 乳酸 2.0 セチルアルコール 3.0 ラノリン 10.0 白色蜜ろう 5.0 Finsolv TN^TM 4.0 Ungerer Mask DD 49978^TM 0.5 白色ペトロラタム 73.5 Lauricidin^TM（グリセリルモノラウレート）は、Med-Chem Laboratories Inc.， Galena，ILより購入した。プロピレングリコールモノカプリレートは、Unichema North America，Chicago，ILより購入した。白色蜜ろうは、ACROS Organics，Pittsburgh，PAより購入した。Finsolv TN^TMは、アルキルベゾエートと、C₁₂〜C₁₅の範囲の鎖長を有するアルキル基との混合物であり、Finetex,Inc.，Spencer，NCより購入した。Ungerer Mask DD 49978^TMは芳香剤であり、Ungerer，Inc.，Lincoln Park，NJより購入した。白色ペトロラタムはPennsylvania Refining Co.，Butler，PAより購入した。試験軟膏を調製するために、白色ペトロラタムおよびラノリンを混合タンクに添加した。混合タンクを過熱した。白色ペトロラタムおよびラノリンの一部が融解した時点で混合を開始した。混合開始後、他の成分を以下の順序で順番に添加した：Finsolv TN^TM、セチルアルコール、Lauricidin^TM、プロピレングリコールモノカプリレート、白色蜜ろうおよび乳酸。これらの他の成分を添加する間、過熱および混合を継続した。混合物を160°Ｆ±10°Ｆ（71℃±６℃）加熱し、透明な液体溶解物を生成した。加熱を停止し、混合物を冷却する一方、撹拌を継続した。混合物が120°Ｆ〜130°Ｆ（48.9℃〜54.4℃）にまで冷却したら、混合を継続しながら芳香剤（Ungerer Mask DD 49978^TM）を添加した。バッチが約115° Ｆ（46.1℃）まで冷却したら、混合物を軟膏用ジャーに注いだ。上記の試験軟膏の抗微生物硬化を評価するために、両インビトロ試験およびウシ乳頭での試験を実施した。これらの試験について下記に記す。実施例１および比較例１〜３これらの実施異例は、実施例の試験軟膏の抗微生物効果のインビトロ試験を含む。２つの異なるタイプの細菌、Staphylococcus atlresus（グラム陽性、ATCC番号25923）およびEscherichia coli（グラム陰性、ATCC番号25922）により試験を実施した。本発明の試験軟膏との比較のため、３つの市販の水性乳房用香膏についても試験した。Dr．Naylor^TMはH.W．Naylor Co.，Inc.，Morris，NYより市販されており、KenAg^TMはNess & Clark,Inc.Ashla nd,OHより市販されており、４Seasons^TMはMills Fleet Farm,Appleton,WIより市販されている。抗微生物活性の比較は、37℃で０分間および20分間の抗微生物軟膏への暴露後の細菌数に関与する。細菌をトリプシンソイブロス中に懸濁し、懸濁液を37℃で24時間インキュベートすることによって細菌培養物を調製した。懸濁液が10⁷〜10⁸CFU/ｍｌの初期接種量を有するように設計し、後にプレートカウントで確認した。(CFU＝コロニー形成単位)。次いで、24時間細菌培養懸濁液の0.1ｍｌアリコートを、10ｍｌの抗微生物軟膏を含有する遠心分離チューブに添加し、軟膏抗細菌懸濁液（OBS）を形成した。細菌培養懸濁液を添加する前に、水浴中37℃で抗微生物軟膏を軟化させ、OBSの混合を援助した。遠心分離チユーブ中のOBSを20秒間ボルテックスで撹拌し、アリコートを取り出した後水浴に戻した。ボルテックス撹拌直後、およびボルテックス撹拌20分後の両方で、1.0ｍｌアリコートのOBSを遠心分離チューブから取り出した。それぞれの1.0ｍｌアリコートを用いて系列希釈を行った。最初の希釈を行うために、9.0ｍｌのLetheen Bro th^TMを含有する試験チューブに1.0ｍｌアリコートを配置し、１：10希釈を形成した。最初に１：10希釈の１ｍｌアリコートを9.0ｍｌのLetheen Broth^TM中に配置して１：100希釈を形成し、続いて１：100希釈の１ｍｌアリコートを9.0ｍｌのLetheen Broth^TM中に配置して１：100希釈を形成することにより、２つの更なる系列希釈を作製した。 Letheen Broth^TMは更なる細菌の増殖を防止するための中和剤であり、Difco Lab oratoriesより販売されている。混合前にletheen brothを37℃まで加温し、至適混合を維持した。チューブをボルテックスにより撹拌した。ボルテックスによる撹拌後、系列希釈したチューブのそれぞれからの0.1ｍｌの溶液を別々にトリプシンソイ寒天プレート上に広げた。接種したプレートを37 ℃で48時間インキュベートした。インキュベーション後、プレート上の細菌のコロニーを計数し、初期接種量と比較した。試験の結果を表１に示す。 ^★TNTC＝過剰量のため計数不可試験軟膏は、水性乳房用香膏と比較して優れた抗微生物特性を有していた。実施例２および比較例４ウシ乳頭における使用において、特にStreptococcus uberisに対する試験軟膏の比較的長期間（８時間）の抗微生物効果を試験するためにこれらの実施例を設計した。比較（比較例４）のため、市販の水性乳頭浸漬物Lauricare^TM（3M，Sai nt，Paul，MN由来）による試験も実施した。正常な乳頭サイズおよび構造を対象にウシを選択した。試験の開始時に乳頭を洗浄し、アルコールでリンスした。次いで、すべての乳頭を、1.0×10⁷細菌／ｍｌ乳汁懸濁液の濃度のS．uberis細菌溶液中に約3/4長まで浸漬した。乳頭を10分間乾燥させた。次いで、殺菌剤（モノエステル）を伴わない軟膏ビヒクルを対照乳頭（左側）に添加し、試験軟膏を試験乳頭（右側）に添加した。同様に、他のウシについても、Lauricare^TM乳頭浸漬物（水性基材の製品）で試験乳頭（右側）を処置し、対照乳頭（左側）は処置しなかった。乳頭処置８置換後、まずへらで個別に乳頭から掻き取り、残留物を遠心分離チューブ中に置くことによって、試験および対照乳頭から回収したコロニー形成単位（CFU）の数を決定した。次に、それぞれの乳頭を16ｍｌのletheen brothでリンスし、個別の遠心分離チューブに配置した。次いで、それぞれの乳頭を再度掻き取り、残留物を、最初の掻き取り物を伴う同一の遠心分離チューブ内に置いた。チューブ中の材料を適切に希釈し、希釈物をヒツジ血液寒天上にプレート化した。接種プレートを35〜37℃で48時間インキュベートした。プレートあたり30〜300のコロニーを有するプレートのコロニーを計数して、ｍｌあたりのCFUを決定した。試験乳頭由来の細菌の減少対数を、対照乳頭由来の細菌と比較して、それぞれの組の乳頭について算出した。リンス試験および掻き取り試験由来の結果をともに平均した。それぞれのウシについて、２つの左（対照）乳頭および２つの右（試験）乳頭もともに平均した。試験軟膏およびLauricare^TMによる実験の結果を、減少パーセントおよび減少対数として表し、表２に示す。試験軟膏は、現実的条件下で、これらの細菌に対して水性乳頭浸漬物に匹敵する有効性を有した。実施例３本実施例は、ウシのヘルペス乳頭炎ウイルスに対する試験軟膏の有効性を示す。ウシヘルペス乳頭炎ウイルス（New York 1、VR-845株）は、American Tissue Type Collection，Rockville，MDより入手した。試験培地はEagles^TM最小必須培地（Gibco-BRL，Grand Island，NY より市販されている）であり、56℃で30分間加熱することにより熱で不活化した２％（v/v）ウシ胎仔血清を補充した。培地はまた、100単位／ｍｌペニシリン（ USB，Cleveland，OHより市販されている）、10μｇ/mlゲンタマイシンおよび2.5 μg/ｍｌ FungizoneTM（Sigma，St．Louls，MOより市販のアムホテリシンＢ）で補充した。ウイルスを十分な高力価まで増殖させた。次いで、細胞破砕物を除去し、ウイルスのアリコートを使用時まで-70℃で保存した。ウイルスを、１分間（23℃）または20分間（40℃）の暴露時間の間、懸濁液において試験軟膏に暴露した。1.0ｇ量の試験軟膏を0.5ｍｌアリコートのウイルス懸濁液とともに試験チューブに配置した。１分間の暴露の場合、１分間全体の間混合物をボルテックスにより撹拌した。20分間の暴露の場合、１分間およびその後４分ごとに混合物をボルテックスで撹拌した。ボルテックスによる撹拌の間を除いて、暴露の間混合物を40℃で保持した。暴露期間後直ちに、10倍の系列希釈を用い、Eagle^TM最小必須培地を用いて混合物の力価測定をした。感染性について、系列希釈をアッセイした。いくつかの対照を使用した。ウイルス対照は、1.0ｇの試験培地と混合した0.5 ｍｌアリコートのウイルス懸濁液を含んだ。細胞傷害性対照は、0.5ｍｌのEagle^TM 最小必須培地と混合した1.0ｇの試験軟膏を含んだ。細胞傷害性対照混合物の希釈系列をストックウイルスに対抗させ、殺ウイルス活性を有する試験軟膏の希釈率を決定するために感染性についてアッセイした。試験軟膏実験と同じ方法で、細胞傷害対象混合物を用いた実験を行った。 ViroMed Laboratories，Inc.，Cell Culture Divisionより入手したウシ腎細胞株を用いて感染性を決定した。培養物を増殖させ、使い捨て組織培養物用ラボウェア中の単層として使用した。試験混合物および対照の希釈物を、４連でウシ腎細胞培養物中に接種した。それぞれの希釈物の100μｌで細胞を接種し、36〜37℃で、5.1〜6.5％CO₂中でインキュベートした。ウイルスの存在および／または細胞傷害効果について、細胞を７日間観察した。ウシのヘルペス乳頭炎は、ウシ腎細胞に対して典型的な細胞変性効果を生じる。Karberの方法を用いて50パーセントエンドポイント、TCID₅₀ （TCID＝組織培養感染量）を算出した。この量は、50％の細胞に感染が生じる量である。減少パーセント値を以下のように求めた：減少％＝１−（TCID₅₀／TCID₅₀ウイルス対照） 100 （ASTM Standars on Materials and Environmental Microbiology，1994，E1052 -85；Diagnostic Procedures for Vial，Rickettsial、ならびにChlamydial Inf ections，E.H．LennetteおよびN.J．Schmidt編、第５版、1979、32〜35頁）。１分間および20分間暴露試験の結果を表３に示す。両試験におけるウイルス対照の力価は、6.75log₁₀であった。試験軟膏サンプルについては、いずれの試験でも感染性は検出されなかった。このことにより、≦1.5log₁₀の力価に対する下限および≧99.999％の減少パーセントに対する上限が設定される。記号：（＋）＝試験ウイルスの存在に対して陽性（０）＝試験ウイルスが回収されないおよび／または細胞傷害性が認められない（Ｔ）＝細胞傷害性が認められる細胞傷害性対照試験の結果を表４に示す。更に、希釈した試験軟膏を含有するサンプルでは、ウイルス活性が何ら認められなかった。記号：（＋）＝試験ウイルスの存在に対して陽性（０）＝試験ウイルスが回収されないおよび／または細胞傷害性が認められない（Ｔ）＝細胞傷害性が認められる実施例４本実施例は、ウシ乳頭の皮膚状態を改善する試験軟膏の有効性を示す。本研究のウシは、正常な乳頭および乳房を有するものを選択した。ウシの右側の乳頭を試験軟膏で処置し、一方左側の隣接乳頭を未処置とした。本研究では５頭のウシが含まれ、それぞれが２つの試験乳頭および２つの対照乳頭を有した。すなわち、10の試験乳頭および10の対照乳頭を本研究に要した。１日２回搾乳後に試験軟膏を塗布した。試験は比較的寒い期間に実施した。牛舎の気温は約40° Ｆ〜50°Ｆ（4.4℃〜10.0℃）で低湿度であった。これらの条件下では、乾燥の傾向が認められた。筒部の乾燥および乳頭先端スコアを処置および対照ウシ乳頭の両方で決定した。評価ではそれぞれの乳頭に数値スコアを付け、このスコアを加算して全体の結果を求める。評定者には、どの乳頭に製品が投与され、どの乳頭が対照乳頭であるかを知らされていない。乳頭筒部試験では、乾燥および粗ぞうの程度を決定するため触診によって乳頭筒部を評価し、以下の様に数値スコアを付ける。 1＝正常な柔らかい皮膚 2＝乾燥した感触が軽度で、やや粗ぞうである 3＝中等度の湿りの損失、および端の皮膚薄片を感じることができる 4＝皮膚が非常に乾燥していると感じられ、場合により一部にひび割れおよび血清滲出が認められる乳頭先端ケラチン評価は、以下の数的段階に基づいた各乳頭の数的評価とする。 1＝柔らかいケラチンが存在しない、あるいは少量である 2＝ケラチンの量および硬さのわずかな増加 3＝ケラチンの量および硬化の顕著な増加 4＝非常に硬いケラチンが大量に存在試験の結果を表５および表６に示す。乾燥試験（表５）は対照乳頭でほとんど改善が認められないことに比べ、処置乳頭が経時的に有意に改善していることを示す。乳頭先端スコアは、結果にばらつきの範囲内で処置乳頭および対照乳頭でほぼ類似した結果を示した。本発明の他の実施態様も添付の請求の範囲内にある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）ポリヒドロキシアルコールの抗微生物脂肪酸モノエステル；（ｂ）キレート剤；および（ｃ）ペトロラタムを含む軟膏ビヒクル組成物を含む、抗微生物軟膏。２．前記ポリヒドロキシアルコールがグリセロール、プロピレングリコールおよび糖類から成る群より選択される、請求項１に記載の抗微生物軟膏。３．前記脂肪酸が、カプロン酸、ヘプタン酸、カプリル酸、カプリン酸、ウンデカン酸およびラウリン酸から成る群より選択される、請求項１に記載の抗微生物軟膏。４．前記エステルがグリセロールモノラウレートを含む、請求項１に記載の抗微生物軟膏。５．前記エステルがプロピレングリコールモノカプリレートを含む、請求項１に記載の抗微生物軟膏。６．前記抗微生物軟膏が、少なくとも約５０重量％の前記ペトロラタムを含む、請求項１に記載の抗微生物軟膏。７．前記抗微生物軟膏が、約０．１重量％〜約１０重量％のポリヒドロキシアルコールの前記脂肪酸モノエステルを含む、請求項１に記載の抗微生物軟膏。８．前記抗微生物軟膏が、少なくとも約０．１重量％の前記キレート剤を含む、請求項１に記載の抗微生物軟膏。９．前記抗微生物軟膏が、少なくとも約０．１重量％の乳酸を含む、請求項１に記載の抗微生物軟膏。１０．前記抗微生物軟膏が、重量パーセントで、少なくとも約０．１％のグリセリルモノラウレート、少なくとも約０．１％のプロピレングリコールモノラウレート、少なくとも約０．１％の乳酸、および少なくとも約１％のろうを含む、請求項１に記載の抗微生物軟膏。１１．（ａ）ポリヒドロキシアルコールの抗微生物脂肪酸モノエステル；（ｂ）キレート剤；および（ｃ）ビヒクル組成物であって、ここで前記ビヒクル組成物は水に効果的に不溶である、を含む抗微生物組成物を、ウシ乳頭の皮膚に塗布する工程を含む、ウシ乳頭の処置方法。