JP2001500117A

JP2001500117A - 抗クラミジアの方法及び物質

Info

Publication number: JP2001500117A
Application number: JP10509836A
Authority: JP
Inventors: ランバート，ルイス，エイチ．，ジュニア
Original assignee: ゾーマコーポレイション
Priority date: 1996-08-09
Filing date: 1997-08-07
Publication date: 2001-01-09
Also published as: US6162788A; DE69716605D1; AU3909497A; WO1998006415A2; EP0918533B1; US5888973A; CN1232401A; ATE226442T1; AU741480B2; WO1998006415A3; CA2263181A1; NZ334041A; US6583116B1; CA2263181C; EP0918533A2; DE69716605T2

Abstract

(57)【要約】本発明は、クラミジア感染症に見舞われた被験者に、殺菌性／透過性誘導（ＢＰＩ）タンパク質産物を投与する工程を含む、クラミジア感染症を処置するための方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】抗クラミジアの方法及び物質発明の背景本発明は一般に、殺菌性／透過性増強（ＢＰＩ）タンパク質産物の投与による、クラミジア感染症を処置する方法に関する。ＢＰＩは、侵入してくる微生物に対する防御において必須の血液細胞である、哺乳動物の多形核白血球（ＰＭＮまたは好中球）の顆粒から単離されたタンパク質である。ヒトＢＰＩタンパク質は、イオン交換クロマトグラフィー［Elsbach ら、J.Biol.Chem.、254巻、11000頁(1979)］または大腸菌アフィニティークロマトグラフィー［Weissら、Blood、69巻、652頁(1987)］のいずれかと、酸抽出とを併用してＰＭＮから単離されている。このようにして得られたＢＰＩを、本明細書中では天然型ＢＰＩと称するが、これは広範囲にわたるグラム陰性細菌に対して強力な殺菌活性を有することが示されている。ヒトＢＰＩの分子量はおよそ 55,000ダルトン（55kD）である。ヒトＢＰＩタンパク質全体のアミノ酸配列、及び係るタンパク質をコードするＤＮＡの核酸配列は、Glayら、J.Biol.Chem.、26 4巻、9505頁(1989)の図１にて報告されており、係る文献を引用することにより、本明細書に組み入れることとする。Grayらのアミノ酸配列を、本明細書中では配列番号：１で示す。ＢＰＩは、強い陽イオン性のタンパク質である。ＢＰＩのＮ−末端半分は、高い正の実効電荷を担い、この分子のＣ−末端半分は、-3の実効電荷を有している［Elsbach及びWeiss(1981)、前出］。約25kDの分子量を有するＢＰＩのタンパク質分解Ｎ −末端断片は、両親媒性の特性を有しており、疎水性及び親水性領域を交互に含んでいる。ヒトＢＰＩの係るＮ末端断片は、天然に由来する55kDのヒトＢＰＩホロタンパク質の抗菌効力を保有している。［Ooiら、J.Biol.Chem.、262巻、1489 1〜14894頁(1987)］。Ｎ末端部分とは対照的に、単離されたヒトＢＰＩタンパク質のＣ末端領域は、グラム陰性生物に対して、ほんのわずかに検出可能な抗細菌活性を呈するに過ぎない。［Ooiら、J.Exp.Med．、174巻、649頁(1991)］。「ｒＢＰＩ₂₃」と称される、およそ23kDのＮ−末端ＢＰＩ断片が、組換え法によって製造されており、これもグラム陰性生物に対する抗細菌活性を保有している。Ga zzano-Santoroら、Infect.Immun.、60巻、4754〜4761頁(1992)。ＢＰＩの殺菌効果は、例えばElsbach及びWeiss、Inflammation:Basic Princip les and Clinical Correlates、Gallinら編、30章、Raven Press，Ltd．(1992) におけるごとく、グラム陰性の種に特異性が高いとの報告がなされている。このように報告された標的細胞の特異性は、グラム陰性生物の外膜（すなわちエンベロープ）に固有のリポ多糖（ＬＰＳ）に対するＢＰＩの強い誘引力の結果であると考えられた。一般にＢＰＩは、酵母を含む他の微生物に対して、そして高等真核細胞に対しては無毒であると考えられていたが、前述のごときＢＰＩタンパク質産物は、グラム陽性細菌、マイコプラズマ、マイコバクテリア、真菌、及び原生動物に対して活性を呈することが近年になって見出されている。［1995年１月 13日に出願せる、許可された共有で係属中の米国特許出願第08/372,793号（この開示を引用することにより本明細書に組み入れることとする）；共有で係属中の米国特許出願第08/626,646号（この開示を引用することにより本明細書に組み入れることとする）；共有で係属中の米国特許出願第08/372,105号（この開示を引用することにより本明細書に組み入れることとする）；及び共有で係属中の米国特許出願第08/273,470号（この開示を引用することにより本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。］また、ＢＰＩタンパク質産物が細菌に対する抗生物質の活性を増強する能力を有することも、見出されている。［米国特許第5,523,288号（この開示を引用することにより本明細書に組み入れることとする）；及び許可された共有で係属中の米国特許出願第08/372,783号を参照されたい。］ＢＰＩがグラム陰性細菌を殺傷する際の正確な機構は未だ完全には解明されていないが、まず、陽イオン性ＢＰＩタンパク質とＬＰＳ上の陰性に荷電した部位との間の静電気的相互作用及び疎水性相互作用を通して、細菌の表面にＢＰＩが結合しなければならないと考えられている。ＬＰＳは、それが刺激する強い炎症応答（すなわち、回復不能の内毒性ショックを最終的には引き起こしうる宿主炎症細胞によるメディエータの放出）のゆえに、「内毒素」と称されている。ＢＰＩはリピドＡに結合するのであるが、これはＬＰＳの最も毒性が強く且つ最も生物学的活性を有する成分であると報告されている。感受性のグラム陰性細菌において、ＢＰＩの結合はＬＰＳ構造を崩壊させ、リン脂質及びペプチドグリカンを分解する細菌酵素の活性化を導き、細胞外膜の透過性を変化せしめ、そして、最終的には細胞死へと誘導する事象を開始させると考えられる。［Elsbach及びWeiss(1992)、前出］。ＢＰＩは２段階にて作用すると考えられる。第一は、即時的生育停止、外膜の透過性亢進（permeabilization ）ならびにリン脂質及びペプチドグリカンを加水分解する細菌酵素の選択的な活性化によって特徴付けられる亜致死的段階である。この段階での細菌は、血清アルブミンを追加した培地中で生育させることにより救助できる［Mannionら、J.C lin.Invest.、85巻、853〜860頁(1990)］。第二段階は、血清アルブミンで回復しえない生長阻害により規定されるものであるが、細菌をさらに長い間ＢＰＩに曝した後に起こるものであり、細胞質内膜への明白な損傷を含む、広範囲の生理学的及び構造的変化により特徴付けられる。ＢＰＩがＬＰＳにまず結合して、正常時においてＭｇ⁺⁺及びＣａ⁺⁺の結合を通して外膜を安定化させる、ＬＰＳの陰イオン性基への結合におそらくは起因した、組織的な変化が惹起される。グラム陰性細菌の外膜へのＢＰＩの付着によりアクチノマシンＤなどの疎水性物質への外膜の迅速な透過性亢進がなされる。ＢＰＩの結合及びそれに続くグラム陰性細菌殺傷は、少なくとも部分的にＬＰＳ多糖の鎖長に依存するものであり、長いＯ−鎖を持っている「スムーズ」生物は、短いＯ−鎖を持っている「ラフ」生物よりもＢＰＩの殺菌効果に対して耐性である［Weissら、J．Clin.Invest.、65巻、619〜628頁(1980)］。このＢＰＩの作用の第一段階であるグラム陰性外側エンベロープの透過性亢進は、ＢＰＩの解離に際しては可逆性であり、これは、二価陽イオンの存在及び新規ＬＰＳの合成を必要とするプロセスである［Weissら、J.Immunol.、132巻、3109〜3115頁(1984)］。しかしながら、グラム陰性細菌の生育力喪失は、エンベロープの完全性を修復するプロセスによっては回復せず、従って殺菌作用は標的生物に誘導される付加的な障害により媒介されるのであり、それは細胞質膜に位置するかもしれないことが示唆される［Mannionら、J.Clin.Invest.、86巻、631〜641頁(1990)］。この可能性を特に精査して、モルベースで、ＢＰＩは少なくともポリミキシンＢと同等に細胞質膜小胞機能を阻害することが示されている[In't Veldら、Infection and Immunity、56巻、1203〜1208頁(1988)］ものの、正確な機構ならびに、このような小胞と無傷の生物の研究との関連は、未だ解明されていない。クラミジアは、非運動性でグラム陰性の偏性細胞内細菌であり、他の科の細菌とクラミジアとを系統発生的に分別する特異な生物学的特性を有している。クラミジアは目下、それ自体の目であるクラミジア目、クラミジア科、１つの属のクラミジア属に分類されている。［Schachter及びStamm、Manual of Clinical mic robiologyに掲載のChlamydia、669〜677頁、American Society for Microbiolog y、Washington，DC（1995）。］４つの種、すなわち、Chlamydia trachomatis（トラコーマクラミジア）、C．pneumoniae（クラミジア・ニューモニエ）、C．ps ittaci（オーム病クラミジア）及びC．pecorum（クラミジア・ペコラム）があり、これらは広範囲のヒト疾患を引き起こす。発展途上国では、C．trachomatisがトラコーマを引き起こし、この疾患は予防可能な失明の世界中での主たる原因となっているものである。１億5000万人を越える小児が活性型トラコーマに罹っており、そして現在のところ600万人を越える人々がこの疾患に起因して失明している。先進産業国では、C．trachomatisは最も流行性の、性的に伝染される疾患の原因であり、尿道炎、子宮頸管炎、精巣上体炎、子宮外妊娠及び骨盤内炎症性疾患を引き起こす。昨年だけでも、概算３億人の人々が性的に伝染されるクラミジア感染症に罹患していた。米国での１年当たり250,000症例の骨盤内炎症性疾患のうち、毎年およそ25,000名の女性が不妊症になっている。感染した母親から誕生時に罹患したものである、新生児のC．trachomatis感染症は、１年当たり数十万から数百万の結膜炎を引き起こし、これらの感染児のうち約半数に肺炎が発症した。近年、C．pneumoniaeは伝染性ヒト肺炎の一般的な原因として関わっていると考えられている。この属のメンバーは、重要なヒトの病原体であるばかりでなく、他の哺乳動物及び鳥類でも有意な罹患を引き起こす。しかして、クラミジアは動物界において最も普遍的な病原体の一つなのである。［Zhangら、Cell、69巻、861〜869頁(1992)。］クラミジアの独自の発育周期によって、他のすべての微生物とクラミジアとが分別される。クラミジアは、ＡＴＰを合成することができない偏性細胞内寄生体であり、従って生存するために宿主細胞のエネルギーに依存している。ウイルスとは異なり、それらは常にＤＮＡ及びＲＮＡの双方を含み、二分裂によって分裂し、リボソームを含み、そしてタンパク質を合成することができる。クラミジアはグラム陰性細菌の細胞壁と同様の構造の細胞壁を有しており、そしてこの属のメンバーのすべては、特定のグラム陰性細菌のＬＰＳの類似体であるかもしれない、「補体結合（ＣＦ：complement fixation）抗原」と称される独自のＬＰＳ様抗原を保有している。［Schachter及びStamm、前出］クラミジアは、種特異的及び亜種特異的の双方の抗原を含む主要外膜タンパク質（ＭＯＭＰ）も保有している。クラミジアの感染性の型は、基本小体（ＥＢ）であり、これが宿主細胞に接着して宿主に由来する食細胞小胞（エンドソーム）内へ進入することによって哺乳動物細胞に感染し、この中で生育周期全体が完遂する。生体内における標的宿主細胞は、典型的には円柱上皮細胞であり、そして進入の主たる様式は受容体によって媒介されるエンドサイトーシスであると考えられている。ＥＢが一旦細胞に進入すれば、ＥＢよりも大きくて代謝的に活性である網状体（ＲＢ）へと再組織化して、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びタンパク質を合成する。ＥＢは、細胞外での生存に特に適応したものであり、一方代謝的に活性なＲＢは、宿主細胞の外では良好に生存せず、細胞内環境に適応しているようである。およそ８時間の後、ＲＢは二分裂による分裂を開始する。それらは宿主細胞のエンドソーム内で複製するにつれ、光学顕微鏡によって視ることができる、特徴的な細胞内封入体を形成する。生育及び分裂の時期を経た後、ＲＢは再組織化して濃縮し、感染性のＥＢを形成する。発育周期は、宿主細胞の溶解またはクラミジアのエキソサイトーシスが起こると完逐し、ＥＢが放出されて感染症のさらなる周期が開始される。完全な発育周期の長さは、細胞培養モデルにて調べた場合、４８から７２時間であって、これは感染株、宿主細胞及び環境条件の関数により変動する。［Beattyら、Microbiol.Rev.、58巻、686〜699頁(1994)。］少なくともC．trachomatisについては、［クラミジア生物の宿主細胞への接着が、クラミジアの表面上に存在するヘパラン硫酸様グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）によって媒介されていることが立証されている。精製されたヘパリン、ヘパリン硫酸、またはヘパリン受容体類似体（血小板因子４及びフィブロネクチンなど、これら双方ともヘパリン硫酸に結合することが知られている）のいずれかを用いてクラミジアを処置すると、宿主細胞へのクラミジアの接着及び感染性が阻害された。ヒアルロン酸塩、コンドロイチン硫酸、またはケラチン硫酸などの、ヘパリン以外のＧＡＧを用いた場合には、阻害は認められなかった。ヘパリチナーゼを用いてC．trachomatisを処置した場合、接着及び感染性は９０％以上減じられた。続いて外来性ヘパラン硫酸を用いて処置すると、処理生物が宿主細胞へ接着する能力を用量依存的に回復させることができた。ヒアルロン酸塩、コンドロイチン硫酸、またはケラチン硫酸などの他のＧＡＧが、接着能を回復させることはなかった。これらのデータから、ヘパリン硫酸様のＧＡＧは、宿主細胞表面上と、クラミジア外膜表面上との共通のＧＡＧ受容体を架橋することによって、クラミジアの宿主細胞への接着を媒介するのであることが示唆される。［Zhangら、Cell、69巻、861〜869頁(1992)］ C．trachomatisは、ほぼ専らヒトの病原体となり、そしてトラコーマ、封入体結膜炎、性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ）、及び生殖管疾患の原因となる。［Scha chter及びStamm、前出］この種のうち、血清型Ａ、Ｂ、Ｂａ、及びＣは、地方病性のトラコーマ（予防可能な失明の、世界中で最も主要な原因）に関わっている。トラコーマは、結膜及び角膜の慢性的な炎症であり、性的に伝染されるものではない。トラコーマの、潜在的に失明を引き起こす可能性がある後遺症には、眼瞼の歪曲、睫毛乱生（睫毛が生える方向の乱れ）、及び眼瞼内反（眼瞼辺縁の内側への変形）が含まれる。これらは、角膜潰瘍を引き起こす可能性があり、その後視力の喪失を伴うことがある。C．trachomatisの血清型Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３は、ＬＧＶに関わっている。未処置の、性病性リンパ肉芽腫は、三段階で進行し、各段階ではそれぞれの前段階よりも重症となっている。存在する場合、初期感染巣は、生殖器に現れる。第二段階は、局部リンパ節症によって顕示される横痃状態であり、この間に横痃は化膿して排膿性の瘻孔になることがある。直腸狭窄及びリンパ閉塞が、第三段階で出現しうる。性病性リンパ肉芽腫は、熱帯性または亜熱帯性気候の発展途上国、とりわけ社会経済レベルの低い群の間に共通の問題となっている。 C．trachomatisはまた、性的に伝染する疾患の最も主要な物質でもある。男性においては、血清型ＤからＫまでが、非淋菌性尿道炎の主たる同定可能な原因であり、そして精巣上体炎、ライター症候群、及び直腸炎も引き起こす。クラミジア感染症は、この感染症が無症候性であることがあるため、そして他の病原体が同様の症候を引き起こしうるため、臨床的症候のみによって男性で容易に同定されるものではない。クラミジア性の尿道炎は、集団によっては淋菌性の尿道炎（淋疾）の２倍程度の頻度で発症しており、その発生率は上昇傾向にある。N．gonorrhea（淋菌）が存在することが示された場合にも、尿道炎は第２の生物が関与する二重または三重の感染に起因するのかもしれないのである。C．trachomatis及びN．g onorrheaの同時感染は、淋疾の男性の約２５％であると報告されている。精巣上体炎は、クラミジア性尿道炎の、男性において最も重大な合併症である。C．tra chomatisは、米国における若年層の男性の尿道炎の症例の２例に１例の原因となっており、不妊の可能性をはらんだ結果を招いている。ライター症候群は、男性におけるクラミジア感染症の別の徴候である。これは、尿道炎、結膜炎及び関節炎の症候を旧来より含む、有痛性の全身病である。尿道炎及び関節炎は、はるかに頻度の高い併発病であり、クラミジアの尿道感染が関節炎を誘発するのかもしれないと考えられる。C．trachomatisは、特に同性愛者の男性に、直腸炎（肛門炎症）も引き起こす可能性がある。女性にあっては、性的に伝染する血清型によるクラミジア感染症は、子宮頸管炎、尿道炎、子宮内膜炎、卵管炎、及び直腸炎を引き起こし、卵管炎の重篤な合併症には、卵管瘢痕、不妊症、及び子宮外妊娠が含まれる。女性においては認識されていないクラミジア感染症が頻発している。クラミジアに感染しているおよそ５０％の女性が無症候性である。C．trachomatisは、粘液膿性子宮頸管炎及び尿道症候群、さらには子宮内膜炎及び卵管炎を引き起こす。これらの生殖管上部のクラミジア感染は、不妊または子宮外妊娠の素因を引き起こし得、これらは、女性でのクラミジア感染症の最も重大な合併症である。すべての母体死亡の１０％は、子宮外妊娠に起因するものである。 C．trachomatisは、粘液膿性子宮頚管炎の症例の３０％以上を引き起こしている。淋菌性子宮頸管炎の女性の半分もが、随伴するクラミジア感染症になっている。淋菌感染がペニシリンで処置された場合、随伴するクラミジア性子宮頸管炎は検出されず処置されないままであり、そして骨盤の炎症性疾患（卵管炎）にまで進行する場合があり、これは不妊症及び子宮外妊娠を導きうるのである。C．tra chomatisは、女性における尿道症候群の原因である。クラミジア感染は、子宮頸部から子宮内膜へと上行し、この子宮内膜で、C．trachomatisは子宮腔の上皮管壁（lining）に認められている。子宮頸管炎の女性全体の約半分が、子宮内膜炎になっていると見積もられる。子宮外妊娠及び不妊の主たる原因である卵管炎は、女性の性器感染症の最も重篤な合併症である。上腹部痛は、肝周囲炎（perihe patitis）の主症状である。C．trachomatis及びN．gonorrhoeaは、双方とも肝周囲炎を引き起こすことができる。この状態は、炎症を受けたファローピウス管から肝表面に感染生物が広がる女性においてほぼ例外なく起こっている。 C．trachomatisに感染した女性は、感染した産道を新生児が通過する際に、係る新生児に疾患を引き渡すこともある。これらの新生児は、最も多くの場合封入体性結膜炎またはクラミジア性肺炎を発症するが、膣の、咽頭の、または腸の感染も発症することがある。失明に至るほどのものでないにしても、封入体性結膜炎は慢性化する可能性があり、未処置のままでは穏やかな瘢痕及びパンヌスの形成を引き起こすものである。産道の通過の際に、クラミジアによる生殖器感染症の母体に生まれた乳児の３分の２までもが、やはり感染しているようである。世界のある地域では、クラミジア性子宮頸管炎を有する妊婦１０名のうち１名もで、新生児に対する危険性が無視できないものとなっている。クラミジア肺炎は、感染した母体に生まれた乳幼児の１０％から２０％に引き起こされている。 C．trachomatisは、生後６カ月間での肺炎全体の２０％から６０％の原因となっている。 C．trachomatis株は、テトラサイクリン類、マクロライド類及びスルホンアミド類の作用に対して感受性であり、またヨウ素で染色される封入体空胞内のグリコーゲン用物質を生産する。 C．psittaci株は、多くの鳥類の種及び哺乳動物に感染して、オウム病、オルニトーシス、ネコの肺炎、及びウシの流産などの疾患を起こすものである。［Sc hachter及びStamm、前出］ C．psittaciは、鳥類種間に偏在するもので、鳥での感染は、通常腸管に関わっている。この生物は、糞便中に排出され、環境を汚染し、そして噴霧質により分散／蔓延される。 C．psittaciは、家畜（哺乳類）における数多くの全身性消耗性疾患の原因となり、そして最も重要なこととしては流産を引き起こしうるので、世界の特定の地域では、これらの感染が重要な経済的影響に帰することになる。この物質によるヒトのクラミジア感染症は通常、感染した鳥類種への曝露に起因するが、感染した家畜への曝露後にも引き起こされる。この種は、スルホンアミドの作用に対しては耐性であり、ヨウ素では染色しない封入体を生産する。 C．Pneumoniaeは、他の種に対するＤＮＡの相関性が１０％未満であり、基本小体（ＥＢ）が丸形でなく西洋ナシ形を有している。C．trachomatisと同様に、それは保因動物なく専らヒトの病原体となっているらしい。C．pneumoniaeは、様々な呼吸器疾患の原因として同定されており、世界中に分布している。［Schachter及びStamm、前出］一般的に、幼年期の後期、青年期、及び青年期の初期に感染症に陥り、３０から４０歳の年齢の人々のうち４０から５０％の血清での有病率の原因となっている。感染症の徴候には、咽頭炎、気管支炎、及び軽微な肺炎が含まれ、そして、その伝染は主として呼吸分泌物を媒介する。血清疫学的研究で、これらの感染症は冠状動脈疾患と関連付けられ、そしてアテローム性動脈硬化におけるその役割が、目下精査されているところである。病原体としてのC．pecorumの役割は明らかでなく、そして、その同定のためには特殊な試薬が必要とされる。クラミジアの一次単離のために推奨される手法は、細胞培養である。クラミジアは、胚を有する雌鶏の卵黄嚢において、さらに細胞培養中（ある程度の変動を伴う）で生育するはずである。C．trachomatisは、マッコイ（McCoy）の異数体ネズミ細胞、HeLa 299細胞、BHK-21細胞、またはL-929細胞などの種々の細胞系に感染することができる。ＨＬ細胞及びHep-2細胞は、C．pneumoniaeの再生に対する感受性が、より高いかもしれない。最も一般的な技術には、シクロヘキシミドで処理したマッコイ細胞への臨床検体の接種が含まれる。基本原理は、細胞単層上への接種物の遠心沈殿と、その単層の４８〜７２時間のインキュベーションと、そして適切な免疫蛍光、ヨウ素またはギムザ染色法による、典型的な細胞質内封入体の立証を含んでいる。細胞培養には通常、インキュベーション時間が必要であるため、完了までに２から６日を要する。クラミジアはまた、直接蛍光抗体（ＤＦＡ）試験による試料でも検出されうる。この試験では、スライドを、フルオレセインを接合したモノクローナル抗体とインキュベートし、そして蛍光を発している基本小体を蛍光顕微鏡を用いて検出する。この試験は、８０％〜９０％の感度を有し、また、理想的な条件下に双方の試験を実施した場合、細胞培養と比較して９８％〜９９％の特異性がある。［Schachter及びStamm、前出］数多くの市販の製品で、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）法を用いることにより臨床検体中のクラミジア抗原を検出することができる。これらの製品のほとんどは、クラミジアのＬＰＳを検出し、これはＭＯＭＰよりも可溶性である。確証はないが、この試験は９７％程度の特異性を有している。［Schachter及びStamm、前出］様々な核酸プローブも市販されている。１つの市販プローブ試験（GenProbe ）は、クラミジアのＲＮＡを検出することによって感度を高めるための試みにおいて、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリダイゼーションを利用している。補体結合（ＣＦ）試験は、最も頻繁に実施されている血清学的試験であり、これにより補体に結合している抗体（ＣＦ抗原群に対する抗体）の血清レベルが測定される。これはオウム病を診断するために有用であり、この場合、急性期及び回復期のペア血清は時として、力価にして４倍以上の増大を示す。多くのC．pne umoniae感染症についても同じことが当てはまるようである。これらの感染症のうちおよそ５０％がＣＦ陽性であるものの、血清変換（seroconversion）を検出するのに２４週間もかかることがある。ＣＦ試験はＬＧＶを診断するのにも有用であり、この場合１：６４を越える力価の一点で、この臨床的診断が高度に支持されることになる。［Schachter及びStamm、前出］補体結合抗体の高力価は、クラミジア性結膜炎または生殖管感染症においては認められず、従って、これらの感染症に対しては感受性を有しない。微量免疫蛍光（micro-ＩＦ）法は、抗クラミジア抗体を測定するために、格段に感度の高い方法である。この間接蛍光抗体法では、各クラミジア血清型を持つ受精ニワトリ胚の卵黄嚢を感染させることによって調製された抗原が使用される。患者血清の連続希釈液を調製した抗原に添加し、そして血液試料中の抗体のレベルを免疫蛍光を使用して定量する。トラコーマ、封入体性結膜炎、及び生殖管感染症は、適切な時限のペア血清を得ることができる場合にmi cro-ＩＦ技術によって診断されうる。しかし、ペア検体の抗体力価が４倍以上変化していることの実証を必要とするので、そして尿道炎などの表在性性器感染症の患者には力価の変化がないかもしれないので、この方法は臨床での利用に限度がある。しかしながら、ライター症候群の患者由来の単一血清検体における高い抗体力価と、肺炎の幼児の血清中の高いＩｇＭ力価とは、診断を樹立するのに有望なものである。抗微生物の感受性プロファイル及び新たに獲得する薬物耐性における株間の変化は双方とも、クラミジア間では極めて希である。C．trachomatis、C．pneumon iae、及びC．psittaciに対してイン・ビトロで最も活性な薬物のなかに含まれるのは、テトラサイクリン及びドキシサイクリンなどのサイクリン類、エリスロマイシン及びアジスロマイシンなどのマクロライド類、シプロフロキサシン及びオフロキサシンなどのキノリン類、クロラムフェニコール、リファンピシン、クリンダマイシン及びスルホンアミド類である。テトラサイクリン類及びマクロライド類は一般に、クラミジアに起因する感染に対する治療の頼みの綱になっている。［Schachter及びStamm、前出；Goodman及びGilman,．The Pharmacological Ba sis of Therapeutics、第９版、McGraw-Hill、ニューヨーク、ニューヨーク(199 6)。］抗微生物の感受性試験は、クラミジア感染に対しては希にしか行われないが、以下のように実施されうる。試験用の生物を、抗生物質を含まない培地にて採収前に培養した細胞で少なくとも２継代生育する。次いで、微量定量ウェル当たりほぼ１００（〜１００）の封入体形成単位の、調整された播種物を使用して、抗生物質を含まない細胞の単層に感染させる。その播種物を単層上に遠心沈殿させた後、被験抗生物質の連続希釈液を直ちに、またはその後の２４時間にわたり様々な時間間隔にて添加する。４８時間後に、フルオレセインが接合されたモノクローナル抗体を使用して、最小阻害濃度（ＭＩＣ）、すなわち、細胞内封入体型性を阻害する最高の抗体希釈濃度を同定する。一般的には、単層も破壊されて、最小殺菌濃度（ＭＢＣ）すなわち、継代中に検出されるうち生存クラミジアの妨げになる抗生物質の最高希釈濃度（ＭＢＣ）を規定すべく、さらなる継代が行なわれる。発明の要約本発明は、治療上有効量のＢＰＩタンパク質産物を投与することによる、クラミジア感染症に見舞われた被験者の処置方法を提供するものである。本発明は、ＢＰＩタンパク質産物がクラミジアの感染性を阻害し、そして樹立された細胞内感染でのクラミジアの増殖を阻害するという、驚くべき発見に基づくものである。ＢＰＩタンパク質産物は、単独で、または他の既知の抗クラミジア剤と組み合わせて投与してもよい。補助的治療法が被験者に施される場合、ＢＰＩタンパク質産物の投与によって、有効な治療のために必要とされるＢＰＩタンパク質産物以外の薬剤の量が低減されえ、しかして毒性の応答の可能性及び／または処置費用の高騰を局限することができる。ＢＰＩタンパク質産物の投与によって、係る薬剤の効果も増強されえ、係る薬剤の効果を促進し、あるいは係る薬剤に対するクラミジアの耐性を逆転することもできる。加えて、本発明は、クラミジアをＢＰＩタンパク質産物に接触させる工程を含む、クラミジアを殺傷するかまたは生育を阻害する方法を提供する。この方法は、イン・ビボ、または流体及び表面の汚染を除くため、ならびに外科用及び他の医療用装置、そして人工関節及び留置侵入性（観血的）器具を包含する植込可能な器具を滅菌するための用途などといった、様々なイン・ビトロでの用途において実施することができる。本発明のさらなる特徴として、本発明は、クラミジア感染症の処置用の薬物の製造のためのＢＰＩタンパク質産物の使用を企図するものである。薬物には、ＢＰＩタンパク質産物に加えて、ＢＰＩタンパク質産物以外の抗クラミジア剤などの他の化学療法剤が含まれうる。現在のところ好ましい実施態様を記載した以下の発明の詳細な説明を当業者が考慮すれば、本発明の数多くのさらなる特徴及び利点が明らかになるであろう。発明の詳細な説明本発明は、ＢＰＩタンパク質産物を投与して、クラミジア感染症に見舞われた被験者を処置することができるという驚くべき発見に関するものであって、係る感染症を予防的または治療的に処置する方法を提供する。予期せざることであるが、ＢＰＩタンパク質産物は、例えば宿主細胞中に認められる生殖体（reproduc tive body）の数の減少によって測定した場合に、抗クラミジア活性を有することが立証された。C．trachomatis、C．pneumoniae、C．psittaci及びC．pecorum によって引き起こされる感染症を含め、様々なクラミジア感染症を本発明によって処置することができる。本明細書中で用いる「処置する」または「処置」なる語には、予防的及び治療的処置の双方が含まれる。ＢＰＩタンパク質産物は、全身に、あるいは局所に投与することができる。全身投与の経路には、経口、静脈内、筋肉内もしくは皮下注射（長時間放出用のデポ剤に含有せしめられる）、眼内及び眼球後部、鞘内、腹膜組織内（例えば腹腔組織内灌流による）、エアゾル化もしくは霧状にした薬物を用いた経肺、または経皮経路が包含される。局所経路には、軟膏剤、クリーム剤、ジェリー剤、眼用滴剤または眼用軟膏、耳用滴剤、膣用座剤などの座剤、または潅注液（例えば創傷の潅注用）の剤形での投与が包含される。非経口投与される場合、ＢＰＩタンパク質産物組成物は一般に、１日当たり１ μｇ/kgから100mg/kgの範囲の量で、好ましくは１日当たり0.1mg/kgから20mg/kg の範囲の量で、さらに好ましくは1から20mg/kg／日の範囲の量で注射される。処置は、継続的注入または間欠的注射もしくは注入、またはこれらの組合せによって継続されるとよく、同時に、処置担当の医師が決定する限りにおいて、１日当たりの用量を減少または増加してもよい。局所投与される場合、ＢＰＩタンパク質産物組成物は一般に、1μｇ/mLから1グラム/mLの範囲の単位投与量で、そして好ましくは、1μg/mLから100mg/mLの範囲の投与量で適用される。当業者であれば、良好な医療実務及び個々の患者の臨床状態によって判定されるとおり、ＢＰＩタンパク質産物及び／または他の抗クラミジア剤に対する有効投与量及び単一療法もしくは併用投与の計画を難なく至適化できるはずである。ＢＰＩタンパク質産物は、目下のところ有効であることが知られている他の抗クラミジア剤と組み合わせて投与してもよい。この目的のために好ましい抗クラミジア剤には、テトラサイクリン及びドキシサイクリンなどのサイクリン類、エリスロマイシン及びアジスロマイシンなどのマクロライド類、シプロフロキサシン及びオフロキサシンなどのキノリン類、クロラムフェニコール、リファンピシン、クリンダマイシン及びスルホンアミド類などである。抗クラミジア剤とのＢＰＩタンパク質産物の併用投与によって、係る抗クラミジア剤の治療的有効性が向上することが期待される。このことは、クラミジアの生育、例えば、複製を根絶または阻害するのに必要とされる抗クラミジア剤の濃度を低減させることを通じて起こりうる。薬剤によっては、その全身毒性または法外に高い価格によってその使用が限定されてしまうので、治療上の有効性のために必要な抗クラミジア剤の濃度を低減することは、毒性及び／または処置費用を減じ、かくして当該薬剤をさらに広範に使用することを許容することになる。ＢＰＩタンパク質産物及び他の抗クラミジア剤の併用投与によって、いずれかの薬剤のみ単独を用いた場合の達成可能な殺菌または静菌効果よりも、さらに迅速な、またはさらに完全な効果が生じうる。ＢＰＩタンパク質産物の投与によって、抗クラミジア剤に対するクラミジアの耐性が逆転することがある。また、ＢＰＩタンパク質産物の投与によって、静菌剤と殺菌剤に変換させることもできる。本発明の利点は、様々な生物に対するＢＰＩタンパク質産物の広範囲の活性と、抗生物質の活性を増強するための補助的治療法としてのＢＰＩタンパク質産物の使用によって、ＢＰＩタンパク質産物が、クラミジア及びグラム陰性細菌である淋菌などの別の生物による二重または三重の感染症の処置に対する優れた選択肢となることにある。かくして、ＢＰＩタンパク質産物は、淋／クラミジアの二重感染を含むことが多い、性的に伝染する疾患の伝染を阻害するうえで特に有用である。従って、ＢＰＩタンパク質産物を、例えば、殺精子クリームまたはジェリー中に配合したり、コンドームの表面に被覆したりして、避妊組成物及び避妊具へ取り込ませることが企図される。別の利点は、既知の抗クラミジア剤に対して耐性を獲得しているクラミジアを処置する能力である。ＢＰＩと、望ましくない副作用を有する抗クラミジア剤との併用投与のさらなる利点は、有効な治療のために必要とされる抗クラミジア剤の量を減じることができることにある。本発明はまた、深刻な院内（病院で陥った）感染の危険性を減じると共に、例えば治療期間の短縮、集中治療室への滞在期間の短縮または入院期間の短縮などに起因する生活の質の向上への寄与をも提供することができる。本明細書中で使用する「併用投与」には、薬剤を一緒に、あるいは相前後して投与することが包含される。ＢＰＩタンパク質産物及び抗クラミジア剤は、異なる経路によって投与されてもよい。例えば、ＢＰＩタンパク質産物を静脈内に投与して、抗クラミジア剤は筋肉内、静脈内、皮下、経口または腹腔内に投与してもよい。あるいは、ＢＰＩタンパク質産物を腹腔内投与して抗クラミジア剤は腹腔内もしくは静脈内に投与しても、またはＢＰＩタンパク質産物をエアゾル化もしくは霧状にした形態で投与し、抗クラミジア剤は例えば静脈内に投与してもよい。ＢＰＩタンパク質産物及び抗クラミジア剤を双方とも、静脈内に注射してもよい。ＢＰＩタンパク質産物及び抗クラミジア剤は、同じ静脈内ラインを介して（間に洗浄をした後）引き続き与えるか、または異なる静脈内ラインを介して与えてもよい。ＢＰＩタンパク質産物及び抗クラミジア剤は、双方の薬剤とも感染の部位において有効濃度に達することを許容するに充分なように与えられる限りにおいて、同時にまたは引き続き投与すればよい。ＢＰＩタンパク質産物及び抗生物質の併用投与によって、クラミジア感染症のさらに効果的な処置が提供されると予測される。２つの薬剤の併用投与で、どちらかの薬剤を単独で投与した場合よりも、イン・ビボにおいて大きな治療効果を提供することができる。例えば、併用投与によって、同等の治療効果を達成しつつ、一方または双方の薬剤の投与量を低減させることができる。あるいは、併用投与によって、いずれかの薬剤を単独で用いた場合に達成可能な効果よりも迅速または完全な殺細菌／静細菌効果を生じうる。治療上の有効性は、首尾良い臨床上の成果に基づくものであり、感染に関わる生物の１００％を抗クラミジア剤または薬剤が死滅させることが必要なわけではない。成功は、宿主にとって利となるように平衡を傾けるよう、クラミジアを阻害するに充分な、感染部位における抗クラミジア活性のレベルを達成することに依存するものである。宿主の防御が最大級に効果的である場合には、必要な抗クラミジア作用は、かなり低くてもよい。１の（常用）対数（指数１０）にまで生物への負荷量を減じてでさえも、感染を制御するための宿主自身の防御が許容されるかもしれない。加えて、初期の殺細菌／静細菌作用を増大させることが、長期間の殺細菌／静細菌作用よりも重要でありうる。これらの初期の成果によって、宿主の防御機構を活性化する時間が与えられるので、係る成果は重要であり、治療の成功に決定的な部分となる。ＢＰＩタンバク質産物は、補体、ｐ15及びＬＢＰを含む全血または血清、ならびに他の細胞及び免疫系の成分に存在する種々の宿主防御要素と相互作用すると考えられる。このような相互作用は、ＢＰＩタンパク質産物の活性の強化を導きうる。これらの相互作用のために、ＢＰＩタンパク質産物はイン・ビトロよりもイン・ビボで、さらに強い活性を発揮することが期待できる。しかして、イン・ビトロ試験でイン・ビボにおける実用性が予見はされるものの、イン・ビトロで活性がないことが必ずしもイン・ビボにおいて活性がないことを示唆するものではない。例えば、ＢＰＩは、旧来の培地を用いたアッセイにおけるよりも、全血または血漿アッセイで、グラム陰性細菌に対してより大きな殺菌効果を呈することが観察されている。［Weissら、J.Clin.Invest．90巻、1122〜1130頁(1992)］。これは、旧来のイン・ビトロ系が、イン・ビボにおけるＢＰＩの機能を助長するかもしくは強化する血液成分を欠くためか、または、旧来の培地がＢＰＩタンパク質産物の活性の典型的な活性阻害剤であるマグネシウム及びカルシウムを生理学的濃度よりも多量に含有しているからかもしれない。さらに、宿主においてＢＰＩタンパク質産物は、グラム陰性細菌の転位を中庸化し、付随する菌体内毒素の放出を無効にするのに役立ち、抗細菌活性のイン・ビトロ試験によって認められない、または予測されないさらなる臨床上の利益を提供する。ＢＰＩタンパク質産物の抗クラミジア活性を包含するＢＰＩタンパク質産物の活性を強化する他の産物と共に、ＢＰＩタンパク質産物を投与することも企図される。例えば、血清補体は、ＢＰＩタンバク質産物の殺グラム陰性細菌活性を強化し、ＢＰＩタンパク質産物と血清補体との組合せによって、相乗的な殺細菌／生長阻害効果が提供される。例えば、Ooiら、J.Biol.Chem.、265巻、15956頁(19 90)、及びＢＰＩ殺細菌活性を強化する、天然に存在する15kDタンパク質について述べられている、Levyら、J.Biol.Chem.、268巻、6038〜6083頁(1993)を参照されたい。また、1993年7月14日出願の米国特許出願第08/093,201号の一部継続出願である、1994年7月11日出願の米国特許出願第08/274,303号に対応する、1994年7 月13日出願の共有で係属中であるＰＣＴ出願第US94/07834号も参照されたい。これらの出願は、すべて引用することによりその開示が本明細書に含まれるものであり、リポ多糖結合タンパク質（ＬＢＰ）及びＬＢＰタンパク質産物を投与することによってＢＰＩタンパク質産物の殺グラム陰性細菌活性を強化する方法が記載されているものである。ＣＤ−14免疫促進特性を欠くＬＢＰタンパク質誘導体及び誘導体ハイブリッドが、1993年6月17日出願の米国特許出願第08/079,510号の一部継続出願である、1994年6月17日出願の、共有で係属中である米国特許出願第08/261,660号に対応する、1994年6月17日出願のＰＣＴ出願第US94/06931号に記載されており、これらの出願は、すべて引用することによってその開示が本明細書に含まれるものである。1995年1月13日出願の米国特許出願第08/372,104 号の一部継続出願である、1995年9月19日出願の米国特許出願第08/530,599号の一部継続出願である、1996年1月12日出願のLambertの米国出願第08/586,133号（これらすべてが、ＰＣＴ出願第PCT/US96/01095号に対応する）に記載されているように、ポロキサマー界面活性剤がＢＰＩタンパク質産物の抗細菌活性を増強させることも観察されており、ポロキサマー界面活性剤は、抗クラミジア剤の活性をも増強するかもしれない。加えて、本発明は、クラミジアをＢＰＩタンパク質産物に接触させることを含む、クラミジアの殺傷または生長阻害の方法を提供する。この方法は、イン・ビボまたは、流体及び表面の汚染を除くため、または人工気管及び子宮内用器具を包め、外科用及び他の医療用装置そして植込可能な器具を滅菌するための用途などの、様々なイン・ビトロでの用途において実施することができる。これらの方法は、感染巣となることが多い、静脈内ライン及びカテーテルなどの留置侵入性（観血的）器具のイン・サイチュ（設置場所で）の滅菌のためにも使用することができる。本発明のさらなる特徴には、クラミジア感染症の処置用の医薬の製造のための、ＢＰＩタンパク質産物の使用が包含される。医薬には、ＢＰＩタンパク質産物に加えて、抗クラミジア剤などの他の化学療法剤が含まれていてもよい。医薬は任意に、製薬上容認されうる賦形剤、佐剤または担体を含むことができる。本明細書において用いられる「ＢＰＩタンパク質産物」なる語には、天然に、及び組換えにより製造されるＢＰＩタンパク質；天然、合成、及び組換えの、ＢＰＩタンパク質の生物学的活性を有するポリペプチド断片；ハイブリッド融合タンパク質及びダイマーを含む、ＢＰＩタンパク質の生物学的活性を有するポリペプチド変異体またはその断片；システインで置換された類似体を含む、ＢＰＩタンパク質の生物学的活性を有するポリペプチド類似体またはその断片または変異体；ならびにＢＰＩ由来ペプチドが包含される。本発明に従って投与されるＢＰＩタンパク質産物は、当該技術分野において知られているいかなる手段によって生産及び／または単離してもよい。引用することによりその開示が本明細書に含まれるものである、米国特許第5,198,541号に、ｒＢＰＩと称される組換えＢＰＩホロタンパク質及びＢＰＩの組換え断片を含むＢＰＩタンパク質をコードする組換え遺伝子、及びその発現のための方法が開示されている。共有であり係属中の米国特許出願第07/885,501号及びその一部継続出願である1993年5月19日出願の米国特許出願第08/ 072,063号及び1993年5月19日出願の対応国際出願第93/04752号（すべて引用することによりその開示が本明細書に含まれるものである）は、培養において遺伝的に形質転換した哺乳動物宿主細胞で発現され、そして当該細胞から分泌される組換えＢＰＩタンパク質産物の新規精製方法を開示しており、また、安定で均質な医薬製剤に配合するのに好適な、大量の組換えＢＰＩ産物をどのように製造するかを開示している。ＢＰＩの生物学的活性を有する断片（ＢＰＩ断片）には、その断片分子が、ホロタンパク質のアミノ末端アミノ酸、内部アミノ酸、及び／またはカルボキシ末端アミノ酸を欠くことを除いては、天然のヒトＢＰＩホロタンパク質と同じまたは類似のアミノ酸配列を有する、生物学的活性を有する分子が包含される。このような断片の例に、Ooiら、J.Exp.Med.、174巻、649頁(1991)に記載されるおよそ25kDの天然ヒトＢＰＩのＮ-末端断片、及びGazzano-Santoroら、Infect.Immun ．60巻、4754〜4761頁(1992)に記載され、ｒＢＰＩ₂₃と称されている天然ヒトＢＰＩの第１位よりおよそ第193または199位までのＮ-末端アミノ酸をコードするＤＮＡの組換え発現産物が包含されるが、これらに限定されるものではない。係る出版物において、Grayら、前出の図１に示されるごとき、31残基のシグナル配列及び成熟ヒトＢＰＩのＮ-末端の最初の199アミノ酸を有する組換え発現産物（ｒＢＰＩ₂₃）をコードするＤＮＡ（第151位のバリンがＧＴＣでなくＧＴＧで特定され、第１８５位の残基がリジン（ＡＡＧで特定される）でなくグルタミン酸（ＧＡＧで特定される）であるという例外を含む）の供給源として、発現ベクターが用いられた。Grayら、前出の図１に示される配列（配列番号：１４５及び１４６）（ｒＢＰＩ₂₃について注解した例外、及び第４１７位の残基がバリン（ＧＴＴで特定される）でなくアラニン（ＧＣＴで特定される）であるという例外を含む）を有する組換えホロタンパク質（ｒＢＰＩ）も製造されている。他の例には、共有であり係属中の1994年3月11日出願の米国特許出願第08/212,132号及び対応国際出願第PCT/US95/03125号（引用することによりその開示が本明細書に含まれるものである）に記載されるごとき、ＢＰＩ断片の二量体型が包含される。好ましい二量体産物には、その単量体がＢＰＩホロタンパク質の約1〜175位から、約1〜199位までのＮ−末端残基を有するアミノ末端ＢＰＩ断片である、二量体ＢＰＩタンパク質産物が包含される。特に好ましい二量体産物は、ｒＢＰＩ₄₂二量体と命名された、第1位から193位までのＮ−末端残基を有する、ＢＰＩ断片の二量体型である。ＢＰＩの生物学的活性を有する変異体（ＢＰＩ変異体）には、ＢＰＩホロタンパク質またはその生物学的活性を有する断片、及び他のポリペプチドの少なくとも一部を含む組換えハイブリッド融合タンパク質、ならびにＢＰＩ変異体の二量体型が包含されるが、これらに限定されない。このようなハイブリッド融合タンパク質及び二量体型の例は、共有であり係属中の米国特許出願第07/885,911号（ Theofanらによる）及びその一部継続出願である1993年5月19日出願の米国特許出願第08/064,693号と1993年5月19日出願の対応国際出願第US93/04754号（引用することによりそれらのすべてが本明細書に含まれるものである）に記載されており、アミノ末端端部でＢＰＩタンパク質またはその生物学的活性を有する断片、及びカルボキシ末端端部で少なくとも１つの免疫グロブリン重鎖の定常ドメインまたはその対立変異体を含む、ハイブリッド融合タンパク質が包含される。ＢＰＩの生物学的活性を有する類似体（ＢＰＩ類似体）には、１以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸に置換されているＢＰＩタンパク質産物が包含されるが、これらに限定されない。例えば、共有で係属中の1993年2月2日に出願された米国特許出願第08/013,801号及び1994年2月2日に出願された対応国際出願第US94/01235号（引用することによりその開示が本明細書に含まれるものである）に、システイン残基が異なるアミノ酸で置換されたＢＰＩ及びＢＰＩ断片のポリペプチド類似体が開示されている。この出願に記載された安定なＢＰＩタンパク質産物は、ＢＰＩホロタンパク質のＮ-末端アミノ酸の第１位からおよそ第193または199位までのアミノ酸をコードするＤＮＡの発現産物（但し、第132番目のシステイン残基がアラニンで置換されており、ｒＢＰＩ₂₁ΔｃｙｓまたはｒＢＰＩ₂₁と名付けられている）である。他の例としては、ＢＰＩ類似体の二量体型、例えば、1994年3月11日に出願された、共有であり係属中の米国特許出願第08/212,132号及び対応国際出願第US95/03125号（引用することによりその開示が本明細書に含まれるものである）が挙げられる。本発明の方法に有用な他のＢＰＩタンパク質産物は、1995年7月20日出願の、共有且つ係属中の1994年9月15日出願の米国特許出願第08/306,473号に対応する、1994年9月15日に出願された共有で係属中の国際出願第US94/10427号、及び199 4年3月11日に出願された米国特許出願第08/209,762号に対応する、1994年3月11 日出願の国際出願第US94/02465号、これは1994年1月14日出願の米国特許出願第0 8/183,222号の一部継続出願であり、さらにこれは1993年7月15日出願の米国特許出願第08/093,202号の一部継続出願であって、これに対応するのが、1994年3月1 1日に出願された国際出願第US94/02401号で、これは1993年3月12日出願の米国特許出願第08/030,644号の一部継続出願である（これらはすべて、引用することによりその開示が本明細書に含まれるものである）に記載されたものなどの、組換えもしくは合成手段によって生産されたＢＰＩに由来するか、または係るＢＰＩに基づくペプチド（ＢＰＩ由来ペプチド）である。現在のところ好ましいＢＰＩタンパク質産物には、組換えによって製造されるＢＰＩのＮ-末端断片、特にｒＢＰＩ₂₁もしくはｒＢＰＩ₂₃などの、およそ２１から２５kDの間の分子量を有するもの、または、これらＮ-末端断片の二量体型（例えば、ｒＢＰＩ₄₂二量体）が包含される。加うるに、好ましいＢＰＩタンパク質産物には、ｒＢＰＩ及びＢＰＩ由来ペプチドが包含される。ＢＰＩタンパク質産物の投与は、好ましくは、ＢＰＩタンパク質産物と、製薬上容認されうる賦形剤、佐剤、または担体とを含む医薬組成物を用いて成し逐げられる。ＢＰＩタンパク質産物は、既知の界面活性剤、他の化学療法剤もしくはさらなる既知の抗クラミジア剤と組み合わせて、またはそれらと組み合わせることなく投与されるとよい。ＢＰＩタンパク質産物（例えば、ｒＢＰＩ、ｒＢＰＩ₂₃ ）を含有する安定な医薬組成物は、0.1重量％のポロキサマー188（Pluronic F -68、BASF Wyandotte、Parsippany、ニュージャージー州）及び0.002重量％ポリソルベート80（Tween 80、ICI Americans Inc.、Wilmington、デラウェア州）を含むクエン酸緩衝性生理食塩水（5または20mMクエン酸塩、150mM NaCl、pH5.0）中に、1mg/mlの濃度でＢＰＩタンパク質産物を含むものである。ＢＰＩタンパク質産物（例えばｒＢＰＩ₂₁）を含有する他の安定な医薬組成物は、5mMクエン酸塩、150mM NaCl、0.2％ポロキサマー188及び0.002％ポリソルベート80中に2mg/m lの濃度でＢＰＩタンパク質産物を含むものである。このような好ましい組合せが、1994年2月2日出願の米国特許出願第08/190,869号及び1993年2月2日出願の米国特許出願第08/012,360号に対応する、共有で係属中の、1994年2月2日出願の国際出願第US94/01239号に記載されており、これらはすべて引用することによりその開示が本明細書に含まれるものである。本発明の他の特徴及び利点は、以下の実施例を考慮することで明らかになるであろう。実施例１には、クラミジアでの誘発と同時にＢＰＩタンパク質産物を投与した場合における、クラミジアによる宿主細胞の感染を阻害するためのＢＰＩタンパク質産物の使用を示す。実施例２には、クラミジアで感染した宿主細胞での、ＢＰＩタンパク質産物の抗クラミジア活性を示す。実施例１クラミジアによる宿主細胞の感染を阻害するためのＢＰＩタンパク質産物の使用Ａ．クラミジア・ストックの調製トラコーマクラミジア（ｃｔ）血清型Ｌ２ストックを、以下の通りに調製した。マッコイ細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ1696）を、1％ピルビン酸ナトリウム（Ｓ−8636、シグマ（Sigma）社）及び10％胎児ウシ血清（ＦＢＳ、Ａ115−Ｌ、ハイクローン（Hyclone）社、Logan、バーモント州）を含む生育培地［イーグル培地栄養混液（Eagles Medium Nutrient Mixture；ＭＥＭ）、Ｍ−3786、シグマ社、St．Louis、ミズーリ州］にて終夜培養した。培地を吸引して、Ｃｔのバイアルを速やかに解凍し、そしてダルベッコ・リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）シグマ社）及び7％シュクロース（ＤＰＢＳ−7）30mLと混合した。懸濁液10mLをそれぞれ、３Ｔ150フラスコに添加し、このフラスコを37℃にて２時間、播種物が分布するように断続的に振盪しながらインキュベートした。ＤＰＢＳ−7をフラスコから吸引し、各フラスコに50mLの生育培地を添加した。5％ＣＯ₂中で37℃ にて３日間インキュベートした後、以下のごとくにＣｔを回収した。生育培地をフラスコから吸引し、そしてほぼ0.25インチの深さまでフラスコにガラスビーズを加えた。10mLのイーグルＭＥＭ（ＦＢＳ不含）を各フラスコに添加し、そしてすべての細胞が剥がれるまで、単層上にビーズを振盪させた。ビーズ及び細胞デブリスを、50mLのネジ蓋付き遠心チューブの中に集め、フラスコをＰＢＳで２回洗浄し、そして洗液はビーズの懸濁液に加えた。各チューブを氷上に載置し、そして細胞を破壊するために６０秒間超音波処理した。破壊された細胞／ビーズ懸濁液は、低速（〜800rpm）で遠心分離した。上清を取り出して250mLのポリカーボネート製遠心ボトルに集め、次に高速（〜25,000xg）にて１時間遠心分離した。ペレットを、＃16ゲージの針及びシリンジに繰り返し通過させることにより、ＦＢＳ（40mL）中に再懸濁した。1mLのアリコートをＮＵＮＣ（商標名）（Naper ville、イリノイ州）凍結用バイアルに分配し、−70℃にて凍結した。Ｂ．クラミジア・ストックの滴定段落Ａで前記したと同様に調製したＣｔストックのバイアル３本を、37℃にて速やかに解凍し、血清を含まないイーグルＭＥＭまたはＤＰＢＳ−７で連続的に１０倍濃度に希釈した。２４時間のマッコイ細胞単層を各ウェルに含む、カバースリップ付きの２４ウェルのプレートを準備した。培地を吸引し、ウェルをＰＢＳで１回洗浄して、イーグルＭＥＭまたはＤＰＢＳ−７のいずれかを用いた各Ｃｔ希釈液の1mLを、マッコイ細胞の四重のセットに加えた。プレートを、5％ＣＯ₂ 中で３７℃にて２時間インキュベートし、培地を吸引し、そして2mLの生育培地を添加した。次いで、プレートを5％ＣＯ₂中で27℃にて３日間再度インキュベートし、メタノール中で固定し、そしてＦＩＴＣでラベルしたマウスモノクローナル抗クラミジア抗体（Syva MicroTrak（商標名）、トラコーマクラミジア培養確認試験）を用い、湿潤チャンバーの中で３０分間染色した。染色したカバースリップは、水洗し、風乾して封入液（50％グリセロール；50％ＰＢＳ）１滴へと反転し、そしてLeitz蛍光顕微鏡を用いて２５倍の対物レンズで鏡検した（励起波長480nm、放射波長520nm）。封入体を計数したところ、イーグルＭＥＭ及びＤＰＢＳ−７中で調べた10^-2〜10^-10の濃度にわたって、同等の結果が得られた。ストック調製液の10^-5の濃度の希釈液によって１００〜３００の封入体形成単位 /mLが得られ、Ｃｔストックを用いる以降の全実験において使用するために、この希釈液を選択した。Basal Medium Eagle（ＢＭＥ、シグマ社）、イーグルＭＥＭ（Ｅ−ＭＥＭ、シグマ社）、ＨＥＰＥＳ添加ＲＰＭＩ−1640（シグマ社）、ＨＥＰＥＳ無添加ＲＰＭＩ−1640（シグマ社）、Ｆ−12（ギブコ（Gibco）社）及びダルベッコ変法イーグル培地栄養混液Ｆ−12Ham（ＤＭＥＭ／Ｆ−12、ギブコ社）を用いて、さらなる培地の試験を実施した。ＦＢＳを含まないＤＭＥＭ／Ｆ −12を、次なるクラミジア感染性試験での使用のために選択した。ＦＢＳを含まない培地を選択したのは、前記被験培地に10％のＦＢＳを添加すると、Ｃｔによるマッコイ細胞の感染が阻害されたためである。Ｃ．ＢＰＩタンパク質産物の存在下または非存在下でのクラミジアによる感染試験に供したＢＰＩタンパク質産物は、ｒＢＰＩ₂₁［0.2％PLURONIC（商標名）P123、BASF Wyandotte、Parsippany、ニュージャージー州）0.002％ポリソルベート80（TWEEN（商標名）80、ICI American s Inc.、Wilmington、デラウェア州）及び0.05％ＥＤＴＡを含む5mMクエン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH5.0の、2mg/mL溶液］であった。等容量の製剤用緩衝液［0.2％PLURONIC（商標名）P123、0.002％ポリソルベート80及び0.05 ％ＥＤＴＡを含む5mMクエン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH5.0］のみを、対照として用いた。ｒＢＰＩ₂₁の連続希釈液または製剤用緩衝液を、その連続希釈液がＣｔストックの10^-4希釈液1mLと９：１の割合で添加された場合に、Ｃｔの最終濃度がＣｔストックの10^-5希釈となり、そしてｒＢＰＩ₂₁の最終濃度が128、64、32、16及び8μｇ/mLとなるように、ＤＭＥＭ／Ｆ−12（ＦＢＳ不含）を用いて調製した。最終的に得られた懸濁液を、水浴中で37℃にて３０分間インキュベートした。ＤＭＥＭ／Ｆ−12／10％ＦＢＳ中のマッコイ細胞を２４ウェルの組織培養プレート（コーニング（Corning）社、＃25820）へ、2x10⁵細胞数／ウェルで播種し、２４時間インキュベートして培地を吸引した。ＢＰＩ添加または無添加のＣｔを、各ｒＢＰＩ₂₁濃度で、二重試験としたウェルに、１ｍＬにて添加した。プレートを2500rpmで３０分間遠心沈殿し、５％ＣＯ₂中で37℃にて２時間インキュベートし、次いで培地を吸引した。各ウェルに2mLのＤＭＥＭ／Ｆ−12／10％ＦＢＳ及び１μｇ/mLのシクロヘキシミド（シグマ社）を入れ、そしてプレートを再度、３日間インキュベートした。培地を除いた後、ウェルをリン酸緩衝性生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、風乾し、メタノールで固定してグラムヨウ素で染色した。あるいは、細胞を前記段落Ｂに記載したと同様に、ＦＩＴＣでラベルした抗クラミジア抗体で染色してもよい。倒立顕微鏡を用いて、封入体の存在について各ウェルの100％を走査した。当該封入体は、生殖体によって製造される空胞中の高濃度グリコーゲンに起因してグラムヨウ素で褐色に染色されるのである。結果を、以下の表１に示す。三つの試験のうちの一つから得られたこれらの代表的な結果は、ｒＢＰＩ₂₁が許容細胞の感染を阻害することができることを示唆するものである。実施例２クラミジアで感染した宿主細胞に対するＢＰＩタンパク質産物の抗クラミジア活性実施例１に記載した通りに調製したトラコーマクラミジア（Ｃｔ）血清型Ｌ２ストックを、１０％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ変法イーグル培地栄養混液Ｆ−12Ham（ＤＭＥＭ／Ｆ−12）を用いて10^-5にまで希釈した。ＤＭＥＭ／Ｆ−12／10％ＦＢＳ中のマッコイ細胞を、２４ウェルの組織培養プレート（コーニング社、＃25820）へ、1x10⁵細胞数／ウェルで播種し、２４時間インキュベートして、培地を吸引した。Ｃｔ（10^-5ストック1mL）を、プレート１枚当たり２つの陰性対照を除いて、４枚のプレートの各ウェルに添加した。プレートを2500rpmで３０分間遠心沈殿し、5％ＣＯ₂中で37℃にて２４時間インキュベートし、次いで培地を吸引した。実施例１に記載したと同様のｒＢＰＩ₂₁を、ＤＭＥＭ／Ｆ−１２で128、64、3 2、16及び８μｇ/mLの最終濃度となるように希釈し、そして各プレートで適切な二重試験用のウェルに1.0mLを添加した。実施例１に記載したと同様の比較用製剤緩衝液の対照も調製した。プレートを２時間インキュベートし、すべてのウェルに1mLのＤＭＥＭ／Ｆ−12／20％ＦＢＳ及び２μｇ/mLのシクロヘキシミドを添加して、ｒＢＰＩ₂₁の濃度を２倍だけ減少させた。プレートは再度、５日目までインキュベートした。２４、４８、７２及び１２０時間で、培地を一枚のプレートから除去し、ウェルをＰＢＳで洗浄して風乾し、メタノールで固定してグラムヨウ素で染色した。倒立顕微鏡を用いて、封入体の存在について各ウェルの100％を走査した。結果を、以下の表２に示す。この初期濃度は、インキュベーションの最初の２時間に存在した濃度であり、５日間のインキュベーション後の残余については、この初期濃度の半分にまで減少していた。二つの試験のうちの一つから得られたこれらの代表的な結果は、16μｇ/mLから1 28μｇ/mLの範囲の初期濃度のｒＢＰＩ₂₁が、Ｃｔでの誘発から２４時間後に投与された場合に、Ｃｔで感染した細胞の細胞内封入体の数を減少させることができることを示唆するものである。当業者であれば、如上の本発明の目下好ましい実施態様に関する記載を考慮のうえで、本発明を実施する際に施される多くの修正及び変更を想起するものと考えられる。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲における記載のみによってしか限定を受けるべきではない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．クラミジア感染症を処置する方法であって、クラミジア感染症に見舞われた被験者に、治療上有効量の殺菌性／透過性増強（ＢＰＩ）タンパク質産物を投与する工程を含む方法。２．前記ＢＰＩタンパク質産物が、ＢＰＩのＮ末端断片またはそのダイマーフォームである請求の範囲第１項記載の方法。３．前記Ｎ末端断片が、およそ２１ｋＤから２５ｋＤの範囲の分子量を有する請求の範囲第２項記載の方法。４．前記ＢＰＩタンパク質産物が、ＢＰＩホロタンパク質、ｒＢＰＩ₂₃またはｒＢＰＩ₂₁である請求の範囲第１項記載の方法。５．前記ＢＰＩタンパク質産物が、１日当たり1μｇ/kgから100mg/kgの範囲の投与量にて経口または非経口的に投与される請求の範囲第１項記載の方法。６．前記ＢＰＩタンパク質産物が、１μｇ/mLから１gm/mLの範囲の単位投薬量にて局所投与される請求の範囲第１項記載の方法。７．前記クラミジア感染症が、C．trachomatis、C．pneumoniae、C．psittaci 及びC．pecorum種よりなる群から選択されるクラミジア種に関係する請求の範囲第１項記載の方法。８．前記クラミジア種が、C．trachomatisである請求の範囲第６項記載の方法。９．ＢＰＩ以外の抗クラミジア薬剤を投与するさらなる工程を含む請求の範囲第１項記載の方法。１０．クラミジアを殺傷するかまたは複製を阻害する方法であって、クラミジアを殺菌性／透過性増強（ＢＰＩ）タンパク質に接触させる工程を含む方法。１１．クラミジア種を、ＢＰＩ以外の抗クラミジア薬剤に接触させる工程をさらに含む請求の範囲第１０項記載の方法。