JP2001231402A - 前立腺癌発生モデルラット - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 浸潤癌を含む前立腺癌を発生することがで
き、安定的に継代することができる前立腺癌発生のモデ
ルラットを提供すること。 【解決手段】 ラットのプロバシン遺伝子プロモーター
の下流に、SV40ラージT抗原の遺伝子を結合して得
られるPBSVTトランスジーンをスプラーグ−ドーリ
ー系ラットの受精卵に導入し、導入後の受精卵を仮親に
移植し、該仮親から得られるトランスジェニックラット
を野生型スプラーグ−ドーリー系ラットと交配し、得ら
れるトランスジェニックラットを以後同様に継代し、前
立腺の病理組織の観察することにより、前立腺癌を発生
するトランスジェニックラットを選択し、浸潤癌を含む
前立腺癌を発生することができ、安定的に継代すること
ができる前立腺癌発生のモデルラットを樹立する。
き、安定的に継代することができる前立腺癌発生のモデ
ルラットを提供すること。 【解決手段】 ラットのプロバシン遺伝子プロモーター
の下流に、SV40ラージT抗原の遺伝子を結合して得
られるPBSVTトランスジーンをスプラーグ−ドーリ
ー系ラットの受精卵に導入し、導入後の受精卵を仮親に
移植し、該仮親から得られるトランスジェニックラット
を野生型スプラーグ−ドーリー系ラットと交配し、得ら
れるトランスジェニックラットを以後同様に継代し、前
立腺の病理組織の観察することにより、前立腺癌を発生
するトランスジェニックラットを選択し、浸潤癌を含む
前立腺癌を発生することができ、安定的に継代すること
ができる前立腺癌発生のモデルラットを樹立する。
Description
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、浸潤癌を含む前立
腺癌を発生することができ、安定的に継代することがで
きる前立腺癌発生のモデルラット及びその樹立方法に関
する。より詳しくは、プロバシン遺伝子のプロモーター
の制御下にあるSV(シミアンウイルス、simian viru
s)40ラージT抗原遺伝子が導入された、15週齢ま
でに浸潤癌を含む前立腺癌をほぼ全例に発生することが
でき、安定的に継代することができる前立腺癌発生のモ
デルラット、特にPBSVTトランスジェニックラット
2971系統や、その樹立方法に関する。また本発明
は、かかる前立腺癌発生のモデルラットを用いた前立腺
癌の発生及び/若しくは進行促進物質又は発生及び/若
しくは進行抑制物質のスクリーニング方法等に関する。
腺癌を発生することができ、安定的に継代することがで
きる前立腺癌発生のモデルラット及びその樹立方法に関
する。より詳しくは、プロバシン遺伝子のプロモーター
の制御下にあるSV(シミアンウイルス、simian viru
s)40ラージT抗原遺伝子が導入された、15週齢ま
でに浸潤癌を含む前立腺癌をほぼ全例に発生することが
でき、安定的に継代することができる前立腺癌発生のモ
デルラット、特にPBSVTトランスジェニックラット
2971系統や、その樹立方法に関する。また本発明
は、かかる前立腺癌発生のモデルラットを用いた前立腺
癌の発生及び/若しくは進行促進物質又は発生及び/若
しくは進行抑制物質のスクリーニング方法等に関する。
【0002】
【従来の技術】西欧において前立腺癌は癌死亡の第2番
目の原因となっている。かかる前立腺癌は、日本におい
て現時点では癌死亡の11番目の原因でしかないが、平
均寿命の延長に伴い、急激に増加することが予想されて
いる。前立腺癌の病因は殆ど解明されていないが、初期
段階ではアンドロゲン依存性であり、その後非依存性と
なり、治療薬に対して抵抗性を有するようになる。この
ように多段階を経由する前立腺癌発生のメカニズムを解
明するには、色々な動物の、かつ種々の系統の前立腺癌
モデル動物が必要とされている。
目の原因となっている。かかる前立腺癌は、日本におい
て現時点では癌死亡の11番目の原因でしかないが、平
均寿命の延長に伴い、急激に増加することが予想されて
いる。前立腺癌の病因は殆ど解明されていないが、初期
段階ではアンドロゲン依存性であり、その後非依存性と
なり、治療薬に対して抵抗性を有するようになる。この
ように多段階を経由する前立腺癌発生のメカニズムを解
明するには、色々な動物の、かつ種々の系統の前立腺癌
モデル動物が必要とされている。
【0003】前立腺癌のいくつかの動物モデルがこれま
でに作製され、前立腺癌発生のメカニズムやその修飾因
子を解明するために用いられてきた。ACI/Seg系
ラットやローバンド−ウイスター(Lobund-Wistar)系ラ
ットで自然発生的な悪性腫瘍を高い頻度で発生する動物
モデルを作るには約20ケ月という長い潜在期を要する
ことが報告されている。ACI/Seg系ラットの前立
腺側葉癌は最も適度に分化された非転移性の腺癌であり
篩状のパターンをしており、またローバンド−ウイスタ
ー系ラットの前立腺癌は、分化の少ない腺癌で時々転移
性を示すことが知られている。
でに作製され、前立腺癌発生のメカニズムやその修飾因
子を解明するために用いられてきた。ACI/Seg系
ラットやローバンド−ウイスター(Lobund-Wistar)系ラ
ットで自然発生的な悪性腫瘍を高い頻度で発生する動物
モデルを作るには約20ケ月という長い潜在期を要する
ことが報告されている。ACI/Seg系ラットの前立
腺側葉癌は最も適度に分化された非転移性の腺癌であり
篩状のパターンをしており、またローバンド−ウイスタ
ー系ラットの前立腺癌は、分化の少ない腺癌で時々転移
性を示すことが知られている。
【0004】これまでに本発明者らは、発癌物質とし
て、N−メチル−N−ニトロソウレア(MNU)、N−ニ
トロソビス(2−オキソプロピル)アミン(BOP)、
3,2′−ジメチル−4−アミノビフェニル(DMA
B)及び2−アミノ−1−メチル−6−フェニルイミダ
ゾ[4,5−b]ピリヂン(PhIP)を用いて、ラット
前立腺癌モデルを確立した。発癌性物質の投与と細胞増
殖を組み合わせることによって、前立腺癌を高い頻度で
発生するラットの作製に成功した(Jpn. J. CancerRes.,
76:803-808,1985)。その前立腺癌の病巣は腹葉(ventral
lobe)に発生し、大部分が浸潤性のない篩状パターンを
示した。その大きさは、一般に小さく転移も無かった。
DMABで誘発する前立腺癌の場合には、動物種による
特異性があった。すなわち、F344及びACI系ラッ
トは最も感受性が高く、ウイスター(Wistar)系やスプラ
ーグ−ダウレイ(Sprague-Dawley)系は抵抗性を有してい
た。しかし、組織病理学的なパターンには明らかな種特
異性はなかった。
て、N−メチル−N−ニトロソウレア(MNU)、N−ニ
トロソビス(2−オキソプロピル)アミン(BOP)、
3,2′−ジメチル−4−アミノビフェニル(DMA
B)及び2−アミノ−1−メチル−6−フェニルイミダ
ゾ[4,5−b]ピリヂン(PhIP)を用いて、ラット
前立腺癌モデルを確立した。発癌性物質の投与と細胞増
殖を組み合わせることによって、前立腺癌を高い頻度で
発生するラットの作製に成功した(Jpn. J. CancerRes.,
76:803-808,1985)。その前立腺癌の病巣は腹葉(ventral
lobe)に発生し、大部分が浸潤性のない篩状パターンを
示した。その大きさは、一般に小さく転移も無かった。
DMABで誘発する前立腺癌の場合には、動物種による
特異性があった。すなわち、F344及びACI系ラッ
トは最も感受性が高く、ウイスター(Wistar)系やスプラ
ーグ−ダウレイ(Sprague-Dawley)系は抵抗性を有してい
た。しかし、組織病理学的なパターンには明らかな種特
異性はなかった。
【0005】MNU及びBOPと同様に、DMABによ
る前立腺癌発生は、テストステロンプロピオネート(T
P)を高用量で長時間投与して修飾することができる。
本発明者らは、TPをシリコンチューブに入れて皮下に
埋め込み、血清中のテストステロン濃度を10倍に高め
たところ、DMABの投与を受けたラットの生殖器にお
ける癌スペクトルが、腹葉から背側葉及び前葉ならびに
精巣に移行することを見い出している(Cancer Res.,51:
1264-1269,1991)。腹葉の前立腺癌に比べて、後者の部
位に発生した前立腺癌は浸潤的に成長する腺癌であり、
転移病巣は、腹腔、肝臓、肺などに見られた。腹葉から
背側葉及び前葉ならびに精巣への移行やその浸潤性の程
度はTPの投与量と投与期間によって変わることも知ら
れている(Cancer Lett.,83:11-116,1994, Jpn. J. Canc
er Res.,86:645-648(1995))。
る前立腺癌発生は、テストステロンプロピオネート(T
P)を高用量で長時間投与して修飾することができる。
本発明者らは、TPをシリコンチューブに入れて皮下に
埋め込み、血清中のテストステロン濃度を10倍に高め
たところ、DMABの投与を受けたラットの生殖器にお
ける癌スペクトルが、腹葉から背側葉及び前葉ならびに
精巣に移行することを見い出している(Cancer Res.,51:
1264-1269,1991)。腹葉の前立腺癌に比べて、後者の部
位に発生した前立腺癌は浸潤的に成長する腺癌であり、
転移病巣は、腹腔、肝臓、肺などに見られた。腹葉から
背側葉及び前葉ならびに精巣への移行やその浸潤性の程
度はTPの投与量と投与期間によって変わることも知ら
れている(Cancer Lett.,83:11-116,1994, Jpn. J. Canc
er Res.,86:645-648(1995))。
【0006】発癌性物質の投与により誘発された癌を分
子的に分析した結果、DMABによる前立腺及び精巣に
おける癌発生には、Ki-ras遺伝子が関与していると考え
られている。腹葉の腺癌9例中3例、側背葉の腺癌13
例中の5例、精巣の腺癌11例中の1例に、Ki-ras遺伝
子の点突然変異(ポイントミューテーション)が見ら
れ、Ha-ras遺伝子やp53遺伝子には変異はなかった(M
ol. Carcinog.,13:21-26,1995)。浸潤性と非浸潤性とを
問わず、ras遺伝子の突然変異に変わりは無く、実験的
なラットの前立腺癌においては、点突然変異によるras
プロト腫瘍遺伝子(protooncogene)の活性化は癌の進行
と結びついておらず、またp53遺伝子の非活性化も進
行とは関係がないと考えられている。
子的に分析した結果、DMABによる前立腺及び精巣に
おける癌発生には、Ki-ras遺伝子が関与していると考え
られている。腹葉の腺癌9例中3例、側背葉の腺癌13
例中の5例、精巣の腺癌11例中の1例に、Ki-ras遺伝
子の点突然変異(ポイントミューテーション)が見ら
れ、Ha-ras遺伝子やp53遺伝子には変異はなかった(M
ol. Carcinog.,13:21-26,1995)。浸潤性と非浸潤性とを
問わず、ras遺伝子の突然変異に変わりは無く、実験的
なラットの前立腺癌においては、点突然変異によるras
プロト腫瘍遺伝子(protooncogene)の活性化は癌の進行
と結びついておらず、またp53遺伝子の非活性化も進
行とは関係がないと考えられている。
【0007】全ての領域及び腹葉癌における異型過形成
は、免疫組織化学的にみてアンドロゲン受容体−陽性で
あるが、背側葉及び前葉の浸潤性癌はそうではなく、D
MABとTPで誘発した浸潤性の背側葉前立腺癌から確
立した3つのセルラインの生体中における生育はアンド
ロゲン非依存性であることが報告されている(Jpn. J.Ca
ncer Res.,87:1218-1226,1996, J. Toxicol. Pathol.,1
1:27-32,1998) 。DMAB単独又はDMABとTPによ
って処理した後睾丸を摘出すればアンドロゲン受容体−
陽性の腹葉癌の進行は完全に止まるが、背側葉及び前葉
前立腺や精巣に出来たアンドロゲン受容体−陰性の浸潤
性癌の進行は止まらなかった(Jpn. J.Cancer Res.,90:2
3-30,1999)。腺癌のセルラインを用いたアンドロゲン受
容体−遺伝子の最近の研究結果は、受容体のプロモータ
ー領域における過メチル化(hypermethylation)を示して
おり、これが、浸潤性癌がアンドロゲン非依存性である
理由であると考えられる。
は、免疫組織化学的にみてアンドロゲン受容体−陽性で
あるが、背側葉及び前葉の浸潤性癌はそうではなく、D
MABとTPで誘発した浸潤性の背側葉前立腺癌から確
立した3つのセルラインの生体中における生育はアンド
ロゲン非依存性であることが報告されている(Jpn. J.Ca
ncer Res.,87:1218-1226,1996, J. Toxicol. Pathol.,1
1:27-32,1998) 。DMAB単独又はDMABとTPによ
って処理した後睾丸を摘出すればアンドロゲン受容体−
陽性の腹葉癌の進行は完全に止まるが、背側葉及び前葉
前立腺や精巣に出来たアンドロゲン受容体−陰性の浸潤
性癌の進行は止まらなかった(Jpn. J.Cancer Res.,90:2
3-30,1999)。腺癌のセルラインを用いたアンドロゲン受
容体−遺伝子の最近の研究結果は、受容体のプロモータ
ー領域における過メチル化(hypermethylation)を示して
おり、これが、浸潤性癌がアンドロゲン非依存性である
理由であると考えられる。
【0008】以上のような発癌性物質投与による前立腺
癌の誘発においては、種々の前立腺癌を発生させること
ができるものの、癌の発生には1年以上の長期間の動物
の飼育を必要とすることから、最近は、癌発生性の遺伝
子を組み込んだ動物モデルが盛んに作られるようになっ
てきている。前立腺癌のトランスジェニック動物もこれ
までにいくつか報告されている。1995年にグリーン
ベルグ(Greenberg)が作製した、プロバシン(Probasin)
の0.5kbのプロモーターとSV40ラージT抗原遺
伝子を組み込んだマウスは、前立腺に癌を発生しその癌
は転移性であった。1996年にバリオス(Barrios)が
作製した、プロバシン(Probasin)の0.5kbのプロモ
ーターとrasT24遺伝子を組み込んだマウスの前立腺
には過形成が見られたが癌は発生しなかった。1997
年にヤン(Yan)が作製した、プロバシン(Probasin)の1
1.5kbのプロモーターとSV40ラージT抗原遺伝
子を組み込んだマウスは、前立腺癌を発生した。199
4年にマロウラクー(Maroulakoou)が作製した、C3
(1)プロモターとSV40ラージT抗原の遺伝子を組
み込んだマウスは、前立腺癌を発生した。1996年に
テーラニアン(Tehranian)が作製したC3(1)プロモ
ターとポリオーマミドルT(Polyoma middle T)の遺伝子
を組み込んだマウスは、前立腺癌を発生した。1997
年にツァン(Zhang)がC3(1)プロモターとヒトbc
l−2(human bcl-2)の遺伝子を組み込んだマウスは、
前立腺に過形成が発生したが癌には至らなかった。19
96年にペレ−スターブル(Perez-Stable)が作製した、
胎盤Gγ−グロビン(fetal Gγ-globin)のプロモーター
とSV40ラージT抗原遺伝子を組み込んだマウスは、
前立腺癌を発生した。1996年にキッツベルグ(Kitsb
erg)が作製した、MMTVのプロモーターとKGF遺伝
子を組み込んだものは前立腺に過形成を発生したが癌は
発生しなかった。
癌の誘発においては、種々の前立腺癌を発生させること
ができるものの、癌の発生には1年以上の長期間の動物
の飼育を必要とすることから、最近は、癌発生性の遺伝
子を組み込んだ動物モデルが盛んに作られるようになっ
てきている。前立腺癌のトランスジェニック動物もこれ
までにいくつか報告されている。1995年にグリーン
ベルグ(Greenberg)が作製した、プロバシン(Probasin)
の0.5kbのプロモーターとSV40ラージT抗原遺
伝子を組み込んだマウスは、前立腺に癌を発生しその癌
は転移性であった。1996年にバリオス(Barrios)が
作製した、プロバシン(Probasin)の0.5kbのプロモ
ーターとrasT24遺伝子を組み込んだマウスの前立腺
には過形成が見られたが癌は発生しなかった。1997
年にヤン(Yan)が作製した、プロバシン(Probasin)の1
1.5kbのプロモーターとSV40ラージT抗原遺伝
子を組み込んだマウスは、前立腺癌を発生した。199
4年にマロウラクー(Maroulakoou)が作製した、C3
(1)プロモターとSV40ラージT抗原の遺伝子を組
み込んだマウスは、前立腺癌を発生した。1996年に
テーラニアン(Tehranian)が作製したC3(1)プロモ
ターとポリオーマミドルT(Polyoma middle T)の遺伝子
を組み込んだマウスは、前立腺癌を発生した。1997
年にツァン(Zhang)がC3(1)プロモターとヒトbc
l−2(human bcl-2)の遺伝子を組み込んだマウスは、
前立腺に過形成が発生したが癌には至らなかった。19
96年にペレ−スターブル(Perez-Stable)が作製した、
胎盤Gγ−グロビン(fetal Gγ-globin)のプロモーター
とSV40ラージT抗原遺伝子を組み込んだマウスは、
前立腺癌を発生した。1996年にキッツベルグ(Kitsb
erg)が作製した、MMTVのプロモーターとKGF遺伝
子を組み込んだものは前立腺に過形成を発生したが癌は
発生しなかった。
【0009】
【発明が解決しようとする課題】癌の発生メカニズムを
解明したり、その治療薬を開発するに当たって、癌発生
の動物モデルは無くてはならないものであり、これまで
に色々な癌についてのモデル動物が作製されてきている
が、癌を誘発する物質、方法、動物種によって試験でき
る内容は異なるため、できるだけ多くの種類の動物モデ
ルを確立することが望まれている。またラットは、マウ
スと同様に妊娠期間、性成熟期間が短く、産仔数も10
匹前後と多く、体重もマウスの10倍程度あるため、解
析するのに十分な材料が得られる点で優れており、ま
た、多くの化学発癌に関するデーターが蓄積しているな
ど有用な点が多い。しかし、現在まで、前立腺癌を確実
に発生することができ、安定的に継代することができる
前立腺癌発生のモデルラットは確立されていなかった。
本発明の課題は、浸潤癌を含む前立腺癌を発生すること
ができ、安定的に継代することができる前立腺癌発生の
モデルラットを提供することにある。
解明したり、その治療薬を開発するに当たって、癌発生
の動物モデルは無くてはならないものであり、これまで
に色々な癌についてのモデル動物が作製されてきている
が、癌を誘発する物質、方法、動物種によって試験でき
る内容は異なるため、できるだけ多くの種類の動物モデ
ルを確立することが望まれている。またラットは、マウ
スと同様に妊娠期間、性成熟期間が短く、産仔数も10
匹前後と多く、体重もマウスの10倍程度あるため、解
析するのに十分な材料が得られる点で優れており、ま
た、多くの化学発癌に関するデーターが蓄積しているな
ど有用な点が多い。しかし、現在まで、前立腺癌を確実
に発生することができ、安定的に継代することができる
前立腺癌発生のモデルラットは確立されていなかった。
本発明の課題は、浸潤癌を含む前立腺癌を発生すること
ができ、安定的に継代することができる前立腺癌発生の
モデルラットを提供することにある。
【0010】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために鋭意研究し、プロバシン遺伝子のプロモ
ーターの制御下にあるSV40ラージT抗原の遺伝子を
ラットに導入することによって得られるトランスジェニ
ックラットを継代し、前立腺の病理組織の観察を行い、
前立腺癌を全例に発生するトランスジェニックラット系
統を選択することにより、前立腺癌を確実に発生するこ
とができ、かつ安定的に継代することができる前立腺癌
発生のモデルラットを樹立できることを見い出し、本発
明を完成するに至った。
解決するために鋭意研究し、プロバシン遺伝子のプロモ
ーターの制御下にあるSV40ラージT抗原の遺伝子を
ラットに導入することによって得られるトランスジェニ
ックラットを継代し、前立腺の病理組織の観察を行い、
前立腺癌を全例に発生するトランスジェニックラット系
統を選択することにより、前立腺癌を確実に発生するこ
とができ、かつ安定的に継代することができる前立腺癌
発生のモデルラットを樹立できることを見い出し、本発
明を完成するに至った。
【0011】すなわち本発明は、浸潤癌を含む前立腺癌
を発生することができ、安定的に継代することができる
前立腺癌発生のモデルラット(請求項1)や、プロバシ
ン遺伝子のプロモーターの制御下にあるSV40ラージ
T抗原の遺伝子が導入された請求項1記載の前立腺癌発
生のモデルラット(請求項2)や、EcoRIとNcoIで切り
だしたラットのプロバシン遺伝子プロモーターの5′−
フランキング領域(−426〜+32の458bp)の
下流に、NcoIとBamHIで切りだしたSV40ラージT抗
原の遺伝子(5164〜2676)を結合して得られる
2944bpからなるPBSVTトランスジーンをスプ
ラーグ−ドーリー(Sprague-Dawley)系ラットの受精卵に
導入し、導入後の受精卵を仮親に移植し、該仮親から得
られるトランスジェニック雄ラットを野生型スプラーグ
−ドーリー系雌ラットと交配することにより得られる請
求項1又は2記載の前立腺癌発生のモデルラット(請求
項3)や、前立腺癌発生のモデルラットが、PBSVT
トランスジェニックラット2971系統である請求項1
〜3のいずれか記載の前立腺癌発生のモデルラット(請
求項4)に関する。
を発生することができ、安定的に継代することができる
前立腺癌発生のモデルラット(請求項1)や、プロバシ
ン遺伝子のプロモーターの制御下にあるSV40ラージ
T抗原の遺伝子が導入された請求項1記載の前立腺癌発
生のモデルラット(請求項2)や、EcoRIとNcoIで切り
だしたラットのプロバシン遺伝子プロモーターの5′−
フランキング領域(−426〜+32の458bp)の
下流に、NcoIとBamHIで切りだしたSV40ラージT抗
原の遺伝子(5164〜2676)を結合して得られる
2944bpからなるPBSVTトランスジーンをスプ
ラーグ−ドーリー(Sprague-Dawley)系ラットの受精卵に
導入し、導入後の受精卵を仮親に移植し、該仮親から得
られるトランスジェニック雄ラットを野生型スプラーグ
−ドーリー系雌ラットと交配することにより得られる請
求項1又は2記載の前立腺癌発生のモデルラット(請求
項3)や、前立腺癌発生のモデルラットが、PBSVT
トランスジェニックラット2971系統である請求項1
〜3のいずれか記載の前立腺癌発生のモデルラット(請
求項4)に関する。
【0012】また本発明は、EcoRIとNcoIで切りだした
ラットのプロバシン遺伝子プロモーターの5′−フラン
キング領域(−426〜+32の458bp)の下流
に、NcoIとBamHIで切りだしたSV40ラージT抗原の
遺伝子(5164〜2676)を結合して得られる29
44bpからなるPBSVTトランスジーンをスプラー
グ−ドーリー(Sprague-Dawley)系ラットの受精卵に導入
し、導入後の受精卵を仮親に移植し、該仮親から得られ
るトランスジェニックラットを野生型スプラーグ−ドー
リー系ラットと交配し、得られるトランスジェニックラ
ットを以後同様に継代し、前立腺の病理組織の観察する
ことにより、前立腺癌を発生するトランスジェニックラ
ットを選択することを特徴とする、浸潤癌を含む前立腺
癌を発生することができ、安定的に継代することができ
る前立腺癌発生のモデルラットの樹立方法(請求項5)
や、浸潤癌を含む前立腺癌を発生することができ、安定
的に継代することができる前立腺癌発生のモデルラット
が、PBSVTトランスジェニックラット2971系統
であることを特徴とする、請求項5記載の浸潤癌を含む
前立腺癌を発生することができ、安定的に継代すること
ができる前立腺癌発生のモデルラットの樹立方法(請求
項6)に関する。
ラットのプロバシン遺伝子プロモーターの5′−フラン
キング領域(−426〜+32の458bp)の下流
に、NcoIとBamHIで切りだしたSV40ラージT抗原の
遺伝子(5164〜2676)を結合して得られる29
44bpからなるPBSVTトランスジーンをスプラー
グ−ドーリー(Sprague-Dawley)系ラットの受精卵に導入
し、導入後の受精卵を仮親に移植し、該仮親から得られ
るトランスジェニックラットを野生型スプラーグ−ドー
リー系ラットと交配し、得られるトランスジェニックラ
ットを以後同様に継代し、前立腺の病理組織の観察する
ことにより、前立腺癌を発生するトランスジェニックラ
ットを選択することを特徴とする、浸潤癌を含む前立腺
癌を発生することができ、安定的に継代することができ
る前立腺癌発生のモデルラットの樹立方法(請求項5)
や、浸潤癌を含む前立腺癌を発生することができ、安定
的に継代することができる前立腺癌発生のモデルラット
が、PBSVTトランスジェニックラット2971系統
であることを特徴とする、請求項5記載の浸潤癌を含む
前立腺癌を発生することができ、安定的に継代すること
ができる前立腺癌発生のモデルラットの樹立方法(請求
項6)に関する。
【0013】さらに本発明は、前立腺癌発生前後の、請
求項1〜4のいずれか記載の前立腺癌発生のモデルラッ
トに被検物質を投与し、該モデルラットにおける前立腺
癌の発生及び/又は進行の程度を測定・評価することを
特徴とする前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物質
又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニング
方法(請求項7)や、前立腺癌発生及び/又は進行の程
度の測定・評価が、前立腺癌発生のモデルラットから得
られる前立腺癌の病理組織像の解析・評価であることを
特徴とする請求項7記載の前立腺癌の発生及び/若しく
は進行促進物質又は発生及び/若しくは進行抑制物質の
スクリーニング方法(請求項8)や、前立腺癌発生及び
/又は進行の程度の測定・評価が、前立腺癌細胞におい
て産生されるプロスタン酸ホスファターゼ(PAP)及
び/又は前立腺特異的抗原(PSA)の測定・評価であ
ることを特徴とする請求項7記載の前立腺癌の発生及び
/若しくは進行促進物質又は発生及び/若しくは進行抑
制物質のスクリーニング方法(請求項9)や、前立腺癌
発生及び/又は進行の程度を測定・評価するに際し、前
立腺癌発生のモデルラットと同種の野生型ラットの測定
値と比較・評価することを特徴とする請求項7〜9のい
ずれか記載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物
質又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニン
グ方法(請求項10)や、請求項7〜10のいずれか記
載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物質又は発
生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニング方法に
より得られることを特徴とする前立腺癌の発生及び/又
は進行促進物質(請求項11)や、請求項7〜10のい
ずれか記載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物
質又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニン
グ方法により得られることを特徴とする前立腺癌の発生
及び/又は進行抑制物質(請求項12)や、前立腺癌の
発生及び/又は進行抑制物質が、前立腺癌に対する予防
剤、抑制剤若しくは治療剤であることを特徴とする請求
項12記載の前立腺癌の発生及び/又は進行抑制物質
(請求項13)や、前立腺癌の発生及び/又は進行の抑
制を必要としている患者を治療するのに用いられる医薬
組成物であって、有効成分として請求項13記載の前立
腺癌の発生及び/又は進行抑制物質を含有することを特
徴とする医薬組成物(請求項14)に関する。
求項1〜4のいずれか記載の前立腺癌発生のモデルラッ
トに被検物質を投与し、該モデルラットにおける前立腺
癌の発生及び/又は進行の程度を測定・評価することを
特徴とする前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物質
又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニング
方法(請求項7)や、前立腺癌発生及び/又は進行の程
度の測定・評価が、前立腺癌発生のモデルラットから得
られる前立腺癌の病理組織像の解析・評価であることを
特徴とする請求項7記載の前立腺癌の発生及び/若しく
は進行促進物質又は発生及び/若しくは進行抑制物質の
スクリーニング方法(請求項8)や、前立腺癌発生及び
/又は進行の程度の測定・評価が、前立腺癌細胞におい
て産生されるプロスタン酸ホスファターゼ(PAP)及
び/又は前立腺特異的抗原(PSA)の測定・評価であ
ることを特徴とする請求項7記載の前立腺癌の発生及び
/若しくは進行促進物質又は発生及び/若しくは進行抑
制物質のスクリーニング方法(請求項9)や、前立腺癌
発生及び/又は進行の程度を測定・評価するに際し、前
立腺癌発生のモデルラットと同種の野生型ラットの測定
値と比較・評価することを特徴とする請求項7〜9のい
ずれか記載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物
質又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニン
グ方法(請求項10)や、請求項7〜10のいずれか記
載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物質又は発
生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニング方法に
より得られることを特徴とする前立腺癌の発生及び/又
は進行促進物質(請求項11)や、請求項7〜10のい
ずれか記載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物
質又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニン
グ方法により得られることを特徴とする前立腺癌の発生
及び/又は進行抑制物質(請求項12)や、前立腺癌の
発生及び/又は進行抑制物質が、前立腺癌に対する予防
剤、抑制剤若しくは治療剤であることを特徴とする請求
項12記載の前立腺癌の発生及び/又は進行抑制物質
(請求項13)や、前立腺癌の発生及び/又は進行の抑
制を必要としている患者を治療するのに用いられる医薬
組成物であって、有効成分として請求項13記載の前立
腺癌の発生及び/又は進行抑制物質を含有することを特
徴とする医薬組成物(請求項14)に関する。
【0014】
【発明の実施の形態】本発明の前立腺癌発生のモデルラ
ットとしては、浸潤癌を含む前立腺癌をほぼ全例に発生
することができ、かつ安定的に継代することができるラ
ット系統であれば特に制限されるものではないが、前立
腺において特異的に発現し、アンドロゲンや亜鉛で調節
される蛋白質をコードする遺伝子であるプロバシン遺伝
子のプロモーターの制御下に、p53蛋白及びPb蛋白
に直接結合してその機能を不活性化することによって癌
を誘発するSV40ラージT抗原の遺伝子を結合したト
ランスジーン(PBSVTトランスジーン)が導入され
たトランスジェニックラットから樹立された前立腺癌発
生のモデルラット、例えばPBSVTトランスジェニッ
クラット2971系統を具体的に挙げることができる。
ットとしては、浸潤癌を含む前立腺癌をほぼ全例に発生
することができ、かつ安定的に継代することができるラ
ット系統であれば特に制限されるものではないが、前立
腺において特異的に発現し、アンドロゲンや亜鉛で調節
される蛋白質をコードする遺伝子であるプロバシン遺伝
子のプロモーターの制御下に、p53蛋白及びPb蛋白
に直接結合してその機能を不活性化することによって癌
を誘発するSV40ラージT抗原の遺伝子を結合したト
ランスジーン(PBSVTトランスジーン)が導入され
たトランスジェニックラットから樹立された前立腺癌発
生のモデルラット、例えばPBSVTトランスジェニッ
クラット2971系統を具体的に挙げることができる。
【0015】本発明の前立腺癌発生のモデルラットの樹
立方法としては、公知のトランスジェニック動物の作製
方法(例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:7380-7
384,1980)を用いた方法を挙げることができ、以下、上
記プロバシンのプロモーターの制御下にSV40ラージ
T抗原遺伝子が位置する遺伝子断片をトランスジーンと
して用いる場合を例にとって説明する。公知の方法に準
じて調製したPBSVTトランスジーンを適当な発現ベ
クターに入れて増幅し、増幅後、遺伝子断片(PBSV
Tトランスジーン)を切りだし、かかるPBSVTトラ
ンスジーンをマイクロインジェクション法によりラット
前核期受精卵へ導入し、導入後の受精卵を仮親に移植し
産仔させる。出生した仔ラットにPBSVTトランスジ
ーンが導入されているかどうかは、体の一部(例えば尾
部先端)からDNAを抽出し、サザンプロット分析やP
CRアッセイなどにより確認することができる。PBS
VTトランスジーンの存在が確認された個体は初代(Fou
nder)であり、この初代ラットと健常な野生型ラットを
交配させる。得られた産仔(F1)の50%がPBSV
Tトランスジーンを承継するが、PBSVTトランスジ
ーンが導入されていることが確認されたF1ラットを健
常ラットと交配し、以後同様に継代し、前立腺の病理組
織の観察し、前立腺癌を発生するトランスジェニックラ
ットを選択することにより前立腺癌発生のモデルラット
系統を樹立することができる。
立方法としては、公知のトランスジェニック動物の作製
方法(例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:7380-7
384,1980)を用いた方法を挙げることができ、以下、上
記プロバシンのプロモーターの制御下にSV40ラージ
T抗原遺伝子が位置する遺伝子断片をトランスジーンと
して用いる場合を例にとって説明する。公知の方法に準
じて調製したPBSVTトランスジーンを適当な発現ベ
クターに入れて増幅し、増幅後、遺伝子断片(PBSV
Tトランスジーン)を切りだし、かかるPBSVTトラ
ンスジーンをマイクロインジェクション法によりラット
前核期受精卵へ導入し、導入後の受精卵を仮親に移植し
産仔させる。出生した仔ラットにPBSVTトランスジ
ーンが導入されているかどうかは、体の一部(例えば尾
部先端)からDNAを抽出し、サザンプロット分析やP
CRアッセイなどにより確認することができる。PBS
VTトランスジーンの存在が確認された個体は初代(Fou
nder)であり、この初代ラットと健常な野生型ラットを
交配させる。得られた産仔(F1)の50%がPBSV
Tトランスジーンを承継するが、PBSVTトランスジ
ーンが導入されていることが確認されたF1ラットを健
常ラットと交配し、以後同様に継代し、前立腺の病理組
織の観察し、前立腺癌を発生するトランスジェニックラ
ットを選択することにより前立腺癌発生のモデルラット
系統を樹立することができる。
【0016】上記トランスジーンにおけるプロバシン遺
伝子のプロモーターに代えて、前立腺において特異的に
発現する前立腺特異的抗原(PSA)又は前立腺特異的
膜抗原(PSMA)に由来するプロモーターを用いるこ
ともできる。癌を誘発するSV40ラージT抗原の遺伝
子に代えて、SV40の温度感受性突然変異株tsA5
8のラージT抗原遺伝子や、アデノウィルスのE1A遺
伝子、ヒトパピローマウィルスのHPV16遺伝子等を
用いることもできる。また、受精卵への導入方法とし
て、上記マイクロインジクション法に代えて、静電パル
ス法、リポソーム法、リン酸カルシウム法等も用いるこ
とができる。
伝子のプロモーターに代えて、前立腺において特異的に
発現する前立腺特異的抗原(PSA)又は前立腺特異的
膜抗原(PSMA)に由来するプロモーターを用いるこ
ともできる。癌を誘発するSV40ラージT抗原の遺伝
子に代えて、SV40の温度感受性突然変異株tsA5
8のラージT抗原遺伝子や、アデノウィルスのE1A遺
伝子、ヒトパピローマウィルスのHPV16遺伝子等を
用いることもできる。また、受精卵への導入方法とし
て、上記マイクロインジクション法に代えて、静電パル
ス法、リポソーム法、リン酸カルシウム法等も用いるこ
とができる。
【0017】また、前記本発明の前立腺癌発生のモデル
ラットであるPBSVTトランスジェニックラット29
71系統は、EcoRIとNcoIで切りだしたラットのプロバ
シン遺伝子プロモーターの5′−フランキング領域(−
426〜+32の458bp)の下流に、NcoIとBamHI
で切りだしたSV40ラージT抗原の遺伝子(5164
〜2676)を結合して得られる2944bpからなる
PBSVTトランスジーンをスプラーグ−ドーリー(Spr
ague-Dawley)系ラットの受精卵に導入し、導入後の受精
卵を仮親に移植し、該仮親から得られるトランスジェニ
ックラットを野生型スプラーグ−ドーリー系ラットと交
配し、得られるトランスジェニックラットを以後同様に
継代し、前立腺の病理組織の観察して、前立腺癌を発生
するトランスジェニックラットを選択することにより、
浸潤癌を含む前立腺癌を発生することができ、安定的に
継代することができる前立腺癌発生のモデルラットとし
て樹立されたものである。このPBSVTトランスジェ
ニックラット2971系統は、名古屋市立大学医学部第
1病理学教室において継代されており、一定の条件下で
関係者は分譲を受けることができる。
ラットであるPBSVTトランスジェニックラット29
71系統は、EcoRIとNcoIで切りだしたラットのプロバ
シン遺伝子プロモーターの5′−フランキング領域(−
426〜+32の458bp)の下流に、NcoIとBamHI
で切りだしたSV40ラージT抗原の遺伝子(5164
〜2676)を結合して得られる2944bpからなる
PBSVTトランスジーンをスプラーグ−ドーリー(Spr
ague-Dawley)系ラットの受精卵に導入し、導入後の受精
卵を仮親に移植し、該仮親から得られるトランスジェニ
ックラットを野生型スプラーグ−ドーリー系ラットと交
配し、得られるトランスジェニックラットを以後同様に
継代し、前立腺の病理組織の観察して、前立腺癌を発生
するトランスジェニックラットを選択することにより、
浸潤癌を含む前立腺癌を発生することができ、安定的に
継代することができる前立腺癌発生のモデルラットとし
て樹立されたものである。このPBSVTトランスジェ
ニックラット2971系統は、名古屋市立大学医学部第
1病理学教室において継代されており、一定の条件下で
関係者は分譲を受けることができる。
【0018】上記本発明の前立腺癌発生のモデルラット
は、前立腺癌発生のメカニズム解明の他、前立腺癌の発
生・進行の促進物質又は抑制物質のスクリーニング等に
用いることができる。かかるスクリーニング方法として
は、前立腺癌発生前、あるいは前立腺癌発生後に、本発
明の前立腺癌発生のモデルラットに被検物質を投与し、
該モデルラットにおける前立腺癌の発生及び/又は進行
の程度を測定・評価する方法を挙げることができる。ま
た、前立腺癌発生及び/又は進行の程度の測定・評価方
法としては、被検物質を投与されたモデルラットから得
られる前立腺癌の病理組織像を解析・評価する方法を例
示することができる。そして、前立腺癌発生及び/又は
進行の程度を測定・評価するに際しては、前立腺癌発生
のモデルラットと同種の野生型ラットを同時に用いるこ
とが、個体レベルで正確な比較実験をすることができる
ことから好ましい。
は、前立腺癌発生のメカニズム解明の他、前立腺癌の発
生・進行の促進物質又は抑制物質のスクリーニング等に
用いることができる。かかるスクリーニング方法として
は、前立腺癌発生前、あるいは前立腺癌発生後に、本発
明の前立腺癌発生のモデルラットに被検物質を投与し、
該モデルラットにおける前立腺癌の発生及び/又は進行
の程度を測定・評価する方法を挙げることができる。ま
た、前立腺癌発生及び/又は進行の程度の測定・評価方
法としては、被検物質を投与されたモデルラットから得
られる前立腺癌の病理組織像を解析・評価する方法を例
示することができる。そして、前立腺癌発生及び/又は
進行の程度を測定・評価するに際しては、前立腺癌発生
のモデルラットと同種の野生型ラットを同時に用いるこ
とが、個体レベルで正確な比較実験をすることができる
ことから好ましい。
【0019】本発明のスクリーニング方法により得られ
る前立腺癌の発生及び/又は進行抑制物質は、前立腺癌
に対する予防剤、抑制剤若しくは治療剤等に用いること
ができる可能性がある。例えば、上記スクリーニング方
法において、前立腺癌発生前の被検物質の投与は、前立
腺癌の予防薬剤のスクリーニングに適しており、反対に
前立腺癌発生後の被検物質の投与は、前立腺癌の治療剤
・症状改善剤のスクリーニングに適している。他方、前
立腺癌の発生及び/又は進行促進物質は、前立腺癌の発
生が不十分なモデル動物において、前立腺癌を充分に生
起させたい場合などに有用であると考えられる。また、
本発明の前立腺癌の発生及び/又は進行の抑制を必要と
している患者を治療するのに用いられる医薬組成物は、
有効成分としての前立腺癌の発生及び/又は進行抑制物
質と、製剤化に必要な公知の物質を含んでいる。
る前立腺癌の発生及び/又は進行抑制物質は、前立腺癌
に対する予防剤、抑制剤若しくは治療剤等に用いること
ができる可能性がある。例えば、上記スクリーニング方
法において、前立腺癌発生前の被検物質の投与は、前立
腺癌の予防薬剤のスクリーニングに適しており、反対に
前立腺癌発生後の被検物質の投与は、前立腺癌の治療剤
・症状改善剤のスクリーニングに適している。他方、前
立腺癌の発生及び/又は進行促進物質は、前立腺癌の発
生が不十分なモデル動物において、前立腺癌を充分に生
起させたい場合などに有用であると考えられる。また、
本発明の前立腺癌の発生及び/又は進行の抑制を必要と
している患者を治療するのに用いられる医薬組成物は、
有効成分としての前立腺癌の発生及び/又は進行抑制物
質と、製剤化に必要な公知の物質を含んでいる。
【0020】
【実施例】以下本発明を実施例に基づいて説明するが、
本発明はかかる実施例により制限されるものではない。 (PBSVTトランスジーンの構築)SV40ラージT
抗原の遺伝子は、ヒューマンサイエンス研究資源バンク
から供与された、pBluescriptIIKS(-)のマルチクローニ
ングサイトにNcoI−BamHI断片として組み込まれている
ものを使用した。かかるpBluescriptIIKS(-)からNcoIと
BamHIで切りだしたSV40ラージT抗原の遺伝子(5
164〜2676)を、EcoRIとNcoIで切りだしたラッ
トのプロバシン遺伝子プロモーターの5′−フランキン
グ領域(−426〜+32の458bp)の下流に結合
し、PBSVTトランスジーンを構築した(図1)。こ
の2944bpからなるSV40ラージT抗原とスモー
ルt抗原の両方を発現することができるPBSVTトラ
ンスジーンは、プラスミドpBluescriptII(トランスジ
ーン社製)を用いて増幅した後、制限酵素EcoRIとBamHI
により消化し、1%アガロースゲル電気泳動を行い、プ
ラスミド部分を除去し、直鎖状DNA断片として分離し
た。分離したDNA断片をGENE CLEANEII(
BIO 101 INC社 )を用いて回収し、精製後に得られたD
NAを5μg/mlとなるように注入用バッファー(0.
1mM EDTAを含む10mMTris-HCl, pH 7.6)に溶解し、注入
操作に使用するまで−20℃で保存した。
本発明はかかる実施例により制限されるものではない。 (PBSVTトランスジーンの構築)SV40ラージT
抗原の遺伝子は、ヒューマンサイエンス研究資源バンク
から供与された、pBluescriptIIKS(-)のマルチクローニ
ングサイトにNcoI−BamHI断片として組み込まれている
ものを使用した。かかるpBluescriptIIKS(-)からNcoIと
BamHIで切りだしたSV40ラージT抗原の遺伝子(5
164〜2676)を、EcoRIとNcoIで切りだしたラッ
トのプロバシン遺伝子プロモーターの5′−フランキン
グ領域(−426〜+32の458bp)の下流に結合
し、PBSVTトランスジーンを構築した(図1)。こ
の2944bpからなるSV40ラージT抗原とスモー
ルt抗原の両方を発現することができるPBSVTトラ
ンスジーンは、プラスミドpBluescriptII(トランスジ
ーン社製)を用いて増幅した後、制限酵素EcoRIとBamHI
により消化し、1%アガロースゲル電気泳動を行い、プ
ラスミド部分を除去し、直鎖状DNA断片として分離し
た。分離したDNA断片をGENE CLEANEII(
BIO 101 INC社 )を用いて回収し、精製後に得られたD
NAを5μg/mlとなるように注入用バッファー(0.
1mM EDTAを含む10mMTris-HCl, pH 7.6)に溶解し、注入
操作に使用するまで−20℃で保存した。
【0021】(トランスジェニックラットの作製)ラッ
トの前核期受精卵への上記PBSVTトランスジーン溶
液のマイクロインジェクションは下記の要領で実施し
た。8週齢のスプラーグ−ドーリー(SD, Sprague-Dawle
y)系雌ラットを明暗サイクル12時間(明時間 4:0
0〜16:00)、温度約23℃、湿度約55%で飼育
し、膣スメア法により雌の性周期を観察してホルモン処
理日を選択した。雌ラットに150IU/kgの妊馬血
清性性腺刺激ホルモン(日本全薬社製「PMSゼンヤ
ク」)を腹腔内投与して過剰排卵処理を行い、その48
時間後に75IU/kgのヒト絨毛性性腺刺激ホルモン
(三共臓器社製「プべローゲン」)を投与した後、雄と
の同居により交配を行わせ、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモ
ン投与32時間後に卵管灌流により前核期受精卵を採取
した。卵管灌流及び卵の培養にはmKRB液(Y. Yoshi
da and M.C. Chang, J. Reprod. Fertil., Vol.36, pp9
-22(1974))を使用した。採取した受精卵を0.1%ヒ
アルロニダーゼ(シグマ社製)を含むmKRB液中で3
7℃、5分間の酵素処理を行い、卵丘細胞を除去した
後、mKRB液で3回洗浄して酵素を除去し、DNA注
入操作までCO2インキュベーター内(CO25%、37
℃、飽和湿度)に保存した。この様にして調製したウイ
スターラットの受精卵の雄性前核に、前記PBSVTト
ランスジーン溶液を、受精卵1個当たり10分子となる
ように導入した。導入した200個の受精卵を10匹の
仮親に移植し、40匹の産仔を得た。離乳直後の尾より
調製したDNAを、配列表配列番号1及び2記載のプラ
イマーを用いてPCR法により検定した。その結果、S
D系の4匹の初代(F0)の雄トランスジェニックラッ
トを得た。
トの前核期受精卵への上記PBSVTトランスジーン溶
液のマイクロインジェクションは下記の要領で実施し
た。8週齢のスプラーグ−ドーリー(SD, Sprague-Dawle
y)系雌ラットを明暗サイクル12時間(明時間 4:0
0〜16:00)、温度約23℃、湿度約55%で飼育
し、膣スメア法により雌の性周期を観察してホルモン処
理日を選択した。雌ラットに150IU/kgの妊馬血
清性性腺刺激ホルモン(日本全薬社製「PMSゼンヤ
ク」)を腹腔内投与して過剰排卵処理を行い、その48
時間後に75IU/kgのヒト絨毛性性腺刺激ホルモン
(三共臓器社製「プべローゲン」)を投与した後、雄と
の同居により交配を行わせ、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモ
ン投与32時間後に卵管灌流により前核期受精卵を採取
した。卵管灌流及び卵の培養にはmKRB液(Y. Yoshi
da and M.C. Chang, J. Reprod. Fertil., Vol.36, pp9
-22(1974))を使用した。採取した受精卵を0.1%ヒ
アルロニダーゼ(シグマ社製)を含むmKRB液中で3
7℃、5分間の酵素処理を行い、卵丘細胞を除去した
後、mKRB液で3回洗浄して酵素を除去し、DNA注
入操作までCO2インキュベーター内(CO25%、37
℃、飽和湿度)に保存した。この様にして調製したウイ
スターラットの受精卵の雄性前核に、前記PBSVTト
ランスジーン溶液を、受精卵1個当たり10分子となる
ように導入した。導入した200個の受精卵を10匹の
仮親に移植し、40匹の産仔を得た。離乳直後の尾より
調製したDNAを、配列表配列番号1及び2記載のプラ
イマーを用いてPCR法により検定した。その結果、S
D系の4匹の初代(F0)の雄トランスジェニックラッ
トを得た。
【0022】かかる初代の雄トランスジェニックラット
を健常な野生型SD系雌ラットと交配して雑種第1代
(F1)を作製して、経時的に全身臓器における病変に
ついて検討した。4匹のトランスジェニックラット中2
944系統及び2971系統の2匹がライン化可能であ
った。2971系は安定的な継代が可能であり、PBS
VTトランスジェニックラットとして樹立することがで
きた。一方、2944系は継代を重ねるにつれ水頭症の
出現が高頻度となり系が途絶してしまった。
を健常な野生型SD系雌ラットと交配して雑種第1代
(F1)を作製して、経時的に全身臓器における病変に
ついて検討した。4匹のトランスジェニックラット中2
944系統及び2971系統の2匹がライン化可能であ
った。2971系は安定的な継代が可能であり、PBS
VTトランスジェニックラットとして樹立することがで
きた。一方、2944系は継代を重ねるにつれ水頭症の
出現が高頻度となり系が途絶してしまった。
【0023】2944系統及び2971系統のF0は、
12週齢頃より両下肢麻痺が出現し14週及び25週に
死亡した。両者とも前立腺腹葉でびまん性に高度異型過
形成が認められたが、癌病巣は観察されなかった。SV
40T抗原は前立腺全葉に発現していたが、特に腹葉で
高度に発現していた。また両者とも脊髄腫瘍、さらに2
971系統では舌下部腫瘍も認められ、いずれも悪性小
円形細胞腫瘍でSV40T抗原陽性であった。
12週齢頃より両下肢麻痺が出現し14週及び25週に
死亡した。両者とも前立腺腹葉でびまん性に高度異型過
形成が認められたが、癌病巣は観察されなかった。SV
40T抗原は前立腺全葉に発現していたが、特に腹葉で
高度に発現していた。また両者とも脊髄腫瘍、さらに2
971系統では舌下部腫瘍も認められ、いずれも悪性小
円形細胞腫瘍でSV40T抗原陽性であった。
【0024】2971系及び2944系の継代におい
て、死亡したもの及び屠殺したものに関する全体的な所
見を表1「PBSVTトランスジェニックラット297
1系の全体的な所見(死亡又は屠殺の場合)」及び表2
「PBSVTトランスジェニックラット2944系の全
体的な所見(死亡又は屠殺の場合)」に示す。また、そ
れらの前立腺の病理組織学的知見を表3「PBSVTト
ランスジェニックラットの前立腺の病理組織学的知見」
に示す。表1に示されるように、2971系ラットは、
継代可能なことが確認された。前立腺以外では舌、脊髄
周辺に小細胞性未分化悪性腫瘍の発生がみられた。ま
た、表2に示されるように、2944系ラットには、水
頭症で死亡する個体が多かった。前立腺以外では舌、脊
髄周辺、その他に小細胞性未分化悪性腫瘍の発生がみら
れた。
て、死亡したもの及び屠殺したものに関する全体的な所
見を表1「PBSVTトランスジェニックラット297
1系の全体的な所見(死亡又は屠殺の場合)」及び表2
「PBSVTトランスジェニックラット2944系の全
体的な所見(死亡又は屠殺の場合)」に示す。また、そ
れらの前立腺の病理組織学的知見を表3「PBSVTト
ランスジェニックラットの前立腺の病理組織学的知見」
に示す。表1に示されるように、2971系ラットは、
継代可能なことが確認された。前立腺以外では舌、脊髄
周辺に小細胞性未分化悪性腫瘍の発生がみられた。ま
た、表2に示されるように、2944系ラットには、水
頭症で死亡する個体が多かった。前立腺以外では舌、脊
髄周辺、その他に小細胞性未分化悪性腫瘍の発生がみら
れた。
【0025】
【表1】
【0026】
【表2】
【0027】
【表3】
【0028】2971系の15週齢のPBSVTトラン
スジェニックラット5匹を屠殺して、前立腺及び精巣を
病理組織学的に調べた。その結果、前立腺各葉でほぼ全
例に腺癌の発生がみられ、これらは腺構造中に配置され
た多くの有糸分裂像をもつ異型癌細胞であった。特に前
葉では浸潤癌の発生が観察された。結果を表4「PBS
VTトランスジェニックラットの前立腺及び精巣の病理
組織学的知見」に示す。
スジェニックラット5匹を屠殺して、前立腺及び精巣を
病理組織学的に調べた。その結果、前立腺各葉でほぼ全
例に腺癌の発生がみられ、これらは腺構造中に配置され
た多くの有糸分裂像をもつ異型癌細胞であった。特に前
葉では浸潤癌の発生が観察された。結果を表4「PBS
VTトランスジェニックラットの前立腺及び精巣の病理
組織学的知見」に示す。
【0029】
【表4】
【0030】PBSVTトランスジェニックラットにお
けるSV40ラージT抗原のタンパク発現を免疫組織化
学的に観察した結果、前立腺各葉、唾液腺導管及び精巣
セルトリ細胞に認められた。その結果を表5「PBSV
TトランスジェニックラットにおけるSV40T抗原の
タンパク発現の免疫組織化学的観察結果」に示す。
けるSV40ラージT抗原のタンパク発現を免疫組織化
学的に観察した結果、前立腺各葉、唾液腺導管及び精巣
セルトリ細胞に認められた。その結果を表5「PBSV
TトランスジェニックラットにおけるSV40T抗原の
タンパク発現の免疫組織化学的観察結果」に示す。
【0031】
【表5】
【0032】テストステロンの投与による癌発生への影
響を調べる次の実験を行った。雄のPBSVTトランス
ジェニックラットを5週齢に3群に分け、第1群は対照
群とし、第2群は精巣摘出、第3群は1.5cmシリコン
チューブ内に充填したテストステロンを皮下に移植し、
15週齢で全群剖検屠殺し、前立腺の病変を病理組織学
的に検索した。第1群の対照群では全例に前立腺前葉に
びまん性に高度異型過形成がみられ、一部では癌の発生
を認めた。第2群では前立腺は全体に萎縮しており腫瘍
性病変は認められなかった。第3群では前立腺全体が著
明に腫大しており、浸潤癌の発生を高率に認めた。しか
し、テストステロンを15週投与した後で去勢すると前
立腺は退縮し、すべての増殖性病巣は消失する。これら
の所見より、このPBSVTトランスジェニックラット
の前立腺腫瘍発生はアンドロゲン依存性であり、テスト
ステロンにより短期間かつ顕著に前立腺腫瘍を進展させ
ることが明かとなった。さらに、p53及びPbを不活
性化することによって前立腺癌が発生することが立証さ
れた。
響を調べる次の実験を行った。雄のPBSVTトランス
ジェニックラットを5週齢に3群に分け、第1群は対照
群とし、第2群は精巣摘出、第3群は1.5cmシリコン
チューブ内に充填したテストステロンを皮下に移植し、
15週齢で全群剖検屠殺し、前立腺の病変を病理組織学
的に検索した。第1群の対照群では全例に前立腺前葉に
びまん性に高度異型過形成がみられ、一部では癌の発生
を認めた。第2群では前立腺は全体に萎縮しており腫瘍
性病変は認められなかった。第3群では前立腺全体が著
明に腫大しており、浸潤癌の発生を高率に認めた。しか
し、テストステロンを15週投与した後で去勢すると前
立腺は退縮し、すべての増殖性病巣は消失する。これら
の所見より、このPBSVTトランスジェニックラット
の前立腺腫瘍発生はアンドロゲン依存性であり、テスト
ステロンにより短期間かつ顕著に前立腺腫瘍を進展させ
ることが明かとなった。さらに、p53及びPbを不活
性化することによって前立腺癌が発生することが立証さ
れた。
【0033】
【発明の効果】この動物モデルは前立腺癌を早期かつ高
率に惹起させることが可能である。したがって、前立腺
発癌過程を詳細に解析したり、前立腺癌の治療剤を開発
するための前立腺癌モデルとして極めて有用である。本
発明トランスジェニックラットは、その形質より医学研
究分野において有用である。
率に惹起させることが可能である。したがって、前立腺
発癌過程を詳細に解析したり、前立腺癌の治療剤を開発
するための前立腺癌モデルとして極めて有用である。本
発明トランスジェニックラットは、その形質より医学研
究分野において有用である。
【0034】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Japan Science and Technology Corporation <120> Rat Prostate Carcinogenesis Models <130> A031P56 <140> <141> <160> 2 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Primer <400> 1 gtcagcagta gcctcatcat 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:Primer <400> 2 ggttgattgc tactgcttcg 20
【図1】本発明の前立腺癌トランスジェニックラットモ
デル創出のために用いたPBSVT遺伝子断片を示す図
である。
デル創出のために用いたPBSVT遺伝子断片を示す図
である。
Claims (14)
- 【請求項1】 浸潤癌を含む前立腺癌を発生することが
でき、安定的に継代することができる前立腺癌発生のモ
デルラット。 - 【請求項2】 プロバシン遺伝子のプロモーターの制御
下にあるSV40ラージT抗原の遺伝子が導入された請
求項1記載の前立腺癌発生のモデルラット。 - 【請求項3】 EcoRIとNcoIで切りだしたラットのプロ
バシン遺伝子プロモーターの5′−フランキング領域
(−426〜+32の458bp)の下流に、NcoIとBa
mHIで切りだしたSV40ラージT抗原の遺伝子(51
64〜2676)を結合して得られる2944bpから
なるPBSVTトランスジーンをスプラーグ−ドーリー
(Sprague-Dawley)系ラットの受精卵に導入し、導入後の
受精卵を仮親に移植し、該仮親から得られるトランスジ
ェニック雄ラットを野生型スプラーグ−ドーリー系雌ラ
ットと交配することにより得られる請求項1又は2記載
の前立腺癌発生のモデルラット。 - 【請求項4】 前立腺癌発生のモデルラットが、PBS
VTトランスジェニックラット2971系統である請求
項1〜3のいずれか記載の前立腺癌発生のモデルラッ
ト。 - 【請求項5】 EcoRIとNcoIで切りだしたラットのプロ
バシン遺伝子プロモーターの5′−フランキング領域
(−426〜+32の458bp)の下流に、NcoIとBa
mHIで切りだしたSV40ラージT抗原の遺伝子(51
64〜2676)を結合して得られる2944bpから
なるPBSVTトランスジーンをスプラーグ−ドーリー
(Sprague-Dawley)系ラットの受精卵に導入し、導入後の
受精卵を仮親に移植し、該仮親から得られるトランスジ
ェニックラットを野生型スプラーグ−ドーリー系ラット
と交配し、得られるトランスジェニックラットを以後同
様に継代し、前立腺の病理組織の観察することにより、
前立腺癌を発生するトランスジェニックラットを選択す
ることを特徴とする、浸潤癌を含む前立腺癌を発生する
ことができ、安定的に継代することができる前立腺癌発
生のモデルラットの樹立方法。 - 【請求項6】 浸潤癌を含む前立腺癌を発生することが
でき、安定的に継代することができる前立腺癌発生のモ
デルラットが、PBSVTトランスジェニックラット2
971系統であることを特徴とする、請求項5記載の浸
潤癌を含む前立腺癌を発生することができ、安定的に継
代することができる前立腺癌発生のモデルラットの樹立
方法。 - 【請求項7】 前立腺癌発生前後の、請求項1〜4のい
ずれか記載の前立腺癌発生のモデルラットに被検物質を
投与し、該モデルラットにおける前立腺癌の発生及び/
又は進行の程度を測定・評価することを特徴とする前立
腺癌の発生及び/若しくは進行促進物質又は発生及び/
若しくは進行抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項8】 前立腺癌発生及び/又は進行の程度の測
定・評価が、前立腺癌発生のモデルラットから得られる
前立腺癌の病理組織像の解析・評価であることを特徴と
する請求項7記載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行
促進物質又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリ
ーニング方法。 - 【請求項9】 前立腺癌発生及び/又は進行の程度の測
定・評価が、前立腺癌細胞において産生されるプロスタ
ン酸ホスファターゼ(PAP)及び/又は前立腺特異的
抗原(PSA)の測定・評価であることを特徴とする請
求項7記載の前立腺癌の発生及び/若しくは進行促進物
質又は発生及び/若しくは進行抑制物質のスクリーニン
グ方法。 - 【請求項10】 前立腺癌発生及び/又は進行の程度を
測定・評価するに際し、前立腺癌発生のモデルラットと
同種の野生型ラットの測定値と比較・評価することを特
徴とする請求項7〜9のいずれか記載の前立腺癌の発生
及び/若しくは進行促進物質又は発生及び/若しくは進
行抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項11】 請求項7〜10のいずれか記載の前立
腺癌の発生及び/若しくは進行促進物質又は発生及び/
若しくは進行抑制物質のスクリーニング方法により得ら
れることを特徴とする前立腺癌の発生及び/又は進行促
進物質。 - 【請求項12】 請求項7〜10のいずれか記載の前立
腺癌の発生及び/若しくは進行促進物質又は発生及び/
若しくは進行抑制物質のスクリーニング方法により得ら
れることを特徴とする前立腺癌の発生及び/又は進行抑
制物質。 - 【請求項13】 前立腺癌の発生及び/又は進行抑制物
質が、前立腺癌に対する予防剤、抑制剤若しくは治療剤
であることを特徴とする請求項12記載の前立腺癌の発
生及び/又は進行抑制物質。 - 【請求項14】 前立腺癌の発生及び/又は進行の抑制
を必要としている患者を治療するのに用いられる医薬組
成物であって、有効成分として請求項13記載の前立腺
癌の発生及び/又は進行抑制物質を含有することを特徴
とする医薬組成物。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2000042491A JP2001231402A (ja) | 2000-02-21 | 2000-02-21 | 前立腺癌発生モデルラット |
US10/204,504 US7105717B1 (en) | 2000-02-21 | 2000-06-13 | Model rat with the onset of prostatic cancer |
AU2000251092A AU2000251092A1 (en) | 2000-02-21 | 2000-06-13 | Mdel rats with the onset of prostatic cancer |
CA002400966A CA2400966C (en) | 2000-02-21 | 2000-06-13 | Rat model with the onset of prostate cancer |
PCT/JP2000/003825 WO2001060151A1 (fr) | 2000-02-21 | 2000-06-13 | Modeles murins presentant les premiers symptomes du cancer de la prostate |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2000042491A JP2001231402A (ja) | 2000-02-21 | 2000-02-21 | 前立腺癌発生モデルラット |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2001231402A true JP2001231402A (ja) | 2001-08-28 |
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ID=18565560
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000042491A Pending JP2001231402A (ja) | 2000-02-21 | 2000-02-21 | 前立腺癌発生モデルラット |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7105717B1 (ja) |
JP (1) | JP2001231402A (ja) |
AU (1) | AU2000251092A1 (ja) |
CA (1) | CA2400966C (ja) |
WO (1) | WO2001060151A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007004337A1 (ja) | 2005-07-01 | 2007-01-11 | Chubu University Educational Foundation | 白髪発症モデル動物、白髪発症モデル動物の樹立方法、白髪発症モデル動物の継代方法、白髪発症の研究方法、白髪発症制御手段のスクリーニング方法、白髪発症制御用組成物 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1726640B1 (en) * | 2004-03-04 | 2016-01-13 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Rat embryonic stem cell |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5907078A (en) * | 1994-12-09 | 1999-05-25 | Greenberg; Norman M. | Transgenic mouse model for prostate cancer |
-
2000
- 2000-02-21 JP JP2000042491A patent/JP2001231402A/ja active Pending
- 2000-06-13 AU AU2000251092A patent/AU2000251092A1/en not_active Abandoned
- 2000-06-13 WO PCT/JP2000/003825 patent/WO2001060151A1/ja active Application Filing
- 2000-06-13 CA CA002400966A patent/CA2400966C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-13 US US10/204,504 patent/US7105717B1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007004337A1 (ja) | 2005-07-01 | 2007-01-11 | Chubu University Educational Foundation | 白髪発症モデル動物、白髪発症モデル動物の樹立方法、白髪発症モデル動物の継代方法、白髪発症の研究方法、白髪発症制御手段のスクリーニング方法、白髪発症制御用組成物 |
US8067666B2 (en) | 2005-07-01 | 2011-11-29 | Chubu University Educational Foundation | Model animal causing the white hair development and methods relating thereto |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2001060151A1 (fr) | 2001-08-23 |
AU2000251092A1 (en) | 2001-08-27 |
CA2400966C (en) | 2009-05-19 |
US7105717B1 (en) | 2006-09-12 |
CA2400966A1 (en) | 2001-08-23 |
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Legal Events
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---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051017 |
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A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060224 |