JP2001213891A - １，５−ｄ−アンヒドロフルクトースの糖供与体としての用途 - Google Patents
１，５−ｄ−アンヒドロフルクトースの糖供与体としての用途Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースおよび
１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖として含
む糖鎖の糖供与体、特にアミノ化合物への糖供与体とし
ての用途を提供すること。 【解決手段】 １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースま
たは１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖とし
て含有する糖鎖の糖供与体としての用途、特に蛋白質の
アミノ基、ペプチドのアミノ基またはアミノ酸のアミノ
基への糖供与体としての用途。
１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖として含
む糖鎖の糖供与体、特にアミノ化合物への糖供与体とし
ての用途を提供すること。 【解決手段】 １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースま
たは１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖とし
て含有する糖鎖の糖供与体としての用途、特に蛋白質の
アミノ基、ペプチドのアミノ基またはアミノ酸のアミノ
基への糖供与体としての用途。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを構成糖として含有する糖鎖の糖供与体としての
用途に関する。さらに詳しくは、１,５−Ｄ−アンヒド
ロフルクトースまたはそれを構成糖として含有する糖鎖
をアミノ化合物のアミノ基、特に、蛋白質、ペプチドあ
るいはアミノ酸のアミノ基への糖供与体として使用する
用途に関する。
ドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを構成糖として含有する糖鎖の糖供与体としての
用途に関する。さらに詳しくは、１,５−Ｄ−アンヒド
ロフルクトースまたはそれを構成糖として含有する糖鎖
をアミノ化合物のアミノ基、特に、蛋白質、ペプチドあ
るいはアミノ酸のアミノ基への糖供与体として使用する
用途に関する。
【０００２】１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースは、
担子菌などの微生物あるいは紅藻などの植物組織に存在
する酵素、α−１,４−グルカンリアーゼの作用により
澱粉あるいは澱粉分解物を基質として生産することがで
きる。１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースはグルコー
スが脱水した興味ある特異な構造をしている。これまで
の解析の結果から、グルコース等の他の単糖類に比較し
て反応性が高いことが明らかとなっている。
担子菌などの微生物あるいは紅藻などの植物組織に存在
する酵素、α−１,４−グルカンリアーゼの作用により
澱粉あるいは澱粉分解物を基質として生産することがで
きる。１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースはグルコー
スが脱水した興味ある特異な構造をしている。これまで
の解析の結果から、グルコース等の他の単糖類に比較し
て反応性が高いことが明らかとなっている。
【０００３】グルコースなど還元性を持つ糖質が、アミ
ノ酸や蛋白質などのアミノ基と反応してアミノカルボニ
ル反応物質をつくることは以前より知られている。
ノ酸や蛋白質などのアミノ基と反応してアミノカルボニ
ル反応物質をつくることは以前より知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、１,
５−Ｄ−アンヒドロフルクトースおよび１,５−Ｄ−ア
ンヒドロフルクトースを構成糖として含む糖鎖の糖供与
体、特にアミノ化合物への糖供与体としての用途を提供
することにある。
５−Ｄ−アンヒドロフルクトースおよび１,５−Ｄ−ア
ンヒドロフルクトースを構成糖として含む糖鎖の糖供与
体、特にアミノ化合物への糖供与体としての用途を提供
することにある。
【０００５】本発明の他の目的は、凍結乾燥により糖供
与体としての用途を実現する、糖受容体が特に熱に敏感
な化合物であるときに好適な、糖供与方法を提供するこ
とにある。
与体としての用途を実現する、糖受容体が特に熱に敏感
な化合物であるときに好適な、糖供与方法を提供するこ
とにある。
【０００６】本発明のさらに他の目的および利点は、以
下の説明から明らかになろう。
下の説明から明らかになろう。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、本発明
の上記目的および利点は、第１に、１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを構成糖として含有する糖鎖の糖供与体としての
用途によって達成される。
の上記目的および利点は、第１に、１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを構成糖として含有する糖鎖の糖供与体としての
用途によって達成される。
【０００８】また、本発明の上記目的および利点は、第
２に、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは１,５
−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖として含有する
糖鎖をアミノ化合物のアミノ基、特に、蛋白質のアミノ
基、ペプチドのアミノ基またはアミノ酸のアミノ基への
糖供与体としての用途によって達成される。
２に、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは１,５
−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖として含有する
糖鎖をアミノ化合物のアミノ基、特に、蛋白質のアミノ
基、ペプチドのアミノ基またはアミノ酸のアミノ基への
糖供与体としての用途によって達成される。
【０００９】さらに、本発明の上記目的および利点は、
第３に、蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸と、１,５−
Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースを構成糖として含有する糖鎖とを凍結
乾燥せしめて糖で置換されたアミノ基を持つアミノ化合
物、蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸を生成せしめるこ
とを特徴とする、蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸に糖
を供与する方法によって達成される。
第３に、蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸と、１,５−
Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースを構成糖として含有する糖鎖とを凍結
乾燥せしめて糖で置換されたアミノ基を持つアミノ化合
物、蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸を生成せしめるこ
とを特徴とする、蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸に糖
を供与する方法によって達成される。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明で用いられる１,５−Ｄ−
アンヒドロフルクトースは澱粉やグリコーゲンをα−
１,４−グルカンリアーゼで分解して得られる。
アンヒドロフルクトースは澱粉やグリコーゲンをα−
１,４−グルカンリアーゼで分解して得られる。
【００１１】α−１,４グルカンリアーゼは海藻やきの
こに含まれることが報告されている。本発明者らは海藻
オゴノリよりα−１,４−グルカンリアーゼを精製し、
この酵素を澱粉（例えば、ワキシーコーンスターチ）に
作用させ１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを合成し
た。この１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを精製し
純度９９％以上の１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
として用いた。
こに含まれることが報告されている。本発明者らは海藻
オゴノリよりα−１,４−グルカンリアーゼを精製し、
この酵素を澱粉（例えば、ワキシーコーンスターチ）に
作用させ１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを合成し
た。この１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを精製し
純度９９％以上の１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
として用いた。
【００１２】一方、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトー
スを構成糖として含む糖鎖は、オリゴ糖あるいは多糖類
等と１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースとを糖転移触
媒の存在下に接触をせしめて、多糖類を構成する単糖単
位もしくは部分糖鎖単位を１,５−Ｄ−アンヒドロフル
クトースへ転移せしめることによって製造することがで
きる。
スを構成糖として含む糖鎖は、オリゴ糖あるいは多糖類
等と１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースとを糖転移触
媒の存在下に接触をせしめて、多糖類を構成する単糖単
位もしくは部分糖鎖単位を１,５−Ｄ−アンヒドロフル
クトースへ転移せしめることによって製造することがで
きる。
【００１３】多糖類としては、例えばグルカン類が好ま
しく用いられる。これらのうち、シクロデキストリン、
澱粉、可溶性澱粉、マルトデキストリンの如きα−１,
４−グルカン鎖、α−１,６−グルカン鎖を持つ糖類お
よびその誘導体がさらに好ましい。
しく用いられる。これらのうち、シクロデキストリン、
澱粉、可溶性澱粉、マルトデキストリンの如きα−１,
４−グルカン鎖、α−１,６−グルカン鎖を持つ糖類お
よびその誘導体がさらに好ましい。
【００１４】これらの原料は糖転移触媒の存在下に接触
せしめられる。糖転移触媒としては、例えばシクロデキ
ストリン合成酵素、α−グリコシダーゼ等糖転移活性を
有する酵素を挙げることができる。
せしめられる。糖転移触媒としては、例えばシクロデキ
ストリン合成酵素、α−グリコシダーゼ等糖転移活性を
有する酵素を挙げることができる。
【００１５】例えば糖鎖合成の酵素反応は１,５−Ｄ−
アンヒドロフルクトースと澱粉あるいはシクロデキスト
リン等のα−１,４−グルカンにシクロデキストリン合
成酵素を作用させることによって行うことができる。シ
クロデキストリン合成酵素はシクロデキストリン合成の
他に糖転移反応を触媒する。従って、１,５−Ｄ−アン
ヒドロフルクトースとα−１,４−グルカンの基質にこ
の酵素を作用させると、１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースに種々の重合度の糖を転移し１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースを構成糖に持つ糖鎖を合成することが
できる。
アンヒドロフルクトースと澱粉あるいはシクロデキスト
リン等のα−１,４−グルカンにシクロデキストリン合
成酵素を作用させることによって行うことができる。シ
クロデキストリン合成酵素はシクロデキストリン合成の
他に糖転移反応を触媒する。従って、１,５−Ｄ−アン
ヒドロフルクトースとα−１,４−グルカンの基質にこ
の酵素を作用させると、１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースに種々の重合度の糖を転移し１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースを構成糖に持つ糖鎖を合成することが
できる。
【００１６】上記の糖鎖合成反応は、好ましくは、水性
媒体中で実施される。水性媒体としては、水あるいは場
合により水と水混和性有機媒体例えばアルコールからな
る混合媒体が用いられる。反応温度およびｐＨは使用す
る糖転移触媒の種類により至適値が異なるが、例えば１
０〜６５℃および２〜８のｐＨの範囲で実施することが
できる。
媒体中で実施される。水性媒体としては、水あるいは場
合により水と水混和性有機媒体例えばアルコールからな
る混合媒体が用いられる。反応温度およびｐＨは使用す
る糖転移触媒の種類により至適値が異なるが、例えば１
０〜６５℃および２〜８のｐＨの範囲で実施することが
できる。
【００１７】また、原料である基質の濃度は、例えば１
〜４０ｇ／１００ｍｌであることができる。反応終了
後、通常、使用した酵素を失活させたのち、あるいは、
酵素を担体に固定化して反応を行った場合は、反応液が
酵素との接触を終了した後、常法に従い、生成物を分離
することができる。かくして、構成糖に１,５−Ｄ−ア
ンヒドロフルクトースを含有する糖鎖（糖分子鎖）が製
造される。
〜４０ｇ／１００ｍｌであることができる。反応終了
後、通常、使用した酵素を失活させたのち、あるいは、
酵素を担体に固定化して反応を行った場合は、反応液が
酵素との接触を終了した後、常法に従い、生成物を分離
することができる。かくして、構成糖に１,５−Ｄ−ア
ンヒドロフルクトースを含有する糖鎖（糖分子鎖）が製
造される。
【００１８】構成糖に１,５−Ｄ−アンヒドロフルクト
ースを含有する糖鎖としては、１,５−Ｄ−アンヒドロ
フルクトース以外の部分がマルトデキストリン糖鎖であ
ることが好ましく、糖鎖の中で１,５−Ｄ−アンヒドロ
フルクトースが還元末端に位置するのがさらに好まし
い。特に下記式 Ｇ−（Ｇ）n−ＡＦ ここで、Ｇはグルコース骨格であり、ＡＦは１,５−Ｄ
−アンヒドロフルクトース骨格であり、そしてｎは０〜
２０の数であり、さらに、上記式に示すいずれのグルコ
ースにも側鎖としてグルコースがグリコシド結合してい
てもよい、で表わされる糖鎖が好ましく提供される。
ースを含有する糖鎖としては、１,５−Ｄ−アンヒドロ
フルクトース以外の部分がマルトデキストリン糖鎖であ
ることが好ましく、糖鎖の中で１,５−Ｄ−アンヒドロ
フルクトースが還元末端に位置するのがさらに好まし
い。特に下記式 Ｇ−（Ｇ）n−ＡＦ ここで、Ｇはグルコース骨格であり、ＡＦは１,５−Ｄ
−アンヒドロフルクトース骨格であり、そしてｎは０〜
２０の数であり、さらに、上記式に示すいずれのグルコ
ースにも側鎖としてグルコースがグリコシド結合してい
てもよい、で表わされる糖鎖が好ましく提供される。
【００１９】本発明において、１,５−Ｄ−アンヒドロ
フルクトースまたはそれを構成糖として含有する糖鎖
は、糖供与体として用いられる。すなわち、例えばアミ
ノ基を有する化合物のアミノ基と反応して、１，５−D
−アンヒドロフルクトースまたはそれを含むより高次の
糖鎖からなる基を置換基とするアミノ基を与える。
フルクトースまたはそれを構成糖として含有する糖鎖
は、糖供与体として用いられる。すなわち、例えばアミ
ノ基を有する化合物のアミノ基と反応して、１，５−D
−アンヒドロフルクトースまたはそれを含むより高次の
糖鎖からなる基を置換基とするアミノ基を与える。
【００２０】アミノ基を有する化合物としては、例え
ば、エチルアミン、トリエチルアミン、コリン、エタノ
ールアミン等アミン類、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミン等の脂質、グルコサミン、ガ
ラクトサミン等のアミノ糖、アデニン、グアニン、シト
シン等の塩基およびその誘導体、その他リボフラビン、
フラビンモノヌクレオチド、３−ヒドロキシアントラニ
ル酸等の抗酸化活性を有するアミノ化合物、ドーパミ
ン、アドレナリン、ノルアドレナリン等のカテコールア
ミンを挙げることができる。さらに、好適な化合物とし
て、例えば蛋白質、ペプチドおよびアミノ酸を挙げるこ
とができる。すなわち、蛋白質またはペプチドの側鎖ア
ミノ基あるいは末端アミノ基およびアミノ酸のアミノ基
へ付加反応することができる。
ば、エチルアミン、トリエチルアミン、コリン、エタノ
ールアミン等アミン類、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミン等の脂質、グルコサミン、ガ
ラクトサミン等のアミノ糖、アデニン、グアニン、シト
シン等の塩基およびその誘導体、その他リボフラビン、
フラビンモノヌクレオチド、３−ヒドロキシアントラニ
ル酸等の抗酸化活性を有するアミノ化合物、ドーパミ
ン、アドレナリン、ノルアドレナリン等のカテコールア
ミンを挙げることができる。さらに、好適な化合物とし
て、例えば蛋白質、ペプチドおよびアミノ酸を挙げるこ
とができる。すなわち、蛋白質またはペプチドの側鎖ア
ミノ基あるいは末端アミノ基およびアミノ酸のアミノ基
へ付加反応することができる。
【００２１】アミノ酸としては、蛋白質アミノ酸および
非蛋白質アミノ酸のいずれでもよい。蛋白質の構成アミ
ノ酸であるα−アミノ酸が好ましい。α−アミノ酸とし
ては、例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、
イソロイシン、セリン、トレオニン、アスパラギン、ア
スパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リジン、ア
ルギニン、システイン、メチオニン、フェニルアラニ
ン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプ
トファン、ヒスチジン等を挙げることができる。非蛋白
質アミノ酸としては、例えばβ−アラニン、γ−アミノ
酪酸、オルニチン、１−メチルヒスチジン、３−メチル
ヒスチジン等を挙げることができる。
非蛋白質アミノ酸のいずれでもよい。蛋白質の構成アミ
ノ酸であるα−アミノ酸が好ましい。α−アミノ酸とし
ては、例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、
イソロイシン、セリン、トレオニン、アスパラギン、ア
スパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リジン、ア
ルギニン、システイン、メチオニン、フェニルアラニ
ン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプ
トファン、ヒスチジン等を挙げることができる。非蛋白
質アミノ酸としては、例えばβ−アラニン、γ−アミノ
酪酸、オルニチン、１−メチルヒスチジン、３−メチル
ヒスチジン等を挙げることができる。
【００２２】ペプチドとしては、上記の如きα−アミノ
酸同士が複数個分子間でペプチド結合した化合物が挙げ
られる。例えばアラニル−グリシンの如きジペプチド、
グリシル−アラニル−ロイシン、グルタチオンの如きト
リペプチド、その他テトラペプチドの如き種々のオリゴ
ペプチドを挙げることができる。
酸同士が複数個分子間でペプチド結合した化合物が挙げ
られる。例えばアラニル−グリシンの如きジペプチド、
グリシル−アラニル−ロイシン、グルタチオンの如きト
リペプチド、その他テトラペプチドの如き種々のオリゴ
ペプチドを挙げることができる。
【００２３】蛋白質としては、例えばインシュリン、プ
ロタミン類、ヘモグロビン、アルブミン等種々のタンパ
ク質を挙げることができる。
ロタミン類、ヘモグロビン、アルブミン等種々のタンパ
ク質を挙げることができる。
【００２４】１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまた
は１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む糖鎖が結
合したアミノ化合物の合成は１,５−Ｄ−アンヒドロフ
ルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
を構成糖として含む糖鎖とアミノ化合物を水溶液とし、
次いでそれを凍結乾燥することにより得られる。例え
ば、２％グリシン水溶液と２％１,５−Ｄ−アンヒドロ
フルクトース溶液を１：１で混合しｐＨ７.５に調整
後、凍結乾燥し３０℃に３日間放置するとすると反応物
中の遊離のアミノ基は２０％に減少した。従って、この
結果は、グリシンの８０％に１,５−Ｄ−アンヒドロフ
ルクトースが結合したことを示している（図７参照）。
は１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む糖鎖が結
合したアミノ化合物の合成は１,５−Ｄ−アンヒドロフ
ルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
を構成糖として含む糖鎖とアミノ化合物を水溶液とし、
次いでそれを凍結乾燥することにより得られる。例え
ば、２％グリシン水溶液と２％１,５−Ｄ−アンヒドロ
フルクトース溶液を１：１で混合しｐＨ７.５に調整
後、凍結乾燥し３０℃に３日間放置するとすると反応物
中の遊離のアミノ基は２０％に減少した。従って、この
結果は、グリシンの８０％に１,５−Ｄ−アンヒドロフ
ルクトースが結合したことを示している（図７参照）。
【００２５】反応生成物の遊離のアミノ基はトリニトロ
ベンゼンスルホン酸法で定量した。すなわち、反応生成
物が溶解した溶液1ｍｌに４％炭酸水素ナトリウム、
０．１％トリニトロベンゼンスルホン酸をそれぞれ１ｍ
ｌ加えて暗所下４０℃で２時間反応させた後、３４５ｎ
ｍの吸光度を測定し分子吸光係数より遊離のアミノ基を
求めた。
ベンゼンスルホン酸法で定量した。すなわち、反応生成
物が溶解した溶液1ｍｌに４％炭酸水素ナトリウム、
０．１％トリニトロベンゼンスルホン酸をそれぞれ１ｍ
ｌ加えて暗所下４０℃で２時間反応させた後、３４５ｎ
ｍの吸光度を測定し分子吸光係数より遊離のアミノ基を
求めた。
【００２６】本発明により製造される、糖で置換された
アミノ基を持つ蛋白質等は、蛋白質等としての本来の性
質を維持したまま例えばｐＨ依存性等を変えたものとし
て、種々の用途に用いられることが期待される。
アミノ基を持つ蛋白質等は、蛋白質等としての本来の性
質を維持したまま例えばｐＨ依存性等を変えたものとし
て、種々の用途に用いられることが期待される。
【００２７】以下、実施例により本発明をさらに詳述す
る。
る。
【００２８】
【実施例】実施例１ １０ｍｇ／ｍｌの牛血清アルブミン７５ｍｌと１０ｍｇ
／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは２
０ｍｇ／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを
含む重合度２のオリゴ糖２５ｍｌを混合してｐＨ７.５
に調整した後、凍結乾燥し３０℃で３日間放置した。凍
結乾燥終了時点からの各タンパク質のアミノ基の１,５
−Ｄ−アンヒドロフルクトースによる修飾率を図１に示
す。この結果から明らかなとおり、１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースおよび１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを含む重合度２のオリゴ糖がコントロールとして
用いたグルコースに比較してタンパク質である牛血清ア
ルブミンに効率的に転移されることがわかる。さらに、
修飾された牛血清アルブミンをＳＤＳゲル電気泳動で調
べた結果、図２に示すように１,５−Ｄ−アンヒドロフ
ルクトースおよび１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
を含む重合度２のオリゴ糖で修飾したものは移動度が小
さくなった。このことは糖が転移してタンパク質の分子
量が大きくなったことを示している。
／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは２
０ｍｇ／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを
含む重合度２のオリゴ糖２５ｍｌを混合してｐＨ７.５
に調整した後、凍結乾燥し３０℃で３日間放置した。凍
結乾燥終了時点からの各タンパク質のアミノ基の１,５
−Ｄ−アンヒドロフルクトースによる修飾率を図１に示
す。この結果から明らかなとおり、１,５−Ｄ−アンヒ
ドロフルクトースおよび１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを含む重合度２のオリゴ糖がコントロールとして
用いたグルコースに比較してタンパク質である牛血清ア
ルブミンに効率的に転移されることがわかる。さらに、
修飾された牛血清アルブミンをＳＤＳゲル電気泳動で調
べた結果、図２に示すように１,５−Ｄ−アンヒドロフ
ルクトースおよび１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
を含む重合度２のオリゴ糖で修飾したものは移動度が小
さくなった。このことは糖が転移してタンパク質の分子
量が大きくなったことを示している。
【００２９】実施例２ 実施例１において、１０ｍｇ／ｍｌの牛血清アルブミン
に代えて１０ｍｇ／ｍｌの卵白アルブミンを用い、その
他は実施例１と同様に実施した。結果を図３に示した。
に代えて１０ｍｇ／ｍｌの卵白アルブミンを用い、その
他は実施例１と同様に実施した。結果を図３に示した。
【００３０】実施例３ 実施例１において、１０ｍｇ／ｍｌの牛血清アルブミン
に代えて１０ｍｇ／ｍｌの牛血漿γ−グロブリンを用
い、その他は実施例１と同様に実施した。結果を図４に
示した。
に代えて１０ｍｇ／ｍｌの牛血漿γ−グロブリンを用
い、その他は実施例１と同様に実施した。結果を図４に
示した。
【００３１】実施例４ ０.１ｍｇ／ｍｌのグリシル−グルタミン酸７５ｍｌと
１０ｍｇ／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
または２０ｍｇ／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを含む重合度２のオリゴ糖２５ｍｌとを混合して
ｐＨ７.５に調整した後、凍結乾燥し３０℃で３日間放
置した。凍結乾燥終了時点からのこのペプチドのアミノ
基の１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースによる修飾率
を図５に示す。この結果から明らかなとおり、経時的に
１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−
アンヒドロフルクトースを含む重合度２のオリゴ糖によ
るこのペプチドのアミノ基の修飾がグルコースに比較し
て効率的に進行していることがわかる。
１０ｍｇ／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース
または２０ｍｇ／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルク
トースを含む重合度２のオリゴ糖２５ｍｌとを混合して
ｐＨ７.５に調整した後、凍結乾燥し３０℃で３日間放
置した。凍結乾燥終了時点からのこのペプチドのアミノ
基の１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースによる修飾率
を図５に示す。この結果から明らかなとおり、経時的に
１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−
アンヒドロフルクトースを含む重合度２のオリゴ糖によ
るこのペプチドのアミノ基の修飾がグルコースに比較し
て効率的に進行していることがわかる。
【００３２】実施例５ 実施例４において、０.１ｍｇ／ｍｌのグリシル−グル
タミン酸に代えて０.１ｍｇ／ｍｌのメチオニル−セリ
ニル−アスパラギン酸を用い、その他は実施例４と同様
に実施した。結果を図６に示した。
タミン酸に代えて０.１ｍｇ／ｍｌのメチオニル−セリ
ニル−アスパラギン酸を用い、その他は実施例４と同様
に実施した。結果を図６に示した。
【００３３】実施例６ ０.１ｍｇ／ｍｌのグリシン７５ｍｌと１０ｍｇ／ｍｌ
の１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは２０ｍｇ
／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重
合度２のオリゴ糖２５ｍｌを混合してｐＨ７.５に調整
した後、凍結乾燥し３０℃で３日間放置した。凍結乾燥
終了時点からのこのアミノ酸のアミノ基の１,５−Ｄ−
アンヒドロフルクトースによる修飾率を図７に示す。こ
の結果から明らかなとおり、経時的に１,５−Ｄ−アン
ヒドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフル
クトースを含む重合度２のオリゴ糖によるアミノ酸のア
ミノ基の修飾がグルコースに比較して効率的に進行して
いることがわかる。
の１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは２０ｍｇ
／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重
合度２のオリゴ糖２５ｍｌを混合してｐＨ７.５に調整
した後、凍結乾燥し３０℃で３日間放置した。凍結乾燥
終了時点からのこのアミノ酸のアミノ基の１,５−Ｄ−
アンヒドロフルクトースによる修飾率を図７に示す。こ
の結果から明らかなとおり、経時的に１,５−Ｄ−アン
ヒドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−アンヒドロフル
クトースを含む重合度２のオリゴ糖によるアミノ酸のア
ミノ基の修飾がグルコースに比較して効率的に進行して
いることがわかる。
【００３４】実施例７ 実施例６において、０.１ｍｇ／ｍｌのグリシンに代え
て０.１ｍｇ／ｍｌのヒスチジンを用い、その他は実施
例６と同様に実施した。結果を図８に示した。
て０.１ｍｇ／ｍｌのヒスチジンを用い、その他は実施
例６と同様に実施した。結果を図８に示した。
【図１】グルコース、１,５−Ｄ−アンヒドロフラクト
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖による牛血清アルブミンのアミノ基の修
飾。
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖による牛血清アルブミンのアミノ基の修
飾。
【図２】１,５−Ｄ−アンヒドロフラクトースと１,５−
Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合度２のオリゴ糖
で修飾した牛血清アルブミンのＳＤＳゲル電気泳動によ
る分子量測定。未修飾またはグルコースと反応させた牛
血清アルブミンとの比較。図左の数値は分子量をｋＤａ
単位で表示している。
Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合度２のオリゴ糖
で修飾した牛血清アルブミンのＳＤＳゲル電気泳動によ
る分子量測定。未修飾またはグルコースと反応させた牛
血清アルブミンとの比較。図左の数値は分子量をｋＤａ
単位で表示している。
【図３】グルコース、１,５−Ｄ−アンヒドロフラクト
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖による卵白アルブミンのアミノ基の修
飾。
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖による卵白アルブミンのアミノ基の修
飾。
【図４】グルコース、１,５−Ｄ−アンヒドロフラクト
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖による牛血漿γ−グロブリンのアミノ基
の修飾。
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖による牛血漿γ−グロブリンのアミノ基
の修飾。
【図５】グルコース、１,５−Ｄ−アンヒドロフラクト
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるグリシル−グルタミン酸のアミノ
基の修飾。
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるグリシル−グルタミン酸のアミノ
基の修飾。
【図６】グルコース、１,５−Ｄ−アンヒドロフラクト
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるメチオニル−セリニルーアスパラ
ギン酸のアミノ基の修飾。
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるメチオニル−セリニルーアスパラ
ギン酸のアミノ基の修飾。
【図７】グルコース、１,５−Ｄ−アンヒドロフラクト
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるグリシンのアミノ基の修飾。
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるグリシンのアミノ基の修飾。
【図８】グルコース、１,５−Ｄ−アンヒドロフラクト
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるヒスチジンのアミノ基の修飾。
ース、１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合
度２のオリゴ糖によるヒスチジンのアミノ基の修飾。
Ａ １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む重合度
２のオリゴ糖 Ｂ １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース Ｃ グルコース 図２中 レーン1：分子量マーカー レーン２：１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースと牛血
清アルブミンとの反応生成物 レーン３：グルコースと牛血清アルブミンとの反応生成
物 レーン４：１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む
重合度２のオリゴ糖と牛血清アルブミンとの反応生成物 レーン５：牛血清アルブミン
２のオリゴ糖 Ｂ １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトース Ｃ グルコース 図２中 レーン1：分子量マーカー レーン２：１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースと牛血
清アルブミンとの反応生成物 レーン３：グルコースと牛血清アルブミンとの反応生成
物 レーン４：１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを含む
重合度２のオリゴ糖と牛血清アルブミンとの反応生成物 レーン５：牛血清アルブミン
【手続補正書】
【提出日】平成１２年４月４日（２０００．４．４）
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 竹田 靖史 鹿児島県日置郡松元町春山1685−19 (72)発明者 安部 淳一 鹿児島県鹿児島市錦江台１丁目24−22 (72)発明者 室屋 賢康 鹿児島県鹿児島市南栄３−20 日本澱粉工 業株式会社内 (72)発明者 吉永 一浩 鹿児島県鹿児島市南栄３−20 日本澱粉工 業株式会社内 (72)発明者 藤末 真実 鹿児島県鹿児島市南栄３−20 日本澱粉工 業株式会社内 (72)発明者 石場 秀人 鹿児島県鹿児島市南栄３−20 日本澱粉工 業株式会社内 Ｆターム(参考） 4C057 AA17 BB02 BB03 BB04 BB07 JJ13 4H045 AA20 BA11 BA12 FA10
Claims (4)
- 【請求項１】 １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースま
たは１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖とし
て含有する糖鎖の糖供与体としての用途。 - 【請求項２】 １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースま
たは１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖とし
て含有する糖鎖のアミノ化合物のアミノ基への糖供与体
としての用途。 - 【請求項３】 １,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースま
たは１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースを構成糖とし
て含有する糖鎖を蛋白質のアミノ基、ペプチドのアミノ
基またはアミノ酸のアミノ基への糖供与体としての用
途。 - 【請求項４】 蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸と、
１,５−Ｄ−アンヒドロフルクトースまたは１,５−Ｄ−
アンヒドロフルクトースを構成糖として含有する糖鎖と
を凍結乾燥せしめて糖で置換されたアミノ基を持つ蛋白
質、ペプチドまたはアミノ酸を生成せしめることを特徴
とする、蛋白質、ペプチドまたはアミノ酸に糖を供与す
る方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000025540A JP2001213891A (ja) | 2000-02-02 | 2000-02-02 | １，５−ｄ−アンヒドロフルクトースの糖供与体としての用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000025540A JP2001213891A (ja) | 2000-02-02 | 2000-02-02 | １，５−ｄ−アンヒドロフルクトースの糖供与体としての用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001213891A true JP2001213891A (ja) | 2001-08-07 |
Family
ID=18551388
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000025540A Pending JP2001213891A (ja) | 2000-02-02 | 2000-02-02 | １，５−ｄ−アンヒドロフルクトースの糖供与体としての用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001213891A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001204490A (ja) * | 2000-01-26 | 2001-07-31 | 進 ▲桧▼作 | 構成糖に１，５−ｄ−アンヒドロフルクトースを含有する糖鎖 |
-
2000
- 2000-02-02 JP JP2000025540A patent/JP2001213891A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001204490A (ja) * | 2000-01-26 | 2001-07-31 | 進 ▲桧▼作 | 構成糖に１，５−ｄ−アンヒドロフルクトースを含有する糖鎖 |
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