JP2001186887A - サソリ毒由来の抗菌ペプチド - Google Patents
サソリ毒由来の抗菌ペプチドInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 サソリの一種である、パンディヌス インペ
レータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒
液から単離された、新規ペプチドの提供。 【解決手段】 その一つのペプチドが、次のアミノ酸配
列式： Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr で表わされるペプチドであり、他のペプチドが、次のア
ミノ酸配列式： Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp で表わされるペプチド、またはそのＣ−末端がアミド化
されたペプチドである。これらのペプチドは、抗菌活性
を有しており、抗菌剤として有用である。
レータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒
液から単離された、新規ペプチドの提供。 【解決手段】 その一つのペプチドが、次のアミノ酸配
列式： Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr で表わされるペプチドであり、他のペプチドが、次のア
ミノ酸配列式： Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp で表わされるペプチド、またはそのＣ−末端がアミド化
されたペプチドである。これらのペプチドは、抗菌活性
を有しており、抗菌剤として有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、サソリの一種であ
るパンディヌス インペレータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉ
ｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒由来の新規な抗菌ペプチドに関
する。
るパンディヌス インペレータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉ
ｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒由来の新規な抗菌ペプチドに関
する。
【０００２】
【従来の技術】サソリ類およびクモ類の毒液は、生理活
性成分の豊富な資源となっており、そのなかでも、ペプ
チド類は、脊椎動物および昆虫に対して有効な医薬の研
究、ならびに開発のために重要な化合物である。いくつ
かの研究によれば、クモ類の毒液には、細菌や真核細胞
に対して有効な、新規なペプチド性の毒成分が含まれて
いることが明らかにされている。
性成分の豊富な資源となっており、そのなかでも、ペプ
チド類は、脊椎動物および昆虫に対して有効な医薬の研
究、ならびに開発のために重要な化合物である。いくつ
かの研究によれば、クモ類の毒液には、細菌や真核細胞
に対して有効な、新規なペプチド性の毒成分が含まれて
いることが明らかにされている。
【０００３】最近、毒クモの一種であるＬｙｃｏｓａ
ｓｐ．の粗製毒液（ＹａｎおよびＡｄａｍｓ，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：２０５９−２０６６，１９
９８）から、また毒クモの一種であるＣｕｐｉｅｎｎｉ
ｕｓ ｓａｌｅｉの粗製毒液（Ｓ．Ｈａｅｂｅｒｌｉ
ら、Ｔｏｘｉｃｏｎ，３８：３７３−３８０，２００
０）から抗菌ペプチドが単離された。また、サソリの一
種であるＬｉｅｕｒｕｓｑｕｉｎｑｕｅｓｔｒｉａｔｕ
ｓ ｈｅｂｒａｅｕｓ（Ｓ．Ｃｏｃｉａｎｃｉｃｈら、
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ
ｍ．，１９４：１７−２２，１９９３）から、ならびに
Ａｎｄｒｏｃｔｏｎｕｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ（Ｌ．Ｅ
ｈｒｅｔ−Ｓａｂａｔｉｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２７１：２９５３７−２９５４４，１９９６）か
ら抗菌ペプチドが単離されている。しかしながら、これ
らの抗菌ペプチドは、サソリの血液リンパ液から単離さ
れたものである。
ｓｐ．の粗製毒液（ＹａｎおよびＡｄａｍｓ，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：２０５９−２０６６，１９
９８）から、また毒クモの一種であるＣｕｐｉｅｎｎｉ
ｕｓ ｓａｌｅｉの粗製毒液（Ｓ．Ｈａｅｂｅｒｌｉ
ら、Ｔｏｘｉｃｏｎ，３８：３７３−３８０，２００
０）から抗菌ペプチドが単離された。また、サソリの一
種であるＬｉｅｕｒｕｓｑｕｉｎｑｕｅｓｔｒｉａｔｕ
ｓ ｈｅｂｒａｅｕｓ（Ｓ．Ｃｏｃｉａｎｃｉｃｈら、
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ
ｍ．，１９４：１７−２２，１９９３）から、ならびに
Ａｎｄｒｏｃｔｏｎｕｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ（Ｌ．Ｅ
ｈｒｅｔ−Ｓａｂａｔｉｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，２７１：２９５３７−２９５４４，１９９６）か
ら抗菌ペプチドが単離されている。しかしながら、これ
らの抗菌ペプチドは、サソリの血液リンパ液から単離さ
れたものである。
【０００４】さらに、Ｒａｎａ種のカエルの皮膚（Ｍ．
Ｚａｓｌｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．，ＵＳＡ，８４：５４４９−５４５３，１９８７；
Ｊ．Ｍ．Ｐａｒｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２０５：９４８−９５４，１
９９４；Ｎ．Ｍｏｒｉｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１８９：１８４−
１９０，１９９２）から、ならびに、蛾の血液リンパ液
（Ｄ．Ｈｕｌｔｍａｒｋ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，１０６：７−１６，１９８０）から、同様の抗菌
活性、細胞溶解活性を有するペプチドが、いくつか単離
されている。
Ｚａｓｌｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．，ＵＳＡ，８４：５４４９−５４５３，１９８７；
Ｊ．Ｍ．Ｐａｒｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２０５：９４８−９５４，１
９９４；Ｎ．Ｍｏｒｉｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１８９：１８４−
１９０，１９９２）から、ならびに、蛾の血液リンパ液
（Ｄ．Ｈｕｌｔｍａｒｋ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，１０６：７−１６，１９８０）から、同様の抗菌
活性、細胞溶解活性を有するペプチドが、いくつか単離
されている。
【０００５】そして、これらのペプチドのうちのいくつ
かについては、病原性細胞に対する用途について、すで
に特許が付与されている（例えば、アメリカ特許第５，
６８６，５６３号；同第５，８８９，１４８号；同第
５，９１２，２３１号；同第５，９６２，４１０号）。
かについては、病原性細胞に対する用途について、すで
に特許が付与されている（例えば、アメリカ特許第５，
６８６，５６３号；同第５，８８９，１４８号；同第
５，９１２，２３１号；同第５，９６２，４１０号）。
【０００６】したがって、サソリ類の毒液より、病原性
細胞に対する作用を有する新規な抗菌ペプチドを単離す
ることは重要なことであるが、いまだに、そのようなペ
プチドを単離する試みはなされていなかった。
細胞に対する作用を有する新規な抗菌ペプチドを単離す
ることは重要なことであるが、いまだに、そのようなペ
プチドを単離する試みはなされていなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】上記の現状を鑑み、本
発明は、サソリの毒液より新規な抗菌ペプチドを単離し
て、医薬へ応用することを課題とする。
発明は、サソリの毒液より新規な抗菌ペプチドを単離し
て、医薬へ応用することを課題とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】かかる課題を解決するた
めに、本発明者らは、サソリの一種であるパンディヌス
インペレータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏ
ｒ）の粗製毒液より、新規な抗菌ペプチドを単離し、そ
の化学的な特徴を明らかにするとともに、その生物活性
について鋭意研究を行なった。その結果、抗菌活性なら
びに溶血活性を有する新規な２つのペプチドとして、配
列番号１で示されるペプチド（これをパンディトキシン
１と命名し、以下、Ｐｉｍ１と記載する場合もある）、
および配列番号２で示されるペプチド（これをパンディ
トキシン２と命名し、以下、Ｐｉｍ２と記載する場合も
ある）を単離し、このものが、ヒトならびに動物の病原
性細菌および細胞に対し有効なものであることを確認
し、本発明を完成させた。
めに、本発明者らは、サソリの一種であるパンディヌス
インペレータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏ
ｒ）の粗製毒液より、新規な抗菌ペプチドを単離し、そ
の化学的な特徴を明らかにするとともに、その生物活性
について鋭意研究を行なった。その結果、抗菌活性なら
びに溶血活性を有する新規な２つのペプチドとして、配
列番号１で示されるペプチド（これをパンディトキシン
１と命名し、以下、Ｐｉｍ１と記載する場合もある）、
および配列番号２で示されるペプチド（これをパンディ
トキシン２と命名し、以下、Ｐｉｍ２と記載する場合も
ある）を単離し、このものが、ヒトならびに動物の病原
性細菌および細胞に対し有効なものであることを確認
し、本発明を完成させた。
【０００９】したがって、本発明は、パンディヌス イ
ンペレータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）
の毒液より得られる、新規な抗菌ペプチドを提供する。
ンペレータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）
の毒液より得られる、新規な抗菌ペプチドを提供する。
【００１０】本発明は、その具体的な態様として、以下
のアミノ酸配列式: Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr で表わされる抗菌ペプチド（パンディトキシン１（Ｐａ
ｎｄｉｔｏｘｉｎ １）；Ｐｉｍ１）を提供する。
のアミノ酸配列式: Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr で表わされる抗菌ペプチド（パンディトキシン１（Ｐａ
ｎｄｉｔｏｘｉｎ １）；Ｐｉｍ１）を提供する。
【００１１】本発明は、さらに別な具体的態様として、
以下のアミノ酸配列式: Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp で表わされる抗菌ペプチド（パンディトキシン２（Ｐａ
ｎｄｉｔｏｘｉｎ ２）；Ｐｉｍ２）、またはそのＣ−
末端がアミド化されたペプチドを提供する。
以下のアミノ酸配列式: Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp で表わされる抗菌ペプチド（パンディトキシン２（Ｐａ
ｎｄｉｔｏｘｉｎ ２）；Ｐｉｍ２）、またはそのＣ−
末端がアミド化されたペプチドを提供する。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明が提供する抗菌ペプチド
は、サソリの一種であるパンディヌス インペレータ
（Ｐ．ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒液を、例えば、約１０
％のアセトニトリルを含む０．１％トリフルオロ酢酸
（以下、ＴＦＡと略す）含有水溶液で抽出し、粗抽出物
を得た後、次いで、この粗抽出物を逆相クロマトグラフ
ィーあるいはイオン交換クロマトグラフィーなど、常法
に従って単離、精製することにより、目的とするペプチ
ドを得ることができる。
は、サソリの一種であるパンディヌス インペレータ
（Ｐ．ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒液を、例えば、約１０
％のアセトニトリルを含む０．１％トリフルオロ酢酸
（以下、ＴＦＡと略す）含有水溶液で抽出し、粗抽出物
を得た後、次いで、この粗抽出物を逆相クロマトグラフ
ィーあるいはイオン交換クロマトグラフィーなど、常法
に従って単離、精製することにより、目的とするペプチ
ドを得ることができる。
【００１３】その結果、本発明者らは、以下の２種類の
抗菌ペプチドを得ることに成功した。
抗菌ペプチドを得ることに成功した。
【００１４】パンディトキシン１（Ｐｉｍ１）［Ｐａｎ
ｄｉｔｏｘｉｎ １］ Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr
ｄｉｔｏｘｉｎ １］ Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr
【００１５】パンディトキシン２（Ｐｉｍ２）［Ｐａｎ
ｄｉｔｏｘｉｎ ２］ Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp
ｄｉｔｏｘｉｎ ２］ Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp
【００１６】パンディトキシン１は、以下の表１のアミ
ノ酸配列式に示すように、蛾の一種であるＨｙａｌｏｐ
ｈｏｒａ ｃｅｃｒｏｐｉａから単離されたセクロピン
（Ｃｅｃｒｏｐｉｎ）、およびカエルの一種であるＰｈ
ｙｌｌｏｍｅｄｕｓａ ｓａｕｖａｇｉｉから単離され
たデルマセプチン（Ｄｅｒｍａｓｅｐｔｉｎ）と、高い
相同性（ホモロジー）を示した。
ノ酸配列式に示すように、蛾の一種であるＨｙａｌｏｐ
ｈｏｒａ ｃｅｃｒｏｐｉａから単離されたセクロピン
（Ｃｅｃｒｏｐｉｎ）、およびカエルの一種であるＰｈ
ｙｌｌｏｍｅｄｕｓａ ｓａｕｖａｇｉｉから単離され
たデルマセプチン（Ｄｅｒｍａｓｅｐｔｉｎ）と、高い
相同性（ホモロジー）を示した。
【００１７】また、パンディトキシン２は、カエルの一
種であるＲａｎａ ｒｕｇｏｓａの皮膚から単離された
抗菌ペプチドである、ガエグリン−５（Ｇａｅｇｕｒｉ
ｎ−５）（Ｊ．Ｍ．Ｐａｒｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２０５：９４８−９
５４，１９９４）、ならびにカエルの一種であるＲａｎ
ａ ｂｒｅｖｉｐｏｄａ ｐｏｒｓａから単離された抗
菌ペプチドであるブレビニン−１（Ｂｒｅｖｉｎｉｎ−
１）（Ｎ．Ｍｏｒｉｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１８９：１８４−１
９０，１９９２）と、高い相同性（ホモロジー）を示し
た。
種であるＲａｎａ ｒｕｇｏｓａの皮膚から単離された
抗菌ペプチドである、ガエグリン−５（Ｇａｅｇｕｒｉ
ｎ−５）（Ｊ．Ｍ．Ｐａｒｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，２０５：９４８−９
５４，１９９４）、ならびにカエルの一種であるＲａｎ
ａ ｂｒｅｖｉｐｏｄａ ｐｏｒｓａから単離された抗
菌ペプチドであるブレビニン−１（Ｂｒｅｖｉｎｉｎ−
１）（Ｎ．Ｍｏｒｉｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１８９：１８４−１
９０，１９９２）と、高い相同性（ホモロジー）を示し
た。
【００１８】
【表１】表１：シークエンス アライメント（Sequence
alignment）
alignment）
【００１９】シークエンス アライメント（Ｓｅｑｕｅ
ｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）は、Ｃｌｕｓｔａｌｘに
より、ＰｒｏＭＳＥＤプログラムによるＰＡＭ２５０タ
ンパク重量マトリックスを使用して行なった。なお、解
析のために、配列の順序を、アライメントの後修正して
ある。配列のホモロジーは、ＰＡＭ２５０の結果をもと
にＰｉｍ１およびＰｉｍ２に対する割合を百分率で表わ
した。また、配列式中のギャップ（「−」で表示する）
は、配列式同士に近似性をもたせるために挿入した。
ｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）は、Ｃｌｕｓｔａｌｘに
より、ＰｒｏＭＳＥＤプログラムによるＰＡＭ２５０タ
ンパク重量マトリックスを使用して行なった。なお、解
析のために、配列の順序を、アライメントの後修正して
ある。配列のホモロジーは、ＰＡＭ２５０の結果をもと
にＰｉｍ１およびＰｉｍ２に対する割合を百分率で表わ
した。また、配列式中のギャップ（「−」で表示する）
は、配列式同士に近似性をもたせるために挿入した。
【００２０】本発明が提供するペプチドにおいては、ア
ミノ酸の一部欠失、付加、置換、さらにそのＣ−末端が
アミド化されたものであっても、本発明の天然のペプチ
ドと同じような薬理活性を示す限り、それらは本発明の
ペプチドの技術範囲に包含される。そのようなペプチド
は、また、抗菌剤としての使用に関連する本発明の技術
的範囲中に包含されるものでもある。
ミノ酸の一部欠失、付加、置換、さらにそのＣ−末端が
アミド化されたものであっても、本発明の天然のペプチ
ドと同じような薬理活性を示す限り、それらは本発明の
ペプチドの技術範囲に包含される。そのようなペプチド
は、また、抗菌剤としての使用に関連する本発明の技術
的範囲中に包含されるものでもある。
【００２１】本発明が提供するペプチドは、通常のペプ
チド合成機（例えば、アプライドバイオシステムズ社か
ら入手可能な、４３３Ａ型ペプチド合成機）を用いた固
相法により、容易に合成することができるほか、通常の
遺伝子工学による手法により得ることができる。
チド合成機（例えば、アプライドバイオシステムズ社か
ら入手可能な、４３３Ａ型ペプチド合成機）を用いた固
相法により、容易に合成することができるほか、通常の
遺伝子工学による手法により得ることができる。
【００２２】本発明が提供するペプチドを医薬として使
用する場合には、その剤形は特に限定されず、経口的あ
るいは非経口的に投与することができる。また、本発明
のペプチドは種々の剤形の製剤とすることができ、その
ようなものとしては、注射剤、点滴剤、粉末剤、顆粒
剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、腸溶製剤、吸入
剤、トローチ剤、軟膏剤、坐剤ならびに舌下錠等をあげ
ることができる。これらの製剤は、患者の状態により、
単独あるいは併用で投与することができる。その製剤化
としては、製剤学的に慣用されている添加剤（例えば、
賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、香味剤等）と共に、
所望の剤形にすることで行われる。
用する場合には、その剤形は特に限定されず、経口的あ
るいは非経口的に投与することができる。また、本発明
のペプチドは種々の剤形の製剤とすることができ、その
ようなものとしては、注射剤、点滴剤、粉末剤、顆粒
剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、腸溶製剤、吸入
剤、トローチ剤、軟膏剤、坐剤ならびに舌下錠等をあげ
ることができる。これらの製剤は、患者の状態により、
単独あるいは併用で投与することができる。その製剤化
としては、製剤学的に慣用されている添加剤（例えば、
賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、香味剤等）と共に、
所望の剤形にすることで行われる。
【００２３】本発明のペプチドを、医薬品としてヒトに
投与する場合には、その投与量は特に限定されず、ペプ
チドの活性の程度、患者の年齢、性別、体重等、あるい
は、患者の状態により決定することができる。例えば、
本発明のペプチドを成人に投与する場合には、経口投与
の場合には、有効成分として通常０．１〜１０００ｍｇ
／日の範囲内で、また非経口投与の場合には、０．０１
〜１００ｍｇ／日の範囲内で、適宜選択し投与すること
ができる。
投与する場合には、その投与量は特に限定されず、ペプ
チドの活性の程度、患者の年齢、性別、体重等、あるい
は、患者の状態により決定することができる。例えば、
本発明のペプチドを成人に投与する場合には、経口投与
の場合には、有効成分として通常０．１〜１０００ｍｇ
／日の範囲内で、また非経口投与の場合には、０．０１
〜１００ｍｇ／日の範囲内で、適宜選択し投与すること
ができる。
【００２４】
【実施例】以下に本発明を実施例によりさらに詳細に説
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。なお、以下の実施例においては、パンディヌス
インペレータ（Ｐ．ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒液は、
電気刺激により採取した。トリプシン（Ｅ．Ｃ．３．
４．２１．４）およびエンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃ
（Ｅ．Ｃ．３．４．２１．１９）の酵素は、シグマ社の
ものを使用し、また、マガイニン１（Ｍａｇａｉｎｉｎ
１）は、ペプチド研究所（大阪、日本）より購入し
た。
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。なお、以下の実施例においては、パンディヌス
インペレータ（Ｐ．ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒液は、
電気刺激により採取した。トリプシン（Ｅ．Ｃ．３．
４．２１．４）およびエンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃ
（Ｅ．Ｃ．３．４．２１．１９）の酵素は、シグマ社の
ものを使用し、また、マガイニン１（Ｍａｇａｉｎｉｎ
１）は、ペプチド研究所（大阪、日本）より購入し
た。
【００２５】実施例１：精製および配列の決定 ａ）抗菌性毒素（抗菌ペプチド）の単離 パンディヌス インペレータ（Ｐ．ｉｍｐｅｒａｔｏ
ｒ）の毒液（１００μｌ）を、１０％のアセトニトリル
を含む０．１％ＴＦＡ含有水溶液に溶解し、以下の分画
操作を行なう前に、１４，０００×ｇで５分間遠心分離
に付し、不溶物を除いた。得られた上清液を、０．１％
ＴＦＡ水溶液で平衡化させた逆相セミ分取Ｃ18カラム
（１０×２５０ｍｍ）を用い、流速２ｍｌ／ｍｉｎで、
０．１％ＴＦＡ−アセトニトリル溶液を用いた６０分間
で０％から６０％のアセトニトリルの直線濃度勾配で、
２１５ｎｍの紫外吸収をモニターしながら、溶出を行っ
た。
ｒ）の毒液（１００μｌ）を、１０％のアセトニトリル
を含む０．１％ＴＦＡ含有水溶液に溶解し、以下の分画
操作を行なう前に、１４，０００×ｇで５分間遠心分離
に付し、不溶物を除いた。得られた上清液を、０．１％
ＴＦＡ水溶液で平衡化させた逆相セミ分取Ｃ18カラム
（１０×２５０ｍｍ）を用い、流速２ｍｌ／ｍｉｎで、
０．１％ＴＦＡ−アセトニトリル溶液を用いた６０分間
で０％から６０％のアセトニトリルの直線濃度勾配で、
２１５ｎｍの紫外吸収をモニターしながら、溶出を行っ
た。
【００２６】８１個の溶出画分を集め、後記する試験法
により、それらの抗菌活性を検討した。その結果、４０
−４５％のアセトニトリル濃度で溶出した２個の画分
に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂ
ｔｉｌｉｓ）の生育を抑制する作用が認められた。
により、それらの抗菌活性を検討した。その結果、４０
−４５％のアセトニトリル濃度で溶出した２個の画分
に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂ
ｔｉｌｉｓ）の生育を抑制する作用が認められた。
【００２７】この抗菌活性を示した画分をさらに、ＴＳ
Ｋ−ｇｅｌ スルホプロピル カラム（ＳＰ−５ＰＷ；
７．５×７５ｍｍ、東ソー社製）を用いた陽イオン交換
ＨＰＬＣクロマトグラフィーに付し、０．５Ｍ酢酸（ｐ
Ｈ２．９）で展開した。次いで、流速１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎで、０．５Ｍ酢酸−１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．
９）を用いた７５分間で０％から１００％の酢酸の直線
濃度勾配で溶出した。
Ｋ−ｇｅｌ スルホプロピル カラム（ＳＰ−５ＰＷ；
７．５×７５ｍｍ、東ソー社製）を用いた陽イオン交換
ＨＰＬＣクロマトグラフィーに付し、０．５Ｍ酢酸（ｐ
Ｈ２．９）で展開した。次いで、流速１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎで、０．５Ｍ酢酸−１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．
９）を用いた７５分間で０％から１００％の酢酸の直線
濃度勾配で溶出した。
【００２８】抗菌活性を示す画分は、最終的に、逆相Ｃ
4カラム（４．６×２５０ｍｍ）を用いて、初めの方の
濃度勾配条件により、流速１ｍｌ／ｍｉｎで溶出し、精
製を行なった。その結果、抗菌活性を有する２個のペプ
チドが得られ、それぞれをパンディトキシン１（Ｐｉｍ
１）［Ｐａｎｄｉｔｏｘｉｎ １］、およびパンディト
キシン２（Ｐｉｍ２）［Ｐａｎｄｉｔｏｘｉｎ ２］と
命名した。
4カラム（４．６×２５０ｍｍ）を用いて、初めの方の
濃度勾配条件により、流速１ｍｌ／ｍｉｎで溶出し、精
製を行なった。その結果、抗菌活性を有する２個のペプ
チドが得られ、それぞれをパンディトキシン１（Ｐｉｍ
１）［Ｐａｎｄｉｔｏｘｉｎ １］、およびパンディト
キシン２（Ｐｉｍ２）［Ｐａｎｄｉｔｏｘｉｎ ２］と
命名した。
【００２９】ｂ）キャピラリー電気泳動分析 キャピラリー ゾーン電気泳動（ＣＺＥ）分析を、ＣＲ
−４Ａレコーダー（島津社製）へ接続したＵＶ検出器、
および７０ｃｍのキャピラリー（内径０．１μｍ；長さ
７０ｃｍ；内５０ｃｍが検出器部分）を装備したＪａｓ
ｃｏシステムにより行なった。泳動分析には、２０ｍＭ
クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）（アプライド
バイオシステムズ社、ＵＳＡ）を使用した。移動緩衝
液に溶解したサンプルを、水圧を用いてキャピラリーに
充填し（高さ２０ｃｍ、１５秒）、２０ｋＶの定電圧で
泳動分析を行ない、２１０ｎｍで溶出をモニタリングし
た。そのキャピラリー電気泳動分析の結果、本発明の抗
菌ペプチドは、高純度で得られたものであった。
−４Ａレコーダー（島津社製）へ接続したＵＶ検出器、
および７０ｃｍのキャピラリー（内径０．１μｍ；長さ
７０ｃｍ；内５０ｃｍが検出器部分）を装備したＪａｓ
ｃｏシステムにより行なった。泳動分析には、２０ｍＭ
クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）（アプライド
バイオシステムズ社、ＵＳＡ）を使用した。移動緩衝
液に溶解したサンプルを、水圧を用いてキャピラリーに
充填し（高さ２０ｃｍ、１５秒）、２０ｋＶの定電圧で
泳動分析を行ない、２１０ｎｍで溶出をモニタリングし
た。そのキャピラリー電気泳動分析の結果、本発明の抗
菌ペプチドは、高純度で得られたものであった。
【００３０】ｃ）質量スペクトル解析 ＶＳＬ−３３７ＮＤ型窒素レーザー（レーザーサイエン
ス社、ニュートン、マサチューセッツ）を備えた、Ｖｏ
ｙａｇｅｒ Ｅｌｉｔｅ ｔｉｍｅ−ｏｆ−ｆｌｉｇｈ
ｔ（ＴＯＦ）スペクトロメーター（パーセプティブ バ
イオシステムズ社、フラミンガム、マサチューセッツ）
によるＭＡＬＤＩ質量スペクトルを測定した。イオン源
の加速電圧を２０ｋＶにセットし、データは、測定の陽
性線形様式にて読み取った。外部基準物質および／また
は内部基準物質として、シグマ化学社（セントルイス、
ミズーリ）から得たブラディキニン（ｍ／ｚ：１０６
１．２）、仔牛膵臓由来のβ−インシュリン（ｍ／ｅ：
３４９６．６）および仔牛膵臓由来のインシュリン（ｍ
／ｅ：５７３４．５）を用い、測定された時間をもとに
質量へ変換した。その結果、本発明のペプチドの分子量
は、パンディトキシン１（Ｐｉｍ１）が４７９９であ
り、パンディトキシン２（Ｐｉｍ２）は２６１２であっ
た。
ス社、ニュートン、マサチューセッツ）を備えた、Ｖｏ
ｙａｇｅｒ Ｅｌｉｔｅ ｔｉｍｅ−ｏｆ−ｆｌｉｇｈ
ｔ（ＴＯＦ）スペクトロメーター（パーセプティブ バ
イオシステムズ社、フラミンガム、マサチューセッツ）
によるＭＡＬＤＩ質量スペクトルを測定した。イオン源
の加速電圧を２０ｋＶにセットし、データは、測定の陽
性線形様式にて読み取った。外部基準物質および／また
は内部基準物質として、シグマ化学社（セントルイス、
ミズーリ）から得たブラディキニン（ｍ／ｚ：１０６
１．２）、仔牛膵臓由来のβ−インシュリン（ｍ／ｅ：
３４９６．６）および仔牛膵臓由来のインシュリン（ｍ
／ｅ：５７３４．５）を用い、測定された時間をもとに
質量へ変換した。その結果、本発明のペプチドの分子量
は、パンディトキシン１（Ｐｉｍ１）が４７９９であ
り、パンディトキシン２（Ｐｉｍ２）は２６１２であっ
た。
【００３１】ｄ）アミノ酸配列の決定 本発明の抗菌ペプチドは、トリブチルホスフィン添加に
よる還元、あるいは４−ビニルピリジン添加によるアル
キル化を受けなかったことより、そのアミノ酸配列中に
はシステイン残基を含有するものではない。得られたペ
プチドのアミノ酸配列を、エドマン分解および酵素加水
分解により決定した。
よる還元、あるいは４−ビニルピリジン添加によるアル
キル化を受けなかったことより、そのアミノ酸配列中に
はシステイン残基を含有するものではない。得られたペ
プチドのアミノ酸配列を、エドマン分解および酵素加水
分解により決定した。
【００３２】本発明のペプチドは、ＰＰＳＱ−１０型自
動アミノ酸シーケンサー（島津社製）を用いてそのアミ
ノ酸配列を決定した。ペプチドを３７％アセトニトリル
溶液３０μｌに溶解し、ＴＦＡ処理したガラス繊維フィ
ルターにより濾過し、濾液にポリブレン（アルドリッチ
社、アメリカ）を添加した。データは、ＣＲ−７Ａイン
テグレータ（島津社製）に記録した。
動アミノ酸シーケンサー（島津社製）を用いてそのアミ
ノ酸配列を決定した。ペプチドを３７％アセトニトリル
溶液３０μｌに溶解し、ＴＦＡ処理したガラス繊維フィ
ルターにより濾過し、濾液にポリブレン（アルドリッチ
社、アメリカ）を添加した。データは、ＣＲ−７Ａイン
テグレータ（島津社製）に記録した。
【００３３】酵素加水分解として、トリプシンによる加
水分解は、以下のようにして行なった。すなわち、０．
１Ｍ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ８．１）中、酵素と基質
の重量比が１：５０となる酵素量を使用し、３７℃で３
時間加水分解を行なった。一方、黄色ブドウ球菌（Ｓ．
ａｕｒｅｕｓ）のＶ８株から得られたエンドプロテイナ
ーゼＸＶＩＩ−Ｂ（Ｇｌｕ−Ｃ）による加水分解は、
０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ７．６）中、酵素と
基質の重量比が１：２０となる酵素量を使用し、３７℃
で３時間加水分解を行なった。
水分解は、以下のようにして行なった。すなわち、０．
１Ｍ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ８．１）中、酵素と基質
の重量比が１：５０となる酵素量を使用し、３７℃で３
時間加水分解を行なった。一方、黄色ブドウ球菌（Ｓ．
ａｕｒｅｕｓ）のＶ８株から得られたエンドプロテイナ
ーゼＸＶＩＩ−Ｂ（Ｇｌｕ−Ｃ）による加水分解は、
０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ７．６）中、酵素と
基質の重量比が１：２０となる酵素量を使用し、３７℃
で３時間加水分解を行なった。
【００３４】上記のトリプシン加水分解で得られた各フ
ラグメントを、Ｃ4カラム（４．６×２５０ｍｍ）を用
いた逆相ＨＰＬＣにて、０．１％ＴＦＡ水溶液中のアセ
トニトリルによる直線濃度勾配で溶出し、分取した。一
方、エンドプロテイナーゼ加水分解で得られた各フラグ
メントについては、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦによる質量分
析、およびエドマン分解によりアミノ酸配列の決定を行
なった。それらの結果は以下のようであった。
ラグメントを、Ｃ4カラム（４．６×２５０ｍｍ）を用
いた逆相ＨＰＬＣにて、０．１％ＴＦＡ水溶液中のアセ
トニトリルによる直線濃度勾配で溶出し、分取した。一
方、エンドプロテイナーゼ加水分解で得られた各フラグ
メントについては、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦによる質量分
析、およびエドマン分解によりアミノ酸配列の決定を行
なった。それらの結果は以下のようであった。
【００３５】（ｉ）パンディトキシン１（Ｐｉｍ１） パンディトキシン１（Ｐｉｍ１）の直接アミノ酸配列分
析により、Ｎ末端から２８個のアミノ酸残基が決定でき
た。パンディトキシン１をトリプシンで加水分解したと
ころ、６個の分解フラグメントが生成し、それぞれをエ
ドマン分解に付した。その結果、パンディトキシン１
は、４４個のアミノ酸残基からなるペプチドであること
が判明した。その正式配列を決定するために、パンディ
トキシン１をエンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃにより加
水分解に付し、２個のペプチドフラグメントを得て、パ
ンディトキシン１のアミノ酸配列を決定した。その結
果、パンディトキシン１は、分子量４，７９９．５ダル
トンと計算され、この値は質量分析で得た値と一致し
た。
析により、Ｎ末端から２８個のアミノ酸残基が決定でき
た。パンディトキシン１をトリプシンで加水分解したと
ころ、６個の分解フラグメントが生成し、それぞれをエ
ドマン分解に付した。その結果、パンディトキシン１
は、４４個のアミノ酸残基からなるペプチドであること
が判明した。その正式配列を決定するために、パンディ
トキシン１をエンドプロテイナーゼＧｌｕ−Ｃにより加
水分解に付し、２個のペプチドフラグメントを得て、パ
ンディトキシン１のアミノ酸配列を決定した。その結
果、パンディトキシン１は、分子量４，７９９．５ダル
トンと計算され、この値は質量分析で得た値と一致し
た。
【００３６】（ｉｉ）パンディトキシン２（Ｐｉｍ２） パンディトキシン２（Ｐｉｍ２）の直接アミノ酸配列分
析により、２４個の全アミノ酸残基が決定された。パン
ディトキシン２の配列は、このアミノ酸配列分析により
解明でき、その分子量も２６１２．１ダルトンと計算さ
れ、質量分析で得られた値と一致した。したがって、パ
ンディトキシン２のアミノ酸配列については、酵素加水
分解法、あるいはアミノ酸分析法による同定を行なわな
かった。これらの結果を、表２にまとめて示した。
析により、２４個の全アミノ酸残基が決定された。パン
ディトキシン２の配列は、このアミノ酸配列分析により
解明でき、その分子量も２６１２．１ダルトンと計算さ
れ、質量分析で得られた値と一致した。したがって、パ
ンディトキシン２のアミノ酸配列については、酵素加水
分解法、あるいはアミノ酸分析法による同定を行なわな
かった。これらの結果を、表２にまとめて示した。
【００３７】
【表２】表２：P．imperatorから得られた抗菌ペプチド
のアミノ酸配列
のアミノ酸配列
【００３８】本ペプチドの精製過程における抗菌活性試
験（抗菌試験方法） 抗菌活性は、溶出画分を寒天表面に直接適用して、細菌
の生育抑制状況を検討することにより評価した。Ｐｉｍ
１およびＰｉｍ２の単離は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）お
よび枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）に対する、平板生
育抑制法で行なった。すなわち、クロマトグラフィー
（逆相あるいは陽イオンクロマトグラフィー）により溶
出された画分を真空乾燥し、その乾燥物を２０μｌの脱
イオン水中に再度懸濁した。一方、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌ
ｉ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を、液体抗
菌第３培地（ＤＩＦＣＯ）中で１８時間培養させた。
験（抗菌試験方法） 抗菌活性は、溶出画分を寒天表面に直接適用して、細菌
の生育抑制状況を検討することにより評価した。Ｐｉｍ
１およびＰｉｍ２の単離は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）お
よび枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）に対する、平板生
育抑制法で行なった。すなわち、クロマトグラフィー
（逆相あるいは陽イオンクロマトグラフィー）により溶
出された画分を真空乾燥し、その乾燥物を２０μｌの脱
イオン水中に再度懸濁した。一方、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌ
ｉ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を、液体抗
菌第３培地（ＤＩＦＣＯ）中で１８時間培養させた。
【００３９】１ｍｌの細菌の懸濁液（ＯＤ600nm＝０．
７−０．８）を、１：１０の希釈となるように、９ｍｌ
の滅菌処理した抗菌第３培地に添加し、得られた希釈溶
液の１ｍｌを、加温（〜４５℃）された１．５％寒天含
有抗菌第３培地（ＤＩＦＣＯ）９ｍｌに加えた。以上の
ようにして調製した液体培地を、１００×２０ｍｍの無
菌ペトリ皿中に注ぎ培養し、細菌数を、菌株ごとに、１
０6−１０7個のコロニー形成単位／ｍｌとなるようにし
た。抗菌試験は、先に調製した溶出画分の真空乾燥物を
再懸濁させた懸濁液５μｌを固形平板培地表面上に注
ぎ、３７℃にて１２〜１４時間培養した場合における平
板表面上の透明なスポット数で、細菌の生育抑制を評価
した。
７−０．８）を、１：１０の希釈となるように、９ｍｌ
の滅菌処理した抗菌第３培地に添加し、得られた希釈溶
液の１ｍｌを、加温（〜４５℃）された１．５％寒天含
有抗菌第３培地（ＤＩＦＣＯ）９ｍｌに加えた。以上の
ようにして調製した液体培地を、１００×２０ｍｍの無
菌ペトリ皿中に注ぎ培養し、細菌数を、菌株ごとに、１
０6−１０7個のコロニー形成単位／ｍｌとなるようにし
た。抗菌試験は、先に調製した溶出画分の真空乾燥物を
再懸濁させた懸濁液５μｌを固形平板培地表面上に注
ぎ、３７℃にて１２〜１４時間培養した場合における平
板表面上の透明なスポット数で、細菌の生育抑制を評価
した。
【００４０】実施例２:ペプチドの合成 パンディトキシン２（Ｐｉｍ２）を、全自動ペプチド合
成機４３３Ａ型（アプライドバイオシステムズ社製）を
用い、ＦＭｏｃ（ＦａｓｔＭｏｃ）法により化学的に合
成した。
成機４３３Ａ型（アプライドバイオシステムズ社製）を
用い、ＦＭｏｃ（ＦａｓｔＭｏｃ）法により化学的に合
成した。
【００４１】合成品のＣ末端カルボン酸であるＰｉｍ２
−ＯＨ（ｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＯＨ）における、Ｃ末端へ
の遊離カルボキシル基の導入には、担体としてＦｍｏｃ
−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｗａｎｇレジンを用いた。また、
合成品のＣ末端アミドであるＰｉｍ２−ＮＨ2（ｓｙｎ
−Ｐｉｍ２−ＮＨ2）における、Ｃ末端のアミノ基を与
えるためには、担体としてＲｉｎｋアミドレジンである
４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−ア
ミノメチル）フェノキシレジンを用いた。
−ＯＨ（ｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＯＨ）における、Ｃ末端へ
の遊離カルボキシル基の導入には、担体としてＦｍｏｃ
−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｗａｎｇレジンを用いた。また、
合成品のＣ末端アミドであるＰｉｍ２−ＮＨ2（ｓｙｎ
−Ｐｉｍ２−ＮＨ2）における、Ｃ末端のアミノ基を与
えるためには、担体としてＲｉｎｋアミドレジンである
４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−ア
ミノメチル）フェノキシレジンを用いた。
【００４２】結合ペプチド樹脂からのペプチドの切離し
と脱保護には、Ｒ．Ｒｏｍｉ−Ｌｅｂｒｕｎらの方法
（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４５：４５７−４
６４，１９９７）を応用して行なった。例えば、ペプチ
ド樹脂からの粗ペプチドの切離しと脱保護は、ＴＦＡ：
チオアニソール：エタンジオール（９０：５：５，ｖ／
ｖ）混合溶液を、結合ペプチド樹脂１ｇに対して約１０
ｍｌとなるように加え、混合物を室温下に１．５時間か
ら３時間程度反応させ、反応溶液にエーテルを加えてペ
プチドを沈殿させ、沈殿をエーテルで３回洗浄して粗ペ
プチドを得た。この粗ペプチドを３０％アセトニトリル
水溶液に溶解し、セミ分取Ｃ18カラム（１０×２５０ｍ
ｍ）の逆相クロマトグラフィーにて不純物を除去した。
合成抗菌ペプチドはさらに陽イオン交換クロマトグラフ
ィーならびにＣ4カラムを用いた逆相ＨＰＬＣにより精
製した。
と脱保護には、Ｒ．Ｒｏｍｉ−Ｌｅｂｒｕｎらの方法
（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４５：４５７−４
６４，１９９７）を応用して行なった。例えば、ペプチ
ド樹脂からの粗ペプチドの切離しと脱保護は、ＴＦＡ：
チオアニソール：エタンジオール（９０：５：５，ｖ／
ｖ）混合溶液を、結合ペプチド樹脂１ｇに対して約１０
ｍｌとなるように加え、混合物を室温下に１．５時間か
ら３時間程度反応させ、反応溶液にエーテルを加えてペ
プチドを沈殿させ、沈殿をエーテルで３回洗浄して粗ペ
プチドを得た。この粗ペプチドを３０％アセトニトリル
水溶液に溶解し、セミ分取Ｃ18カラム（１０×２５０ｍ
ｍ）の逆相クロマトグラフィーにて不純物を除去した。
合成抗菌ペプチドはさらに陽イオン交換クロマトグラフ
ィーならびにＣ4カラムを用いた逆相ＨＰＬＣにより精
製した。
【００４３】合成品の抗菌ペプチドと、天然品のペプチ
ドの同定は、キャピラリーゾーン電気泳動分析および陽
イオン交換ＨＰＬＣにて行なった。また、合成品と天然
品の抗菌ペプチドの質量分析による同定も行なった。
ドの同定は、キャピラリーゾーン電気泳動分析および陽
イオン交換ＨＰＬＣにて行なった。また、合成品と天然
品の抗菌ペプチドの質量分析による同定も行なった。
【００４４】２個の合成ペプチドを調製し、そのうち１
つはＣ末端がカルボキシル化されているものであり、他
の１つはＣ末端がアミド化されているものである。キャ
ピラリーゾーン電気泳動分析では、パンディトキシン２
（Ｐｉｍ２）はｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＯＨと共通の展開を
示したが、ｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＮＨ2の展開とは共通の
展開をみせなかった。このことから、天然の抗菌ペプチ
ドは、Ｃ末端が遊離カルボン酸であることが明らかとな
った。
つはＣ末端がカルボキシル化されているものであり、他
の１つはＣ末端がアミド化されているものである。キャ
ピラリーゾーン電気泳動分析では、パンディトキシン２
（Ｐｉｍ２）はｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＯＨと共通の展開を
示したが、ｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＮＨ2の展開とは共通の
展開をみせなかった。このことから、天然の抗菌ペプチ
ドは、Ｃ末端が遊離カルボン酸であることが明らかとな
った。
【００４５】天然の抗菌ペプチドは、さらに質量分析お
よびエドマン分解により、合成品（ｓｙｎ−Ｐｉｍ２−
ＯＨ）と同一のものであることが確認された。なお、ｓ
ｙｎ−Ｐｉｍ２−ＯＨおよびｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＮＨ2
の両者ともに、抗菌活性を有していた。
よびエドマン分解により、合成品（ｓｙｎ−Ｐｉｍ２−
ＯＨ）と同一のものであることが確認された。なお、ｓ
ｙｎ−Ｐｉｍ２−ＯＨおよびｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＮＨ2
の両者ともに、抗菌活性を有していた。
【００４６】実施例３：円偏光二色性によるコンフォメ
ーション解析 円偏光二色性（ＣＤ）スペクトルを、Ｊａｓｃｏ Ｊ−
７２５偏光計（ｓｐｅｃｔｒｏｐｏｌａｒｉｍｅｔｅ
ｒ）（東京、日本）により行なった。測定には１ｍｍの
透過厚のセルを用いて、６０％のトリフルオロエタノー
ル（ｐＨ７．１）中にて室温下、２６０〜１７０ｎｍの
波長でのスペクトルを測定した。スペクトルデータは、
スキャン比率１００ｎｍ／ｍｉｎをもつ０．１ｎｍおよ
び０．５秒のインターバルにて集めた。測定に用いたペ
プチドの濃度は、１００μｇ／ｍｌとした。測定値は、
１０回の測定データの平均値であり、Ｇ．Ｂｏｈｍら
（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，５：１９１−１９５，１
９９２）の方法により解析を行なった。
ーション解析 円偏光二色性（ＣＤ）スペクトルを、Ｊａｓｃｏ Ｊ−
７２５偏光計（ｓｐｅｃｔｒｏｐｏｌａｒｉｍｅｔｅ
ｒ）（東京、日本）により行なった。測定には１ｍｍの
透過厚のセルを用いて、６０％のトリフルオロエタノー
ル（ｐＨ７．１）中にて室温下、２６０〜１７０ｎｍの
波長でのスペクトルを測定した。スペクトルデータは、
スキャン比率１００ｎｍ／ｍｉｎをもつ０．１ｎｍおよ
び０．５秒のインターバルにて集めた。測定に用いたペ
プチドの濃度は、１００μｇ／ｍｌとした。測定値は、
１０回の測定データの平均値であり、Ｇ．Ｂｏｈｍら
（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，５：１９１−１９５，１
９９２）の方法により解析を行なった。
【００４７】合成品のペプチド、ｓｙｎ−Ｐｉｍ２−Ｏ
Ｈおよびｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＮＨ2の二次構造をＣＤに
より解析し、マガイニン１（Ｍａｇａｉｎｉｎ １）の
ＣＤ解析から得られたデータと比較し、それを表３にま
とめた。
Ｈおよびｓｙｎ−Ｐｉｍ２−ＮＨ2の二次構造をＣＤに
より解析し、マガイニン１（Ｍａｇａｉｎｉｎ １）の
ＣＤ解析から得られたデータと比較し、それを表３にま
とめた。
【００４８】
【表３】表３：円偏光二色性（ＣＤ）のデータから得ら
れたPim 2-NH2、Pim 2-OHおよびMagainin 1の予測二次
構造
れたPim 2-NH2、Pim 2-OHおよびMagainin 1の予測二次
構造
【００４９】表中の記号： Ｈ：α−ヘリックス； Ａ：逆平行β構造； Ｐ：平行
β構造；Ｔ：βターン； Ｒ：ランダムコイル構造
β構造；Ｔ：βターン； Ｒ：ランダムコイル構造
【００５０】表中に掲げた３種のペプチドの構造データ
をみると、その二次構造データ、特にα−ヘリックスお
よびβ−ターン構造で対比し得るものとなっている。こ
れら３種のペプチドのＣＤデータからみれば、３種のペ
プチドは、同じ折りたたみ構造を有しているものと思わ
れる。したがって、これらの抗菌活性と、α−ヘリック
ス二次構造を参照にすると、パンディトキシン２（Ｐｉ
ｍ２）は、すでにその三次元構造が解析されている抗菌
ペプチドであるガエグリン−６（Ｇａｅｇｕｒｉｎ−
６）（Ｋ．Ｙ．Ｌｅｅら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９：１
６５３−１６５８，１９９２）、マガイニン２（Ｍａｇ
ａｉｎｉｎ ２）（Ｊ．Ｇｅｓｅｌｌら、Ｊ．Ｂｉｏｍ
ｏｌ ＮＭＲ，９：１２７−１３５，１９９７）、およ
びカエリン１．１（ｃａｅｒｉｎ １．１）（Ｈ．Ｗｏ
ｎｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４７：５４
５−５５７，１９９７）と、同じ三次元構造を有してい
るものと考えられた。
をみると、その二次構造データ、特にα−ヘリックスお
よびβ−ターン構造で対比し得るものとなっている。こ
れら３種のペプチドのＣＤデータからみれば、３種のペ
プチドは、同じ折りたたみ構造を有しているものと思わ
れる。したがって、これらの抗菌活性と、α−ヘリック
ス二次構造を参照にすると、パンディトキシン２（Ｐｉ
ｍ２）は、すでにその三次元構造が解析されている抗菌
ペプチドであるガエグリン−６（Ｇａｅｇｕｒｉｎ−
６）（Ｋ．Ｙ．Ｌｅｅら、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９：１
６５３−１６５８，１９９２）、マガイニン２（Ｍａｇ
ａｉｎｉｎ ２）（Ｊ．Ｇｅｓｅｌｌら、Ｊ．Ｂｉｏｍ
ｏｌ ＮＭＲ，９：１２７−１３５，１９９７）、およ
びカエリン１．１（ｃａｅｒｉｎ １．１）（Ｈ．Ｗｏ
ｎｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２４７：５４
５−５５７，１９９７）と、同じ三次元構造を有してい
るものと考えられた。
【００５１】実施例４：パンディトキシン２（Ｐｉｍ
２）を含有する注射製剤の製造 １０ｍｇのＰｉｍ−ＯＨを２０ｍｌの注射用水に溶解
し、０．２２μｍのフィルター濾過を行ない、無菌処理
をした。得られた溶液を無菌条件下に１ｍｌのアンプル
に充填し、パンディトキシン２（Ｐｉｍ２）含有の注射
製剤を得た。
２）を含有する注射製剤の製造 １０ｍｇのＰｉｍ−ＯＨを２０ｍｌの注射用水に溶解
し、０．２２μｍのフィルター濾過を行ない、無菌処理
をした。得られた溶液を無菌条件下に１ｍｌのアンプル
に充填し、パンディトキシン２（Ｐｉｍ２）含有の注射
製剤を得た。
【００５２】評価例１：抗菌試験 本発明の抗菌ペプチドであるパンディトキシン１（Ｐｉ
ｍ１）およびパンディトキシン２（Ｐｉｍ２）につい
て、種々のグラム陰性ならびにグラム陽性菌に対する抗
菌試験を、汎用されている平板寒天培地希釈法により行
なった。なお、比較対照ペプチドとして、カエルの一種
Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌｅａｖｉｓの皮膚から単離された抗
菌活性を有する、マガイニン１（Ｍａｇａｉｎｉｎ
１）（Ｍ．Ｚａｓｌｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：５４４９−５４５３，１
９８７）をおいた。その結果を表４に示した。
ｍ１）およびパンディトキシン２（Ｐｉｍ２）につい
て、種々のグラム陰性ならびにグラム陽性菌に対する抗
菌試験を、汎用されている平板寒天培地希釈法により行
なった。なお、比較対照ペプチドとして、カエルの一種
Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌｅａｖｉｓの皮膚から単離された抗
菌活性を有する、マガイニン１（Ｍａｇａｉｎｉｎ
１）（Ｍ．Ｚａｓｌｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：５４４９−５４５３，１
９８７）をおいた。その結果を表４に示した。
【００５３】
【表４】Pim１、Pim２およびMagainin １の抗菌活性
【００５４】表中の結果から明らかなように、本発明の
サソリ毒液より単離された抗菌ペプチドであるパンディ
トキシン２（Ｐｉｍ２）は、パンディトキシン１（Ｐｉ
ｍ１）およびＭａｇａｉｎｉｎ １に比較して最も抗菌
力が強かった。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、カンジダアル
ビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）および緑膿菌（Ｐ．
ａｕｒｅｇｉｎｏｓａ）は、試験した抗菌ペプチド３種
に対して最も抵抗性を示した。腸球菌（Ｅ．ｆａｅｃａ
ｌｉｓ）およびブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ）の２株は、試験した抗菌ペプチド３種に対し、最
も感受性を示した。枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）
は、Ｍａｇａｉｎｉｎ １より本発明の抗菌ペプチドに
対しより感受性を示した。
サソリ毒液より単離された抗菌ペプチドであるパンディ
トキシン２（Ｐｉｍ２）は、パンディトキシン１（Ｐｉ
ｍ１）およびＭａｇａｉｎｉｎ １に比較して最も抗菌
力が強かった。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、カンジダアル
ビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）および緑膿菌（Ｐ．
ａｕｒｅｇｉｎｏｓａ）は、試験した抗菌ペプチド３種
に対して最も抵抗性を示した。腸球菌（Ｅ．ｆａｅｃａ
ｌｉｓ）およびブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ）の２株は、試験した抗菌ペプチド３種に対し、最
も感受性を示した。枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）
は、Ｍａｇａｉｎｉｎ １より本発明の抗菌ペプチドに
対しより感受性を示した。
【００５５】評価例２：溶血活性試験 本発明のペプチドの溶血活性を、ヒツジ赤血球の１０％
（ｖ／ｖ）懸濁液と一緒に培養することにより測定し
た。測定には、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）中３，０００×
ｇにて３分間の遠心分離を行ない、その上清液の吸光度
（ＯＤ）がリン酸緩衝液（ブランク液）のＯＤになるま
でリン酸緩衝液で数回洗浄したヒツジ赤血球を使用し
た。かくして得られたヒツジ赤血球を、脱イオン水中
（ポジティブコントロール）、リン酸緩衝液中（ブラン
クコントロール）、またはパンディトキシン２（Ｐｉｍ
２）もしくはマガイニン１（ｍａｇａｉｎｉｎ １）の
適当な量とともに室温で１時間培養した。
（ｖ／ｖ）懸濁液と一緒に培養することにより測定し
た。測定には、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）中３，０００×
ｇにて３分間の遠心分離を行ない、その上清液の吸光度
（ＯＤ）がリン酸緩衝液（ブランク液）のＯＤになるま
でリン酸緩衝液で数回洗浄したヒツジ赤血球を使用し
た。かくして得られたヒツジ赤血球を、脱イオン水中
（ポジティブコントロール）、リン酸緩衝液中（ブラン
クコントロール）、またはパンディトキシン２（Ｐｉｍ
２）もしくはマガイニン１（ｍａｇａｉｎｉｎ １）の
適当な量とともに室温で１時間培養した。
【００５６】培養液を１０，０００×ｇにて５分間の遠
心分離に付し、上清を血球より分取し、５７０ｎｍでの
吸光度を測定した。相対光学密度（吸光度）を、脱イオ
ン水で処理した懸濁液のものと対比し、溶血性の割合を
百分率で計算した。Ｐｉｍ２およびＭａｇａｉｎｉｎ
１の溶血活性を表５にまとめて示した。表中の結果から
も明らかなように、本発明の抗菌ペプチドであるパンデ
ィトキシン２（Ｐｉｍ２）の強い抗菌活性は、溶血活性
の強さと関連するものであった。
心分離に付し、上清を血球より分取し、５７０ｎｍでの
吸光度を測定した。相対光学密度（吸光度）を、脱イオ
ン水で処理した懸濁液のものと対比し、溶血性の割合を
百分率で計算した。Ｐｉｍ２およびＭａｇａｉｎｉｎ
１の溶血活性を表５にまとめて示した。表中の結果から
も明らかなように、本発明の抗菌ペプチドであるパンデ
ィトキシン２（Ｐｉｍ２）の強い抗菌活性は、溶血活性
の強さと関連するものであった。
【００５７】
【表５】
【００５８】
【配列表】 ＜１１０＞ ＳＵＮＴＯＲＹ ＬＩＭＩＴＥＤ ＜１２０＞ ＡＮＴＩＭＩＣＲＯＢＩＡＬ ＰＥＰＴＩＤＥＳ ＦＲＯＭ ＰＡ
ＮＤＩＮＵＳ ＩＭＰＥＲＡＴＯＲ ＜１３０＞ ＳＮ−１５３ ＜１６０＞ ２ ＜１７０＞ ＰａｔｅｎｔＩｎ Ｖｅｒ． ２．１ ＜２１０＞ １ ＜２１１＞ ４４ ＜２１２＞ ＰＲＴ ＜２１３＞ ＰＡＮＤＩＮＵＳ ＩＭＰＥＲＡＴＯＲ ＜４００＞ １ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｒｐ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｙ
Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ ２０ ２５
３０ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｔｈｒ ３５ ４０
＜２１０＞ ２ ＜２１１＞ ２４ ＜２１２＞ ＰＲＴ ＜２１３＞ ＰＡＮＤＩＮＵＳ ＩＭＰＥＲＡＴＯＲ ＜４００＞ ２ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ １ ５
１０ １５ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｐ
２０
ＮＤＩＮＵＳ ＩＭＰＥＲＡＴＯＲ ＜１３０＞ ＳＮ−１５３ ＜１６０＞ ２ ＜１７０＞ ＰａｔｅｎｔＩｎ Ｖｅｒ． ２．１ ＜２１０＞ １ ＜２１１＞ ４４ ＜２１２＞ ＰＲＴ ＜２１３＞ ＰＡＮＤＩＮＵＳ ＩＭＰＥＲＡＴＯＲ ＜４００＞ １ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｒｐ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｙ
Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ ２０ ２５
３０ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｔｈｒ ３５ ４０
＜２１０＞ ２ ＜２１１＞ ２４ ＜２１２＞ ＰＲＴ ＜２１３＞ ＰＡＮＤＩＮＵＳ ＩＭＰＥＲＡＴＯＲ ＜４００＞ ２ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ １ ５
１０ １５ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｓｐ
２０
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１２年３月２１日（２０００．３．２
１）
１）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１８】
【表１】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３７】
【表２】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 中嶋 暉躬 大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号 財団法人サントリー生物有機科学研究所 内 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA38 4C084 AA02 AA07 BA01 BA19 BA44 CA51 DA41 MA13 MA17 MA23 MA28 MA31 MA35 MA37 MA41 MA43 MA52 MA57 MA66 ZB352 4H045 AA10 AA30 BA10 CA50 DA83 EA29 FA71
Claims (10)
- 【請求項１】 サソリ毒由来の抗菌ペプチド。
- 【請求項２】 該ペプチドが、パンディヌス インペレ
ータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒液
から単離されたものである請求項１に記載の抗菌ペプチ
ド。 - 【請求項３】 該ペプチドが、次のアミノ酸配列式： Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr で表わされるペプチドである請求項１または２に記載の
抗菌ペプチド。 - 【請求項４】 該ペプチドが、次のアミノ酸配列式： Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp で表わされるペプチド、またはそのＣ−末端がアミド化
されたペプチドである請求項１または２に記載の抗菌ペ
プチド。 - 【請求項５】 請求項１ないし４のいずれか１項に記載
のペプチドを有効成分として含有する医薬品。 - 【請求項６】 請求項１ないし４のいずれか１項に記載
のペプチドの抗菌剤としての使用。 - 【請求項７】 有効成分としてのサソリ毒由来の抗菌ペ
プチドの有効量と、製薬的に許容される担体とからなる
抗菌剤。 - 【請求項８】 該ペプチドが、パンディヌス インペレ
ータ（Ｐａｎｄｉｎｕｓ ｉｍｐｅｒａｔｏｒ）の毒液
から単離されたものである請求項７に記載の抗菌剤。 - 【請求項９】 該ペプチドが、次のアミノ酸配列式： Gly Lys Val Trp Asp Trp Ile Lys Ser Ala Ala Lys Lys Ile Trp Ser Ser Glu Pro Val Ser Gln Leu Lys Gly Gln Val Leu Asn Ala Ala Lys Asn Tyr Val Ala Glu Lys Ile Gly Ala Thr Pro Thr で表わされるペプチドである請求項７または８に記載の
抗菌剤。 - 【請求項１０】 該ペプチドが、次のアミノ酸配列式： Phe Trp Gly Ala Leu Ala Lys Gly Ala Leu Lys Leu Ile Pro Ser Leu Phe Ser Ser Phe Ser Lys Lys Asp で表わされるペプチド、またはそのＣ−末端がアミド化
されたペプチドである請求項７または８に記載の抗菌
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000005789A JP2001186887A (ja) | 2000-01-06 | 2000-01-06 | サソリ毒由来の抗菌ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000005789A JP2001186887A (ja) | 2000-01-06 | 2000-01-06 | サソリ毒由来の抗菌ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001186887A true JP2001186887A (ja) | 2001-07-10 |
Family
ID=18534410
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000005789A Pending JP2001186887A (ja) | 2000-01-06 | 2000-01-06 | サソリ毒由来の抗菌ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001186887A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006088010A1 (ja) | 2005-02-15 | 2006-08-24 | Toagosei Co., Ltd. | 抗菌ペプチド及びその利用 |
| US7482328B2 (en) | 2002-04-25 | 2009-01-27 | Toagosei Co., Ltd. | Antimicrobial polypeptide and utilization thereof |
| US7615534B2 (en) | 2004-07-30 | 2009-11-10 | Toagosei Co., Ltd | Antimicrobial peptides and use thereof |
| US7674771B2 (en) | 2003-10-29 | 2010-03-09 | Toagosei Co., Ltd | Antimicrobial peptides and utilization of the same |
| US7964556B1 (en) | 2004-12-06 | 2011-06-21 | Toagosei Co., Ltd | Antimicrobial peptides and use thereof |
| US9238796B2 (en) | 2010-06-04 | 2016-01-19 | Toagosei Co. Ltd. | Cell growth-promoting peptide and use thereof |
| US9370182B2 (en) | 2012-05-28 | 2016-06-21 | Toagosei Co., Ltd. | Antimicrobial peptide and use thereof |
| US9480727B2 (en) | 2012-10-18 | 2016-11-01 | Toagosei Co. Ltd. | Synthetic peptide for inhibiting expression of type 2 TNF receptor and use thereof |
-
2000
- 2000-01-06 JP JP2000005789A patent/JP2001186887A/ja active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7482328B2 (en) | 2002-04-25 | 2009-01-27 | Toagosei Co., Ltd. | Antimicrobial polypeptide and utilization thereof |
| US7674771B2 (en) | 2003-10-29 | 2010-03-09 | Toagosei Co., Ltd | Antimicrobial peptides and utilization of the same |
| US7615534B2 (en) | 2004-07-30 | 2009-11-10 | Toagosei Co., Ltd | Antimicrobial peptides and use thereof |
| US7964556B1 (en) | 2004-12-06 | 2011-06-21 | Toagosei Co., Ltd | Antimicrobial peptides and use thereof |
| WO2006088010A1 (ja) | 2005-02-15 | 2006-08-24 | Toagosei Co., Ltd. | 抗菌ペプチド及びその利用 |
| US9238796B2 (en) | 2010-06-04 | 2016-01-19 | Toagosei Co. Ltd. | Cell growth-promoting peptide and use thereof |
| US9370182B2 (en) | 2012-05-28 | 2016-06-21 | Toagosei Co., Ltd. | Antimicrobial peptide and use thereof |
| US9480727B2 (en) | 2012-10-18 | 2016-11-01 | Toagosei Co. Ltd. | Synthetic peptide for inhibiting expression of type 2 TNF receptor and use thereof |
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