JP2001086983A - 家禽用ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】高度病原性を示す伝染性ファブリキウス嚢病に
対して有効な、新規ワクチンを提供する。 【解決手段】伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスの新規
株であるＹＨ−９１−ＣＬＣ株を利用することによっ
て、同病に対する優れたワクチンを得た。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は鳥類の伝染性ファブ
リキウス嚢病ウイルスの新規な株に関する。さらに詳し
くは、該ウイルスの新規株を利用した伝染性ファブリキ
ウス嚢病のワクチン及びワクチン組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】伝染性ファブリキウス嚢病（Infectious
Bursal Disease、以下ＩＢＤ）は、鶏や七面鳥等の家
禽に発症するウイルス性疾患である。ＩＢＤウイルスは
ビルナウイルス科アビビルナウイルス属に属する二本鎖
のＲＮＡウイルスである。その遺伝子としては、長さ3.
4kbの分節Ａ、2.7kbの分節Ｂを有する。分節Ｂは90kDの
多機能蛋白（ポリメラーゼ、capping酵素）であるVP1を
コードする。一方、分節Ａは110kDの蛋白（NH2-VP2-VP4
-VP3-COOH）をコードし（Mundt E., et al.,J. General
Virol., 76, 437-443, 1995）、このうち構造蛋白であ
るVP2は主要な宿主防御抗原であり、VP2の中心部分の変
化によって、ＩＢＤウイルスの抗原性、病原性が変化す
る。Toらはベトナムで分離された23のＩＢＤウイルス株
について、VP2遺伝子の可変領域のアミノ酸配列を決定
し、系統発生学的に解析した結果、これらのベトナムで
分離された株、ヨーロッパで分離された株、日本で分離
された株がいずれも起源を同一にすることを報告してい
る(To, H.,et al., J.Vet.Med.Sci., 61, 429-432, 199
9)。

【０００３】ＩＢＤは1950年代後半にアメリカ、デラウ
ェア州のガンボロ地方で初めて発症例が発見されたため
ガンボロ病（Gumboro Disease）とも呼ばれている。日
本では1960年代前半に初めて報告され、現在では全国的
に発生をみている。特に1990年夏頃から各地の養鶏現場
で大発生した高度病原性ＩＢＤは、ファブリキウス嚢
（以下Ｆ嚢）の萎縮あるいは腫大が著しく、しかも死亡
率が数％から約60％にまで達し、甚大な被害をもたらし
た。当時実用化されていた従来型生ワクチンは、死亡率
の減少には役立ったものの、免疫原性が高かったため
に、同時に病原性も高いという欠点があった。したがっ
て、その投与によってＦ嚢が悪影響を受け免疫能が低下
し、大腸菌症等の感染症を誘発してしまう現象が度々み
られた。そのためたとえ死亡を阻止したとしても鶏の成
長が遅延し、経済面を考慮すると廃用にせざるを得ない
場合もあった。これらの状況は現在に至っても改善され
ず、解決すべき問題点として残っている。

【０００４】Ｆ嚢は鳥類に特有の液性免疫を司る器官で
あり、鶏では生後２〜３カ月齢で最大となり性成熟とと
もに退縮する。ＩＢＤウイルスはＦ嚢のＢ前駆細胞に強
い親和性を示し、免疫抑制をおこすため、日和見感染や
ワクチン免疫の不成立の原因となる。生後３〜12週齢の
雛で感受性が高く、ＩＢＤ発症例では元気消失、沈鬱、
羽毛粗造、鶏冠の退色、下痢等の症状を示し重症例は死
亡する。病理学的にはＦ嚢の腫大又は萎縮・出血、筋肉
内出血、脾腫、骨髄の退色、カタル性腸炎などがみられ
る。死亡に至らない例でも、他の微生物等による感染症
を併発し、成長遅延を招く等、経済上大きな損失を被る
疾病である。

【０００５】ＩＢＤはウイルス性疾患であり発症すると
効果的な治療法がないため、ワクチン接種による予防が
重要な対処法となっている。一般的なワクチネーション
の方法としては、種鶏に対してワクチンを投与し雛の移
行抗体を高めようとする方法、生後約２〜４週齢の雛に
対して生ワクチンを投与し、抗体価を高めようとする方
法がある。前者では処置を行わない場合に比べて、通常
高い移行抗体レベルが得られるが、一般に移行抗体は生
後２〜４週間で消失するため、以後は野外ウイルスに対
して無防備な状態になってしまう。また、後者の方法で
は生ワクチンとして投与したウイルスが、親鳥からの移
行抗体によって感染・増殖を妨げられ、雛において免疫
誘導がなされなくなる場合があることが知られている。

【０００６】一般に微生物を利用したワクチンには、生
ワクチンと不活化ワクチンがある。不活化ワクチンはウ
イルスが病原性を示す危険はない。しかし不活化処理に
よって、エピトープ部位の構造が変化し効果が不十分と
なる場合がある。また、注射器によって１個体ずつ筋肉
内、皮下、皮内等に投与するため、手間がかかり、個体
に対してもストレスを与えるという欠点がある。アジュ
バントとともに投与しなければならないため、局所に炎
症を誘発する場合もある。一方、弱毒化生ワクチンは一
般に高い効果が得られるものの、継代によって病原性が
復帰する危険性があるため、その品質管理には細心の注
意が必要である。

【０００７】ＩＢＤワクチンとしては現在までに種々の
ものが報告されており、特開平７−６７６３４号公報方
には、ＩＢＤウイルスのＩＱ株及び91-6株の不活化ワク
チン、特開平５−１９４５９７号公報には、ウイルス構
造蛋白であるVP-2、VP-3、VP-4蛋白を含むワクチン等が
記載されている。また、特表平７−５０１２２６号公報
には、ＩＢＤウイルス・デラウェア株を弱毒化させたワ
クチン、特開平７−２２８５４２号公報には、不活化し
たウイルスを主成分とする気管内投与用ワクチン、特開
昭５０−４８１２０号公報には、累代継代して弱毒化ワ
クチン及び不活化剤で不活化したワクチンが開示されて
いる。しかしながら、現在流行している高度病原性ＩＢ
Ｄに対して、安全でかつ十分な有効性を発揮するワクチ
ンは知られていない。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】野外では常に新しい性
状を有するウイルス株が出現するため、そのウイルス株
に適した新規な株を使用したワクチンの開発が必要とさ
れている。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、この様な
状況から鋭意研究を進めた結果、高度病原性ＩＢＤウイ
ルスの野外株を継代培養することによって、雛鳥に対し
て病原性がなく、優れたワクチン効果を有し、しかも鶏
で10代継代しても病原性が復帰しない弱毒ウイルス株YH
-91-CLC株の作出に成功、本発明を完成させた。

【００１０】すなわち本発明は、(1)伝染性ファブリキ
ウス嚢病ウイルスYH-91-CLC株、及び／又は該ウイルス
株の細胞継代株、(2)伝染性ファブリキウス嚢病ウイル
スYH-91-CLC株、及び／又は該ウイルス株の細胞継代株
を有効成分とする伝染性ファブリキウス嚢病ワクチン、
(3)伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスYH-91-CLC株、及
び／又は該ウイルス株の細胞継代株を有効成分とし、薬
理学的に許容される担体を含む伝染性ファブリキウス嚢
病ワクチン組成物、(4)配列番号１に示した塩基配列を
含む遺伝子、(5)配列番号１に示した塩基配列を含む遺
伝子を有する伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス、及び
／又は該ウイルスの細胞継代株、(6)配列番号１に示し
た塩基配列を含む遺伝子を有する伝染性ファブリキウス
嚢病ウイルスYH-91-CLC株、及び／又は該ウイルス株の
細胞継代株、(7)配列番号２〜５に示したアミノ酸配列
を含むペプチドである。

【００１１】ＩＢＤウイルスYH-91-CLC株は、1991年に
徳島県で分離された高度病原性ＩＢＤウイルス株（以下
徳島株）をＳＰＦ鶏由来の発育鶏卵の漿尿膜上接種で15
代及び卵黄嚢で46代継代したウイルス株を鶏胚線維芽細
胞（Chick embryo fibroblast、以下ＣＥＦ）で４代継
代し、さらにＣＥＦで３代プラーククローニングし、Ｃ
ＥＦで１代継代して得られた４株の中から１株を選択し
たものである。

【００１２】なお、本明細書中ではＩＢＤウイルスYH-9
1-CLC株を、YH-91-CLC株、または単にCLC株と標記する
場合がある。

【００１３】本発明に係るYH-91-CLC株の微生物学的性
状は以下の通りである。 分類 ビルナウイルス科アビビルナウイルス属 形態 1)ウイルスの形状：球形 2)大きさ：50〜60nm 3)エンベロープ：無 4)ヌクレオカプシドの形：正20面体

【００１４】配列番号１に示した塩基配列は、ＩＢＤウ
イルスYH-91-CLC株の遺伝子のうち分節Ａの塩基配列を
示す。また、配列番号３〜５に示したアミノ酸配列で示
されるペプチドは、分節Ａの遺伝子によってコードされ
る構造蛋白質であるＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ３をそれぞれ
表す。配列番号６は、YH-91-CLC株のＶＰ２超可変領域
の一部のアミノ酸配列を示す（配列番号３の228〜334番
目のアミノ酸配列に相当する）。また、配列番号７〜12
は、それぞれＩＢＤウイルス徳島株、岡山株、GBF-1
株、J1株、K株、Lukert-BP株の配列番号６と同部位のア
ミノ酸配列である。なお、配列番号９(GBF-1株)の57番
目のアミノ酸は特定されていない。

【００１５】

【発明の実施の形態】本発明におけるワクチンとは、生
ウイルスそのものを利用するワクチン、及び／又は生ウ
イルスを不活化したワクチンを意味する。生ウイルスワ
クチンは、継代培養、高温度培養等公知の方法で培養
し、無毒化、または感染しても発病しない程度に弱毒化
したものである。不活化ワクチンは加熱、紫外線照射等
の物理的処理、ホルマリン、フェノール、ベータプロピ
オラクトン等による化学的処理など、公知の方法により
不活化したものである。

【００１６】本発明に係るワクチンの投与経路として
は、経口、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、点眼、腹腔
内、Ｆ嚢内等が挙げられるが、生ワクチンとして投与す
る場合には混水、混餌又は強制経口投与するのが好まし
い。また、不活化ワクチンとして投与する場合には筋肉
内、腹腔内、皮下等への投与が好ましい。この際、ゴマ
油、菜種油等の植物油、フロイントの完全アジュバン
ト、フロイントの不完全アジュバント等の鉱物オイル、
水酸化アルミニウムゲル、硫酸アルミニウムゲル等の公
知のアジュバントとともに投与すると効果を高めること
ができる。本ワクチンは、ＩＢＤが発症していないとき
に予防的に、または発症後に治療剤として用いる。

【００１７】本発明に係るＩＢＤワクチンを適用する対
象動物は、鶏、七面鳥、鶉、家鴨等の家禽である。投与
量は対象とする家禽の種、週齢によって異なるが、例え
ば生ワクチンとして鶏に使用する場合には、10^2.6TCID
₅₀／羽以上、好ましくは10^3.6TCID₅₀／羽以上となるよ
うに飲水に添加して投与する。投与する時期は任意でよ
く特に限定されないが、例えばブロイラーの場合には、
移行抗体が消失する生後２〜４週齢の雛に生ワクチンを
投与することが好ましい。また、種鶏であれば生ワクチ
ンを生後２〜４週齢、生または不活化ワクチンを70日前
後に投与する。さらに、不活化ワクチンのオイルアジュ
バント製剤であれば生後90日前後に１回、オイル以外の
例えば水酸化アルミニウムゲル製剤であれば生後約90日
及び約110日の２回投与することが好ましい。

【００１８】本発明に係るＩＢＤウイルスYH-91-CLC株
の培養方法は、特に限定されず公知の方法を用いればよ
い。その一例を以下に示す。YH-91-CLC株を規定量（例
えば10^2.0TCID₅₀／0.1ml）になるように維持用培地（Ma
intenance medium、以下ＭＭ）を用いて調製したウイル
ス液を、常法によりあらかじめ37℃、５％CO₂存在下で2
4〜48時間培養したＣＥＦ単層細胞（面積：25cm²の細胞
培養ボトル）に1.0ml接種する。その後37℃、５％CO₂存
在下で24〜96時間培養し、この培養物をすべて回収し、
−80℃で凍結保存後再び融解し、４℃で3000rpm、20分
間遠心分離後、上清を回収する。維持用培地の組成の一
例を以下に示す。

【００１９】

【００２０】本発明に係るＩＢＤウイルスYH-91-CLC株
の遺伝子配列の解析は、通常行われる公知の方法で実施
可能である。たとえばMolecular Cloning；A Laborator
y Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spri
ng Harbor, New York等に記載の方法に従って行うこと
ができる。

【００２１】なお、本発明に係るＩＢＤウイルスYH-91-
CLC株及び該ウイルスの細胞継代株は、−80℃以下で長
期間保存可能であって、財団法人畜産生物科学安全研究
所に登録保管されており、頒布可能な状態にある。

【００２２】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。

【００２３】実施例１ YH-91-CLC株の力価測定 YH-91-CLC株の力価は、常法により24穴プレートで単層
形成したＣＥＦを用いて測定した。ＣＥＦの表面をHan
k's均衡塩類溶液で３回洗浄した後、予めＭＭで10段階
希釈したYH-91-CLC株のウイルス液の0.1mlを各穴に加え
て15分ごとに攪拌しながら90分間吸着した。吸着後、ウ
イルスを吸引除去し、各穴にＭＭを1ml加えて、37℃、
５％CO₂存在下で培養し、細胞変性効果（Cytopathic ef
fect、ＣＰＥ）を指標としてTCID₅₀を算出した。その結
果をテーブル２に示した。

【００２４】

【００２５】実施例２ 免疫用のウイルス株の調製 ＩＢＤウイルスYH-91-CLC株をテーブル３に示した用量
となるように、リン酸緩衝生理食塩液（Phosphate buff
ered saline、以下ＰＢＳ）で調製した。

【００２６】

【００２７】実施例３ 攻撃用の徳島株の調製 ＩＢＤウイルス徳島株に感染した鶏のＦ嚢を摘出し、20
％濃度の乳剤とした後、ＰＢＳで４倍に希釈した。その
0.4mlをＳＰＦ鶏15羽（白色レグホン種、８週齢）に強
制経口投与した。投与後３日目に放血致死させ解剖し、
Ｆ嚢を採取した。採取したＦ嚢は、凍結融解を３回繰り
返した後、ＰＢＳを加えて50％乳剤とし、攻撃試験用の
サンプルとして−80℃以下で凍結保存した。また、50％
の乳剤の一部を10000rpm、４℃で30分間遠心分離し、上
清を0.22μmのメンブランフィルターで濾過した後、力
価測定用のサンプルとして−80℃で凍結保存した。

【００２８】実施例４ 攻撃用徳島株の力価測定 攻撃用ウイルス株の力価測定は以下の方法で実施した。
すなわち実施例３の凍結サンプルを融解し、ＰＢＳを用
いて10⁴〜10¹¹倍の10段階希釈後、各希釈液の0.1mlずつ
を10個の10日齢ＳＰＦ鶏由来の発育卵奬尿膜上に接種し
た。接種後８日間の鶏胚の死亡数より、EID₅₀を算出し
た結果、10^8.6EID₅₀/mlであった。

【００２９】実施例５ 攻撃試験(1) 実施例２で調製したYH-91-CLC株の10^0.6、10^1.6、10^2.6
及び10^3.6TCID₅₀/0.2ml/羽を、それぞれ５羽のＳＰＦ鶏
（白色レグホン種、２週齢）に強制経口投与し、免疫後
０、７、14及び21日目に全鶏から採血した。血清を分離
し、中和抗体価測定用に−20℃で凍結保存した。さらに
免疫後21日目に、実施例３で調製した攻撃試験用徳島株
乳剤を10％になるようにＰＢＳで希釈し、0.2ml/羽（10
^7.2EID₅₀/羽に相当）を強制経口投与して攻撃し、攻撃
後４日間の臨床症状の観察を行った。死亡鶏はその都度
剖検し、生存鶏は攻撃後４日目に放血殺の後解剖して、
肉眼的観察を行った。全鶏について死亡時又は剖検時の
体重及びＦ嚢の重量測定を行い、Ｆ嚢、胸腺及び脾臓を
採材した。対照群としては非免疫攻撃群を設け、各免疫
群と同様に徳島株による攻撃を行った。非免疫攻撃群で
は徳島株攻撃後２日目から、10^0.6及び10^1.6免疫群では
攻撃後１日目から、10^2.6免疫群では攻撃後３日目か
ら、各群全鶏において沈鬱、羽毛粗造、下痢等の症状が
観察された。それらの症状は死亡時ないし攻撃後４日の
計画殺時まで回復傾向は認められなかった。一方、10
^3.6免疫群では攻撃後４日目まで、それらの症状はみら
れなかった。攻撃後４日目の生存数は、非免疫攻撃群で
１羽、10^0.6免疫群で０羽、10^1.6免疫群で１羽、10^2.6
及び10^3.6免疫群でそれぞれ５羽であった。剖検時のＦ
嚢重量指数（Ｆ嚢重量／体重×1000）は、非免疫攻撃群
と各免疫群の間で差はみられなかった。また、Ｆ嚢及び
他の臓器の剖検時の肉眼的病理検査の結果、非免疫攻撃
群では計画殺鶏を含む３羽でＦ嚢の外側及び割面に赤色
点の散在ないし水腫及び黄色化が認められたが、各免疫
群では全羽において変化はみられなかった。臨床症状、
生存数及びＦ嚢への影響をそれぞれテーブル４、５及び
６に示した。

【００３０】 ＋:元気消失、羽毛粗造、鶏冠退色、下痢 −:変化なし ＊：全例死亡のため３日以降所見無し

【００３１】

【００３２】

【表１】

【００３３】実施例６ 攻撃試験(2) YH-91-CLCをCEFで１代継代した株（以後CLC'株と表記）
のワクチン効果を調べた。実施例２と同様の方法で、CL
C'株を使用して、10^1.6TCID₅₀/0.2ml/羽、10^{2. 6}TCID₅₀/
0.2ml/羽、10^3.6TCID₅₀/0.2ml/羽の投与量になるように
ワクチン液を調製した。実施例５とほぼ同様の方法で、
強毒株である徳島株(10^7.2EID₅₀/0.2ml/羽)で攻撃試験
を実施した。臨床症状・中和抗体価、生存数及び病理学
的検査の結果をそれぞれテーブル７、８及び９に示し
た。

【００３４】 ＋:元気消失、沈鬱、羽毛粗造、鶏冠退色、下痢 −:変化なし 中和抗体価：攻撃直前の血中抗体価

【００３５】

【００３６】 剖検所見； ＋：Ｆ嚢の発赤、赤色点散在、腫脹、水腫、脆弱、黄色
化、チーズ様内容物存在のいずれか１以上の所見あり −：所見なし 病理組織所見； ＋：軽度、++：中等度、+++：高度 −：変化なし

【００３７】実施例７ 攻撃試験(3) 実施例６と同様の方法で攻撃試験を実施した。ただし、
攻撃ウイルス濃度は、10^4.2EID₅₀/0.2ml/羽とした。臨
床症状、生存数及び病理学的検査の結果をそれぞれテー
ブル１０、１１及び１２に示した。

【００３８】 ＋:元気消失、沈鬱、羽毛粗造、鶏冠退色、下痢 −:変化なし 中和抗体価：攻撃直前の血中抗体価

【００３９】

【００４０】 剖検所見；＋：Ｆ嚢の発赤、赤色点散在、腫脹、水腫、
脆弱、黄色化、チーズ様内容物存在のいずれか１以上の
所見あり −：所見なし 病理組織所見； ＋：軽度、++：中等度、+++：高度 −：変化なし

【００４１】実施例８ 攻撃試験(4) ＩＢＤウイルスYH-91-CLC株(CLC株)から作製したワクチ
ンと市販のワクチンを使用して攻撃試験を実施し、効果
及び安全性を比較した。市販ワクチンとして、日生研Ｉ
ＢＤ生ワクチン(商品名；日生研(株)製、弱毒ＩＢＤウ
イルスMB-1・E株、以下MB-1株)を使用した。試験群はテ
ーブル１３の通り設定し、攻撃には徳島株の10^7.2EID₅₀
/0.2ml/羽を使用し、その他の試験方法は実施例５とほ
ぼ同様とした。臨床症状、生存数、剖検所見及びBB-Ind
ex［(試験鶏のＦ嚢重量/体重)／(対照群のＦ嚢重量/体
重)を算出］をテーブル１４、１５、１６及び１７にそ
れぞれ示した。その結果、臨床症状、生存数、剖検所見
には、CLC株群とMB-1株群との間に差はみられなかっ
た。しかし、BB-IndexはCLC株群が0.87であったのに対
して、MB-1株群では0.44と低かった。したがって、CLC
株ワクチンは、Ｆ嚢に対する障害をMB-1株ワクチンより
も軽減できるものと考えられた。

【００４２】

【００４３】 ＋：元気消失、沈鬱、羽毛粗造、鶏冠退色のいずれかを
確認 −：変化なし

【００４４】

【００４５】 *:Ｆ嚢の発赤、水腫、黄変、チーズ様物存在のいずれか
１以上の所見が認められた個体数

【００４６】 Ｆ嚢重量指数：Ｆ嚢重量／体重×1000

【００４７】実施例９ 病原性復帰否定試験 ＩＢＤウイルスYH-91-CLC株をＰＢＳで10^4.0TCID₅₀/0.3
ml/羽となるように調製し、４週齢のＳＰＦ鶏10羽に強
制経口投与した。投与後５日目に体重を測定後、剖検し
て肉眼観察を行いＦ嚢を採取した。Ｆ嚢は重量を測定し
た後、半数をホルマリンで固定した。また、残りの半数
のＦ嚢をプールしＰＢＳで10％乳剤とした。３回凍結融
解後、2000rpmで５分間遠心分離し、上清0.2mlを継代に
用いた。以後、同様に繰り返し、10代まで継代を行っ
た。継代過程で臨床症状及び剖検時の肉眼所見は認めら
れなかった。また、BB index［(試験鶏のＦ嚢重量/体
重)／(対照群のＦ嚢重量/体重)を算出］にも変化はみら
れなかった(テーブル１８)。以上の結果から、YH-91-CL
C株を10代継代しても、病原性は復帰しないことが明ら
かになった。

【００４８】

【００４９】実施例１０ YH-91-CLC株のウイルスゲノ
ム分節Aの塩基配列の決定(1)ウイルス核酸の抽出 ウイルス核酸の抽出はISOGEN-LS(商品名；株式会社ニッ
ポンジーン製)を用いて行った。10^6.9TCID₅₀/mlのウイ
ルス液250μlから抽出したRNAを、15〜20μlのRNase-fr
ee水に溶解した。

【００５０】(2)ウイルス遺伝子の増幅 上記の方法により得られたウイルスRNAを鋳型として、
逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)を行い、分節Aの
LORF全域をカバーする、部分的に重なり合う3つのDNA断
片を得た。まずウイルスRNA液とジメチルスルホキシド
(DMSO)を2：1の割合で混合し、97℃5分間加熱後、氷水
中で急冷し、この3μlをテーブル１９の組成からなる逆
転写反応液17μlに加え、37℃１時間、逆転写反応を行
った。次に95℃5分間の加熱により逆転写酵素を失活さ
せた後、テーブル２０の組成からなる反応液を80μl加
え、PCRを行った。95℃5分間の熱変性を行った後、93℃
1分間の熱変性、60℃1分間のアニーリング、72℃2分間
の伸長反応を30サイクル実施し、さらに72℃5分間の伸
長反応を行った。1.5％アガロースゲルを用いた電気泳
動により、PCR産物として目的のDNA断片が得られている
ことを確認し、目的のバンドを含むアガロースゲルを切
り出し、常法に従ってDNAを回収した。

【００５１】

【００５２】

【００５３】(3)PCR産物のベクターへのクローニング 上記の方法により精製されたPCR産物は、Original TA C
loning Kit(商品名；Invitrogen社)を用いてpCR 2.1ベ
クターにライゲーション反応により挿入し、宿主大腸菌
であるINVαF' cellを形質転換した。LB寒天培地上に発
育した白色のコロニーについて、PCR法によりYH-91-CLC
株由来のDNA断片の有無を確認し、各断片について最低4
個の組み換え大腸菌を得た。組換え大腸菌は、2mlのLur
ia-Bertani寒天培地を用いて37℃、16時間、230rpmで培
養し、うち0.5mlは等量の70％グリセリンと混合し、-80
℃で保管した。残りの1.5mlについてはアルカリ-SDS法
でプラスミドを抽出し、シークエンス反応の鋳型とし
た。

【００５４】(4)塩基配列の決定 上記の方法により得られたプラスミドDNAを鋳型とし
て、ダイデオキシ法により塩基配列を決定した。シーク
エンス反応にはThermoSequenase fluorescent labelled
primer cycle sequence kit with 7-deaza-dGTP(商品
名；Amarsham Pharmacia Biotec製)を用いた。なお、得
られた塩基配列のデータは、遺伝情報処理ソフトウェア
GENETYX-WIN(商品名；ソフトウェア開発(株)製)及び核
酸配列自動結合ソフトウェアGENETYX-WIN/ATSQ(商品
名；ソフトウェア開発(株)製)により解析を行った。得
られた分節Ａの遺伝子の塩基配列、及びこの遺伝子によ
ってコードされるペプチドのアミノ酸配列を配列番号１
に示した。

【００５５】(5)ウイルス株によるＶＰ２蛋白のアミノ
酸配列の違い YH-91-CLC株及び既存のＩＢＤウイルス株である徳島
株、岡山株、GBF-1株、J1株、K株、Lukert-BP株のアミ
ノ酸配列に異なる部分があるかどうか検討した。配列番
号６は、YH-91-CLC株のＶＰ２超可変領域の一部のアミ
ノ酸配列を示す(配列番号３の228〜334番目のアミノ酸
配列に相当する)。また、配列番号７〜12は、それぞれ
ＩＢＤウイルス徳島株、岡山株、GBF-1株、J1株、K株、
Lukert-BP株の同部位のアミノ酸配列である。これらの
配列の26及び29番目(VP2蛋白としてそれぞれ253及び256
番目に相当する)のアミノ酸の比較をテーブル２１に示
した。

【００５６】

【００５７】実施例１１ VP2超可変領域の制限酵素に
よる処理 ＩＢＤウイルスYH-91-CLC株、徳島株、岡山株、GBF-1
株、J1株、Ｋ株、Lukert-bp株のVP2超可変領域のPCR産
物を、常法によってエタノール沈殿させた後、約30μl
の滅菌精製水に溶解し、６単位の制限酵素を用いて消化
を行った。まず、PCR産物１容に対してエタノール２容
及び酢酸ナトリウム1/10容を加えた。これを−20℃に一
夜放置後、12000rpm、60分、４℃の条件で遠心を行っ
た。上清を捨て沈渣を真空乾燥させた後、約30μlの滅
菌精製水を加えて溶解した。これをテーブル２２又は２
３に示した反応液で、37℃１時間インキュベートした。
これに10倍色素液を２μl加えた後、1.5％TBEゲルで電
気泳動を行った。その結果、CLC株はK株とは同じパター
ンを示したが、その他の株とは異なるパターンを示すこ
とが明らかになった(テーブル２４)。

【００５８】

【００５９】

【００６０】

【００６１】

【配列表】

【００６２】 <110> Eisai Co., Ltd. <120> Vaccine for poultry <130> 99NT006H <140> <141> <150> 1998-7-21 <151> JP98/204615 <160> 12 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 3148 <212> RNA <213> Infectious bursal disease virus <220> <221> CDS <222> (39)..(1394) <220> <221> CDS <222> (1395)..(2204) <220> <221> CDS <222> (2205)..(3074) <400> 1 auugaugguu aguagagauc agacaaacga ucgcagcg aug acg aac cug caa gau 56 Met Thr Asn Leu Gln Asp 1 5 caa acc caa cag auu guu ccg uuc aua cgg agc cuu cug aug cca aca 104 Gln Thr Gln Gln Ile Val Pro Phe Ile Arg Ser Leu Leu Met Pro Thr 10 15 20 acc gga ccg gcg ucc auu ccg gac gac acc cua gag aag cac acu cuc 152 Thr Gly Pro Ala Ser Ile Pro Asp Asp Thr Leu Glu Lys His Thr Leu 25 30 35 agg uca gag acc ucg acc uac aau uug acu gug ggg gac aca ggg uca 200 Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr Asn Leu Thr Val Gly Asp Thr Gly Ser 40 45 50 ggg cua auu guc uuu uuc ccu ggu uuc ccu ggc uca auu gug ggu gcu 248 Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro Gly Phe Pro Gly Ser Ile Val Gly Ala 55 60 65 70 cac uac aca cug cag agc aau ggg aac uac aag uuc gau cag aug cuc 296 His Tyr Thr Leu Gln Ser Asn Gly Asn Tyr Lys Phe Asp Gln Met Leu 75 80 85 cug acu gcc cag aac cua ccg gcc agc uac aac uac ugc agg cua gug 344 Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro Ala Ser Tyr Asn Tyr Cys Arg Leu Val 90 95 100 agu cgg agu cuc aca gug agg uca agc aca cuc ccu ggu ggc guu uau 392 Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg Ser Ser Thr Leu Pro Gly Gly Val Tyr 105 110 115 gca cua aau ggc acc aua aac gcc gug acc uuc caa gga agc cug agu 440 Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn Ala Val Thr Phe Gln Gly Ser Leu Ser 120 125 130 gaa cug aca gau guu agc uac aau ggg uug aug ucu gca aca gcc aac 488 Glu Leu Thr Asp Val Ser Tyr Asn Gly Leu Met Ser Ala Thr Ala Asn 135 140 145 150 auc aac gac aaa auc ggg aac guc cua gua ggg gag ggg gua acc guc 536 Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn Val Leu Val Gly Glu Gly Val Thr Val 155 160 165 cuc agc uua ccc aca uca uau gau cuu ggg uau gug aga cuc ggu gac 584 Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr Asp Leu Gly Tyr Val Arg Leu Gly Asp 170 175 180 ccc auu ccc gcu aua ggg cuc gac cca aaa aug gua gca aca ugu gac 632 Pro Ile Pro Ala Ile Gly Leu Asp Pro Lys Met Val Ala Thr Cys Asp 185 190 195 agc agu gac agg ccc aga guc uac acc aua acu gca gcc gau gau uac 680 Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val Tyr Thr Ile Thr Ala Ala Asp Asp Tyr 200 205 210 caa uuc uca uca cag uac caa gca ggu ggg gua aca auc aca cug uuc 728 Gln Phe Ser Ser Gln Tyr Gln Ala Gly Gly Val Thr Ile Thr Leu Phe 215 220 225 230 uca gcu aau auc gau gcc auc aca agc cuc agc auc ggg gga gaa cuc 776 Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Ile Gly Gly Glu Leu 235 240 245 gug uuu caa aca agc guc cau ggc cuc aca cug ggu gcu acc auc uac 824 Val Phe Gln Thr Ser Val His Gly Leu Thr Leu Gly Ala Thr Ile Tyr 250 255 260 cuu aua ggc uuu gau ggg acu gcg gua auc acc aga gcu gug gcc gca 872 Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Ala Val Ile Thr Arg Ala Val Ala Ala 265 270 275 aac aau ggg cua acg acc ggc acu gac aac cuu aug cca uuc aau auu 920 Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn Leu Met Pro Phe Asn Ile 280 285 290 gug auu cca acc agc gag aua acc cag cca auc aca ucc auc aaa cug 968 Val Ile Pro Thr Ser Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser Ile Lys Leu 295 300 305 310 gag aua gug acc ucc aaa agu ggu ggu cag gcg ggg gau cag aug uca 1016 Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp Gln Met Ser 315 320 325 ugg uca gca agu ggg agc cua gca gug acg auc cac ggu ggc aac uac 1064 Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala Val Thr Ile His Gly Gly Asn Tyr 330 335 340 cca ggg gcc cuc cgu ccc guc aca cua gua gcc uac gaa aga gug gca 1112 Pro Gly Ala Leu Arg Pro Val Thr Leu Val Ala Tyr Glu Arg Val Ala 345 350 355 aca gga ucu guc guu acg guc gcc ggg gug agc aac uuc gag cug auc 1160 Thr Gly Ser Val Val Thr Val Ala Gly Val Ser Asn Phe Glu Leu Ile 360 365 370 cca aac ccu gaa cua gca aag aac cug guc aca gaa uac ggc cga uuu 1208 Pro Asn Pro Glu Leu Ala Lys Asn Leu Val Thr Glu Tyr Gly Arg Phe 375 380 385 390 gac cca ggg gcc aug aac uac aca aaa uug aua cug agu gag agg gac 1256 Asp Pro Gly Ala Met Asn Tyr Thr Lys Leu Ile Leu Ser Glu Arg Asp 395 400 405 cgu cuu ggc auc aag acc gua gug cca aca agg gag uac acu gac uuu 1304 Arg Leu Gly Ile Lys Thr Val Val Pro Thr Arg Glu Tyr Thr Asp Phe 410 415 420 cgc gag uac uuc aug gag gug gcc gac cuc aac ucu ccc cug aag auu 1352 Arg Glu Tyr Phe Met Glu Val Ala Asp Leu Asn Ser Pro Leu Lys Ile 425 430 435 gca gga gca uuu ggc uuc aaa gac aua auu cgg gca cua agg agg aua 1400 Ala Gly Ala Phe Gly Phe Lys Asp Ile Ile Arg Ala Leu Arg Arg Ile 440 445 450 gcu gug ccg gug guc ucu aca cug uuc cca ccc gcc gcu ccc cua gcc 1448 Ala Val Pro Val Val Ser Thr Leu Phe Pro Pro Ala Ala Pro Leu Ala 455 460 465 470 cau gca auu ggg gaa ggu gua gac uac cug cug ggc gau gag gca cag 1496 His Ala Ile Gly Glu Gly Val Asp Tyr Leu Leu Gly Asp Glu Ala Gln 475 480 485 gcu gcu uca gga acu gcu cga gcc gcg uca gga aaa gca aga gcu gcc 1544 Ala Ala Ser Gly Thr Ala Arg Ala Ala Ser Gly Lys Ala Arg Ala Ala 490 495 500 uca ggc cgc aua agg cag cua acu cuc gcc gcc gac aag ggg uac gag 1592 Ser Gly Arg Ile Arg Gln Leu Thr Leu Ala Ala Asp Lys Gly Tyr Glu 505 510 515 gua guc gcg aau cug uuu cag gug ccc cag aau ccu gua guc gac ggg 1640 Val Val Ala Asn Leu Phe Gln Val Pro Gln Asn Pro Val Val Asp Gly 520 525 530 auu cuc gcu uca ccu ggg aua cuc cgc ggu gca cac aac cuc gac ugc 1688 Ile Leu Ala Ser Pro Gly Ile Leu Arg Gly Ala His Asn Leu Asp Cys 535 540 545 550 gug uug aga gag ggu gcc acg cua uuc ccu gug guc auc acg aca gug 1736 Val Leu Arg Glu Gly Ala Thr Leu Phe Pro Val Val Ile Thr Thr Val 555 560 565 gaa gau gcc aug aca ccu aaa gca cug aac agc aaa aug uuu gcu guc 1784 Glu Asp Ala Met Thr Pro Lys Ala Leu Asn Ser Lys Met Phe Ala Val 570 575 580 auu gaa ggc gug cga gaa gac cuc caa ccu cca ucu caa aga gga ucu 1832 Ile Glu Gly Val Arg Glu Asp Leu Gln Pro Pro Ser Gln Arg Gly Ser 585 590 595 uuc aua cga acu cuc ucc gga cau aga guc uau gga uau gcu cca gau 1880 Phe Ile Arg Thr Leu Ser Gly His Arg Val Tyr Gly Tyr Ala Pro Asp 600 605 610 ggg gua cuu cca cug gag acu ggg aga gau uau acc gug guc cca aua 1928 Gly Val Leu Pro Leu Glu Thr Gly Arg Asp Tyr Thr Val Val Pro Ile 615 620 625 630 gau gau guc ugg gac gac agc auu aug cug ucc aaa gac ccc aua ccu 1976 Asp Asp Val Trp Asp Asp Ser Ile Met Leu Ser Lys Asp Pro Ile Pro 635 640 645 ccu auu gug gga aac agc gga aac cua gcc aua gcu uac aug gau gua 2024 Pro Ile Val Gly Asn Ser Gly Asn Leu Ala Ile Ala Tyr Met Asp Val 650 655 660 uuu cga ccc aaa guc ccc auc cau gua gcc aug acg gga gcc cuc aac 2072 Phe Arg Pro Lys Val Pro Ile His Val Ala Met Thr Gly Ala Leu Asn 665 670 675 gcc uau ggc gag auu gag aac gug agc uuu aga agc acc aag cuc gcc 2120 Ala Tyr Gly Glu Ile Glu Asn Val Ser Phe Arg Ser Thr Lys Leu Ala 680 685 690 acu gca cac cga cuu ggc cuc aag uug gcu ggu ccc ggu gca uuc gac 2168 Thr Ala His Arg Leu Gly Leu Lys Leu Ala Gly Pro Gly Ala Phe Asp 695 700 705 710 gug aac acc ggg ucc aac ugg gcg acg uuu auc aaa cgu uuu ccu cac 2216 Val Asn Thr Gly Ser Asn Trp Ala Thr Phe Ile Lys Arg Phe Pro His 715 720 725 aau cca cgc gac ugg gac agg cuc ccu uac cuc aac cuu cca uac cuu 2264 Asn Pro Arg Asp Trp Asp Arg Leu Pro Tyr Leu Asn Leu Pro Tyr Leu 730 735 740 cca ccc aac gca gga cgc cag uac ggc cug gcc aug gcc gcu uca gag 2312 Pro Pro Asn Ala Gly Arg Gln Tyr Gly Leu Ala Met Ala Ala Ser Glu 745 750 755 uuc aaa gag acc ccc gaa cuc gag agc gcc guc aga gcc aug gaa gca 2360 Phe Lys Glu Thr Pro Glu Leu Glu Ser Ala Val Arg Ala Met Glu Ala 760 765 770 gca gcc aac gug gac cca cug uuc caa ucu gcg cuc agc gug uuc aug 2408 Ala Ala Asn Val Asp Pro Leu Phe Gln Ser Ala Leu Ser Val Phe Met 775 780 785 790 ugg cug gaa gag aau ggg auu gug acu gau aug gcc aac uuc gca cuc 2456 Trp Leu Glu Glu Asn Gly Ile Val Thr Asp Met Ala Asn Phe Ala Leu 795 800 805 agc gac ccg aau gcc cau cgg aug cgc aau uuu cuc gca aac gca cca 2504 Ser Asp Pro Asn Ala His Arg Met Arg Asn Phe Leu Ala Asn Ala Pro 810 815 820 caa gca ggc agc aag ucg caa aga gcc aag uac ggg aca gca ggc uac 2552 Gln Ala Gly Ser Lys Ser Gln Arg Ala Lys Tyr Gly Thr Ala Gly Tyr 825 830 835 gga gug gag gcc cgg ggc ccc acu cca gag gga gca cag agg gaa aaa 2600 Gly Val Glu Ala Arg Gly Pro Thr Pro Glu Gly Ala Gln Arg Glu Lys 840 845 850 gac aca cgg auc uca aag aag aug gag acu aug ggc auc uac uuu gca 2648 Asp Thr Arg Ile Ser Lys Lys Met Glu Thr Met Gly Ile Tyr Phe Ala 855 860 865 870 aca cca gaa ugg gua gca cuc aau ggg cac cgg ggg cca agc ccc ggc 2696 Thr Pro Glu Trp Val Ala Leu Asn Gly His Arg Gly Pro Ser Pro Gly 875 880 885 cag cua aag uac ugg cag aac aca cga gaa aua ccu gau cca aac gag 2744 Gln Leu Lys Tyr Trp Gln Asn Thr Arg Glu Ile Pro Asp Pro Asn Glu 890 895 900 gac uac cua gac uac gug cau gca gag aag agc cgg uug gca uca gaa 2792 Asp Tyr Leu Asp Tyr Val His Ala Glu Lys Ser Arg Leu Ala Ser Glu 905 910 915 gaa caa auc cua agg gca gcu acg ucg auc uac ggg gcu cca gga cag 2840 Glu Gln Ile Leu Arg Ala Ala Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Pro Gly Gln 920 925 930 gcg gag cca ccc cag gcc uuc aua gac gaa guc gcc aaa guc uau gaa 2888 Ala Glu Pro Pro Gln Ala Phe Ile Asp Glu Val Ala Lys Val Tyr Glu 935 940 945 950 auc aac cau ggg cgu ggc ccc aac caa gaa cag aug aaa gau cug cuc 2936 Ile Asn His Gly Arg Gly Pro Asn Gln Glu Gln Met Lys Asp Leu Leu 955 960 965 uug acu gcg aug gag aug aag cau cgc aau ccc agg cgg gcu cca cca 2984 Leu Thr Ala Met Glu Met Lys His Arg Asn Pro Arg Arg Ala Pro Pro 970 975 980 aag ccc aag cca aaa ccc aau guu cca aca cag aga ccc ccu ggu cgg 3032 Lys Pro Lys Pro Lys Pro Asn Val Pro Thr Gln Arg Pro Pro Gly Arg 985 990 995 cug ggc cgc ugg auc agg gcu guc ucu gau gag gac cuu gag 3074 Leu Gly Arg Trp Ile Arg Ala Val Ser Asp Glu Asp Leu Glu 1000 1005 1010 ugaggcuccu gggagucucc cgacaccacc cgcgcaggcg uggacaccaa uucggccuua 3134 caacauccca aauu 3148

【００６３】 <210> 2 <211> 1012 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 2 Met Thr Asn Leu Gln Asp Gln Thr Gln Gln Ile Val Pro Phe Ile Arg 1 5 10 15 Ser Leu Leu Met Pro Thr Thr Gly Pro Ala Ser Ile Pro Asp Asp Thr 20 25 30 Leu Glu Lys His Thr Leu Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr Asn Leu Thr 35 40 45 Val Gly Asp Thr Gly Ser Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro Gly Phe Pro 50 55 60 Gly Ser Ile Val Gly Ala His Tyr Thr Leu Gln Ser Asn Gly Asn Tyr 65 70 75 80 Lys Phe Asp Gln Met Leu Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro Ala Ser Tyr 85 90 95 Asn Tyr Cys Arg Leu Val Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg Ser Ser Thr 100 105 110 Leu Pro Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn Ala Val Thr 115 120 125 Phe Gln Gly Ser Leu Ser Glu Leu Thr Asp Val Ser Tyr Asn Gly Leu 130 135 140 Met Ser Ala Thr Ala Asn Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn Val Leu Val 145 150 155 160 Gly Glu Gly Val Thr Val Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr Asp Leu Gly 165 170 175 Tyr Val Arg Leu Gly Asp Pro Ile Pro Ala Ile Gly Leu Asp Pro Lys 180 185 190 Met Val Ala Thr Cys Asp Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val Tyr Thr Ile 195 200 205 Thr Ala Ala Asp Asp Tyr Gln Phe Ser Ser Gln Tyr Gln Ala Gly Gly 210 215 220 Val Thr Ile Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu 225 230 235 240 Ser Ile Gly Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val His Gly Leu Thr 245 250 255 Leu Gly Ala Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Ala Val Ile 260 265 270 Thr Arg Ala Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn 275 280 285 Leu Met Pro Phe Asn Ile Val Ile Pro Thr Ser Glu Ile Thr Gln Pro 290 295 300 Ile Thr Ser Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln 305 310 315 320 Ala Gly Asp Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala Val Thr 325 330 335 Ile His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Ala Leu Arg Pro Val Thr Leu Val 340 345 350 Ala Tyr Glu Arg Val Ala Thr Gly Ser Val Val Thr Val Ala Gly Val 355 360 365 Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Ala Lys Asn Leu Val 370 375 380 Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Ala Met Asn Tyr Thr Lys Leu 385 390 395 400 Ile Leu Ser Glu Arg Asp Arg Leu Gly Ile Lys Thr Val Val Pro Thr 405 410 415 Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu Val Ala Asp Leu 420 425 430 Asn Ser Pro Leu Lys Ile Ala Gly Ala Phe Gly Phe Lys Asp Ile Ile 435 440 445 Arg Ala Leu Arg Arg Ile Ala Val Pro Val Val Ser Thr Leu Phe Pro 450 455 460 Pro Ala Ala Pro Leu Ala His Ala Ile Gly Glu Gly Val Asp Tyr Leu 465 470 475 480 Leu Gly Asp Glu Ala Gln Ala Ala Ser Gly Thr Ala Arg Ala Ala Ser 485 490 495 Gly Lys Ala Arg Ala Ala Ser Gly Arg Ile Arg Gln Leu Thr Leu Ala 500 505 510 Ala Asp Lys Gly Tyr Glu Val Val Ala Asn Leu Phe Gln Val Pro Gln 515 520 525 Asn Pro Val Val Asp Gly Ile Leu Ala Ser Pro Gly Ile Leu Arg Gly 530 535 540 Ala His Asn Leu Asp Cys Val Leu Arg Glu Gly Ala Thr Leu Phe Pro 545 550 555 560 Val Val Ile Thr Thr Val Glu Asp Ala Met Thr Pro Lys Ala Leu Asn 565 570 575 Ser Lys Met Phe Ala Val Ile Glu Gly Val Arg Glu Asp Leu Gln Pro 580 585 590 Pro Ser Gln Arg Gly Ser Phe Ile Arg Thr Leu Ser Gly His Arg Val 595 600 605 Tyr Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Leu Pro Leu Glu Thr Gly Arg Asp 610 615 620 Tyr Thr Val Val Pro Ile Asp Asp Val Trp Asp Asp Ser Ile Met Leu 625 630 635 640 Ser Lys Asp Pro Ile Pro Pro Ile Val Gly Asn Ser Gly Asn Leu Ala 645 650 655 Ile Ala Tyr Met Asp Val Phe Arg Pro Lys Val Pro Ile His Val Ala 660 665 670 Met Thr Gly Ala Leu Asn Ala Tyr Gly Glu Ile Glu Asn Val Ser Phe 675 680 685 Arg Ser Thr Lys Leu Ala Thr Ala His Arg Leu Gly Leu Lys Leu Ala 690 695 700 Gly Pro Gly Ala Phe Asp Val Asn Thr Gly Ser Asn Trp Ala Thr Phe 705 710 715 720 Ile Lys Arg Phe Pro His Asn Pro Arg Asp Trp Asp Arg Leu Pro Tyr 725 730 735 Leu Asn Leu Pro Tyr Leu Pro Pro Asn Ala Gly Arg Gln Tyr Gly Leu 740 745 750 Ala Met Ala Ala Ser Glu Phe Lys Glu Thr Pro Glu Leu Glu Ser Ala 755 760 765 Val Arg Ala Met Glu Ala Ala Ala Asn Val Asp Pro Leu Phe Gln Ser 770 775 780 Ala Leu Ser Val Phe Met Trp Leu Glu Glu Asn Gly Ile Val Thr Asp 785 790 795 800 Met Ala Asn Phe Ala Leu Ser Asp Pro Asn Ala His Arg Met Arg Asn 805 810 815 Phe Leu Ala Asn Ala Pro Gln Ala Gly Ser Lys Ser Gln Arg Ala Lys 820 825 830 Tyr Gly Thr Ala Gly Tyr Gly Val Glu Ala Arg Gly Pro Thr Pro Glu 835 840 845 Gly Ala Gln Arg Glu Lys Asp Thr Arg Ile Ser Lys Lys Met Glu Thr 850 855 860 Met Gly Ile Tyr Phe Ala Thr Pro Glu Trp Val Ala Leu Asn Gly His 865 870 875 880 Arg Gly Pro Ser Pro Gly Gln Leu Lys Tyr Trp Gln Asn Thr Arg Glu 885 890 895 Ile Pro Asp Pro Asn Glu Asp Tyr Leu Asp Tyr Val His Ala Glu Lys 900 905 910 Ser Arg Leu Ala Ser Glu Glu Gln Ile Leu Arg Ala Ala Thr Ser Ile 915 920 925 Tyr Gly Ala Pro Gly Gln Ala Glu Pro Pro Gln Ala Phe Ile Asp Glu 930 935 940 Val Ala Lys Val Tyr Glu Ile Asn His Gly Arg Gly Pro Asn Gln Glu 945 950 955 960 Gln Met Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Met Glu Met Lys His Arg Asn 965 970 975 Pro Arg Arg Ala Pro Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Asn Val Pro Thr 980 985 990 Gln Arg Pro Pro Gly Arg Leu Gly Arg Trp Ile Arg Ala Val Ser Asp 995 1000 1005 Glu Asp Leu Glu 1010

【００６４】 <210> 3 <211> 452 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 3 Met Thr Asn Leu Gln Asp Gln Thr Gln Gln Ile Val Pro Phe Ile Arg 1 5 10 15 Ser Leu Leu Met Pro Thr Thr Gly Pro Ala Ser Ile Pro Asp Asp Thr 20 25 30 Leu Glu Lys His Thr Leu Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr Asn Leu Thr 35 40 45 Val Gly Asp Thr Gly Ser Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro Gly Phe Pro 50 55 60 Gly Ser Ile Val Gly Ala His Tyr Thr Leu Gln Ser Asn Gly Asn Tyr 65 70 75 80 Lys Phe Asp Gln Met Leu Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro Ala Ser Tyr 85 90 95 Asn Tyr Cys Arg Leu Val Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg Ser Ser Thr 100 105 110 Leu Pro Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn Ala Val Thr 115 120 125 Phe Gln Gly Ser Leu Ser Glu Leu Thr Asp Val Ser Tyr Asn Gly Leu 130 135 140 Met Ser Ala Thr Ala Asn Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn Val Leu Val 145 150 155 160 Gly Glu Gly Val Thr Val Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr Asp Leu Gly 165 170 175 Tyr Val Arg Leu Gly Asp Pro Ile Pro Ala Ile Gly Leu Asp Pro Lys 180 185 190 Met Val Ala Thr Cys Asp Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val Tyr Thr Ile 195 200 205 Thr Ala Ala Asp Asp Tyr Gln Phe Ser Ser Gln Tyr Gln Ala Gly Gly 210 215 220 Val Thr Ile Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu 225 230 235 240 Ser Ile Gly Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val His Gly Leu Thr 245 250 255 Leu Gly Ala Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Ala Val Ile 260 265 270 Thr Arg Ala Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn 275 280 285 Leu Met Pro Phe Asn Ile Val Ile Pro Thr Ser Glu Ile Thr Gln Pro 290 295 300 Ile Thr Ser Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln 305 310 315 320 Ala Gly Asp Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala Val Thr 325 330 335 Ile His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Ala Leu Arg Pro Val Thr Leu Val 340 345 350 Ala Tyr Glu Arg Val Ala Thr Gly Ser Val Val Thr Val Ala Gly Val 355 360 365 Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Ala Lys Asn Leu Val 370 375 380 Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Ala Met Asn Tyr Thr Lys Leu 385 390 395 400 Ile Leu Ser Glu Arg Asp Arg Leu Gly Ile Lys Thr Val Val Pro Thr 405 410 415 Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu Val Ala Asp Leu 420 425 430 Asn Ser Pro Leu Lys Ile Ala Gly Ala Phe Gly Phe Lys Asp Ile Ile 435 440 445 Arg Ala Leu Arg 450

【００６５】 <210> 4 <211> 270 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 4 Arg Ile Ala Val Pro Val Val Ser Thr Leu Phe Pro Pro Ala Ala Pro 1 5 10 15 Leu Ala His Ala Ile Gly Glu Gly Val Asp Tyr Leu Leu Gly Asp Glu 20 25 30 Ala Gln Ala Ala Ser Gly Thr Ala Arg Ala Ala Ser Gly Lys Ala Arg 35 40 45 Ala Ala Ser Gly Arg Ile Arg Gln Leu Thr Leu Ala Ala Asp Lys Gly 50 55 60 Tyr Glu Val Val Ala Asn Leu Phe Gln Val Pro Gln Asn Pro Val Val 65 70 75 80 Asp Gly Ile Leu Ala Ser Pro Gly Ile Leu Arg Gly Ala His Asn Leu 85 90 95 Asp Cys Val Leu Arg Glu Gly Ala Thr Leu Phe Pro Val Val Ile Thr 100 105 110 Thr Val Glu Asp Ala Met Thr Pro Lys Ala Leu Asn Ser Lys Met Phe 115 120 125 Ala Val Ile Glu Gly Val Arg Glu Asp Leu Gln Pro Pro Ser Gln Arg 130 135 140 Gly Ser Phe Ile Arg Thr Leu Ser Gly His Arg Val Tyr Gly Tyr Ala 145 150 155 160 Pro Asp Gly Val Leu Pro Leu Glu Thr Gly Arg Asp Tyr Thr Val Val 165 170 175 Pro Ile Asp Asp Val Trp Asp Asp Ser Ile Met Leu Ser Lys Asp Pro 180 185 190 Ile Pro Pro Ile Val Gly Asn Ser Gly Asn Leu Ala Ile Ala Tyr Met 195 200 205 Asp Val Phe Arg Pro Lys Val Pro Ile His Val Ala Met Thr Gly Ala 210 215 220 Leu Asn Ala Tyr Gly Glu Ile Glu Asn Val Ser Phe Arg Ser Thr Lys 225 230 235 240 Leu Ala Thr Ala His Arg Leu Gly Leu Lys Leu Ala Gly Pro Gly Ala 245 250 255 Phe Asp Val Asn Thr Gly Ser Asn Trp Ala Thr Phe Ile Lys 260 265 270

【００６６】 <210> 5 <211> 290 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 5 Arg Phe Pro His Asn Pro Arg Asp Trp Asp Arg Leu Pro Tyr Leu Asn 1 5 10 15 Leu Pro Tyr Leu Pro Pro Asn Ala Gly Arg Gln Tyr Gly Leu Ala Met 20 25 30 Ala Ala Ser Glu Phe Lys Glu Thr Pro Glu Leu Glu Ser Ala Val Arg 35 40 45 Ala Met Glu Ala Ala Ala Asn Val Asp Pro Leu Phe Gln Ser Ala Leu 50 55 60 Ser Val Phe Met Trp Leu Glu Glu Asn Gly Ile Val Thr Asp Met Ala 65 70 75 80 Asn Phe Ala Leu Ser Asp Pro Asn Ala His Arg Met Arg Asn Phe Leu 85 90 95 Ala Asn Ala Pro Gln Ala Gly Ser Lys Ser Gln Arg Ala Lys Tyr Gly 100 105 110 Thr Ala Gly Tyr Gly Val Glu Ala Arg Gly Pro Thr Pro Glu Gly Ala 115 120 125 Gln Arg Glu Lys Asp Thr Arg Ile Ser Lys Lys Met Glu Thr Met Gly 130 135 140 Ile Tyr Phe Ala Thr Pro Glu Trp Val Ala Leu Asn Gly His Arg Gly 145 150 155 160 Pro Ser Pro Gly Gln Leu Lys Tyr Trp Gln Asn Thr Arg Glu Ile Pro 165 170 175 Asp Pro Asn Glu Asp Tyr Leu Asp Tyr Val His Ala Glu Lys Ser Arg 180 185 190 Leu Ala Ser Glu Glu Gln Ile Leu Arg Ala Ala Thr Ser Ile Tyr Gly 195 200 205 Ala Pro Gly Gln Ala Glu Pro Pro Gln Ala Phe Ile Asp Glu Val Ala 210 215 220 Lys Val Tyr Glu Ile Asn His Gly Arg Gly Pro Asn Gln Glu Gln Met 225 230 235 240 Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ala Met Glu Met Lys His Arg Asn Pro Arg 245 250 255 Arg Ala Pro Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Asn Val Pro Thr Gln Arg 260 265 270 Pro Pro Gly Arg Leu Gly Arg Trp Ile Arg Ala Val Ser Asp Glu Asp 275 280 285 Leu Glu 290

【００６７】 <210> 6 <211> 107 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 6 Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Ile Gly 1 5 10 15 Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val His Gly Leu Thr Leu Gly Ala 20 25 30 Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Ala Val Ile Thr Arg Ala 35 40 45 Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn Leu Met Pro 50 55 60 Phe Asn Ile Val Ile Pro Thr Ser Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser 65 70 75 80 Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp 85 90 95 Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala 100 105

【００６８】 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 7 Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Ile Gly 1 5 10 15 Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val Gln Gly Leu Ile Leu Gly Ala 20 25 30 Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Ala Val Ile Thr Arg Ala 35 40 45 Val Ala Ala Asp Asn Gly Leu Thr Ala Gly Thr Asp Asn Leu Met Pro 50 55 60 Phe Asn Ile Val Ile Pro Thr Ser Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser 65 70 75 80 Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp 85 90 95 Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala 100 105

【００６９】 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 8 Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Ile Gly 1 5 10 15 Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val Gln Gly Leu Thr Leu Gly Ala 20 25 30 Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Ala Val Ile Thr Arg Ala 35 40 45 Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn Leu Met Pro 50 55 60 Phe Asn Ile Val Ile Pro Thr Ser Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser 65 70 75 80 Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Phe Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp 85 90 95 Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala 100 105

【００７０】 <210> 9 <211> 107 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <220> <221>UNSURE <222>57 <223>Not specified. <400> 9 Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Val Gly 1 5 10 15 Gly Glu Leu Val Phe His Thr Ser Val Gln Ser Leu Val Leu Gly Ala 20 25 30 Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Ser Thr Val Ile Thr Arg Ala 35 40 45 Val Ala Ala Asp Asn Gly Leu Thr Xaa Gly Thr Asp Asn Leu Met Pro 50 55 60 Phe Asn Leu Val Ile Pro Thr Asn Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser 65 70 75 80 Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp 85 90 95 Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala 100 105

【００７１】 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 10 Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Val Gly 1 5 10 15 Gly Glu Leu Val Phe Arg Thr Ser Val His Gly Leu Val Leu Gly Ala 20 25 3 Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Thr Val Ile Thr Arg Ala 35 40 45 Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn Leu Met Pro 50 55 60 Phe Asn Leu Val Ile Pro Thr Asn Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser 65 70 75 80 Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp 85 90 95 Gln Met Ser Trp Ser Ala Arg Gly Ser Leu Ala 100 105

【００７２】 <210> 11 <211> 107 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 11 Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Val Gly 1 5 10 15 Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val His Gly Leu Val Leu Gly Ala 20 25 30 Thr Val Tyr Phe Ile Gly Phe Asp Gly Thr Thr Val Ile Thr Arg Ala 35 40 45 Val Ala Ala Asn Asn Gly Leu Thr Thr Gly Thr Asp Asn Leu Met Pro 50 55 60 Phe Asn Leu Val Ile Pro Thr Asn Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser 65 70 75 80 Ile Lys Leu Glu Val Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp 85 90 95 Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala 100 105

【００７３】 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Infectious bursal disease virus <400> 12 Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu Ser Ile Gly 1 5 10 15 Gly Glu Leu Val Phe His Thr Ser Val Gln Gly Leu Ala Leu Asn Ala 20 25 30 Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Thr Val Ile Thr Arg Ala 35 40 45 Val Ala Ser Asp Asn Gly Leu Thr Thr Gly Ile Asp Asn Leu Met Pro 50 55 60 Phe Asn Leu Val Ile Pro Thr Asn Glu Ile Thr Gln Pro Ile Thr Ser 65 70 75 80 Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln Ala Gly Asp 85 90 95 Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala 100 105

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山口 剛士 岐阜県岐阜市早田本町１−67 フレグラン ス田中Ｂ−102 (72)発明者 岡山 敦子 神奈川県相模原市下九沢1576−31 コーポ ＳＫ下九沢101 (72)発明者 西村 昌晃 東京都日野市高幡688 Ｆターム(参考） 4B065 AA90X AA95X BA22 CA23 CA24 CA45 4C085 AA03 BA51 CC08 DD06 EE01 GG08 4H045 AA10 AA30 BA10 CA10 DA86 EA31 FA72

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスＹＨ−
   ９１−ＣＬＣ株、及び／又は該ウイルス株の細胞継代
   株。
2. 【請求項２】請求項１記載の伝染性ファブリキウス嚢病
   ウイルスＹＨ−９１−ＣＬＣ株、及び／又は該ウイルス
   株の細胞継代株を有効成分とする伝染性ファブリキウス
   嚢病ワクチン。
3. 【請求項３】請求項１記載の伝染性ファブリキウス嚢病
   ウイルスＹＨ−９１−ＣＬＣ株、及び／又は該ウイルス
   株の細胞継代株を有効成分とし、薬理学的に許容される
   担体を含む伝染性ファブリキウス嚢病ワクチン組成物。
4. 【請求項４】配列番号１に示した塩基配列を含む遺伝
   子。
5. 【請求項５】配列番号１に示した塩基配列を含む遺伝子
   を有する伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス、及び／又
   は該ウイルスの細胞継代株。
6. 【請求項６】配列番号１に示した塩基配列を含む遺伝子
   を有する伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスＹＨ−９１
   −ＣＬＣ株、及び／又は該ウイルス株の細胞継代株。
7. 【請求項７】配列番号１に示した塩基配列を含む遺伝子
   を有する伝染性ファブリキウス嚢病ウイルスＹＨ−９１
   −ＣＬＣ株、及び／又は該ウイルス株の細胞継代株を有
   効成分とする伝染性ファブリキウス嚢病ワクチン。
8. 【請求項８】配列番号２に示したアミノ酸配列を含むペ
   プチド。
9. 【請求項９】配列番号３に示したアミノ酸配列を含むペ
   プチド。
10. 【請求項１０】配列番号４に示したアミノ酸配列を含む
    ペプチド。
11. 【請求項１１】配列番号５に示したアミノ酸配列を含む
    ペプチド。