JP2000515155A

JP2000515155A - Ｇタンパク質共役受容体に対する２価アゴニスト

Info

Publication number: JP2000515155A
Application number: JP10507205A
Authority: JP
Inventors: レーナー，マイケル，アール．; カリザーズ，マイケル，ディー．
Original assignee: エールユニバーシティー
Priority date: 1996-07-24
Filing date: 1997-07-23
Publication date: 2000-11-14
Also published as: CA2262008A1; AU3810797A; EP0951532A4; US6500934B1; EP0951532A1; AU711206B2; WO1998003632A1

Abstract

(57)【要約】２つのアゴニストまたは２つのアンタゴニスト・リガンドドメインを含み、これらのリガンドドメイン間の距離が約40〜約250Åであり、かつこれら２つのリガンドドメインに共有結合で結合されているバックボーンをさらに含んでなる、１種以上のＧタンパク質共役受容体に対して親和性を有する２価アゴニストが提供される。さらに、１つのアゴニストおよび１つのアンタゴニスト・リガンドドメインを含んでなる２価アゴニストも提供される。特定の態様において、２価アゴニストはペプチドダイマーであり、前記バックボーンが２つのスペーサー領域、２つのポリリシン領域および１つのジスルフィド結合領域を含み、その際、前記リガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域およびジスルフィド結合領域が一緒に共有結合されている順序は、（リガンドドメイン）−（スペーサー領域）−（ポリリシン領域）−（ジスルフィド結合領域）−（ポリリシン領域）−（スペーサー領域）−（リガンドドメイン）の順である。このようなペプチドダイマーはそれらの対応モノマーの酸化的二量体化により製造される。

Description

【発明の詳細な説明】Ｇタンパク質共役受容体に対する２価アゴニスト１．発明の分野本発明は、GPCRに対して親和性を有する２価アゴニスト、２価アゴニストとして有用なペプチドダイマー、およびその製造方法および使用方法に関する。２．発明の背景Ｇタンパク質共役受容体（GPCR）は、二次メッセンジャー応答を開始するために細胞膜を通してシグナルを伝達しうる形質膜タンパク質である。この目的のために、GPCRは小さな生体アミンからペプチド、小さなタンパク質および大きな糖タンパク質まで、種々のリガンドに結合する（C.D.Straderら，Annu．Rev．Bioc hem．63，101-132(1994)）。GPCRは全て、形質膜を貫通すると考えられており、親水性の細胞内および細胞外ループに結合した7個の疎水性ドメインを有している。GPCRサブファミリーの例として、ドーパミン、セロトニン、サブスタンスＰ、ブラジキニン、アンジオテンシン、ソマトスタチンおよびルトロピンの受容体を含むロドプシン／βアドレナリン（βＡＲ）ファミリー；セクレチン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド１、ガストリックインヒビターペプチド、副甲状腺ホルモン、セクレチン／バソインテスティナルペプチド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド、カルシトニンおよび成長放出ホルモンの受容体を含むセクレチン／バソインテスティナルペプチド（VIP）ファミリー；およびグルタミン酸の受容体を含む代謝型グルタミン酸（mGlu）ファミリーが挙げられる。今日まで、Ca²⁺、嗅覚、プロスタグランジンおよびsweet−taste受容体を含む、250 種を越えるGPCRが同定されている（M.A.Cascieriら，JPM 33(4)，179-185(1995) ;C.D.Straderら，FASEB J．9，745-754(1995)）。免疫グロブリンのような多価のリガンドは、その結合部位に対して親和性が顕著に増大している。結合力のエントロピー効果に基づき、多価であることによって理論上見かけの結合親和性が数桁増加しうる（D.M.Crothersら，Immunochemis try 9，341-357(1972)）。この親和性の増加は通常はより小さいものであるが、多価の分子は臨床薬理学における強力な応用の可能性がある。例えば、特殊な細胞のサブタイプに対し、あるいは血液−脳関門を通して、毒素、薬剤および、潜在的にはプラスミドDNAをターゲッティングするために合成の２価リガンドを使用することができる。熱力学的には、細胞表面上の近接したエピトープに対する多価抗体の結合はキレート効果に類似している（C.G.Spikeら，J．Amer．Che．Soc．75，2726-2729( 1953);D.Neriら，J．Mol．Biol．246，367-373(1995)）。この効果はもともとキレート環の安定性の増加を説明するために記載されたものであるが、酵素反応の速度の加速において、またポリヌクレオチドの塩基対形成においても関係がある（M.I.Pageら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 68，1678-1683(1971);C.Delisiら，Biopolymers 10，1809-1827(1971)）。これらの反応に共通な性質は、初期反応（例えば抗原に対する１本の抗体の「腕」の結合）の後、エントロピー損失が減少するためにそれぞれの次の反応（例えば隣接するエピトープへの抗体の第二の「腕」の結合）がより好ましくなることである。隣接するエピトープに結合できる２価分子の特定の例としては、抗体フラグメント（Fab）または単鎖抗体（Fv）からなる小さな２価抗体が挙げられる（P.Pac kら，Biochemistry 31，1579-1584(1992);P.Holligerら，Proc．Natl．Acad．Sc i．USA 90，6444-6448(1993);W.D.Mallenderら，J．Biol．Chem．269，199-206( 1994)）。更に、２価の炭水化物および種々の合成ドラッグデリバリーシステム等、他の多価の分子が隣接するエピトープに結合するように設計されている（R. T.Leeら，Biochemistry 23，4255-4261(1984);R.Duncanら，Clin．Pharmacokine t．27，290-306(1994)）。受容体−接着型モジュラータンパク質（RAMP）等の２価のペプチドは、細胞ターゲッティングへのもう一つのアプローチとして使用されてきた（M.Engelら，B iochemistry 30，3161-3169(1991);C.A.Slateら，Int．J．Peptide Protein Res ．45，290-298(1995)）。スペーサー領域で分離された２つのリガンド部位およびダイマー化ドメインを有するこれらの大きな合成ペプチドは、２つの膜受容体に同時に結合することを目的として設計された。そのもともとの設計では、ダイマー化ドメインは二本鎖の並行したαヘリックスコイルドコイルからなり、リガンド領域は２つの同一のインテグリン受容体結合ペプチドから構成されていた。しかしながら、２つのリガンドドメインが少なくとも５０オングストローム離れているにもかかわらず、このダイマー構築物の親和性の増加が証明されず、こうしたダイマーペプチドは２つの受容体に同時に結合できないことが示唆された。これまでの研究から、２つのGPCR間の最小距離は４０オングストローム（Å）であることが示唆された（G.F.X.Schertlerら，Nature 362，770-772(1993)）が、一方免疫グロブリンの構造研究からは抗原結合部位間の距離は１００−２５０Å であることが証明された（D.M.Crothersら，Immunochemistry 9，341-357(1972) ）。これまでの研究により、抗GnRH抗体と共にインキュベートして、架橋の長さ１５０Åのより大きなダイマーを形成した、短い架橋ゴナドトロピン放出ホルモン（GnRH）ペプチドダイマーは、機能的黄体形成ホルモン（LH）放出アッセイにおいて、相当する短いダイマーと比較してアゴニスト活性が増加していることが示された（P.M.Connら，Endocrinology 111，335-337(1982)）。更に、抗体と２つのGnRHアンタゴニストとの可逆的な会合の結果、アゴニスト活性を有する会合が生じることが示された（P.M.Connら，Nature 296，653-654( 1982)）。しかしながら、その場合、２つのGnRHアンタゴニストおよび抗体間に共有結合もイオン結合も存在しないため、こうした可逆的な会合は容易に壊れ、アゴニスト活性の停止につながる。活性部とその受容体との相互接触を可能とする適当なスペーサー部を有し、ダイマー形成を通して作用することが知られる単一の貫膜受容体に結合するいずれの小分子のダイマーも、アゴニスト活性を有しうることが推測されている（B.Se ed,Chemistry&Biology 1(3)，125-29(1994)）。当該分野においては、現在利用できるものよりも機能的活性またはin vivo効力が増大した、容易に合成できるアゴニストに対する明らかな需要がある。本出願明細書の第２節に記載する参考文献の引用または同定は、こうした引用文献が本発明に対する先行技術として利用できるものであることを認めたものと解釈してはならない。３．発明の概要本発明は、それぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアゴニストであるリガンドドメインを含み、１種以上のＧタンパク質共役受容体に対する親和性を有する２価アゴニストであって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に２つのリガンドドメインに共有結合した分子バックボーンを有する２価アゴニストを提供する。本発明は更に、それぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアンタゴニストであるリガンドドメインを含み、１種以上のＧタンパク質共役受容体に対する親和性を有する２価アゴニストであって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に２つのリガンドドメインに共有結合した分子バックボーンを有する２価アゴニストを提供する。本発明は更に、第１のＧタンパク質共役受容体に対するアゴニストである第１のリガンドドメイン、および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアンタゴニストである第２のリガンドドメインを含み、１種以上のＧタンパク質共役受容体に対する親和性を有する２価アゴニストであって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に第１および第２のリガンドドメインに共有結合した分子バックボーンを有する２価アゴニストを提供する。本発明は更に、ある量のモノマーをある量の酸化剤で処理する工程を含む、２価アゴニストダイマーの合成方法であって、モノマーが分子バックボーンに共有結合したリガンドドメインを有し、該リガンドドメインは（ａ）Ｇタンパク質共役受容体に対するアゴニストであり、そして（ｂ）ペプチドを含み、バックボーンは共有結合しているスペーサー領域、ポリリシン領域、およびスルフヒドリル基含有アミノ酸残基を有し；前記量の酸化剤はスルフヒドリル基を酸化することができ、酸化されたスルフヒドリル基が別のモノマーの酸化されていないスルフヒドリル基と反応してジスルフィド結合を有するダイマーを形成することを特徴とする、２価アゴニストダイマーの合成方法を提供する。本発明は更に、ある量のモノマーをある量の酸化剤で処理する工程を含む、２価アゴニストダイマーの合成方法であって、モノマーが分子バックボーンに共有結合したリガンドドメインを有し、該リガンドドメインは（ａ）Ｇタンパク質共役受容体に対するアンタゴニストであり、そして（ｂ）ペプチドを含み、バックボーンは共有結合しているスペーサー領域、ポリリシン領域、およびスルフヒドリル基含有アミノ酸残基を有し；前記量の酸化剤はスルフヒドリル基を酸化することができ、酸化されたスルフヒドリル基が別のモノマーの酸化されていないスルフヒドリル基と反応してジスルフィド結合を有するダイマーを形成することを特徴とする、２価アゴニストダイマーの合成方法を提供する。本発明は更にまた、細胞を２価アゴニストと接触させることを含む、細胞によって発現された1種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激する方法を提供する。該アゴニストはそれぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアゴニストである２つのリガンドドメインを有し、更に該アゴニストは２つのリガンドドメインに共有結合した分子バックボーンを有する。リガンドドメイン間の距離は約４０から約２５０Åの範囲にある。本発明は更にまた、細胞を、それぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアンタゴニストである２つのリガンドドメインを有する２価アゴニストと接触させることを含む、細胞によって発現された１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激する方法であって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に２つのリガンドドメインに共有結合した分子バックボーンを有する、上記方法を提供する。。本発明は更にまた、細胞を、第１のＧタンパク質共役受容体に対するアゴニストである第１のリガンドドメインおよび第２のＧタンパク質共役受容体に対するアンタゴニストである第２のリガンドドメインを有する２価アゴニストと接触させることを含む、細胞によって発現された１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激する方法であって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に第１および第２のリガンドドメインに共有結合する分子バックボーンを有する、上記方法を提供する。更にまた、本発明は、それぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアゴニストである２つのリガンドドメインを含み、１種以上のＧタンパク質共役受容体に対する親和性を有する２価アゴニスト、および製薬上許容しうる担体を含有する、１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するための組成物であって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に２つのリガンドドメインに共有結合する分子バックボーンを有し、該２価アゴニストの量が１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するのに有効なものである、上記組成物を提供する。更にまた、本発明は、それぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアンタゴニストである２つのリガンドドメインを含み、１種以上のＧタンパク質共役受容体に対する親和性を有する２価アゴニスト、および製薬上許容しうる担体を含有する、１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するための組成物であって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に２つのリガンドドメインに共有結合する分子バックボーンを有し、該２価アゴニストの量が１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するのに有効なものである、上記組成物を提供する。更にまた、本発明は、第１のＧタンパク質共役受容体に対するアゴニストである第１のリガンドドメイン、および第２のＧタンパク質共役受容体に対するアンタゴニストである第２のリガンドドメインを含み、１種以上のＧタンパク質共役受容体に対する親和性を有する２価アゴニスト、および製薬上許容しうる担体を含有する、１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するための組成物であって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲にあり、該アゴニストが更に第１および第２のリガンドドメインに共有結合する分子バックボーンを有し、該２価アゴニストの量が１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するのに有効なものである、上記組成物を提供する。 3.1. 略語本明細書において、以下の略語を使用する。Ａアラニン βＡｌａ β−アラニンＣシステインＥグルタミン酸ＦフェニルアラニンＧグリシンＨヒスチジンＫリシンＬロイシンＭメチオニンＮアスパラギンＰプロリンＱグルタミンＲアルギニンＳセリンＶバリンＷトリプトファンＹチロシン ε-Ahx ε-アミノヘキサン酸 α-MSH α-メラノサイト刺激ホルモン α-MSH-ANT α-メラノサイト刺激ホルモン受容体アンタゴニスト Boc ｔ−ブチルオキシカルボニル DIEA N,N-ジイソプロピルエチルアミン DMF N,N-ジメチルホルムアミド DMSO ジメチルスルホキシド EC₅₀ アゴニスト応答の５０％が達成される濃度 Fmoc ９-フルオレニルメトキシカルボニル GnRH ゴナドトロピン放出ホルモン GPCR Ｇタンパク質共役受容体 HBTU ２-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3,- テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート HOBt 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール HPLC 高速液体クロマトグラフィー IC₅₀ アンタゴニスト応答の５０％が達成される濃度 MBHA メチルベンズヒドリルアミン NMP N-メチルピロリジノン PBS リン酸緩衝液 PI ホスファチジルイノシトール Pmc 2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマン-6-スルホニル tBu tert-ブチル TFA トリフルオロ酢酸 Trt トリチル上記のように定義したアミノ酸の略号の直前に表示「ｄ」がある場合は、そのアミノ酸が非天然のｄ-エナンチオマーであることが理解されよう。本発明は、以下の図面、詳細な説明および実施例を参考とすることでより十分に理解できるが、これらは本発明の非限定的な実施態様を例示したものである。４．図面の説明図１は、本発明のα−ＭＳＨペプチドダイマーのＨＰＬＣクロマトグラムである。保持時間（Ｒｔ）＝３９．０分。図２は、本発明のα−ＭＳＨモノマーのＨＰＬＣクロマトグラムである。保持時間（Ｒｔ）＝４４．０分。図３は、α−ＭＳＨモノマーがメラノサイト色素の分散に及ぼす影響の経時変化を示すグラフである。グラフ中のそれぞれの点は３回の実験サンプルの平均値を示す。○＝１ｎｍ；□＝１０ｎｍ；◇＝２５ｎｍ；△＝５０ｎｍ；●＝１００ｎｍ；および■＝５００ｎｍ。図４は、α−ＭＳＨモノマーおよびα−ＭＳＨダイマーがメラノサイト色素の分散に及ぼす影響の用量依存性を示すグラフである。「薬剤」とは、α−ＭＳＨモノマーまたはα−ＭＳＨダイマーをさす。グラフ中のそれぞれの点は３回の実験サンプルの平均値を示す。○＝α−ＭＳＨダイマー；□＝α−ＭＳＨモノマー。図５は、α−ＭＳＨ−ＡＮＴモノマーおよびα−ＭＳＨ−ＡＮＴダイマーがメラノサイト色素の分散に及ぼす影響の用量依存性を示すグラフである。「薬剤」とは、α−ＭＳＨ−ＡＮＴモノマーまたはα−ＭＳＨ−ＡＮＴダイマーを意味する。グラフ中のそれぞれの点は３回の実験サンプルの平均値を示す。○＝α−ＭＳＨ−ＡＮＴダイマー；□＝α−ＭＳＨ−ＡＮＴモノマー。図６は、モノマーおよびダイマーのα−ＭＳＨ−ＡＮＴがメラノサイト色素の分散に及ぼす影響の用量依存性を示すグラフである。「薬剤」とは、α−ＭＳＨ −ＡＮＴモノマーまたはα−ＭＳＨ−ＡＮＴダイマーを意味する。グラフ中のそれぞれの点は３回の実験サンプルの平均値を示す。○＝α−ＭＳＨ−ＡＮＴダイマー；□＝α−ＭＳＨ−ＡＮＴモノマー。図７は、モノマーおよびダイマーのボンベシンがメラノサイト色素の分散に及ぼす影響の用量依存性を示すグラフである。「薬剤」とは、ボンベシンモノマーまたはボンベシンダイマーを意味する。グラフ中のそれぞれの点は3回の実験サンプルの平均値を示す。○＝ボンベシンダイマー；□＝ボンベシンモノマー。５．発明の詳細な説明 5.1 ２価アゴニスト本発明者らは、本発明の２価アゴニストが、２つのアゴニスト・リガンドドメイン、２つのアンタゴニスト・リガンドドメイン、または１つのアゴニスト・リガンドドメインと１つのアンタゴニスト・リガンドドメインのいずれを有していてもGPCRに対してアゴニスト活性を有することを見いだした。２価アゴニストが単独で同一のまたは異なるGPCRに対するアゴニストである２つのリガンドドメインを有する場合、驚くべきことに２価アゴニストのアゴニスト活性は２つの個々のアゴニストリガンドよりも相乗的に高い。２価アゴニストが単独でアンタゴニストである２つのリガンドドメインを有する場合、驚くべきことに２価アゴニストの活性は拮抗的というよりも刺激的である。２価アゴニストが１つのアゴニスト・リガンドドメインおよび１つのアンタゴニスト・リガンドドメインを有する場合、２価アゴニストの活性は刺激的である。本発明の２価アゴニストはこれまで報告されたアゴニストよりも十分低い量で効果的なアゴニストであると考えられるため、本発明の２価アゴニストの使用によって、アゴニスト・リガンドドメインの使用に伴う毒性の問題が回避される。本発明は、GPCRに対する親和性を有する２価アゴニストを提供する。「２価」とは、それぞれがGPCRに対する親和性を有する２つのリガンドドメインを有するアゴニストを意味する。GPCRは同じでも、また異なっていてもよい。リガンドドメインは本発明の２価アゴニストの（共有結合を介する）分子成分である。それぞれのリガンドドメインはGPCRに対する特異的な結合親和性を有する。本発明の２価アゴニストのリガンドドメインが同じであっても、または異なっていても良いことは理解されるべきである。好ましい態様において、リガンドドメインの１つが親和性を有するGPCRの一つはＭＳＨ受容体である。もう一つの態様において、２つのリガンドドメインが親和性を有するGPCRはいずれもＭＳＨ受容体である。リガンドドメインは２価アゴニストと目的の細胞型のGPCRとの結合を容易にする。有用なリガンドドメインはタンパク質（ペプチドおよびポリペプチドを含む）またはその誘導体からなる群から独立して選択され、ホルモン、抗原、合成または天然の薬物等；オピエート；ドーパミン；セロトニン；Ｃａ²⁺；カテコールアミン；トロンビン；アセチルコリン；プロスタグランジン；香料等の小分子；フェロモン；アデノシン；スクロース、グルコース、ラクトースおよびガラクトース等の単純な糖；GPCRを認識し、これに対する親和性を有する他の分子；およびこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。アゴニスト・リガンドドメインとして有用な特定の化合物として、アンギオテンシンII、ブラジキニン、N-ホルミル-Met-Leu-Phe（走化性ペプチド）、ダイノルフィンＡ断片1-13、（D-Ser²）-ロイシンエンケファリン-Thr、ボンベシン、ヒト成長ホルモン放出因子、ヒトLH-RH、α−MSH、キネテンシン、ニューロテンシン、モルフィセプチン、（Thr⁴、Gly⁷）-オキシトシン、ソマトスタチン、（Sar⁹、Met(O₂)¹¹）-サブスタンスＰ、および目的のGPCRに対する天然リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。アンタゴニスト・リガンドドメインとして有用な特定の化合物として、（Sar¹ ，Ala⁸）-アンギオテンシンII、（D-Phe⁷）-ブラジキニン、N-t-Boc-Met-Leu-Ph e（走化性ペプチドアンタゴニスト）、N-カルボキシメチル-Phe-Leu、ロイペプチン、N-アセチル-Pen-Arg-Gly-Asp-Cys、（D-Phe¹²，Leu¹⁴）-ボンベシン、（N -アセチル-Tyr¹，D-Arg²）断片1-29アミド、（D-Phe²，D-Ala⁶）-LH-RH、（D-Tr p¹¹）-ニューロテンシン、バソプレッシンおよび（D-Arg¹，D-Trp^7,9，Leu¹¹）- サブスタンスＰが挙げられるが、これらに限定されない。有用なα−MSHアンタゴニストとしては、D-Trp-Arg-Xaa-NH₂（ここでXaaはLeu、Nle、Nva、Met、D-Nl e、Ile、 AbU、Val、 ArgまたはD-Argである）；D-Trp-Xaa-Nle-NH₂（ここでXaa はLys）D-Arg、Leu、Nle、Ala、MetまたはAbuである）；およびXaa-Arg-Nle-NH₂ （ここでXaaはD-Phe、D-Tyr、Ac-D-rp、TrpおよびD-Hisである）が挙げられる（J.M.Quillanら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 92，2894-2898(1995)）。アゴニストまたはアンタゴニスト・リガンドドメインとして有用な他の化合物は当該分野で公知のものから選択され、例えばSigma Chemical Co．(St．Louis ，Missouri)から入手可能な「生化学的、有機化合物および診断試薬のシグマケミカル社カタログ」から選択することができる。先に特定したペプチドアゴニストおよびアンタゴニスト、ならびにアゴニストまたはアンタゴニスト・リガンドドメインとして有用な他の化合物は、例えばSigma Chemical Co．(St．Louis，M issouri）、およびPeninsula Laboratories(Belmont，California)から得ることができる。あるいはまた、先に特定したペプチドアゴニストおよびアンタゴニスト、ならびにアゴニストまたはアンタゴニスト・リガンドドメインとして有用な他の化合物は、当該分野で良く知られている方法によって、合成でき、または天然源あるいは組換え発現系から精製することができる。本明細書中で使用する場合、「アゴニスト」とは、その分子に特異的な受容体を活性化し、その受容体のシグナル伝達経路における適切な二次メッセンジャー応答を引き出す分子のことである。かくして、アゴニストのその受容体への結合は、受容体が介在する生化学的応答を引き出す。本明細書中で使用する場合、「アンタゴニスト」とは、受容体に結合して、アゴニストが受容体を刺激することを阻害する化合物を意味する。かくして、アンタゴニストのその受容体への結合は、受容体が介在する生化学的応答を引き出さない。 GPCRの例としては、ドーパミン、セロトニン、サブスタンスP、ブラジキニン、アンギオテンシン、ソマトスタチンおよびルトロピンに対する受容体を含むロドプシン／βアドレナリン受容体；セクレチン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド１、ガストリックインヒビターペプチド、副甲状腺ホルモン、セクレチン／バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド、カルシトニンおよび成長ホルモン放出ホルモンに対する受容体を含むセクレチン／バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド受容体；およびグルタミン酸に対する受容体を含むMglu受容体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。C.D.Straderら，Annu．Rev．Biochem．63，101-132(1994);M .A.Cascieriら，JPM33(4)，179-185(1995);およびC.D.Straderら，FASEBJ．9，7 45-754(1995)を参照のこと。２価アゴニストの２つのリガンドドメインは、共にアゴニストであっても、共にアンタゴニストであっても、あるいは１つのアゴニストと１つのアンタゴニストであってもよい。既知のアゴニストおよびアンタゴニストの使用に加え、例えばGPCRを有し、特定の生理学的応答を引き出すことが知られている細胞型と所望の化合物との接触等の、当該分野で知られているいずれかの方法によって、GPCRに対するアゴニストまたはアンタゴニストとして使用しうる可能性のある化合物に対して、その潜在的なアゴニストまたはアンタゴニスト活性をスクリーニングすることができる。ここで特定の生理学的応答が引き出された場合、その化合物はアゴニストである。一例として、同じＧタンパク質共役受容体に対してアンタゴニスト活性を有する化合物をアッセイするためには、目的の生理学的応答に対するアゴニストであることが知られている化合物とアンタゴニスト活性を潜在的に有する化合物の混合物を細胞型と接触させる。アンタゴニスト活性を潜在的に有する化合物の存在下で、アゴニスト量を減らしても生理学的応答が正常に観察された場合には、その化合物はその特定のGPCRに対するアゴニストである。本発明の２価アゴニストは単一特異的であっても二重特異的であってもよい。「単一特異的」とは、２つのリガンドドメイン、すなわち、２つのアゴニストリガンド、２つのアンタゴニストリガンド、あるいは１つのアゴニストと１つのアンタゴニストリガンドが、GPCRの１つの型に対して選択的な結合親和性を有することを意味する。単一特異的な２価アゴニストにおいて、２つのリガンドドメインは同一であることが好ましい。「二重特異的」（異種特異的）とは、２つのリガンドドメイン、すなわち、２つのアゴニストリガンド、２つのアンタゴニストリガンド、あるいは１つのアゴニストと１つのアンタゴニストリガンドが、同一ではなく、異なる型のGPCRに対して選択的であることを意味する。上記のように、本発明は二重特異的な２価アゴニストを包含する。例えば、特定の態様において、２価アゴニストの一方のリガンドドメインがα-MST-ANTを含み、他方のリガンドドメインがボンベシンアンタゴニストを含む。本発明の２価アゴニストに組み入れるために選択される特定のリガンドドメインに関わらず、二重特異的なダイマーアンタゴニストは、一般に双方の型の受容体を発現している細胞においてのみ実質的なアゴニスト活性を有し、そしてこれらの標的細胞が２価アゴニストに対して特異的にエンドサイトーシスを行うと考えられる。例えば、一方のリガンドドメインとしてα-MST-ANTを含み、他方のドメインとしてボンベシンアンタゴニストを含む２価アゴニストは、双方の受容体を発現している細胞によって最も効率的にエンドサイトーシスされ、この２つの異なる受容体の一方のみを発現している細胞、またはいずれも発現していない細胞によるエンドサイトーシスはずっと少ない。一方、それ自体がアゴニストである２つのリガンドドメインを有する二重特異的な２価アゴニストの場合には、２つの二重特異的リガンドドメインの一方または双方に対して特異的なGPCRを有する細胞は、２価アゴニストを飲み込むことができると考えられる。結合力の増大という利益と合わせ、それ自体がアンタゴニストとして作用するリガンドドメインを有する二重特異的なアゴニストは、標的細胞による取り込みが最高一桁増大する。従って、アゴニストが第１のGPCRを認識する第１のアンタゴニスト・リガンドドメイン、および第２の異なるGPCRを認識する第２の異なるアンタゴニスト・リガンドドメインを含む、本発明の二重特異的なアゴニストを使用して対象の細胞をアゴニスト刺激する好ましい方法において、対象の細胞は第１または第２のGP CR、好ましくは第１および第２のGPCRの双方を発現する。二重特異的な２価アゴニストが２つのアゴニスト・リガンドドメインを含む場合、対象の細胞は好ましくは第１または第２のGPCR、より好ましくは第１および第２のGPCRの双方を発現する。二重特異的な２価アゴニストが第１のGPCRを認識する１つのアゴニストおよび第２のGPCRを認識する１つのアンタゴニスト・リガンドドメインを有する場合、対象の細胞は好ましくは少なくとも第１のGPCRを発現し、より好ましくは第１および第２のGPCRの双方を発現する。２つのアゴニスト・リガンドドメインを含む二重特異的な２価アゴニストを使用する特に好ましい態様において、２つのリガンドドメインは同じGPCRに結合し、細胞はそのGPCRを発現する。このように、本発明は、第１および第２のＧタンパク質共役受容体に対して共にアゴニストであるか、または共にアンタゴニストである２つのリガンドドメインを含む２価アゴニストと細胞を接触させることを含む、細胞が発現する１種以上のGPCRをアゴニスト刺激する（適切な二次メッセンジャー応答を引き出すように活性化する）方法であって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０ Åの範囲であり、アゴニストが更に２つのリガンドドメインに共有結合する分子バックボーンを含んでなる、上記方法を提供する。更に、本発明は、細胞を第１のGPCRに対するアゴニストである第１のリガンドドメインおよび第２のGPCRに対するアンタゴニストである第２のリガンドドメインを含む２価アゴニストと接触させることを含む、細胞が発現する１種以上のGP CRをアゴニスト刺激する方法であって、リガンドドメイン間の距離が約４０から約２５０Åの範囲であり、アゴニストが更に２つのリガンドドメインに共有結合する分子バックボーンを含んでなる、上記方法を提供する。細胞が発現する１種以上のGPCRをアゴニスト刺激する方法の種々の態様において、細胞は（それぞれ２つのリガンドドメインによって認識される）第１または第２のGPCRのいずれかを発現していてもよく、また第１および第２のGPCRの双方を発現していてもよい。更に、本発明の２価アゴニストのリガンドドメインによって認識されるGPCRは同じであっても異なっていてもよい。特定の態様において、第１または第２のGPCRのいずれかはMSH受容体である。好ましい態様においては、第１および第２のGPCRは共にMSH受容体である。「接触させる」とは、２価アゴニストが細胞のGPCR分子と会合できるように２価アゴニストを細胞に近接させることを意味する。このような接触は、ヒトまたは動物の患者に対し、GPCRを刺激することによる疾病または障害の治療または改善のために、本発明の２価アゴニストを、好ましくは更に製薬上許容しうるビヒクルまたは担体（第5.4節参照）を含有する組成物の形態で、経口的、または非経口的に（筋肉内、皮下、および静脈内等）、ならびに当該分野で知られている他の方法で投与することにより行われる。接触はまた、例えば本発明の種々の２価アゴニストの潜在的な薬学的性質を決定するアッセイの一部として、あるいはGPCRが介在する潜在的な生理学的応答を決定または研究するために、in vitroで実施することもできる。使用可能な細胞型は、本発明の２価アゴニストの一方、または好ましくは双方のリガンドドメインが親和性を有する特定のGPCRを発現するいずれの細胞のクラスのメンバーであってもよい。こうした細胞として、ヒト、哺乳類、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ等のいずれかの細胞または組織の型のものが含まれるが、これらに限定されるものではない。２価アゴニストのリガンドドメインは、これらリガンドドメインの双方が目的の細胞型の２つのGPCRに結合できるように２価アゴニストを十分に柔軟性にし、また水性系または生理的系に可溶にする分子バックボーンに共有結合する。「バックボーン」とは、２つのリガンドドメインを結合する手段として機能する生体適合性のいずれの分子をも意味する。それぞれのリガンドドメインは分子バックボーンに共有結合で、好ましくはバックボーンのアミノ基とリガンドドメインのカルボキシル基またはその同等物間のアミド結合もしくはペプチド結合、またはその逆の結合を介して結合する。「柔軟性」の語は、バックボーンがその軸の回りの自由回転を有する多くの炭素−炭素σ結合を有し、これに結合した２つのアゴニストまたは２つのアンタゴニスト・リガンドドメインが約４０から約２５０ Å、好ましくは約４０から約１５０Åの範囲の距離で分離されていることを意味する。好適なバックボーンとしては、タンパク質；ポリヌクレオチド；単糖、オリゴ糖、シクロデキストリンおよびデキストラン等の糖類；ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレートおよびアミノ−、ヒドロキシ−、チオ−またはカルボキシ−官能基を有するシリコーン等のポリマー；他の生体適合性物質の単位；およびこれらの組合せ等の基が挙げられるが、これらに限定されるものではない。しかしながら、溶解性および柔軟性の限界のために、バックボーンはポリグリシンまたはポリプロリンのみであるべきではない。更に、好ましい態様において、バックボーンは抗体であってはならない。上記のこうしたバックボーン物質は広く市販のものが入手可能であり、また当業者には公知の有機合成法を介して得ることができる。本明細書中で記載するタンパク質、および本明細書中で使用するアミノ酸は「天然」、すなわち天然に存在するアミノ酸だけでなく、「非古典的な」Ｄアミノ酸（普通のアミノ酸のＤ異性体）、α−イソ酪酸、４−アミノ酪酸、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ− ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、デザイナーアミノ酸（例えば、β−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎ α−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体）を含むが、これらに限定されるものではないことに留意すべきである。更に、アミノ酸として、Abu、２−アミノ酪酸；γ−Abu、４−アミノ酪酸；ε−Ahx、６−アミノヘキサン酸；Aib、２− アミノイソ酪酸；β−Ala、３−アミノプロピオン酸；Orn、オルニチン；Hyp、t rans−ヒドロキシプロリン；Nle、ノルロイシン；Nva、ノルバリンを含むことができる。「これらの組合せ」の語は、バックボーンが上記の２以上のクラスの基を含みうること、例えば、サッカリドと炭化水素の基；ペプチド、炭化水素およびシリコーンの基等を含むことができ、ならびに一つのクラスの２以上のメンバーを含むこともできることを意味する。バックボーンに２以上のクラスの基が含まれる場合、このようなバックボーンは異なる単位をそれらの官能基を介して連結することによって得ることが好ましい。例えば、サッカリドと、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、シリコーン、またはセリンやチロシンを含むペプチド等の求核性の基を有する単位と、を含むバックボーンの場合、ヒドロキシル基を有する基がサッカリドのグリコシド末端と安定なグリコシド結合を形成しうる。こうした結合を形成する方法には標準的な有機合成が関与し、当業者には周知である。分子バックボーンには、場合によって薬剤、すなわち薬物、または合成の遺伝子治療用ベクター等の他の化学種（species）とイオン結合または共有結合を形成しうる求核性または求電子性の官能基が含まれていてもよい。これはこれらの化学種がＧタンパク質共役受容体を有する細胞によってエンドサイトーシスされることを可能にする手段を提供する。合成の遺伝子治療用ベクターとしては、好ましくは特定の細胞型にベクターをターゲッティングする非ウイルス性のベクターまたは他の発現構築物が挙げられる。好適な求核性の基の例としては、アミノ基、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基が挙げられる。好適な求電子性の基の例としては、カルボキシル基およびその同等物、およびエポキシド基が挙げられる。カルボキシル基の同等物であると考えられる基としては、エステル、酸ハロゲン化物、カルボキシレート等が含まれることが理解されよう。他の化学種が分子バックボーンの官能基とイオン結合を形成する場合、安定な塩複合体を形成するようにバックボーンにアミノ基が、他の化学種にカルボキシル基が含まれていてもよい。反対に、分子バックボーンにカルボキシル基が含まれ、他の化学種にアミノ基が含まれていてもよい。他の化学種が分子バックボーンの官能基と共有結合を形成する場合、他の化学種のカルボキシル基またはその同等物とアミド、エステルまたはチオエステル結合をそれぞれ形成することができるアミノ基、ヒドロキシル基またはスルフヒドリル基がバックボーンに含まれていてもよく、その逆であってもよい。同様に、エポキシド機能化バックボーンは他の化学種の遊離のアミノ基、ヒドロキシル基またはスルフヒドリルと安定な付加物を形成することができ、その逆も可能である。例えば、薬物またはベクターがバックボーンに結合される実施態様において、バックボーンのペンダント（pendant）アミノ基は、アミノ基と共有結合すなわちアミド結合を形成することができる求電子性の基、例えばカルボキシル基またはその同等物等を含みうる。もう一つの例において、ペンダントアミノ基に結合すべき薬物またはベクターは、アミノ基とイオン結合すなわち塩を形成してアンモニウム基を形成することができるカルボン酸基を含んでいてもよい。バックボーンに荷電した官能基および荷電していない官能基の双方が含まれていてもよいことは理解すべきであり、この場合荷電した官能基は他の物質とイオン的に結合するために利用でき、一方荷電していない官能基は他の物質と共有結合するために利用できる。更に、バックボーンには、例えばアンモニウム基またはカルボキシレート基等の荷電した官能基が含まれていてもよい。荷電した官能基は２価アゴニストに水性系または生理的系に対する十分な溶解性を与え、他の化学種とのイオン結合のための反応部位を与え、かつGPCRに対するこれらの結合力を増大させる。このようなアンモニウム基はバックボーンのアミノ基と、塩酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩等を含むが、これらに限定されない酸との反応を介して形成しうる。このようなカルボキシレート基は、バックボーンのカルボキシル基と、アルカリ金属炭酸塩または重炭酸塩等の塩基との反応を介して形成しうる。２価アゴニストに最適な溶解性および結合能を付与するための特定の酸およびその濃度の選択は当該分野における技術の範囲である。好ましくは、荷電した官能基の総量は、２価アゴニストのGPCRに対する特異性を最大にするように、しかし溶解性を顕著に減少しないように、あるいは荷電した官能基の潜在的な担体機能、すなわちイオン結合または共有結合の形成をなくさないように、最小のものとする。リガンドドメインおよびバックボーンの双方がアミノ酸を含み、リガンドドメインのアミノ酸とバックボーンのアミノ酸がリガンドドメインおよびバックボーンをつなぐペプチド結合を形成する場合、こうしたペプチド結合は、リガンドドメインのＮ末端アミノ酸とバックボーンのＣ末端アミノ酸から形成されるものであっても、その反対であってもよい。リガンドドメインは、２価アゴニストのリガンドドメインが細胞の近接する２つのGPCR分子に結合できるように、２つのリガンドドメイン間の距離が十分なものであるようにバックボーン上に位置している。好ましくは、リガンドドメイン間の距離は約40から約250Å、または約40から約150Å、または約40から約125Å 、より好ましくは約60から約120Å、そして最も好ましくは約80から約100Åの範囲である。リガンドドメイン間の距離が約40から約250Åの範囲にある限りにおいてリガンドドメインはバックボーン上のどこにあってもよいが、それぞれのリガンドドメインが線上のバックボーンのそれぞれの末端に位置するのが好ましい。約40から約250Åの距離が近接する２つのGPCR分子を隔てる距離であることは理解されるべきである。２価アゴニストのバックボーンが柔軟性であるため、２価アゴニストはそのリガンドドメインが近接するGPCRに結合できるコンフォメーションをとることができる。従って、２価アゴニスト・リガンドドメインのGPCR への完全で効果的な結合のためには、２つのリガンドドメインはその間の距離が約40から約250Åとなりうるべきである。こうした距離は当該分野で公知の方法によって測定し、あるいは理論的に予測できる。例えば、本発明の２価アゴニストにおけるリガンドドメイン間の距離を測定するために、例えば分子の予測されるコンフォメーションに基づき、分子モデルを使用することができる。使用しうる分子モデルプログラムは当該分野で周知であり、入手可能である。更なる態様において、リガンドドメイン間の距離は、２価アゴニスト、好ましくはアミノ基を官能基として有する２価アゴニストを、例えば非結晶性物質を結晶性物質に変換することが知られているハロゲン置換されたハロゲン化ベンゾイル等の反応性物質と反応させることによって測定する。こうして得られる結晶性物質をＸ線回折にかけ、そのリガンドドメイン間の距離を測定できる。５．２ペプチドダイマー特定の１態様において、２価アゴニストはペプチドダイマーである。「ペプチドダイマー」とは本発明の２価アゴニストの２つのリガンドドメインおよび分子バックボーンがそれぞれ１以上のペプチドを含むことを意味する。本発明のすべての２価アゴニストと同様に、ペプチドダイマーは２個の受容体分子に同時に結合することができる。特定の理論に結びつくわけではないが、リガンドドメインが同一のまたは別の受容体のいずれを認識するにしても、２個の受容体部位に同時に結合する結果、アゴニストの活性が劇的に増大すると、発明者らは信じている。本ペプチドダイマーは好ましくはバックボーンの末端にそれぞれ共有結合している２つのリガンドドメインを含む。このバックボーンは２個のスペーサー領域、２個のポリリシン領域、および１個のジスルフィド結合領域を含む。ペプチドダイマーは、リガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域またはジスルフィド結合領域のそれぞれが同一ではないヘテロダイマーであっても、あるいはリガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域およびジスルフィド結合領域のそれぞれが同一であるホモダイマーであってもよい。ペプチドダイマーのリガンドドメインはペプチドダイマーと所望の細胞型のGP CR間の結合を促進する。有用なリガンドドメインは２価アゴニストについて一般的に上に記載したものである。好ましくは、ペプチドダイマーのリガンドドメインはα-MSH，α-MSH-ANTまたはボンベシンを含む。２価アゴニストについて上に記載したように、ペプチドダイマーはリガンドドメインが共有結合しているバックボーンを含む。好ましいペプチドダイマーの場合、バックボーンはスペーサー領域２個、ポリリシン領域２個およびジスルフィド結合領域１個を含み、リガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域およびジスルフィド結合領域が次の順序で互いに共有結合している：（リガンドドメイン）−（スペーサー領域）−（ポリリシン領域）−（ジスルフィド結合領域）−（ポリリシン領域）−（スペーサー領域）−（リガンドドメイン）。ペプチドダイマーのバックボーンのスペーサー領域によって、ペプチドダイマーが同時に２個の受容体部位に結合することが可能になる。これを達成するため、スペーサー領域はスペーサー領域が２個の受容体に及ぶほど十分長くなければならないが、第２の受容体部位に結合することができるように十分柔軟性でなければならない。言い換えると、好適なスペーサー領域は安定した長い二次構造配置をとる一方、水系または生理系において柔軟性および十分な溶解性を維持しているものである。こうしたスペーサー領域として、タンパク質、末端の１つがカルボキシル基で終結しているポリエチレン若しくはプロピレングリコール、各末端が独立してスルフヒドリル、ヒドロキシル、アミノ若しくはカルボキシル基で終結している炭化水素、およびこれらの組合せが含まれる。しかし、可溶性および柔軟性の制限があるため、スペーサー領域はポリグリシンまたはポリプロリンとすることはできない。好ましくは、スペーサー領域は、他の末端がカルボキシル基で終結している炭化水素のスルフヒドリル、ヒドロキシル、またはアミノ基末端とそれぞれチオエステル、エステルまたはアミド結合を形成するアミノ酸またはジ、トリ若しくはテトラペプチドを含む。最も好ましくはスペーサー領域は GGG-εAhxである。こうしたスペーサー領域は市販品を入手するか、または通常の有機合成技術にしたがって調製することができる。必須ではないが、スペーサー領域は好ましくはリガンドドメインがバックボーンのスペーサー領域を介してバックボーンに連結するように、リガンドドメインにバックボーンを接続するバックボーンの部分である。好ましくはリガンドドメインとスペーサー領域間の結合はペプチド結合である。ペプチドダイマーのバックボーンのポリリシン領域は、ダイマーに水系または生理系中での十分な溶解性を与え、他種物質とのイオン結合のための反応性部位を与え、そしてGPCRとの結合力を強化するために、荷電させることができる。「荷電」とは、１個のポリリシン領域の１個のリシン反復単位のペンダントアミノ基の少なくとも１個が陽性電荷を持って、この荷電アミノ基が酸塩の形態になることを意味する。このようなリシン反復単位のアミノ基の酸塩として、限定するわけではないが、塩酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩などが含まれる。ポリリシン領域はペプチドダイマーが水系または生理系中で十分な溶解性を維持するように、十分な電荷を有するべきであると理解される。好ましい態様において、本発明の２価アゴニストのポリリシン領域のアミノ基の少なくとも１個が陽性荷電を有する。ポリリシン領域は好ましくはスペーサー領域よりも長く（Å）、そして約５〜約30リシン反復単位からなる。好ましくは、ポリリシン領域は長さが20反復単位である。ポリリシン領域はペンダントアミノ基、または荷電しているならばアンモニウム基を有し、他種物質とアミノ基の場合は共有結合、そしてアンモニウム基の場合はイオン結合を形成することができるものである。こうした「他種物質」として、例えば医薬および遺伝子治療用合成ベクターが含まれる。必須ではないが、以下に考察するように、ポリリシン領域は好ましくはスペーサー領域をジスルフィド結合領域に接続するバックボーンの部分である。ポリリシン領域とジスルフィド結合領域間で形成される結合がペプチド結合であることが好ましい。本ペプチドダイマーはジスルフィド結合領域を含む。ジスルフィド結合領域はスペーサードメインに結合していない２個のポリリシン領域の末端を連結するための好都合な手段を提供する。ジスルフィド結合領域として、それぞれがジスルフィド結合を少なくとも１個有している、ペプチドなどのタンパク質（ただし、このタンパク質はポリグリシン若しくはポリプロリンではない）：末端の１個がカルボキシル基で終結しているポリエチレン若しくはプロピレングリコール；各末端が独立してスルフヒドリル、ヒドロキシル、アミノ若しくはカルボキシル基で終結している炭化水素、およびこれらの組合せが含まれる。好ましくは、ジスルフィド領域はジスルフィド結合を含有するようにスルフヒドリル基を介して連結した２個のシステイン残基を含む。特定の１態様において、ジスルフィド領域はスルフヒドリル基を介して連結し、N-またはC-末端のいずれかがβ−アラニンでふさがれている２個のシステイン残基である。ジスルフィド結合領域のジスルフィド結合は好ましくは対応するモノマーのスルフヒドリル基のMills Jr.ら、J.Am.Chem.Soc.62,1173(1940)の手法にしたがう酸化によるか、またはそのスルフヒドリル保有部分のダイマー化のために有用な当業者に知られた任意のその他の手法によって形成される。好ましくは、ジスルフィド結合はJ.P.Tamら、J.Am.Chem.Soc.113,6657-6662(1991)の手法にしたがった、DMSOを使用したモノマースルフヒドリル基の酸化によって形成される。最も好ましくは、スルフヒドリル基はモノマーのポリリシン領域の一方の末端に共有結合したシステイン残基のものである。この場合、システイン残基はスペーサー領域に結合していないポリリシン領域のアミノ−またはカルボキシ−末端と共有結合を形成する。特定の１態様において、ペプチドダイマーはモノマーの固相合成の後、末端のシステインスルフヒドリル基の酸化的ダイマー化によって調製される。本発明の例示のペプチドダイマーは、以下の構造を有する： α-MSHダイマー α-MSH-ANTダイマーおよびボンベシンダイマー上記の例示のペプチドダイマーにおいて、α-MSHダイマーのリガンドドメインは構造SYSMEHFRWGKPV-を有し、α-MSH-ANTダイマーのリガンドドメインは構造MP dFRdWFKPV-を有し、ボンベシンダイマーのリガンドドメインは構造MLHGVAWQNGLR QQ-を有している。α-MSH、α-MSH-ANTおよびボンベシンペプチドダイマーのスペーサー領域はGGG-εAhxである。α-MSH、α-MSH-ANTおよびボンベシンペプチドダイマーのポリリシン領域は20リシン単位のポリペプチド（Ｋ₍₂₀₎）である。 α-MSHおよびα-MSH-ANTダイマーのジスルフィド結合領域はそのスルフヒドリル基から形成されたジスルフィド結合を介して連結している２個のシステイン残基であり、そのC-末端がβ−アラニンでふさがれて終結している。ボンベシンダイマーのジスルフィド結合領域はそのスルフヒドリル基から形成されたジスルフィド結合を介して連結した２個のシステイン残基である。α-MSHおよびα-MSH-ANT ダイマーの終結末端はアミノ終結であり、ボンベシンダイマーの終結末端はカルボキシ終結であることを指摘しておく。本発明はホモダイマー、すなわちジスルフィド結合に対して対称形であるダイマー、に限定するものではないにもかかわらず、ここに挙げた好ましいペプチドダイマーがホモダイマーであることを指摘しておく。したがって、本発明はヘテロダイマーであるペプチドダイマーを包含する。こうしたヘテロダイマーは例えば互いの間にジスルフィド結合を有する２個のシステイン部分から合成することができ、またJ.P.Tamら、J.Am.Chem.Soc.113,6657-6662(1991)の手法にしたがう DMSOを使用したシステインの酸化的ダイマー化によって合成することができる。この基質をT.W.Gr eene，「有機合成における保護基」（Protective Groups in Organic Synthesis ），John Wiley & Sons,New York(1981)に記載されているようなペプチドのための普通の保護基で保護することができ、そして通常の固相合成法によって、ダイマー化されたシステイン基質の一方の側と他方が異なるポリリシン領域、スペーサー領域およびリガンドドメインの合成に使用することができる。この手段によって、ヘテロダイマーを容易に作成することができる。５．３ペプチドダイマーを合成するのに有用なモノマー好ましいペプチドダイマーはモノマーの酸化的ダイマー化によって調製するのが好都合であり、そして好ましい。こうしたモノマーは分子のバックボーンに共有結合したリガンドドメインを含み、そのリガンドドメインは（ａ）GPCRに対するアゴニストであり、そして（ｂ）ペプチドを含み、そのバックボーンはすべてペプチドダイマーについて5.2節に記載したようなスペーサー領域、ポリリシン領域、およびスルフヒドリル基領域を含む。好ましくは、スルフヒドリル基領域はペプチド結合を介してポリリシン領域に連結されたアミノ酸システインである。本明細書で使用する用語「モノマー」とは、それぞれGPCRに対するアゴニストまたはアンタゴニストであるリガンドドメインを有し、本発明のペプチドダイマーを製造するための中間体として有用であって、リガンドドメインおよびバックボーンがペプチドを含んでいる、１価のアゴニストまたはアンタゴニストを称するものと理解されたい。モノマーは（リガンドドメイン）−（スペーサー領域）−（ポリリシン領域） −（スルフヒドリル基領域）の順に共有結合で配列するように、リガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域および好ましくはシステインの部分としてのスルフヒドリル基領域を任意の適当な順番で接続することによって合成される。スルフヒドリル基領域がシステインの場合は、モノマーは（リガンドドメイン）−（スペーサー領域）−（ポリリシン領域）−（システイン）構造をとることになる。このように、好ましい態様においては、スルフヒドリル基領域はスルフヒドリル基を含有するアミノ酸残基である。特定の１態様において、モノマーはタンパク質を含み、通常の固相法を使用して合成される。モノマーを調製するために固相合成法を使用する場合、モノマーをそのリガンドドメインがポリペプチドのアミノ末端に位置するように調製するか、またはリガンドドメインがカルボキシル末端に位置するように反対の方向に合成することができる。酸化的ダイマー化を介してペプチドダイマーを産生させるため、好ましくはDM SOを使用して、モノマーを酸化する。この方式において、生成するペプチドダイマーはリガンドドメイン、スペーサー領域およびポリリシン領域のそれぞれが同一であるような、そのジスルフィド結合に対して対称形である。言い換えると、生成するペプチドダイマーはホモダイマーである。酸化的ダイマー化は酸化されたスルフヒドリル基がもう一方のモノマーの酸化されていないスルフヒドリル基と反応してジスルフィド結合を有するペプチドダイマーを形成するように、ある量のモノマーをスルフヒドリル基を酸化することができる量の酸化剤で処理することを含む。好ましい態様において、モノマーの量は約２当量で酸化剤の量が約１当量である。５．４２価アゴニストを含む組成物およびこの組成物を使用する治療方法本発明の２価アゴニストはその２価アゴニストについて特異的な近傍の受容体を活性化することによって適切な二次メッセンジャー応答を誘発するのに有用である。言い換えると、２価アゴニストはこれに対応した近傍のGPCRに結合することによって所望の生理的応答を開始させる。２価アゴニストが、それら自体が別々のGPCRに対するアゴニストである２つのリガンドドメインを含む場合は、そうした生理的応答は２個のアゴニストの個別の場合の合計に比較して相乗効果として発生するものと確信する。２価アゴニストが、それ自体がアンタゴニストである２つのリガンドドメインを含む場合は、そのアンタゴニストリガンドドメインを別々に投与した場合の様式でGPCRに拮抗作用をせずに、対応するGPCRをアゴニスト刺激すると確信している。その外、２価アゴニストがアゴニストリガンドドメイン１つおよびアンタゴニストリガンドドメイン１つを含む場合は、その２価アゴニストはアゴニストとして挙動すると確信している。例えば、患者または被験者の収縮期および／または拡張期血圧を臨床的に上昇させる必要がある場合、実務医は２個のアンギオテンシン１１リガンドドメインを有する本発明の２価アゴニスト、それ自体はアンギオテンシンアンタゴニストである、（Sar¹，Ile⁸）-アンギオテンシンIIなどのリガンドドメインを２個有する２価アゴニスト、あるいはまたアンギオテンシンIIリガンドドメイン１つおよび（Sar¹，Ile⁸）-アンギオテンシンIIアンタゴニストリガンドドメインを有する２価アゴニストを投与することができる。同様に、黄体形成ホルモン数値を全身的に増大させる必要がある場合は、実務医は２個のLH-RHリガンドドメインを有する本発明の２価アゴニスト、それ自体はLH-RHアンタゴニストである、（D -Phe²，D-Ala⁶）-LH-RHなどのリガンドドメインを２個有する２価アゴニスト、あるいはまたLH-RHリガンドドメイン１つおよび（D-Phe²，D-Ala⁶）-LH-RHリガンドドメイン１つを有する２価アゴニストを投与することができる。別の例として、皮膚の日焼けを促進するために、ともにα-MSHアゴニストであるリガンドドメインを有する２価アゴニストを使用することができる。このように、本発明は、本発明に係る２価アゴニストの有効量のヒトまたは動物の患者または被験者への投与による治療方法を提供する。１態様において、２価アゴニストは上の５．２節に記載したペプチドダイマーである。本発明の２価アゴニストを投与するためには、各種の送達系が知られており、そして使用することができる。例えば、水溶液、リポソーム中へのカプセル化、微小粒子、マイクロカプセル、受容体が仲介するエンドサイトーシスなどである（例えば、WuおよびWu,1987,J.Biol.Chem.262,4429-4 432を参照されたい）。投与の方法として、限定するわけではないが、皮膚への直接の適用、皮内、筋肉内、静脈内、鼻腔内、硬膜外および口腔経路が含まれる。本発明の２価アゴニストを例えば注入、ボーラス注射、上皮または皮膚粘膜（口内粘膜、直胴および腸粘膜）塗布による吸収などの任意の好都合な経路で投与することができる。特定の１態様において、本発明に係る２価アゴニストを上記のいずれかの方法によって、治療を必要とする部位に局所的に投与することが望ましいようである。本発明は医薬組成物をも提供する。１以上のGPCRをアゴニスト刺激するのに有用なこれらの組成物は、治療上有効な量の本発明の２価アゴニストおよび製薬上許容しうる担体または賦形剤を含む。これらの担体として限定するわけではないが、水、例えば生理食塩水、緩衝塩水などの塩溶液、デキストロース、グリセロール、エタノール、およびこれらの組合せが含まれる。こうした２価アゴニスト製剤は投与方法に適合しなければならない。所望ならば、組成物に少量の湿潤若しくは乳化剤、またはpH緩衝剤を含ませることもできる。組成物は液状溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、持続放出製剤、クリーム、ゲルまたは粉末でもよい。組成物をトリグリセリドなどの従来からのバインダーおよび担体で坐剤として製剤化してもよい。口内製剤に医薬用等級のマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含ませることができる。特定の１態様において、組成物をヒトへの静脈内投与に適合する医薬組成物として常用の手法にしたがって製剤化することができる。典型的には、静脈内投与用の組成物は殺菌した等張水性緩衝液の溶液である。必要ならば、組成物に可溶化剤および注射の部位の痛みを軽減するための局所麻酔剤を含ませることもよい。一般的には、成分は、例えば活性薬剤の量を指示したアンプルまたはサシエ(sachet)などの密閉容器中の乾燥凍結乾燥粉末または非含水濃縮物として単位用量形態で別々に供給するかまたは一緒に混合する。組成物が注入によって投与するものである場合は、殺菌した医薬用等級の水または塩溶液を含有する注入ビンを使用して調剤することができる。組成物を注射によって投与する場合は、投与の前に成分を混合することができるように、注射用の殺菌水または塩溶液のアンプルを提供することができる。上記５．１節に示したように、２価アゴニストのバックボーンにアミノおよびカルボキシル基を含む求核性または求電子性官能基を含ませることができる。したがって、本発明の２価アゴニストを中性または塩形態で製剤化することができる。製薬上許容しうる塩として、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸その他から誘導されるような遊離のアミノ基と共に形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄(III)、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインその他から誘導されるような遊離のカルボキシル基と共に形成されるものが含まれる。本発明の２価アゴニストの特定の疾患または美容上の症状の治療に有効な量はその疾忠または症状の性質に応じて決まり、これは標準的な臨床技術によって決定することができる。その上、最適用量範囲を同定するのを助けるため、場合によってはin vitroまたはin vivoアッセイを利用してもよい。製剤中に使用すべき正確な用量は投与経路、および疾患または美容上の症状の重篤度または進行度に応じて決まるものでもあり、実務医の診断および各患者の情況にしたがって決定すべきものである。有効な用量は本明細書で提供するようなin vitroまたは動物試験システムから誘導される用量−応答曲線から外挿することができる。２価アゴニストの有効量は本発明に係る２価アゴニストの段階的用量を投与し、所望の効果を観察することによって、容易に決定することができる。下記図３〜７に提供するデータは有効量を決定する助けとなるであろう。１態様において、例えば皮膚日焼け剤のための局所製剤中の例示のペプチドダイマー、α-MSH-ANTについての有効濃度は１μＭ〜10mMの範囲、好ましくは100 μＭ〜5mM、そして最も好ましくは500μＭ〜2mMである。特定の１態様において、局所製剤の有効濃度は約１mMである。別の態様において、例えば皮膚の日焼けのための全身投与のために有効な２価アゴニストの用量は１〜4000μｍｏｌ/kg体重の範囲、好ましくは20〜200μｍｏｌ/kg体重、そして最も好ましくは30〜100μｍｏｌ/kg体重である。別の態様において、有効用量は30〜100μｍｏｌ/kg体重の範囲である。例示のα-MSH-ペプチドおよびボンベシンペプチドダイマーに関する有効な濃度および用量は、例えば図３〜７を参照することによって容易に決定することができる。また別の態様において、本発明は本発明に係る２価アゴニストの有効量を含有するキットを含む。この場合、キットは本発明に係る２価アゴニストを少なくとも１個含有する１以上の容器を含むことを意図する。例示のために単純化すると、キットに、皮膚への適用、または皮内、筋肉内、静脈内、鼻腔内、硬膜外および経口投与による投与のために製剤化された２価アゴニスト１個または２価アゴニストの組合せを含有させる。キットには本発明に係る２価アゴニストの有効量を含む、プレミックス形態の、または混合する準備ができた別々の成分として、またはペプチド製剤若しくは医薬組成物に製剤化された、液状溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、持続放出製剤、クリーム、ゲルまたは粉末形態の２価アゴニストを含有させることができる。以下の一連の実施例は例示のために提示するものであって、本発明の範囲を限定するためではない。６．実施例：Ｇタンパク質共役受容体を標的とする２価ペプチドリガンドの合成および特性決定結合力の効果を通じて、２価によってリガンドの結合部位に対する見かけの親和性を増大させることができる。GPCRを有する特定の細胞サブタイプに各種の薬剤を送達するのにペプチドダイマーなどの高親和性の２価アゴニストを使用することができる。これらのGPCRを標的とするために、一連のペプチドダイマーを近傍の受容体部位に結合するように合成した。これらのペプチドダイマーはリガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域およびジスルフィド結合領域が（リガンドドメイン）−（スペーサー領域）−（ポリリシン領域）−（ジスルフィド結合領域）−（ポリリシン領域）−（スペーサー領域）−（リガンドドメイン）の順序で互いに結合するように、リガンドドメイン２個、スペーサー領域２個、ポリリシン領域２個およびジスルフィド結合領域１個を含む。６．１材料物質および方法材料物質．Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Arg(Pmc)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asp(O- tBu)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Glu(O-tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-His(Trt )-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Phe- OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，F moc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Val-OH，HBTU，HOBt，MBHA樹脂、およびRinkアミドMBHA 樹脂をCalbiochem-Nova Biochem,La Jolla,Californiaから購入した。ジクロロメタン、DMF、DIEA、NMPおよびTFAをApplied Biosystems,Foster City,Californ iaから入手した。エタノール、メタノール、ピリシン、シアン化カリウム、ニンヒドリンおよびフェノールをAldrich Chemical Co.,Milwaukee,Wisconsinから入手した。ペプチド合成．ペチド合成、分析用HPLC、レーザー脱着質量分析およびアミノ酸分析をW.M.Keck Foundation Resource Laboratory of YaleUniversityにおいて実施した。Fmoc保護基化学を使用してRainin Symphony Multiple Peptide Sy nthesizer上の固相によってペプチドを合成した。TFAによるRinkアミドMBHA樹脂からの切断後、逆相HPLC（Vydec C₁₈カラム）および質量分析によってペプチドを分析した。実施例１ DMF中の0.45M HBTU/HOBt試薬．乾燥HBTU 25mmolを含有する125mLコハク色ビン中に0.5M(DMF)HOBt 50mLを注入した。緩やかに撹拌してHBTUを溶解させた。HBTU およびHOBtの最終濃度は0.45Mであった。生成した溶液は室温で少なくとも６週間安定だった。実施例２モノマーの合成．以下のようにして、すべてのFmoc-アミノ酸をMBHAリンカーに連結させた：誘導体化したアミノ酸１mmolをNMP 2.5mL中に溶解し、実施例１の操作にしたがって得られたDMF中の0.45M HBTU/HOBt試薬2.0mLをこのアミノ酸溶液に添加し、そして生成した溶液を10分間混合し、MBHA樹脂に移した。樹脂懸濁液にDIEA 2.0mLを添加し、混合しながら室温で30分間インキュベートした。生成したアミノ酸が連結した樹脂を濾過し、NMPで６回洗浄し、定量ニンヒドリン試験のためにビーズ２mgを取り出した。20％ピペリシン／NMPでの５分間の処理後、さらに15分間の処理によって、アミノ酸連結樹脂から脱保護した。生成した脱保護されたアミノ酸連結樹脂を濾過し、NMPで６回洗浄し、そして所望のモノマーのペプチド配列が得られるまで、上記のプロセスを連続的に反復するのに使用した。実施例３ MBHA樹脂からのモノマーの切断．所望のモノマーを合成した後、樹脂を気体の TFAに0，2，4，6および10時間暴露することによって、モノマーをMBHA樹脂から切断した。切断をHPLC分析によって定量試験した。実施例４モノマーのペプチドダイマーへの酸化．実施例３の操作法に従ったMBHA樹脂からのモノマーの切断後、生成したモノマーをJ.P.Tamら、J.Am.Chem.Soc.113,665 7-6662(1991)の操作法にしたがって酸化した。すなわち、生成したモノマーを25 ％酢酸で抽出し、続いて5％酢酸で二次抽出した。まとめた酢酸洗浄液を希釈して最終濃度を5％酢酸とし、(ＮＨ₄)₂ＣＯ₃を使用して、生成したモノマー溶液を pH６に調整した。20容積％のDMSOを添加し、1〜4時間後、相似体ペプチドダイマーが得られた。HPLC．Superdex PeptideおよびSuperose 6サイズ排除カラムを使用するPharma cia SMARTシステム上でペプチドのHPLC精製を実施した。合成後、PBS中のSuperd ex Peptideカラム上で流速50uL／分でペプチドを精製し、すぐに酸化反応に使用した。酸化後、PBS中のSuperose 6カラム上で流速50uL／分でモノマーおよびダイマーを再精製した。ダイマーは好適な純度に到達するためには通常２回の連続ゲル濾過ステップが必要であった。ペプチドをPBS中、-20℃で保存した。アミノ酸分析によってペプチドの濃度を判定し、質量分析によって分子量を確認した。酸化．Superdex Peptideカラムでペプチドを精製した後、20％ジメチルスルホキシド(DMSO)を含有するPBS(pH＝7.0)中でそれらを室温で4時間酸化した（J.P.T amら、J.Am.Chem.Soc.113,6657-6662(1991)）。ダイマーペプチドの平均収率は約20％であった。カエルメラニン細胞アッセイ．M.Engelら、Biochemistry 30,3161-3169(1991) ；C.A.Slateら、Int.J.Peptide Protein Res.45,290-298(1995)；およびC.Plank ら、J.Biol.Chem.269,12918-12924(1994)に記載されたように、Xenopus Laevis の黒色素胞を培養液中に維持した。エレクトロポレーションによって、黒色素胞中でボンベシン受容体プラスミドDNA（pJG3.6BR）の一時的発現を達成させた（C .A.Slateら、Int.J.Peptide Protein Res.45,290-298(1995)）。黒色素胞を96ウエルの組織培養プレート（Falcon）上に撒き（15,000／ウェル）、マイクロタイタープレートアッセイによって時間および用量−応答曲線を得た（R.Duncanら、 Clin.Pharmacokinet.27,290-306(1994)；M.Engelら、Biochemistry 30,3161-316 9(1991)；C.A.Slateら、Int.J.Peptide Protein Res.45,290-298(1995)；C.Plan kら、J.Biol.Chem.269,12918-12924(1994)；およびP.M.Connら、Endocrlnology 111,335-337(1982)）。モノマーまたはダイマーの添加の前に、細胞を洗浄し、その後１nMメラトニンを補充した0.7X L15培地とともに１時間インキュベートした。この予備インキュベートの結果、細胞の色素が凝集して細胞の色が明るくなった。このマイクロタイターウェルにモノマーまたはダイマーを最終濃度の10倍で 20μｌアリコートを添加した。IC₅₀曲線のために、培地に5nM α-MSHもまた補充した。 340 ATTCマイクロタイタープレートリーダー（SLT Lab Instruments）を使用して620nmでの光透過を測定した。メラトニンの添加後１時間目に透過の読取りを開始し（T_i）、同時にモノマーまたはダイマーを添加した。各種時間毎（５〜 60分）にその後の読取り（T_f）を実施した。データはｙ＝１−（T_f／T_i）の非直線回帰曲線に適合した。最終データを正規化し、最大色素分散率％（ｙ_max）として表現した。この研究のため、カエル黒色素細胞中のＧタンパク質共役受容体の迅速で機能的なアッセイを使用した（C.K.Jayawickremeら、J.Biol.Chem.269,29846-29854( 1994)；M.N.Potenzaら、Anal.Biochem.206,315-322(1992)；G.F.Graminskiら、J .Biol.Chem.268,5957-5964(1993);S.Karneら、J.Biol.Chem.268,19126-19133(19 93)；およびC.K.Jayawickremeら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91,1614-1618(1994) ）。カエルのメラニン形成細胞中で、細胞内サイクリックAMP量の増加を仲介するα-MSHなど、またはPI代謝を刺激するエンドセリン3（S.Karneら、J.Biol.Che m.268,19126-19133(1993)）などのリガンドは色素の分散および細胞の暗色化の原因となり、一方メラトニンなどのサイクリックAMP合成の阻害剤は色素の凝集および細胞の明色化の原因となる。この研究においては、色素の分散に及ぼすモノマーまたはダイマーペプチドの影響が測定された。 α-MSHおよびα-MSH-ANTモノマーおよびダイマーが関与するアッセイのために、野性型黒色素胞を使用した。ボンベシンモノマーおよびダイマーが関与するアッセイのために、ボンベシン受容体をコードする領域を含有するプラスミドでトランスフェクトした黒色素胞を使用した（G.F.Graminskiら、J.Biol.Chem.268,5 957-5964(1993)：およびC.K.Jayawickremeら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91,161 4-1618(1994)）。他のリガンドについて同様の効果が観察されるかどうかを評価するため、ボンベシン受容体をコードするプラスミドで野性型細胞をトランスフェクト（ｃＤＮＡ）した。ボンベシン受容体はPI加水分解に機能的に連動し、トランスフェクト後は色素の分散を仲介することが証明されている（P. M.Connら、Nature 296,653-654(1982)）。６．２ α-MSH、α−MSH-ANTおよびボンベシンモノマーおよびダイマーの合成上記６．１節の操作法にしたがう固相ペプチド合成を使用して、α-MSH、α-M SH-ANTおよびボンベシンモノマーを合成した。下記に構造を示すα-MSHおよびα -MSH-ANTダイマーを、リガンド結合ドメインで構成されるN-末端領域に続いて３つのグリシン残基およびアミノヘキサン酸スペーサーで構成される短い非荷電領域；20リシン残基のより長い荷電スペーサー領域；およびシステイン残基；そして最後にカルボキシル末端にβアラニン残基を有するモノマーから合成した。構造を下記に示すボンベシンモノマーを、カルボキシル末端にリガンド結合ドメインを有するように反対の方向に合成した。なぜならば、MSHモノマーとは異なって、ボンベシンの結合にとってカルボキシル末端が重要であるからである。固相合成の後、DMSOを使用してα-MSH、α-MSH-ANTおよびボンベシンモノマーを酸化して、対応するダイマーとした。６．１節に記載したカエルメラニン形成細胞アッセイで使用したモノマーは、そのアッセイで使用したモノマーがシステイン残基を欠如している点で、この実施例においてペプチドダイマーの合成で使用するモノマーとは少し異なっていることを指摘しておかなければならない。これは、システイン残基を含むモノマーは空気酸化を受けやすく、したがって、こうしたシステイン残基を有するモノマーで構成される純粋なペプチドダイマーに比較する基準値／対照データを得るためには、特には有用ではないからである。以下に記載する研究で使用するモノマーは以下の構造を有する： SYSMEHFRWGKPV-GGG-εAhX-K₍₂₀₎-βA1a α-MSHモノマー MPdFRdWFKPV-GGG-εAhX-K₍₂₀₎-βAla α-MSH-ANTモノマーおよび K₍₂₀₎-εAhX-GGG-QQRLGNQWAVGHLM ボンベシンモノマー HPLC精製後、システイン含有および非システイン含有の両ペプチドを20％DMSO での４時間の処理によって酸化した（J.P.Tamら、J.Am.Chem.Soc.113,6657-6662 (1991)）。次にHPLCサイズ排除クロマトグラフィー（Pharmacia Superose 6カラム）によってペプチドを再精製した（図１および２）。ダイマーは２回のゲル濾過精製ステップを必要とした。およその保持時間（Rt）はダイマーおよびモノマーについてそれぞれ39.0および44.0分だった。質量分析によって分子量を確認し、アミノ酸分析によって濃度を決定した（データは示していない）。６．３結果野性型黒色素胞中で、モノマーおよびダイマーα-MSHペプチドは分散を時間および用量依存様式で刺激した（図３）。しかし、α-MSHダイマーは（t＝30分において）モノマーに比較しておよそ５倍低いEC₅₀で分散を刺激した（図４）。計算したEC₅₀値はダイマーおよびモノマーについてそれぞれ72.5±5.0nMおよび372 ±18nMだった。このように、α-MSHモノマーからダイマーへの変換の結果、、アゴニスト活性が５倍増大した。さらに、色素の分散に及ぼすモノマーおよびダイマーα-MSH-ANTの効果を試験した。予想したように、α-MSH-ANTモノマーはα-MSH（5nM）が仲介する分散をI C₅₀＝120±6nMの用量依存様式で阻害した（図５）。しかし、α-MSH-ANTダイマーは低濃度ではα-MSHが仲介する分散を阻害するように見えた（図５）が、高濃度ではα-MSH-ANTダイマーはむしろ分散を刺激した（図６）。α-MSH-ANTモノマーでは有意な分散は観察されなかった。α-M SH-ANTダイマーについてのIC₅₀（t＝30分）はモノマーの場合（IC₅₀＝57±74nM ）よりもおよそ２倍低かったが、この数値を正確に計算することはできなかった。なぜならば、分散は100nMを超える濃度で発生したからである（図５）。α-MS H不在下（図６）では、ダイマーについて計算したEC₅₀は138±4nMだった。しかし、およそ350nMを超える濃度では、ダイマーのアゴニズムは減少した。α-MSH- ANTモノマーは１μＭより低い濃度では分散を刺激しなかった。１μＭより高い濃度では、両ペプチドが非特異的な色素の分散を少しではあるが有意な程度に刺激した。このように、α-MSH-ANTモノマーのダイマーへの変換の結果、驚くべきかつ予期しなかったアゴニスト効果が得られた。上に議論したようなα-MSHペプチドによって得られた結果と同様に、ボンベシンダイマーはボンベシンモノマーよりもおよそ５倍低いEC₅₀で用量依存様式で色素の分散を刺激した（図７）。EC₅₀（t＝30分）はダイマーについて23.4±5.6nM 、そしてモノマーについては110±9nMだった。α-MSH-ANTモノマーと同様に、ボンベシンペプチドは使用した濃度範囲内では野性型黒色素胞において分散を刺激しなかった（データは示していない）。このように、ボンベシンモノマーのダイマーへの変換の結果、アゴニスト活性がおよそ５倍増大した。６．４結論上の結果は、α-MSHおよびボンベシン受容体を標的とするダイマーペプチドが対応するモノマーよりもおよそ５倍高い親和性を有することを証明している。ダイマーは能力があるリガンドの数を２倍含有しているので、結合活性効果は２倍よりも少し多かったことになる。この効果はわずかであるが、これは完全に合成されたアゴニストペプチドダイマーがＧタンパク質が仲介するシグナル作用を強化することができるという本発明者らの知見の最初の証明である。 GPCRへの２価結合の効果がなぜ比較的わずかであるかはいくつかの解釈があると思われる。第１に、シグナル作用は部分的にＧタンパク質複合体のα −効果によって調節されて、過剰のシグナル増幅を抑制しているようである。第２に、次数が１桁またはそれ以上の親和性の増加を予言するモデルにとっては標的の表面上の抗原または受容体のきわめて高い濃度が仮定される（D.M.Crothers ら、Immunochemistry 9,341-357(1972)）。第３に、Ｇタンパク質共役受容体の場合、受容体の局部的濃度が多価による親和性の増強における限定因子であるらしい。ダイマーペプチドの増大した能力はＧタンパク質によって増強されたシグナル作用によるものである可能性もある。以前のGnRH受容体の研究において、受容体タンパク質の微小凝集が二次メッセンジャー作用を促進するらしいことが仮定された（P.M.Connら、Endocrinology 111,335-337(1982):P.M.Connら、Nature 296 ,653-654(1982)）。さらに最近のＧタンパク質共役受容体の分子学的研究では、これらのタンパク質が相互作用し、アミノおよびカルボキシル末端ドメインの交換が関与するダイマーを形成することが示唆された（R.Maggioら、Proc.Natl.Ac ad.Sci.USA 90,3103-3107(1993)）。これらのダイマーはモノマー受容体よりも効率的にＧタンパク質を活性化するのかも知れない。上に記載した最も重要な結果はα-MSH-ANTダイマーがアゴニストとして作用したことである。特定の理論になんら拘束されることなく、本発明者らは、２価アゴニストはリガンドの２個の「アーム」が近傍の受容体に結合したときの共同した効果を仲介するものと仮定する。この筋書きにおいて、受容体の微小凝集またはダイマー化が発生し、これが二次メッセンジャー応答を刺激するのに十分であり得る（P.M.Connら、Endocrinology 111,335-337(1982)；P.M.Connら、Nature 296,653-654(1982)）。さらに、上の結果は例示の２価アゴニストのアゴニズムが高濃度で減少したことを示している。これは非常に高いリガンド濃度では受容体の濃度が律速になるらしいことを示唆している（G.Fuhら、Science 256,1677-1680(1992)）。言い換えると、リガンドのモノマー結合が受容体結合部位を飽和して、受容体のダイマー化が阻害される。このように、カエル黒色素細胞における機能アッセイを使用して、本発明者らは、それ自身がアゴニストとして作用する２つのリガンドドメインを有する２価アゴニストが対応するモノマー形態に比較してアゴニストとしての能力を増大させる結果になること、およびそれ自身がアンタゴニストとして作用する２つのリガンドドメインを有する２価アゴニストがアンタゴニスト活性からアゴニスト活性に変化する結果になることを証明した。これらの知見は薬剤に特定の細胞型を標的とさせるために強力であると思われる方法を提供する。本発明は実施例で開示した特定の態様の範囲に限定されるべきものではなく、これらの実施例は本発明の多数の様相の例示を意図するものであり、そして機能的に等価などんな態様も本発明の範囲内である。実際、本明細書に示し、そして記載したものの他に本発明の各種の改変が当業者には明らかになるであろうし、それらは請求の範囲内に含まれることを意図している。多数の参考文献を引用したが、それらの開示の全部が参照として本明細書中に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims

【特許請求の範囲】１．１種以上のＧタンパク質共役受容体に対して親和性を有する２価アゴニストであって、前記アゴニストはそれぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体のアゴニストである２つのリガンドドメインを含み、これらのリガンドドメイン間の距離は約40〜約250Åであり、前記アゴニストはこれら２つのリガンドドメインに共有結合で結合されている分子バックボーンをさらに含むことを特徴とする、上記２価アゴニスト。２．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項１に記載の２価アゴニスト。３．それぞれのリガンドドメインが同じものである、請求項２に記載の２価アゴニスト。４．第１のＧタンパク質共役受容体が第２のＧタンパク質共役受容体と異なるものである、請求項１に記載の２価アゴニスト。５．第１のＧタンパク質共役受容体か第２のＧタンパク質共役受容体のいずれかがＭＳＨ受容体である、請求項１に記載の２価アゴニスト。６．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項１に記載の２価アゴニスト。７．リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項１に記載の２価アゴニスト。８．前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項１に記載の２価アゴニスト。９．前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項８に記載の２価アゴニスト。 10．前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項９に記載の２価アゴニスト。 11．前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項９に記載の２価アゴニスト。 12．前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項８に記載の２価アゴニスト。 13．１種以上のＧタンパク質共役受容体に対して親和性を有する２価アゴニストであって、前記アゴニストはそれぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体のアンタゴニストである２つのリガンドドメインを含み、これらのリガンドドメイン間の距離は約40〜約250Åであり、前記アゴニストはこれら２つのリガンドドメインに共有結合で結合されている分子バックボーンをさらに含むことを特徴とする、上記２価アゴニスト。 14．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項13に記載の２価アゴニスト。 15．それぞれのリガンドドメインが同じものである、請求項14に記載の２価アゴニスト。 16．第１のＧタンパク質共役受容体が第２のＧタンパク質共役受容体と異なるものである、請求項13に記載の２価アゴニスト。 17．第１のＧタンパク質共役受容体か第２のＧタンパク質共役受容体のいずれかがＭＳＨ受容体である、請求項13に記載の２価アゴニスト。 18．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項13に記載の２価アゴニスト。 19．リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項13に記載の２価アゴニスト。 20．前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項13に記載の２価アゴニスト。 21．前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 20に記載の２価アゴニスト。 22．前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項21に記載の２価アゴニスト。 23．前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項21に記載の２価アゴニスト。 24．前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項20に記載の２価アゴニスト。 25．１種以上のＧタンパク質共役受容体に対して親和性を有する２価アゴニストであって、前記アゴニストは第１および第２のリガンドドメインを含み、第１のリガンドドメインが第１のＧタンパク質共役受容体のアゴニストであって、第２のリガンドドメインが第２のＧタンパク質共役受容体のアンタゴニストであり、これらのリガンドドメイン間の距離は約40〜約250Åであり、前記アゴニストは第１および第２のリガンドドメインに共有結合で結合されている分子バックボーンをさらに含むことを特徴とする、上記２価アゴニスト。 26．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項25に記載の２価アゴニスト。 27．第１のＧタンパク質共役受容体が第２のＧタンパク質共役受容体と異なるものである、請求項25に記載の２価アゴニスト。 28．第１のＧタンパク質共役受容体か第２のＧタンパク質共役受容体のいずれかがＭＳＨ受容体である、請求項25に記載の２価アゴニスト。 29．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項25に記載の２価アゴニスト。 30．リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項25に記載の２価アゴニスト。 31．前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項25に記載の２価アゴニスト。 32．前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 31に記載の２価アゴニスト。 33．前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項30に記載の２価アゴニスト。 34．前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項30に記載の２価アゴニスト。 35．前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項31に記載の２価アゴニスト。 36．２つの前記リガンドドメインおよび前記バックボーンがそれぞれ１以上のペプチドを含み、前記バックボーンが２つのスペーサー領域、２つのポリリシン領域および１つのジスルフィド結合領域を含み、前記リガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域およびジスルフィド結合領域が（リガンドドメイン）−（スペーサー領域）−（ポリリシン領域）−（ジスルフィド結合領域） −（ポリリシン領域）−（スペーサー領域）−（リガンドドメイン）の順で一緒に共有結合されている、請求項１に記載の２価アゴニスト。 37．前記スペーサー領域のそれぞれがタンパク質、一端にカルボキシル基を有するポリエチレンもしくはポリプロピレングリコール、各端に独立してスルフヒドリル、ヒドロキシル、アミノまたはカルボキシル基を有する炭化水素、およびこれらの組合せよりなる群から独立に選択される、請求項36に記載の２価アゴニスト。 38．それぞれのスペーサー領域がGGG-εAhxである、請求項37に記載の２価アゴニスト。 39．ポリリシン領域の少なくとも１個のアミノ基が正電荷を有する、請求項36に記載の２価アゴニスト。 40．前記２価アゴニストがである、請求項36に記載の２価アゴニスト。 41．前記２価アゴニストがである、請求項36に記載の２価アゴニスト。 42．２つの前記リガンドドメインおよび前記バックボーンがそれぞれ１以上のペプチドを含み、前記バックボーンが２つのスペーサー領域、２つのポリリシン領域および１つのジスルフィド結合領域を含み、前記リガンドドメイン、スペーサー領域、ポリリシン領域およびジスルフィド結合領域が（リガンドドメイン）−（スペーサー領域）−（ポリリシン領域）−（ジスルフィド結合領域） −（ポリリシン領域）−（スペーサー領域）−（リガンドドメイン）の順で一緒に共有結合されている、請求項13に記載の２価アゴニスト。 43．前記スペーサー領域のそれぞれがタンパク質、一端にカルボキシル基を有するポリエチレンもしくはポリプロピレングリコール、各端に独立してスルフヒドリル、ヒドロキシル、アミノまたはカルボキシル基を有する炭化水素、およびこれらの組合せよりなる群から独立に選択される、請求項42に記載の２価アゴニスト。 44．それぞれのスペーサー領域がGGG-εAhxである、請求項43に記載の２価アゴニスト。 45．ポリリシン領域の少なくとも１個のアミノ基が正電荷を有する、請求項42に記載の２価アゴニスト。 46．前記２価アゴニストがである、請求項42に記載の２価アゴニスト。 47．ある量のモノマーをある量の酸化剤で処理する工程を含んでなる２価アゴニストダイマーの合成方法であって、前記モノマーが分子バックボーンに共有結合されたリガンドドメインを含み、前記リガンドドメインは、(a) Ｇタンパク質共役受容体のアゴニストであり、かつ(b) ペプチドを含み；前記バックボーンは共有結合しているスペーサー領域、ポリリシン領域およびスルフヒドリル基含有アミノ酸残基を含み；前記量の酸化剤がスルフヒドリル基を酸化することができ、その結果、酸化されたスルフヒドリル基が別のモノマーの酸化されていないスルフヒドリル基と反応してジスルフィド結合を有するダイマーを形成する、ことを特徴とする上記方法。 48．酸化剤がジメチルスルホキシドである、請求項47に記載の方法。 49．ある量のモノマーをある量の酸化剤で処理する工程を含んでなる２価アゴニストダイマーの合成方法であって、前記モノマーが分子バックボーンに共有結合されたリガンドドメインを含み、前記リガンドドメインは、(a) Ｇタンパク質共役受容体のアンタゴニストであり、かつ(b) ペプチドを含み；前記バックボーンは共有結合しているスペーサー領域、ポリリシン領域およびスルフヒドリル基含有アミノ酸残基を含み；前記量の酸化剤がスルフヒドリル基を酸化することができ、その結果、酸化されたスルフヒドリル基が別のモノマーの酸化されていないスルフヒドリル基と反応してジスルフィド結合を有するダイマーを形成する、ことを特徴とする上記方法。 50．酸化剤がジメチルスルホキシドである、請求項49に記載の方法。 51．細胞を２価アゴニストと接触させることを含んでなる、細胞により発現された１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激する方法であって、前記アゴニストがそれぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体のアゴニストである２つのリガンドドメインを含み、これらのリガンドドメイン間の距離は約40〜約250Åであり、前記アゴニストが２つのリガンドドメインに共有結合で結合されている分子バックボーンをさらに含む、ことを特徴とする上記方法。 52．前記細胞が第１または第２のＧタンパク質共役受容体を発現する、請求項51 に記載の方法。 53．前記細胞が第１および第２のＧタンパク質共役受容体を発現する、請求項51 に記載の方法。 54．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が異なるものである、請求項51に記載の方法。 55．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項51に記載の方法。 56．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項53に記載の方法。 57．第１または第２のＧタンパク質共役受容体がＭＳＨ受容体である、請求項51 に記載の方法。 58．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項51に記載の方法。 59．リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項51に記載の方法。 60．前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項51に記載の方法。 61．前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 60に記載の方法。 62．前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項61に記載の方法。 63．前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項61に記載の方法。 64．前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項60に記載の方法。 65．細胞を２価アゴニストと接触させることを含んでなる、細胞により発現された１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激する方法であって、前記アゴニストがそれぞれ第１および第２のＧタンパク質共役受容体のアンタゴニストである２つのリガンドドメインを含み、これらのリガンドドメイン間の距離は約40〜約250Åであり、前記アゴニストが２つのリガンドドメインに共有結合で結合されている分子バックボーンをさらに含む、ことを特徴とする上記方法。 66．前記細胞が第１または第２のＧタンパク質共役受容体を発現する、請求項 65に記載の方法。 67．前記細胞が第１および第２のＧタンパク質共役受容体を発現する、請求項65 に記載の方法。 68．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が異なるものである、請求項65に記載の方法。 69．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項65に記載の方法。 70．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項67に記載の方法。 71．第１または第２のＧタンパク質共役受容体がＭＳＨ受容体である、請求項65 に記載の方法。 72．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項65に記載の方法。 73．リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項65に記載の方法。 74．前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項65に記載の方法。 75．前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 74に記載の方法。 76．前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項75に記載の方法。 77．前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項75に記載の方法。 78．前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項74に記載の方法。 79．細胞を２価アゴニストと接触させることを含んでなる、細胞により発現された１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト剌激する方法であって、前記アゴニストが第１および第２のリガンドドメインを含み、第１のリガンドドメインは第１のＧタンパク質共役受容体のアゴニストであって、第２のリガンドドメインは第２のＧタンパク質共役受容体のアンタゴニストであり、これらのリガンドドメイン間の距離は約40〜約250Åであり、前記アゴニストが第１および第２のリガンドドメインに共有結合で結合されている分子バックボーンをさらに含む、ことを特徴とする上記方法。 80．前記細胞が第１または第２のＧタンパク質共役受容体を発現する、請求項79 に記載の方法。 81．前記細胞が第１および第２のＧタンパク質共役受容体を発現する、請求項79 に記載の方法。 82．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が異なるものである、請求項79に記載の方法。 83．第１または第２のＧタンパク質共役受容体がＭＳＨ受容体である、請求項79 に記載の方法。 84．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項79に記載の方法。 85．リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項79に記載の方法。 86．前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項79に記載の方法。 87．前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 86に記載の方法。 88．前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項87に記載の方法。 89．前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項87に記載の方法。 90．前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項86に記載の方法。 91．１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するのに有効な量の請求項１に記載の２価アゴニスト、および製薬上許容される担体を含んでなる、１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するための組成物。 92．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項91に記載の組成物。 93．それぞれのリガンドドメインが同じものである、請求項92に記載の組成物。 94．第１のＧタンパク質共役受容体が第２のＧタンパク質共役受容体と異なるものである、請求項91に記載の組成物。 95．第１のＧタンパク質共役受容体か第２のＧタンパク質共役受容体のいずれかがＭＳＨ受容体である、請求項91に記載の組成物。 96．第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項91に記載の組成物。 97．リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項91に記載の組成物。 98．前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項91に記載の組成物。 99．前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 98に記載の組成物。 100.前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項99に記載の組成物。 101.前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項99に記載の組成物。 102.前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項98に記載の組成物。 103.前記２価アゴニストがである、請求項91に記載の組成物。 104.前記２価アゴニストがである、請求項91に記載の組成物。 105.１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するのに有効な量の請求項13に記載の２価アゴニスト、および製薬上許容される担体を含んでなる、１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するための組成物。 106.第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項105に記載の組成物。 107.それぞれのリガンドドメインが同じものである、請求項106に記載の組成物。 108.第１のＧタンパク質共役受容体が第２のＧタンパク質共役受容体と異なるものである、請求項105に記載の組成物。 109.第１のＧタンパク質共役受容体か第２のＧタンパク質共役受容体のいずれかがＭＳＨ受容体である、請求項105に記載の組成物。 110.第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項105に記載の組成物。 111.リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項105に記載の組成物。 112.前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項105に記載の組成物。 113.前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 112に記載の組成物。 114.前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項113に記載の組成物。 115.前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項113に記載の組成物。 116.前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項112に記載の組成物。 117.前記２価アゴニストがである、請求項105に記載の組成物。 118.１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するのに有効な量の請求項25に記載の２価アゴニスト、および製薬上許容される担体を含んでなる、１種以上のＧタンパク質共役受容体をアゴニスト刺激するための組成物。 119.第１および第２のＧタンパク質共役受容体が同じものである、請求項118に記載の組成物。 120.第１のＧタンパク質共役受容体か第２のＧタンパク質共役受容体のいずれかがＭＳＨ受容体である、請求項118に記載の組成物。 121.第１および第２のＧタンパク質共役受容体が両方ともＭＳＨ受容体である、請求項118に記載の組成物。 122.リガンドドメインのそれぞれがホルモン、抗原、合成または天然の薬物、オピエート、ドーパミン、セロトニン、Ｃａ²⁺、カテコールアミン、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン、芳香物質である小さい有機分子、フェロモン、アデノシン、単純な糖、およびこれらの混合物よりなる群から独立に選択される、請求項118に記載の組成物。 123.前記バックボーンがタンパク質、ポリヌクレオチド、サッカリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、炭化水素、ポリアクリレート、アミノ-、ヒドロキシ-、チオ-もしくはカルボキシ-官能化シリコーン、またはこれらの組合せを含んでなるが、前記バックボーンは単独でポリグリシンまたはポリプロリンではなく、さらに前記バックボーンは抗体でもない、請求項118に記載の組成物。 124.前記バックボーンが１個以上の求核性または求電子性官能基を含む、請求項 123に記載の組成物。 125.前記求核性または求電子性官能基が１以上の薬剤または合成遺伝子治療用ベクターとイオン結合または共有結合を形成している、請求項124に記載の組成物。 126.前記求核性官能基がアミノ、ヒドロキシおよびスルフヒドリル基よりなる群から選択され、前記求電子性官能基がカルボキシル基とそれらの同等物およびエポキシド基よりなる群から選択される、請求項124に記載の組成物。 127.前記バックボーンがアンモニウムまたはカルボキシレート基をさらに含む、請求項123に記載の組成物。