JP2000512300A

JP2000512300A - ポルフィリン誘導体の意図的な照射なしでのアテローム硬化症の処置における医薬品の製造での緑色ポルフィリンの使用

Info

Publication number: JP2000512300A
Application number: JP10501989A
Authority: JP
Inventors: ケリー，バーバラ; レビー，ジュリア; マリアクロテイルマーガロン，フィリップ
Original assignee: キュウエルティーフォトセラピューティクス，インコーポレイテッド
Priority date: 1996-06-14
Filing date: 1997-06-05
Publication date: 2000-09-19
Also published as: KR20000016656A; CN1101188C; NO985829D0; CN1222076A; NZ333236A; NO985829L; HUP0001063A3; US6235767B1; AU714045B2; EP0910371A1; TW514527B; AR008392A1; CA2257564A1; US5834503A; WO1997048393A1; HUP0001063A2; AU2947097A

Abstract

(57)【要約】動脈斑の発達を防止または阻害する方法であって、以下の工程を包含する方法：(a)被験体に、上記の発達を防止または阻害するために有効な量の緑色ポルフィリン化合物を投与する工程；および(b)緑色ポルフィリンによって吸収される光の照射の非存在下で、阻害が起こることを可能にする工程；または動脈斑の発達を防止または阻害するための薬学的組成物。この組成物は、(a)その発達を防止または阻害するための処置が必要な被験体に投与する場合に、緑色ポルフィリンによって吸収される光の照射の非存在下でさえその発達を防止または阻害するのに有効な量の上記の緑色ポルフィリン化合物、および(b)薬学的に受容可能な賦形剤を含有する。緑色ポルフィリンの投与は、光の何らかの意図的な照射により達成される。

Description

【発明の詳細な説明】ポルフィリン誘導体の意図的な照射なしでのアテローム硬化症の処置における医薬品の製造での緑色ポルフィリンの使用発明の背景発明の分野本発明は、アテローム硬化症血管における脂肪沈着の処置に関する。特に、本発明は、緑色ポルフィリン化合物を投与することによる、動脈斑の防止または阻害に関する。標準的な光力学的プロトコルとは異なり、光の意図的な照射は、所望の阻害を達成するために必要とされない。関連技術の説明アテローム硬化症は、脂肪物質（脂質）が、内膜または内中膜、動脈の内腔を包囲する最内膜中に蓄積する、動脈疾患である。結果として生じる病巣は、アテローム硬化症斑と呼ばれる。アテローム硬化症斑の塊が増大するにつれ、関連する動脈を通しての血流が徐々に減少し、それによってそれに対して遠位にある組織または器官の機能を損なうので、臨床的症状が最終的に生じる。アテローム硬化症およびその合併症（例えば、心筋梗塞、脳卒中、および末梢血管疾患）は、西洋における羅患率および死亡率の主要な原因のままである。冠状心臓疾患は、単独で、米国において年間50万人を越える死亡を占めると報告された。アテローム硬化症の基本的な病巣は、アテローム性または線維脂肪性の斑であり、それは動脈の狭小化を引き起こし、血栓症の素因になり、石灰化し、筋肉の衰えにつながり、そして動脈瘤の拡張を引き起こす。アテローム硬化症斑はだいたい丸く、隆起した病巣であり、通常表面の色はオフホワイトから白色であり、そしておそらく直径で１cmである。より大きい斑の中心は、黄色の凝血塊のような液体を滲出し得る。代表的な細胞性斑は、図３に示され、そして以下からなる：１．いくつかの白血球および比較的密な結合組織（エラスチン、コラーゲン原線維、プロテオグリカン、および基底膜を含む）を有する平滑筋細胞でほとんどが構成される、線維性キャップ；２．マクロファージ、平滑筋細胞、およびＴリンパ球の混合物からなるキャップの下および側面の細胞性領域；ならびに３．細胞性細片、細胞外脂質滴、およびコレステロール結晶を含む、より深い「ネクローシスコア」。 Munroら、「Biology of Disease;The Pathogenesis of Atherosclerosis:Athero genesis and Inflammation」，Laboratory Investigation 58:3，249〜50(1988) 。未検査のままで、斑の形成は、動脈の完全な閉塞および重篤な臨床的結果を引き起こし得る。例えば、併発した場合、病巣は、種々の程度のネクローシス、血栓症、および潰瘍を含む石灰化された線維性斑になる。ネクローシスおよび細胞細片の蓄積の増加につれて、動脈壁は進行的に弱くなり、そして内膜の破裂が起こり得、動脈瘤および出血を引き起こす。動脈塞栓は、斑の断片が内腔中に移動するときに形成され得る。狭窄および弱められた器官機能は、斑が厚くなり、そして血栓が形成されるにつれて、ゆるやかな閉塞から生じる。アテローム硬化症の処置は、一般的にアテローム硬化症合併症を患う患者の看護に集中しており、そして代表的には４つの基本的なアプローチの内の１つに従う：(1)患部血管セグメントは、全心臓移植を実施する限り、補綴のまたは天然の移植片と置き換えられ得る；(2)薬物（例えば、抗不整脈剤、抗凝固剤、および血漿脂質低下剤）は、患者がその状態で生存し得るようにするために投与され得る；(3)斑は、血管形成術におけるバルーンカテーテルの使用によって、物理的に大きさを減少させ得る；または(4)感光剤の投与と、その後の光増感剤を励起するための光の照射とを組合わせ、このようにして細胞傷害性効果を生成する、光力学的治療が使用され得る。Spears，米国特許第4,512,762号（1985年４月2 3日発行）、および米国特許第4,566,636号（1986年３月25日発行）。光力学的治療において、使用される光増感剤は、生来の性向によって、またはそれらが意図的に特定の型の組織に標的化されているか、またはその両方のいずれかにより、悪性細胞に局所化し得る。照射される場合、それらは蛍光を発し得、そして従って、標的組織を検出することに関連する診断法に有用であり得る。しかし、なおより重要なことには、この光増感剤は、化合物が吸収する波長の光を照射される場合、光増感剤が局在化したどのような細胞または他の組織に対しても細胞傷害性効果を引き起こす能力を有する。いまだ決定的には確立されていないが、この細胞傷害性効果は、照射の際の一重項酸素の形成によると考えられる。ほとんどの光力学的治療プロトコルにおいて、光増感剤が局所化された場所の標的組織に到達する光を照射するための方法が、見出されなければならない。このことは、特に、化合物を活性化するために必要とされる照射の波長が、約630n m（血液および他の周辺組織中の天然の発色団によって容易に吸収される波長）の範囲である場合、特に困難である。ひとつの技術において、患者は、カテーテルの発光部分がアテローム硬化症斑に隣接するように、患部動脈または他の血管中に挿入される発光カテーテルを用いてカテーテル処置されなければならない。例えば、発光バルーンカテーテルは、バルーンの膨張によって、バルーンの外表面とアテローム硬化症斑との間の光不透性の血液を置き換えるために使用され得る。あるいは、１形態の「液体光」が血管樹中に注入され得、その結果血液または血液置換物と自由に混合する「液体光」は、患部動脈を潅流する。Spears，米国特許第4,512,762号。別の方法では、投薬量を低く維持しそして光に対する患者の感作を減少させるために、「緑色ポルフィリン」の好ましい群は、血液または他の正常な組織によって通常強く吸収される波長外の波長範囲（詳細には、約670〜780nm）を有する光を用いた光力学的治療を実施することを可能にした。有効なインビボ処置をより低い濃度で供給することおよび非標的組織の過敏性を減少させることに加えて、この照射光によるより深い透過深度はまた、通常達成される。これらの光増感剤は、色が赤でなく緑に見えるため、それらは「緑色ポルフィリン」と異名をつけられた。緑色ポルフィリンが、光力学的治療プロトコルにおいてアテローム硬化症斑を検出しそして処置するために使用され得ることは公知である。例えば、 Levyら、米国特許第5,399,583号（1995年３月21日発行）（第２欄、14〜15行）; Levyら、米国特許第4,920,143号（1990年４月24日発行）（第10欄、58〜59行）；Levyら、米国特許第5,095,030号（1992年３月10日発行）（第２欄、８〜９行および第15欄、29〜30行）；ならびにLevyら、米国特許第5,171,749号（1992年12 月15日発行）（第２欄、12〜13行ならびに第18欄、１〜４行および35〜47行）を参照のこと。緑色ポルフィリンは、光活性化光での何の意図的な照射もなしに起こる、特定の「ダーク効果」を発揮し得ることが見出された。例えば、血管形成術のような血管介入手順に続く、緑色ポルフィリンの投与は、代表的には内膜に集まり「再狭窄」または「内膜過形成」を引き起こす平滑筋細胞の増殖を、有意に減少させ得ることが見出された。例えば、Vincentら、米国特許第5,422,362号（1995年６月６日発行）を参照のこと。さらに、同時係属中の出願第08/374,158号（1995年１月13日出願）に記載のように、特定の抗原に対する免疫応答は改変され得ること、および血流における血栓症または血液凝固形成を生じる細胞内連絡は、光の非存在下で緑色ポルフィリンを投与することによって防害され得ることが見出されている。しかし、これまで、脂肪性アテローム硬化症斑を処置するための緑色ポルフィリンの使用は、光増感剤の投与に続いて細胞傷害性効果を生じるために緑色ポルフィリンを刺激し得る波長を有する光での血管の内膜の照射が必要とされる、光力学的治療プロトコルに制限されている。従って、特別な発光装置の必要性が完全にない、動脈斑を阻害または防止するための治療法を提供することは、有利である。本発明において、緑色ポルフィリンは、どんな種類の意図的な光の曝露もなしに、動脈斑の発達を防止または阻害するために使用され得ることが見い出された。発明の要旨本発明によれば、以下の工程を包含する、動脈斑の発達を防止または阻害するための方法が開発された：ａ．上記の発達を防止または阻害するために有効な量の緑色ポルフィリン化合物を被験体に投与する工程；およびｂ．上記緑色ポルフィリンによって吸収される光の照射の非存在下で、上記阻害が起こることを可能にする工程。本発明はまた、動脈斑の発達を防止または阻害するための薬学的組成物に関する。本組成物は、以下を含有する：ａ．このような処置が必要な被験体に投与された場合に、上記Gpによって吸収される光の照射の非存在下でさえ、上記発達を防止または阻害するために有効な量の緑色ポルフィリン化合物；およびｂ．薬学的に受容可能な賦形剤。本発明の結果として、驚くべきことに、緑色ポルフィリンの投与は、投与される緑色ポルフィリンによって吸収される光の照射を伴う必要はない。むしろ、代表的にはこの処置は、どんな種類の光の意図的な照射もなしで実施される。図面の簡単な説明本発明は、以下の図面を参照にすることによってより明瞭に理解される。ここで：図１は、本発明の方法および組成物に有用な、代表的な緑色ポルフィリンの式を示す。図２は、本発明の緑色ポルフィリンの内、特に好ましい４つの実施態様である、BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA、およびBPD-MBの式を示す。図３は、アテローム硬化症斑の断面図を示す。発明の詳細な説明アテローム硬化症は、大型および中型の筋肉の動脈に関する傾向にある。大動脈、ならびに腸骨動脈、大腿動脈、冠動脈、頚動脈、脳底動脈、椎骨動脈、大脳動脈は、最も一般に影響を受ける。本明細書中で使用される場合、「アテローム硬化症動脈斑」は、内膜または内中膜、動脈の内腔を囲む最内層内での、脂肪の増殖または脂質沈着を伴う、病態生理学的現象として定義される。図３の断面図に示されるように、アテローム硬化症斑は、内膜１または中膜２内で起こり（中間の平滑筋細胞は示されていない）、その両方は外膜３を越えて動脈の外膜まで広がる。上に広がる内皮層は、斑の上に広がる。この斑の線維性筋性「キャップ」部分は、平滑筋細胞４、マクロファージ５、およびコラーゲンバンド８を含む。この下部に、大量の細胞外脂質滴９、その細胞質が脂質滴で満たされている「泡沫」細胞、コレステロール結晶10、およびネクローシス細胞性細片を有する「コア」が存在する。マクロファージ５は広く分布しており、そしてリンパ球６はキャップ内、およびコアの側面に見出され得る。外膜毛細血管７は、内膜の病巣に引き寄せられる。Munroら、「Biology of Disease;The Patho genesis of Atherosclerosis:Atherogenesis and Inflammation」，Laboratory Investigation 58:3，249〜50(1988)。緑色ポルフィリン本発明の方法において有用な緑色ポルフィリンは、Levyら、米国特許第5,171, 749号、1992年12月15日発行（本明細書中で参考として援用される）に詳細に記載される。「緑色ポルフィリン」は、Diels-Alder型反応でポルフィリン核とアルキンを反応させ、モノヒドロベンゾポルフィリンを得ることによって得られるポルフィリン誘導体を言う。代表的には、緑色ポルフィリンは、フォトポルフィリン-IX環系（環Ａおよび環Ｂ）に存在する、２つの利用可能な複合非芳香族ジエン構造の内の１つのみで反応を促進する条件下で、アセチレン誘導体とフォトポルフィリンとのDiels-Alder反応によって得られるポルフィリン誘導体の群から選択される。代表的な緑色ポルフィリンのいくつかの構造は、図１に示される。Diels-Alde r反応は、初めに式１および２に示されるように、ＡまたはＢのピロール環に融合される(fused)シクロヘキサジエン（本明細書中で「ヒドロベンゾ」と言われる）の形成を生じる。ヘキサジエン環でのπ系(π system)の転位は、式３および４の化合物の形成を生じ、そして還元は、式５および６の化合物を提供する。これらの化合物は、水素が内環の窒素の位置を占めている式１〜６に示される。しかし、カチオンがこれらの水素の１つまたは両方と置換する、メタレート形(m etalate forms)もまた使用され得ることが理解されるべきである。本発明で有用な緑色ポルフィリン化合物の調製は、米国特許第5,095,030号に詳細に記載され、これは本明細書中で参考として援用される。簡便には、用語ヒドロモノベンゾポルフィリン誘導体の略語「BPD」は、図１の式３および４の化合物をいうために、一般的に使用される。式３および４の化合物ならびにそれらの混合物は、特に好ましい。図１に示すように、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴は、本発明の方法における化合物および組成物の活性に確認できるほど影響を及ぼさない、非干渉性置換基である。さらに詳細には、用語「非干渉性置換基」は、緑色ポルフィリンの、動脈斑を防止または阻害する能力を破壊しない置換基を意味するために用いられる。図１および２の化合物の場合、一般的にＲ¹およびＲ²は、それぞれ独立した適度な電子吸引性置換基、または十分に電子吸引性ではない任童の他の活性置換基であり、１つの環のみではなくＡ環とＢ環の両方で進行する、Diels-Alder反応を生じる。適切なＲ¹およびＲ²の例は、カルバルコキシ基（２〜６Ｃ）、アルキルスルホニル基（１〜６Ｃ）またはアリールスルホニル基（６〜10Ｃ）、アリール基（６〜10Ｃ）、シアノ基、および-ＣＯＮＲ⁵ＣＯ-（ここでＲ⁵は、アリール基（６〜10Ｃ）またはアルキル基（１〜６））を含む。Ｒ¹およびＲ²の内の１つはまた、他方がDiels-Alder反応を促進するのに十分な強さの電子吸引性置換基である限りは、水素であり得る。非常に一般的には、Ｒ¹およびＲ²はカルバルコキシ基であり、好ましくはメチルカルボキシエステルまたはエチルカルボキシエステルである。好ましい組成物は、Ｒ¹およびＲ²が同じである化合物、ならびにＲ¹ およびＲ²がカルバルコキシ基、特にカルボエトキシである化合物である。本明細書中で用いられる場合、用語「カルボキシ」は慣習的に規定されるように-ＣＯＯＨであり、「カルバルコキシ」は-ＣＯＯＲを示し、ここでＲはアルキルである。「カルバルコキシアルキル」は、置換基-Ｒ'-ＣＯＯＨを言い、ここでＲ'はアルキレンである。「カルバコシアルキル」は、-Ｒ'-ＣＯＯＲを言い、ここでＲ'およびＲは、それぞれアルキレンおよびアルキルである。「アルキル」は、一般的に１〜６炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖の炭化水素(hydrocarbyl )部分（例えば、メチル、n-ヘキシル、2-メチルペンチル、t-ブチル、n-プロピルなど）を示す。「アルキレン」は、基が、一価ではなく二価であることを除いては「アルキル」と同じである。「アリール」は、フェニル基を示し、このフェニル基は、ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素）；低級アルキル（１〜４Ｃ）；および低級アルコキシ（１〜４Ｃ）からなる群より独立して選択され得る１〜３個の置換基で必要に応じて置換される。「アリール」または「アルキルスルホニル」基は、式-ＳＯ₂Ｒを有し、ここでＲは上記で規定するようなアルキルまたはアリールである。Ｒ³は、独立してω-カルボキシアルキル基（２〜６Ｃ）、またはその塩、アミド、エステルもしくはアシルヒドラゾン、あるいはアルキル（１〜６Ｃ）である。好ましくは、Ｒ³は、2-カルボキシエチルまたはそれらのアルキルエステルであり、そしてＲ⁴は、ビニルである。しかし、これらの実施態様は、生物学的効率の考慮によって指示されることではなく、天然のポルフィリンの入手可能性のために好ましい。図１に示すように、Ｒ¹-Ｃ≡Ｃ-Ｒ²とフォトポルフィリンIX環系との反応によって形成される付加物（ここでＲ³は、2-カルボメトキシエチルまたは2-カルボエトキシエチルのような、2-カルボキシエチルの保護形であり、そしてＲ⁴は、-ＣＨ=ＣＨ₂である）が、式１および２の化合物である。式１の化合物は、Ａ環への添加から生成し、そして式２の化合物は、Ｂ環への添加から生成する。本発明の緑色ポルフィリン化合物用の簡便な出発物質には、天然に存在するポルフィリンが挙げられ、ここでＲ³は-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨまたは-ＣＨ₂ＣＨＲＣＯＯＲのいずれかであり、ここでＲはアルキル（１〜６Ｃ）である。しかし、Ｒ³ の実際の働きは、それが環状π結合に共役されるπ結合を含まない限りは、通常Diels-Alder反応の進行または生じる生成物に関係しない。したがって、Ｒ³は、広範な範囲の基（例えば、短いアルキル（１〜４Ｃ）；ならびにω-カルボキシアルキル（２〜６Ｃ）；ならびにそれらのエステルおよびアミド）の任意の１つであり得る。Ｒ³置換基もまた、ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素）；あるいは他の非反応性置換基で置換され得る。Ｒ³がＣＨ₂ＣＨＲＣＯＯＲである場合、エステル化したカルボキシル基を加水分解または部分的に加水分解することは、有利であることが見出されている。代表的には、Ｒ³位置での加水分解は、Ｒ¹またはＲ²のエステル基の加水分解よりかなり速い速度で簡便に起こる。さらに、得られた化合物の溶解度および体内分布特性は、非加水分解性形のそれらより望ましい。加水分解は、二酸のまたは単酸の生成物（またはそれらの塩）を生成する。式１および２の化合物で、Ｒ⁴は、通常少なくとも最初は-ＣＨ=ＣＨ₂であるが、このビニル基は、式１または２における環ＢまたはＡのそれぞれのビニル環置換基への付加、またはその酸化によってＲ⁴の他の実施態様に容易に誘導される。したがって、Ｒ⁴は、容易な付加反応によって形成される置換基と一致する広範な置換基の任意の１つであり得る。例えば、例示的な付加試薬は、ＨＸ形のものであり得、ここでＨは、以下の式を有するＲ⁴位を提供する環に隣接する炭素に添加される：したがって、ひとつの実施態様では、付加される置換基の一方は水素であり、そして他方は、水素；ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）；水酸基；低級アルコキシ；アミノ；アミド；スルフヒドリル；または有機スルフィドからなる群から選択される。例えば、水のマルコフニコフ付加は、関係する環でのヘマトポルフィリン(hematoporphyrin)に類似の置換構造を提供する。ビニル基もまた、Ｒ⁴位における置換基として、-ＣＨ₂ＯＨ、-ＣＨＯ、もしくはＣＯＯＨもしくはその塩またはエステルを得るために酸化され得る。付加生成または酸化生成物はまた、付加された置換基が脱離官能基(functional leaving grou p)であるなら、それ自身で置換され得る。例えば、Brが置換基である場合、それは-ＯＨ、-ＯＲのような部分によって置換され得、ここでＲは、上記のようなアルキル（１〜６Ｃ）、ハロゲン、-ＮＨ₂，-ＮＨＲ、-ＮＲ₂などである。したがって、一般的にＲ⁴は、ビニル基-ＣＨ=ＣＨ₂が開裂または付加によって容易に変換される任意の置換基、および脱離基(leaving good groups)とさらなる部分との反応によって形成されるさらなる置換基を示す。しかし、好ましくは、Ｒ⁴はビニル（-ＣＨ=ＣＨ₂）；-ＣＨＯＲ⁴であり、ここでＲ⁴は、Ｈまたはアルキル（１〜６Ｃ）、必要ならば親水性置換基（例えば、-ＣＨ₂ＯＨ；-ＣＨＯ；-ＣＯＯＲ⁴（例えば、-ＣＯＯＨまたは-ＣＯＯＣＨ₃）；-ＣＨ（ＯＲ⁴）ＣＨ₃ （例えば、-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₃または-ＣＨ（ＯＣＨ₃）ＣＨ₃）；-ＣＨ（ＯＲ⁴）ＣＨ₂ＯＲ⁴；-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ＯＨ；-ＣＨ（ＳＲ⁴）ＣＨ₃（例えば、- ＣＨ（ＳＣＨ₃）ＣＨ₃およびその二硫化物）；-ＣＨ（ＮＲ⁴）ＣＨ₃；-ＣＨ（ＣＮ）ＣＨ₃；-ＣＨ（ピリジニウムブロマイド）ＣＨ₃；-ＣＨ（ＣＯＯＲ⁴）ＣＨ₃ ;-ＣＨ（ＣＯＯＣＲ⁴）ＣＨ₃；-ＣＨ₂（ハロ）ＣＨ₃（例えば、-ＣＨＢｒＣＨ₃ ）；または-ＣＨ（ハロ）ＣＨ₂（ハロ）））で置換される。あるいは、Ｒ⁴は、ビニルの直接的なまたは間接的な誘導化から生成する、１２個未満の炭素原子の有機基であり得る。また、Ｒ⁴は、さらなるポルフィリンまたはポルフィリン関連環系（例えば、下記のように定義される式-Ｌ-Ｐの1-3テトラピロール型核）を提供し得る。Ｒ⁴が、-ＣＨ=ＣＨ₂、-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₃，-ＣＨ（ハロゲン）ＣＨ₃または下記のように定義される式-Ｌ-Ｐの1-3テトラピロール型核を含む基であるこれらの化合物は、好ましい。本明細書中で使用されるように、用語「テトラピロール型核」は、高度に共役する、骨格の４個の環系、またはそれらの塩、エステル、アミド、もしくはアシルヒドラゾンを示す：それは、ポルフィリン系（それは、実質的に完全な共役系である）；クロル系（それは、実質的にポルフィリンのジヒドロ形である）；および還元クロル系（それは、共役ポルフィリン系のテトラヒドロ形である）を含む。「ポルフィリン」が指定される場合、完全な共役系が指示される。緑色ポルフィリンは、実質的にポルフィリン系のジヒドロ形態である。一つの実施態様で、置換基Ｒ⁴は、少なくとも１個のさらなるテトラピロール型核を含む。得られる本発明の化合物は、少なくとも１個のテトラピロール型環系が緑色ポルフィリンである場合、二量体または多量体である。Ｒ⁴位での緑色ポルフィリン部分間の、さらなるテトラピロール型環系への結合は、エーテル、アミン、またはビニル結合によってであり得る。Ｒ⁴に対応する２つの利用可能な置換基位（ＡとＢ環との両方にある）を有するポルフィリン環系は、さらに下記で説明されるように誘導され得る。Ｒ４が「-Ｌ-Ｐ」である場合、-Ｌ-は、以下からなる群から選択される：そしてＰは、任意の第２のＲ４基が上記のＬによって置換されることを除けば、図１に示す式１〜６のポルフィリン構造または第２の緑色ポルフィリンである。（-Ｌ-が、上記の式(e)または(f)である場合、二重結合が結合する環系は、示すように二重結合が結合する環にある、以下に対応する共鳴系を有することもまた明らかである）：上記のDiels-Alder反応から直接生成する、ヒドロ-モノベンゾポルフィリンはまた、図１の式３および４のBPD化合物に対して異性体化され得る。図１中の化合物３および４の図は、Ｒ²置換基に関する環外メチル基（式３の環Ａおよび式４の環Ｂ）の相対的な位置を示さない。いずれの異性体も利用可能である。式３および４の化合物は、本発明の方法および組成物において特に好ましい。さらに、Diels-Alder生成物は、触媒（例えば、木炭(charcoal)上のパラジウム）の存在下で水素で処理することによって、選択的に還元され得、図１に式５および６として示される飽和環アナログを提供する。これは環ＡおよびＢのそれぞれのDiels-Alder生成物に対応する。残存するビニル置換基（Ｒ⁴）の変換による誘導化と関係のある式１および２の化合物に関する、ならびにＲ³の可変性に関する上記の記載は、同様に式３、４、５、および６の化合物に適用する。本発明の緑色ポルフィリンの好ましい実施態様は、Diels-Alder生成物が、転位し、そして部分的に加水分解されるという実施態様である。さらにより好ましくは、Ｒ³位におけるカルバルコキシ基も加水分解されるかまたは部分的に加水分解される、式３および４の（BPDの）化合物である。-ＣＯＯＨを含む本発明の化合物は、遊離酸または塩の形態のいずれかで、有機または無機塩基を用いて調製され得る。図２は、式３および４に包含される本発明の４つの特に好ましい化合物を示し、これはベンゾポルフィリン誘導体（すなわち、BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA、およびBPD-MB）として集団的に設計される。これらは、式３および４の転位生成物の、加水分解されたまたは部分的に加水分解された形態であり、ここでＲ³の保護されたカルボキシル基の一つまたは両方は加水分解される。Ｒ¹およびＲ²でのエステル基は比較的ゆっくり加水分解し、その結果図２に示す形態への転化は容易に達成される。これらの緑色ポルフィリン化合物のうち最も好ましいのは、BPD- MAである。図２で、Ｒ³は-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＲ³'であり、ここでＲ³'は、個々の化合物によって変化する。特にBPD-DAでは、Ｒ¹およびＲ²はカルバルコキシであり、Ｒ³' は水素であり、そして誘導体化は環Ａにおいて起こる。BPD-DBは、環Ｂでの誘導体化に対応する化合物である。BPD-MAは、BPD-DAの部分的に加水分解された形態を示し、そしてBPD-MBは、BPD-DBの部分的に加水分解された形態を示す。したがって、これらの後者の化合物で、Ｒ¹およびＲ²はカルバルコキシであり、一方のＲ³'は水素であり、そして他方のＲ³'はアルキル（１〜６Ｃ）である。式BPD-MAおよびBPD-MBの化合物は、同質であり得、ここでＣ環カルバルコキシエチルのみもしくはＤ環カルバルコキシエチルのみは、加水分解されるか、またはＣおよびＤ環の置換基加水分解物の混合物であり得る。さらに、BPD-MA、-MB 、-DA、および-DBの任意の２つ以上の混合物は、本発明の方法および組成物に使用され得る。図１の化合物の多くは、少なくとも１つのキラル中心を含み、したがって光学異性体として存在し得ることは、注意されるべきである。本発明の方法は、化合物が単一の立体異性体の単離物として供給される場合も、また鏡像異性体および／またはジアステレオマーの混合物である場合も、キラル炭素の両方の立体配置を有する化合物を使用し得る。ジアステレオマーの混合物の分離は、任意の従来の手段によって達成され得る。鏡像異性体の混合物は、任意の通常の技術によって（例えば、それらを光学活性な調製物と反応させること、および生成するジアステレオマーを分離することによって）分離され得る。さらに、反応生成物が、ＡおよびＢ環付加物の分離されない混合物（例えば、式１と２または３と４または５と６の混合物）であり得ることは、注意されるべきである。分離された形態（例えば、式３のみあるいは４のみ）または任意の比の混合物のいずれかは、本発明の方法および組成物に使用され得る。さらになお、緑色ポルフィリンの二量体形および緑色ポルフィリン／ポルフィリンの組合せの二量体または多量体形は、使用され得る。本発明の二量体および多量体化合物は、ポルフィリン自体の二量体化および多量体化のための反応と類似する反応を使用することによって、調製され得る。緑色ポルフィリンもしくは緑色ポルフィリン／ポルフィリン結合は、直接作製され得るか、またはポルフィリンはカップリングされ得、続いて、末端ポルフィリンのいずれかまたは両方の Diels-Alder反応により、それらを対応する緑色ポルフィリンに転化する。緑色ポルフィリン化合物の投与：本発明の方法で、被験体は、所定量の緑色ポルフィリン化合物または緑色ポルフィリン化合物の混合物を１または数回の投薬量で投与される。その投薬量は、緑色ポルフィリンの純度および化学形態、ならびに期待される吸収の程度に依存する。１用量当たりの適切な量は、代表的には約0.5mg/kg体重より多く、好ましくは１用量当たり約0.5mg/kg〜5.0mg/kgの範囲であり、そして最も好ましくは１用量当たり約0.5mg/kg〜2.0mg/kgである。特定の被験体の個々の反応は変化するため、これらの投薬量の範囲は示唆として意図され、そして必ずしも限定としてみなされるべきではない。個々の変化に従い投薬量範囲を調整することは、医師の間での通常の手順である。同様に、一度にすべての場合について、単一のプロトコルが、望ましいわけではないらしい。しかし、代表的なプロトコルは、単回用量、または初回用量に続く一週間、隔週、もしくは一月間隔でのさらなる１〜４用量のいずれかを含む。特に好ましいプロトコルは、約２週間ごとの３用量を必要とする。再び、これらのプロトコルは、プロトコル設計で許容される広範な変化を考慮すると、限定であると意図されない。本発明の緑色ポルフィリン化合物は、単一化合物（好ましくはBPD-MA）として、または種々の緑色ポルフィリンの混合物として投与され得る。適切な処方物は、全身投与（注射用調整物を含む）、経粘膜もしくは経皮投与、または経口投与に適切な処方物を含む。この使用に特に好ましい、本発明の緑色ポルフィリンを処方するための手段は、末梢静脈中への注射に適切な、溶液またはリポソームの形態である。緑色ポルフィリンは、リポソーム内に含有されるか、その表面に付着されるか、またはその両方であり得る。リポソームを調製するための適切な方法は、当該分野において周知である。このような調製において緑色ポルフィリン化合物を含有させることは、例えば、Allisonら、米国特許第5,214,036号（1993 年５月25日発行）、およびDesaiら、同時係属出願第08/489,850号（1995年６月1 3日出願）に記載される（共に、本明細書中で参考として援用される）。静脈内に注射される場合、溶液またはリポソーム処方物は、血管系全体に広がり、したがって標的にされる動脈斑と直接的に接触し、そこで緑色ポルフィリンは選択的に吸収され、ピーク濃度は代表的には約24時間以内に生じる。斑内の緑色ポルフィリンの存在は、注射後数時間以内に検出され得、そして数日から２週間程度の長期間、存続し得る。一つの実施態様において、じゅく状斑による緑色ポルフィリンの吸収は、斑の成分に特異的ないくつかの抗体を緑色ポルフィリンに結合させることによって、増強され得る。モノクローナル抗体は、それらの極度の特異性のために特に有用であり得る。抗原標的として働き得る斑の成分は、弾性成分、コラーゲン、および脂質成分を含む。本発明の方法において、緑色ポルフィリン化合物は、薬学的組成物に処方され、緑色ポルフィリンによって吸収される光を、潜在的なまたは成長中の動脈斑の部位に侵襲的に照射する必要なしに投与される。語句「緑色ポルフィリンによって吸収される光の照射の非存在下で」は、このような意図的な照射が実施されないことを意味すると意図される。この語句は、言うまでもなく、周辺光への患部組織の、不注意な、偶然の、または通常の曝露を除外しない。下記の実施例は、例示のためであり、本発明を限定することを意図されない。実施例１：用量変化高脂肪食で飼育したウサギにおける大動脈脂肪斑の発達に対する、リポソーム BPD-MA骨格ポルフィリン(verteporfin)の効果を評価するために、本研究を実施した。20匹の試験動物を選択し、そして４群に分けた。本研究を通して、全動物を、７％のコーン油および1.5％のコレステロールを含有する再ペレット化したウサギ用固形飼料からなる食餌で維持した。このうち３群は、高脂肪食の開始後２週目および６週目に、0.5、1.0、または2.0mg/kgのBPD-MAのいずれかを投与した。第４の群の動物は、全くBPD-MAを投与されず、したがってこれをコントロール群として供した。すべての試験動物を、７週目に剖検し、そしてそれらの大動脈を摘出し、そして認定された獣医学病理学者による肉眼検査および顕微鏡検査用に固定した。標準的ヘマトキシリンおよびエオシン染色技術を用いて、ホルマリン固定切片について組織病理学を実施した。各試験群中５匹の個々の動物からのデータを、その群の値を得るために平均した。肉眼評価で、長さ約15cmのウサギ大動脈全体を、斑の重篤度および範囲について検査した。結果は、下記の表１に要約される。表１群薬物用量(mg/kg) 重篤度¹ 患部組織の範囲²(cm) 患部組織の％１０ 2.2 7.0 46.7 ２ 0.5 1.8 2.5 16.7 ３ 1.0 1.3 4.8 32.0 ４ 2.0 1.2 0.9 6.1¹ 重篤度：０＝斑なし１＝小さな線状斑（３mm以下）２＝動脈の円周の１／２未満を含む斑の融合領域３＝動脈の円周の１／２より多くを含む斑の融合領域² 範囲：斑によって冒された大動脈の直線での全長(cm)。いくつかの別々の領域が含まれる場合、その患部の長さを加算して全体値を得た。大動脈分岐由来のウサギ大動脈の約１cmの切片を、顕微鏡検査のために採取した。大動脈のこの特定の部分は、全体の斑発達を最も良好に代表すると一般的に考えられるため、それを選択した。この結果は、下記の表２に要約される。表２群薬物用量(mg/kg) 斑の重篤度¹ 大動脈斑を含む切片数１０ 1.0 4/5 ２ 0.5 0.8 3/5 ３ 1.0 0.2 1/5 ４ 2.0 ０ 0/5¹ 重篤度：０＝正常な大動脈１＝大動脈切片の30％未満が含まれる１つ以上の亜内皮脂肪斑２＝大動脈切片の30〜60％が冒された亜内皮脂肪斑３＝大動脈切片の60％が含まれる亜内皮脂肪斑斑の重篤度および斑に冒された組織の範囲は、共に、BPD-MAの用量を増加させるにつれて減少するようである。これらの効果は、肉眼でも顕微鏡でも観測され得た。両方の場合で、最も高い効果は、2.0mg/kgの緑色ポルフィリンを投与された動物で見られた。実施例２：用量数の変化本研究で、２群の試験動物（１群当たりn=6）に、上記の実施例１に記載の高脂肪食の開始後２週目、またはこの食餌の開始後２、４、および６週目のいずれかに、２mg/kgのBPD-MAを投与した。３番目の群は、コントロール群として供し、したがってBPD-MAを投与されなかった。すべての動物を８週目に剖検し、そして上記で実施例１に記載のようにウサギ大動脈を摘出し、そして固定した。肉眼検査を、長さ約13.0〜17.5cmの範囲におよぶ大動脈について実施した。その結果は、下記の表３に提示される。表３食餌の開始からの患部組織の患部組織群薬物用量薬物投与の時間(週) 重篤度² 範囲² の％１００ 2.2 5.0 30.6 ２ 2.0 ２ 1.7 2.5 17.8 ３ 2.0 2,4,6 1.2 0.9 5.9¹ および²：表１を参照のことウサギ大動脈の切片はまた、顕微鏡用に、大動脈分岐から約１、２、および３ cmで採取した。この１cmの切片は、実施例１で採取した切片と同程度であると考えられた。その結果は、下記の表４に要約される。表４食餌の開始大動脈斑を薬物用量からの薬物投与斑の重篤度¹ 含む切片数群 (mg/kg) の時間(週) （切片１,２,３cm）（切片１,２,３）１００ 1.3，1.7，2.2 4/6，5/6，5/6 ２ 2.0 ２ 0.8，1.0，2.0 4/6，4/6，5/5 ３ 2.0 2,4,6 0.7，1.3，2.0 2/6，5/6，5/6 は、表２を参照のこと。肉眼検査と顕微鏡検査の両方の結果は、この研究の終わりの６週間前に、BPD- MAの単回投与後の大動脈斑の重篤度および範囲が減少したことを示した。しかし、２週間間隔での薬物の３回の繰り返し投与後、この減少はさらにより顕著なようであった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者レビー，ジュリアカナダ国ブイ６ジェイ４ゼット３ブリティッシュコロンビア，バンクーバー，ペニーファーシングレーン 1490 ナンバー601 (72)発明者マーガロン，フィリップマリアクロテイルカナダ国ブイ６ピー３エックス４ブリティッシュコロンビア，バンクーバー，フレムリンストリート 8685 ナンバー６

Claims

【特許請求の範囲】１．動脈斑の発達を防止または阻害する方法であって、該方法は、以下の工程：ａ．該発達を防止または阻害するために有効な量の緑色ポルフィリン化合物を、１以上の用量で被験体に投与する工程；およびｂ．該阻害が、該緑色ポルフィリンによって吸収される光の意図的な照射の非存在下で起こることを可能にする工程を包含する、方法。２．前記投与が１〜５用量を投与することによって実施される、請求項１に記載の方法。３．前記投与が１用量を投与することによって実施される、請求項２に記載の方法。４．前記投与が３用量を投与することによって実施される、請求項２に記載の方法。５．前記有効量が各用量において0.5mg/kgより多い、請求項１に記載の方法。６．前記有効量が各用量において0.5〜5.0mg/kgである、請求項５に記載の方法。７．前記有効量が各用量において0.5〜2.0mg/kgである、請求項５に記載の方法。８．前記緑色ポルフィリンがリポソーム処方物中で投与される、請求項１に記載の方法。９．前記緑色ポルフィリンが以下からなる群から選択され、ここでＲ¹、Ｒ²、Ｒ³ 、およびＲ⁴は非干渉性置換基である、請求項１に記載の方法：１０．Ｒ¹およびＲ²が独立してカルボメトキシまたはカルボエトキシである、請求項９に記載の方法。１１．各Ｒ³が−−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、またはそれらの塩、アミド、エステル、もしくはアシルヒドラゾンである、請求項９に記載の方法。１２．前記ポルフィリンが、式３または４を有する、請求項９に記載の方法。１３．前記緑色ポルフィリンが、BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA、およびBPD-MBからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。１４．前記緑色ポルフィリンがBPD-MAである、請求項１３に記載の方法。１５．光の意図的な照射の非存在下で起こる前記処置が、周辺光に曝露される条件下で実施される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。１６．動脈斑の発達を防止または阻害するための医薬品の製造のための組成物の使用であって、該組成物は、動脈斑の発達を防止または阻害するための処置が必要な被験体に投与する場合に、緑色ポルフィリンによって吸収される光の意図的な照射の非存在下でさえ、動脈斑の発達を防止または阻害するために有効な該緑色ポルフィリン化合物を含有する、使用。１７．前記医薬品が、前記被験体の体重１kgあたり0.5mgより多い単位投薬量の前記緑色ポルフィリン化合物を含有する、請求項１６に記載の使用。１８．前記単位投薬量が、前記被験体の体重１kgあたり0.5〜5.0mgである、請求項１７に記載の使用。１９．前記単位投薬量が、前記被験体の体重１kgあたり0.5〜2.0mgである、請求項１７に記載の使用。２０．前記組成物がリポソーム処方物である、請求項１６に記載の使用。２１．前記緑色ポルフィリンが以下からなる群から選択され、ここでＲ¹、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴は非干渉性置換基である、請求項１６に記載の使用：２２．Ｒ¹およびＲ²が独立してカルボメトキシまたはカルボエトキシである、請求項２１に記載の使用。２３．各Ｒ³が−−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、またはそれらの塩、アミド、エステル、もしくはアシルヒドラゾンである、請求項２１に記載の使用。２４．緑色ポルフィリンが式３または４を有する、請求項２１に記載の使用。２５．前記緑色ポルフィリンが、BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA、およびBPD-MBからなる群から選択される、請求項２４に記載の使用。２６．前記緑色ポルフィリンがBPD-MAである、請求項２５に記載の使用。２７．前記医薬品が薬学的に受容可能な賦形剤を含有する、請求項１６〜２６のいずれか１項に記載の使用。２８．前記組成物が、周辺光に曝露される条件下で前記被験体に投与される場合、動脈斑の発達を防止または阻害するために有効である、請求項１６〜２７のいずれか１項に記載の使用。２９．動脈斑の発達を防止または阻害する方法であって、該方法が、請求項１６〜２８のいずれか１項に従って１用量または数用量で製造される医薬品を投与する工程を包含する、方法。３０．前記医薬品が１〜５用量で投与される、請求項２９に記載の方法。３１．前記医薬品が１用量で投与される、請求項３０に記載の方法。３２．前記医薬品が３用量で投与される、請求項３０に記載の方法。３３．前記投与が、周辺光に曝露される条件下で実施される、請求項２８〜３２のいずれか１項に記載の方法。