【発明の詳細な説明】
抗−ウイルス性化合物群
本発明はヒト医薬分野、特にウイルス感染の処置におけるものである。さらに
具体的には、本発明はライノウイルス、エンテロウイルスおよびフラビウイルス
感染の処置に関する。
ウイルス性上部呼吸器疾患、一般かぜの発病率は非常に高い。来国だけで毎年
１０億件近く発病すると評価されている。ピコルナウイルスファミリーの一員で
あるライノウイルスはヒト一般かぜの主要な原因である。１１０株以上のライノ
ウイルスが同定されているため、実用的なライノウイルスワクチンの開発は不可
能であり、化学療法がより望ましいアプローチであると思われる。ピコルナウイ
ルスファミリーの他のメンバーの１つはエンテロウイルスであり、これは約８０
のヒト病原体を含む。これらのエンテロウイルスの多くはかぜ様徴候を引き起こ
し；他のものはポリオ、結膜炎、無菌性髄膜炎および心筋炎のようなより深刻な
疾患を引き起こし得る。
ライノウイルス感染に関連する疾患は鼻水および鼻詰まりによって明らかにな
る。さらに、これは中耳炎に関係し、気管支炎を発病させやすくし、副鼻腔炎を
悪化させ、喘息アルトクリス（altoclis）の急激化に関係する。多くの人はこの
疾患を些細な害であると考えるが、他の点において健康な個体で頻繁に発生し、
従業者の欠勤および医師訪問によって結果として経済的に重要となることから、
広く研究の対象とされている。
インビトロでの化学化合物のウイルス増殖抑制能は、ウイルスプラーク抑制試
験または細胞変性作用試験（ＣＰＥ）を用いて容易に示すことができる。
Siminoff，Applied Microbiology，9(1)，66(1961)参照。ライノウイルスのよう
なピコルナウイルスを阻害するたくさんの化学化合物が同定されているが、多く
は１）限定された活性スペクトル、２）望ましくない副作用または３）動物また
はヒトの感染または疾患を妨げる能力がないことにより許容されない。
Textbook of Human Virology，edited by Robert B．Belshe，chapter 16,”Rhi
noviruses,”Roland A．Levandowski，391-405(1985)参照。したがって、ライノ
ウイルス阻害剤に付随する認識された治療能力および今までに費やされた研究努
力にもかかわらず、利用可能な治療薬は未だ現れていない。例えば、抗ウイルス
性ベンゾイミダゾール化合物が米国特許番号４，００８，２４３、４，０１８，
７９０、４，１１８，５７３、４，１１８，７４２、４，１７４，４５４および
４，４９２，７０８に開示されている。
概して、上記特許に開示されている化合物はライノウイルス感染の処置に用い
るのに望ましい薬理学的プロファイルを有していない。特にこれらの化合物は満
足のいく経口生物学的利用能、またはその比較的低い経口生物学的利用能を補っ
て、幅広い利用を可能にする程に高い阻害活性を有していない。さらに、ライノ
ウイイルス感染の処置に用いる化合物は毒物学的観点からみてとても安全である
べきことは当分野に広く許容されている。
したがって、本発明の主たる目的は、ピコルナウイルス、例えばライノウイル
ス、エンテロウイルス、例えばポリオウイルス、コクサッキーＡおよびＢ群ウイ
ルスまたはエコーウイルスの増殖を阻害し、望ましい薬理学的プロファイルを有
する新規なベンゾイミダゾール化合物を提供することである。
本発明は式Ｉ：
［式中：
ａは０、１、２または３であり；
Ｒはそれぞれ独立して、水素、ハロ、シアノ、アミノ、ハロ（Ｃ1−Ｃ6）アル
キル、ジ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルアミノ、アジド、Ｃ1−Ｃ6アルキル、カルバ
モイル、カルバモイルオキシ、カルバモイルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1
−Ｃ4アルキルチオ、Ｃ1−Ｃ4アルキルスルフィニル、Ｃ1−Ｃ4アルキルスルホ
ニル、ピロリジノ、ピペリジノまたはモルホリノであり；
Ｒ0は水素、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキルまたはＣ1−Ｃ4アルコキシであり；
Ｒ1はハロ、シアノ、ヒドロキシ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、メ
チルチオ、メチルスルフィニルまたはメチルスルホニルであり；
Ｒ2は水素、アミノまたは−ＮＨＣ(Ｏ)（Ｃ1−Ｃ6アルキル）であり；
Ｒ3はジメチルアミノ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、置換Ｃ3
−Ｃ7シクロアルキル、ハロ（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、フェニル、置換フェニル、
フリル、チエニル、チアゾリル、チアゾリジニル、ピロリジノ、ピペリジノ、モ
ルホリノまたは式：
で示される基であり；
Ｒ4およびＲ5は独立して水素またはＣ1−Ｃ4アルキルである］
で示される化合物または製薬的に許容されるその塩を提供する。
本発明はまた、本発明の化合物または製薬的に許容されるその塩を、製薬的に
許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて含む医薬製剤を提供する。
本発明はまた、ピコルナウイルスの阻害方法であって、それを必要としている
宿主に有効量の式Ｉの化合物または製薬的に許容されるその塩［式中、ａ、Ｒ、
Ｒ0、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は上記定義のとおりである］を投与すること
を特徴とする方法を提供する。
本発明はまた、フラビウイルスの阻害方法であって、それを必要としている宿
主に有効量の式Ｉの化合物または製薬的に許容されるその塩［式中、ａ、Ｒ、Ｒ0
、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は上記定義のとおりである］を投与することを
特徴とする方法を提供する。
本明細書中に記載する温度はすべて摂氏の℃である。本明細書中に用いる量単
位は、容量単位である液体を除いてすべて重量単位である。
本明細書中に用いる用語「Ｃ1−Ｃ10アルキル」は１〜１０個の炭素原子を有
する直鎖状または分岐鎖状アルキル鎖を表す。代表的なＣ1−Ｃ10アルキルには
、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチ
ル、ｔ−ブチル、ペンチル、neo−ペンチル、ヘキシル、２−メチルヘキシル、
ヘプチルなどが含まれる。用語「Ｃ1−Ｃ10アルキル」はその定義範囲内に用語
「Ｃ1−Ｃ6アルキル」および「Ｃ1−Ｃ4アルキル」を含む。
「ハロ」はクロロ、フルオロ、ブロモまたはヨードを表す。
「ハロ（Ｃ1−Ｃ6）アルキル」は１〜６個の炭素原子をそれに結合した1,２ま
たは３個のハロゲン原子とともに有する直鎖状または分岐鎖状アルキル鎖を表す
。代表的なハロ（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基にはクロロメチル、２−ブロモエチル
、１−クロロイソプロピル、３−フルオロプロピル、３−ブロモブチル、３−ク
ロロイソプロピル、３−フルオロプロピル、３−ブロモブチル、３−クロロイソ
ブチル、ヨード−ｔ−ブチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、２，２
−クロロ−ヨードエチル、２，３−ジブロモプロピルなどが含まれる。
「Ｃ1−Ｃ4アルキルチオ」は硫黄原子に結合した１〜４個の炭素原子を有する
直鎖状または分岐鎖状アルキル鎖を表す。代表的なＣ1−Ｃ4アルキルチオ基には
メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオなどが
含まれる。
「Ｃ1−Ｃ6アルコキシ」は酸素原子に結合した１〜６個の炭素原子を有する直
鎖状または分岐鎖状アルキル鎖を表す。代表的なＣ1−Ｃ6アルコキシ基にはメト
キシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシなどが含まれる。用語
「Ｃ1−Ｃ6アルキル」はその定義範囲内に用語「Ｃ1−Ｃ4アルキル」を含む。
「ジ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルアミノ」は一般アミノ基に結合した１〜４個の炭素
原子を有する２つの直鎖状または分岐鎖状アルキル鎖を表す。代表的なジ（Ｃ1
−Ｃ4）アルキルアミノ基にはジメチルアミノ、エチルメチルアミノ、メチルプ
ロピルアミノ、エチルイソプロピルアミノ、ブチルメチルアミノ、sec−ブチ
ルエチルアミノなどが含まれる。
「Ｃ1−Ｃ4アルキルスルフィニル」はスルフィニル部分に結合した１〜４個の
炭素原子を有する直鎖状または分岐鎖状アルキル鎖を表す。代表的なＣ1−Ｃ4ア
ルキルスルフィニル基にはメチルスルフィニル、エチルスルフィニル、プロピル
−スルフィニル、イソプロピルスルフィニル、ブチルスルフィニルなどが含まれ
る。
「Ｃ1−Ｃ4アルキルスルホニル」はスルホニル部分に結合した１〜４個の炭素
原子を有する直鎖状または分岐鎖状アルキル鎖を表す。代表的なＣ1−Ｃ4アルキ
ルスルホニル基にはメチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピル−スルホニ
ル、イソプロピルスルホニル、ブチルスルホニルなどが含まれる。
「置換フェニル」は以下から選択される１〜３個の置換分で置換されているフ
ニル環を表す：ハロ、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、アミノ
またはハロ（Ｃ1−Ｃ4）アルキル。
「置換Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル」は以下から選択される１〜３個の置換分で置
換されているシクロアルキル環を表す：ハロ、シアノ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1
−Ｃ4アルコキシ、アミノまたはハロ（Ｃ1−Ｃ4）アルキル。
特許請求している化合物はシスまたはトランス配座のいずれでも存在し得る。
本出願では、シスはカルボキサミド部分がベンゾイミダゾール環に対してシスで
ある化合物を表し、トランスはカルボキサミド部分がベンゾイミダゾール環に対
してトランスである化合物を表すこととする。特許請求している化合物の範囲に
は両方の異性体が含まれる。
上記のように、本発明は式Ｉで定義される化合物の製薬的に許容される塩を含
む。本発明の化合物は十分な酸性基、十分な塩基性基または両方の官能基を有す
ることができ、したがってたくさんの無機塩基、および無機および有機酸と反応
し、製薬的に許容される塩を形成する。
本明細書中に用いる用語「製薬的に許容される塩」とは、生物に対し実質的に
無毒な上記式の化合物の塩を表す。代表的な製薬的に許容される塩には本発明の
化合物を鉱酸または有機酸または無機塩基と反応させて製造される塩が含まれる
。
そのような塩は酸付加塩および塩基付加塩として知られる。
一般に酸付加塩の形成に用いられる酸は無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨ
ウ化水素酸、硫酸、リン酸など、および有機酸、例えばp−トルエンスルホニッ
ク、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、蓚酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン
酸、炭酸、琥珀酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などである。
上記製薬的に許容される塩の例は硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、
重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロ
リン酸塩、クロライド、ブロミド、ヨーダイド、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカ
ン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘ
プタン酸塩、プロピオル酸塩、蓚酸塩、マロン酸塩、琥珀酸塩、スベリン酸、セ
バシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオエート、ヘキシ
ン−１，６−ジオエート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、
ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩
、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン
酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコー
ル酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、プロパンスルホ
ン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マン
デル酸塩などである。好ましい製薬的に許容される酸付加塩は無機酸、例えば塩
酸および硫酸と形成される塩、および有機酸、例えばマレイン酸およびメタンス
ルホン酸と形成される塩である。
塩基付加塩には、無機塩基、例えばアンモニアまたはアルカリ金属もしくはア
ルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩などから生じる塩が含まれる。し
たがって、本発明の塩の製造に有用な塩基には、水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム
、重炭酸カリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウムなどが含まれる。カリウ
ムおよびナトリウム塩形態は特に好ましい。
塩が全体として製薬的に許容され、対イオンが全体としての塩に対し望ましく
ない性質を与えない限り、本発明の塩部分を形成する個々の対イオンは重要では
ないと認識すべきである。
本発明の好ましい化合物は化合物：［式中：
ａは０、１または２であり；
Ｒはそれぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ
またはジ（Ｃ1−Ｃ4）アルキルアミノであり；
Ｒ0は水素であり；
Ｒ2はアミノであり；
Ｒ3はジメチルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、ハロ（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、フェ
ニル、置換フェニル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、置換Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、
チエニル、チアゾリジニル、ピロリジノ、ピペリジノまたはモルホリノであり；
Ｒ4は水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ5は水素、メチルまたはエチルである］
または製薬的に許容されるその塩である。
これらの好ましい化合物のうち、より好ましいのは式Ｉ［式中：
ａは０または１であり；
Ｒはそれぞれ独立して、水素、フルオロ、メチル、エチル、メトキシ、エトキ
シ、ジメチルアミノであり；
Ｒ3はＣ1−Ｃ4アルキル、フェニル、置換フェニル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル
または置換Ｃ3−Ｃ7シクロアルキルである］
で示される化合物または製薬的に許容されるその塩である。
これらの化合物のうち、最も好ましいのは式：で示される化合物または製薬的に許容されるその塩である。
式Ｉの化合物は、適当な置換アセトアミドを塩基と反応させて対応するアニオ
ンを得、次いでこれを式ＩＡの適当な置換ケトン体と反応させてカルビノール中
間体を得ることによって製造することができる。この反応は通常、ケトン反応物
に対して過剰の塩基およびアセトアミド反応物を用いて、有機溶媒中、約−９０
℃〜室温で１〜１２時間行う。このアセトアミドは反応に用いる前に適当な保護
基で保護するのが好ましい。代表的な塩基には水素化ナトリウム、リチウムジ
イソプロピルアミド（ＬＤＡ）およびｎ−ブチルリチウムが含まれる。好ましい
塩基はｎ−ブチルリチウムである。用いる溶媒が進行中の反応に対して不活性で
あり、反応物が所望の反応を行うのに十分に可溶である限り、溶媒の選択は重要
ではない。この反応に用いるのに適当な溶媒はテトラヒドロフランであり、一方
アセトアミド反応物を溶媒として用いることもできる。カルビノール中間体は一
般に、反応を−７８℃で開始し、徐々に室温にまであたためる場合、約１〜１８
時間で製造される。反応はＨＰＬＣによってモニターでき、反応が実質的に完了
した時点で酸を加えてクエンチする。代表的な酸には塩酸、臭化水素酸、ギ酸な
どが含まれる。好ましい酸は濃塩酸である。得られたカルビノール中間体は前も
って単離または精製せずに脱水するのが好ましい。
具体的には、カルビノール中間体は約室温〜混合物の還流温度で３０分〜１２
時間酸と反応させ、所望の式Ｉの化合物を得る。代表的な酸には塩酸、臭化水素
酸、ギ酸、酢酸および酸を組み合わせたものが含まれる。好ましい酸の組み合わ
せは濃塩酸を含むギ酸である。所望の化合物は一般に、反応を混合物の還流温度
の少し下の温度で行い、約３０分〜７時間で製造する。反応は例えば、ＨＰＬＣ
によってモニターして、確実に完了させるのが好ましい。
式Ｉの化合物は好ましくは単離し、得られたシス／トランス異性体を当分野に
既知の手法を用いて分離する。例えばシスおよびトランス型の単離化合物はカラ
ムクロマトグラフィー、例えば逆相ＨＰＬＣを用いて分離できる。化合物は適当
な割合のアセトニトリルおよび水、またはメタノールおよび水を用いてカラムか
ら溶出させることができる。シス型化合物はｈυ照射に露出することによってシ
ス／トランス混合物に変換でき、上記精製工程により回収できる。
式ＩＡのケトン中間体は当分野の技術文献に詳述の手法にしたがって製造でき
る。例えば、ケトン中間体は以下の反応式Ｉにしたがって製造できる。反応式Ｉ ［式中：
Ｘはシアノまたは−ＣＯＯＲ’（ここにＲ’はＣ1-Ｃ4アルキルである)であり
；
Ｘ’はハロであり；
ａ、Ｒ、Ｒ0、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は上記定義のとおりである］
上記反応式Ｉは反応１−４を行うことによって完了する。反応が完了した後、
所望ならば、当分野に既知の手法によって中間体化合物を単離できる。例えば、
化合物を結晶化し、次いでろ過によって集めることができ、あるいは反応溶媒を
抽出、蒸発またはデカンテーションによって取り除くことができる。中間体化合
物は所望ならば、反応式の次の工程を行う前に結晶化、またはシリカゲルもしく
はアルミナのような固形支持体のクロマトグラフィーのような一般的技術によっ
てさらに精製することができる。
反応Ｉ．１はまず適当な置換ハロ−ニトロアニリンおよび適当な置換フェニル
アセトニトリルまたはベンゾエートを有機溶媒中、約−１０℃〜約４０℃の温度
で１〜２４時間塩基に暴露し、ケトン前駆体を得ることによって完了する。この
反応は通常、等モル濃度比の反応物を２当量の塩基の存在下に用いて行う。代表
的な塩基には水素化ナトリウム、カリウムｔ−ブトキシド、リチウムジイソプロ
ピルアミド（ＬＤＡ）が含まれる。好ましい塩基はカリウムｔ−ブトキシドであ
る。この反応に用いるのに適当な溶媒の例には、ジメチルホルムアミド、ジメチ
ルアセトアミドなどが含まれる。用いる溶媒が進行中の反応に対して不活性であ
り、反応物が所望の反応を行うのに十分に可溶である限り、溶媒の選択は重要で
はない。ケトン前駆体は一般に、反応を０℃で開始し、室温にまであたためなが
ら、約１〜１５時間で製造する。このケトン前駆体は前もって単離または精製せ
ずに同反応混合物中で酸化するのが好ましい
具体的には、ケトン前駆体は約０℃〜約３０℃の温度で３０分〜１５時問酸化
剤と反応させ、対応するケトン化合物を得る。代表的な酸化剤には過酸化水素、
酸素および空気が含まれる。酸素および空気は通常、気泡として反応混合物に通
す。好ましい酸化剤は過酸化水素であり、好ましくは３０％溶液とする。このケ
トン体は通常、反応を０℃〜室温の間で行うと、約３０〜５時間で製造される。
この反応は例えばＴＬＣでモニターし、確実に完了させるのが好ましい。
反応Ｉ．２では、ケトン体のニトロ置換分を当分野に既知の手法にしたがって
還元し、対応するジアミノベンゾフェノン化合物を得る。例えば、ニトロ置換分
を、触媒を用いて水素化すること、例えば反応Ｉ．１から単離したケトン体をエ
タノールまたはテトラヒドロフラン中の水素ガスおよび触媒と混合することによ
って還元することができる。好ましい触媒はパラジウム−炭素またはラネーニッ
ケルである。用いる溶媒が進行中の反応に対して不活性であり、ニトロ反応物が
所望の反応を行うのに十分に可溶である限り、溶媒の選択は重要ではない。水素
ガスは通常、６０ｐｓｉまでの圧力下、好ましくは約３０ｐｓｉ下で用いる。こ
の反応は通常、約０℃〜約４０℃の範囲の温度で行った場合、約１〜２４時間後
に実質的に完了する。この反応は約２０℃〜約３０℃の範囲の温度で、約２〜５
時間行うのが好ましい。
反応Ｉ．３では、アルコール性溶媒、例えばイソプロパノール中、ベンゾフェ
ノン化合物を臭化シアンと反応させることによって、反応Ｉ．３から単離した化
合物をニトリル中間体を経て環化する。通常、反応は約０℃〜約３０℃の温度で
行う。ベンゾフェノン化合物を完全に溶解し、得られた溶液を臭化シアンと混合
する。臭化シアンは通常、溶液形態（例えばアセトニトリル中３−７Ｍ）で加え
る。この反応は通常、反応混合物を室温で攪拌した場合、１〜１８時間後に完了
する。しかし、ある例ではニトリル中間体は反応混合物から析出するであろう。
所望のケトン体を形成するため、この沈殿を単離し、次いでアルコール性溶媒、
例えばイソプロパノール中で１〜４時間還流し、式Ｉの所望のケトン化合物を得
る。
式：
［式中：
Ｘ’、Ｒ0およびＲ3は上記定義のとおりである］
で示される化合物は、式：
［式中：
Ｙはクロロまたはフルオロであり、ただしＸ’がフルオロである場合、Ｙはク
ロロではない］
で示される化合物のクロロまたはフルオロ置換分を有機溶媒中、式：ＮＨ2Ｒ3（
式中、Ｒ3は上記定義のとおりである）で示される一級アミンと置きかえること
によって製造される。この反応は酸スカベンジャー、例えば炭酸カリウムまたは
大過剰の一級アミンの存在下に行うこともできる。代表的な溶媒にはテトラヒ
ドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどが含まれる。こ
の反応は一般的に、約２０℃〜約８０℃の温度で行うと、１〜２０時間で完了す
る。次いで、得られたアルキル化ハロニトロアニリンを上記反応式Ｉに記載のよ
うに反応させる。
Ｒ2が−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ1−Ｃ6アルキル）である式Ｉの化合物は、当分野に
既知の手法にしたがってケトン中間体、またはＲ2がアミノである式Ｉの対応す
る化合物をアシル化することによって製造できる。例えば、アミン化合物は、好
ましくは三級アミンのような酸スカベンジャー、好ましくはトリエチルアミンの
存在下に適当なアシルハライド、イソシアネートまたはクロロホルメートでアシ
ル化できる。好ましいアシル化試薬は無水酢酸である。この反応は通常、約−２
０℃〜約２５℃の温度で行う。この反応用の代表的な溶媒にはエーテルおよび塩
素化炭化水素、好ましくはジエチルエーテル、クロロホルムまたはメチレンクロ
ライドが含まれる。アミン反応物は一般に、アシル化反応物と等モル濃度比で、
好ましくは等モル濃度量の酸スカベンジャー、例えば三級アミンの存在下に用い
る。この反応用の好ましい酸スカベンジャーはＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）
である。
本発明の化合物の合成に出発物質として用いる化合物は当分野に既知であり、
市販されていなくても当分野に一般に用いる標準的手法によって容易に合成でき
る。
上記工程を実行する際、二次反応が起こるの防ぐため、化学保護基を反応物に
導入することが望ましいことがあることは当業者の理解するところであろう。反
応物に存在することもあるアミン、アルコール、アルキルアミンまたはカルボキ
シ基のいずれも、残りの分子が所望の様式で反応する能力に対し有害に作用しな
い標準的アミノ−、アルコール−またはカルボキシ−保護基のいずれかを用いて
保護することができる。次いで種々の保護基は、当分野に既知の方法を用いて同
時または連続的に除去できる。
本発明の製薬的に許容される塩は通常、式Ｉの化合物を等モル濃度もしくは過
剰量の酸または塩基と反応させることによって形成させる。反応物は一般に、酸
付加塩に対しては、例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、メタノール
、エタノール、イソプロパノール、ベンゼンなどに、あるいは塩基付加塩に対し
ては水、アルコールまたは塩素化溶媒、例えばメチレンクロライドなどの相溶性
溶媒中で混合する。塩は通常、約１時間〜約１０日以内に溶液から析出し、ろ過
および他の慣用方法によって単離できる。
以下に製造例および実施例を挙げ、本発明の具体的態様をさらに例示する。し
かし、これらの実施例は例示のためだけのものであり、いかなる意味においても
本発明の範囲を限定するためのものではなく、そのように考えるべきではないこ
とが理解されるべきである。
以下の製造例および実施例では、用語融点、核磁気共鳴分析、電子衝撃質量分
析、電界脱離質量分析、高速原子衝撃質量分析、赤外分析、紫外分析、元素分析
、高性能液体クロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラフィーはそれぞれ「ｍ
.ｐ.」、「ＮＭＲ」、「ＥＩＭＳ」、「ＭＳ（ＦＤ）」、「ＭＳ（ＦＡＢ）」、
「ＩＲ」、「ＵＶ」、「Analysis」、「ＨＰＬＣ」および「ＴＬＣ」という略語
を用いる。ＭＳ（ＦＤ）データは、特に記載しない限り質量数として表す。さら
に、ＩＲ分析に対して表記した吸収最大値は興味深いもののみであり、観測され
たすべての最大値でない。
ＮＭＲ分析に関して、以下の略語を用いる：「ｓ」は一重項であり、「ｄ」は
二重項であり、「ｄｄ」は二重の二重項であり、「ｔ」は三重項であり、「ｑ」
は四重項であり、「ｍ」は多重項であり、「ｄｍ」は二重の多重項であり、「ｂ
ｒ．ｓ」、「ｂｒ．ｄ」、「ｂｒ．ｔ」および「ｂｒ．ｍ」はそれぞれブロード
な一重項、二重項、三重項および多重項である。「Ｊ」はヘルツ（Ｈｚ）のカッ
プリング定数を示す。特に記載がなければ、ＮＭＲデータは対象化合物の遊離塩
基を表す。
300MHz機器で得た。化学シフトはデルタ、δ値（テトラメチルシランからダウン
フィールドの百万当たりの部分）で表す。ＭＳ（ＦＤ）分析は炭素樹枝状結晶エ
ミッターを用いるVarion-MAT 731分光器で測定した。ＥＩＭＳ分析は
Consolidated Electrodynamics CorporationのCEC 21‐110装置で得た。ＩＲ分
析はPerkin-Elmer 281機器で得た。ＵＶ分析はCary 118機器で得た。ＴＬＣはE.
Merckシリカゲルプレートで行った。融点は補正していない。
実施例１
Ａ．２−イソプロピルアミノ−４−フルオロ−ニトロベンゼン
テトラヒドロフラン４００ｍＬ中の２，４−ジフルオロニトロベンゼン４３．
３５ｍＬ（４００mmol）および炭酸カリウム５５ｇ（約４００mmol）の冷（０℃
）混合物にイソプロピルアミン約３４．４ｍＬ（４００mmol）を加えた。この反
応混合物を室温にまであたため、６０時間反応させ、次いでろ過した。炭酸カリ
ウムを酢酸エチルで洗浄し、次いで有機層を減圧下で濃縮し、所望の化合物を結
晶させ、次いでこれをろ過によって単離し、少量のヘキサンで洗浄した。収量:
６６．３７ｇ、黄色結晶（８４％）。
Ｂ．３−イソプロピルアミノ−４−ニトロ−２’，３’-ジフルオロベンゾフェ ノン
ジメチルホルムアミド８０ｍＬ中の２，３−ジフルオロフェニルアセトニトリ
ル７．６５ｇ（５０mmol）および実施例１Ａの化合物９．９ｇ（５０mmol）の冷
（０℃）混合物にカリウムｔ−ブトキシド１１．２２ｇ（１００mmol）を加えた
。この反応混合物を室温にまであたため、約１時問反応させた。ＴＬＣで測定し
、反応が実質的に完了した時点で、混合物を０℃に冷却し、次いで過酸化水素３
０％溶液１５ｍＬを加えた。混合物を室温にまであたため、一晩攪拌し、次いで
１Ｎ塩酸１Ｌに注ぎ、オレンジ色固形物１６ｇを形成させ、これをさらに精製す
ることなく用いた。
Ｃ．３−イソプロピルアミノ−４−アミノ−２’，３’−ジフルオロベンゾフェ ノン
実施例１Ｂの化合物をテトラヒドロフラン２５０ｍＬ中、ラネーニッケル触媒
２．１ｇを用いて６０ｐｓｉの水素（気体）下に６時間水素化した。この反応混
合物をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、固形物１４ｇを得、これをさらに精製す
ることなく用いた。
D． イソプロピルアルコール１２５ｍＬ中の実施例１Ｃ１４ｇの冷（０℃）混合物
に臭化シアン１当量（５Ｍアセトニトリル溶液９．６ｍＬ）を加えた。得られた
混合物を室温にまであたため、２日間攪拌し、次いで減圧下で濃縮し、残留物を
得た。この残留物を酢酸エチルに溶解し、次いで超音波破砕し、結晶１３．０ｇ
を形成させた。
元素分析（Ｃ17Ｈ16Ｎ3ＯＢｒＦ2として）：
計算値： Ｃ，51.53； Ｈ，4.07； Ｎ，10.61； Ｂｒ，20.17；
実測値： Ｃ，51.64； Ｈ，4.17； Ｎ，10.51； Ｂｒ，20.41．
E．
酢酸エチル中の実施例１Ｄに１Ｎ水酸化ナトリウムを加えて所望の化合物を得
た。得られた層を分離し、有機層を減圧下で濃縮した。
収量：９．３４ｇ（６２％）。
元素分析（Ｃ17Ｈ15Ｎ3ＯＦ2として）：
計算値： Ｃ，64.76； Ｈ，4.80； Ｎ，13.33；
実測値： Ｃ，64.97； Ｈ，4.78； Ｎ，13.40.
F．
テトラヒドロフラン２００ｍＬ中のビス（トリメチルシリル）アセトアミド１
８．８ｍＬ（７６mmol）の冷（−７８℃）溶液にヘキサン中の２．５Ｍ ｎ−ブ
チルリチウム３０．４ｍＬ（７６mmol）をゆっくりと加え、続いて実施例１Ｅ３
．０ｇ（９．５mmol）を加えた。この反応混合物を−７８℃で８時間攪拌し、次
いで室温にまであたためた。ＨＰＬＣで反応の実質的完了が示された時点で、濃
塩酸６．４ｍＬ（７６mmol）を加えて反応をクエンチし、次いで減圧下で濃縮し
、油状物を得、次いでこれを１％濃塩酸を含むギ酸に溶解した。この混合物を９
５℃で４時間反応させた。ＨＰＬＣで反応の実質的完了が示された時点で、混合
物を減圧下で濃縮し、油状物を得た。この油状物を逆相ＨＰＬＣ（水中のアセト
ニトリルで溶出）を用いて分離し、副標題化合物のシスおよびトランス異性体を
得た。
シス
特性化していない
トランス
元素分析（Ｃ19Ｈ21Ｎ4Ｏ2Ｆ2Ｃｌとして）：
計算値： Ｃ，55.55； Ｈ，5.15； Ｎ，13.64；
実測値： Ｃ，54.21； Ｈ，4.93； Ｎ，12.98.
実施例２ Ｎ−メチル−Ｎ−トリメチルシリルアセトアミドを用い、実質的に実施例１Ｆ
に記載のように本化合物を製造した。
シス
特性化していない
トランス
元素分析（Ｃ20Ｈ23Ｎ4Ｏ2Ｆ2Ｃｌとして）：
計算値： Ｃ，56.54； Ｈ，5.46； Ｎ，13.19；
実測値： Ｃ，56.32； Ｈ，5.10； Ｎ，13.06. 実施例３ 以下のように製造した溶液にｎ−ブチルリチウム（１５．８５mmol）をゆっく
りと加えたことを除いては、実質的に実施例１Ｅにしたがって本化合物を製造し
た。テトラヒドロフラン中のビス（トリメチルシリル）アミド（１当量）および
Ｎ−エチルアセトアミド（１当量）の冷（−７８℃）溶液を１時間攪拌し、次い
でクロロトリメチルシラン（１当量）を加えた。得られた溶液を１５分間攪拌し
、次いでゆっくりと室温にまであたためた。
注記:溶液はｎ−ブチルリチウムの添加前に再び−７８℃に冷却した。
シス
特性化していない
トランス
元素分析（Ｃ21Ｈ22Ｎ4ＯＦ2・ＨＣｌ−Ｈ2Ｏとして）：
計算値： Ｃ，57.47； Ｈ，5.74； Ｎ，12.76；
実測値： Ｃ，57.25； Ｈ，5.65； Ｎ，12.74. 実質的に実施例１Ａ−Ｆに記載のように以下の化合物を製造した。
実施例４ シス
ＭＳ（ＦＤ）：３３８（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ19Ｈ19Ｎ4ＯＦ・ＨＣｌとして）：
計算値： Ｃ，60.88； Ｈ，5.38； Ｎ，14.95；
実測値： Ｃ，60.62； Ｈ，5.66； Ｎ，14.78.
トランス
ＭＳ（ＦＤ）：３３８（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ19Ｈ19Ｎ4ＯＦ・ＨＣｌ・１．２Ｈ2Ｏとして）：
計算値： Ｃ，57.56； Ｈ，5.70； Ｎ，14.13；
実測値： Ｃ，57.26； Ｈ，5.28； Ｎ，13.75.
実施例５ シス
元素分析（Ｃ23Ｈ18Ｎ4Ｏ2Ｆ2として）：
計算値： Ｃ，65.71； Ｈ，4.32； Ｎ，13.33；
実測値： Ｃ，65.44； Ｈ，4.30； Ｎ，13.05.
トランス
元素分析（Ｃ23Ｈ18Ｎ4Ｏ2Ｆ2として）：
計算値： Ｃ，65.71； Ｈ，4.32； Ｎ，13.33;
実測値： Ｃ，63.22； Ｈ，4.63； Ｎ，12.63.
実施例６ シス
特性化していない
トランス
ＭＳ（ＦＤ）：３８２（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ21Ｈ20Ｎ4ＯＦ2・ＨＣｌ・１．２Ｈ2Ｏとして）：
計算値： Ｃ，57.26； Ｈ，5. ； Ｎ，12.72；
実測値： Ｃ，57.21； Ｈ，5.08； Ｎ，12.47.
実施例７ シス
ＭＳ（ＦＤ）：３６４（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ21Ｈ21Ｎ4ＯＦ・１．２ＨＣｌとして）：
計算値： Ｃ，61.79； Ｈ，5.48； Ｎ，13.73；
実測値： Ｃ，61.68； Ｈ，5.60； Ｎ，13.56.
トランス
ＭＳ（ＦＤ）：３６４（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ21Ｈ21Ｎ4ＯＦ・ＨＣｌとして）：
計算値： Ｃ，62.92； Ｈ，5.53； Ｎ，13.98；
実測値： Ｃ，62.78； Ｈ，5.55； Ｎ，13.68.
実質的に上記実施例２に記載のように以下の化合物を製造した。
実施例８ シス
ＭＳ（ＦＤ）：３７８（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ22Ｈ23Ｎ4ＯＦ・ＨＣｌ・０．５Ｈ2Ｏとして）：
計算値： Ｃ，62.33； Ｈ，5.94； Ｎ，13.22；
実測値： Ｃ，62.33； Ｈ，5.74； Ｎ，12.98.
トランス
ＭＳ（ＦＤ）：３７８（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ22Ｈ23Ｎ4ＯＦ・ＨＣｌ・０．２Ｈ2Ｏとして）：
計算値： Ｃ，63.14； Ｈ，5.88； Ｎ，13.39；
実測値： Ｃ，63.00； Ｈ，5.92； Ｎ，13.33.
実施例９ シス
ＭＳ（ＦＤ）：３５０（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ20Ｈ19Ｎ4ＯＦ・１．５ＨＣｌ・１．５Ｈ2Ｏとして）：
計算値： Ｃ，55.59； Ｈ，5.48； Ｎ，12.97;
実測値： Ｃ，55.92； Ｈ，5.24； Ｎ，12.80.
トランス
ＭＳ（ＦＤ）：３５０（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ20Ｈ19Ｎ4ＯＦ・１．６ＨＣｌとして）：
計算値： Ｃ，58.77； Ｈ，5.08； Ｎ，13.71；
実測値： Ｃ，58.89； Ｈ，5.42； Ｎ，12.55.
実施例１０ シス
特性化していない
トランス
ＭＳ（ＦＤ）：３６６（Ｍ+）．
元素分析（Ｃ21Ｈ23Ｎ4ＯＦ・１．４ＨＣｌとして）：
計算値： Ｃ，60.42； Ｈ，5.89； Ｎ，13.42；
実測値： Ｃ，60.28； Ｈ，6.15； Ｎ，13.24.
実質的に実施例１Ａ−Ｆに詳述のように以下の化合物を製造した。実施例１１ 実施例１２ 本発明の化合物はウイルス複製複合体（ウイルス性および細胞性タンパク質の
膜結合複合体）の構造および／または機能を妨げることによりプラス鎖ウイルス
ＲＮＡの複製を阻害することがわかっている。非常に低いレベルの薬物耐性を示
す突然変異ライノウイルスおよびエンテロウイルスが単離されている。これらの
突然変異体は「３Ａ」として知られるウイルス遺伝子が発現するタンパク質に１
つのアミノ酸置換を有している。それゆえ、本発明の化合物は３Ａ機能を阻害す
ることによってライノウイルスおよびエンテロウイルスを阻害する。この３Ａ遺
伝子は複製複合体のタンパク質を細胞内膜に結合させる足場タンパク質として働
く疎水性タンパク質をコードしている。
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）およびウシ下痢性ウイルス（ＢＶＤＶ）のような
フラビウイルスの複製戦略は上記ライノウイルスおよびエンテロウイルスのもの
と類似している。特に両ファミリーのウイルスは細胞質複合体においてマイナス
鎖ＲＮＡ中間体を介して複製する１本鎖のメッセンジャー−センスＲＮＡを有す
る。さらに両ファミリーのウイルスはそのゲノムをポリタンパク質に翻訳し、次
いでこれは切断される。さらに、両ウイルスの複製複合体は細胞内膜に堅く結合
する。最後に、両ファミリーのウイルスは、ウイルス複製に必要な５’および３
’側非翻訳領域が存在するなど、類似のゲノム構造を有する。この細胞内膜結合
に関与する２つのＨＣＶタンパク質：ＮＳ２およびＮＳ４が存在する。ＮＳ２ま
たはＮＳ４のどちらかはピコルナウイルス３Ａタンパク質に類似すると推定され
る。
したがって、本発明のもう１つの態様は、フラビウイルス感染の処置または予
防方法であって、それを必要としている宿主に有効量の式Ｉの化合物または製薬
的に許容されるその塩を投与することを特徴とする方法である。Ｃ型肝炎を予防
するのが好ましい。
上記のように、本発明の化合物は抗ウイルス剤として有用である。これらは種
々のエンテロウイルスおよびライノウイルスに対し阻害活性を示している。本発
明の態様は、ピコルナウイルス感染の処置または予防方法であって、それを必要
としている宿主に有効量の式Ｉの化合物または製薬的に許容されるその塩を投与
することを特徴とする方法である。
本明細書中に用いる用語「有効量」は、ウイルスの複製を阻害することができ
る式Ｉの化合物の量を意味する。本発明の方法に包含されるピコルナウイルスの
阻害には、治療または予防処置のどちらも適当に含まれる。治療または予防効果
を得るために本発明にしたがって投与する化合物の具体的な投与量はもちろん、
例えば投与する化合物、投与経路、処置される症状および処置される個体を含む
、そのケースを取り巻く特定の環境によって決められる。典型的な１日当たりの
投与量には約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／体重ｋｇの投与量レベルの本発
明の活性な化合物が含まれる。好ましい１日当たりの投与量は一般的に、約０．
０５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇであり、理想的には約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約
１０ｍｇ／ｋｇである。
本発明の化合物は経口、直腸内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内および鼻腔内を
含む種々の経路によつて投与することができる。本発明の化合物は投与前に製剤
化するのが好ましい。それゆえ、本発明のもう１つの態様は、有効量の式Ｉの化
合物または製薬的に許容されるその塩および製薬的に許容される担体、希釈剤ま
たは賦形剤を含む医薬製剤である。
上記製剤中の活性成分は製剤の重量の０．１％〜９９．９％を構成する。用語
「製薬的に許容される」は、担体、希釈剤または賦形剤が他の製剤成分と融和性
であり、その服用者に有害でないことを意味する。
本医薬製剤は、周知であり容易に入手可能な成分を用いて、既知の手法により
製造する。本発明の組成物を調製するには、通常、活性成分を担体と混合し、あ
るいは担体で希釈し、あるいはカプセル、サシエ、ペーパーまたはその他の容器
の形とすることができる担体中に包含させる。担体が希釈剤として働く場合、活
性成分のビヒクル、賦形剤または媒体として働く固形物、半固形物または液状物
とすることができる。したがって、この組成物は錠剤、ピル剤、粉末剤、トロー
チ剤、サシエ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤
、エアロゾル剤、（固形物として、あるいは液体媒体中）、例えば活性な化合物
を重量の１０％まで含む軟膏剤、ゼラチン軟および硬カプセル剤、坐剤、滅菌注
射溶液剤、滅菌パッケージ粉末剤などの剤型とすることができる。
以下の製剤例は単に例示的なものであり、いかなる意味においても本発明の範
囲を限定するためのものではない。用語「活性成分」は式Ｉで示される化合物ま
たは製薬的に許容されるその塩を意味する。
製剤例１
以下の成分を用いてゼラチン硬カプセル剤を製造する。
製剤例２
以下の成分を用いて錠剤を製造する。
これらの成分を混合し、圧縮して６６５ｍｇ重量の各錠剤を成型する。
製剤例３
以下の成分を含むエアロゾル溶液剤を製造する。
活性成分をエタノールと混合し、この混合物をプロペラント２２の一部に加え
、−３０℃に冷却し、充填装置に移す。次いで必要量をステンレス鋼の容器に移
し、残りのプロペラントで希釈する。次いでバルブ部分を容器に取り付ける。製剤例４
活性成分６０ｍｇを含む各錠剤を以下のように製造する。
活性成分、デンプンおよびセルロースをＮｏ．４５メッシュ米国ふるいに通し
、十分に混合する。ポリビニルピロリドンを含む水溶液を得られた粉末と混合し
、
次いでこの混合物をＮｏ．１４メッシュ米国ふるいに通す。このように製造した
顆粒を５０℃で乾燥し、Ｎｏ．１８メッシュ米国ふるいに通す。次いで、前もっ
てＮｏ．６０メッシュ米国ふるいに通しておいたカルボキシメチルデンプンナト
リウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを顆粒に加え、混合後、錠剤成
型装置で圧縮し、１５０ｍｇ重量の各錠剤を得た。
製剤例５
活性成分８０ｍｇを含む各カプセル剤を以下のように製造する。
活性成分、セルロース、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混合し、
Ｎｏ．４５メッシュ米国ふるいに通し、２００ｍｇ量をゼラチン硬カプセルに充
填する。製剤例６
活性成分２２５ｍｇを含む各坐剤を以下のように製造する。
活性成分をＮｏ．６０メッシュ米国ふるいに通し、前もって必要最少加熱で融
解させた飽和脂肪酸グリセリドに懸濁する。次いで、この混合物を名目２ｇ容量
の坐剤型に注ぎ、冷却する。
製剤例７
投与量５ｍＬ当たり活性成分５０ｍｇを含む各懸濁剤を以下のように製造する
。
活性成分をＮｏ．４５メッシュ米国ふるいに通し、カルボキシメチルセルロー
スナトリウムおよびシロップと混合し、滑らかなペーストを製造する。安息香酸
溶液、香料および着色料を水で希釈し、攪拌しながら加える。次いで十分量の水
を加え、必要量を製造する。
製剤例８
静脈内製剤を以下のように製造できる。
上記成分の溶液を通常、１分当たり１ｍＬの速度で患者に静脈内投与する。
式Ｉの化合物の特定ウイルス阻害能を示すために以下の実験を行った。
抗−ピコルナウイルスアッセイの試験方法
アフリカ緑ザル腎臓細胞（ＢＳＣ‐１）またはＨｅｌａ細胞（５−３）を２５
ｃｃFalconフラスコ中の５％不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ペニシリン（１
５０単位１ｍＬ）およびストレプトマイシン（１５０μｇ／ｍＬ）を含む培地１
９９中、３７℃で培養した。全面成長単層が形成された時点で、上清培養培地を
除去し、適当に希釈したウイルス（エコー、メンゴ、コクサッキー、ポリオまた
はライノウイルス）０．３ｍＬをそれぞれのフラスコに加えた。１時間室温で吸
着させた後、ウイルスを感染させた細胞シートを、１％イオン寒天(Ionagar)Ｎ
ｏ．２（１部）、およびＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含み、
薬物を１００、５０、２５、１２、６、３および０μｇ／ｍＬの濃度で含む２倍
強度の培地１９９（１部）からなる培地に重ねた。薬物を含まないフラスコは本
試験の対照標準として用いた。ビニルアセチレンベンゾイミダゾールのストック
溶液をジメチルスルホキシドで希釈し、１０4μｇ／ｍＬの濃度にした。次いで
、
このフラスコをポリオ、コクサッキー、エコーおよびメンゴウイルスに対して３
７℃で７２時間、ライノウイルスに対して３２℃で１２０時間インキュベートし
た。ウイルスプラークは細胞中のウイルスが感染および再生した領域に見られた
。１０％ホルマリンおよび２％酢酸ナトリウムの溶液をそれぞれのフラスコに加
え、ウイルスを不活性化し、細胞シートをフラスコ表面に固定した。ウイルスプ
ラークは、周りの細胞領域をクリスタルバイオレットで染色した後に、サイズに
関係なくカウントした。各薬物濃度においてプラークのカウントを対照標準のカ
ウントと比較した。試験化合物の活性はプラークの減少パーセントまたは阻害パ
ーセントで表した。一方、プラーク形成を５０パーセント阻害する薬物の濃度を
活性の尺度として用いることができる。５０パーセント阻害は記号ＩＣ５０で示
す。
インビトロＣＰＥ／ＸＴＴ抗−ＢＶＤＶアッセイ
ＭＤＢＫ細胞を９６ウェルミクロタイタープレートにエール（Ｅａｒｌ）の平
衡塩溶液（ＥＢＳＳ）、２％ウマ血清、ペニシリン（１００単位／ｍＬ）および
ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を含む最少必須培地の入ったウェル当
たり１０，０００細胞で分配した。プレートを３７℃のＣＯ2インキュベーター
で一晩培養した。次いで、ＭＤＢＫ細胞を〜０．０２ｍｏｉ（感染多重度）のウ
シウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ，ＡＴＣＣ ＶＲ−５３４）で感染させた
。このウイルスを細胞に１−２時間吸着させた後、連続希釈した薬物を含む培地
または培地のみをウェルに加えた。さらに３−４日間インキュベートした後（培
地のみのウェルに広がったｃｐｅがはっきりと認められた時点で）、以下に記載
のＸＴＴアッセイを行って試験薬物の抗−ウイルス性作用を評価した。
ＦＢＳを含まないあたたかい培地に対し、１ｍｇ／ｍＬのＸＴＴ［２，３−ビ
ス（メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム−５
−カルボキシアニリド、内部塩、ナトリウム塩］を新たに調製し、直ちに用いた
。ＸＴＴ溶液各５ｍＬに対し、リン酸緩衝塩溶液中の５ｍＭ ＰＭＳ（フェナジ
ンメトスルフェイト）２５μＬを加えた。次いで、新たに調製したＸＴＴ／ＰＭ
Ｓ混合物５０μＬを各ミクロタイターウェルに加えた。３７℃（ＣＯ2）で３−
４時間あるいは色の変化が顕著になるまでインキュベートした。４５０ｎｍでの
吸
光度／基準６５０ｎｍを分光器で読み取った。次いで、各用量作用曲線の直線部
分から、無薬物無ウイルス対照標準と比べて５０％の細胞毒性作用を引き起こす
のに必要な薬物の濃度（ＴＣ50）およびウイルス細胞変性作用（ｃｐｅ）の発生
を５０％阻害するのに必要な薬物の濃度（ＩＣ50）を決定した。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Anti-viral compounds
The present invention is in the field of human medicine, especially in the treatment of viral infections. further
Specifically, the present invention relates to rhinoviruses, enteroviruses and flaviviruses.
Related to the treatment of infection.
The incidence of viral upper respiratory disease, common cold, is very high. Every year just in Japan
It is estimated that nearly 1 billion cases will occur. A member of the picornavirus family
Certain rhinoviruses are a major cause of common cold in humans. More than 110 rhinos
Development of a practical rhinovirus vaccine is not possible because the virus has been identified
And chemotherapy seems to be a more desirable approach. Picornawi
One other member of the Lus family is the enterovirus, which
Human pathogens. Many of these enteroviruses cause cold-like symptoms
Others are more severe such as polio, conjunctivitis, aseptic meningitis and myocarditis
Can cause disease.
Diseases associated with rhinovirus infection are evident by runny nose and congestion
You. In addition, it is associated with otitis media, making bronchitis more likely to develop and sinusitis
Exacerbates and is associated with the rapidity of asthma altoclis. Many people use this
We consider the disease a minor harm, but it frequently occurs in otherwise healthy individuals,
Due to the financial consequences of employee absenteeism and doctor visits,
Widely studied.
The ability of chemical compounds to suppress virus growth in vitro was determined by the viral plaque suppression assay.
Or using a cytopathic effect test (CPE).
See Siminoff, Applied Microbiology, 9 (1), 66 (1961). Like rhinovirus
Numerous chemical compounds have been identified that inhibit various picornaviruses, but many
Are 1) limited activity spectrum, 2) undesired side effects or 3) animals or
Is not tolerated due to its inability to prevent human infection or disease.
Textbook of Human Virology, edited by Robert B. Belshe, chapter 16, ”Rhi
noviruses, "Roland A. Levandowski, 391-405 (1985).
Recognized therapeutic capabilities associated with viral inhibitors and research efforts to date
Despite the power, no available remedy has yet emerged. For example, antivirus
Benzoimidazole compounds are disclosed in U.S. Patent Nos. 4,008,243, 4,018,
790, 4,118,573, 4,118,742, 4,174,454 and
No. 4,492,708.
Generally, the compounds disclosed in the above patents are used to treat rhinovirus infections
Do not have the desired pharmacological profile to In particular, these compounds are
Compensate for good oral bioavailability or its relatively low oral bioavailability
Therefore, it does not have an inhibitory activity high enough to enable wide use. In addition, Rhino
Compounds used to treat viral infections are very safe from a toxicological standpoint
What is to be done is widely accepted in the art.
Accordingly, a primary object of the present invention is to provide a picornavirus, such as rhinovirus.
Virus, enteroviruses such as poliovirus, Coxsackie A and B
Inhibits the growth of virus or echovirus and has a desirable pharmacological profile.
To provide a novel benzimidazole compound.
The present invention provides compounds of formula I:
[In the formula:
a is 0, 1, 2, or 3;
R is each independently hydrogen, halo, cyano, amino, halo (C1-C6) Al
Kill, Di (C1-CFour) Alkylamino, azide, C1-C6Alkyl, carb
Moyl, carbamoyloxy, carbamoylamino, C1-C6Alkoxy, C1
-CFourAlkylthio, C1-CFourAlkylsulfinyl, C1-CFourAlkylsulfo
Nyl, pyrrolidino, piperidino or morpholino;
R0Is hydrogen, halo, C1-CFourAlkyl or C1-CFourAlkoxy;
R1Is halo, cyano, hydroxy, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy,
Tylthio, methylsulfinyl or methylsulfonyl;
RTwoIs hydrogen, amino or -NHC (O) (C1-C6Alkyl);
RThreeIs dimethylamino, C1-CTenAlkyl, CThree-C7Cycloalkyl, substituted CThree
-C7Cycloalkyl, halo (C1-C6) Alkyl, phenyl, substituted phenyl,
Furyl, thienyl, thiazolyl, thiazolidinyl, pyrrolidino, piperidino, molybdenum
Luholino or formula:
A group represented by;
RFourAnd RFiveIs independently hydrogen or C1-CFourAlkyl]
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
The present invention also provides a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
Pharmaceutical formulations are provided that comprise in combination with an acceptable carrier, diluent or excipient.
The present invention is also a method of inhibiting a Picornavirus, in need thereof
An effective amount of a compound of Formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof wherein a, R,
R0, R1, RTwo, RThree, RFourAnd RFiveIs as defined above]
A method is provided.
The present invention also relates to a method for inhibiting flavivirus, comprising the steps of
A predominantly effective amount of a compound of Formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein a, R, R0
, R1, RTwo, RThree, RFourAnd RFiveIs as defined above]
A method of characterizing is provided.
All temperatures described herein are in degrees Celsius. Quantity used in this specification
All places are by weight except for liquids, which are volume units.
As used herein, the term "C1-CTen"Alkyl" has from 1 to 10 carbon atoms.
Represents a linear or branched alkyl chain. Representative C1-CTenAlkyl
, Methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl
, T-butyl, pentyl, neo-pentyl, hexyl, 2-methylhexyl,
Heptyl and the like. The term "C1-CTen"Alkyl" is a term within its definition
"C1-C6Alkyl "and" C1-CFourAlkyl ".
"Halo" represents chloro, fluoro, bromo or iodo.
"Halo (C1-C6) Alkyl "is an alkyl group having from 1 to 6 carbon atoms attached to it.
Or a linear or branched alkyl chain having 3 halogen atoms
. Representative halo (C1-C6) -Alkyl group is chloromethyl, 2-bromoethyl
, 1-chloroisopropyl, 3-fluoropropyl, 3-bromobutyl, 3-
Loroisopropyl, 3-fluoropropyl, 3-bromobutyl, 3-chloroiso
Butyl, iodo-t-butyl, trichloromethyl, trifluoromethyl, 2,2
-Chloro-iodoethyl, 2,3-dibromopropyl and the like.
"C1-CFour“Alkylthio” has 1 to 4 carbon atoms attached to a sulfur atom
Represents a linear or branched alkyl chain. Representative C1-CFourAlkylthio groups include
Methylthio, ethylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, etc.
included.
"C1-C6“Alkoxy” is a straight chain having from 1 to 6 carbon atoms attached to an oxygen atom.
It represents a chain or branched alkyl chain. Representative C1-C6The alkoxy group is met
Xy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy and the like. the term
"C1-C6"Alkyl" includes within its definition the term "C1-CFourAlkyl ".
"J (C1-CFour) Alkylamino "is a 1-4 amino group bonded to a general amino group
Represents two linear or branched alkyl chains having atoms. Typical di (C1
-CFour) Alkylamino groups include dimethylamino, ethylmethylamino,
Ropylamino, ethylisopropylamino, butylmethylamino, sec-butyl
Ruethylamino and the like.
"C1-CFour“Alkylsulfinyl” is one to four alkyl groups attached to a sulfinyl moiety.
Represents a linear or branched alkyl chain having carbon atoms. Representative C1-CFourA
Methylsulfinyl, ethylsulfinyl, propyl
-Including sulfinyl, isopropylsulfinyl, butylsulfinyl, etc.
You.
"C1-CFour"Alkylsulfonyl" is a 1 to 4 carbon atom attached to a sulfonyl moiety
Represents a linear or branched alkyl chain having atoms. Representative C1-CFourArchi
Rusulfonyl groups include methylsulfonyl, ethylsulfonyl, propyl-sulfonyl
Isopropylsulfonyl, butylsulfonyl and the like.
“Substituted phenyl” is a phenyl substituted with one to three substituents selected from
Represents a nyl ring: halo, cyano, C1-CFourAlkyl, C1-CFourAlkoxy, amino
Or halo (C1-CFour) Alkyl.
"Replacement CThree-C7"Cycloalkyl" is substituted with 1 to 3 substituents selected from
Represents a substituted cycloalkyl ring: halo, cyano, C1-CFourAlkyl, C1
-CFourAlkoxy, amino or halo (C1-CFour) Alkyl.
The claimed compounds can exist in either the cis or trans conformation.
In the present application, cis is a compound in which the carboxamide moiety is cis to the benzimidazole ring.
Trans represents a compound in which the carboxamide moiety is linked to the benzimidazole ring.
Represents a compound that is trans. Within the scope of the claimed compound
Includes both isomers.
As noted above, the present invention includes pharmaceutically acceptable salts of the compounds defined by Formula I.
No. The compounds of the invention have sufficient acidic groups, sufficient basic groups or both functional groups
And therefore reacts with many inorganic bases and inorganic and organic acids
And form pharmaceutically acceptable salts.
As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt" refers to a substance that is substantially
Represents a non-toxic salt of a compound of the above formula. Representative pharmaceutically acceptable salts of the present invention
Includes salts produced by reacting compounds with mineral or organic acids or inorganic bases
.
Such salts are known as acid addition and base addition salts.
In general, the acids used to form acid addition salts are inorganic acids, such as hydrochloric acid, hydrobromic acid,
Hydrauric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like, and organic acids such as p-toluenesulfonate.
Methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, oxalic acid, p-bromophenylsulfone
Acid, carbonic acid, succinic acid, citric acid, benzoic acid, acetic acid and the like.
Examples of the pharmaceutically acceptable salts are sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite,
Bisulfite, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyro
Phosphate, chloride, bromide, iodide, acetate, propionate, deca
Phosphate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caproate,
Butanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suberic acid,
Basinate, fumarate, maleate, butyne-1,4-diate, hexyl
1,6-diate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate,
Dinitrobenzoate, hydroxybenzoate, methoxybenzoate, phthalate
, Sulfonate, xylene sulfonate, phenylacetate, phenylpropion
Acid salt, phenyl butyrate, citrate, lactate, γ-hydroxybutyrate, glyco
Citrate, tartrate, methanesulfonate, ethanesulfonate, propanesulfo
Naphthalene-1-sulfonate, naphthalene-2-sulfonate, man
And delates. Preferred pharmaceutically acceptable acid addition salts are inorganic acids, such as salts
Salts formed with acids and sulfuric acids, and organic acids such as maleic acid and methanes
It is a salt formed with sulfonic acid.
Base addition salts include inorganic bases such as ammonia or alkali metals or alcohols.
Salts derived from hydroxides, carbonates, bicarbonates and the like of the alkaline earth metals are included. I
Accordingly, bases useful for the production of the salts of the present invention include sodium hydroxide and potassium hydroxide.
, Ammonium hydroxide, potassium carbonate, sodium carbonate, sodium bicarbonate
, Potassium bicarbonate, calcium hydroxide, calcium carbonate and the like. Kariu
And sodium salt forms are particularly preferred.
The salt as a whole is pharmaceutically acceptable and the counterion is
Unless conferring properties, the individual counterions forming the salt moiety of the present invention are not critical.
It should be recognized that there is no.
Preferred compounds of the invention are compounds:[In the formula:
a is 0, 1 or 2;
R is each independently hydrogen, halo, C1-CFourAlkyl, C1-CFourAlkoxy
Or di (C1-CFour) Alkylamino;
R0Is hydrogen;
RTwoIs amino;
RThreeIs dimethylamino, C1-C6Alkyl, halo (C1-C6) Alkyl, Fe
Nil, substituted phenyl, CThree-C7Cycloalkyl, substituted CThree-C7Cycloalkyl,
Thienyl, thiazolidinyl, pyrrolidino, piperidino or morpholino;
RFourIs hydrogen, methyl or ethyl;
RFiveIs hydrogen, methyl or ethyl]
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Of these preferred compounds, more preferred are those of the formula I:
a is 0 or 1;
R is each independently hydrogen, fluoro, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy,
Dimethylamino;
RThreeIs C1-CFourAlkyl, phenyl, substituted phenyl, CThree-C7Cycloalkyl
Or substitution CThree-C7Cycloalkyl]
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Of these compounds, the most preferred is of the formula:Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Compounds of formula I are prepared by reacting a suitable substituted acetamide with a base to give the corresponding anion.
Which is then reacted with a suitable substituted ketone of formula IA to give carbinol
It can be produced by obtaining an interstitial body. This reaction is usually a ketone reactant
Using an excess of base and acetamide reactant relative to
Perform for 1 to 12 hours at C to room temperature. This acetamide must be protected before use in the reaction.
It is preferred to protect with a group. Typical bases include sodium hydride and lithium di.
Includes isopropylamide (LDA) and n-butyllithium. preferable
The base is n-butyl lithium. The solvent used is inert to the ongoing reaction
And the choice of solvent is important as long as the reactants are sufficiently soluble to carry out the desired reaction
is not. A suitable solvent for use in this reaction is tetrahydrofuran, while
Acetamide reactants can also be used as solvents. One carbinol intermediate
In general, the reaction is started at -78 ° C and gradually warmed to room temperature, about 1-18
Produced in time. The reaction can be monitored by HPLC and the reaction is virtually complete
At this point, quench by adding acid. Typical acids include hydrochloric acid, hydrobromic acid and formic acid.
Etc. are included. The preferred acid is concentrated hydrochloric acid. The resulting carbinol intermediate was previously
It is preferable to dehydrate without isolation or purification.
Specifically, the carbinol intermediate is present at about room temperature to the reflux temperature of the mixture for 30 minutes to 12 hours.
Reaction with the acid for a time gives the desired compound of formula I. Typical acids are hydrochloric acid and hydrogen bromide
Acids, formic acid, acetic acid and combinations of acids are included. Preferred acid combinations
Seaweed is formic acid containing concentrated hydrochloric acid. The desired compound is generally reacted at the reflux temperature of the mixture.
And is produced in about 30 minutes to 7 hours. The reaction is, for example, HPLC
To ensure completion.
The compound of formula I is preferably isolated and the resulting cis / trans isomer is referred to in the art.
Separate using known techniques. For example, isolated compounds in cis and trans form
Separation can be achieved using column chromatography, for example, reverse phase HPLC. Compound is suitable
Column with a high proportion of acetonitrile and water or methanol and water
Can be eluted. The cis-type compound is exposed to hυ
And can be recovered by the above purification step.
The ketone intermediate of formula IA can be prepared according to procedures detailed in the technical literature.
You. For example, a ketone intermediate can be prepared according to Reaction Scheme I below.Reaction Formula I [In the formula:
X is cyano or -COOR '(where R' is C1-CFourAlkyl)
;
X 'is halo;
a, R, R0, R1, RTwoAnd RThreeIs as defined above]
Reaction Scheme I is completed by performing Reactions 1-4. After the reaction is completed,
If desired, the intermediate compound can be isolated by techniques known in the art. For example,
The compound can be crystallized and then collected by filtration, or
It can be removed by extraction, evaporation or decantation. Intermediate compound
The product may be crystallized or silica gel or silica gel if desired prior to performing the next step in the reaction scheme.
By common techniques such as chromatography on solid supports such as alumina.
For further purification.
Reaction I. 1 is firstly a suitable substituted halo-nitroaniline and a suitable substituted phenyl
Acetonitrile or benzoate in an organic solvent at a temperature of about -10C to about 40C
Exposure to base for 1 to 24 hours to complete by obtaining ketone precursor. this
The reaction is usually performed using equimolar ratios of the reactants in the presence of 2 equivalents of base. representative
Typical bases include sodium hydride, potassium t-butoxide, lithium diisopro
Pyramide (LDA). A preferred base is potassium t-butoxide.
You. Examples of suitable solvents for use in this reaction include dimethylformamide, dimethyl
Luaceamide and the like. The solvent used is inert to the ongoing reaction.
Solvent selection is important so long as the reactants are sufficiently soluble to carry out the desired reaction.
There is no. The ketone precursor generally starts the reaction at 0 ° C. and warms to room temperature.
From about 1 to 15 hours. This ketone precursor must be isolated or purified beforehand.
Preferably oxidized in the same reaction mixture without
Specifically, the ketone precursor is oxidized at a temperature of about 0 ° C. to about 30 ° C. for 30 minutes to 15 hours.
React with the agent to obtain the corresponding ketone compound. Typical oxidants are hydrogen peroxide,
Contains oxygen and air. Oxygen and air usually pass through the reaction mixture as bubbles.
You. A preferred oxidizing agent is hydrogen peroxide, preferably in a 30% solution. This
The tonnage is usually produced in about 30 to 5 hours when the reaction is carried out at 0 ° C. to room temperature.
The reaction is preferably monitored, for example by TLC, to ensure completion.
Reaction I. In 2, the nitro-substituted moiety of the ketone body is determined according to a method known in the art.
Reduction yields the corresponding diaminobenzophenone compound. For example, nitro-substituted
Is hydrogenated using a catalyst, for example, reaction I. The ketone body isolated from
By mixing with hydrogen gas in tanol or tetrahydrofuran and a catalyst.
Can be reduced. Preferred catalysts are palladium on carbon or Raney Ni.
Kel. The solvent used is inert to the ongoing reaction and the nitro reactant
The choice of solvent is not critical so long as it is sufficiently soluble to carry out the desired reaction. hydrogen
The gas is typically used at pressures up to 60 psi, preferably at about 30 psi. This
Is usually carried out at a temperature in the range of about 0 ° C. to about 40 ° C., after about 1 to 24 hours.
Substantially complete. The reaction is carried out at a temperature in the range of about
It is preferable to carry out for a time.
Reaction I. In 3, the benzophene in an alcoholic solvent such as isopropanol
By reacting the non-compound with cyanogen bromide, the reaction I.I. Compound isolated from 3
The compound is cyclized via a nitrile intermediate. Usually, the reaction is carried out at a temperature of about 0 ° C to about 30 ° C.
Do. Completely dissolve the benzophenone compound and mix the resulting solution with cyanogen bromide
I do. Cyanogen bromide is usually in solution form (eg, 3-7 in acetonitrile).M)
You. The reaction is usually complete after 1-18 hours when the reaction mixture is stirred at room temperature
I do. However, in certain instances, the nitrile intermediate will precipitate from the reaction mixture.
This precipitate is isolated to form the desired ketone body, and then the alcoholic solvent,
Reflux for example in isopropanol for 1-4 hours to give the desired ketone compound of formula I
You.
formula:
[In the formula:
X ', R0And RThreeIs as defined above]
Has the formula:
[In the formula:
Y is chloro or fluoro, provided that when X 'is fluoro, Y is
Not Lolo]
In an organic solvent, a chloro- or fluoro-substituted compound represented by the formula:TwoRThree(
Where RThreeIs as defined above).
Manufactured by The reaction is carried out by an acid scavenger, such as potassium carbonate or
It can also be carried out in the presence of a large excess of primary amine. Tetrahi is a typical solvent
Drofuran, dimethylformamide, dimethylacetamide and the like are included. This
The reaction is generally carried out at a temperature of about 20 ° C. to about 80 ° C. and is completed in 1 to 20 hours.
You. The resulting alkylated halonitroaniline is then converted as described in Scheme I above.
To react.
RTwoIs -NHC (O) (C1-C6Alkyl) is a compound of formula I
A ketone intermediate, or R, according to known proceduresTwoCorresponding to formula I wherein
By acylating the compound. For example, amine compounds are preferred.
Acid scavengers, preferably tertiary amines, preferably triethylamine
In the presence, a suitable acyl halide, isocyanate or chloroformate
Can be A preferred acylating reagent is acetic anhydride. This reaction is usually carried out at about -2.
It is carried out at a temperature between 0 ° C and about 25 ° C. Typical solvents for this reaction are ethers and salts
Hydrogenated hydrocarbons, preferably diethyl ether, chloroform or methylene chloride
Ride included. The amine reactant is generally equimolar to the acylation reactant,
Preferably used in the presence of an equimolar amount of an acid scavenger, such as a tertiary amine.
You. A preferred acid scavenger for this reaction is N-methylmorpholine (NMM)
It is.
Compounds used as starting materials in the synthesis of compounds of the present invention are known in the art,
Even if not commercially available, it can be easily synthesized by standard techniques commonly used in the art.
You.
When performing the above steps, add a chemical protecting group to the reactants to prevent secondary reactions from taking place.
It will be appreciated by those skilled in the art that it may be desirable to introduce one. Anti
Amines, alcohols, alkylamines or carboxyls
None of the groups has a deleterious effect on the ability of the remaining molecules to react in the desired manner.
Using any of the standard amino-, alcohol- or carboxy-protecting groups
Can be protected. The various protecting groups can then be isolated using methods known in the art.
Can be removed at times or continuously.
The pharmaceutically acceptable salts of the present invention generally comprise a compound of formula I in equimolar or excess concentration.
It is formed by reacting with excess acid or base. The reactants are generally acid
For addition salts, for example, diethyl ether, tetrahydrofuran, methanol
To ethanol, isopropanol, benzene, etc. or to base addition salts
Compatible with water, alcohols or chlorinated solvents such as methylene chloride
Mix in solvent. Salt usually precipitates out of solution within about 1 hour to about 10 days and is filtered.
And by other conventional methods.
Production Examples and Examples are given below to further illustrate specific embodiments of the present invention. I
However, these examples are for illustrative purposes only and in any sense
It is not intended to limit the scope of the present invention and should not be considered as such.
And should be understood.
In the following production examples and examples, the terms melting point, nuclear magnetic resonance analysis, electron impact mass spectrometry
Analysis, field desorption mass spectrometry, fast atom bombardment mass spectrometry, infrared analysis, ultraviolet analysis, elemental analysis
, High performance liquid chromatography and thin layer chromatography
.p. "," NMR "," EIMS "," MS (FD) "," MS (FAB) ",
Abbreviations for "IR", "UV", "Analysis", "HPLC" and "TLC"
Is used. MS (FD) data are expressed as mass numbers unless otherwise noted. Further
In addition, the absorption maximums indicated for the IR analysis are only interesting and
Not all of the maximums.
For NMR analysis, the following abbreviations are used: "s" is singlet and "d" is
A doublet, "dd" is a doublet, "t" is a triplet, "q"
Is a quartet, “m” is a multiplet, “dm” is a doublet, “b”
r. s ”,“ br.d ”,“ br.t ”and“ br.m ”are broad
Singlet, doublet, triplet and multiplet. "J" stands for Hertz (Hz)
Shows the pulling constant. Unless otherwise specified, NMR data is based on the free salt of the target compound.
Represents a group.
Obtained on a 300 MHz instrument. Chemical shift is delta, δ value (down from tetramethylsilane
Parts per million of field). MS (FD) analysis showed that carbon dendrites
Measured on a Varion-MAT 731 spectrometer using a mitter. EIMS analysis
Obtained on a CEC 21-110 instrument from Consolidated Electrodynamics Corporation. IR minutes
Analysis was obtained on a Perkin-Elmer 281 instrument. UV analysis was obtained on a Cary 118 instrument. TLC is E.
Performed on Merck silica gel plates. Melting points are not corrected.
Example 1
A.2-isopropylamino-4-fluoro-nitrobenzene
2,4-difluoronitrobenzene in 400 mL of tetrahydrofuran 43.
35 mL (400 mmol) and 55 g (about 400 mmol) of potassium carbonate were cooled (0 ° C).
) To the mixture was added about 34.4 mL (400 mmol) of isopropylamine. This anti
The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and was allowed to react for 60 hours, then filtered. Potassium carbonate
The organic layer is concentrated under reduced pressure to form the desired compound.
The crystals were then isolated by filtration and washed with a small amount of hexane. yield:
66.37 g, yellow crystals (84%).
B.3-isopropylamino-4-nitro-2 ', 3'-difluorobenzofe Non
2,3-difluorophenylacetonitrile in 80 mL of dimethylformamide
7.65 g (50 mmol) of the compound and 9.9 g (50 mmol) of the compound of Example 1A were cooled.
(0 ° C.) 11.22 g (100 mmol) of potassium t-butoxide was added to the mixture.
. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and was allowed to react for about 1 hour. Measured by TLC
When the reaction is substantially complete, the mixture is cooled to 0.degree.
15 mL of a 0% solution was added. The mixture was allowed to warm to room temperature and was stirred overnight, then
Pour into 1 L of 1N hydrochloric acid to form 16 g of an orange solid which is further purified
Used without.
C.3-isopropylamino-4-amino-2 ', 3'-difluorobenzofe Non
Compound of Example 1B in 250 mL of tetrahydrofuran in Raney nickel catalyst
Hydrogenation under 2.1 psi of hydrogen (gas) at 60 psi for 6 hours. This reaction mixture
The mixture was filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure to give 14 g of a solid, which was further purified
Used without.
D. Cold (0 ° C.) mixture of 14 g of Example 1C in 125 mL of isopropyl alcohol
To the mixture was added 1 equivalent of cyanogen bromide (9.6 mL of a 5 M acetonitrile solution). Got
The mixture was allowed to warm to room temperature, stirred for 2 days, and then concentrated under reduced pressure to remove the residue.
Obtained. The residue was dissolved in ethyl acetate and then sonicated to yield 13.0 g of crystals.
Was formed.
Elemental analysis (C17H16NThreeOBrFTwoAs):
Calculated values: C, 51.53; H, 4.07; N, 10.61; Br, 20.17;
Found: C, 51.64; H, 4.17; N, 10.51; Br, 20.41.
E.
Addition of 1N sodium hydroxide to Example 1D in ethyl acetate to give the desired compound
Was. The obtained layer was separated, and the organic layer was concentrated under reduced pressure.
Yield: 9.34 g (62%).
Elemental analysis (C17H15NThreeOFTwoAs):
Calculated: C, 64.76; H, 4.80; N, 13.33;
Found: C, 64.97; H, 4.78; N, 13.40.
F.
Bis (trimethylsilyl) acetamide 1 in 200 mL of tetrahydrofuran
8.8 mL (76 mmol) of a cold (−78 ° C.) solution of 2.5 M n-butyl in hexane
30.4 mL (76 mmol) of chilled lithium were slowly added, followed by Example 1E3
. 0 g (9.5 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at -78 ° C for 8 hours.
Warm up to room temperature. When HPLC indicates substantial completion of the reaction,
The reaction is quenched by the addition of 6.4 mL (76 mmol) of hydrochloric acid and then concentrated under reduced pressure.
An oil was obtained which was then dissolved in formic acid containing 1% concentrated hydrochloric acid. 9
The reaction was performed at 5 ° C. for 4 hours. When HPLC indicates that the reaction is substantially complete, mix
The residue was concentrated under reduced pressure to obtain an oil. This oil was purified by reverse phase HPLC (acetate in water).
Eluting with nitrile) to separate the cis and trans isomers of the subtitle compound.
Obtained.
Cis
Not characterized
Trance
Elemental analysis (C19Htwenty oneNFourOTwoFTwoAs Cl):
Calculated: C, 55.55; H, 5.15; N, 13.64;
Found: C, 54.21; H, 4.93; N, 12.98.
Example 2 Example 1F using N-methyl-N-trimethylsilylacetamide
This compound was prepared as described in
Cis
Not characterized
Trance
Elemental analysis (C20Htwenty threeNFourOTwoFTwoAs Cl):
Calculated: C, 56.54; H, 5.46; N, 13.19;
Found: C, 56.32; H, 5.10; N, 13.06. Example 3 Slowly add n-butyllithium (15.85 mmol) to the solution prepared as follows
This compound was prepared essentially according to Example 1E, except for the following.
Was. Bis (trimethylsilyl) amide (1 equivalent) in tetrahydrofuran and
A cold (−78 ° C.) solution of N-ethylacetamide (1 equivalent) was stirred for 1 hour, then
Then, chlorotrimethylsilane (1 equivalent) was added. The resulting solution is stirred for 15 minutes
, Then slowly warmed up to room temperature.
Note: The solution was cooled again to -78 C before the addition of n-butyllithium.
Cis
Not characterized
Trance
Elemental analysis (Ctwenty oneHtwenty twoNFourOFTwo・ HCl-HTwoO):
Calculated: C, 57.47; H, 5.74; N, 12.76;
Found: C, 57.25; H, 5.65; N, 12.74. The following compounds were prepared substantially as described in Examples 1A-F.
Example 4 Cis
MS (FD): 338 (M+).
Elemental analysis (C19H19NFourOF · HCl):
Calculated: C, 60.88; H, 5.38; N, 14.95;
Found: C, 60.62; H, 5.66; N, 14.78.
Trance
MS (FD): 338 (M+).
Elemental analysis (C19H19NFourOF ・ HCl ・ 1.2HTwoO):
Calculated: C, 57.56; H, 5.70; N, 14.13;
Found: C, 57.26; H, 5.28; N, 13.75.
Example 5 Cis
Elemental analysis (Ctwenty threeH18NFourOTwoFTwoAs):
Calculated: C, 65.71; H, 4.32; N, 13.33;
Found: C, 65.44; H, 4.30; N, 13.05.
Trance
Elemental analysis (Ctwenty threeH18NFourOTwoFTwoAs):
Calculated: C, 65.71; H, 4.32; N, 13.33;
Found: C, 63.22; H, 4.63; N, 12.63.
Example 6 Cis
Not characterized
Trance
MS (FD): 382 (M+).
Elemental analysis (Ctwenty oneH20NFourOFTwo・ HCl ・ 1.2HTwoO):
Calculated: C, 57.26; H, 5 .; N, 12.72;
Found: C, 57.21; H, 5.08; N, 12.47.
Example 7 Cis
MS (FD): 364 (M+).
Elemental analysis (Ctwenty oneHtwenty oneNFourOF · 1.2HCl):
Calculated: C, 61.79; H, 5.48; N, 13.73;
Found: C, 61.68; H, 5.60; N, 13.56.
Trance
MS (FD): 364 (M+).
Elemental analysis (Ctwenty oneHtwenty oneNFourOF · HCl):
Calculated: C, 62.92; H, 5.53; N, 13.98;
Found: C, 62.78; H, 5.55; N, 13.68.
The following compounds were prepared substantially as described in Example 2 above.
Example 8 Cis
MS (FD): 378 (M+).
Elemental analysis (Ctwenty twoHtwenty threeNFourOF ・ HCl ・ 0.5HTwoO):
Calculated: C, 62.33; H, 5.94; N, 13.22;
Found: C, 62.33; H, 5.74; N, 12.98.
Trance
MS (FD): 378 (M+).
Elemental analysis (Ctwenty twoHtwenty threeNFourOF ・ HCl ・ 0.2HTwoO):
Calculated: C, 63.14; H, 5.88; N, 13.39;
Found: C, 63.00; H, 5.92; N, 13.33.
Example 9 Cis
MS (FD): 350 (M+).
Elemental analysis (C20H19NFourOF ・ 1.5HCl ・ 1.5HTwoO):
Calculated: C, 55.59; H, 5.48; N, 12.97;
Found: C, 55.92; H, 5.24; N, 12.80.
Trance
MS (FD): 350 (M+).
Elemental analysis (C20H19NFourOF-1.6HCl):
Calculated: C, 58.77; H, 5.08; N, 13.71;
Found: C, 58.89; H, 5.42; N, 12.55.
Example 10 Cis
Not characterized
Trance
MS (FD): 366 (M+).
Elemental analysis (Ctwenty oneHtwenty threeNFourOF · 1.4 HCl):
Calculated: C, 60.42; H, 5.89; N, 13.42;
Found: C, 60.28; H, 6.15; N, 13.24.
The following compounds were prepared substantially as detailed in Examples 1A-F.Example 11 Example 12 The compounds of the present invention may be used in viral replication complexes (for viral and cellular proteins).
Plus-strand virus by interfering with the structure and / or function of the membrane-bound complex
It has been shown to inhibit RNA replication. Shows very low level of drug resistance
Mutant rhinoviruses and enteroviruses have been isolated. these
The mutant contains 1 in the protein expressed by the viral gene known as "3A".
Has one amino acid substitution. Therefore, the compounds of the present invention inhibit 3A function
Inhibits rhinoviruses and enteroviruses. This 3A remains
The gene acts as a scaffold protein that binds the proteins of the replication complex to the inner cell membrane
It encodes a hydrophobic protein.
Such as hepatitis C virus (HCV) and bovine diarrhea virus (BVDV)
The flavivirus replication strategy is that of the above rhinoviruses and enteroviruses
Is similar to In particular, both families of viruses are negative in the cytoplasmic complex
Has a single-stranded messenger-sense RNA that replicates through a strand RNA intermediate
You. In addition, both families of viruses translate their genomes into polyproteins,
Now this is cut. In addition, the replication complex of both viruses binds tightly to the inner cell membrane
I do. Finally, both families of viruses have 5 'and 3's required for viral replication.
It has a similar genomic structure, such as the presence of an 'untranslated region. This intracellular membrane binding
There are two HCV proteins involved in NS: NS2 and NS4. NS2
Or NS4 is presumed to be similar to the Picornavirus 3A protein.
You.
Thus, another aspect of the invention is a method of treating or prophylactically treating a flavivirus infection.
A method of preventing a host in need thereof from an effective amount of a compound of formula I or a pharmaceutical.
And administering a salt thereof which is chemically acceptable. Prevent hepatitis C
Is preferred.
As noted above, the compounds of the present invention are useful as antiviral agents. These are seeds
It shows inhibitory activity against various enteroviruses and rhinoviruses. Departure
An embodiment of the present invention is a method of treating or preventing a Picornavirus infection, the method comprising the steps of:
An effective amount of a compound of Formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof to the host
It is a method characterized by doing.
As used herein, the term "effective amount" is capable of inhibiting viral replication.
Means the amount of the compound of formula I The picornavirus included in the method of the present invention
Inhibition suitably includes either therapeutic or prophylactic treatment. Therapeutic or prophylactic effect
The specific dosage of the compound administered according to the present invention to obtain
For example, including the compound to be administered, the route of administration, the condition being treated and the individual being treated.
Determined by the particular environment surrounding the case. Typical per day
Dosage levels range from about 0.01 mg / kg to about 50 mg / kg body weight.
Light active compounds are included. A preferred daily dose will generally be about 0.5.
05 mg / kg to about 20 mg / kg, ideally from about 0.1 mg / kg to about 20 mg / kg.
10 mg / kg.
The compounds of the present invention can be administered orally, rectally, transdermally, subcutaneously, intravenously, intramuscularly and intranasally.
It can be administered by a variety of routes, including. The compound of the present invention is formulated before administration.
It is preferred that the Therefore, another aspect of the present invention is to provide an effective amount of a compound of formula I
Compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or the like.
Or a pharmaceutical formulation containing an excipient.
The active ingredients in the above formulations constitute from 0.1% to 99.9% by weight of the formulation. the term
"Pharmaceutically acceptable" means that the carrier, diluent or excipient is compatible with the other formulation components
Means that it is not harmful to the user.
The pharmaceutical formulation is prepared by known procedures using well-known and readily available ingredients.
To manufacture. To prepare the compositions of the present invention, the active ingredients are usually mixed with a carrier and the
Or diluted with a carrier, or in a capsule, sachet, paper or other container
In the form of a carrier. If the carrier acts as a diluent,
, Semi-solid or liquid that acts as vehicle, excipient or vehicle for the active ingredient
It can be. Therefore, this composition can be used for tablets, pills, powders,
Pills, sachets, cachets, elixirs, suspensions, emulsions, solutions, syrups
Aerosols, as solids or in liquid media, eg active compounds
Ointments, soft and hard capsules, suppositories, sterile injection containing up to 10% by weight of
It can be in the form of a spray solution, a sterile package powder and the like.
The following formulation examples are merely illustrative, and in any way are intended to be within the scope of the present invention.
It is not intended to limit the enclosure. The term "active ingredient" refers to compounds of the formula I
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Formulation Example 1
A hard gelatin capsule is produced using the following ingredients.
Formulation Example 2
A tablet is prepared using the following ingredients.
These ingredients are mixed and compressed to form each tablet weighing 665 mg.
Formulation Example 3
An aerosol solution containing the following components is prepared.
The active ingredient is mixed with ethanol and this mixture is added to a portion of the propellant 22
, Cooled to -30 ° C and transferred to the filling device. Then transfer the required amount to a stainless steel container.
And dilute with the remaining propellant. The valve part is then attached to the container.Formulation Example 4
Each tablet containing 60 mg of the active ingredient is prepared as follows.
The active ingredients, starch and cellulose were no. Through a 45 mesh US sieve
Mix well. An aqueous solution containing polyvinylpyrrolidone is mixed with the obtained powder.
,
The mixture was then No. Pass through a 14 mesh US sieve. Manufactured in this way
The granules are dried at 50 ° C. Pass through an 18 mesh US sieve. Next,
No. Carboxymethyl starch natu passed through a 60 mesh US sieve
, Magnesium stearate and talc are added to the granules, mixed and
Each tablet was compressed by a mold device to obtain a weight of 150 mg.
Formulation Example 5
Each capsule containing 80 mg of the active ingredient is prepared as follows.
Mix active ingredients, cellulose, starch and magnesium stearate,
No. Fill a hard gelatin capsule with 200 mg amount through a 45 mesh US sieve.
Refill.Formulation Example 6
Each suppository containing 225 mg of the active ingredient is prepared as follows.
The active ingredient was no. Pass through a 60 mesh US sieve and melt in advance with minimum heating
Suspend in the dissociated saturated fatty acid glyceride. The mixture is then brought to a nominal 2 g capacity.
Pour into suppository molds and cool.
Formulation Example 7
Each suspension containing 50 mg of active ingredient per 5 mL of dosage is prepared as follows
.
The active ingredient was no. Pass through a 45 mesh US sieve with carboxymethyl cellulose
Mix with sucrose and syrup to produce a smooth paste. benzoic acid
The solution, flavor and color are diluted with water and added with stirring. Then enough water
To produce the required quantity.
Formulation Example 8
An intravenous formulation can be manufactured as follows.
Solutions of the above components are typically administered intravenously to a patient at a rate of 1 mL per minute.
The following experiments were performed to demonstrate the ability of the compounds of Formula I to inhibit certain viruses.
Test method for anti-picornavirus assay
25 African green monkey kidney cells (BSC-1) or Hela cells (5-3)
5% inactivated fetal bovine serum (FBS) in a ccFalcon flask, penicillin (1
Medium 1 containing 50 units 1 mL) and streptomycin (150 μg / mL)
The cells were cultured in 99 at 37 ° C. When the overgrowth monolayer is formed, remove the supernatant culture medium.
Removed and appropriately diluted virus (echo, mengo, coxsackie, polio or
0.3 mL of Rhinovirus) was added to each flask. 1 hour at room temperature
After attachment, the virus-infected cell sheet was washed with 1% ion agar (Ionagar) N
o. 2 (1 part), and FBS, penicillin and streptomycin,
2x with drug at concentrations of 100, 50, 25, 12, 6, 3, and 0 μg / mL
It was overlaid on a medium consisting of medium 199 (1 part) of strong medium. Drug-free flask
Used as a control for the test. Stock of vinyl acetylene benzimidazole
The solution was diluted with dimethyl sulfoxide andFourA concentration of μg / mL was obtained. Then
,
The flasks were tested against polio, coxsackie, echo and mengoviruses.
Incubate at 7 ° C for 72 hours and at 32 ° C for rhinovirus for 120 hours.
Was. Virus plaques were found in virus-infected and regenerated areas of cells
. A solution of 10% formalin and 2% sodium acetate was added to each flask.
Then, the virus was inactivated and the cell sheet was fixed on the flask surface. Virus
Lark stains the surrounding cell area with crystal violet and then reduces the size.
Counted regardless. At each drug concentration, count plaques as control
Und compared. The activity of the test compound is measured as percent plaque reduction or inhibition
Expressed in cents. On the other hand, the concentration of the drug that inhibits plaque formation by 50 percent
It can be used as a measure of activity. 50 percent inhibition is indicated by the symbol IC50
You.
In vitro CPE / XTT anti-BVDV assay
MDBK cells were plated in a 96-well microtiter plate in an Earl plate.
Balanced salt solution (EBSS), 2% horse serum, penicillin (100 units / mL) and
Well containing the minimum essential medium containing streptomycin (100 μg / mL)
Per 10,000 cells. Plate at 37 ° C COTwoIncubator
Overnight. Then, MDBK cells~C of 0.02 moi (multiplicity of infection)
Infected with the cyviral diarrhea virus (BVDV, ATCC VR-534)
. After adsorbing this virus to cells for 1-2 hours, serially diluted medium containing drug
Alternatively, only medium was added to the wells. After further incubation for 3-4 days (culture
(When cpe spreading to the wells only on the ground is clearly recognized), described below
Was performed to evaluate the anti-viral effect of the test drug.
For a warm medium without FBS, 1 mg / mL of XTT [2,3-bi
(Methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl) -2H-tetrazolium-5
-Carboxanilide, internal salt, sodium salt] was prepared fresh and used immediately
. For each 5 mL of the XTT solution, add 5 mM PMS (Phenazi
25 μL) were added. Then, the newly prepared XTT / PM
50 μL of the S mixture was added to each microtiter well. 37 ° C (COTwo) And 3-
Incubate for 4 hours or until color change is noticeable. At 450 nm
Sucking
Light intensity / reference 650 nm was read on a spectrometer. Then, the linear part of each dose-response curve
Causes 50% cytotoxic effect compared to drug-free virus-free control
Concentration of drug required for50) And the onset of viral cytopathic effect (cpe)
Concentration of drug required to inhibit 50% (IC50)It was determined.
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(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ
Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ
，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，
ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ
Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ
，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ
，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，
ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ
Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ
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ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ
Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ
，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，
ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ
(72)発明者 スピッツァー，ウェイン・エイ
アメリカ合衆国46254インディアナ州イン
ディアナポリス、モラー・ロード5501番
(72)発明者 テッブ，マーク・ジェイ
アメリカ合衆国46220インディアナ州イン
ディアナポリス、ノース・シャーマン・ド
ライブ6202番────────────────────────────────────────────────── ───
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(81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE,
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U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF)
, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE,
SN, TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, S
D, SZ, UG), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ
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LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, N
O, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG
, SI, SK, TJ, TM, TR, TT, UA, UG,
UZ, VN, YU
(72) Spitzer, Wayne A.
United States46254Indiana, Indiana
Dianapolis, Morar Road 5501
(72) Inventor Tebb, Mark Jay
United States 46220 Indiana Inn
Dianapolis, North Sherman de
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