JP2000511539A

JP2000511539A - Prevention of Graft-versus-Host Disease by T Cells Containing a Polynucleotide Encoding a Negative Selectable Marker

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Publication number: JP2000511539A
Application number: JP09542889A
Authority: JP
Inventors: ムンシ，ニキヒル; エニスト，デイビッド・エル; ジェイコブ，ウィリアム・エフ; チアン，ヤウェン・エル
Original assignee: ジェネティック・セラピー・インコーポレイテッド
Priority date: 1996-05-31
Filing date: 1997-05-28
Publication date: 2000-09-05
Also published as: NO985522D0; CA2255941A1; WO1997045142A1; EP0977595A4; AU3079697A; EP0977595A1; IL127211A0; AU719930B2; NZ333053A; NO985522L

Abstract

(57)【要約】再発性または慢性白血病の処置を受けている患者における対宿主性移植片病の予防方法。この方法は、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むように遺伝子操作が加えられた同種異系Ｔ細胞を宿主に投与することを含む。対宿主性移植片病の発生前に、相互作用剤または化学療法剤を宿主に投与し、遺伝子操作されたＴ細胞を殺すことにより、対宿主性移植片病の発生を予防する。上記方法はまた、疾病または疾患の処置であって、骨髄切除、次いでＴ細胞除去骨髄移植片の投与を含む処置と連係的に使用され得る。 (57) [Summary] A method of preventing graft versus host disease in a patient undergoing treatment for recurrent or chronic leukemia. The method involves administering to a host allogeneic T cells that have been genetically engineered to contain a polynucleotide encoding a negative selectable marker. Prior to the onset of graft-versus-host disease, an interacting or chemotherapeutic agent is administered to the host to kill the engineered T cells, thereby preventing the development of graft-versus-host disease. The above methods can also be used in conjunction with treatment of a disease or disorder that involves myelotomy followed by administration of a T cell depleted bone marrow graft.

Description

【発明の詳細な説明】負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むＴ細胞による対宿主性移植片病の予防この発明は、同種異系骨髄移植を受けた患者における、対宿主性移植片病またはＧＶＨＤの予防に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、同種異系Ｔ細胞除去骨髄移植に続いて起こる、再発性または慢性白血病に罹患している患者における対宿主性移植片病の予防であって、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むＴ細胞を上記患者に投与した後、対宿主性移植片病が発現する前に、相互作用剤またはプロドラッグを投与してＴ細胞、特に対宿主移植片反応性であるＴ細胞を殺すことによる予防法に関するものである。さらに、この発明は、疾病または疾患の処置であって、骨髄切除の後、同種異系骨髄移植片、例えばＴ細胞除去骨髄移植片を投与することを含む処置と連係的に対宿主性移植片病を予防する方法に関するものである。かかる方法では、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むＴ細胞を同じく患者に投与し、対宿主性移植片病が発現する前に、相互作用剤またはプロドラッグを患者に投与することによって、Ｔ細胞、特に対宿主移植片反応性であるＴ細胞を殺す。発明の背景血液悪性疾患または白血病、例えば多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）は、毎年何千人ものアメリカ人を襲う。例えば、毎年アメリカ人１０００００人中約４人が多発性骨髄腫にかかる。１９９３年には新たな症例が１２８００件あった。多発性骨髄腫は、全タイプの悪性疾患のうち１％を僅かに越え、全血液悪性疾患のうち１０％を僅かに越える割合を占めている。（バーロジーら、ＪＡＭＡ、第２６８巻、２９４６−２９５１頁（１９９２）、バーロジーら、「ブラッド」、第７３巻、８６５−８７９頁（１９８９））。診断での中央値年齢は６２歳であり、女性よりも男性に多く見られる。（ボーチンら、「トランスプランテーション」、第４２巻、２９頁（１９８６）。）患者らは、局所性または播種性疾患を呈し、血清Ｍ−蛋白値は通常３.０ｇ／ｄｌを越え、単純な血清免疫グロブリンの値は低い。多くの場合尿および骨格病変部にモノクローナル軽鎖が存在する。形質細胞標識指数、β２ミクログロブリンおよびＣ−反応性蛋白（ＣＲＰ）は、独立した予後因子であることが示された。同種異系骨髄移植は、選ばれた多発性骨髄腫患者に関する有効な処置様式として登場した（ボーチンら、１９８６）。２６８名の患者が異なる試行で同種異系移植を受けた。（バーロジーら、「セミナーズ・イン・へマトロジー」、第３２巻、３１−４４頁（１９９５））。患者の５０パーセントは１年以内に死亡し、約４０パーセントは完全応答を達成し、４年プロジェクト化事象−独立生存率は約３５パーセントである。一つには、ドナー移植片における免疫担当細胞の養子免疫伝達から誘導された抗腫瘍（すなわち、対骨髄腫性移植片またはＧＶＭ）効果があるため、同種異系骨髄移植は治療に有効であると考えられている。（ゲールら、「ザ・ランセット」、第２巻、２８頁（１９８４）、ボーチンら、「ネイチャー」、第６７巻、７２２頁（１９７９）。）対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）に伴う抗腫瘍効果は、Ｔ細胞および非Ｔ細胞エフェクター細胞集団の両方により仲介されると思われる。しかしながら、ＧＶＨＤは、その罹病率および死亡率故に依然として大きな問題である。同種異系骨髄移植による早期死亡率を減少させるため、Ｔ細胞除去が採られている。Ｔ細胞は、密度勾配遠心分離、大豆レクチン凝集およびＥ−ロゼット形成、遠心水簸、細胞傷害性薬剤またはコルチコステロイド類、抗Ｔ細胞モノクローナル抗体、およびＣＤ３４＋細胞の正の選択を含む数種の技術のいずれかにより同種移植片から除去され得る。（チャンプリン、「ジャーナル・オブ・ヘマドセラピー」、第２巻、２７−４２頁（１９９３）、ライスナーら、「ザ・ランセット」、第２巻、３２７−３３１頁（１９８１）、ワルドマンら、「ザ・ランセット」、第２巻、４８３−４８６頁（１９８４）、アンティンら、「ブラッド」、第７８巻、２１３９−２１４９頁（１９９１）、ゾイファーら、「ジャーナル・オブ・クリニカル・オンコロジー」、第１０巻、１１９１−１２００頁（１９９２）。）骨髄移植片からＴ細胞を除去するのに現在使用されている技術のうち、最も有効なのは、ライスナーらの技術（１９８１）である。この技術は、一貫して２.５−３.０ｌｏｇ₁₀のクローン化可能Ｔ細胞を除去するもので、まず大豆レクチンとの分別凝集を用いることにより、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単核球および顆粒球を含む成熟白血球を除去し、次いでＥ−ロゼット除去により残留Ｔ細胞を除去する。この技術は、白血病患者に与えられた２００を越えるＨＬＡ−適合関連移植片の集団を処置するのに使用されてきた。この集団では、段階II急性ＧＶＨＤの発生率は５％であり、段階IIIおよびIV急性ＧＶＤＨは観察されなかった。（オレイリーら、「ボーン・マロウ・トランスプランテーション」、第３巻、３− ６頁（１９８８）。）Ｔ細胞除去によりＧＶＤＨの発生は減少するが、Ｔ細胞除去はまた早期再発、不完全免疫再構成、移植失敗、およびエプスタイン-バールウイルス関連リンパ腫の危険度を増加させる。再発の危険は、慢性骨髄性白血病において最も正確に実証されている。（マーモントら、「ブラッド」、第７８巻、２１２０−２１３０（１９９１）、ゴールドマンら、「アナルス・オブ・インターナル・メディシン」、第１０８巻、８０６−８１４（１９８８）。）対白血病性移植片（ＧＶＬ）効果の直接的証拠は、追加的化学療法または放射能療法を一切行わず骨髄ドナーからの末梢血単核細胞注入によるＴ細胞除去骨髄移植後の再発性慢性骨髄性白血病患者において立証されており、白血病細胞の少なくとも６ｌｏｇ₁₀致死がもたらされる。（ドロビスキら、「ブラッド」、第８２巻、２３１０−２３１８頁（１９９３）、サリバンら、「ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン」、３２０巻、８２８−８３４頁（１９８９）、ポーターら、「ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン」、３００巻、１００−１０６頁（１９９４）、スラビンら、「ボーン・マロウ・トランスプランテーション」、第６巻、１５５−１６１頁（１９９０）、ソスマンら、「アメリカン・ジャーナル・オブ・ペディアトリ．ヘム／オンク.」、第１５巻、１８５−１９５頁（１９９３）。）注入された末梢血単核細胞は上記患者において完全かつ長期軽減を誘導し得るが、上記療法はＧＶＨＤを伴い得る。（バーら、「ジャーナル・オブ・クリニカル・オンコロジー」、第１１巻、５１３頁（１９９３）、ドロビスキら、１９９３、スラビンら、１９９０。）Ｔ細胞除去後の同種異系骨髄移植はまた、骨髄移植失敗の発生増加を伴っている。（ビーティら、「ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン」、第３１５巻、７６５−７７１頁（１９８５）、ヘイルら、「トランスプランテーション」、第４５巻、７５３−７５９頁（１９８８）、パッターソンら、「ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー」、第６３巻、２２１−２３０頁（１９８６）。）同種異系骨髄移植に関するネズミモデルでは、コンディショニング治療プログラムにおいて全身照射（ＴＢＩ）と共に強力な免疫抑制処置を追加して宿主のＴ細胞を除去した後のみ永続的移植状態が観察された。（ラピドットら、「ブラッド」、第７３巻、２０２５頁（１９８９））。ヒト同種移植の場合、同問題は、コンディショニング治療プログラムにチオテパおよび抗胸腺細胞グロブリンを加えることにより克服される。Ｔ細胞除去骨髄移植後の免疫不全は、強力なコンディショニング治療プログラムおよび移植片に成熟ドナーＴ細胞が存在しないことの結果として非常に明白である。それは、ドナーおよび患者間における少量の組織適合性抗原の大きな差異によりおそらく延長されると思われる。Ｔ細胞除去骨髄移植片における深刻な免疫不全の結果の１つは、エプスタイン -バールウイルス（ＥＢＶ）リンパ球増殖性疾患の危険性増加である。（シャピロら、「ブラッド」、第７１巻、１２３４−１２４３頁（１９８８）、ズッターら、「ブラッド」、第７２巻、５２０−５２２頁（１９８８）。）これらのリンパ球増殖性疾患は、標準的治療形態に対して非応答性であることが多い。メモリアル・スローン-ケッタリング骨髄移植グループは、ドナーリンパ球注入で処置されたリンパ球増殖性疾患を発現している患者７名について報告している。（パパドポウロスら、「ブラッド」、第８２巻、補遺、１：２１４ａ（１９９３）。）患者は全てＴ細胞除去移植片のレシピエントであった（４名関連、３名非関連）。移植後６カ月以内にリンパ球増殖性疾患が現れた。生検標本は、拡散した大きな細胞リンパ腫を示した。４つの評価可能標本は、ドナー細胞起源のものであることが見いだされた。ＥＢＶＤＮＡは、ＰＣＲにより５つの評価可能標本のうち５つから検出された。患者には、患者体重１kg当たり０.２−１.０×１０⁶ ＣＤ３＋細胞を提供する用量でドナー白血球が与えられた。完全な病理学的および／または臨床応答は、５名の患者全員で観察された。これらの応答は、注入の８−２１日後までに病理学的に実証された。臨床的軽減は１４−３０日以内に達成され、存命中の３患者において他の療法を行わないでも持続された。２名の患者は、それぞれ敗血症および間質性肺炎により注入の８日および１６日後に死亡した。剖検の結果、残留リンパ腫の証拠は全く示されなかった。生存している３患者にＧＶＨＤが現れた。タイバーフィエンらは、一連の抄録および雑誌文献において（タイバーフィエンら、「プロシーディングズ・オブ・ジ・アメリカン・アソーシエイション・フォー・キャンサー・リサーチ」、第３４巻、３３８頁、抄録２０１１（１９９３年３月）、タイバーフィエンら、「ジャーナル・オブ・セル.バイオケム.」、補遺１７Ｅ、２３４頁、抄録ＳＺ２２３（１９９３）、タイバーフィエンら、「ヌーブ.レブ.フラ．ドヘマトル.」、第３５巻、３２９頁（１９９３）、タイバーフィエンら、「ファースト・ミーティング・オブ・ザ・ヨーロピアン・ワーキング・グループ・オン・ヒューマン・ジーン・トランスファー・アンド・セラピー」、要約本、４４頁（１９９３年１１月１９日）、タイバーフィエンら、「ブラッド」、第８４巻、ナンバー４、１３３３−１３４１頁（１９９４年８月１５日））、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子を含むレトロウイルス性ベクターによるＴ細胞の形質導入について開示している。形質導入されたＴ細胞をガンシクロビルで処置すると、８０％より大きいこれらの細胞の生長阻害がもたらされた。ガンシクロビルは、対照（非形質導入）Ｔ細胞に対しては効果を示さなかった。さらにタイバーフィエンらは、Ｔ細胞が単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子によりエクスビボで形質導入され、次いで造血幹細胞により患者に投与され得ることを主張している。患者がＧＶＨＤを発症した場合、形質導入Ｔ細胞を除去するためにガンシクロビルが患者に投与され得る。発明の要約Ｔ細胞除去同種異系骨髄移植後に再発性または慢性白血病患者を処置することがこの発明の対象である。上記患者には、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むように遺伝子操作されたＴ細胞が与えられる。細胞が治療効果を提供するのに十分な長さの時間患者に残存した後、相互作用剤またはプロドラッグが患者に投与されることにより、遺伝子操作されたＴ細胞が殺され、ＧＶＨＤの発現が予防される。別法として、予め定められた相互作用剤投与時間前にＧＶＨＤが発現した場合、相互作用剤がＧＶＨＤ発現時点で患者に投与され得ることにより、形質導入Ｔ細胞を殺すことを通してＧＶＨＤが処置される。疾病または疾患の処置を受けている患者において対宿主性移植片病を予防することがこの発明の別の対象であり、この場合の処置は骨髄切除の後、Ｔ細胞除去骨髄移植片の投与を含む。上記疾病または疾患には、固形腫瘍悪性疾患および後天性または遺伝性免疫学的または造血性疾患があるが、これらに限定されるわけではない。処置の間、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドにより遺伝子操作されたＴ細胞を、患者に投与する。細胞が治療効果を与えるのに十分な長さの時間患者中に残存した後、相互作用剤またはプロドラッグを患者に投与することにより、遺伝子操作されたＴ細胞が殺され、対宿主性移植片病が予防される。発明の詳細な記載この発明の一態様によると、宿主にＴ細胞を投与することにより処置され得る疾患または疾病、例えば再発性または慢性白血病に関する処置を受けている宿主における対宿主性移植片病の予防方法が提供される。この方法は、負の選択マーカーまたは「自殺」遺伝子をコード化するポリヌクレオチドを含むように遺伝子操作が加えられたＴ細胞を宿主に投与することを含む。これらの細胞は、宿主において治療効果を提供するのに有効な量で投与され、かつ有効な長さの時間宿主中に残存する。Ｔ細胞が宿主において治療効果を提供するのに十分な長さの時間宿主中に残存した後、かつ対宿主性移植片病が発生する前に、相互作用剤またはプロドラッグが宿主に投与される。相互作用剤は、遺伝子操作されたＴ細胞、特に対宿主性移植片反応性である、すなわち対宿主性移植片効果を提供し得るＴ細胞を殺すことにより、宿主における対宿主性移植片病の発生を予防するのに有効な量で宿主に投与される。ここで使用されている「ポリヌクレオチド」の語は、いかなる長さでもよいヌクレオチドのポリマー形態を包含し、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含む。上記語はまた、１本および２本鎖ＤＮＡ並びに１本および２本鎖ＲＮＡを包含する。この語はまた、修飾ポリヌクレオチド、例えばメチル化またはキャップポリヌクレオチドも包含する。負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドは、Ｔ細胞へ形質導入される適当な発現ビークル内に含まれ得る。上記発現ビークルには、真核生物ベクター、原核生物ベクター（例えば細菌性ベクター）およびウイルスベクターがあるが、これらに限定されるわけではない。別の一態様では、作用物質をコード化するポリヌクレオチド、または作用物質をコード化するポリヌクレオチドを含む発現ビークルは、リポソーム内に封入される。好ましい一態様では、発現ビークルはウイルス性ベクターである。使用され得るウイルス性ベクターには、ＤＮＡウイルスベクター（例えばアデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターおよびワクシニアウイルスベクター）およびＲＮＡウイルスベクター（例えばレトロウイルスベクター）がある。ベクター構築においてＲＮＡウイルスベクターが使用されるとき、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドはＲＮ形態を呈する。ベクター構築においてＤＮＡウイルスベクターが使用されるとき、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドはＤＮＡ形態を呈する。一態様では、ウイルスベクターはレトロウイルスベクターである。使用され得るレトロウイルスベクターの例には、モロニーネズミ白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、およびレトロウイルス、例えばラウス肉腫ウイルス、ハーヴィー肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルスおよび乳癌ウイルスから誘導されたベクターがあるが、これらに限定されるわけではない。ベクターは、好ましくは感染性の複製不全レトロウイルス粒子である。レトロウイルスベクターは、レトロウイルス性遺伝子を真核生物細胞へ導入するのを仲介する作用物質として有用である。レトロウイルスベクターは、一般にウイルスの構造遺伝子をコードする配列の大多数を除去し、興味の対象である遺伝子（複数も可）により置き換える形で構築される。最も多くの場合、構造遺伝子（すなわち、ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ）は、当業界公知の遺伝子工学技術を用いてレトロウイルスバックボーンから除去される。ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子を除去することにより得られるベクターバックボーンは、５’ＬＴＲ、パッケージングシグナル、興味の対象である異種遺伝子（複数も可）が導入され得る１個またはそれ以上のクローニング部位および３’ＬＴＲから成る。好ましいベクターバックボーンは、Ｇ１ベクターバックボーンであり、マクラクリンら、「ヴァイロロジー」、１９５：１−５（１９９３）および１９９１年７月２５日公開の「新規レトロウイルスベクター」に関するＰＣＴ特許出願第ＷＯ９１／１０７２８号に開示されている。異種遺伝子（複数も可）が標準技術によってプロウイルスバックボーン中に組み込まれることにより、レトロウイルスベクターが形成される。レトロウイルスベクターの製造技術は、ＰＣＴ出願ＷＯ９１／１０７２８並びに次の文献：アーメンタノら、「ジャーナル・オブ・ヴァイロロジー」、６１：１６４７−１６５０（１９８７）、ベンダーら、「ジャーナル・オブ・ヴァイロロジー」、６１：１６３９−１６４６（１９８７）およびミラーら、「バイオテクニクス」、７：９８０−９９０（１９８９）に開示されている。最も簡単な構築物は、レトロウイルスの構造遺伝子が単一遺伝子により置き換えられ、次いでこれが長末端反復 (ＬＴＲ）内のウイルス性調節配列の制御下で転写されているものである。複数の遺伝子を標的細胞中へ導入し得るレトロウイルスベクターもまた構築されている。通常、上記ベクターでは、１遺伝子がウイルスＬＴＲの調節制御下にあり、第２遺伝子がスプライシングされたメッセージから発現されるかまたはそれ自体の内部プロモーターの調節下に置かれる。適当なブロモーターには、ＳＶ４０プロモーター、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ベータ-アクチンプロモーター、アルファ-フェトプロテインプロモーター、および興味の対象である異種遺伝子に天然に伴うあらゆるプロモーターがある。さらに、ポリシストロン性ベクターは、内部リボソームエントリー部位を用いることにより作製され得る。レトロウイルスベクターは、プラスミド、ウイルスＤＮＡのセグメント、またはプロウイルスＤＮＡのセグメントの形態であり得る。この発明の場合、好ましいレトロウイルスベクターはＧ１ＴＫ１ＳｖＮａであり、１９９５年３月９日に公開された、「ヒト腫瘍細胞の遺伝子形質転換によるヒト腫瘍の処置」と題するＰＣＴ特許出願番号ＷＯ９５／０６４８６に開示されている。レトロウイルスベクターは、パッケージング細胞へ導入されることにより、プロデューサー細胞を形成させる。パッケージング細胞がトランスでｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子を提供することにより、感染性ではあるが複製能欠損の組換え体レトロウイルスヘレトロウイルスベクターがパッケージングされ得る。ベクターは、トランスフェクション、形質導入、リン酸カルシウム沈澱、電気穿孔、およびリポソーム仲介ＤＮＡ転移を含む標準遺伝子導入技術によりパッケージング細胞へ導入される。使用され得るパッケージング細胞の例には、ＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ｐｓｉ−２、Ｐｓｉ−ＡＭ、ＰＡ１２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ− １９−１７−Ｈ２、Ｐｓｉ−ＣＲＥ、Ｐｓｉ−ＣＲＩＰ、ＧＰ＋Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡＭ１２、ＰＧ１３およびＤＡＮセルラインがあるが、これらに限定されるわけではない。組換え体レトロウイルスを製造するためのこの発明における好ましいプロデューサーセルラインは、ＰＡ３１７／Ｇ１ＴＫ１ＳｖＮａと称されるプロデューサーセルラインであり、ＰＣＴ出願ＷＯ９５／０６４８６に開示されている。負の選択マーカーには、ウイルス性チミジンキナーゼ、例えば単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、サイトメガロウイルスチミジンキナーゼおよび水痘ウイルスチミジンキナーゼ、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、およびシトシンデアミナーゼがあるが、これらに限定されるわけではない。負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むレトロウイルスベクターを、Ｔ細胞へ形質導入する。一般に、約１０⁶〜約１０⁹、好ましくは約１０⁷ 〜約１０⁸のＴ細胞がレトロウイルスベクターにより形質導入され、これは約１０⁵cfu／ml〜約１０⁹cfu/ml、好ましくは約２×１０⁶cfu/ml〜約１×１０⁸cfu／ mlの力価を有する、約２ml〜約５００mlのレトロウイルス上清中に含まれ得る。一旦Ｔ細胞が負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むレトロウイルスベクターへ形質導入されると、Ｔ細胞は再発性または慢性白血病を患う宿主へ投与される。宿主は動物宿主、および特に哺乳類宿主、例えばヒトおよびヒト以外の霊長類宿主である。形質導入されたＴ細胞は、当業界熟練者に知られている手段、例えば脈管内投与、例えば静脈内または動脈内投与、または腹腔内投与により投与される。一態様において、形質導入されたＴ細胞はボーラス注入として投与される。形質導入されたＴ細胞は、治療効果の提供に有効な量、すなわち宿主における再発性または慢性白血病の処置に有効な量で投与される。一般に、形質導入されたＴ細胞は、約１０⁵細胞／kg〜約１０⁹細胞／kg、好ましくは約２×１０⁵細胞／kg〜約１×１０⁷細胞／kgの量で投与される。形質導入されたＴ細胞は、許容し得る医薬用担体、例えば食塩水溶液または水性緩衝液、例えばリン酸緩衝液、トリス緩衝液、プラズマライトＡ（バクスター）または乳酸加リンガー溶液と連係的に投与される。適当な医薬用担体の選択は、この明細書に含まれる教義から当業界の熟練者には明白なものであると思われる。別法として、形質導入されたＴ細胞は、細胞が宿主に投与されるまで許容し得る低温保存培地（例えば、リン酸緩衝食塩水、５％ＤＭＳＯおよびヒトアルブミンを含む培地）中で冷凍され得る。投与前、細胞および培地は解凍され、細胞および培地は解凍後宿主に投与される。形質導入されたＴ細胞が宿主において治療効果をもたらし得るのに十分な長さの時間をおいた後、ただし対宿主性移植片病の発現前に、相互作用または化学療法剤は、形質導入されたＴ細胞を殺す、特に形質導入された増殖性対宿主性移植片反応性Ｔ細胞、すなわち対宿主性移植片効果を提供し得るＴ細胞を殺すことにより、対宿主性移植片病の発現を予防するのに有効な量で宿主に投与される。好ましくは、対宿主性移植片反応性であるＴ細胞（従って、上記Ｔ細胞は、宿主細胞のＭＨＣクラスＩ抗原の認識を通して対宿主性移植片効果を提供し得る）が増殖相にあり、そしてＴ細胞の一部、例えば対白血病移植片効果をもたらすかまたは抗ウイルス効果をもたらすＴ細胞の一部が鎮静期または非増殖相にあるときに、相互作用剤が投与される。相互作用剤またはプロドラッグが上記時点で投与されると、対宿主性移植片効果をもたらし得る増殖性Ｔ細胞の致死を招き、対白血病性移植片効果または抗ウイルス効果を与えるＴ細胞の一部を含む非増殖性Ｔ細胞は相互作用剤またはプロドラッグの投与にもかかわらず残存する。すなわち、ＧＶＨＤ誘発に関与するT細胞の大多数は優先的に除去され、対白血病性移植片効果または抗ウイルス効果をもたらし得る他のＴ細胞が生き残る。一般に、相互作用剤は、形質導入されたＴ細胞の投与後約１０日〜約５０日、好ましくは約１４日〜約２８日の期間をおいて、さらに好ましくは２１日目に投与される。負の選択マーカーがウイルス性チミジンキナーゼ、例えば上述のものである場合、相互作用剤または化学療法剤またはプロドラッグは、好ましくはヌクレオシド類似体、例えばガンシクロビル、アシクロビル、および１−２−デオキシ−２ −フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル−５−ヨードウラシル（ＦＩＡＵ）から成る群から選ばれたものである。上記相互作用剤は基質としてのウイルス性チミジンキナーゼにより有効に利用され、すなわち上記相互作用剤は、ウイルス性チミジンキナーゼを発現し、および特に対宿主性移植片反応性であるＴ細胞を増殖させる形質導入Ｔ細胞のＤＮＡに致死的に組み込まれることにより、形質導入Ｔ細胞の死を誘発する。負の選択マーカーがシトシンデアミナーゼである場合、好ましい相互作用剤またはプロドラッグは５−フルオロシトシンである。シトシンデアミナーゼは、５ −フルオロシトシンを細胞傷害性の高い５−フルオロウラシルに変換する。すなわち、シトシンデアミナーゼ遺伝子を発現する形質導入Ｔ細胞は、５−フルオロシトシンを５−フルオロウラシルに変換し、殺される。相互作用剤またはプロドラッグは、形質導入Ｔ細胞の有効致死量で投与される。相互作用剤は、好ましくは全身投与、例えば静脈内投与により投与される。一般に、相互作用剤は、約３〜１８日間、好ましくは約５日間、約２mg／kg／日〜約１０mg／kg／日、好ましくは約１０mg／kg／日の量で投与される。好ましい具体例では、相互作用剤またはプロドラッグは、５日の期間１２時間毎に５mg／kg の量で投与される。形質導入Ｔ細胞の致死が望まれる所望の時点までに宿主が対宿主性移植片病を発現した場合、相互作用剤を対宿主性移植片病の発現時に投与することにより、宿主における対宿主性移植片病が処置される。すなわち、この発明の方法を用いると、Ｔ細胞を患者に投与することにより、再発性または慢性血液悪性疾患または白血病を患う患者が処置され、Ｔ細胞が所望の治療効果を発揮した後でＴ細胞を殺すことにより対宿主性移植片病の発生が予防され得る。形質導入Ｔ細胞で処置され得る白血病には、多発性骨髄腫（ＭＭ）、脊髄形成異常症候群、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病および骨髄線維症があるが、これらに限定されるわけではない。この発明の利点は、病的状態および致死状態に陥る主たる原因である対宿主性移植片病がプロドラッグまたは相互作用剤の投与により予防され得るため、負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むように遺伝子操作が加えられたＴ細胞の方が遺伝子操作されていないＴ細胞よりも、再発性または慢性白血病の処置で使用するのに安全である点である。対宿主性移植片病はドナーおよび患者間の不適合度合いの結果であるため、この発明の方法により、高齢の患者および遺伝的非対応のドナー、例えばＨＬＡの異なる同胞および適合非血縁ドナーを含むため同種異系骨髄移植に適格である患者の数は拡大される。さらに、相互作用剤またはプロドラッグの投与のタイミングは、ＧＶＨＤ反応性細胞（すなわちＧＶＨＤの誘発に関与するＴ細胞）の大多数が優先的に除去され、すなわち患者に免疫学的Ｔ細胞レパートリー部分をより多く残すようにはかられる。対白血病性移植片反応性細胞の少なくとも一部およびＧＶＨＤに伴うもの以外の抗原との反応性を示すＴ細胞は、相互作用剤またはプロドラッグの投与にも耐えるため、ＥＢＶリンパ腫および感染症の頻度低下を促すと思われる。白血病の処置に加えて、上記方法は、他の疾病および疾患の処置に適用され得る。例えば、この方法は、固形腫瘍悪性疾患、特に腫瘍が転移し、腫瘍細胞が骨髄から見いだされる場合の処置に適用され得る。上記処置の間、患者には全身照射と共にまたはそれを伴わずに高用量化学療法処置が行われ、次いで同種異系Ｔ細胞除去骨髄移植による救命措置が行われる。負の選択マーカーまたは自殺遺伝子をコード化するポリヌクレオチドにより遺伝子操作されたＴ細胞は、上記要領で患者に投与され、ＧＶＨＤは相互作用剤またはプロドラッグの投与により予防される。この具体例では、Ｔ細胞は、対腫瘍性移植片（ＧＶＴ）効果を発揮する。この方法に従い処置され得る固形腫瘍悪性疾患には、乳癌、神経芽細胞腫、精巣癌、卵巣および子宮癌、および軟組織肉腫があるが、これらに限定されるわけではない。さらに、この発明の上記方法は、後天的または遺伝的免疫または血液疾患の処置であって、骨髄切除後、Ｔ細胞除去骨髄移植片の投与を含む処置に使用され得る。上記疾患には、ＡＩＤＳ、重傷複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴィスコット- オールドリッチ症候群、リンパ球機能障害、骨髄機能障害、再生不良性貧血、ファンコーニ貧血、サラセミア、鎌状赤血球貧血、酵素欠損症（ゴシェ病、ムコ多糖症および白質ジストロフィーを含む）およびオステオポローシス、すなわち古い骨を破壊する骨髄細胞の欠損を特徴とする病気があるが、これらに限定されるわけではない。これらの疾病には、対白血病性移植片または対腫瘍性移植片効果は存在しない。この具体例において、遺伝子操作されたＴ細胞は、骨髄移植の改善およびＥＢＶリンパ腫の発生減少に関与する。ＧＶＨＤは、プロドラッグまたは相互作用剤の投与により予防される。すなわち、この発明の別の態様によると、宿主（ヒトおよびヒト以外の霊長類哺乳類宿主であり得る）における疾病または疾患の処置方法が提供され、この場合の宿主における疾病または疾患の処置は、宿主の骨髄を切除した後、Ｔ細胞除去骨髄移植片を宿主に投与することを含む。この方法は、宿主の骨髄切除を含む。次いで、Ｔ細胞除去骨髄移植片を宿主に投与する。次いで、上記のものから選択され得る負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドを含むように遺伝子操作が加えられたＴ細胞を宿主に投与する。対宿主性移植片病の発生前に、相互作用剤またはプロドラッグ（例えば上記のもの）を、宿主での遺伝子操作されたＴ細胞に関する有効致死量で宿主に投与する。この方法に従い処置され得る疾病または疾患には、上記のものがあるが、これらに限定されるわけではない。負の選択マーカーをコード化するポリヌクレオチドは、適当な発現ビークル、例えば上記のもの、例えばウイルス性ベクター、例えばレトロウイルスベクターに含まれ得る。遺伝子操作されたＴ細胞は、治療効果をもたらすのに有効な量で宿主に投与され得る。この量は、上記と同様であり得る。投与される遺伝子操作されたＴ細胞の正確な量は、様々な因子、例えば患者の年齢、体重および性別、処置されている疾病または疾患、およびその範囲および重症度により異なる。遺伝子操作されたＴ細胞が宿主において治療効果を提供するのに十分な時間をおいた後、ただし対宿主性移植片病が発現する前に、プロドラッグまたは相互作用剤は、上記の場合と同様であり得る、遺伝子操作されたＴ細胞、特に対宿主性移植片効果を提供し得る遺伝子操作されたＴ細胞を殺すのに有効な量で投与されることにより、対宿主性移植片病の発現が予防される。遺伝子操作されたＴ細胞の投与後相互作用剤が投与されるまでの時間は、上記と同様であり得る。実施例以下、実施例によりこの発明についてさらに記載するが、この発明の範囲をそれによって限定する意図はない。実施例１慢性または再発性多発性骨髄腫を患う患者に対する単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子を含むレトロウイルスベクターにより形質導入されたT細胞の投与、その後のガンシクロビルの投与ドナーリンパ球の採取５０〜１００mlのドナー血液を集め、少なくとも２.５−５×１０⁷細胞を回収する。血液を等容量の滅菌リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）と混合し、フィコル（リンホプレプ、ナイコメッド）を用いて勾配分離にかけ、単核細胞を分離する。次いで細胞を滅菌ＰＢＳ中で３回洗浄する。１００単位／mlのペニシリンおよび１００μｇ／mlのストレプトマイシン（ペン-ストレップ、ギブコ−ＢＲＬ）を１ ×１０⁶細胞／mlの密度で、さらに１μｇ／mlの抗ＣＤ３抗体（オルトクローンＯＫＴ３、オルト−バイオテク）を含む血清不含有ＡＩＭ−Ｖ培地に細胞を再懸濁し、３７℃で５％ＣＯ₂中２４時間インキュベーションする。組換えヒトインターロイキン−２（キロン・コーポレイション）を１５００単位／mlで加え、３７℃で５％ＣＯ₂中７日以下の期間細胞を培養する。リンパ球が指数的増殖相にあるとき、それらをレトロウイルスベクターにより形質導入する。Ｇ１ＴＫ１ＳｖＮａによるリンパ球の形質導入約１×１０⁸リンパ球に対し、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子およびネオマイシン耐性遺伝子を含むレトロウイルスベクターＧＩＴＫ１ＳｖＮａにより形質導入する。上記形質導入は、２×１０⁸cfu〜１×１０⁹cfu のレトロウイルスベクターを含むウイルス上清１００mlをリンパ球に加えることにより達成される。レトロウイルスベクターＧ１ＴＫ１ＳｖＮａは、１９９５年３月９日公開のＰＣＴ出願第ＷＯ９５／０６４８６号にさらに記載されている。新鮮なウイルス上清は、追加量のインターロイキン２およびプロタミンスルフェートと一緒に合計３日間毎日加えられ、１５００単位／mlの最終インターロイキン２濃度および５μｇ／mlのプロタミンスルフェートが達成される。上清およびプロタミンスルフェートを毎回加えた後、細胞を５％ＣＯ₂中３７℃で２４時間インキュベーションする。第３の形質導入の２４時間後、細胞をペン-ストレップおよび１５００単位／m lのインターロイキン２を含む新鮮な培地中１×１０⁶細胞／mlの密度で再懸濁し、３〜５日間インキュベーションする。次いで、ジェネティシンを３００μｇ／ mlの活性濃度で加え、細胞を３日間選別し、遠心分離にかけ、次いでインターロイキン２を含むＡＩＭ−Ｖ培地に再懸濁し、十分な数の細胞が得られるまで培養する。一般に、少なくともさらに４日間細胞を培養する。形質導入および選択の効率は、ガンシクロビル致死検定法により測定される。形質導入細胞の１〜２パーセントを、ガンシクロビル致死検定用に標本抽出する。（この検定の遂行には最小限２×１０⁶細胞が必要とされる。）この検定は、組織培養フラスコ中１５００単位／mlの組換え体インターロイキン−２を含むＡＩＭ−Ｖ（ギブコ−ＢＲＬ）培地５.０mlに形質導入されたリンパ球を懸濁することにより行われる。合計３本のフラスコを調製する。ガンシクロビルをフラスコのうちの２本に加え、１本目は２０マイクロモルおよび２本目は５０マイクロモルの濃度とする。３本目のフラスコを正常な対照として使用する。細胞を５日間５％ＣＯ2中３７℃でインキュベーションする。ガンシクロビルでの３および５日間の培養後に生きている細胞（トリパンブルー陰性）のパーセンテージを計数する。濃度５０マイクロモルでのガンシクロビル致死率が８５％未満である場合、上記要領に従い細胞をジェネティシン中で再選択する。細胞を低温保存し、ガンシクロビル致死率が８５％と同等またはそれより大きい場合のみ注入する。２回注入（必要ならば）に十分な細胞を供給するため、十分な数の細胞を最初に集め、拡充し、各患者用に低温保存する。また形質導入されたリンパ球についても、注入前にＦＡＣＳによるサブセット分析（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９およびＣＤ５６）に関して試験する。形質導入リンパ球の注入およびガンシクロビルの投与。Ｔ細胞除去した同種異系骨髄移植を受けた患者に対して、彼らが移植後９０日で持続的疾患またはいずれの時点にせよ測定可能な再発の証拠を示した場合、形質導入されたリンパ球の注入を行う。持続的疾患の患者の場合、骨髄吸引物またはバイオプシーに２０％を越える割合で形質細胞が存在し、および／または血清Ｍ−成分が存在し、および最後の６週間においてＭ−成分が低減化せず、および／または最後の６週間においてベンス・ジョーンズ蛋白尿の低減化は見られない。３患者の各々に、１×１０⁶リンパ球／kgの量で形質導入リンパ球を投与する。１〜５０mlのリンパ球をボーラス注入として投与し、各患者をその後４時間観察する。患者に形質導入リンパ球を投与した２１日後、または対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）が早期に発現した場合、患者にガンシクロビル（サイトヴィーン、シンテックス・コーポレーション、パロアルト、カリフォルニア）を５日間毎日１２時間毎に５mg／kgの量で静脈内注入により投与する。形質導入リンパ球の注射後４２日目に測定可能な病状の連続低減化を伴う完全応答または部分応答した患者には、病気のプラトーまたは進行が観察されるまで第２のリンパ球注入はしない。完全応答は、最小限２週間、次の要件：（ｉ）尿および血清中に免疫固定によるＭ−成分が存在しない、（ii）骨髄が免疫染色の結果十分細胞性（すなわち＞２０％）であり、形質細胞は３％未満である、（iii）血清カルシウムレベルの上昇が無い、および（iv）新たな骨病変も既存病変の拡大も無いということを満たすべきである。部分応答は、少なくとも４週間、次の条件：（ｉ）少なくとも５％までの血清Ｍ−成分の低減化、（ii）２００mg／２４時間未満および前処置値の１０％未満への尿中Ｍ蛋白の低減化、および（iii）新たな崩壊性骨病変または柔組織形質細胞腫が無いことを必要とする。改善としては、基準線値と比べて２０−２５％の血清パラプロテインレベルおよび尿軽鎖排出の低下、および基準線値と比べて２５−５０％の形質細胞による骨髄浸潤の減少も含まれるべきである。Ｍ−蛋白の連続下降を伴わない部分応答を示す患者には、形質導入リンパ球の第１注入の４２日後、第１注入中の場合と同数の形質導入リンパ球が投与される。患者がＧＶＨＤを発現しなければ、ガンシクロビルは投与されない。この実施例の場合、用量レベルは次の通りである：用量レベルリンパ球注入用量（リンパ球／kg）Ｉ１×１０⁶ II ５×１０⁶ III １×１０⁷ IV ２×１０⁷ Ｖ５×１０⁷ また、この実施例の目的のため、ＧＶＨＤを次の要領で等級付けする。急性ＧＶＨＤの臨床的等級付け器官系による病期分類最初の３患者が完全応答または部分応答を達成せず、III段階またはIV段階ＧＶＨＤを発現しない場合、リンパ球の用量を１×１０⁶リンパ球／kgから５×１０⁶リンパ球／kg（すなわち、用量レベルII）に上昇させる。各用量レベルに関する処置計画は、用量レベルＩに関して上述したものと同一である（すなわち、１×１０⁶リンパ球／kg）。追加の６患者については、３患者のうちの一人が応答する用量レベルまたは傷害性が観察されるレベルより低用量で開始される。この出願で参考として引用されている全特許の明細書、出版物（公開された特許出願を含む）およびデータベース記載事項を各々具体的かつ個々に示すことにより引用して説明の一部とする場合と同程度に、それらの特許、出版物およびデータベース記載事項を具体的に全体をそのままここに引用して説明の一部とする。しかしながら、この発明の範囲は、上記実施態様に限定されるわけではないものとする。この発明は、特記されている方法以外でも実践され得、同様に後記請求の範囲内に含まれ得る。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Contains polynucleotide encoding negative selectable marker Prevention of graft-versus-host disease by T cells This invention relates to graft versus host disease in patients who have received allogeneic bone marrow transplantation. Is related to the prevention of GVHD. More particularly, the invention relates to allogeneic Patients with recurrent or chronic leukemia following T cell depleted bone marrow transplantation Of graft versus host disease in the elderly, encoding a negative selectable marker After administration of the T cells containing the polynucleotide to the patient, graft versus host disease develops. Prior to manifestation, interacting agents or prodrugs may be administered to deliver T cells, especially against host transplantation. It relates to a prophylactic method by killing T cells that are unireactive. Further, the invention relates to the treatment of a disease or disorder, wherein the allogeneic resection is followed by an allogeneic procedure. In conjunction with a treatment comprising administering a lineage bone marrow graft, eg, a T cell depleted bone marrow graft And a method for preventing graft-versus-host disease. In such a way, the negative T cells containing a polynucleotide encoding a selectable marker are also administered to the patient Before the onset of graft-versus-host disease, The administration kills T cells, especially those that are graft-reactive to host. Background of the Invention Hematological malignancies or leukemias, such as multiple myeloma (MM), chronic myeloid leukemia (CML), acute myeloid leukemia (AML), and acute lymphoblastic leukemia (A LL) attacks thousands of Americans each year. For example, every year 1000 Americans About 4 out of 00 people have multiple myeloma. In 1993 there were 1280 new cases There were 0 cases. Multiple myeloma accounts for just over 1% of all types of malignancies, It accounts for slightly more than 10% of hematological malignancies. (Virology et al. JAMA, 268, 2946-2951 (1992), Verlogy et al., " Blood, 73, 865-879 (1989)). Median age at diagnosis Is 62 years old and is more common in men than women. (Botin et al., “Transp Lations, Vol. 42, p. 29 (1986). ) Patients may have Presenting with disseminated disease, serum M-protein level usually exceeds 3.0 g / dl, Epidemiological globulin levels are low. Mostly monoclonal light in urine and skeletal lesions There is a chain. Plasma cell labeling index, β2 microglobulin and C-reactive protein (CRP) has been shown to be an independent prognostic factor. Allogeneic bone marrow transplantation is an effective treatment modality for selected patients with multiple myeloma. (Bochin et al., 1986). 268 patients are allogeneic in different trials Received a transplant. (Virology et al., Seminars in Hematology, 32 Volume 31-44 (1995)). Fifty percent of patients die within a year, Approximately 40 percent achieved a complete response and the four-year project event-independent survival About 35 percent. In part, it was derived from adoptive transfer of immunocompetent cells in donor grafts Allogeneic due to its anti-tumor (ie, myeloma graft or GVM) effect Bone marrow transplantation is considered to be therapeutically effective. (Gail et al., "The Lancet Vol. 2, p. 28 (1984), Bochin et al., Nature, Vol. 67, 7 22 (1979). ) The antitumor effect associated with graft versus host disease (GVHD) It appears to be mediated by both cell and non-T cell effector cell populations. However, GVHD remains a major problem because of its morbidity and mortality It is. T cell ablation has been used to reduce early mortality from allogeneic bone marrow transplantation I have. T cells were subjected to density gradient centrifugation, soy lectin aggregation and E-rosette formation. , Centrifugal elutriation, cytotoxic drugs or corticosteroids, anti-T cell monochrome By any of several techniques, including null antibody, and positive selection of CD34 + cells It can be removed from an allograft. (Champlin, "Journal of Hemadose Rappy, Vol. 2, pp. 27-42 (1993); Reisner et al., The Lancet. 2, 327-331 (1981), Waldman et al., "The Lancet". 2, 483-486 (1984), Antin et al., "Blood", Vol. 78, pp. 2139-2149 (1991); Of Clinical Oncology ", Vol. 10, pp. 1191-1200 (199 2). ) Of the techniques currently used to remove T cells from bone marrow transplants, The most effective is the technique of Reisner et al. (1981). This technology is consistent 2.5-3.0 log_TenOf soybeans that can be cloned. By using differential aggregation with lectins, T cells, B cells, monocytes and granules Remove mature leukocytes, including spheres, and then remove residual T cells by E-rosette removal I do. This technique has been applied to more than 200 HLA-matched related transfers given to leukemia patients. It has been used to treat plant populations. In this population, stage II acute GVHD Was 5% and no stage III and IV acute GVDH was observed. ( O'Reilly et al., "Bone Mallow Transplantation", Volume 3, 3- 6 (1988). ) Depletion of T cells reduces the incidence of GVDH, but T cell depletion also results in early relapse, Incomplete immune reconstitution, transplant failure, and Epstein-Barr virus-related lymph Increases the risk of tumor. The risk of recurrence has been most accurately demonstrated in chronic myeloid leukemia. (Ma Mont et al., "Blood", Vol. 78, 2120-2130 (1991), goal Doman et al., "Anals of Internal Medicine," Volume 108, 80 6-814 (1988). ) Direct evidence of leukemic graft (GVL) effect Peripheral blood mononuclear cells from bone marrow donors without any additional chemotherapy or radiotherapy Demonstrated in patients with recurrent chronic myeloid leukemia after T cell depletion bone marrow transplantation by infusion At least 6 logs of leukemia cells_TenIt is lethal. (Drobis Kira, "Blood", Vol. 82, pp. 2310-2318 (1993), Sullivan "New England Journal of Medicine," Volume 320, 82 8-834 (1989), Porter et al., "New England Journal. Of Medicine ", 300, 100-106 (1994), Slavin et al., "Bourne Mallow Transplantation," Vol. 6, pp. 155-161 ( 1990), Sossman et al., "American Journal of Pediatry. 15 / 185-195 (1993). ) Injected peripheral Although blood mononuclear cells can induce complete and long-term relief in the patient, May be accompanied by VHD. (Bar et al., “Journal of Clinical Oncology” 11, Vol. 513, p. 1993 (1993), Dlovski et al., 1993, Slavin et al. 1990. ) Allogeneic bone marrow transplantation after T cell depletion has also been associated with an increased incidence of bone marrow transplant failure You. (Beaty et al., "New England Journal of Medicine," 315, 765-771 (1985), Hale et al., Transplanters. 45, 753-759 (1988); Patterson et al. Tissue Journal of Hematology ", Vol. 63, pp. 221-230 (1986). ) In the murine model for allogeneic bone marrow transplantation, the condition Intensive immunosuppressive treatment along with total body irradiation (TBI) in In addition, a permanent transplant condition was observed only after removal of host T cells. (Rapidodo Et al., Blood, 73, 2025 (1989)). Place for human allograft If the problem is tiotepa and antithymocyte It is overcome by adding globulin. Immunodeficiency after T-cell depleted bone marrow transplantation is a potential conditioning therapy program Very evident as a result of the absence of mature donor T cells in is there. It is because of the large differences in small amounts of histocompatibility antigens between donor and patient. Will probably be extended by One of the consequences of severe immunodeficiency in T cell depleted bone marrow grafts is that Epstein -Increased risk of Burr virus (EBV) lymphoproliferative disease. (Shapi B. et al., "Blood", Vol. 71, pp. 1234-1243 (1988), Zutter Et al., Blood, 72, 520-522 (1988). ) These phosphorus Papuloproliferative disorders are often unresponsive to standard forms of treatment. memory Al Sloan-Kettering bone marrow transplant group treated with donor lymphocyte infusion We report seven patients who have developed lymphoproliferative disorders. (Pa Padpoulos et al., "Blood", Vol. 82, Addendum, 1: 214a (1993). ) All patients were recipients of T cell depleted grafts (4 related, 3 unrelated) ). Lymphoproliferative disease appeared within 6 months after transplantation. The biopsy specimen is Cell lymphoma. The four evaluable specimens are of donor cell origin. Was found. EBV DNA was obtained from 5 evaluable specimens by PCR. Detected in 5 of them. Patients have 0.2-1.0 x 10 / kg of patient weight.⁶ Donor leukocytes were given at doses providing CD3 + cells. Complete pathological and And / or clinical response was observed in all five patients. These responses are Pathologically demonstrated by 8-21 days after injection. Clinical relief less than 14-30 days And was sustained without other therapy in 3 surviving patients. 2 Patients received 8 and 16 days post-infusion due to sepsis and interstitial pneumonia, respectively Died. Necropsy showed no evidence of residual lymphoma. Alive Three patients had GVHD. Et al. In a series of abstracts and journal articles Et al., “Proceedings of the American Association Vol. 34, p. 338, Abstract 2011 (1993) March), Thai Verfien et al., "Journal of Cell. Biochem." 17E, 234 pages, Abstract SZ223 (1993), Thaiverfien et al. Bu. Lev. Hula. Dohematl. ", Volume 35, p. 329 (1993), Thai Bar Fien et al., "First Meeting of the European Workingin Gu Group on Human Gene Transfer and Therapy "Summary Book, p. 44 (November 19, 1993), Thaiverfien et al.," Bra 84, Number 4, pages 1333-1341 (August 15, 1994) )), A retroviral vector containing the herpes simplex virus thymidine kinase gene. Discloses the transduction of T cells by a vector. Transduced T cells Treatment with ganciclovir resulted in greater than 80% inhibition of the growth of these cells. It was done. Ganciclovir is effective against control (non-transduced) T cells Did not. In addition, Tyverfien et al. Reported that T cells Ex vivo transduced with the kinase kinase (TK) gene and then hematopoietic stem cells Can be administered to patients. When the patient develops GVHD Ganciclovir may be administered to a patient to remove transduced T cells. Summary of the Invention Treating relapsed or chronic leukemia patients after T-cell depleted allogeneic bone marrow transplantation Is an object of the present invention. The patient has a polypride encoding a negative selectable marker. T cells are provided that have been genetically engineered to contain nucleotides. Cells are therapeutic After the patient has been in the patient for a sufficient length of time to provide When the rag is administered to the patient, the engineered T cells are killed and GV HD development is prevented. Alternatively, prior to the predetermined interaction agent administration time If GVHD is expressed, the interacting agent can be administered to the patient at the time of GVHD onset Thus, GVHD is treated through killing transduced T cells. Prevent graft-versus-host disease in patients undergoing treatment for the disease or disorder Is another subject of this invention, where the treatment is myeloablation followed by T cell depletion Including administration of bone marrow grafts. The diseases or disorders include solid tumor malignancies and later There are, but are not limited to, acquired or inherited immunological or hematopoietic disorders is not. During treatment, the polynucleotide encoding the negative selectable marker The engineered T cells are administered to a patient. Enough cells to give therapeutic effect Interactor or prodrug is administered to the patient after remaining in the patient for a length of time Can kill genetically engineered T cells and prevent graft-versus-host disease It is. Detailed description of the invention According to one aspect of the invention, it can be treated by administering T cells to the host. A host undergoing treatment for a disease or condition, such as recurrent or chronic leukemia And a method for preventing graft-versus-host disease in the present invention. This method uses a negative selection marker. Gene to include a polynucleotide encoding a car or "suicide" gene Administering the engineered T cells to a host. These cells provide the host with Administered in an amount effective to provide a therapeutic effect in a host for an effective length of time. Remains inside. A time period long enough for the T cells to provide a therapeutic effect in the host After remaining in the host and before graft-versus-host disease occurs, the interacting agent or A prodrug is administered to the host. Interacting agents include genetically engineered T cells, T cells that are graft-reactive to a host, ie, can provide a graft-versus-host effect Kills vesicles and is effective in preventing the development of graft-versus-host disease in the host Is administered to the host in any amount. As used herein, the term "polynucleotide" refers to a nucleic acid of any length. Including polymeric forms of nucleotides, ribonucleotides and deoxyribonucleic acids. Contains leotide. The term also refers to single and double stranded DNA and single and double stranded DNA. Strand RNA. The term also includes modified polynucleotides, such as methylated Or cap polynucleotides. A polynucleotide encoding a negative selectable marker is transduced into T cells. Be contained in any suitable expression vehicle. The expression vehicle contains a eukaryotic vector -Prokaryotic vectors (eg, bacterial vectors) and viral vectors However, it is not limited to these. In another aspect, a polynucleotide encoding an agent, or an agent An expression vehicle containing a polynucleotide that encodes It is. In one preferred aspect, the expression vehicle is a viral vector. Can be used Viral vectors include DNA virus vectors (eg, adenovirus vectors). Vector, adeno-associated virus vector, herpes virus vector and wax Near virus vectors) and RNA virus vectors (eg, retroviruses) Vector). RNA virus vectors are used in vector construction Sometimes, a polynucleotide encoding a negative selectable marker exhibits an RN form. When DNA viral vectors are used in vector construction, negative selection markers The polynucleotide that encodes Kerr is in DNA form. In one aspect, the viral vector is a retroviral vector. Can be used Examples of retroviral vectors include Moloney murine leukemia virus, spleen necrosis Viruses and retroviruses such as Rous sarcoma virus, Harvey sarcoma Virus, avian leukemia virus, human immunodeficiency virus, myeloproliferative sarcoma virus But not limited to vectors derived from virus and breast cancer virus. Not only. The vector is preferably an infectious, replication defective retroviral particle. You. Retroviral vectors transfer retroviral genes into eukaryotic cells It is useful as an agent that mediates transmission. Retroviral vectors are generally Removal of the majority of the sequences encoding the structural genes of the virus, leaving the remains of interest It is constructed in such a way that it is replaced by a gene (s). Most often, structural inheritance The offspring (ie, gag, pol and env) are constructed using genetic engineering techniques known in the art. To remove from the retrovirus backbone. vector vector obtained by removing the gag, pol and env genes. Cookbone is a 5 'LTR, a packaging signal, a heterogeneous object of interest. One or more cloning sites into which the gene (s) can be introduced and 3 'LTR. A preferred vector backbone is the G1 vector backbone. McLoughlin et al., "Virology", 195: 1-5 (1993). ) And “New Retroviral Vectors” published July 25, 1991. It is disclosed in PCT Patent Application No. WO 91/10728. Heterogeneous gene (s) are assembled into the provirus backbone by standard techniques. This results in the formation of a retroviral vector. Retro virus Vector production techniques are described in PCT application WO 91/10728 and in the following literature: Mentano et al., "Journal of Virology", 61: 1647-165. 0 (1987), Vendors et al., Journal of Viology, 61: 1639-1646 (1987) and Miller et al., "Biotechnics", 7: 980-990 (1989). The simplest construct is a retro A single gene replaces the structural gene of irs, which is then It is transcribed under the control of a viral regulatory sequence in (LTR). Multiple Retroviral vectors have been constructed that can transfer any gene into target cells. You. Usually, in the above vector, one gene is under the regulatory control of the viral LTR, The second gene is expressed from the spliced message or itself Is under the control of an internal promoter. Suitable blowers include SV40 Motor, human cytomegalovirus (CMV) promoter, beta-acto Tin promoter, alpha-fetoprotein promoter, and pair of interest The heterologous gene being an elephant has any promoter naturally associated with it. In addition, the policy Stronic vectors are created by using an internal ribosome entry site Can be done. Retroviral vectors include plasmids, segments of viral DNA, May be in the form of a segment of proviral DNA. In the case of this invention, A retroviral vector is G1TK1SvNa, which was published on March 9, 1995. Published, titled "Treatment of human tumors by genetic transformation of human tumor cells" It is disclosed in PCT Patent Application No. WO 95/06486. Retroviral vectors are introduced into packaging cells, Allow producer cells to form. Gag, po By providing the l and env genes, a set of infectious but replication-defective A retroviral vector can be packaged with the recombinant retrovirus. Be Transfection, transduction, calcium phosphate precipitation, electroporation And standard transfection techniques, including liposome-mediated DNA transfer Is introduced into the cell. Examples of packaging cells that can be used include PE501 , PA317, Psi-2, Psi-AM, PA12, T19-14X, VT- 19-17-H2, Psi-CRE, Psi-CRIP, GP + E-86, GP + EnvAM12, PG13 and DAN cell lines, but not limited to Not necessarily. In this invention for producing a recombinant retrovirus A preferred producer cell line is designated PA317 / G1TK1SvNa. Producer cell line, disclosed in PCT application WO 95/06486 Have been. Negative selectable markers include viral thymidine kinases such as herpes simplex Illthymidine kinase, cytomegalovirus thymidine kinase and varicella Ilstymidine kinase, xanthine-guanine phosphoribosyl transferase But not limited to cytosine and cytosine deaminase . Retroviral vector containing a polynucleotide encoding a negative selectable marker Transduce T cells. Generally, about 10⁶~ About 10⁹, Preferably about 10⁷ ~ About 10⁸Of T cells were transduced with the retroviral vector, which 0^Fivecfu / ml to about 10⁹cfu / ml, preferably about 2 × 10⁶cfu / ml ~ about 1 × 10⁸cfu / It can be contained in about 2 ml to about 500 ml of retroviral supernatant, with a titer of ml. Once the T cell contains a polynucleotide encoding a negative selectable marker, When transduced into viral vectors, T cells suffer from recurrent or chronic leukemia Administered to the host. Hosts are animal hosts, and especially mammalian hosts, such as humans and Non-human primate host. Transduced T cells are known to those skilled in the art. Means, such as intravascular administration, such as intravenous or intraarterial administration, or intraperitoneal Administered by administration. In one embodiment, the transduced T cells are bolus injected Is administered as The transduced T cells are in an amount effective to provide a therapeutic effect, i. That is, it is administered in an amount effective to treat recurrent or chronic leukemia in the host. General In addition, the transduced T cells^FiveCells / kg to about 10⁹Cells / kg, preferably About 2 × 10^FiveCells / kg to about 1 × 10⁷Administered in an amount of cells / kg. The transduced T cells are treated with an acceptable pharmaceutical carrier, such as saline solution or water. Buffer, for example, phosphate buffer, Tris buffer, Plasmalight A (Baxter ) Or lactated Ringer's solution. Selection of a suitable pharmaceutical carrier Seem to be obvious to those skilled in the art from the doctrine contained in this specification. You. Alternatively, the transduced T cells are permissive until the cells are administered to a host. The resulting cryopreservation medium (eg, phosphate buffered saline, 5% DMSO and human albumin) (A medium containing min). Prior to administration, cells and medium are thawed and cells And the medium is administered to the host after thawing. Long enough that the transduced T cells can produce a therapeutic effect in the host After a period of time, but before the onset of graft-versus-host disease, The method kills transduced T cells, especially transduced proliferative versus host transplantation. To kill unireactive T cells, ie, T cells that can provide a graft-versus-host effect Thus, it is administered to a host in an amount effective to prevent the onset of graft-versus-host disease. Preferably, T cells that are graft-reactive to host (therefore, the T cells are Can provide a graft versus host effect through recognition of the MHC class I antigens of the principal cells) Is in the proliferative phase and results in some of the T cells, eg, a leukemia graft effect Or if some of the T cells that provide antiviral effects are in sedation or non-proliferation phase At this time, an interacting agent is administered. The interactor or prodrug is injected at the time When given, it results in the killing of proliferating T cells, which can lead to a graft-versus-host effect, Non-proliferative containing a portion of T cells that confers a leukemic graft or antiviral effect T cells remain despite administration of interacting agents or prodrugs. Sand The majority of the T cells involved in GVHD induction are preferentially eliminated, and Other T cells that can provide an implant or antiviral effect survive. In general, The interacting agent may be present for about 10 days to about 50 days after administration of the transduced T cells, preferably It is administered between about 14 days to about 28 days, more preferably on day 21. If the negative selectable marker is a viral thymidine kinase, such as those described above, If the interaction or chemotherapeutic agent or prodrug is Analogs such as ganciclovir, acyclovir, and 1-2-deoxy-2 -Fluoro-β-D-arabinofuranosyl-5-iodouracil (FIAU) Selected from the group consisting of: The above-mentioned interacting agents serve as viral substrates as substrates. Efficiently utilized by midin kinase, i.e., the interacting agent is viral Increases T cells that express thymidine kinase and are particularly graft-reactive against host Transduction by lethal integration into the DNA of the transduced T cells to be propagated. Induces T cell death. If the negative selectable marker is cytosine deaminase, preferred interactors Or the prodrug is 5-fluorocytosine. Cytosine deaminase contains 5 -Converts fluorocytosine to highly cytotoxic 5-fluorouracil. sand That is, transduced T cells expressing the cytosine deaminase gene are 5-fluoro Converts cytosine to 5-fluorouracil and is killed. The interaction agent or prodrug is administered at an effective lethal dose of the transduced T cells. . The interacting agent is preferably administered by systemic administration, for example, intravenous administration. one Generally, the interaction agent is present in about 2 mg / kg / day to about 3-18 days, preferably about 5 days. It is administered in an amount of about 10 mg / kg / day, preferably about 10 mg / kg / day. Preferred tool In an exemplary embodiment, the interactant or prodrug is 5 mg / kg every 12 hours for a period of 5 days. Is administered in an amount of The host develops graft-versus-host disease by the desired point in time when killing of the transduced T cells is desired. When expressed, by administering the interacting agent at the onset of graft-versus-host disease, Graft-versus-host disease in the host is treated. That is, by using the method of the present invention, by administering T cells to a patient, Patients with recurrent or chronic hematologic malignancies or leukemia are treated and T cells are Killing T cells after exerting the desired therapeutic effect will reduce the incidence of graft versus host disease Can be prevented. Leukemias that can be treated with transduced T cells include multiple myeloma (M M), myelodysplastic syndrome, chronic myelogenous leukemia (CML), chronic lymphocytic leukemia (CLL), acute myeloid leukemia (AML), acute lymphoblastic leukemia (ALL) , Non-Hodgkin's lymphoma, Hodgkin's disease and myelofibrosis Not necessarily. The advantage of this invention is that host disease is a major cause of morbidity and lethality. Because graft disease can be prevented by administration of prodrugs or interacting agents, Genetically engineered to include a polynucleotide encoding a selectable marker. T cells that have been recruited are more recurrent or chronic leukemia than non-engineered T cells. It is safe to use in the treatment of disease. Graft versus host disease Because of the degree of incompatibility between patients, the method of the present invention allows elderly patients to And genetically unmatched donors, eg different siblings of HLA and matched unrelated donors Will expand the number of patients eligible for allogeneic bone marrow transplantation. Further, the timing of administration of the interacting agent or prodrug may be dependent on the GVHD response. The majority of germ cells (ie, T cells involved in inducing GVHD) are preferentially removed To leave more of the immunological T cell repertoire in the patient Can be At least a portion of leukemic graft-reactive cells and associated with GVHD T cells exhibiting reactivity with antigens other than the above are treated with an interacting agent or a prodrug. Would also promote a reduction in the frequency of EBV lymphomas and infections. In addition to treating leukemia, the methods may be applied to the treatment of other diseases and disorders. You. For example, this method may be used in solid tumor malignancies, especially when the tumor metastasizes and the tumor cells It can be applied to treatment when found in the marrow. During the procedure, the patient is High-dose chemotherapeutic treatment is performed with or without firing, followed by allogeneic T Life-saving measures are performed by cell ablation bone marrow transplantation. Negative selectable marker or suicide inheritance T cells genetically engineered with a polynucleotide encoding a progeny GVHD is prevented by administration of interacting agents or prodrugs Is done. In this embodiment, the T cells exert a tumor versus graft (GVT) effect . Solid tumor malignancies that can be treated according to this method include breast cancer, neuroblastoma, Nerve cancer, ovarian and uterine cancer, and soft tissue sarcoma, but not limited to is not. Further, the above method of the invention may be used to treat acquired or genetic immunity or hematological disorders. Can be used for a procedure that includes the administration of a T cell depleted bone marrow graft following myelotomy. You. The above-mentioned diseases include AIDS, severe injury combined immunodeficiency (SCID), Viscott- Aldrich syndrome, lymphocyte dysfunction, bone marrow dysfunction, aplastic anemia, Anconi anemia, thalassemia, sickle cell anemia, enzyme deficiency (Gaucher disease, Osteoporosis, including glycemic and leukodystrophic) Diseases characterized by, but not limited to, the loss of bone marrow cells that destroy bones Do not mean. These diseases include anti-leukemic or anti-neoplastic graft effects Does not exist. In this embodiment, the engineered T cells are modified for bone marrow transplantation. Involved in good and reduced incidence of EBV lymphoma. GVHD is a prodrug or Is prevented by administration of an interacting agent. That is, according to another aspect of the invention, the host (human and non-human primates) And a method for treating a disease or disorder in a mammalian host. Treatment of a disease or disorder in a combined host involves excision of the host's bone marrow followed by T cell depletion. Administering to the host a bone marrow transplant. The method involves myelotomy of the host . The T cell depleted bone marrow graft is then administered to the host. Then select from the above Genetic to include a polynucleotide encoding a negative selectable marker that can be selected The sub-manipulated T cells are administered to the host. Prior to the onset of graft-versus-host disease, An interactor or prodrug (eg, as described above) may be engineered in the host. Is administered to the host in an effective lethal dose for the killed T cells. Diseases or disorders that can be treated according to this method include those described above. It is not limited to them. Polynucleotide encoding a negative selectable marker The vector is a suitable expression vehicle, such as those described above, e.g., viral vectors, e.g., For example, it can be included in a retrovirus vector. The engineered T cells are administered to a host in an amount effective to produce a therapeutic effect. Can be This amount can be as described above. Genetically modified T cells to be administered The exact amount will depend on a variety of factors, including the age, weight and sex of the patient, Disease or disorder, and its extent and severity. Sufficient time for the engineered T cells to provide a therapeutic effect in the host Prodrug or interaction, but before the onset of graft-versus-host disease The agent may be the same as described above, and may be a genetically engineered T cell, particularly Administered in an amount effective to kill the engineered T cells capable of providing a graft effect This prevents the development of graft versus host disease. Genetically modified T cells The time until administration of the interacting agent after administration of can be the same as described above. Example Hereinafter, the present invention will be further described with reference to examples. It is not intended to be limited thereby. Example 1 Herpes simplex virus thimi for patients with chronic or recurrent multiple myeloma T cells transduced by a retroviral vector containing a gin kinase gene Of ganciclovir followed by ganciclovir Collection of donor lymphocytes Collect 50-100 ml of donor blood and at least 2.5-5 x 10⁷Harvest cells I do. Mix blood with an equal volume of sterile phosphate buffered saline (PBS), (Monhoprep, Nycomed) to separate mononuclear cells. Next The cells are then washed three times in sterile PBS. 100 units / ml penicillin and 1 1 μg / ml streptomycin (pen-strep, Gibco-BRL) × 10⁶At a density of cells / ml, an additional 1 μg / ml of anti-CD3 antibody (orthoclonal Cells were resuspended in serum-free AIM-V medium containing OKT3, ortho-biotech). Cloudy, 5% CO at 37 ° C_TwoIncubate for 24 hours. Recombinant human in Add Tarleukin-2 (Kilon Corporation) at 1500 units / ml and add 3 5% CO at 7 ° C_TwoCulture the cells for a period of up to 7 days. Lymphocytes in exponential growth phase Sometimes, they are transduced with a retroviral vector. Transduction of lymphocytes with G1TK1SvNa About 1 × 10⁸Herpes simplex virus thymidine kinase (TK) ) Retroviral vector GITK containing gene and neomycin resistance gene Transduce with 1 SvNa. The transduction was 2 × 10⁸cfu ~ 1 × 10⁹cfu 100 ml of the virus supernatant containing the retroviral vector from Example 1 to the lymphocytes This is achieved by: The retroviral vector G1TK1SvNa contains 199 Further described in PCT Application No. WO 95/06486 published Mar. 9, 5 You. Fresh viral supernatant was supplemented with additional amounts of interleukin 2 and protamine sulfone. Added daily for a total of 3 days with Fate, 1500 units / ml final interlo An ikkin 2 concentration and 5 μg / ml protamine sulfate are achieved. Supernatant After every addition of protamine sulfate and_Two24 at 37 ° C Incubate for hours. Twenty-four hours after the third transduction, cells were pen-strep and 1500 units / m2. 1 x 10 in fresh medium containing 1 interleukin 2⁶Resuspend at a density of cells / ml Incubate for 3-5 days. Next, Geneticin was added at 300 μg / Add cells at an active concentration of 1 ml, sort cells for 3 days, centrifuge, then Resuspend in AIM-V medium containing Ikin-2 and culture until a sufficient number of cells are obtained I do. Generally, the cells are cultured for at least another 4 days. Transduction and selection efficiencies are measured by the ganciclovir lethality assay. Sampling 1-2% of transduced cells for ganciclovir lethality assay . (Minimum 2 × 10 to perform this test⁶Cells are needed. This test is A containing 1500 units / ml recombinant interleukin-2 in tissue culture flask Suspend the transduced lymphocytes in 5.0 ml of IM-V (Gibco-BRL) medium This is done by: Prepare a total of three flasks. Ganciclovir frass In addition to two of the two, the first was 20 micromolar and the second was 50 micromolar. Molar concentration. A third flask is used as a normal control. Cells for 5 days Incubate at 37 ° C. in 5% CO 2 for 5 minutes. 3 in ganciclovir and Count the percentage of live cells (trypan blue negative) after 5 days of culture To count. If the ganciclovir lethality at a concentration of 50 micromolar is less than 85%, Reselect cells in Geneticin as described. Keep cells in a cryopreserved Inject only if clovir mortality is equal to or greater than 85%. 2 injections Collect enough cells first to supply enough cells for entry (if needed) Expand and cryopreserve for each patient. Also note that transduced lymphocytes Subset analysis by FACS (CD3, CD4, CD8, CD19 and And CD56). Infusion of transduced lymphocytes and administration of ganciclovir. For patients who have received allogeneic bone marrow transplants with T cells removed, If evidence of persistent disease or measurable recurrence at any time Inject the transduced lymphocytes. For patients with persistent disease, bone marrow aspirate or Indicates that more than 20% of the plasma cells are present in the biopsy and / or The M-component is present and has not been reduced in the last 6 weeks, and No reduction in Bence Jones proteinuria during last 6 weeks . 1 × 10 for each of 3 patients⁶Administer transduced lymphocytes in the amount of lymphocytes / kg . Administer 1 to 50 ml of lymphocytes as a bolus infusion and observe each patient for 4 hours thereafter. Sympathize. Twenty-one days after administration of the patient with the transduced lymphocytes, or graft-versus-host disease (GV HD) develops early in patients with ganciclovir (Cytovine, Synte (X Corporation, Palo Alto, CA) for 5 days at 12:00 It is administered by intravenous infusion in an amount of 5 mg / kg every time. 4 after injection of transduced lymphocytes For patients who have a complete or partial response with a continuous reduction in measurable condition on day 2 Does not give a second lymphocyte infusion until a plateau or progression of the disease is observed. A complete response is required for a minimum of 2 weeks with the following requirements: (i) immunofixation in urine and serum (Ii) the bone marrow is sufficiently cellular (ie> 20%) and plasma cells are less than 3%. (Iii) Serum calcium levels No elevation and (iv) no new bone lesions or expansion of existing lesions I should do it. Partial response is for at least 4 weeks with the following conditions: (i) at least Reduction of serum M-component by up to 5%, (ii) less than 200 mg / 24 hours and pretreatment Reduction of urinary M protein to less than 10% of the value and (iii) Or the absence of parenchyma plasmacytoma. As an improvement, compared to the baseline value 20-25% reduction in serum paraprotein levels and urinary light chain excretion A 25-50% reduction in bone marrow infiltration by plasma cells compared to the baseline value should also be included. is there. Patients with a partial response without a continuous decline in M-protein may include transduced lymphocyte 42 days after the first injection, the same number of transduced lymphocytes is administered as during the first injection . If the patient does not develop GVHD, ganciclovir will not be administered. For this example, the dose levels are as follows: Dose level Lymphocyte infusion dose (Lymphocytes / kg) I 1 × 10⁶ II 5 × 10⁶ III 1 × 10⁷ IV 2 × 10⁷ V 5 × 10⁷ Also, for the purpose of this example, the GVHD is graded as follows. Clinical grading of acute GVHD Staging by organ system The first three patients do not achieve a complete or partial response and have stage III or IV If VHD is not expressed, the dose of lymphocytes should be 1 × 10⁶Lymphocytes / kg to 5 × 1 0⁶Increase to lymphocytes / kg (ie dose level II). The treatment plan for each dose level is the same as described above for dose level I (Ie, 1 × 10⁶Lymphocytes / kg). For an additional 6 patients, 3 Lower than the dose level at which one of the responders responds or at which injury is observed Start with the quantity. The specifications and publications of all patents cited in this application as references (publicly available features). And specific items in the database) To the same extent as if cited as part of the description, those patents, publications and data Quote the entire database description here as it is and make it part of the description . However, the scope of the present invention is not limited to the above embodiments. And The invention may be practiced other than as specifically described, and also May be included within the scope of the invention.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ジェイコブ，ウィリアム・エフアメリカ合衆国20874メリーランド州ジャーマンタウン、タイドウィンズ・ウェイ 20204番 (72)発明者チアン，ヤウェン・エルアメリカ合衆国20854メリーランド州ポトマック、ベッドフォードシャー・アベニュー11423番────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF) , CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, S D, SZ, UG), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ , MD, RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AU , AZ, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, H U, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ , LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, R O, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM , TR, TT, UA, UG, UZ, VN (72) Inventor Jacob, William F United States 20874 Maryland Thaertown, Tidewinds Way No. 20204 (72) Inventors Chiang, Ywen El United States 20854 Maryland Po Tomac, Bedfordshire Aveni No. 11423

Claims

[Claims] 1. A method of preventing graft versus host disease in a host undergoing treatment for recurrent or chronic leukemia, comprising using a T cell genetically engineered to contain a polynucleotide encoding a negative selectable marker. And administering an interacting agent to the host prior to the onset of graft-versus-host disease, wherein the interacting agent interacts with the negative selectable marker. Administered in an amount effective to kill genetically engineered T cells capable of exerting a graft versus host effect in a host. 2. 2. The method of claim 1, wherein the negative selectable marker is selected from the group consisting of thymidine kinase, xanthine-guanine phosphoribosyltransferase and cytosine deaminase. 3. 3. The method of claim 2, wherein the negative selectable marker is selected from the group consisting of herpes simplex virus thymidine kinase, cytomegalovirus thymidine kinase, and varicella virus thymidine kinase. 4. 4. The method of claim 3, wherein the negative selectable marker is herpes simplex virus thymidine kinase. 5. 2. The method of claim 1, wherein the polynucleotide encoding the negative selectable marker is included in a viral vector. 6. 6. The method according to claim 5, wherein the viral vector is a retroviral vector. 7. The method of claim 1, wherein the engineered T cells are administered in an amount from about 10 ⁵ cells / kg to about 10 ⁹ cells / kg. 8. 4. The method of claim 3, wherein the interacting agent is ganciclovir. 9. 9. The method of claim 8, wherein ganciclovir is administered in an amount from about 2 mg / kg / day to about 10 mg / kg / day. 10. 10. The method of claim 9, wherein ganciclovir is administered in an amount of about 10 mg / kg / day. 11. A method of treating a disease or disorder in a host, wherein treating the disease or disorder in the host comprises removing the bone marrow of the host, administering a T cell depleted bone marrow graft to the host, and (a) removing the bone marrow of the host. (B) administering to the host a T cell depleted bone marrow graft; (c) administering to the host T cells engineered to contain a polynucleotide encoding a negative selectable marker; and (d) C.) Administering to the host an interacting agent prior to the onset of graft-versus-host disease, provided that the interacting agent is capable of interacting with the host in the host through the interaction of the interacting agent with a negative selectable marker. Administering an effective amount to kill genetically engineered T cells capable of exerting a sexual graft effect. 12. 12. The method of claim 11, wherein the negative selectable marker is selected from the group consisting of thymidine kinase, xanthine-guanine phosphoribosyltransferase, and cytosine deaminase. 13. 13. The method of claim 12, wherein the negative selectable marker is selected from the group consisting of herpes simplex virus thymidine kinase, cytomegalovirus thymidine kinase, and varicella virus thymidine kinase. 14． 14. The method of claim 13, wherein the negative selectable marker is herpes simplex virus thymidine kinase. 15. 12. The method of claim 11, wherein the polynucleotide encoding the negative selectable marker is included in a viral vector. 16. 16. The method according to claim 15, wherein the viral vector is a retroviral vector. 17． Genetically modified T cells are administered in an amount of about 10 ⁵ cells / kg to about ¹⁰⁹ cells / kg, The method of claim 11. 18. 14. The method of claim 13, wherein the interacting agent is ganciclovir. 19. 19. The method of claim 18, wherein ganciclovir is administered in an amount from about 2 mg / kg / day to about 10 mg / kg / day. 20. 20. The method of claim 19, wherein ganciclovir is administered in an amount of about 10 mg / kg / day.