JP2000507946A

JP2000507946A - 血管形成のｐｌａ２阻害剤

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Publication number: JP2000507946A
Application number: JP9534590A
Authority: JP
Inventors: ジャクソン，ジェフリー・エイ; ウィンクラー，ジェイムズ・ディ
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1996-03-26
Filing date: 1997-03-26
Publication date: 2000-06-27
Also published as: WO1997035567A1; EP0904069A1; EP0904069A4

Abstract

(57)【要約】本発明は、過剰な、望ましくないかまたは不適当な血管形成により引き起こされる慢性疾患の治療におけるＰＬＡ₂阻害剤の新規使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】血管形成のＰＬＡ２阻害剤発明の分野本発明は、哺乳動物における不適当な、過剰なまたは望ましくない血管形成が起こっている疾患の治療に関する。発明の背景慢性疾患は、しばしば著しい血管形成を伴い、これは炎症性および／または増殖性状態に寄与するかまたはこれを維持でき、あるいは血管の侵入性増殖による組織の破壊を引き起こす。ＩＬ−１βおよびＴＮＦαはｉｎｖｉｖｏでの血管形成の有効な誘発物質であることが判明しており、通常、慢性炎症性疾患の病状に関与する(Folkman and Shing，J．Biol．Chem.，267:10931，1992)。血管形成は、一般に新生もしくは置換血管の発達、または、血管新生を説明するのに用いられる。これは必要で生理学的に正常なプロセスであり、これにより胚中に脈管構造が確立される。血管形成は、一般に正常な成人においては起こらない。しかしながら、多くの疾患は持続性かつ未制御の血管形成を特徴とする。たとえば、関節炎においては、新生毛細血管が関節に侵入し、軟骨を破壊する (Colville-Nash and Scott，Ann．Rheum．Dis.，51，919，1992)。糖尿病においては、新生血管は硝子体および血液に侵入し、失明を引き起こす(および、多くの種々の眼疾患を引き起こしうる)(Brooksら，Cell，79，1157，1994)。アテローム性硬化症の過程は血管形成と関連づけられている(Kahlonら，Can．J．Cardi ol．8，60，1992)。腫瘍増殖および転移は血管形成依存性であることが判明している(Folkman，Cancer Biol，3，65，1992;Denekamp，Br．J．Rad.，66，181，1 993;Fidler and Ellis，Cell，79，185，1994)。主な疾患における血管形成の関与の認識から、血管形成の阻害剤の同定および開発のための研究が行われてきている。これらの阻害剤は一般に、たとえば、血管形成シグナルによる内皮細胞の活性化；分解酵素の合成および放出；内皮細胞の移行；内皮細胞の増殖；および毛細管の形成などの血管形成カスケードにおける別個の標的に応じて分類される。したがって、血管形成は多くの段階において起こり、これらの種々の段階で血管形成をブロックするように働く化合物の発見および開発が現在試みられている。血管形成の阻害剤が、さまざまな機構により働くが、癌および転移(O'Reilly ら，Cell，79，315，1994;Ingberら，Nature，348，555，1990)、眼疾患(Friedl anderら，Science，270，1500，1995)、関節炎(Peacockら，J．Exp．Med.，175 ，1135，1992;Peacockら，Cell．Immun.，160，178，1995)および血管腫(Tarabo lettiら，J．Natl．Cancer Inst.，87，293，1995)などの疾患において有用であることを示唆する開示がある。しかし、血管形成成分を有するこれらの疾患の治療のための哺乳動物において血管形成を遮断する適当な小分子阻害剤を見いだす必要が依然として存在する。本出願は、サイトカイン産生を遮断する化合物は、血管形成に関する初期サイトカインシグナルを除去することにより血管形成を遮断できるという新しい知見を教示する。発明の要約本発明は、過剰な、不適切な血管形成により引き起こされる慢性炎症性または増殖性または脈管形成疾患の治療に対するＰＬＡ₂阻害剤の新規使用に関する。図面の簡単な説明図ＩＡおよびＢは血管形成の血管キャスティングモデルにおける化合物Ｉの効果を表し、図ＩＡは血管指数を示し、図ＩＢは肉芽腫乾燥重量を示す。発明の詳細な記載本発明は、過剰なまたは不適切な血管形成により引き起こされる慢性炎症性疾患の治療に対するＰＬＡ₂阻害剤、特に低分子量の１４ｋＤａＰＬＡ₂の新規使用に関する。ホスホリパーゼＡ₂ ［ＰＬＡ₂(ＥＣ３．１．１．４)］はリン脂質のｓｎ−２位からのアラキドン酸の遊離の原因となる。これらは炎症の発生病理およびおそらくは免疫不全においても、両方とも細胞結合酵素ならびに細胞外可溶性酵素として、重要な役割を果たすと考えられる。低分子量、哺乳動物ＩＩ型１４ｋＤａＰＬＡ₂はよく解析されており、炎症性液体中に細胞外形態(Kramerら，J．Bio l． Chem.，264:5768-5775(1989))および細胞結合形態(Kandaら，Biochemical and Biophysical Research Communications，163:42-48(1989))の両方で存在することが知られており、種々の細胞および組織においてまたは、抗原性活性化因子または前炎症性メディエイター、たとえばインターロイキン(ＩＬ)−１、ＩＬ−６または腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)などに応答して放出された場合細胞外で見いだされている。このような炎症性液体、組織滲出液または血清におけるその存在は、したがって、ＩＩ型−１４ｋＤａ−ＰＬＡ₂の炎症における役割と関連づけられる( Vadasら，(1985)Life Sci．36、579-587;およびSeilhamerら，(1989)J．Biol．C hem．)264，5335-5338)。最近、炎症障害におけるＰＬＡ₂活性の高い血清レベルは、１４ｋＤａ−ＰＬＡ₂がその一部であると指摘されている肝臓からの急性期蛋白質放出のサイトカイン誘発に起因するとされる(Crowlら，(1991)J．Biol．C hem．266，2647-2651)。加えて、可溶性ＰＬＡ₂活性は関節リウマチの患者の血清および関節滑液において著しく上昇する(Stefanskiら，J．Biochem.，100: 1297-303(1986))。さらに、増加する血清ＰＬＡ₂レベルは臨床的重篤度と正比例することが証明されている(Bomalaski and Clark，Arthritis and Rheumat．36: 190-198(1993))。ＰＬＡ₂の種々の阻害剤が出版物および米国特許に記載されている。たとえば、米国特許番号４９５９３５７；４９３３３６５；５２０８２２３；５２０８２４４；Marshallら，J．Rheumatology 18:１(1991)；Marshall ら，Phospholipase A2，PyuWong編，Plenum Press NY(1990)p169-181;Wilkerson ら，Eur．J．Med．Chem.，26:667，1991およびWilkerson，Antiinflammatory Phospholipase A2 inhibitors，Drugs of the Future，第15巻，No.2 p139- 148(1990)参照。したがって、ＰＬＡ₂はリン脂質からのアラキドン酸の遊離において重要であり、さらにリソリン脂質形成を介してＰＡＦの生成に役割を担うので、かかる酵素の阻害はこれにより引き起こされる疾患の治療において有用である。最近発見されたホスホリパーゼＡ₂の多くの新規形態がある。本発明における目的に関して、ＰＬＡ₂のｓｎ−２アシルヒドロラーゼ科の要素は、哺乳動物、または哺乳動物以外の供給源からのものである、低分子量および高分子量酵素に分類される。低分子量ＰＬＡ₂は一般に１２０００ないし１５０００の範囲の分子量を有する。高分子量は、ＳＤＳ電気泳動分析により、３００００または５６０００ｋＤａないし１１００００の範囲である。ホスホリパーゼＡ₂ ［ＰＬＡ₂(ＥＣ３．１．１．４)］はリン脂質のｓｎ−２位からのアラキドン酸の遊離の原因となる。これらは炎症の発生病理およびおそらくは免疫不全においても、両方とも細胞結合酵素ならびに細胞外可溶性酵素として、重要な役割を果たすと考えられる。低分子量、哺乳動物ＩＩ型１４ｋＤａＰＬＡ₂はよく解析されており、炎症性液体中に細胞外形態(Kramerら，J．Bio l．Chem.，264:5768-5775(1989))および細胞結合形態(Kandaら，Biochemical an d Biophysical Research Communications，163:42-48(1989))の両方で存在することが知られており、種々の細胞および組織においてまたは、抗原性活性化因子または前炎症性メディエイター、たとえばインターロイキン(ＩＬ)−１、ＩＬ− ６または腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)などに応答して放出された場合細胞外で見いだされている。このような炎症性液体、組織滲出液または血清におけるその存在は、したがって、ＩＩ型−１４ｋＤａ−ＰＬＡ₂の炎症における役割と関連づけられる(Vadasら，(1985)Life Sci．36、579-587;およびSeilhamerら，(1989)J．Biol ．Chem．)264，5335-5338)。最近、炎症障害におけるＰＬＡ₂活性の高い血清レベルは、１４ｋＤａ−ＰＬＡ₂がその一部であると指摘されている肝臓からの急性期蛋白質放出のサイトカイン誘発に起因するとされる(Crowlら，(1991)J．Bio l．Chem．266，2647-2651)。加えて、可溶性ＰＬＡ₂活性は関節リウマチの患者の血清および関節滑液において著しく上昇する(Stefanskiら，J．Biochem.，100 :1297-303(1986))。さらに、増加する血清ＰＬＡ₂レベルは臨床的重篤度と正比例することが証明されている(Bomalaski and Clark，Arthritis and Rheumat．3 6:190-198(1993))。ＰＬＡ₂の種々の阻害剤が出版物および米国特許に記載されている。たとえば、米国特許番号４９５９３５７；４９３３３６５；５２０８２２３；５２０８２４４；Marshal1ら,J．Rheumatology 18:１(1991)；Marshall ら，Phospholipase A2，PyuWong編，Plenum Press NY(1990)p169-181;Wilkerson ら，Eur．J．Med．Chem.，26:667，1991およびWilkerson，Antiinflammatory Phospholipase A2 inhibitors，Drugs of the Future，第15巻，No.2 p139- 148(1990)参照。したがって、ＰＬＡ₂はリン脂質からのアラキドン酸の遊離において重要であり、さらにリソリン脂質形成を介してＰＡＦの生成に役割を担うので、かかる酵素の阻害はこれにより引き起こされる疾患の治療において有用である。最近見出されたホスホリパーゼＡ₂の多くの新規形態がある。本発明における目的に関して、ＰＬＡ₂のｓｎ−２アシルヒドロラーゼ科の要素は、哺乳動物、または哺乳動物以外の供給源からのものである、低分子量および高分子量酵素に分類される。低分子量ＰＬＡ₂は一般に１２０００ないし１５０００の範囲の分子量を有する。高分子量は、ＳＤＳ電気泳動分析により、３００００または５６０００ｋＤａないし１１００００の範囲である。本発明においてＰＬＡ₂阻害剤としての使用に好ましい化合物は、構造式：［式中、Ｒ₁は、(ＣＨ₂)_nＯＨまたは(ＣＨ₂)_nＣＯ₂Ｒ₈であり；ｎは、０または１の整数であり；Ｘは、酸素または硫黄であり；Ｒ₂は、水素、ハロゲン、所望により置換されていてもよいＣ_1-8アルキル、またはＣ_1-8アルコキシであり；ｍは、０または１もしくは２の整数であり；Ｒ₃は、Ｓ(Ｏ)₂Ｒ₇であり；Ｒ₄は、水素またはＳ(Ｏ)₂Ｒ₇であり；Ｒ₅は、水素、ハロゲン、ＣＦ₃、ＣＨ₃、(ＣＨ₂)_tＣ(Ｏ)₂Ｒ₉、または（ＣＨ₂）_tＯＨであり；ｔは、０または１もしくは２の整数であり；Ｒ₆は、水素またはハロゲンであり；Ｒ₇は、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアリールＣ_1-2アルキル、または所望により置換されていてもよいＣ_1-8 アルキルであり；Ｒ₈は、水素またはＣ_1-4アルキルであり；Ｒ₉は、水素またはＣ_1-4アルキルである］により表される式(Ｉ)の化合物またはその医薬上許容される塩を包含する。Ｒ₁は、適当には、(ＣＨ₂)_nＯＨまたは(ＣＨ₂)_nＣＯ₂Ｒ₈である。好ましくは、Ｒ₁は(ＣＨ₂)_nＣＯ₂Ｒ₈であり、ｎは、好ましくは０である。Ｒ₈は、好ましくは水素またはメチル、より好ましくは水素、またはその医薬上許容される塩である。適当には、Ｒ₂は、独立して、１ないし２個のベンゼン環上の置換基であり、かかる置換基は、水素、ハロゲン、所望により置換されていてもよいＣ_1-8アルキル、またはＣ_1-8アルコキシ基から選択される。適当には、Ｒ₂がハロゲンである場合、塩素、臭素、フッ素またはヨウ素である。Ｒ₂が所望により置換されていてもよいＣ_1-8アルキルである場合、アルキルはハロゲン、たとえばフッ素で１ないし３回、置換されていてもよく、好ましくはトリフルオロメチル基である。所望により置換されていてもよいＣ_1-8アルキル基は、好ましいならば、１，１−ジメチルプロピル基などの分枝Ｃ５鎖または１，１，３，３−テトラメチルブチル基などのＣ８分枝鎖である。適当には、Ｒ₃は、Ｓ(Ｏ)₂Ｒ₇であり；Ｒ₇は所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアリールＣ_1-2アルキル、または所望により置換されていてもよいＣ_1-8アルキル基である。好ましくは、Ｒ₇がアリール基である場合、フェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルであり；Ｒ₇ がアリールアルキル基である場合、好ましくはベンジルである。適当には、アリール、アリールアルキルまたはアルキル基は、独立して、ハロゲン、トリフルオロメチル、アリールオキシ、メトキシ、ＣＨ₂ＯＨ、メチル、またはＣ(Ｏ)₂Ｈで１ないし３回置換されている。好ましくは、置換基はハロゲン、またはトリフルオロメチルである。置換基ハロゲン基は、好ましくはＣｌ、Ｂｒおよびフッ素である。好ましくは、置換基はアリール環の３，５−位または４−位にある。より好ましくは、アリール置換基は、３，５−ビス−トリフルオロメチル、４−トリフルオロメチル、４−ブロモ、４−クロロ、または４−フルオロである。Ｒ₇が、所望により置換されていてもよいアルキル基である場合、好ましくはメチルまたはＣ₈非分枝鎖である。メチル基は置換されている場合、好ましくは、たとえばトリフルオロメチル基におけるように１個またはそれ以上のフッ素で置換されている。Ｒ₄は、適当には、水素またはＳ(Ｏ)₂Ｒ₇である。好ましくは、Ｒ₄は水素である。Ｒ₄がＳ(Ｏ)₂Ｒ₇である場合、Ｒ₇基はビス構造を形成するＲ₃基におけるのと同じＲ₇基である。適当には、Ｒ₅は、水素、ハロゲン、ＣＦ₃、ＣＨ₂、ＣＨ₂Ｃ(Ｏ)₂Ｒ₉、または、ＣＨ₂ＯＨ(ここに、ｔは１である)である。好ましくは、Ｒ₅がＣＨ₂Ｃ(Ｏ)₂Ｒ₉ である場合、Ｒ₉はＣ_1-4アルキル、好ましくはｔ−ブチルである。好ましいＲ₅ 基は、水素、ＣＦ₃、またはハロゲンである。より好ましくは、Ｒ₅は水素またはＣＦ₃である。適当には、Ｒ₆は水素またはハロゲンであり；好ましくは水素である。Ｒ₆がハロゲンである場合、これは好ましくはフッ素または塩素である。本発明においてＰＬＡ₂の阻害剤として用いるさらなる化合物は、米国特許番号５４７０８８２、Ｄｉｘｏｎら、１９９５年１１月２８日付与；ＷＯ９５／３３７１２、Ｄｉｘｏｎら、１９９５年１２月１４日公開；米国特許番号５５４５６６９、Ａｄａｍｓら、１９９６年８月１３日付与；ＷＯ９５／３３４６１、Ａｄａｍｓら、１９９５年１２月１４日公開；ＷＯ９５／３３４６２、Ａｄａｍｓら、１９９５年１２月１４日公開；米国特許番号５４４７９５７、Ａｄａｍｓら、１９９５年９月５日付与；ＷＯ９５／３３４６０、Ａｄａｍｓら、１９９５年１２月１４日公開；ＷＯ９５／３３４５８、Ａｄａｍｓら、１９９５年１２月１４日公開；ＷＯ９５／３３７１３、Ａｄａｍｓら、１９９５年１２月１４日公開；ＷＯ９５／３３７１５、Ｅｇｇｌｅｓｔｏｎら、１９９５年１２月１４日公開；米国特許番号５４９６８５５、Ａｄａｍｓら、１９９６年３月５日付与；ＷＯ９６／２２７７０、Ａｄａｍｓら、１９９６年８月１日公開に見られる。適当な医薬上許容される塩は、当業者に周知のものであり、塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸などの無機および有機酸の塩基性塩を包含する。加えて、式(Ｉ)の化合物の医薬上許容される塩は、たとえば置換基Ｒ₁ がカルボキシ基を含む場合、医薬上許容されるカチオンと形成されてもよい。適当な医薬上許容されるカチオンは当業者に周知であり、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよび第４アンモニウムカチオンが包含される。以下の用語は本明細書において用いる場合、次のものを意味する：・「ハロ」 − すべてのハロゲン、即ち、クロロ、フルオロ、ブロモおよびヨード。・「Ｃ_1-8アルキル」または「アルキル」 − 鎖長が限定されていない場合、炭素数１ないし８個の直鎖および分枝鎖ラジカルであり、メチル、エチル、ｎ− プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどを包含するが、これに限定されない。・「アリール」 − フェニルおよびナフチル。・「アリールアルキル」は本明細書において用いて、特記しないかぎり前記に定義したＣ_1-4アルキルに結合したフェニルおよびナフチルを意味する。本発明の化合物は１個またはそれ以上の不斉炭素原子を含有し、ラセミおよび光学活性な形態で存在してもよい。これらの化合物はすべて本発明の範囲内に含まれる。本発明において用いられる式(Ｉ)の化合物の例は：２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−ブロモフェニルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］フェノキシ］安息香酸; ２−［２−(２−ナフチルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−(２−ナフチルスルホンアミド)フェノキシ］安息香酸；２−［２− ［３，５−ビス(トリフルオロメチルフェニル］スルホンアミド−４−トリフルオロメチルフェノキシ］−５−(１，１−ジメチルプロピル)安息香酸；２−[２−(オクチルスルホンアミド)フェノキシ]安息香酸；(２−［２−［[( オクチルスルホニル)アミノ]フェノキシ］安息香酸とも称する)；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−メチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−［[(メチルスルホニル)アミノ］−４−(トリフルオロメチル)フェノキシ］安息香酸；２−［２−［(オクチルスルホニル)アミノ］−４−(トリフルオロメチル)フェノキシ］安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニル−Ｎ−メチルスルホンアミド］−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−(フェニルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−クロロフェニルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−(１−ナフチルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチル−フェノキシ］安息香酸；２−［２−(フェニルメチルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−トリフルオロメチルフェニルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−トリフルオロメチルフェノキシ］フェニル酢酸；２−［２−(４−フルオロフェニルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−メトキシフェニルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−（トリフルオロメチル)−フェノキシ］−４−メトキシ安息香酸；２−［２−［Ｎ，Ｎ−ビス［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホニル］アミノ］−４−(トリフルオロメチル)フェノキシ］−４−メトキシ安息香酸；２−［２−［Ｎ，Ｎ−ビス［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホニル］アミノ］−４−(トリフルオロメチル)フェノキシ］安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−ブロモフェノキシ］安息香酸；２−［２−［[[３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニル]スルホニル]アミノ］−４−ブロモフェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−ヒドロキシメチルスルホンアミド)−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸；６−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−トリフルオロメチルフェノキシ］−２−メトキシ安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−トリフルオロメチルチオフェノキシ安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４，５−ジクロロ−フェノキシ］安息香酸；２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］− ４−トリフルオロメチルフェノキシ］ベンジルアルコール；２−［２−(４−クロロフェニルスルホンアミド)−４，５−ジクロロフェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−ブロモフェニルスルホンアミド)−４−(カルボキシメチル)フェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−ブロモフェニルスルホンアミド)−４−(ヒドロキシエチル)フェノキシ］安息香酸；２−［２−(４−ブロモフェニルスルホンアミド)−４−(カルボキシメチル)− フェノキシ］安息香酸メチル；２−[２−(４−ブロモフェニルスルホンアミド)−４−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル)−フェノキシ]安息香酸；２−［２−［(トリフルオロメチルスルホニル)アミノ］−４−(トリフルオロメチル)フェノキシ］安息香酸；２−［ｔｒａｎｓ−２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］シクロヘキシルオキシ］ベンジルアルコール；および２−［ｔｒａｎｓ−２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］シクロヘキシルオキシ］安息香酸である。式(Ｉ)の化合物またはその医薬上許容される塩を治療において用いるために、通常これを標準的医薬手法にしたがって医薬組成物に処方する。したがって、本発明はさらに、有効かつ非毒性量の式(Ｉ)の化合物と医薬上許容される担体または希釈剤とを含んでなる医薬組成物に関する。式(Ｉ)の化合物、その医薬上許容される塩およびこれを配合した医薬組成物は、薬剤投与に通常用いられるいずれかの経路、たとえば経口、局所、非経口または吸入によって、都合よく投与される。式(Ｉ)の化合物は、式(Ｉ)の化合物を常法にしたがって標準的医薬担体と組合せることにより調製される通常の投与形態で投与される。かかる医薬上許容される担体または希釈剤およびその製造方法は当業者には周知であり、Remington's Pharmaceutical Scienes，第18版，Alfonso R．Genarao編，1990，Mack Publishing Co．およびthe Handbook of Pharmaceut ical Excipients，APhA Publications，1986などのテキストに見ることができる。式(Ｉ)の化合物はまた、既知の第二の治療的に活性な化合物、たとえばステロイドまたはＮＳＡＩＤと組合せて通常の投与形態で投与できる。これらの方法は、所望の製剤に適したように、混合、造粒および圧縮または成分を適当に溶解することを含む。医薬上許容される担体または希釈剤の形態および特性は、組合せる活性成分の量、投与経路および他の周知の要因に依存すると考えられる。担体は、処方物の他の成分と適合し、摂取者に有害でないという意味で「許容され」なければならない。用いられる医薬担体は、たとえば固体または液体のいずれでもよい。固体担体の例はラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などである。液体担体の例は、シロップ、ピーナツ油、オリーブ油、水などである。同様に、担体または希釈剤は、グリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートなどの当該分野で周知の遅効性物質を単独またはワックスと共に含んでもよい。広範囲におよぶ医薬形態を用いることができいる。したがって、固体担体を用いる場合、製剤は、錠剤にしたり、粉末またはペレット形態でハードゼラチンカプセル中に入れたり、トローチまたはロゼンジの形態にできる。固体担体の量は広範囲におよぶが、好ましくは約２５ｍｇないし約１ｇである。液体担体を用いる場合、製剤はシロップ、乳剤、ソフトゼラチンカプセル、アンプルなどの滅菌注射可能な液体または非水性懸濁剤の形態にされる。式(Ｉ)の化合物は局所的に、即ち非全身性投与により投与できる。これは、式 (Ｉ)の化合物の外部から表皮へまたは口腔内への投与、およびこのような化合物の耳、目および鼻への点滴注入が包含され、化合物が著しく血流に入らないようにする。対照的に、全身性投与は、経口、静脈内、腹膜組織内および筋肉内投与を意味する。局所投与に適した処方物は炎症部位へ皮膚を通して浸透するのに適した液体または半液体製剤、たとえばリニメント、ローション、クリーム、軟膏またはペースト、および目、耳または鼻への投与に適した滴剤を包含する。活性成分は、局所投与に関しては、処方物の０．００１％ないし１０％ｗ／ｗ、たとえば１％ないし２重量％含まれる。しかし、処方物の１０％ｗ／ｗを含んでもよいが、５％ｗ／ｗ未満、より好ましくは０．１％ないし１％ｗ／ｗを含むのが好ましい。本発明のローションは、皮膚または目への適用に適したものを包含する。眼ローションは所望により殺菌剤を含んでもよい滅菌水性溶液を含み、滴剤の調製と類似の方法により調製される。皮膚へ適用するためのローションまたはリニメントはさらにアルコールまたはアセトンなどの皮膚の乾燥を促進し、冷却する薬剤および／またはグリセロールあるいはヒマシ油または落花生油などの油などの保湿剤を含んでもよい。本発明のクリーム、軟膏またはペーストは外部適用用の活性成分の半固体製剤である。これらは、活性成分を微粉末または粉末形態で、単独または水性または非水性流体中溶液または懸濁液中で、適当な機械を用いて、グリース状または非グリース状基剤と混合することにより調製される。基剤は、炭化水素、たとえば、固型、軟または流動パラフィン、グリセロール、ミツロウ、金属石鹸；漿剤；アーモンド油、トウモロコシ油、落花生油、ヒマシ油またはオリーブ油などの天然源の油；羊毛脂またはその誘導体またはステアリン酸またはオレイン酸などの脂肪酸などをアルコール、たとえばプロピレングリコールまたはマクロゲルとともに含んでもよい。処方物は適当な界面活性剤、たとえばアニオン、カチオンまたは非イオン性界面活性剤、たとえばソルビタンエステルまたはそのポリオキシエチレン誘導体を含んでもよい。また、懸濁化剤、たとえば天然ゴム、セルロース誘導体、または無機物質、たとえば石英含有シリカ、および他の成分、たとえばラノリンを含んでもよい。本発明の滴剤は、滅菌水性もしくは油性溶液または懸濁液を含んでもよく、活性成分を殺菌剤および／または殺真菌剤および／または他の適当な保存剤の適当な水性溶液中に溶解し、好ましくは界面活性剤を配合することにより調製される。次いで得られた溶液を濾過により清澄化し、適当な容器に移し、これを密封し、加圧殺菌また９８〜１００℃に半時間維持することにより滅菌する。別法として、溶液を濾過により滅菌し、無菌技術により容器に移す。滴剤に配合するのに適した殺菌剤および殺真菌剤の例は、硝酸または酢酸フェニル水銀(０．００２％) 、ベンザルコニウムクロリド(０.０１％)および酢酸クロルヘキシジン(０.０１％)である。油性溶液の調製に適した溶媒は、グリセロール、希釈アルコールおよびプロピレングリコールを包含する。経口投与用の各投与単位は、好ましくは１ないし２５０ｍｇ(非経口投与用には、好ましくは０.１ないし２５ｍｇ)の構造式(Ｉ)の化合物またはその医薬上許容される塩を遊離塩基換算で含有する。本発明の医薬上許容される化合物は、通常患者に毎日の投与計画にしたがって投与される。例えば成人患者について、これは、遊離塩基換算での式(Ｉ)の化合物またはその医薬上許容される塩の１ｍｇと５００ｍｇ、好ましくは１ｍｇと２５０ｍｇの間の経口用量、または０．１ｍｇと１００ｍｇ、好ましくは０．１ｍｇと２５ｍｇの間の静脈内、皮下、または筋肉内投与量であり、化合物を１日につき１ないし４回投与する。投与の形態、ならびに有効な投与量の選択は、なかでも治療される症状に依存する。投与様式および投与量の選択は当業者の技術範囲内である。脈管形成成分を有する慢性疾患は、糖尿病性網膜症および黄斑変性などの種々の眼球新生血管形成である。脈管構造の過剰なまたは増加した増殖を有する他の慢性疾患は腫瘍増殖および転移、アテローム性硬化症、およびある種の関節炎症状である。したがって、サイトカイン阻害剤はこれらの病態の脈管形成成分のブロックに有用である。本明細書において用いる「血管形成に不適当な過剰なまたは増加した増殖」なる用語はこれに制限されないが、血管腫および眼病を特徴とする疾患を包含する。本明細書において用いる「不適当な血管形成」なる用語は、癌、転移、関節炎およびアテローム性硬化症において起こるような組織増殖をともなう小胞増殖により特徴付けられる疾患を包含するが、これに限定されない。以下に記載するように、炎症性血管形成のモデルを用いてＰＬＡ₂阻害が血管の過剰なまたは不適当な増殖の組織破壊を止めることを証明する。これらの観察の基づいて、ＰＬＡ₂阻害剤、２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル) −フェニルスルホンアミド］−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸( 化合物Ｉ)を炎症性血管形成のｉｎｖｉｖｏ動物モデルにおいて血管形成を阻害する能力に関して試験した。慢性炎症のネズミエアパウチ肉芽腫モデル(Kimuraら，1985，J．Pharmacobio- Dyn.，8:393-400;Colville-Nashら，1995，J．Pharm．and Exp．Ther.,274;1463 -1472、この開示は全体として出典明示により本発明の一部とする)は炎症性細胞流入物、線維状組織増殖および強力な血管形成を特徴とする。これは炎症性血管形成の代表例であり、脈管形成性成分は肉芽腫の増殖および大きさに関係無く薬理学的に調節できることを実証する。加えて、血管形成は、血管キャスティング法により正確に定量できる。血管密度(および乾燥重量)に対する化合物の効果を肉芽腫誘発後６日間測定した。この時点が血管形成のピークであるかその付近であることが確認されている。化合物Ｉは血管指数において、有意の減少を示し、その最大減少は３０ｍｇ／ｋｇ、一日につき２回、腹膜組織内投与で３６％であった。正の対照として、メドロキシプロゲステロン、血管静止ステロイド(Grossら，1981,Proc.Natl.Acad. Sci．USA，78:1176-1180、この開示は全体として出典明示により本発明の一部とする)を用いた。この対照は、このモデルにおいて５０％の最大減少を示した。化合物Ｉ、メドロキシプロゲステロンのどちらも、乾燥重量により測定された肉芽腫の大きさに影響を与えなかった。肉芽腫における血管形成を顕微鏡で評価した。未処置および化合物Ｉ処置マウスの両方からの６日の肉芽腫の脈管構造を試験した。肉芽腫における著しい血管形成が、対照組織における広範囲の血管網により示される。処置組織の脈管構造において著しい減少があった。実際、ほとんど微細毛細血管は見られず、２、３のより大きな血管が見られるだけであった。プロスタノイドおよびロイコトリエンは、ＰＬＡ₂により放出されるアラキドン酸の下流産物である。肉芽腫におけるこれらの脂質メディエーターのレベルを測定して、化合物Ｉによる調整が血管形成と相関するかどうかを調べた。プロスタグランジンＤ₂(ＰＧＤ₂)およびロイコトリエンＢ₄(ＬＴＢ₄)レベルをＥＬＩＳＡにより６日肉芽腫組織のホモジネートを用いて測定した。ＬＴＢ₄はビヒクル処置動物において３４０４ｐｇ／ｍｌ、化合物Ｉ処置動物において２０４２ｐｇ／ｍｌと測定された。このように、化合物ＩはＬＴＢ４レベルを４０％減少させる。対照的に、ＰＧＤ₂レベルは化合物Ｉにより影響を受けず、ビヒクル処置動物において３７８ｐｇ／ｍｌＰＧＤ₂、化合物Ｉ処置動物において４０３ｐｇ／ｍｌＰＧＤ₂であった。これらの結果は、ロイコトリエン合成に関して１４ｋＤＰＬＡ₂はアラキドン酸を放出し、一方プロスタグランジン合成に用いるアラキドン酸は８５ｋＤＰＬＡ₂により放出されるので、ｉｎｖｉｖｏでの化合物Ｉによる１４ｋＤＰＬＡ₂の特異的阻害と一致する。方法：ネズミエアパウチ肉芽腫モデル： −１日、マウスをアエラン(Aerrane)(イソフルラン)ガス(５％)を用いて麻酔し、その後、３ｍｌの空気を２７ｇ針を用いて背皮下組織中に注射する。マウスを回復させる。０日、マウスを再びアエランを用いて麻酔し、麻酔にかかったら０．５ｍｌのフロインド完全アジュバントを０．１％ｖ／ｖクロトンオイルとともに−１日に形成したエアパウチ中に注入する。動物にさらに投薬規制飼育(研究に応じた日数)を開始し、動物に典型的には０．２ｍｌのＮ，Ｎジメチルアセトアセトアミド(ＤＭＡ)(Sigma，St．Louis，Mo.)／クレメフォアＥ１(Sigma，St．Louis，Mo .品)／塩水(１０／１０／８)または他の適当なビヒクルを投与する。動物を回復させ、その後の投薬をすべて麻酔なしに動物に対して行う。１−５日、動物に計画にしたがって投薬する。６日に、動物を再びアレランを用いて麻酔し、その後血管キャスト(Kimuraら，1986，J．Pharmacobio-Dyn.，9:442-446)、これはカルミン・レッド(Carmine Red)(１０％)(Sigma，St．Louis，Mo.)／ゼラチン(５％)(Sigma，St．Louis，Mo .) 溶液の１ｍｌ尾静脈ｉ．ｖ．注射を含む。次いで、動物を致死量の麻酔薬の投与により屠殺し、肉芽腫組織摘出前に４℃に２時間冷却する。肉芽腫を摘出したら、秤量し、次いで３日間４５℃で乾燥し、再秤量する。その後、乾燥組織を０．９ｍｌの０．０５Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．０［１２Ｕ／ｍｌ^-1パパイン(Sigma，St．Louis，Mo.)および０．３３ｇ／Ｌ^-1Ｎ−アセチル− １−システイン(Sigma，St．Louis，Mo.)含有］中、５７℃で３日間消化する。３日間消化後、０．１ｍｌの５ｍＭＮａＯＨの添加によりカルミンレッドを溶解させる。サンプルを遠心分離し、次に０．２ｕｍアクロディスクを用いて濾過する。次いで、カルミン含量を、非カルミン処置動物から抽出した組織において生成したカルミンレッド標準曲線(０．５ないし２ｍｇ／ｍｌ)に対して測定し、４９０ｎｍで読み取る。サンプルおよび標準値をデルタソフトエリザ分析(Delta Soft Elisa analysis)ソフトウェア(Biometallics Inc.，Princeton，MJ)を用いて測定する。カルミン含量を次に用いて種々の処置についての血管指数を測定し、ここに血管指数はカルミン色素(ｍｇ)／乾燥組織(ｍｇ)である。肉芽腫を０．５ｍｌの５ｍＭＫＨ₂ＰＯ₄／０．１ｇ湿潤組織中均質化することにより組織抽出物を調製した。ＰＧＤ₂およびＬＴＢ₄をケイマン・ケミカル・カンパニー(Cayman Chemical Company)より入手したＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。両ＥＬＩＳＡに関するサンプル値を、デルタソフトＥＬＩＳＡ分析ソフトウェア(Biometallics Inc.，Princeton，MJ)を用いて計算する。図１は、化合物Ｉまたはメドロキシプロゲステロンでの処置後６日の肉芽腫の乾燥重量および血管指数［ＶＩカルミン色素(ｍｇ)／乾燥組織(ｇｍ)］を示す。薬物投与は肉芽腫が誘発された時点で開始した。ＶＩデータはビヒクル処置対照動物＋／−標準偏差のパーセンテージで表す。対照ＶＩ＝４．６。対照乾燥重量＝０．２５ｇ。ｎ＝５。＊ダンカンのマルチプルレンジテスト(Duncan's multip le range test)により訃算して、ｐ＜０．０５で対照から有意。本発明における使用に関する化合物のＰＬＡ₂活性を測定するために、種々の細胞検定を用いることができる。加えて、前脚浮腫モデル、マウスザイモザン腹膜炎、逆アルチュスろく膜炎またはLewisら、Experimental Models of Inflammation assays，Handbook of Inflammation，Vol．5,Bonto Ed.，Elsevie rScience Publishers,NY(1985)(その開示を出典明示により本発明の一部とする) に記載されている種々の皮膚炎症検定などの、上昇したエイコサノイドレベルを評価するためのその病因のある特性を有する種々の古典的ｉｎｖｉｖｏ急性炎症モデルを用いることができる。ラットにおけるＴＰＡ誘発性耳浮腫モデル(マウス)ならびにカラギーナン前脚浮腫モデルもまた本明細書に記載する。これらの炎症の古典的モデルは炎症応答を変更する薬剤の能力を反映するが、薬剤作用の特異性に向けることはできない。これらのモデルは伝統的に非ステロイド抗炎症剤感受性薬理学的スクリーンとしてデザインされ、以下に記載するようなＮＳＡＩＤＳからＰＬＡ₂を区別できるモデルを用いることが重要である。ホスホリパーゼＡ₂検定：ｒｈＩＩ型−１４ｋＤａＰＬＡ₂またはヒト関節滑液から部分精製したＰＬＡ₂のホスホリパーゼＡ₂活性をMarshallら、J．Rheumatology，18:1，pp 59- 65(1991)によりすでに記載されているように高比活性(ＮＥＮ)［³Ｈ］−ＡＡ− イー・コリ(E.coli)(０．５ｍＣｉ／５ｎｍｏｌＰＬＰｉ)のアシル加水分解により測定した。高比活性［³Ｈ］ＡＡ−イー・コリは精製１４ｋＤａＰＬＡ₂または低分子量ＰＬＡ₂アシル加水分解および薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)による生成物の分離(データーは示していない)により示されるように、ほとんど排他的にｓｎ−２位に局所化された燐脂質中に配合された９５％までの標識を有する。[本明細書においては主に、ｒｈＩＩ型１４ｋＤａＰＬＡ₂、または別法としてウシ膵臓ＰＬＡ₂も用いた]。反応混合物(合計容積５０または１００ｍｌ) は２５ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＣａＣｌ₂ および［³Ｈ］−ＡＡ−イー・コリ(低比活性；５〜８ｎｍｏｌＰＬＰｉ／アッセイ)を含有していた。アッセイを時間対加水分解プロットの直線部分上にのるようにあらかじめ決められた時間インキュベートした。最終加水分解値％がブランク校正後２％(４００〜１０００ｄｐｍ)ないし１０％(２０００〜５０００ｄｐｍ)アシル加水分解の範囲で、実験を行った。１．０ｍＬのテトラヒドロフラン(ＴＨＦ)の添加により、反応を終結させた。全サンプルをアミノプロピル固体相シリカカラム上に置き、ＴＨＦ：酢酸(４９：１)で溶出し、排他的に遊離脂肪酸を９５％以上の回収率で分離した。この溶出液中の放射標識を液体シンチレーション計測により定量した。結果を加水分解された脂肪酸の％([サンプルｄｐｍ−非特異性(ブランク)ｄｐｍ／全ｔｐｍ]×１００)または時間対加水分解％プロットの直線部分から得た加水分解値から計算した比活性(加水分解された遊離脂肪酸ｐｍｏｌ／ｍｇ／分)として表した。非特異性活性は常に全カウントの１％未満であった。蛋白質測定すべての蛋白質濃度を、ブラッドフォード蛋白質分析キット(Biorad,Richmond ,CA)により測定した。本明細書に記載した式(Ｉ)の代表的化合物はすべて前記方法において正のＰＬＡ₂阻害を示した。これらの化合物は一般に５０μｍレベルで試験し、陽性であったが、いくつかは５００μＭレベルまでで正の阻害活性に関しても試験した。本明細書中に記載した特許および特許出願を含むがこれに限定されないすべての開示は、個々の開示が完全に記載されているかのように本発明の一部となるように、特に、個々に示されているように、出典明示により本発明の一部とする。前記載事項はその好ましい具体例を含む本発明を完全に開示する。本明細書に開示した具体例の修飾および改良は以下の請求の範囲内である。さらに努力することなく、当業者は前記載事項を用いて本発明を最大限に利用できると考えられる。したがって、本明細書の実施例は単に例示的であって、本発明の範囲をなんら制限するものでないと考えられる。排他的性質または優先権を主張する本発明の具体例を以下のように定義する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 35/04 Ａ６１Ｋ 31/00 ６３５Ｂ 43/00 ６４３Ａ６１Ｋ 31/135 31/135 31/165 31/165 31/198 31/195 ６０３ 31/27 31/27

Claims

【特許請求の範囲】１．１４ｋＤａＰＬＡ₂の産生、転写、翻訳または活性を阻害する化合物の有効量による、哺乳動物における、過剰な、望ましくないかまたは不適当な血管形成により特徴付けられる慢性疾患の治療方法。２．疾患が、糖尿病性網膜症および他の眼球新生血管形成であることを特徴とする請求項１に記載の方法。３．疾患が腫瘍増殖および転移である請求項１記載の方法。４．疾患がアテローム性硬化症である請求項１記載の方法。５．化合物が式：［式中、Ｒ₁は、(ＣＨ₂)_nＯＨまたは(ＣＨ₂)_nＣＯ₂Ｒ₈であり；ｎは、０または１の整数であり；Ｘは、酸素または硫黄であり；Ｒ₂は、水素、ハロゲン、置換されていてもよいＣ_1-8アルキル、またはＣ_1-8 アルコキシであり；ｍは、０または１もしくは２の整数であり；Ｒ₃は、Ｓ(Ｏ)₂Ｒ₇であり；Ｒ₄は、水素またはＳ(Ｏ)₂Ｒ₇であり；Ｒ₅は、水素、ハロゲン、ＣＦ₃、ＣＨ₃、(ＣＨ₂)_tＣ(Ｏ)₂Ｒ₉、または（ＣＨ₂）_tＯＨであり；ｔは、０または１もしくは２の整数であり；Ｒ₆は、水素またはハロゲンであり；Ｒ₇は、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアリールＣ_1-2 アルキル、または置換されていてもよいＣ_1-8アルキルであり；Ｒ₈は、水素またはＣ_1-4アルキルであり；Ｒ₉は、水素またはＣ_1-4アルキルである］の化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１記載の方法。６．化合物が２−［２−［３，５−ビス(トリフルオロメチル)フェニルスルホンアミド］−４−トリフルオロメチルフェノキシ］安息香酸、またはその医薬上許容される塩である請求項５記載の方法。