JP2000300298A - 抗白髪剤効果の判定方法 - Google Patents
抗白髪剤効果の判定方法Info
- Publication number
- JP2000300298A JP2000300298A JP11117006A JP11700699A JP2000300298A JP 2000300298 A JP2000300298 A JP 2000300298A JP 11117006 A JP11117006 A JP 11117006A JP 11700699 A JP11700699 A JP 11700699A JP 2000300298 A JP2000300298 A JP 2000300298A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- leu
- ser
- hair
- gly
- pro
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 毛髪の生長を待たずに抗白髪薬剤の効果を判
定することができる方法の提供。 【解決手段】 分離された毛包中のチロシナーゼをコー
ドするｍＲＮＡを検出することを特徴とする、毛髪の色
の推定方法。
定することができる方法の提供。 【解決手段】 分離された毛包中のチロシナーゼをコー
ドするｍＲＮＡを検出することを特徴とする、毛髪の色
の推定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は毛髪の色の推定方法
に関し、特に抗白髪剤のスクリーニング及び抗白髪剤の
効果判定のために有用である。
に関し、特に抗白髪剤のスクリーニング及び抗白髪剤の
効果判定のために有用である。
【０００２】
【従来の技術】抗白髪剤、すなわち、白髪化した対象に
投与することにより黒色の毛髪の発生を促進する薬剤の
開発・スクリーニングに当っては、候補被験物質を白髪
を有する対象に投与（例えば頭皮に塗布）し、その後発
生する毛髪の色を観察することにより被験物質の有効性
が判定される。しかしながら、その方法においては被験
試料を投与した後、毛髪の伸長を待ってその色を観察し
なければならないため、例えば数ヶ月以上の期間を必要
とし、多数の被験試料をスクリーニングするのには適さ
ない。また、上記の方法によれば多数の被験者を用意し
なければならない、等の問題点がある。
投与することにより黒色の毛髪の発生を促進する薬剤の
開発・スクリーニングに当っては、候補被験物質を白髪
を有する対象に投与（例えば頭皮に塗布）し、その後発
生する毛髪の色を観察することにより被験物質の有効性
が判定される。しかしながら、その方法においては被験
試料を投与した後、毛髪の伸長を待ってその色を観察し
なければならないため、例えば数ヶ月以上の期間を必要
とし、多数の被験試料をスクリーニングするのには適さ
ない。また、上記の方法によれば多数の被験者を用意し
なければならない、等の問題点がある。
【０００３】他方、毛髪に黒色を提供する物質としてメ
ラニン系色素が知られており、またメラニン系色素を合
成するための生合成経路及び該生合成に関与する多数の
酵素もすでに知られている。しかしながら、事前に、す
なわち毛髪が伸長する前に、毛髪の色を推定する方法は
知られていない。
ラニン系色素が知られており、またメラニン系色素を合
成するための生合成経路及び該生合成に関与する多数の
酵素もすでに知られている。しかしながら、事前に、す
なわち毛髪が伸長する前に、毛髪の色を推定する方法は
知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、イ
ンビトロでの分析により、短時間に日本人の毛髪の黒化
度又は白髪の回復度を推定することができる方法を提供
しようとするものである。
ンビトロでの分析により、短時間に日本人の毛髪の黒化
度又は白髪の回復度を推定することができる方法を提供
しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するため種々検討した結果、メラニン色素の生
合成に関与する多数の酵素の内、チロシナーゼをコード
するｍＲＮＡの毛包中の存在を検出することにより、毛
髪の色を推定することができることを見出し、本発明を
完成した。従って本発明は、分離された毛包中のチロシ
ナーゼをコードするｍＲＮＡを検出することを特徴とす
る、毛髪の色の推定方法を提供する。
題を解決するため種々検討した結果、メラニン色素の生
合成に関与する多数の酵素の内、チロシナーゼをコード
するｍＲＮＡの毛包中の存在を検出することにより、毛
髪の色を推定することができることを見出し、本発明を
完成した。従って本発明は、分離された毛包中のチロシ
ナーゼをコードするｍＲＮＡを検出することを特徴とす
る、毛髪の色の推定方法を提供する。
【０００６】
【発明の実施の形態】ｍＲＮＡの調製 ｍＲＮＡの調製においては、例えばヒトの毛髪を１本〜
数本抜去又は外科手術により入手し、必要に応じて、緩
衝液、例えばリン酸緩衝液中に保存する。直ちに毛包部
を切り離し、５０μｌのIsogen（又はそれと同組成のＡ
ＧＰＣ法に用いられるフェノール、クロロホルム、グア
ニジンイソチオシアネートの混合物）、１０μｌの０．
５mg／ml ｔＲＮＡ、及び５μｌのＲＮＡｓｅ阻害剤の
存在下で、小型ホモジナイザーにより破砕する。この破
砕物に等量のイソプロピルアルコール及び１μｌの１０
mg／mlグリコーゲンを加えて−７０℃に冷却する。
数本抜去又は外科手術により入手し、必要に応じて、緩
衝液、例えばリン酸緩衝液中に保存する。直ちに毛包部
を切り離し、５０μｌのIsogen（又はそれと同組成のＡ
ＧＰＣ法に用いられるフェノール、クロロホルム、グア
ニジンイソチオシアネートの混合物）、１０μｌの０．
５mg／ml ｔＲＮＡ、及び５μｌのＲＮＡｓｅ阻害剤の
存在下で、小型ホモジナイザーにより破砕する。この破
砕物に等量のイソプロピルアルコール及び１μｌの１０
mg／mlグリコーゲンを加えて−７０℃に冷却する。
【０００７】上記の混合物を遠心分離し、沈澱物を７０
〜８０％エタノールにより洗浄し、そして乾燥する。こ
の乾燥物を、１０μｌの加熱した蒸留水に溶解し、９５
℃以上にて１分間以上加熱し、直ちに氷上で冷却する。
これによりＲＮＡの調製を終了する。次に、上記のよう
にして得たｍＲＮＡを転写することによりｃＤＮＡを調
製する。この目的のため、上に調製したＲＮＡに２μｌ
の０．１Ｍデオキシコール酸、１μｌの１０mMデオキシ
ヌクレオチドアデニン、グアニジン、チミジン及びシト
シンの４種混合三燐酸、１μｌのＲＮＡ阻害剤及び逆転
写酵素（例えば、Superscript II）及び緩衝液を加えて
全量を２０μｌとし、４０℃にて２時間以上反応せしめ
てｃＤＮＡを合成する。
〜８０％エタノールにより洗浄し、そして乾燥する。こ
の乾燥物を、１０μｌの加熱した蒸留水に溶解し、９５
℃以上にて１分間以上加熱し、直ちに氷上で冷却する。
これによりＲＮＡの調製を終了する。次に、上記のよう
にして得たｍＲＮＡを転写することによりｃＤＮＡを調
製する。この目的のため、上に調製したＲＮＡに２μｌ
の０．１Ｍデオキシコール酸、１μｌの１０mMデオキシ
ヌクレオチドアデニン、グアニジン、チミジン及びシト
シンの４種混合三燐酸、１μｌのＲＮＡ阻害剤及び逆転
写酵素（例えば、Superscript II）及び緩衝液を加えて
全量を２０μｌとし、４０℃にて２時間以上反応せしめ
てｃＤＮＡを合成する。
【０００８】次に、上記のようにして調製したｃＤＮＡ
を鋳型として用いて、常法に従ってＰＣＲを行う。ＰＣ
Ｒの具体的な条件の１例を実施例において具体的に記載
する。ＰＣＲ用プライマーとしては、配列番号：３に記
載するチロシナーゼをコードする遺伝子の２ケ所におい
て相補性の１対のプライマーを用いることができる。プ
ライマーのサイズは２０〜３０塩基の長さが好ましく、
チロシナーゼをコードする遺伝子上の１対のプライマー
間の距離（すなわち、増幅生成物のサイズは例えば３０
０〜１５００塩基対程度が好ましい。
を鋳型として用いて、常法に従ってＰＣＲを行う。ＰＣ
Ｒの具体的な条件の１例を実施例において具体的に記載
する。ＰＣＲ用プライマーとしては、配列番号：３に記
載するチロシナーゼをコードする遺伝子の２ケ所におい
て相補性の１対のプライマーを用いることができる。プ
ライマーのサイズは２０〜３０塩基の長さが好ましく、
チロシナーゼをコードする遺伝子上の１対のプライマー
間の距離（すなわち、増幅生成物のサイズは例えば３０
０〜１５００塩基対程度が好ましい。
【０００９】好ましいプライマーの１例として、例えば
cagaagctgacaggagatgaaaact（配列番号：１）及び ctc
tgggaacctggacattactttg（配列番号：２）の配列を有す
る１対のプライマーが挙げられる。増幅生成物の検出
は、例えば１％アガロースゲル中で電気泳動を行い、エ
チジウムブロミド等の蛍光検出薬により染色し、ＵＶ照
射下で蛍光を発するバンドを撮映する等の常法に従って
行うことができる。
cagaagctgacaggagatgaaaact（配列番号：１）及び ctc
tgggaacctggacattactttg（配列番号：２）の配列を有す
る１対のプライマーが挙げられる。増幅生成物の検出
は、例えば１％アガロースゲル中で電気泳動を行い、エ
チジウムブロミド等の蛍光検出薬により染色し、ＵＶ照
射下で蛍光を発するバンドを撮映する等の常法に従って
行うことができる。
【００１０】本発明によれば、メラニン色素の生合成に
関与する酵素、例えば、チロシナーゼ、ＴＲＰ１（ＤＨ
ＩＣＡオキシダーゼ）、ＴＲＰ２（ドーパクロムトート
メラーゼ）、ｐｍｅｌ１７（メラノサイト構造タンパク
質）等、及び他の生理活性タンパク質につき、それをコ
ードするｍＲＮＡの毛包における存否を調べた。その結
果、種々の毛髪について、常に黒色毛髪の毛包において
ｍＲＮＡが陽性であり白色毛髪の毛包においてｍＲＮＡ
が陰性であったのはチロシナーゼのみであり、他は、黒
色毛髪の毛包及び白色毛髪の毛包のいずれにおいても陽
性であるか、又は両毛包において陰性であった。この結
果、毛髪の色を事前に推定するには、毛包中のチロシナ
ーゼをコードするｍＲＮＡを検出するのが最も好ましい
ことが明らかになった。
関与する酵素、例えば、チロシナーゼ、ＴＲＰ１（ＤＨ
ＩＣＡオキシダーゼ）、ＴＲＰ２（ドーパクロムトート
メラーゼ）、ｐｍｅｌ１７（メラノサイト構造タンパク
質）等、及び他の生理活性タンパク質につき、それをコ
ードするｍＲＮＡの毛包における存否を調べた。その結
果、種々の毛髪について、常に黒色毛髪の毛包において
ｍＲＮＡが陽性であり白色毛髪の毛包においてｍＲＮＡ
が陰性であったのはチロシナーゼのみであり、他は、黒
色毛髪の毛包及び白色毛髪の毛包のいずれにおいても陽
性であるか、又は両毛包において陰性であった。この結
果、毛髪の色を事前に推定するには、毛包中のチロシナ
ーゼをコードするｍＲＮＡを検出するのが最も好ましい
ことが明らかになった。
【００１１】
【実施例】次に実施例により、本発明をさらに具体的に
説明する。実施例 毛包サンプルの調製 外科的に切除した頭皮から毛包を単離する際は、実体顕
微鏡下で頭皮組織を基底膜直下で切断し、脂肪組織に埋
まった形の毛包をピンセットで単離した。毛包は使用直
前まで、ＰＢＳ（−）またはＤＭＥＭ等に浸して保存し
た。ヒトから直接採取する場合は、十分なインフォーム
ド・コンセントのもとにランダムに毛抜きを用いて毛髪
を引き抜き、毛根部分は直ちにＰＢＳ（−）中に浸して
氷上保存した。白く組織のついている部分だけ切り取っ
て用いた。
説明する。実施例 毛包サンプルの調製 外科的に切除した頭皮から毛包を単離する際は、実体顕
微鏡下で頭皮組織を基底膜直下で切断し、脂肪組織に埋
まった形の毛包をピンセットで単離した。毛包は使用直
前まで、ＰＢＳ（−）またはＤＭＥＭ等に浸して保存し
た。ヒトから直接採取する場合は、十分なインフォーム
ド・コンセントのもとにランダムに毛抜きを用いて毛髪
を引き抜き、毛根部分は直ちにＰＢＳ（−）中に浸して
氷上保存した。白く組織のついている部分だけ切り取っ
て用いた。
【００１２】単離した毛包からのＲＮＡ抽出 微量ホモジナイザー中に、５０μｌのIsogen、１０μｌ
の０．５mg／ml ｔＲＮＡ、５μｌのＲＮａｓｅ阻害剤
とともに１〜数個の毛包を入れ、室温で破砕した。破砕
した内容を０．５mlの微量試験管に移し、等量のクロロ
ホルムを加え、ボルテックスをかけた。１５〜３０分
間、１２−１５krpmで遠心した。上層（透明）を別の試
験管に移し、中間層が混入しているようならば、再度遠
心して除いた。上清に等量のイソプロパノールと１μｌ
の１０mg／mlグリコーゲンを加え、−８０℃で３０分以
上保存した。１５〜３０分間、１２−１５krpmで遠心し
た。沈殿を７０〜７５％の冷エタノールで洗浄し風乾し
た。沈殿を１０μｌのＤＥＰＣ−処理水に溶解しＲＮＡ
サンプルとして以後用いた。
の０．５mg／ml ｔＲＮＡ、５μｌのＲＮａｓｅ阻害剤
とともに１〜数個の毛包を入れ、室温で破砕した。破砕
した内容を０．５mlの微量試験管に移し、等量のクロロ
ホルムを加え、ボルテックスをかけた。１５〜３０分
間、１２−１５krpmで遠心した。上層（透明）を別の試
験管に移し、中間層が混入しているようならば、再度遠
心して除いた。上清に等量のイソプロパノールと１μｌ
の１０mg／mlグリコーゲンを加え、−８０℃で３０分以
上保存した。１５〜３０分間、１２−１５krpmで遠心し
た。沈殿を７０〜７５％の冷エタノールで洗浄し風乾し
た。沈殿を１０μｌのＤＥＰＣ−処理水に溶解しＲＮＡ
サンプルとして以後用いた。
【００１３】逆転写反応（ＲＮＡからｃＤＮＡの合成） 上記のようにして調製したＲＮＡサンプルを９５℃にて
２分間加熱し、そして氷上で冷却した。これに１μｌの
０．５mg／mlの oligo（ｄＴ）１２−１６（ＢＲＬ）を
加え、７０℃にて１０分間加熱した後徐々に温度を室温
まで下げてアニーリングを行った。アニーリング後の反
応液１１μｌに、４μｌの５×第一鎖合成緩衝液、２μ
ｌの０．１Ｍ ＤＴＴ、１μｌの１０mM ｄＮＴＰｍｉ
ｘ、１μｌのＲＮａｓｅ阻害剤及び１μｌのSuperscrip
t II（逆転写酵素）をこの順序で加えて全量２０μｌと
した。これを４０℃にて一昼夜インキュベートした後、
９５℃に加熱し、次に急冷して−８０℃に保存した。
２分間加熱し、そして氷上で冷却した。これに１μｌの
０．５mg／mlの oligo（ｄＴ）１２−１６（ＢＲＬ）を
加え、７０℃にて１０分間加熱した後徐々に温度を室温
まで下げてアニーリングを行った。アニーリング後の反
応液１１μｌに、４μｌの５×第一鎖合成緩衝液、２μ
ｌの０．１Ｍ ＤＴＴ、１μｌの１０mM ｄＮＴＰｍｉ
ｘ、１μｌのＲＮａｓｅ阻害剤及び１μｌのSuperscrip
t II（逆転写酵素）をこの順序で加えて全量２０μｌと
した。これを４０℃にて一昼夜インキュベートした後、
９５℃に加熱し、次に急冷して−８０℃に保存した。
【００１４】ＰＣＲ反応 ＰＣＲ反応の組成は、２．５μｌの１０×ＰＣＲ緩衝
液、２μｌのｄＮＴＰ、１．２５μｌのＤＭＳＯ、０．
２５μｌのＴａｑポリメラーゼ、１７．５μｌの水及び
０．５μｌの鋳型ｃＤＮＡ（計２３μｌ）とし、これに
１μｌのプライマー（各５pmol）を加えた。反応サイク
ルは９４℃にて１５秒間、５０℃にて３０秒間及び７２
℃にて９０秒間とし、４０〜９０サイクル行った。
液、２μｌのｄＮＴＰ、１．２５μｌのＤＭＳＯ、０．
２５μｌのＴａｑポリメラーゼ、１７．５μｌの水及び
０．５μｌの鋳型ｃＤＮＡ（計２３μｌ）とし、これに
１μｌのプライマー（各５pmol）を加えた。反応サイク
ルは９４℃にて１５秒間、５０℃にて３０秒間及び７２
℃にて９０秒間とし、４０〜９０サイクル行った。
【００１５】なお、ステップダウンＰＣＲを行う場合に
は、例えば次の表１に示すごとき反応サイクルを用いる
ことができる。なお、アニーリング温度の下げ幅はプラ
イマーや塩基の性能に合わせて調節する。この方法によ
り検出限界を上げることができる。
は、例えば次の表１に示すごとき反応サイクルを用いる
ことができる。なお、アニーリング温度の下げ幅はプラ
イマーや塩基の性能に合わせて調節する。この方法によ
り検出限界を上げることができる。
【００１６】
【表１】
【００１７】なお、ＤＮＡポリメラーゼとしてＴａｑＧ
ＯＬＤを使用する場合には、９５℃にて９０分間の過程
を最初に加える。プライマーとしては、種々の発現生成
物に対応する多数のプライマーを用いたが、この一部を
下記の表２に示す。
ＯＬＤを使用する場合には、９５℃にて９０分間の過程
を最初に加える。プライマーとしては、種々の発現生成
物に対応する多数のプライマーを用いたが、この一部を
下記の表２に示す。
【００１８】
【表２】
【００１９】毛髪の試料として、提供者Ｓ．Ｈ（４
０）、Ｔ．Ｈ（４４）、Ｊ．Ｈ（３７）及びＹ．Ｓ（４
０）よりそれぞれ白色毛髪及び黒色毛髪を抜去毛として
入手し、別の提供者から単離毛包を得た。結果を次の表
３に示す。
０）、Ｔ．Ｈ（４４）、Ｊ．Ｈ（３７）及びＹ．Ｓ（４
０）よりそれぞれ白色毛髪及び黒色毛髪を抜去毛として
入手し、別の提供者から単離毛包を得た。結果を次の表
３に示す。
【００２０】
【表３】
【００２１】表３の結果から明らかな通り、チロシナー
ゼをコードするｍＲＮＡは一貫して、黒色毛髪の毛包で
は検出され、白色毛髪の毛包では検出されなかった。Ｔ
ＲＰ１では一貫した結果が得られず、ＴＲＰ２及びｐｍ
ｅｌ１７の発現の有無によっては黒色毛髪と白色毛髪の
区別ができなかった。なお、チロシナーゼの結果（Ａ）
及びｐｍｅｌ１７の結果（Ｂ）を図１に示す。
ゼをコードするｍＲＮＡは一貫して、黒色毛髪の毛包で
は検出され、白色毛髪の毛包では検出されなかった。Ｔ
ＲＰ１では一貫した結果が得られず、ＴＲＰ２及びｐｍ
ｅｌ１７の発現の有無によっては黒色毛髪と白色毛髪の
区別ができなかった。なお、チロシナーゼの結果（Ａ）
及びｐｍｅｌ１７の結果（Ｂ）を図１に示す。
【００２２】
【配列表】 ＳＥＱＥＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ ＜１１０＞ ＳＨＩＳＥＩＤＯ ＜１２０＞ Method for Assumption of Color of Hair ＜１３０＞ ＳＳＤ−９８４０７３ ＜１６０＞ １０ ＜２１０＞ １ ＜２１１＞ ２５ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ １ cagaagctga caggagatga aaact 25
【００２３】 ＜２１０＞ ２ ＜２１１＞ ２５ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ ２ ctctgggaac ctggacatta ctttg 25
【００２４】 ＜２１０＞ ３ ＜２１１＞ １５８７ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Human ＜２２３＞ DNA coding for human tyrosinase ＜４００＞ ３ atg ctc ctg gct gtt ttg tac tgc ctg ctg tgg agt ttc cag acc tcc 48 Met Leu Leu Ala Val Leu Tyr Cys Leu Leu Trp Ser Phe Gln Thr Ser 1 5 10 15 gct ggc cat ttc cct aga gcc tgt gtc tcc tct aag aac ctg atg gag 96 Ala Gly His Phe Pro Arg Ala Cys Val Ser Ser Lys Asn Leu Met Glu 20 25 30 aag gaa tgc tgt cca ccg tgg agc ggg gac agg agt ccc tgt ggc cag 144 Lys Glu Cys Cys Pro Pro Trp Ser Gly Asp Arg Ser Pro Cys Gly Gln 35 40 45 ctt tca ggc aga ggt tcc tgt cag aat atc ctt ctg tcc aat gca cca 192 Leu Ser Gly Arg Gly Ser Cys Gln Asn Ile Leu Leu Ser Asn Ala Pro 50 55 60 ctt ggg cct caa ttt ccc ttc aca ggg gtg gat gac cgg gag tcg tgg 240 Leu Gly Pro Gln Phe Pro Phe Thr Gly Val Asp Asp Arg Glu Ser Trp 65 70 75 80 cct tcc gtc ttt tat aat agg acc tgc cag tgc tct ggc aac ttc atg 288 Pro Ser Val Phe Tyr Asn Arg Thr Cys Gln Cys Ser Gly Asn Phe Met 85 90 95 gga ttc aac tgt gga aac tgc aag ttt ggc ttt tgg gga cca aac tgc 336 Gly Phe Asn Cys Gly Asn Cys Lys Phe Gly Phe Trp Gly Pro Asn Cys 100 105 110 aca gag aga cga ctc ttg gtg aga aga aac atc ttc gat ttg agt gcc 384 Thr Glu Arg Arg Leu Leu Val Arg Arg Asn Ile Phe Asp Leu Ser Ala 115 120 125 cca gag aag gac aaa ttt ttt gcc tac ctc act tta gca aag cat acc 432 Pro Glu Lys Asp Lys Phe Phe Ala Tyr Leu Thr Leu Ala Lys His Thr 130 135 140 atc agc tca gac tat gtc atc ccc ata ggg acc tat ggc caa atg aaa 480 Ile Ser Ser Asp Tyr Val Ile Pro Ile Gly Thr Tyr Gly Gln Met Lys 145 150 155 160 aat gga tca aca ccc atg ttt aac gac atc aat att tat gac ctc ttt 528 Asn Gly Ser Thr Pro Met Phe Asn Asp Ile Asn Ile Tyr Asp Leu Phe 165 170 175 gtc tgg atg cat tat tat gtg tca atg gat gca ctg ctt ggg gga tct 576 Val Trp Met His Tyr Tyr Val Ser Met Asp Ala Leu Leu Gly Gly Ser 180 185 190 gaa atc tgg aga gac att gat ttt gcc cat gaa gca cca gct ttt ctg 624 Glu Ile Trp Arg Asp Ile Asp Phe Ala His Glu Ala Pro Ala Phe Leu 195 200 205 cct tgg cat aga ctc ttc ttg ttg cgg tgg gaa caa gaa atc cag aag 672 Pro Trp His Arg Leu Phe Leu Leu Arg Trp Glu Gln Glu Ile Gln Lys 210 215 220 ctg aca gga gat gaa aac ttc act att cca tat tgg gac tgg cgg gat 720 Leu Thr Gly Asp Glu Asn Phe Thr Ile Pro Tyr Trp Asp Trp Arg Asp 225 230 235 240 gca gaa aag tgt gac att tgc aca gat gag tac atg gga ggt cag cac 768 Ala Glu Lys Cys Asp Ile Cys Thr Asp Glu Tyr Met Gly Gly Gln His 245 250 255 ccc aca aat cct aac tta ctc agc cca gca tca ttc ttc tcc tct tgg 816 Pro Thr Asn Pro Asn Leu Leu Ser Pro Ala Ser Phe Phe Ser Ser Trp 260 265 270 cag att gtc tgt agc cga ttg gag gag tac aac agc cat cag tct tta 864 Gln Ile Val Cys Ser Arg Leu Glu Glu Tyr Asn Ser His Gln Ser Leu 275 280 285 tgc aat gga acg ccc gag gga cct tta cgg cgt aat cct gga aac cat 912 Cys Asn Gly Thr Pro Glu Gly Pro Leu Lys Arg Arg Asn Pro Gly Asn 290 295 300 gac aaa tcc aga acc cca agg ctc ccc tct tca gct gat gta gaa ttt 960 His Asp Ser Arg Thr Pro Arg Leu Pro Ser Ser Ala Asp Val Glu Phe 305 310 315 320 tgc ctg agt ttg acc caa tat gaa tct ggt tcc atg gat aaa gct gcc 1008 Cys Leu Ser Leu Thr Gln Tyr Glu Ser Gly Ser Met Asp Lys Ala Ala 325 330 335 aat ttc agc ttt aga aat aca ctg gaa gga ttt gct agt cca ctt act 1056 Asn Phe Ser Phe Arg Asn Thr Leu Glu Gly Phe Ala Ser Pro Leu Thr 340 345 350 ggg ata gcg gat gcc tct caa agc agc atg cac aat gcc ttg cac atc 1104 Gly Ile Ala Asp Ala Ser Gln Ser Ser Met His Asn Ala Leu His Ile 355 360 365 tat atg aat gga aca atg tcc cag gta cag gga tct gcc aac gat cct 1152 Tyr Met Asn Gly Thr Met Ser Gln Val Gln Gly Ser Ala Asn Asp Pro 370 375 380 atc ttc ctt ctt cac cat gca ttt gtt gac agt att ttt gag cag tgg 1200 Ile Phe Leu Leu His His Ala Phe Val Asp Ser Ile Phe Glu Gln Trp 385 390 395 400 ctc cga agg cac cgt cct ctt caa gaa gtt tat cca gaa gcc aat gca 1248 Leu Arg Arg His Arg Pro Leu Gln Glu Val Tyr Pro Glu Ala Asn Ala 405 410 415 ccc att gga cat aac cgg gaa tcc tac atg gtt cct ttt ata cca ctg 1296 Pro Ile Gly His Asn Arg Glu Ser Tyr Met Val Pro Phe Ile Pro Leu 420 425 430 tac aga aat ggt gat ttc ttt att tca tcc aaa gat ctg ggc tat gac 1344 Tyr Arg Asn Gly Asp Phe Phe Ile Ser Ser Lys Asp Leu Gly Tyr Asp 435 440 445 tat agc tat cta caa gat tca gac cca gac tct ttt caa gac tac att 1392 Tyr Ser Tyr Leu Gln Asp Ser Asp Pro Asp Ser Phe Gln Asp Tyr Ile 450 455 460 aag tcc tat ttg gaa caa gcg agt cgg atc tgg tca tgg ctc ctt ggg 1440 Lys Ser Tyr Leu Glu Gln Ala Ser Arg Ile Trp Ser Trp Leu Leu Gly 465 470 475 480 gcg gcg atg gta ggg gcc gtc ctc act gcc ctg ctg gca ggg ctt gtg 1488 Ala Ala Met Val Gly Ala Val Leu Thr Ala Leu Leu Ala Gly Leu Val 485 490 495 agc ttg ctg tgt cgt cac aag aga aag cag ctt cct gaa gaa aag cag 1536 Ser Leu Leu Cys Arg His Lys Arg Lys Gln Leu Pro Glu Glu Lys Gln 500 505 510 cca ctc ctc atg gag aaa gag gat tac cac agc ttg tat cag agc cat 1584 Pro Leu Leu Met Glu Lys Glu Asp Tyr His Ser Leu Tyr Gln Ser His 515 520 525 tta 1587 Leu
【００２５】 ＜２１０＞ ４ ＜２１１＞ ５２９ ＜２１２＞ ＰＲＴ ＜２１３＞ Human ＜２２３＞ Amino acid sequence of human tyrosinase ＜４００＞ ３ Met Leu Leu Ala Val Leu Tyr Cys Leu Leu Trp Ser Phe Gln Thr Ser 1 5 10 15 Ala Gly His Phe Pro Arg Ala Cys Val Ser Ser Lys Asn Leu Met Glu 20 25 30 Lys Glu Cys Cys Pro Pro Trp Ser Gly Asp Arg Ser Pro Cys Gly Gln 35 40 45 Leu Ser Gly Arg Gly Ser Cys Gln Asn Ile Leu Leu Ser Asn Ala Pro 50 55 60 Leu Gly Pro Gln Phe Pro Phe Thr Gly Val Asp Asp Arg Glu Ser Trp 65 70 75 80 Pro Ser Val Phe Tyr Asn Arg Thr Cys Gln Cys Ser Gly Asn Phe Met 85 90 95 Gly Phe Asn Cys Gly Asn Cys Lys Phe Gly Phe Trp Gly Pro Asn Cys 100 105 110 Thr Glu Arg Arg Leu Leu Val Arg Arg Asn Ile Phe Asp Leu Ser Ala 115 120 125 Pro Glu Lys Asp Lys Phe Phe Ala Tyr Leu Thr Leu Ala Lys His Thr 130 135 140 Ile Ser Ser Asp Tyr Val Ile Pro Ile Gly Thr Tyr Gly Gln Met Lys 145 150 155 160 Asn Gly Ser Thr Pro Met Phe Asn Asp Ile Asn Ile Tyr Asp Leu Phe 165 170 175 Val Trp Met His Tyr Tyr Val Ser Met Asp Ala Leu Leu Gly Gly Ser 180 185 190 Glu Ile Trp Arg Asp Ile Asp Phe Ala His Glu Ala Pro Ala Phe Leu 195 200 205 Pro Trp His Arg Leu Phe Leu Leu Arg Trp Glu Gln Glu Ile Gln Lys 210 215 220 Leu Thr Gly Asp Glu Asn Phe Thr Ile Pro Tyr Trp Asp Trp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Glu Lys Cys Asp Ile Cys Thr Asp Glu Tyr Met Gly Gly Gln His 245 250 255 Pro Thr Asn Pro Asn Leu Leu Ser Pro Ala Ser Phe Phe Ser Ser Trp 260 265 270 Gln Ile Val Cys Ser Arg Leu Glu Glu Tyr Asn Ser His Gln Ser Leu 275 280 285 Cys Asn Gly Thr Pro Glu Gly Pro Leu Lys Arg Arg Asn Pro Gly Asn 290 295 300 His Asp Ser Arg Thr Pro Arg Leu Pro Ser Ser Ala Asp Val Glu Phe 305 310 315 320 Cys Leu Ser Leu Thr Gln Tyr Glu Ser Gly Ser Met Asp Lys Ala Ala 325 330 335 Asn Phe Ser Phe Arg Asn Thr Leu Glu Gly Phe Ala Ser Pro Leu Thr 340 345 350 Gly Ile Ala Asp Ala Ser Gln Ser Ser Met His Asn Ala Leu His Ile 355 360 365 Tyr Met Asn Gly Thr Met Ser Gln Val Gln Gly Ser Ala Asn Asp Pro 370 375 380 Ile Phe Leu Leu His His Ala Phe Val Asp Ser Ile Phe Glu Gln Trp 385 390 395 400 Leu Arg Arg His Arg Pro Leu Gln Glu Val Tyr Pro Glu Ala Asn Ala 405 410 415 Pro Ile Gly His Asn Arg Glu Ser Tyr Met Val Pro Phe Ile Pro Leu 420 425 430 Tyr Arg Asn Gly Asp Phe Phe Ile Ser Ser Lys Asp Leu Gly Tyr Asp 435 440 445 Tyr Ser Tyr Leu Gln Asp Ser Asp Pro Asp Ser Phe Gln Asp Tyr Ile 450 455 460 Lys Ser Tyr Leu Glu Gln Ala Ser Arg Ile Trp Ser Trp Leu Leu Gly 465 470 475 480 Ala Ala Met Val Gly Ala Val Leu Thr Ala Leu Leu Ala Gly Leu Val 485 490 495 Ser Leu Leu Cys Arg His Lys Arg Lys Gln Leu Pro Glu Glu Lys Gln 500 505 510 Pro Leu Leu Met Glu Lys Glu Asp Tyr His Ser Leu Tyr Gln Ser His 515 520 525 Leu
【００２６】 ＜２１０＞ ５ ＜２１１＞ ２４ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ ５ agggaggggc agatgtgagg cagt 24
【００２７】 ＜２１０＞ ６ ＜２１１＞ ２４ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ ６ agttggaata aaaaggaggc gtgt 24
【００２８】 ＜２１０＞ ７ ＜２１１＞ ２０ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ ７ ttggtggggg tttctgctca 20
【００２９】 ＜２１０＞ ８ ＜２１１＞ ２０ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ ８ ctgtgtatct cttgctgctt 20
【００３０】 ＜２１０＞ ９ ＜２１１＞ ２４ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ ９ tggttctgca ccagatactg aagg 24
【００３１】 ＜２１０＞ １０ ＜２１１＞ ２４ ＜２１２＞ ＤＮＡ ＜２１３＞ Artificial sequence ＜２２０＞ PCR Primer ＜２２３＞ Synthetic DNA ＜４００＞ １０ ggctattctc accaatggga caag 24
【図１】図１において、（Ａ）は複数の個体からの黒色
毛髪及び白色毛髪の毛包におけるチロシナーゼの発現
（ｍＲＮＡの存否）を示す電気泳動図であり、図面代用
写真である。（Ｂ）は、（Ａ）と同じ個体からの黒色毛
髪及び白色毛髪の毛包におけるｐｍｅｌ１７の発現（ｍ
ＲＮＡの存否）を示す電気泳動図であり、図面代用写真
である。
毛髪及び白色毛髪の毛包におけるチロシナーゼの発現
（ｍＲＮＡの存否）を示す電気泳動図であり、図面代用
写真である。（Ｂ）は、（Ａ）と同じ個体からの黒色毛
髪及び白色毛髪の毛包におけるｐｍｅｌ１７の発現（ｍ
ＲＮＡの存否）を示す電気泳動図であり、図面代用写真
である。
フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G045 AA35 AA40 CB16 DA14 GC12 4B024 AA11 CA12 CA20 DA03 HA08 HA11 4B063 QA05 QA18 QQ08 QQ53 QR62 QS25 QX01
Claims (4)
- 【請求項１】 分離された毛包中のチロシナーゼをコー
ドするｍＲＮＡを検出することを特徴とする、毛髪の色
の推定方法。 - 【請求項２】 検出のためにＲＮＡ転写−ポリメラーゼ
連鎖反応法（ＲＴ−ＰＣＲ）を用いることを特徴とする
請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 ＰＣＲプライマーとして、チロシナーゼ
をコードする遺伝子の２ヶ所において相補性の１対のプ
ライマーを用いることを特徴とする請求項２に記載の方
法。 - 【請求項４】 ＰＣＲ用プライマーとして cagaagctgac
aggagatgaaaact（配列番号：１）及び ctctgggaacctgga
cattactttg（配列番号：２）の塩基配列を有する１対の
プライマーを用いることを特徴とする請求項３に記載の
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11117006A JP2000300298A (ja) | 1999-04-23 | 1999-04-23 | 抗白髪剤効果の判定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11117006A JP2000300298A (ja) | 1999-04-23 | 1999-04-23 | 抗白髪剤効果の判定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000300298A true JP2000300298A (ja) | 2000-10-31 |
Family
ID=14701138
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11117006A Withdrawn JP2000300298A (ja) | 1999-04-23 | 1999-04-23 | 抗白髪剤効果の判定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000300298A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008249700A (ja) * | 2007-03-07 | 2008-10-16 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 毛髪の状態を評価する方法およびその用途 |
| WO2013002354A1 (ja) * | 2011-06-29 | 2013-01-03 | 株式会社ダナフォーム | 生体試料の前処理方法、ｒｎａの検出方法及び前処理キット |
-
1999
- 1999-04-23 JP JP11117006A patent/JP2000300298A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008249700A (ja) * | 2007-03-07 | 2008-10-16 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 毛髪の状態を評価する方法およびその用途 |
| WO2013002354A1 (ja) * | 2011-06-29 | 2013-01-03 | 株式会社ダナフォーム | 生体試料の前処理方法、ｒｎａの検出方法及び前処理キット |
| JPWO2013002354A1 (ja) * | 2011-06-29 | 2015-02-23 | 株式会社ダナフォーム | 生体試料の前処理方法、ｒｎａの検出方法及び前処理キット |
| US9518901B2 (en) | 2011-06-29 | 2016-12-13 | Kabushiki Kaisha Dnaform | Pretreatment method of biological sample, detection method of RNA, and pretreatment kit |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Minokawa et al. | Expression patterns of four different regulatory genes that function during sea urchin development | |
| Dealy et al. | Wnt-5a and Wnt-7a are expressed in the developing chick limb bud in a manner suggesting roles in pattern formation along the proximodistal and dorsoventral axes | |
| Wada et al. | Spatially and temporally regulated expression of the LIM class homeobox gene Hrlim suggests multiple distinct functions in development of the ascidian, Halocynthia roretzi | |
| Bolce1 et al. | Ventral ectoderm of Xenopus forms neural tissue, including hindbrain, in response to activin | |
| Murakami et al. | IF-LCM: Laser capture microdissection of immunofluorescently defined cells for mRNA analysis: Rapid Communication | |
| NO327084B1 (no) | Fremgangsmate for isolering av mRNA eller cDNA-prober, samt anvendelse derav for fremstilling av et standard diagnostisk gentranskripsjonsmonster og probetestsett og anvendelse av fremgangsmaten for diagnostisering eller identifisering av en sykdom. | |
| Sun et al. | Expression of NR1, NR2A‐D, and NR3 subunits of the NMDA receptor in the cerebral cortex and olfactory bulb of adult rat | |
| CA2437737A1 (en) | Methods and compositions of amplifying rna | |
| Linn et al. | Microsatellite analysis and telomerase activity in archived tissue and urine samples of bladder cancer patients | |
| Chen et al. | Identification of estrogen-induced genes downregulated by AhR agonists in MCF-7 breast cancer cells using suppression subtractive hybridization | |
| Terry et al. | Sfrp-1 and sfrp-2 are expressed in overlapping and distinct domains during chick development | |
| Wasik et al. | Decapentaplegic (dpp) regulates the growth of a morphological novelty, beetle horns | |
| Javan et al. | The apoptotic thanatotranscriptome associated with the liver of cadavers | |
| JP4728480B2 (ja) | 調節された遺伝子の検出方法としての二色ディファレンシャルディスプレー | |
| JP2002512046A (ja) | 遺伝子発現の定量的分析 | |
| Siah et al. | Selecting a set of housekeeping genes for quantitative real-time PCR in normal and tetraploid haemocytes of soft-shell clams, Mya arenaria | |
| Shen et al. | Detection of loss of heterozygosity on chromosome 9q22. 3 in microdissected sporadic basal cell carcinoma | |
| JP2000300298A (ja) | 抗白髪剤効果の判定方法 | |
| Rufaut et al. | Identification of differentially expressed genes during a wool follicle growth cycle induced by prolactin | |
| Fantappié et al. | Molecular characterisation of a NADH ubiquinone oxidoreductase subunit 5 from Schistosoma mansoni and inhibition of mitochondrial respiratory chain function by testosterone | |
| DE60216073T2 (de) | Peptidylarginin deiminase 6 | |
| JP2003509066A5 (ja) | ||
| JP2023522061A (ja) | 毛包の表現型を決定する方法 | |
| FR2798392A1 (fr) | Marqueurs genetiques de la toxicite, preparation et utilisations | |
| WO1999043844A1 (en) | Reciprocal subtraction differential display |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20060704 |