JP2000258418A

JP2000258418A - 免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法およびそれに用いる検体分析用具

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Publication number: JP2000258418A
Application number: JP11066229A
Authority: JP
Inventors: Yoshihiko Higuchi; 善彦樋口; Kyoichi Oshiro; 京一大代
Original assignee: Arkray Inc
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1999-03-12
Filing date: 1999-03-12
Publication date: 2000-09-22
Anticipated expiration: 2019-03-12
Also published as: JP4437211B2

Abstract

(57)【要約】【課題】免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法に
おいて、定量分析を可能にする。【解決手段】被測定物に対する第一の標識化抗体に検
体５を接触させた後、前記検体５を展開層１１において
毛細管現象により展開し、前記展開層１１の途中に形成
された測定部１４に固定化された被測定物に対する第二
の抗体により前記被測定物と前記第一の標識化抗体との
複合体を捕捉し、前記捕捉された複合体中の前記第一の
標識化抗体を測定することにより被測定物を測定する方
法において、前記固定化された第二の抗体に対する第三
の標識化抗体を検体と共に展開し、前記第一の標識化抗
体の標識と前記第三の標識化抗体の標識とが相互に識別
可能とし、前記測定部１４において前記第二の抗体と結
合した前記第三の標識化抗体の測定も行い、これを測定
基準とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、免疫クロマトグラ
フィーを用いた定量分析が可能な測定方法およびそれに
用いる検体分析用具に関する。

【０００２】

【従来の技術】免疫クロマトグラフィーは、免疫反応
（抗原−抗体反応）を利用した測定方法であり、様々な
物質の検出、定性分析または半定量分析に使用されてい
る。免疫クロマトグラフィーは、被測定物に対する第一
の標識化抗体に検体を接触させた後、前記検体を展開層
において毛細管現象により展開し、前記展開層の途中に
固定化された被測定物に対する第二の抗体により前記被
測定物と前記第一の標識化物質との複合体を捕捉し、前
記捕捉された複合体中の前記第一の標識化抗体を測定す
ることにより被測定物を測定するという方法である。前
記標識としては、通常、金属コロイドや着色ラテックス
粒子が使用される。また、酵素を標識として用い、これ
に酵素反応によって検出可能な物質に変化する基質を作
用させる場合もある。

【０００３】他方、板状支持体上に試薬フィルム等を配
置した検体分析用具（試験片ともいう）は、多数の検体
を簡便に処理できること等から、多くの病院や検査機関
で汎用されており、免疫クロマトグラフィーを適用した
検体分析用具も開発され市販されている。例えば、妊娠
診断用として、妊娠時に尿中に排出されるヒト繊毛性ゴ
ナドトロビン（ｈＣＧ）に対する抗体を用いた分析用具
が市販されている。また、免疫クロマトグラフィーを適
用した検体分析用具は、被測定物に対する標識化抗体を
含有する試薬部と、ニトロセルロースフィルター等を用
いた展開層と、この展開層の途中に形成された測定部
（固定化抗体が配置されている）とが板状支持体の上に
配置された形態が一般的である。このような検体分析用
具の具体例としては、例えば、米国特許第４４４６２３
２号公報、特開昭５５−１５１００号公報、特開昭５８
−７６７６３号公報、特開平４−６４０６２号公報、特
開平５−２８１２３１号公報、特開平８−９４６１８号
公報、特開平８−２４０５９１号公報、特開平８−２８
５８５０号公報等に記載された検体分析用具がある。

【０００４】このような免疫クロマトグラフィーを用い
た検体分析用具は、被測定物の検出や定性分析はできる
ものの、定量分析が困難であり、半定量分析が限界であ
った。また、検出や定性分析においても、免疫クロマト
グラフィーを適用した検体分析用具において、その精度
に問題がある場合があった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明の目的
は、被測定物の定量分析が可能であり、また検出や定性
分析を精度良く行うことができる免疫クロマトグラフィ
ーを用いた測定方法およびそれに用いる検体分析用具の
提供である。

【０００６】

【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に、本発明の免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法
は、被測定物に特異的に結合する第一の標識化物質に検
体を接触させた後、前記検体を展開層において毛細管現
象により展開し、前記展開層の途中に形成された測定部
に固定化された被測定物に結合する第二の物質により前
記被測定物と前記第一の標識化物質との複合体を捕捉
し、前記捕捉された複合体中の前記第一の標識化物質を
測定することにより被測定物を測定する方法において、
第三の標識化物質を検体と共に展開し、前記第一の標識
化物質の標識と前記第三の標識化物質の標識とが相互に
識別可能であり、前記測定部において前記第三の標識化
物質の測定も行う方法である。

【０００７】免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法
において、定量分析が困難であり、場合によっては検出
や定性分析の精度が悪くなるのは、展開層における標識
化物質（コンジュゲート）や検体の展開が不均一である
ことに起因する。このため、展開層の途中に形成された
測定部（抗体等が固定化されている）において、被測定
物とこれに対する標識化抗体等との複合体の濃度も不均
一となる。この結果、前記標識からの信号強度（吸光度
等）が不均一となって定量分析が困難となり、検出や定
性分析の精度の低下の要因ともなる。そこで、本発明の
測定方法では、第一の標識物質と共に、前記第三の標識
化物質（標準物質）を展開し、前記測定部において、前
記第三の標識化物質の測定も行う。このようにすれば、
標識化物質や検体の展開が不均一であっても、前記第三
の標識化物質の測定値を基準にとることができ、これに
よって、定量分析が可能となる。例えば、前記第三の標
識化物質の測定値に対する前記第一の標識化物質の測定
値の比率から、被測定物を定量することが可能である。
また、本発明の測定方法によれば、基準が明確となるた
め、検出や定性分析の精度低下のおそれもなくなる。

【０００８】本発明の測定方法において、前記第三の標
識化物質が、前記測定部に固定化された前記第二の物質
に結合することが好ましい。これにより、測定部におい
て、前記第三の標識化物質を捕捉できるため、基準がよ
り明確になる。

【０００９】本発明の測定方法において、前記測定部に
第四の物質を固定化し、前記第三の標識化物質が前記固
定化された第四の物質に結合することが好ましい。この
ように、前記第三の標識化物質のみを捕捉する第四の物
質を固定化することにより、前記測定部において、前記
第三の標識化物質をさらに効率よく捕捉できるため、基
準をより一層明確にすることが可能となる。なお、前記
第三の標識化物質は、前記固定化された第二の物質およ
び前記固定化された第四の物質に結合してもよいし、前
記固定化された第四の物質のみに結合してもよい。

【００１０】本発明の測定方法において、前記第一の標
識化物質が第一の標識化抗体であり、前記固定化された
第二の物質が固定化された第二の抗体であり、前記第三
の標識化物質が第三の標識化抗体であることが好まし
い。また、前記固定化された第四の物質を有する場合、
これが固定化された第四の抗体であることが好ましい。

【００１１】この場合、前記第一の抗体および第二の抗
体は、同一の抗体でもよいが、異なる抗体（例えば、マ
ウス由来とラット由来）であってもよい。また、前記第
四の抗体は、前記第三の抗体に対する抗体であることが
好ましい。

【００１２】本発明の測定方法において、前記第一の標
識化物質の標識と前記第三の標識化物質の標識が、相互
に色が異なる着色粒子であることが好ましい。相互に色
が異なる着色粒子であれば、光学的手法により前記両標
識を簡単に識別できるからである。

【００１３】つぎに、本発明の検体分析用具は、前記本
発明の測定方法に用いる検体分析用具であって、試薬部
と、展開層と、前記展開層の途中に形成された測定部と
を有し、前記測定部には、被測定物に結合する第二の物
質が固定化され、前記試薬部は、第三の標識化物質およ
び被測定物に特異的に結合する第一の標識化物質を有す
る。また、前記第三の標識化物質は、前記固定化された
第二の物質に結合する物質であることが好ましい。

【００１４】本発明の検体分析用具は、前記測定部に
は、さらに第四の物質が固定化され、前記第三の標識化
物質が前記固定化された第四の物質に結合する物質であ
ってもよい。この場合、前記第三の標識化物質は、前記
固定化された第二の物質および前記固定化された第四の
物質の両方に結合する物質でもよいし、前記固定化され
た第四の物質のみに結合する物質でもよい。

【００１５】本発明の検体分析用具を用いれば、被測定
物の定量分析が可能となり、また検出や定性分析も精度
良く行うことができる。

【００１６】

【発明の実施の形態】図１に、本発明の検体分析用具の
一例を示す。図示のように、この検体分析用具１は、展
開層１１の一端（同図において左側端部）上に、試薬部
１３が形成され、この試薬部１３の上に血球分離部１２
が積層形成されており、前記展開層１１の他端（図にお
いて右側端部）上には液吸収材１５が配置されている。
また、展開層１１の途中には測定部１４が形成されてい
る。

【００１７】この検体分析用具１の大きさは、通常、全
長５〜２００ｍｍ、幅１〜５０ｍｍ、厚み０．５〜３０
ｍｍ、測定部の幅０．１〜５０ｍｍである。

【００１８】図示していないが、前記展開層１１は、通
常、支持体上に形成されている。前記支持体としては、
例えば、ポリスチレン、ポリエステル、酢酸セルロース
等から形成されたものが使用でき、その形状としては、
フィルム状、シート状、板状のいずれでもよい。なお、
測定部における測定を、支持体の裏側（展開層配置側と
反対側）から光を照射して行う場合は、支持体が透明で
あることが好ましく、具体的には、透明なポリエチレン
テレフタレート（ＰＥＴ）が好ましい。また、前記展開
層には、通常、多孔質膜が使用され、例えば、セルロー
ス膜、酢酸セルロースまたはニトロセルロース等のセル
ロース誘導体膜、ガラスフィルター、濾紙等などが使用
できる。支持体上への展開層の形成は、常法により行う
ことができる。例えば、支持体上に、多孔質膜を、両面
テープや接着剤を用いて固定すればよい。

【００１９】血球分離部１２は、例えば、分析対象が全
血中の血漿成分であり、血球を取り除く必要がある場合
に設ける、任意の構成要素である。したがって、血球を
分離する必要がない尿等の検体の場合は、血球分離部１
２を設ける必要はない。前記血球分離部には、通常、ガ
ラスフィルター等が使用される。

【００２０】前記試薬部１３には、試薬として、通常、
前記第一の標識化抗体および前記第三の標識化抗体が配
置される。また、図２（Ａ）に示すように、測定部１４
には、固定化された第二の抗体３１が配置される。な
お、図２において、図１と同一部分には同一符号を付し
ている。前記抗体は、特に制限されず、免疫グロブリン
（Ｉｇ）Ｇ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれ
であってもよい。また、これらの抗体において、ポリク
ローナルおよびモノクローナルのいずれでもよい。被測
定物に結合する抗体は、マウス、ラット、山羊等の動物
を用いて、常法により作製できる。また、固定化された
第二の抗体に結合する抗体も、常法により作製できる。

【００２１】展開層１１の測定部１４への前記第二の抗
体３１の固定化は、常法により行うことができる。

【００２２】前記抗体の標識は、特に制限されず、金コ
ロイド、着色ラテックス粒子、放射性標識、蛍光色素標
識、酵素標識等が使用できる。ただし、第一の標識化抗
体の標識と、第三の標識化抗体の標識とが、相互に区別
できる必要がある。したがって、前記標識は、相互に色
が異なる（吸収スペクトルが重ならない）もの、または
光学的に区別できるものが好ましい。このような標識物
質の組み合せとしては、例えば、金コロイドと着色ラテ
ックス粒子（例えば、青色ラテックス粒子）があげられ
るが、二つの標識物質が光学的に区別できれば、特に制
限されない。また、抗体の標識化は、常法により実施で
きる。例えば、抗体と前記金コロイド等を緩衝液中で混
合すれば、前記抗体が前記金コロイド等に物理的に吸着
する。

【００２３】本発明において、試薬部１３は、図１に示
すように展開層１１と別個に形成してもよく、展開層中
に形成してもよい。展開層とは別個に試薬部を形成する
場合、濾紙等に前記試薬を含浸させ、これを図示のよう
に展開層の一端上に配置すればよい。また、展開層に試
薬部を形成する場合は、展開層の所定部分に試薬を含浸
させればよい。また、試薬部は、一個でも複数個でもよ
い。

【００２４】なお、試薬部に配置する試薬としては、前
記抗体の他に、検体の種類や被測定物の種類に応じ、界
面活性剤等の溶血試薬、緩衝剤等のｐＨ調整剤、カゼイ
ン等のブロッキング剤等を配置してもよい。

【００２５】展開層１１の他端上に配置された液吸収材
１５は、展開層における毛管現象を補助するとともに、
測定部１４を通過して流れてきた検体を保持するための
ものである。前記液吸収材としては、濾紙等を使用する
ことができる。

【００２６】つぎに、図１および図２に基づき、この検
体分析用具を用いた測定について、検体として全血を用
い、血漿中の特定成分を測定対象とした例をあげて説明
する。この検体分析用具では、試薬部１３に、血漿中の
特定成分（被測定物）に対する第一の標識化抗体と、固
定化された第二の抗体に対する第三の標識化抗体とが配
置され、また測定部１４には、前記血漿中の特定成分に
対する第二の抗体が固定化されている。また、抗体の標
識は、それぞれ色が異なる着色ラテックス粒子である。

【００２７】まず、図１の矢印ａに示すように、全血５
を、血球分離部１２上に滴下する。すると、全血中の血
漿成分のみが試薬部１３に移行し、ここで試薬と接触す
る。この接触により、血漿中の特定成分と第１の標識化
抗体とが複合体を形成する。ついで、矢印ｂで示すよう
に、血漿成分は、展開層１１中を展開する。このとき、
波線２で示すように、前記複合体等の展開は不均一とな
る。また、この展開において、第三の標識化抗体も同様
に展開する。そして、測定部１４に到達した前記複合体
は、図２（Ｂ）に示すように、固定化された第二の抗体
３１で捕捉される。同図において、４は血漿中の特定成
分を示し、３２は第一の標識化抗体を示し、３３は着色
ラテックス粒子を示す。また、前記複合体と共に展開し
てきた前記第三の標識化抗体も、図２（Ｃ）に示すよう
に、測定部１４に到達すると、固定化抗体３１により捕
捉される。また、前記第三の標識化抗体は、複合体を捕
捉している第二の抗体３１により捕捉されてもよい。前
記同図において、３４は前記第三の標識化抗体を示し、
３５は、着色ラテックス粒子を示す。なお、図２は、抗
原抗体反応を模式的に示すものであり、また標識の大き
さ等も実際とは異なる。そして、前記測定部１４に光を
照射して、前記二つの着色ラテックス粒子のそれぞれの
吸光度を測定する。これらの吸光度の測定値から、第一
の標識化抗体と第三の標識化抗体の量を求め、前記第三
の標識化抗体の量を基準にして、前記第一の標識化抗体
の量から、血漿中の特定成分（被測定物質）の量を定量
する。

【００２８】本発明において、その測定対象となる検体
は、液状のものが好ましいが、これに限定されない。固
体状のものであっても、緩衝液等の液体中に溶解もしく
は分散させれば、展開可能となるからである。

【００２９】つぎに、本発明の検体分析用具において、
前記図１に示す測定部１４に、前記固定化された第二の
抗体の他に、第三の標識化抗体に結合する固定化された
第四の抗体が配置されている一例を図３に示す。図３に
おいて、図１および図２と同一部分には同一符号を付し
ている。なお、図３は、抗原抗体反応を模式的に示すも
のであり、また標識の大きさ等も実際とは異なる。

【００３０】図３（Ａ）に示すように、展開層１１にお
ける測定部には、固定化された第二の抗体３１および固
定化された第四の抗体３６が配置される。そして、前記
複合体と共に展開してきた第三の標識化抗体は、測定部
１４に到達すると、図３（Ｂ）に示すように、固定化さ
れた第四の抗体３６により捕捉される。これ以外は、前
述の例と同様にして測定を行う。前記第四の抗体３６
は、前記第三の標識化抗体に結合するものであれば、特
に制限されず、前述の他の抗体と同様にして作製でき、
その固定化も常法により行うことができる。

【００３１】

【実施例】(実施例１）以下に示すようにして、本発明
の検体分析用具を作製し、これを用いてヒトＣ反応性タ
ンパク質（ヒトＣＲＰ）抗原の測定を行った。

【００３２】（１）固相化抗体メンブレンの作製第二の抗体として抗ヒトＣＲＰ抗体（マウス由来：ＯＹ
Ｍｅｄｉｘ社製、以下同じ）と、第四の抗体として抗
ウサギＩｇＧ抗体（ヤギ由来：ＮｏｒｄｉｃＩｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）と
を、それぞれ１ｍｇ／ｍｌの濃度になるように生理食塩
水に添加し、混合して固相化抗体液とした。この固相化
抗体液を、微細液滴塗出機Ｂｉｏｄｏｔ２０００（Ｂｉ
ｏｄｏｔ社製）を用いて、塗出量１μｌ／ｃｍの条件
で、ニトロセルロースメンブレン（ＨｉｇｈＦｌｏｗ
Ｍｅｍｂｒａｎｅ：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）上に、
一直線上に塗布した後、４０℃の乾燥空気で３０分間乾
燥させて固相化抗体メンブレンを作製した。

【００３３】（２）コンジュゲートパッドの作製最大吸収ピークが異なる青色のラテックス溶液（粒径５
００ｎｍφ：Ｂａｎｇｓ社製）と赤色のラテックス溶液
（粒径５００ｎｍφ：Ｂａｎｇｓ社製）とを準備し、前
記各ラテックス５０ｍｇを、それぞれ別の０．１Ｍホウ
酸緩衝液（ｐＨ８．５）に添加して、この二種類の混合
液をそれぞれ遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、１０分
間）した。

【００３４】そして、予め、前記抗ヒトＣＲＰ抗体（マ
ウス由来）を生理食塩水に混合した抗ヒトＣＲＰ抗体溶
液（濃度１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを、前記遠心分離により
得られた青色ラテックス沈殿物に添加し、攪拌した後、
室温で１時間放置した。この溶液を遠心分離（１５，０
００ｒｐｍ、１０分間）し、得られた沈殿物を、１重量
％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および５重量％サッカ
ロースを含有するリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．４）
１．５ｍｌに分散し、第一の標識化抗体であるラテック
ス標識抗体液Ａを調製した。

【００３５】他方、前記遠心分離により得られた赤ラテ
ックス沈殿物に、予め、ウサギ由来ＩｇＧ（Ｎｏｒｄｉ
ｃＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ社製）を生理食塩水に混合したウサギ由来ＩｇＧ
溶液（濃度１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを添加し、攪拌した
後、室温で１時間放置した。この混合液に、さらに４重
量％ブロッキング剤（ＢｌｏｃｋＡｃｅ：雪印社製）
溶液１ｍｌを添加して、攪拌した後、室温で１時間放置
した。この溶液を、遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、１
０分間）して得られた沈殿物を、１重量％のＢＳＡを含
有するリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．４）１．５ｍｌ
に分散し、第三の標識化抗体であるラテックス標識抗体
液Ｂを調製した。なお、前記リン酸緩衝生理食塩液の組
成を以下に示す。

【００３６】（リン酸緩衝生理食塩液組成）ＮａＣｌ８．０ｇ／リットルＫＣｌ０．２ｇ／リットルＮａ₂ＨＰＯ₄・１２Ｈ₂Ｏ２．９ｇ／リットルＫＨ₂ＨＰＯ₄ ０．２ｇ／リットル

【００３７】この二種類のラテックス標識抗体液Ａ、Ｂ
をそれぞれ８０：２０の体積割合になるように混合して
これをコンジュゲート液とした。そして、前記コンジュ
ゲート液をいれたバットに、ガラスフィルター（製品番
号ＡＰ２５：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を浸して含浸さ
せた後、これを凍結乾燥させてコンジュゲートパッドを
作製した。

【００３８】（３）検体分析用具の作製ガラスフィルター（製品番号ＡＰ２５：Ｍｉｌｌｉｐｏ
ｒｅ社製）、前記固相化抗体メンブレン、前記コンジュ
ゲートパッド、濾紙（製品番号ＡＰ１０：Ｍｉｌｌｉｐ
ｏｒｅ社製）およびＰＥＴフィルム（テトロンフィルム
Ｕ−２２：帝人社製）をそれぞれ用いて、図４に示すよ
うな検体分析用具を作製した。同図（ａ）は、前記検体
分析用具の上面図であり、同図（ｂ）は、前記上面図の
Ｉ−Ｉ方向断面図である。同図において、図１〜図３と
同一部分には同一符号を付している。図示のように、支
持体１６（前記ＰＥＴフィルム）の中央部上に、固定化
抗体を有する展開層１１（前記固相化抗体メンブレン）
を配置し、前記展開層１１の一端（同図において左側端
部）を覆うようにして、前記支持体１６上に、試薬部１
３（前記コンジュゲートパッド）を配置した。そして、
前記試薬部１３全面と前記支持体１６の一端（同図にお
いて左側端部）とを覆うようにして前記ガラスフィルタ
ーを配置することにより検体添加部１７を形成した。ま
た、前記展開層１１の他端（同図において右側端部）に
一部重なり、かつ前記支持体１６の他端（同図において
右側端部）を覆うようにして液吸収材１５（前記濾紙）
を配置した。

【００３９】この検体分析用具の大きさは、全長５９ｍ
ｍ、幅７ｍｍ、最大厚み５５０μｍ、最小厚み３７０μ
ｍである。前記支持体１６は、長さ５９ｍｍ、幅７ｍ
ｍ、厚み２５０μｍである。前記検体添加部１７は、長
さ１８ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み３００μｍである。前記試
薬部１３は、長さ５ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み１００μｍで
ある。前記展開層１１は、長さ２５ｍｍ、幅７ｍｍ、厚
み１２０μｍである。また前記液吸収材１５は、長さ１
８ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み２００μｍである。

【００４０】このようにして作製した検体分析用具を用
い、以下のようにして、ヒトＣＲＰ抗原の検出を行っ
た。

【００４１】（試料溶液の調製）予め、０．１重量％Ｔ
ｗｅｅｎ−２０（ナカライテスク社製）および１重量％
ＢＳＡを含有する２０ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）を調製した。そして、この緩衝液に、ヒトＣ
ＲＰ抗原を５種類の濃度（５０μｇ／リットル、１０μ
ｇ／リットル、１５μｇ／リットル、２５μｇ／リット
ル、５０μｇ／リットル）で添加して５つの試料を調製
し、さらに各試料について８つの検体を準備した。

【００４２】（測定方法）前記検体分析用具の検体添加
部に前記検体溶液を点着し、１０分後、デンシトメータ
ー（ＦｌｙｉｎｇＳｐｏｔＳｃａｎｅｒＣＳ−９
０００：島津製作所社製）を用いて、図４に示す検出ラ
イン１８上における、二波長の吸光度を下記の条件で測
定し、得られた吸光度曲線を積分して測定値を得た。そ
して、この測定値を下記式（１）に代入し、補正した吸
光度を算出した。これらの結果を下記表１〜５に示す。

【００４３】（測定条件）検体量：１７０μｌ測定数：ｎ＝８測定ピッチ：０．０２ｍｍ

【００４４】

【数１】Ａ’（ＣＲＰ）＝Ａ（ＣＲＰ）×［Ａ（ウサギ）／Ａ（ウサギ０）］ …（１）Ａ’（ＣＲＰ）：補正した吸光度Ａ（ＣＲＰ）：λ＝６６０ｎｍの吸光度Ａ（ウサギ）：λ＝５００ｎｍの吸光度Ａ（ウサギ０）：赤ラテックスの吸光度の理論値（Ａ
ｂｓ．＝４０００）

【００４５】

【表１】（ヒトＣＲＰ濃度５μｇ／リットル）検体番号６６０ｎｍの吸光度５００ｎｍの吸光度補正後吸光度Ａ（ＣＲＰ）Ａ（ウサギ）Ａ’（ＣＲＰ）１４２６６３８６７４４１３２３５０２３４９６４００７３３５５８３４３７４１４１４３４９０３２９０４２４２５３２９１３０７２４２８５６３１４７２６２９４７８８７２５９５２３６４４３９１８２５９９２２６４４５９２平均値３３０６３０５３４３５７ＳＤ５４６２４９ＣＶ（％）１６．５５．７

【００４６】

【表２】（ヒトＣＲＰ濃度１０μｇ／リットル）検体番号６６０ｎｍの吸光度５００ｎｍの吸光度補正後吸光度Ａ（ＣＲＰ）Ａ（ウサギ）Ａ’（ＣＲＰ）１８９７５３１１１１１５３９２８４８３２９００１１６９９３９４１６３９２２９６０４４７４７１３０６８９７４１５１０４２４３５７７１１６５６６１０７８９３３９４１２７１６７６７９４２０７８１３０７８８１０２３３３９１８１０４４８平均値９０７３３２４６１１３１０ＳＤ１４３２１２８４ＣＶ（％）１５．８１１．４

【００４７】

【表３】（ヒトＣＲＰ濃度１５μｇ／リットル）検体番号６６０ｎｍの吸光度５００ｎｍの吸光度補正後吸光度Ａ（ＣＲＰ）Ａ（ウサギ）Ａ’（ＣＲＰ）１８９６１２９５３１２１３８２９６５５３４２０１１２９２３９４４８２９８９１２６４４４９９５１３０５５１３０２９５９３８４３０２１１２４２５６１０９８１３６９６１１８８４７１１９７２４１３３１１５８７８１０７０４３４１７１２５３０平均値１０１３２３３３６１２１９１ＳＤ１００７５７９ＣＶ（％）９．９４．７

【００４８】

【表４】（ヒトＣＲＰ濃度２５μｇ／リットル）検体番号６６０ｎｍの吸光度５００ｎｍの吸光度補正後吸光度Ａ（ＣＲＰ）Ａ（ウサギ）Ａ’（ＣＲＰ）１１３０３５３９５９１３１７０２１２９７３３００９１７２４６３１１２８８３２４３１３９２３４１３５６１３３２６１６３０９５８９２８３０３６１１７６３６１５２７９４７２０１２９４８７１１５９７２８８１１６１０１８１２８０４３８３９１３３４１平均値１２４３３３５０２１４３５０ＳＤ１８６９１９４７ＣＶ（％）１５．０１３．６

【００４９】

【表５】（ヒトＣＲＰ濃度５０μｇ／リットル）検体番号６６０ｎｍの吸光度５００ｎｍの吸光度補正後吸光度Ａ（ＣＲＰ）Ａ（ウサギ）Ａ’（ＣＲＰ）１２３０５０４３８１２１０４７２１４４５４２８２３２０４７８３２５０５６３６８４２７２０５４１７９１４３３６２２１３１６５２１４４９３５１０２４４４０６１９３７３３２４７２３８６２７１５９０６２９４８２１５８５８１２８１４３４４５２２８２６平均値１９６５８３４２５２２８４５ＳＤ３５４８２２４７ＣＶ（％）１８．１９．８

【００５０】表１から表５に示すように、各試料におい
て、補正前の吸光度［Ａ（ＣＲＰ）］のばらつき（Ｃ
Ｖ）は大きかったが、補正を行うことにより、補正後吸
光度［Ａ’（ＣＲＰ）］のばらつき（ＣＶ）は小さくな
った。この結果から、本発明の測定方法によれば、測定
精度が向上し、免疫クロマトグラフィーにおける定量分
析が可能になるといえる。

【００５１】

【発明の効果】以上のように、本発明の免疫クロマトグ
ラフィーを用いた測定方法および検体分析用具は、定量
分析が可能であり、また検出や定性分析の精度の問題も
解決できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の検体分析用具の一実施例の構成を示す
斜視図である。

【図２】（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記実施例の
測定部における抗原抗体反応の状態を説明する模式図で
ある。

【図３】（Ａ）および（Ｂ）は、本発明の検体分析用具
のその他の実施例の測定部における抗原抗体反応の状態
を説明する模式図である。

【符号の説明】

１検体分析用具２展開する検体の先端４被測定物５検体１１展開層１２血球分離部１３試薬部１４測定部１５液吸収材１６支持体１７検体添加部１８検出ライン３１固定化された第二の抗体３２第一の標識化抗体３３、３５標識３４第三の標識化抗体３６固定化された第四の抗体ａ、ｂ矢印

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１１年６月４日（１９９９．６．４）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正内容】

【図面の簡単な説明】

【図４】（Ａ）は、本発明の検体分析用具のさらにその
他の実施例の上面図であり、（Ｂ）は、その断面図であ
る。

【符号の説明】１検体分析用具２展開する検体の先端４被測定物５検体１１展開層１２血球分離部１３試薬部１４測定部１５液吸収材１６支持体１７検体添加部１８検出ライン３１固定化された第二の抗体３２第一の標識化抗体３３、３５標識３４第三の標識化抗体３６固定化された第四の抗体ａ、ｂ矢印

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】被測定物に特異的に結合する第一の標識
化物質に検体を接触させた後、前記検体を展開層におい
て毛細管現象により展開し、前記展開層の途中に形成さ
れた測定部に固定化された被測定物に結合する第二の物
質により前記被測定物と前記第一の標識化物質との複合
体を捕捉し、前記捕捉された複合体中の前記第一の標識
化物質を測定することにより被測定物を測定する方法に
おいて、第三の標識化物質を検体と共に展開し、前記第
一の標識化物質の標識と前記第三の標識化物質の標識と
が相互に識別可能であり、前記測定部において前記第三
の標識化物質の測定も行う測定方法。
【請求項２】第三の標識化物質が、測定部に固定化さ
れた第二の物質に結合する請求項１記載の測定方法。
【請求項３】測定部に第四の物質を固定化し、第三の
標識化物質が前記固定化された第四の物質に結合する請
求項１または２記載の測定方法。
【請求項４】第一の標識化物質が第一の標識化抗体で
あり、固定化された第二の物質が固定化された第二の抗
体であり、第三の標識化物質が第三の標識化抗体である
請求項２記載の測定方法。
【請求項５】第一の標識化物質が第一の標識化抗体で
あり、固定化された第二の物質が固定化された第二の抗
体であり、第三の標識化物質が第三の標識化抗体であ
り、固定化された第四の物質が固定化された第四の抗体
である請求項３記載の測定方法。
【請求項６】第三の標識化物質の測定値に対する第一
の標識化物質の測定値の比率から、被測定物を定量する
請求項１〜５のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項７】第一の標識化物質の標識と第三の標識化
物質の標識が、相互に色が異なる着色粒子である請求項
１〜６のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項８】請求項１または２記載の測定方法に用い
る検体分析用具であって、試薬部と、展開層と、前記展
開層の途中に形成された測定部とを有し、前記測定部に
は、被測定物に結合する第二の物質が固定化され、前記
試薬部は、第三の標識化物質および被測定物に特異的に
結合する第一の標識化物質を有する検体分析用具。
【請求項９】請求項３記載の測定方法に用いる検体分
析用具であって、試薬部と、展開層と、前記展開層の途
中に形成された測定部とを有し、前記測定部には、第四
の物質および被測定物に結合する第二の物質が固定化さ
れ、前記試薬部は、前記第四の物質に結合する第三の標
識化物質および被測定物に特異的に結合する第一の標識
化物質を有する検体分析用具。