ITVR20130034A1 - Nanoparticella magnetica e metodo di sintesi di detta nanoparticella. - Google Patents

Nanoparticella magnetica e metodo di sintesi di detta nanoparticella.

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Luca Dalbosco
Claudio Migliaresi
Luca Minati
Giorgio Speranza
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Description

NANOPARTICELLA MAGNETICA E METODO DI SINTESI DI DETTA
NANOPARTICELLA
DESCRIZIONE
La presente divulgazione si riferisce in generale al settore di nanoparticelle ed in particolare di nanoparticelle che presentano proprietà ottiche e magnetiche, e che possono essere utilizzate per applicazioni biomediche, come l’imaging biomedicale e terapie tumorali.
Ancora più in particolare, la presente divulgazione riguarda nanoparticelle includenti un nucleo magnetico ed un rivestimento esterno includente oro.
Lo sviluppo di nanosonde multifunzionali, che consentano nuove modalità di imaging che superino le limitazioni intrinseche di singoli componenti formanti le nanoparticelle, à ̈ di notevole interesse per molte aree di ricerca, che vanno dall’ imaging molecolare e diagnostica medica.
Recenti progressi nel campo delle nanotecnologia hanno prodotto una varietà di nanoparticelle quali nanoparticelle magnetiche (MNPs) e nanoparticelle metalliche. Le straordinarie proprietà elettroniche, magnetiche e ottiche di queste particelle sono state sfruttate in un ampio spettro di applicazioni biomediche, come l’imaging biomedicale e terapie tumorali.
Le nanostrutture precedentemente citate mostrano diversi vantaggi così come anche limitazioni.
In relazione ai vantaggi, si osserva che nanoparticelle magnetiche (MNPs) sono diventate un importante mezzo di contrasto nell’imaging T2 a risonanza magnetica (MRI) in quanto la risonanza magnetica offre alta risoluzione ed eccellente profondità di penetrazione nei tessuti.
In relazione alle limitazioni à ̈ da notare che la risonanza magnetica non à ̈ sensibile come altre tecniche come ad esempio l'imaging ottico, o la tomografia a raggi X. In relazione alle particelle metalliche, nanostrutture includenti oro sono spesso utilizzate per applicazioni biomedicali, in particolare per imaging. Tuttavia, la profondità di penetrazione nel tessuto vivente della radiazione elettromagnetica necessaria per interagire con le nanoparticelle di oro à ̈ limitata ad alcuni millimetri. Ne consegue che, al fine di migliorare le prestazioni e i vantaggi delle nanoparticelle magnetiche e delle nanoparticelle metalliche, à ̈ stato pensato di combinare tali nanoparticelle in una singola nanoparticella multifunzionale, che potrebbe essere utilizzata in una vasta varietà di applicazioni, mantenendo le proprietà uniche di ogni componente (magnetico e metallico) su scala nanometrica. In particolare, nanosonde con molteplici funzionalità permettono di utilizzare nuove modalità di imaging non utilizzabili per i singoli componenti (magnetico e metallico) separati aumentando la specificità e la risoluzione delle tecniche. Infatti, proprietà come l’assorbimento nel vicino infrarosso, magnetizzazione, alta efficienza di scattering sono molto appetibili per applicazioni biologiche di queste nanostrutture. Tuttavia, la produzione di nanosonde contenenti molteplici funzionalità integrate pur mantenendo dimensioni compatte risulta complicata.
Infatti, negli ultimi anni molti tentativi sono stati fatti per ottenere rivestimenti di oro nanometrici direttamente su nanoparticelle magnetiche. Le nanostrutture risultanti presentano un basso assorbimento nel vicino infrarosso (NIR) pur mantenendo dimensioni compatte di particelle. Questo punto à ̈ particolarmente critico per applicazioni biomedicali quali imaging in vivo e terapia.
Gli inventori della presente divulgazione hanno infatti notato che questa esigenza à ̈ dovuta al fatto che nanoparticelle magnetiche con rivestimenti in oro sottile assorbono principalmente nello spettro visibile. Per un efficiente assorbimento nel NIR le nanoparticelle dovrebbero essere di più grandi dimensioni (200-500 nm). Alla base della presente divulgazione vi à ̈ un riconoscimento da parte degli inventori della presente divulgazione che una possibilità di ricoprire le superfici magnetiche inorganiche con polimeri biocompatibili, solubili e con prioprietà antifouling sono cruciali per l’ottenimento di nanosonde utilizzabili nella pratica clinica.
Ancor più in particolare, alla base della presente divulgazione vi à ̈ un riconoscimento da parte degli inventori della presente domanda di brevetto che à ̈ possibile ottimizzare un assorbimento ottico di nanoparticelle magnetiche rivestite con uno strato polimerico intermedio, e con uno strato metallico di oro esterno, al fine di ottenere particelle di dimensione compatta, ottime proprietà magnetiche ed un assorbimento ottimale nella finestra di interesse biologico (680-900nm).
Sulla base di detti riconoscimenti, un problema tecnico alla base della presente divulgazione risiede nel mettere a disposizione nanoparticelle includenti oro che presentino ottimali proprietà magnetiche ed un assorbimento nell’intervallo di 680-900 nm.
Detto problema tecnico à ̈ risolto mediante una nanoparticella come definita nella rivendicazione 1, da un metodo di sintesi di nanoparticelle come definito nella rivendicazione 14 e da un uso di nanoparticelle come definito nella rivendicazione 21.
Caratteristiche secondarie dell'oggetto della presente divulgazione sono definite nelle rispettive rivendicazioni dipendenti.
In particolare, con riferimento alla nanostruttura come definita nella rivendicazione 1, gli inventori della presente divulgazione hanno riconosciuto che, al fine di ottenere ottimali proprietà ottiche, senza modificare le proprietà magnetiche, si possono impiegare nanostrutture includenti oro di forma non sferica, le quali assorbono principalmente la luce nel seguente intervallo di 650-900 nm.
Ancor più in particolare, con riferimento alla rivendicazione 1, vengono messe a disposizione nanoparticelle anisotropiche includenti oro, per esempio di dimensioni di circa 60 nm, contenenti un nucleo di nanoparticelle magnetiche, e un rivestimento esterno di oro di forma non regolare o non sferica, per esempio ramificata.
In una forma di realizzazione della presente divulgazione, la forma non sferica à ̈ ottenuta mediante la presenza di protrusioni sulla superficie, le quali hanno un comportamento ottico simile a “nanorods†di oro. L’anisotropia o ancor meglio la presenza di ramificazioni permette di far corrispondere o combaciare la frequenza di assorbimento a seconda della dimensione delle ramificazioni presenti nella particella. In particolare, si à ̈ riscontrato che la presenza delle ramificazioni comporta un aumento dell’ assorbimento della radiazione nel range rossoinfrarosso dello spettro associata a moti plasmonici localizzati sulle punte delle protrusioni.
La presente divulgazione riguarda inoltre un metodo di sintesi di nanoparticelle includenti oro anisotrope, per esempio in alcune forme di realizzazione, conformate a stella. In particolare, le nanostrutture sono prodotte attraverso riduzione controllata di un precursore di oro in ambiente basico acquoso usando nanoparticelle magnetiche, per esempio, di ossido di ferro rivestite con un rivestimento polimerico come nucleo di crescita per l’oro.
Il metodo di sintesi secondo la presente divulgazione à ̈ inoltre molto più veloce e semplice da effettuare rispetto a altre metodologie riportate in letteratura riguardanti la sintesi di nanoparticelle con proprietà magneto-ottiche. Inoltre, la sintesi può non prevedere l’utilizzo di surfattanti, agenti di crescita o polimeri stabilizzanti che possono risultare di difficile eliminazione al termine della sintesi. In una forma di realizzazione della presente divulgazione, le nanostrutture sono prodotte attraverso riduzione controllata di un precursore di oro, tramite idrossilammina, in ambiente basico acquoso. Le nanostrutture prodotte mostrano una risonanza plasmonica di superficie con un massimo nella regione NIR e proprietà magnetiche derivanti dal nucleo di magnetite.
Le nanoparticelle possono avere dimensioni attorno a 60 nm e contenere nuclei magnetici costituiti da nanoparticelle di magnetite di dimensioni, per esempio di 10-13nm. Queste nanoparticelle possiedono elevate proprietà magnetiche e una intensa banda di assorbimento plasmonica attorno ai 700-800 nm.
Le nanoparticelle secondo la presente divulgazione posseggono importanti caratteristiche magnetiche e ottiche che combinate con le ridotte dimensioni le rendono ideali per una vasta gamma di applicazioni.
La presente divulgazione riguarda inoltre un utilizzo di nanoparticelle come descritte nella presente divulgazione.
In particolare, le nanoparticelle possono essere utilizzate per applicazioni biomedicali come imaging MRI, mezzo di contrasto per tomografia fotoacustica o magneto-fotoacustica, nanoparticelle per terapia fototermica e/o substrati per applicazioni SERS (Surface Enhanced Raman Scattering).
Altri vantaggi, caratteristiche e modalità di impiego dell'oggetto della presente divulgazione risulteranno evidenti dalla seguente descrizione dettagliata di suoi esempi di realizzazione, dati a scopo esemplificativo e non limitativo.
È comunque evidente come ciascun esempio di realizzazione possa presentare uno o più dei vantaggi sopra elencati; in ogni caso non à ̈ comunque richiesto che ciascun esempio di realizzazione presenti simultaneamente tutti i vantaggi elencati. In particolare, con riferimento alle figure allegate:
ï€ Figura 1 mostra in modo schematico un metodo di sintesi secondo una forma di realizzazione della presente divulgazione;
ï€ Figura 2 mostra uno spettro di assorbimento di una nanoparticella secondo una forma di realizzazione della presente divulgazione;
ï€ Figura 3 mostra un’immagine ottenuta al microscopio a trasmissione elettronica di una nanoparticella secondo una forma di realizzazione della presente divulgazione;
ï€ Figura 4 mostra un’immagine ottenuta al microscopio a trasmissione elettronica di una nanoparticella secondo una forma di realizzazione della presente divulgazione.
Con riferimento ai seguenti esempi e alle figure allegate, si descrive una nanoparticella 10 secondo una forma di realizzazione della presente divulgazione, un metodo di sintesi della nanoparticella 10 o di nanoparticelle secondo una forma di realizzazione della presente divulgazione, ed alcuni possibili usi di una nanoparticella 10 o di nanoparticelle secondo rispettive forme di realizzazione della presente divulgazione.
Negli esempi sotto riportati sono stati utilizzati i seguenti prodottiti chimici della Sigma-Aldrich, i quali sono stati utilizzati senza ulteriore purificazione. In particolare, come nuclei magnetici sono state utilizzate, per esempio, nanoparticelle magnetiche di ossido di ferro (Fe3O4) stabilizzate da acido oleico di dimensione nominale 10 nm in toluene. Per il rivestimento polimerico à ̈ impiegato, per esempio, fosfolipide-polietilene glicole terminato con metossi (-OCH3) e ammina (-NH2), indicato anche come (PL)-PEG-X (DSPE PEG-2000 X=- OCH3, -NH2) della Avanti Polar Lipids. Per ottenere il guscio contenente oro à ̈ stata utilizzata una soluzione acquosa di HAuCl4.
ESEMPIO DI SINTESI
Inizialmente le nanoparticelle magnetiche vengono rese solubili in acqua.
In particolare, una soluzione di nanoparticelle di ossido di ferro (Fe3O4) ricoperte da acido oleico in toluene (3 ml, 1 mg / ml) Ã ̈ aggiunta ad una aliquota di 4.8 ml di cloroformio, ottenendo una sospensione.
Una soluzione di DSPE-PEG (4.56 ml a 5 mg / ml) e DSPE-PEG-ammina (240Î1⁄4l a 5 mg/ml) in cloroformio sono aggiunti alla sospensione, ottenendo una miscela omogenea.
Dopo agitazione, la miscela à ̈ essiccata con argon e lasciata in un essiccatore a vuoto per 48 ore per rimuovere tutte le tracce di solventi organici, ottenendo un film sostanzialmente essiccato.
Il film essiccato à ̈ stato risospeso in acqua deionizzata.
Questo procedimento può essere considerato come una variazione di un processo descritto da Dubertret et al. (Benoit Dubertret, Paris Skourides, David J. Norris , Vincent Noireaux, Ali H. Brivanlou, Albert Libchaber In Vivo Imaging of Quantum Dots Encapsulated in Phospholipid Micelles Science 29 November 2002: Vol. 298 no. 5599 pp.1759-1762).
La concentrazione di gruppi NH2nella soluzione finale può essere misurata con metodo fluorimetrico. In alcune forme della presente divulgazione, il massimo numero di gruppi NH2su ogni MNP può essere compreso in un intervallo di 30-60. I lipidi in eccesso sono stati purificati dalla soluzione di MNPS con ultracentrifugazioni ripetute (25.000 rpm per 1h, 3 volte) e rimozione del surnatante, il quale viene rimpiazzato con acqua milli-Q.
Le nanoparticelle purificate (32Î1⁄4g) sono state disciolte in 0.5 ml di soluzione acquosa a pH 12 tramite NaOH. Dopo l'incubazione di 1 minuto, sotto continua agitazione sono aggiunti 60 µl di soluzione acquosa contenente HAuCl4(10 mM) e la soluzione viene agitata per 5 minuti.
Un agente riducente, come per esempio, NH2OH (200 mM in H2O, 50 µL) Ã ̈ stato poi introdotto nella soluzione per avviare la riduzione del precursore di oro, come indicato in modo schematico in Figura 1.
E’ stato osservato che, al momento della miscelazione, la soluzione colloidale cambia colore da arancio pallido a blu-verde nell'arco di qualche minuto, indicando la formazione di oro colloidale. La soluzione viene mescolata per altri due minuti.
La sospensione à ̈ stata purificata mediante centrifugazione/lavaggio (per esempio 12000 rpm per 5 minuti, che può essere ripetuta tre volte).
Infine, al fine di isolare le nanoparticelle ottenute, queste ultime sono state ulteriormente purificate tramite separazione magnetica con l’utilizzo, per esempio, di magneti commerciali.
In relazione all’esempio di metodo di sintesi sopra descritto si osserva quanto segue.
Il metodo in accordo ad una forma di realizzazione della presente divulgazione, come quello qui descritto, consente una funzionalizzazione delle nanoparticelle di ossido di ferro tramite intercalazione di unità fosfolipidiche nel rivestimento polimerico idrofobico che riveste ciascuna delle nanoparticelle di ossido di ferro.
Il guscio idrofobico include quindi catene di diciotto atomi di carbonio due delle quali insaturi dovuti alla presenza dell’ agente stabilizzante (acido oleico). La parte idrofobica del polimero DSPE-MPEG à ̈ costituita da catene di carbonio sature e da un gruppo fosforico. Grazie all’interazione idrofobica tra le catene à ̈ possibile intercalare la coda idrofobica del polimero all’interno delle nanoparticelle magnetiche o nucleo magnetico. La sezione contenete il polietilenglicole risulta cosi esposta all’esterno della nanoparticella conferendogli proprietà idrofiliche e permettendo una solubilizzazione in acqua delle nanoparticelle.
In relazione all’esempio sopra riportato à ̈ da notare inoltre che sono stati utilizzati due differenti terminazioni per il PEG: metossi (-OCH3) e ammino (-NH2).
Un campione costituito interamente da terminazione ammino (-NH2) può presentare una forte tendenza all’agglomerazione delle nanoparticelle probabile conseguenza di interazioni acido-base intraparticellari.
In alcune forme di realizzazione della presente divulgazione, la concentrazione di PEG con terminazione ammino (-NH2) utilizzata può essere del 10% w/w.
Inoltre, la presenza del PEG può permettere di stabilizzare efficacemente in soluzione acquosa le nanoparticelle, anche nelle condizioni fortemente basiche utilizzate per la riduzione del precursore di oro (pH 12).
A pH basici inoltre le terminazioni aminiche risultano deprotonate permettendo quindi la coordinazione del precursore di oro tramite il doppietto elettronico dell’azoto.
L’aggiunta del riducente infine avvia la reazione di riduzione dell’oro la quale avviene completamente nell’arco di circa un minuto. Si à ̈ riscontrato inoltre che il pH basico della soluzione à ̈ un parametro fondamentale per l’ottenimento delle protrusioni. Queste derivano dalla rapida formazione e clustering di particelle di oro sulla superficie delle nanoparticelle magnetiche le quali producono una superfice irregolare non liscia con la formazione di protrusioni e di ramificazioni.
Il colore della soluzione diventa gradualmente più scuro passando dall’ arancio pallido delle nanoparticelle magnetiche al rosso bruno e infine al blu verde. In Figura 2 viene riportato lo spettro di assorbimento del campione in acqua.
Lo spettro presenta un picco allargato di assorbimento a 690 nm che si estende fino a 900 nm. Le nanoparticelle possono essere separate facilmente dalla soluzione mediante l’utilizzo di magneti commerciali che possono essere avvicinati al contenitore contenente la soluzione di nanoparticelle.
Dopo circa un’ora le nanoparticelle risultano essere depositate quantitativamente sul vetro del contenitore in prossimità del magnete posto a fianco del contenitore per essere fisicamente separate, mentre la soluzione appare incolore.
Si può quindi constatare che le fasi di purificazione e separazione delle nanoparticelle secondo la presente divulgazione possono essere molto rapide.
Con riferimento a Figure 3 e 4, tali figure includono immagini ottenute al microscopio a trasmissione elettronica del campione ottenuto. Le immagini mostrano la presenza di nanoparticelle non sferiche “ramificate†della dimensione di circa 60 nm. L’analisi elementare ottenuta con lo stesso strumento ha evidenziato la presenza di ferro nel campione (7% in moli) confermando la presenza delle nanoparticelle di Fe3O4all’interno del rivestimento di oro.
ESEMPI DI USO
Le nanoparticelle secondo la presente divulgazione possono essere utilizzate per applicazioni biologiche che prevedono l’utilizzo di medium contenenti sali, proteine e altre molecole organiche.
Nel caso di impiego in applicazioni biologiche può essere prevista una ulteriore stabilizzazione delle nanoparticelle tramite coniugazione con ulteriori differenti polimeri contenenti gruppi funzionali interagenti con le superfici di oro (come, per esempio, gruppi carbossillici, ammine e tioli).
Per applicazioni come sensori tramite l’utilizzo della banda di assorbimento plasmonica o per applicazioni come substrati per SERS (Surface Enhanced Raman Scattering), le nanoparticelle possono essere utilizzate direttamente dopo la sintesi senza alcuna ulteriore funzionalizzazione.
Al fine di ottenere uno spettro Raman di un analita, tale analita può essere mescolato con le nanoparticelle direttamente in soluzione acquosa. E’ possibile ottenere tramite tecnica micro-Raman lo spettro del campione di interesse analizzando direttamente la sospensione colloidale.
Nel caso di molecole/analiti insolubili in acqua le caratteristiche magnetiche delle nanoparticelle possono essere utilizzate per depositare un film omogeneo su diversi substrati.
Il substrato ottenuto può poi essere utilizzato per analisi micro Raman in condizioni secche. Il sistema di deposizione magnetica delle nanoparticelle può essere utilizzato anche per scopi decorativi quali l’ottenimento di vetri colorati.
Un’ altra importante applicazione delle nanoparticelle secondo la presente divulgazione può essere l’utilizzo di queste nanoparticelle come agenti di contrasto per imaging biologico. Grazie alla combinazione delle proprietà magnetiche e ottiche le nanoparticelle possono essere utilizzate quali mezzi di contrasto in tecniche di imaging di risonanza magnetica, sfruttando i tempi di rilassamento magnetico dei nuclei di magnetite, oppure in tomografia fotoacustica sfruttando le proprietà plasmoniche delle nanoparticelle in particolare la loro alta sezione d’urto nella finestra di trasparenza dei tessuti biologici (700-900 nm) e la capacità delle nanoparticelle di trasformare gli impulsi di fotoni in calore.
E’ da notare che la capacità delle nanoparticelle di assorbire le lunghezze d’onda nella regione del vicino infrarosso e la capacità delle stesse di trasferire l’energia assorbita à ̈ una delle proprietà alla base delle tecniche di analisi e imaging descritte sopra.
Nella tecnica SERS la nanoparticella assorbe l’energia radiante trasferendola alla molecola da analizzare aumentando notevolmente l’intensità di emissione dello spettro Raman permettendo cosi analisi di molecole anche a basse concentrazioni. Nella tomografia fotoacustica viene sfruttata la capacità della nanoparticella di convertire l’energia radiante assorbita in calore che permette, tramite un rivelatore a ultrasuoni, di effettuare una rilevazione spaziale della stessa.
In relazione alla tecnica di tomografia magneto-fotoacustica, si osserva che la risoluzione spaziale della tomografia fotoacustica viene incrementata mediante l’utilizzo dell’applicazione di un campo magnetico in grado di indurre fenomeni di traslazione nelle nanoparticelle. In questo modo si ottiene una forte riduzione del rumore di fondo presente nella tomografia fotoacustica classica migliorando notevolmente la risoluzione spaziale e le prestazioni della tecnica. Le nanoparticelle prodotte secondo le forme di realizzazione sopra menzionate della presente divulgazione, possedendo elevate proprietà magnetiche e un forte assorbimento della luce nel range di interesse, sono potenziali candidati per l’utilizzo come agenti per separazione e rilevazione di componenti biologiche nel sangue quali proteine o cellule tumorali circolanti.
L'oggetto della presente divulgazione à ̈ stato fin qui descritto con riferimento a suoi esempi di realizzazione. È da intendersi che possono esistere altre forme di realizzazione che afferiscono al medesimo nucleo inventivo, tutte rientranti nell’ambito di protezione delle rivendicazioni qui di seguito annesse.

Claims (22)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Nanoparticella (10) includente un nucleo magnetico, un rivestimento polimerico, ed un guscio metallico, in cui il rivestimento polimerico riveste il nucleo ed à ̈ interposto tra il nucleo magnetico ed il guscio metallico, ed in cui il guscio metallico include oro e riveste il rivestimento polimerico, ed in cui il guscio metallico à ̈ anisotropo o ha sagoma anisotropa.
  2. 2. Nanoparticella (10) secondo la rivendicazione 1, in cui il guscio metallico ha un profilo presentante protuberanze o sporgenze irregolari.
  3. 3. Nanoparticella (10) secondo la rivendicazione 2, in cui dette protuberanze o sporgenze irregolari sono distribuite in modo irregolare su una superficie della nanoparticella.
  4. 4. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il guscio metallico ha una conformazione cosiddetta a stella.
  5. 5. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti in cui il guscio metallico presenta proprietà plasmoniche.
  6. 6. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il nucleo à ̈ una nanostruttura di magnetite o di ossido di ferro (Fe3O4).
  7. 7. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui la nanostruttura di magnetite comprende una superficie contenente catene lipidiche.
  8. 8. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rivestimento polimerico include polietilene glicole.
  9. 9. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il rivestimento polimerico include un fosfolipide coniugato con polietilene glicole.
  10. 10. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 8 o 9, in cui il polietilene glicole presenta terminazione con gruppo amminico.
  11. 11. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, detta nanoparticella avendo un assorbimento nel visibile-vicino infrarosso, o un assorbimento nell’intervallo 650-900 nm.
  12. 12. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui una distanza tra il nucleo e il guscio metallico à ̈ compresa tra 2 e 5 nm.
  13. 13. Nanoparticella (10) secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, avente una dimensione media tra i 60 nm e i 100 nm.
  14. 14. Metodo per sintetizzare una nanoparticella (10), detto metodo comprendendo una fase in cui, in ambiente basico, ad una sospensione colloidale di nanoparticelle magnetiche includenti ciascuna un nucleo magnetico ed un rivestimento polimerico che riveste il nucleo magnetico, viene aggiunto un precursore metallico di oro.
  15. 15. Metodo secondo la rivendicazione 14, in cui il pH Ã ̈ almeno 12.
  16. 16. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti 14 o 15, in cui il rivestimento polimerico presenta terminazione amminica.
  17. 17. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti da 14 a 15, in cui il precursore metallico di oro à ̈ HAuCl4 solubilizzato in acqua.
  18. 18. Metodo secondo la rivendicazione 17, in cui il precursore metallico viene ridotto in ambiente basico tramite un agente riducente.
  19. 19. Metodo secondo la rivendicazione 18, in cui l’agente riducente à ̈ una soluzione acquosa di NH2OH.
  20. 20. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui le nanoparticelle sintetizzate vengono purificate tramite centrifugazione e separate dall’ambiente di reazione
  21. 21. Uso di nanoparticelle (10) per sfruttamento di proprietà ottiche e magnetiche di dette nanoparticelle (10), in cui ciascuna nanoparticella (10) à ̈ definita in una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 13, o à ̈ ottenuta tramite un metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 14 a 20.
  22. 22. Uso secondo la rivendicazione 21, in cui le nanoparticelle (10) sono utilizzate in almeno una delle seguenti applicazioni: - utilizzo di dette nanoparticelle (10) come agenti di contrasto per imaging biologico; - applicazioni come sensori tramite l’utilizzo di una banda di assorbimento plasmonica; - applicazioni come substrati per SERS (Surface Enhanced Raman Scattering), - utilizzo di dette nanoparticelle (10) in tomografia fotoacustica o magnetofotoacustica; - utilizzo di dette nanoparticelle (10) per terapia fototermica.
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