IT201800007264A1 - Metodo per la diagnosi in vitro di carcinoma della prostata mediante biomarcatori urinari - Google Patents
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Description
DESCRIZIONE
del brevetto per invenzione industriale dal titolo: “METODO PER LA DIAGNOSI IN VITRO DI CARCINOMA DELLA PROSTATA MEDIANTE BIOMARCATORI URINARI”
La presente invenzione è relativa a un metodo per la diagnosi in vitro/ex vivo di un carcinoma della prostata e/o dell’aggressività dello stesso mediante biomarcatori urinari.
Stato dell’Arte
Il carcinoma della prostata (PCa) rappresenta la patologia più comune e la seconda causa di morte legata a tumori per gli uomini in tutto il mondo.
Attualmente la diagnosi di carcinoma della prostata viene posta solo dopo valutazione istologica di tumore su diversi campioni di tessuto prostatico prelevati tramite biopsia. La biopsia prostatica viene indicata in seguito alla valutazione dei livelli circolanti dell’antigene specifico della prostata (PSA) unita all’esplorazione digito rettale (DRE).
PSA e DRE sono esami preliminari con lo scopo di individuare quei soggetti che con maggiore probabilità hanno sviluppato un tumore alla prostata. In presenza di anomalie, la biopsia prostatica viene eseguita per confermare o smentire le evidenze cliniche. Tuttavia, la limitata accuratezza di questi test porta ad un elevato numero di sovra-diagnosi e di conseguenza sovra-trattamenti.
Mediamente, infatti, per ogni quattro uomini che si sottopongono ad una biopsia della prostata per livelli di PSA sospetti, un solo individuo risulta affetto da carcinoma della prostata dopo esame bioptico. Inoltre, molti dei carcinomi prostatici diagnosticati hanno un decorso molto lento e possono non dare sintomi per tutta la vita del paziente. Essendo impossibile distinguere i tumori sovradiagnosticati dagli altri, alla maggior parte dei pazienti trovati positivi allo screening viene proposto il trattamento chirurgico che è spesso accompagnato da effetti avversi (come disfunzione erettile, incontinenza urinaria, infezioni) e presenta un forte impatto sulla qualità della vita.
Oltre al disagio per i pazienti è da considerare l’impatto economico che una percentuale così alta di test inutili ha sulle risorse del sistema sanitario. Uno dei modi per valutare se si sta facendo un buon uso delle risorse (good value for money) è quello di esprimere i benefici clinici rapportati agli aspetti economici. I due studi economici esistenti sullo screening con PSA sono concordi nel definire questo intervento non “costo-efficace”.
In sintesi, significa che sull’intera popolazione i costi legati al processo che si avvia una volta effettuato il test del PSA (dovuti a biopsie, trattamenti, eventuali danni) superano i benefici, quantificati economicamente.
Alla luce di quanto appena evidenziato, risulta chiara la necessità impellente di identificare biomarcatori specifici per la diagnosi di carcinoma della prostata per individuare uomini a rischio di sviluppare un carcinoma prostatico e prevedere la naturale progressione del tumore.
Alcuni studi recenti suggeriscono che l’infertilità maschile possa essere un segnale del rischio di sviluppare una forma aggressiva di cancro alla prostata. In particolare è stato visto che soggetti con una diagnosi di infertilità possiedono una probabilità tre volte superiore di sviluppare un tumore alla prostata aggressivo, rispetto alla popolazione maschile fertile (Walsh TJ et al., Cancer. 2010 May 1;116(9):2140-7).
La prostata è una ghiandola con la funzione principale di produrre il liquido seminale contenente elementi fondamentali alla sopravvivenza, alla motilità e alla qualità degli spermatozoi. E’ stato visto che stati infiammatori cronici determinano alterazioni delle caratteristiche fisico chimiche della parte liquida dell’eiaculato (variazioni della viscosità e della fluidificazione, del pH, presenza di globuli bianchi, modificazioni dei livelli di PSA, PAP, zinco, fruttosio ed acido citrico) influenzando la fertilità.
Durante la trasformazione neoplastica, la cellula può andare incontro a profondi cambiamenti sia fenotipici sia funzionali. Dato che la maggioranza dei tumori prostatici sono classificati come adenocarcinomi, ovvero tumori che coinvolgono la parte ghiandolare, è plausibile che la trasformazione neoplastica all’interno della prostata possa pregiudicare la funzione secretoria della ghiandola compromettendo la composizione della secrezione prostatica.
Da alcuni studi emerge che tumori prostatici avanzati possono perdere l’espressione del PSA (Aihara M et al., J Urol. 1994;151:1558-1564; Weir EG et al., J Urol.
2000;163:1739-1742; Augustin H et al., J Cancer Res Clin Oncol. 2003;129:662-668). Studi più approfonditi utilizzando la tecnologia del “tissue microarray” hanno confermato che l’espressione del PSA nel tessuto possa essere utilizzato come parametro sia diagnostico sia prognostico per il tumore alla prostata (Erbersdobler A et al., Urology. 2009 Nov;74(5):1169-73).
Dato che il tratto urinario è in stretto contatto con la prostata, i fattori prodotti dal tessuto prostatico stesso possono essere riversati e quindi rilevati nell’urina rappresentando dei marcatori biologici per la diagnosi e la prognosi del carcinoma della prostata.
Sulla base di questo, la misurazione del PSA urinario dovrebbe dare informazioni utili riguardo alla fisiologia e alla situazione patologica della prostata, in quanto il PSA è il normale prodotto delle cellule epiteliali che circondano gli acini e i dotti prostatici (Irani J et al., Eur Urol 1996;29:407-12).
EP2515115 descrive l’utilizzo del PSA urinario come marcatore di tumore alla prostata. In EP2515115, tuttavia, l’assenza di massaggio prostatico prima della raccolta di urine non permette di ottenere una consistente secrezione prostatica. I valori medi individuati risultano essere intorno ai 50 ng/ml per i soggetti sani e 5 ng/ml per i malati.
In un lavoro pubblicato nel 2007 viene osservato che il rapporto tra PSA urinario e PSA plasmatico è diverso tra pazienti con tumore prostatico, pazienti con iperplasia benigna dell’organo e soggetti sani (Bolduc S et al., Can Urol Assoc J. 2007 Nov;1(4):377-81).
Recentemente è stato visto che il PSA circolante esiste in una forma libera e una forma complessata a diverse molecole della famiglia degli inibitori delle proteasi. Più frequentemente, il PSA si trova complessato alla alpha-1antichymotripsin (ACT) ed è stato osservato che i pazienti con tumore alla prostata hanno una più alta percentuale di PSA legata a ACT rispetto ai donatori sani, che mostrano, invece, una più alta percentuale di PSA libero (Christensson A et al., J Urol. 1993;150:100–5).
Diversi studi hanno dimostrato a livello di tessuto una più alta espressione di ACT come mRNA e proteina nel tumore alla prostata rispetto all’iperplasia benigna, giustificando la maggiore quantità di PSA complessato (Zhu L et al., Prostate. 2013 Jan;73(2):219-26).
WO0002052 descrive l’utilizzo del PSA, complessato e libero, clivato e non clivato, come biomarcatori in plasma/siero per distinguere un soggetto sano da un soggetto con carcinoma della prostata.
Scopo della presente invenzione è quello di fornire un metodo per la diagnosi in vitro/ex vivo di carcinoma della prostata mediante nuovi biomarcatori presenti nell’urina, che fornisca risultati affidabili e accurati in modo rapido ed economico.
Secondo la presente invenzione tale scopo viene raggiunto mediante il metodo secondo le rivendicazioni 1 e 4.
Secondo la presente invenzione viene inoltre fornito un kit per uso nel suddetto metodo.
Breve descrizione delle figure
Per una migliore comprensione della presente invenzione, essa viene ora descritta anche con riferimento alle figure allegate, che illustrano quanto segue:
- la Figura 1 rappresenta i grafici dei valori assoluti dei biomarcatori urinari Zinco (Zn), PSA totale (utPSA), PSA libero (ufPSA), spermina in individui affetti da carcinoma della prostata e individui sani;
- la Figura 2 rappresenta i grafici dei valori dei biomarcatori urinari Zn, utPSA, ufPSA, spermina (Spm) normalizzati sulla creatinina in individui affetti da carcinoma della prostata e individui sani;
- la Figura 3 rappresenta la curva ROC (receiver operating characteristic) per Zn, spermina (Spm), utPSA, ufPSA;
- la Figura 4a rappresenta la curva ROC per le combinazioni Zn-Spm, Zn-utPSA, Zn-ufPSA, ufPSA-Spm, utPSA-ufPSA, utPSA-Spm;
- la Figura 4b rappresenta la curva ROC per le combinazioni Zn-Spm-utPSA, Zn-Spm-ufPSA, Zn-utPSA-ufPSA, Spm-utPSA-ufPSA, Spm-utPSA-ufPSA-Zn;
- la Figura 5 rappresenta i grafici dei valori assoluti dei biomarcatori urinari Zinco (Zn), PSA totale (utPSA), PSA libero (ufPSA), spermina in individui affetti da carcinoma della prostata suddivisi in base all’aggressività del tumore in basso, intermedio e alto rischio e individui sani.
Descrizione dettagliata dell’invenzione
Secondo la presente invenzione, il metodo per la diagnosi in vitro/ex vivo di un carcinoma della prostata in un individuo comprende le seguenti fasi.
In una prima fase, viene fornito un campione di urina dell’individuo. Il campione di urina è preferibilmente ottenuto dopo aver eseguito un massaggio prostatico al paziente.
In una seconda fase, viene quantificato lo zinco nel campione di urina. Preferibilmente, la quantificazione avviene mediante test colorimetrico.
In una terza fase, viene confrontato il valore di zinco con un valore di riferimento. Il valore di riferimento corrisponde a un valore tipico di un individuo non affetto da carcinoma della prostata.
Il metodo secondo la presente invenzione consente non solo la diagnosi di un carcinoma della prostata, ma permette anche di valutare l’aggressività dello stesso. I marcatori secondo la presente invenzione risultano differentemente espressi nelle urine di pazienti a basso, intermedio ed alto rischio di progressione della malattia. Per “aggressività del tumore” si intende infatti il livello di rischio di progressione della malattia.
Preferibilmente, nella seconda fase del suddetto metodo viene quantificata anche la PSA (antigene prostatico specifico) totale (utPSA) e nella terza fase il valore quantificato di PSA totale (utPSA) viene confrontato con un valore di riferimento.
Ancor più preferibilmente, nella seconda fase viene quantificata la PSA (antigene prostatico specifico) libera (ufPSA) e nella terza fase il valore quantificato di PSA libera (ufPSA) viene confrontato con un valore di riferimento.
Preferibilmente la quantificazione della PSA totale (utPSA) e/o della PSA libera (ufPSA) è eseguita mediante immunodosaggio, metodo spettrometrico, spettrofotometrico, colorimetrico, elettroforetico, complessometrico, amperometrico, ancora più preferibilmente immunodosaggio. La sequenza della PSA è fornita come SEQ ID NO:1.
Ancor più preferibilmente, nella seconda fase viene quantificato un ulteriore biomarcatore di carcinoma della prostata e nella terza fase il valore quantificato di tale biomarcatore viene confrontato con un valore di riferimento. Tale biomarcatore è selezionato dal gruppo costituito da fosfatasi acida prostatica (PAP), fibrinolisina, profibrinolisina, citrato, fruttosio, putrescina, spermidina, spermina, prostaglandine, calcio, rame. Tale biomarcatore è preferibilmente la spermina (C10H26N4). Preferibilmente la quantificazione della spermina è eseguita mediante immunodosaggio, metodo spettrometrico, spettrofotometrico, colorimetrico, elettroforetico, complessometrico, amperometrico, ancora più preferibilmente immunodosaggio.
Preferibilmente, nel metodo secondo l’invenzione i valori dei biomarcatori (zinco, PSA totale (utPSA), PSA libera (ufPSA), spermina ecc.) sono normalizzati rispetto al valore della creatinina in modo da aumentare l’accuratezza del test (come sarà spiegato più in dettaglio nell’esempio).
In questa forma di realizzazione preferita, quindi, il metodo secondo l’invenzione comprende le seguenti fasi.
In una prima fase, viene fornito un campione di urina dell’individuo.
In una seconda fase, viene quantificato lo zinco nel campione di urina.
In una terza fase, viene quantificata una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina) nel campione di urina. Preferibilmente la quantificazione avviene mediante un immunodosaggio, metodo enzimatico o metodo Jaffe.
In una quarta fase, viene normalizzato il valore quantificato di zinco con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina).
In una quinta fase, viene confrontato il valore normalizzato di zinco con un valore di riferimento. Il valore di riferimento corrisponde a un valore tipico di un individuo non affetto da carcinoma della prostata.
Anche in questa forma di realizzazione, viene preferibilmente quantificato e normalizzato il valore di PSA (antigene prostatico specifico) totale (utPSA) e ancor più preferibilmente il valore di PSA (antigene prostatico specifico) libera (ufPSA).
Preferibilmente, quindi, nella seconda fase viene quantificata anche la PSA (antigene prostatico specifico) totale (utPSA), nella quarta fase viene normalizzato il valore quantificato di PSA totale (utPSA) con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina), e nella quinta fase viene confrontato il valore normalizzato di PSA totale (utPSA) con un valore di riferimento.
Ancor più preferibilmente, nella seconda fase viene quantificata anche la PSA (antigene prostatico specifico) libera (ufPSA), nella quarta fase viene normalizzato il valore quantificato di PSA libera (ufPSA) con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina), e nella quinta fase viene confrontato il valore normalizzato di PSA libera (ufPSA) con un valore di riferimento.
Ancor più preferibilmente, nella seconda fase viene quantificato un ulteriore biomarcatore di carcinoma della prostata, nella quarta fase viene normalizzato il valore quantificato di tale biomarcatore con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina), e nella quinta fase viene confrontato il valore normalizzato di tale biomarcatore con un valore di riferimento. Tale biomarcatore è selezionato dal gruppo costituito da fosfatasi acida prostatica (PAP), fibrinolisina, profibrinolisina, citrato, fruttosio, putrescina, spermidina, spermina, prostaglandine, calcio, rame. Tale biomarcatore è preferibilmente spermina.
Il kit per uso nel metodo secondo la presente invenzione comprende
- mezzi di raccolta e preparazione di un campione di urina da un individuo;
- mezzi per quantificare lo zinco.
Preferibilmente, il kit comprende anche
- mezzi per quantificare la PSA totale (utPSA); e/o - mezzi per quantificare la PSA libera (ufPSA); e/o - mezzi per quantificare altri biomarcatori del carcinoma della prostata, preferibilmente la spermina; e/o - mezzi per quantificare una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina).
Esempio
Sono stati raccolti campioni di urina da 110 soggetti di età tra i 51 e gli 86 anni con indicazione di biopsia prostatica.
I campioni di urina sono stati raccolti dopo esplorazione digito-rettale e massaggio prostatico composto da 3 compressioni digitali in ciascun lobo partendo dalla base, verso la parte mediana e l’apice per una durata di 180 secondi. Il campione è stato agitato e congelato in tubi Falcon a -80°C entro 30 minuti dalla raccolta.
Ad ogni soggetto sono stati prelevati inoltre 12 campioni bioptici, utilizzati per la normale procedura diagnostica da parte della sezione di anatomia patologica. La valutazione istologica ha rilevato la presenza di cellule neoplastiche in 53 soggetti (PCa). Dei soggetti restanti, 29 sono risultati liberi da malattia, in 16 si è riscontrata una situazione patologica benigna, a 12 una situazione potenzialmente precancerosa. Questo indica che circa il 55% dei soggetti, sospetti per PSA/DRE/ECO, è andato incontro a un prelievo bioptico superfluo.
Le urine sono state scongelate e la presenza di biomarcatori utPSA e ufPSA è stata valutata tramite saggio ELISA (Sigma Aldrich), lo Zinco è stato quantificato tramite test colorimetrico (Zinc assay test, Sigma Aldrich), la spermina è stata quantificata tramite saggio ELISA (MyBiosurce).
Poiché la quantità dei biomarcatori nell’urina è dipendente dal volume di urina raccolta e dalla sua concentrazione, è stato effettuato un calcolo chiamato “normalizzazione sulla creatinina” per aumentare l’accuratezza del test. La creatinina è una sostanza prodotta dal corpo ed escreta attraverso le urine e il suo livello è un indicatore della concentrazione delle urine. Più alto è il valore di creatinina, maggiore è la concentrazione dell’urina. Più basso è il valore di creatinina, maggiore è la diluizione delle urine.
Per eliminare possibili fattori confondenti, sono stati esclusi i casi con situazioni precancerose e patologiche benigne.
Già dai valori assoluti dei biomarcatori è stato possibile identificare una differenza statisticamente significativa tra soggetti sani e soggetti malati (si veda la Figura 1).
Dopo normalizzazione su creatinina si osserva una differenza ancor più significativa tra soggetti malati e soggetti sani per tutti e 4 i marcatori studiati (si veda la Figura 2).
I valori di Zn, Spermina, utPSA, ufPSA correlano con la presenza di tumore, con un AUC di 0.656, 0.628, 0.644, 0.617 rispettivamente (si veda la Figura 3).
Effettuando un’analisi multivariata si osserva che la combinazione di più fattori aumenta la potenza del test nel correlare il livello di biomarcatori e tumore prostatico (si vedano le Figure 4a e 4b).
Analizzando gli stessi valori dopo aver suddiviso i pazienti sulla base dell’aggressività del tumore (basso, intermedio, alto rischio), si evidenzia che ognuno dei tre marcatori analizzati diminuisce maggiormente nei soggetti con tumore in stadio più avanzato (si veda la Figura 5).
Dai risultati dell’esempio sono evidenti i vantaggi che la presente invenzione consente di ottenere.
L’analisi in campioni di urina dei valori assoluti di singoli biomarcatori zinco, PSA totale, PSA libera, spermina è già informativa di carcinoma della prostata. L’analisi dei valori normalizzati rispetto alla creatinina consente di ottenere informazioni ancor più accurate. L’analisi contemporanea di più biomarcatori consente di identificare i pazienti con carcinoma della prostata in modo ancor più affidabile.
Il metodo secondo la presente invenzione rappresenta un modo rapido ed economico per ottenere una diagnosi affidabile, evitando procedure invasive.
Claims (10)
- RIVENDICAZIONI 1. Metodo per la diagnosi in vitro/ex vivo di un carcinoma della prostata e/o dell’aggressività dello stesso in un individuo comprendente le fasi di: a) fornire un campione di urina dell’individuo; b) quantificare lo zinco nel campione di urina; c) confrontare il valore quantificato di zinco con un valore di riferimento.
- 2. Metodo secondo la rivendicazione 1, in cui in fase b) viene inoltre quantificata la PSA (antigene prostatico specifico) totale (utPSA) e/o la PSA (antigene prostatico specifico) libera (ufPSA) e in fase c) viene inoltre confrontato il valore quantificato di PSA totale (utPSA) con un valore di riferimento e/o confrontato il valore quantificato di PSA libera (ufPSA) con un valore di riferimento.
- 3. Metodo secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui in fase b) viene inoltre quantificata la spermina e in fase c) viene inoltre confrontato il valore quantificato di spermina con un valore di riferimento.
- 4. Metodo per la diagnosi in vitro/ex vivo di un carcinoma della prostata e/o dell’aggressività dello stesso in un individuo comprendente le fasi di: a’) fornire un campione di urina dell’individuo; b’) quantificare lo zinco nel campione di urina; c’) quantificare nel campione di urina una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina); d’) normalizzare il valore quantificato di zinco con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina); e’) confrontare il valore normalizzato di zinco con un valore di riferimento.
- 5. Metodo secondo la rivendicazione 4, in cui in fase b’) viene inoltre quantificata la PSA (antigene prostatico specifico) totale (utPSA) e/o la PSA (antigene prostatico specifico) libera (ufPSA), in fase d’) viene inoltre normalizzato il valore quantificato di PSA totale (utPSA) con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina) e/o viene normalizzato il valore quantificato di PSA libera (ufPSA) con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina), e in fase e’) viene inoltre confrontato il valore normalizzato di PSA totale (utPSA) con un valore di riferimento e/o viene confrontato il valore normalizzato di PSA libera (ufPSA) con un valore di riferimento.
- 6. Metodo secondo la rivendicazione 4 o 5, in cui in fase b’) viene inoltre quantificata la spermina, in fase d’) viene inoltre normalizzato il valore quantificato di spermina con il valore quantificato di una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina), e in fase e’) viene inoltre confrontato il valore normalizzato di spermina con un valore di riferimento.
- 7. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni dalla 1 alla 6, in cui la quantificazione dello zinco è eseguita mediante test colorimetrico.
- 8. Metodo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 2, 3, 5 o 6, in cui la quantificazione della PSA totale (utPSA) e/o della PSA libera (ufPSA) è eseguita mediante immunodosaggio, metodo spettrometrico, spettrofotometrico, colorimetrico, elettroforetico, complessometrico, amperometrico.
- 9. Kit per uso nel metodo secondo la rivendicazione 1 comprendente: - mezzi di raccolta e preparazione di un campione di urina da un individuo; - mezzi per quantificare lo zinco.
- 10. Kit per uso nel metodo secondo la rivendicazione 2, 3, 4, 5 o 6, comprendente inoltre - mezzi per quantificare la PSA totale (utPSA); e/o - mezzi per quantificare la PSA libera (ufPSA); e/o - mezzi per quantificare la spermina; e/o - mezzi per quantificare una molecola di formula molecolare C4H7N3O (creatinina).
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
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| ZDRAVKA MEDAROVA ET AL: "Risk stratification of prostate cancer patients based on EPS-urine zinc content", AMERICAN JOURNAL OF CANCER RESEARCH, 1 January 2014 (2014-01-01), United States, pages 385, XP055525100, Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4106656/pdf/ajcr0004-0385.pdf> [retrieved on 20181120] * |
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