HUT70748A - Inhibitors of hiv protease useful for the treatment of aids, pharmaceutical compositions containing them and process for preparing them - Google Patents

Description

AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK

A találmány tárgya azok az (I) általános képletű vegyületek és gyógyászati szempontból alkalmazható sóik, melyek gátolják az 1-típusú (HIV-1) és a 2-típusú (HIV-2) emberi immunhiány vírus (humán immunodéiiciency vírus, HÍV) által kódolt proteázt. Ezek a vegyületek alkalmasak a HÍV fertőzés, valamint az általa okozott szerzett immunhiányszindróma (acquired immuné deficiency syndrome, AIDS) megelőzésére és kezelésére. A vegyületek gyógyászati szempontból alkalmazható sóik és gyógyszerkészítményeik alkalmazhatók önmagukban vagy más vírusellenes szerrel, immunszabályozóval, antibiotikummal vagy más oltóanyaggal együtt.

Foglalkozik a találmány az AIDS kezelésének és megelőzésének, a HÍV fertőzés kezelésének és megelőzésének, valamint a HÍV-szaporodás meggátlásának módszereivel.

Az emberi immunhiány vírusnak (HÍV) elnevezett retrovírus az AIDS-nek nevezett összetett betegség okozati tényezője, és a retrovírusok a lentivírus családjába tartozik [M.A. Gonda, F. WongStaal, R. C.Gallo; Sequence homology and morphalogical similarity of HTLV III and visna vírus, a pathogenic lentivirus, Science, 227: 173 (1985); P. Sonigo, N. Alizon és munkatársai, Nucleotide sequence of the visna lentivirus: relationship to the AIDS vírus, Cell: 42: 369 (1985)]. Az összetett AIDS betegség magába foglalja az immunrendszer súlyosbodó pusztulását, valamint a központi és környéki idegrendszer elfajulását. A HÍV vírus azelőtt LAV, HTLV-III vagy ARV vírusként volt ismert.

A retrovírusok közös tulajdonsága, hogy a transzláció után egy, a vírus által kódolt proteáz poliprotein előanyagokat alakít át, melynek következtében olyan, az érett vírusra jellemző proteinek keletkeznek, melyek a vírus kialakulásához és működéséhez szükségesek. Ennek a folyamatnak a megszakítása megakadályozni látszik a fertőző vírus létrejövését. Az emberből elkülönített nem-fertőző HÍV törzsek kiónjaiban ugyancsak megfigyelték a kifejletlen struktúrfehérjét. Az eredmények azt sugalják, hogy a HÍV proteáz gátlása hatásos módszer lehet az AIDS, valamint a HÍV fertőzés kezelésére és megelőzésére.

A HÍV genom gag és pol néven ismert szerkezeti fehérjeelőanyagokat kódol, melyek átalakításával jön létre a proteáz, reverz-transzkriptáz és endonukleáz/integráz. A proteáz tovább hasítja a gag és gag-pol poliproteineket, a vírusmag érett struktúrfehérjéit eredményezve.

Jelentős erőfeszítések történnek a HÍV közvetlen befolyásolására azon struktúrproteinek előanyagain keresztül, melyek átalakítása eredményezi a retrovírus proteázt, reverz-transzkriptázt és endonukleáz/integrázt. Például a jelenleg használt gyógyszer, az AZT, a vírus reverz-transzkriptázának gátlója [H. Mitsuya NS. Broder, Inhibition of the in vitro infectivity in cytopathic effects of HTLV III, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83: 1911 (1968)].

Kutatási erőfeszítések történnek a HÍV proteáz inhibitorok irányában is; lásd például a 346 847 nyilvántartási számú európai szabadalmat, mely a HIV-proteázt gátló vegyületekkel foglalkozik.

Sajnos az ismert vegyületek többségét toxicitási problémák kisérik, élettani szempontból alkalmazhatatlanok vagy rövid az in vivő felezési idejük. Annak ellenére tehát, hogy ismert a protázgátlással kapcsolatos potenciális gyógyítási lehetőség és az ilyen irányú kutatás erőteljesen folyik, igazán használható gyógyszer ezidáig még nem jelent meg.

A találmány tárgya olyan új p.roteázgátlók, melyek alkalmasak a HÍV fertőzés és/vagy az annak következményeként jelentkező AIDS betegség kezelésére vagy megelőzésére.

A találmány tárgya tehát az (I) általános képletű - ahol R jelentése arilcsoport, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport;

A jelentése kémiai kötés, -(CH₂)_V-, (^CH2^m^0_^^CH2^n ^va9V

-(CH₂)_mNR°-(CH₂)_n~ általános képletű vegyület;

m és n jelentése egymástól függetlenül 0, 1 vagy 2;

v jelentése 0, 1, 2 vagy 3;

R° jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

q jelentése 0, 1 vagy 2;

R¹ jelentése arilcsoport vagy 5-7 szénatomszámú cikloalkilcsoport;

R² jelentése aminosav-oldallánc, -CH2-R^2a,

-CH₂-C(0)-NR°-A-R^2a vagy -C^-C (0)-0R^2a általános képletű csoport, melyen belül _R2a jelentése arilcsoport, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport;

X jelentése (IV), (V) vagy (VI) általános képletű csoport;

Y jelentése arilcsoport vagy telítetlen heterociklusos csoport;

Y¹ jelentése heterociklusos csoport;

R^3a jelentése -C(O)-NR⁴R⁴ általános képletű , (VII) vagy (VIII) általános képletű csoport;

R^35d jelentése (IX) , (X) vagy (XI) általános képletű csoport;

p jelentése 4 vagy 5;

jelentése 3, 4 vagy 5;

R⁴ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy hidroxilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport; és

R⁵ és R⁶ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, hidroxil-, 1-6 szénatomszámú alkil-, 1-6 szénatomszámú alkoxi-, amino-, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-, hidroxilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkil-,karboxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, karbamoil-, N-alkil-karbamoil-csoport, melyben belül az alkilcsoport 1-4 szénatomszámú aril-, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója.

A találmány további tárgyát képezik az új (II) általános képletű - ahol

R¹ és X jelentése azonos a fentebb tett meghatározásokkal vegyületek vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sóik.

A (II) általános képletű vegyületek az (I) általános képletű vegyületek előállításának köztestermékei.

Az 1-6 szénatomszámú alkilcsoport jelentése 1-6 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó alkilcsoport, például metil-, etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, szek-butil-, tere-butil-, pentil-, neopentil-, hexilcsoport, stb. Az 1-6 szénatomszámú alkilcsoport kifejezésbe beletartozik az 1-4 szénatomszámú alkilcsoport is.

A halogénatom kifejezés jelentése: klór-, fluor-, brómvagy jódatom.

A halogénatommal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport kifejezés jelentése: olyan 1-4 szénatomszámból álló, egyenes vagy elágazó alkilcsoport, mely 1-3 halogénatommal helyettesített; például klór-metil-, 2-bróm-etil-, 1-klór-izopropil·-, 3-fluor-propil-, 2,3-dibróm-butil-, 3-klór-izobutil-, jód-terc-butil-, trifluor-metil-csoport, stb.

A cianocsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport kifejezés jelentése: olyan 1-4 szénatomból álló egyenes vagy elágazó alkilcsoport, mely cianocsoporttal helyettesített, például ciano-metil-, 2-ciano-etil-, 3-ciano-propil-, 2-ciano-izopropil-, 4-ciano-butil-csoport, stb.

Az 1-4 szénatomszámú alkil-tio-csoport kifejezés jelentése: olyan 1-4 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó • « • · ··· »·* · • · · · · · · ·

- 7 alkilcsoport, mely egy kénatomhoz kapcsolódik; például metil-tio-, etil-tio-, propil-tio-, izopropil-tio-, butil-tio-csoport, stb.

Az 1-4 szénatomszámú alkil-tio-csoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport kifejezés jelentése: olyan 1-4 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó alkilcsoport, melyhez 1-4 szénatomszámú alkil-tio-csoport kapcsolódik; például a metil-tio-etil-, etil-tio-butil-, propil-tio-izopropil-, izopropil-tio-metil-, butil-tio-etil-csoport, stb.

Az 1-4 szénatomszámú alkil-amino-csoport kifejezés jelentése: olyan 1-4 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó alkilcsoport, mely egy aminocsöpörthoz kapcsolódik; például a metil-amino-, etil-amino-, propi1-amino-, izopropil-amino-, butil-amino-, szek-butil-amino-csoport, stb.

A di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport kifejezés jelentése: egy aminocsoport, melyhez két, egymástól függetlenül 1-4 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó alkilcsoport kapcsolódik; például dimetil-amino-, etil-metil-amino-, metil-izopropil-amino-, terc-butil-izopropil-amino-, di(terc-butil)amino-csoport, stb.

Az 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport kifejezés jelentése: olyan 1-4 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó alkilcsoport, mely egy oxigénatomhoz kapcsolódik; például metoxi-, etoxi-, propoxi-, izopropoxi-, butoxicsoport, stb.

Az 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-csoport kifejezés * · ♦ ·· » · · · • · · · · · • · ♦ · · · · · · ···· · ·· · c *******

- 8 jelentése: olyan 1-4 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó alkoxicsoport, mely egy karbonilcsoporthoz kapcsolódik; például metoxi-karbonil-, etoxi-karbonil-, propoxi-karbonil-, izopropoxi-karbonil-, butoxi-karbonil-, terc-butoxi-karbonil-csoport, stb.

A karbamoilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport kifejezés jelentése: olyan 1-4 szénatomból álló, egyenes vagy elágazó alkilcsoport, melyhez egy karbamoilcsöpört kapcsolódik; például karbamoil-metil-, karbamoil-etil-, karbamoil-propil-, karbamoil-izopropil-, karbamoil-butil-, karbamoil-terc-butil-csoport, stb.

Az 5-7 szénatomszámú cikloalkilcsoport kifejezés jelentése: olyan 5-7 szénatomból álló telített szénhidrogén gyűrű, mely lehet szubsztituálatlan vagy 1, 2 vagy 3 szubsztituenssel helyettesített, mely szubsztituens lehet halogénatom, halogénatommal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport, karboxilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-csoport, karbamoilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkil-karbamoil-csoport, aminocsoport, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-csoport, di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport vagy olyan -(CH₂)_a-R⁷ általános képletű csoport, ahol a jelentése 1, 2, 3 vagy 4 és R⁷ jelentése hidroxilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxi-, karboxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, amino-, karbamoil-, 1-4 szénatomszámú alkil-amino- vagy di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport. Ilyen például a ciklopentil-, ciklohexil-, ciklo• «· ·« ··*· * < « · * ♦ • · «·· · · · · ···* · ·· · ,4 ··♦····

- 9 heptil-, 3-metil-ciklopentil-, 4-etoxi-ciklohexil-, 5-karboxi-cikloheptil-, 6-klór-ciklohexil-csoport, stb.

A heterociklusos kifejezés olyan telített gyűrűsszerkezetre utal, mely egy szubsztituálatlan vagy helyettesített, stabil 5-7 tagszámú egygyűrűs vagy 7-10 tagszámú kétgyűrűs heterociklusos gyűrűt jelent, mely a szénatomokon kívül 1-3 heteroatomot tartalmaz, ami lehet nitrogénatom, oxigénatom vagy..kénatom, a nitrogén- és kén heteroatom adott esetben oxidált, lehet, a nitrogén heteroatom adott esetben kvaterner, és a kifejezés magába foglalja azt a kétgyűrűs szerkezetű csoportot is, melyben egy bármelyik fent megnevezett heterociklusos gyűrű egy benzolgyűrűvel fúzionált. A heterociklusos gyűrű kapcsolódhat bármelyik heteroatomjánál vagy szénatomjánál, feltéve, hogy így egy stabil szerkezet jön létre. A heterociklusos gyűrű helyettesítetlen vagy 1, 2 vagy 3 szubsztituenssel helyettesített, mely szubsztituens lehet halogénatom, halogénatommal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport, karboxilcsoport, 1-4 széantomszámú alkoxi-karbonil-csoport, karbamoilcsöpört, 1-4 szénatomszámú alkil-karbamoil-csoport, aminocsoport, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-csöpört, di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport vagy -(CH₂)_a-R⁷ általános képletű csoport, ahol a jelentése 1, 2, 3 vagy 4; és R⁷ jelentése hidroxilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport, karboxilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-csoport, aminocsoport, karbamoilcsöpört, 1-4

A · ·« *··· « * » « » · * · ··« »·· · szénatomszámú alkil-amino-csoport vagy di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport.

A telítetlen heterociklusos kifejezés olyan telítetlen gyűrűsszerkezetre utal, mely egy szubsztituálatlan vagy szubsztituált, stabil 5-7 tagszámú egygyűrűs vagy 7-10 tagszámú kétgyűrűs heterociklusos gyűrűs szerkezetet jelent, mely egy vagy több kettőskötést és a szénatomokon kívül 1-3 heteroatomot tartalmaz, mely heteroatom lehet nitrogénatom, oxigénatom vagy kénatom, a nitrogén és kén heteroatom adott esetben oxidált lehet, a nitrogén heteroatom adott esetben kvaterner lehet, és a kifejezés magába foglalja azokat a kétgyűrűs szerkezetű csoportokat is, ahol bármelyik fent meghatározott heterociklusos gyűrű egy benzolgyűrűvel fúzionált. A telítetlen heterociklusos gyűrű bármelyik heteroatomján vagy szénatomján kapcsolódhat, feltéve, hogy így egy stabil szerkezet jön létre. A telítetlen heterociklusos csoport lehet szubsztituálatlan vagy 1, 2 vagy 3 szubsztituenssel helyettesített, mely szubsztituens egymástól függetlenül lehet halogénatom, halogénatommal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxicsoport, karboxilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-csoport, karbamoilcsoport, 1-4 szénatomszámú alkil-karbamoil-csoport, aminocsoport, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-csoport, di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport vagy egy -(CH₂)_a-R⁷ általános képletű csoport, ahol a jelentése 1,2,3 vagy 4; és R⁷ jelentése hidroxilcsoport, 1-4 * 4 · ·4 · 4 4 4 · « 4 44 «4 444 · 4 ··

4 4 4 4 · 44 szénatomszámú alkoxi-, karboxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, amino-, karbamoil-, 1-4 szénatomszámú alkil-aminovagy di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport.

A heterociklusos, illetve telítetlen heterociklusos csoportokra példaként említhetjük a piperidinil-, piperazinil-, azepinil-, pirrolil-, 4-piperidonil-, pirrolidinil-, pirazolil·-, pirazolidinil-, imidazolil-, imidazolinil-, imidazolidinil-, piridil-, pirazinil-, pirimidinil-, piridazinil-, oxazolil-, oxazolidinil-, izoxazolil-, izoxazolidinil-, morfolinil-, tiazolil-, tiazolidinil-, izotiazolil-, kvinuklidinil-, izotiazolidinil-, indolil-, kinolinil-, izokinolinil-, benzimidazolil-, tiadiazolil-, benzopiranil-, benzotiazolil-, benzoazolil-, furil-, tetrahidrofuril-, tetrahidropiranil-, tienil-, benzotienil-, tiamorfolinil-, tiamorfolinil-szulfoxid-, tiamorfolinil-szulfon-, oxadiazolil-, triazolil-, tetrahidrokinolinil-, tetrahidroizokinolinil-, 4-metil-imidazolil-, 3-metoxi-piridil-, 4-klór-kinolinil-, 4-amino-tiazolil-, 8-metil-kinolinil-, 6-klór-kinoxalonil-, 3-etil-piridil-, 6-metoxi-benzimidazolil-, 4-hidroxi-furil-, 4-metil-izokinolinil-, 6,8-dibróm-kinolinil-,

4,8-dimetil-naftil-, 2-metil-l,2,3,4-tetrahidroizokinolinil-, N-metil-kinolin-2-il-, 2 -tere-butoxi-karbonil-1,2,3,4-izokinolin-7-il-csoportot, stb.

Az arilcsoport kifejezés jelentése: egy fenil vagy naftil gyűrű, mely adott esetben 1, 2 vagy 3 szubsztituenssel helyettesített, mely szubsztituens egymástól függetlenül lehet halogénatom, morfolino-(1-4 szénatomszámú)-alkoxi-karbonil- 12 «· «4·Ι·« • · · * · • 4 · « V 44 • · ·4

-csoport, piridil-(l-4 szénatomszámú)-alkoxi-karbonil-csoport,

1-4 szénatomszámú alkil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-, karboxil-,

1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, karbamoil-, karbamoilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkil-, amino-, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-, di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport vagy -(CH2)_a ^-R⁷ általános képletű csoport, ahol a jelentése 1, 2, 3 vagy 4; és R⁷ jelentése hidroxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-, karboxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, amino-, karbamoil-, 1-4 szénatomszámú alkil-aminovagy di(l-4 szénatomszámú)-alkil-amino-csoport. Az arilcsoportra példaként említhetjük: a 4-metil-fenil-, 3-etil-naftil-, 2,5-dimetil-fenil-, 8-klór-naftil-, 3-amino-naftil-, 4-karboxi-fenil-csoportot, stb.

Az aminosav oldallánc kifejezésen értjük azt a jellegzetes atomot vagy csoportot, mely ahhoz az a-szénatomhoz kapcsolódik, melyhez a karboxilcsoport és az aminocsoport is. Ezek az oldalláncok lehetnek az alább felsorolt aminosavak oldalláncai:

alanin Alá arginin Arg aszparagin Asn aszparaginsav Asp cisztein Cys glutamin Gin gutaminsav Glu glicin Gly

hisztidin	His
izoleucin	He
leucin	Leu
lizin	Lys
metionin	Met
fenil-alanin	Phe
prolin	Pro
szerin	Ser
treonin	Thr
triptofán	Trp
tirozin	Tyr
valin	Val.

Az aminocsoportot védő csoport kifejezésen értjük az aminocsoportok azon szubsztituenseit, melyeket általánosságban használnak az aminocsoport blokkolására vagy védelmére azalatt az idő alatt, mialatt a molekula más funkciós csoportján reakciót hajtanak végre. Ilyen aminocsoportot védő csoport lehet például: a formil, tritil, ftálimido, triklór-acetil, klór-acetil, bróm-acetil, jód-acitil vagy olyan uretán-tipusú védőcsoport, mint például a benzil-oxi-karbonil, 4-fenil-benzil-oxi-karbonil, 2-metil-benzil-oxi-karbonil, 4-metoxi-benzil-oxi

-karbonil, 4-fluor-benzil-oxi-karbonil, 4-klór-benzil-oxi-karbonil, 3-klór-benzil-oxi-karbonil, 2-klór-benzil-oxi-karbonil, 2,4-diklór-benzil-oxi-karbonil, 4-bróm-benzil-oxi

-karbonil, 3-bróm-benzil-oxi-karbonil, 4-nitro-benzil-oxi-kar• · *·· «Η ·4·· * · 4 » · ·· ··· · • 9 · ·

- 14 bonil, 4-ciano-benzil-oxi-karbonil, 2-(4-fenil)-izopropoxi-karbonil, 1,1-difenil-et-1-il-oxi-karbonil, 1,1-difenil-prop-1-il-oxi-karbonil, 2-fenil-prop-2-il-oxi-karbonil, 2-(p-toluil)-prop-2-il-oxi-karbonil, ciklopentanil-oxi-karbonil, 1-metil-ciklopentanil-oxi-karbonil, ciklohexanil-oxi-karbonil, 1-metil-ciklohexanil-oxi-karbonil, 2-metil-ciklohexanil-oxi-karbonil, 2-(4-toluil-szulfonil)-etoxi-karbonil, 2-(metil-szulfonil)-etoxi-karbonil, 2-(trifenil-foszfino)-etoxi-karbonil, fluorenil-metoxi-karbonil (FMOC), 2-(trimetil-szilil)-etoxi-karbonil, allil-oxi-karbonil, 1-(trimetil-szilil-metil)-prop-1-enil-oxi-karbonil, 5-benzizoxalil-metoxi-karbonil, 4-acetoxi-benzil-oxi-karbonil, 2,2,2-triklór-etoxi-karbonil, 2-etinil-2-propoxi-karbonil, ciklopropil-metoxi-karbonil, 4-(deciloxi)-benzil-oxi-karbonil, izobornil-oxi-karbonil, stb. vagy benzoil-metil-szulfonil, 2-nitro-fenil-szulfenil, difenil-foszfin-oxid és hasonló védőcsoportok.

Az aminocsoportot védő csoport típusa nem döntő addig, amíg az aminocsoporton kialakított származék stabil azok között a reakciókörülmények között, melyeknél a molekula más területén reakció(ka)t hajtunk végre, és adott időben szelektíven eltávolítható anélkül, hogy a molekula más részét - beleértve más védett aminocsoporto(ka)t is - sérelem érné. Előnyös védőcsoport a terc-butoxi-karbonil- (t-Boc) és a benzil-oxi-karbonil-csoport (Cbz). A védőcsoportokra további példákat találunk: J. W. Barton, Protective groups in organic chemistry, szerk. J. G. W.

McOmie., Plenum Press, New York, N.Y. , 1973, 2. fejezet;és T. W. Greene, Protective groups in organic synthesis, John Wiley and sons, New York, N.Y., 1981, 7. fejezet.

A karboxilcsoportot védő csoport kifejezésen a karboxilcsoportoknak azon általánosan használt szubsztituenseit értjük, melyek blokkolják vagy védik a karboxilcsoportot, miközben a molekula más funkciós csoportjain reakciót hajtunk végre. Karboxilcsoportot’ védő csoportra példaként említhetjük az alábbiakat: metil, p-nitrobenzil, p-metil-benzil, p-metoxibenzil, 3,4-dimetoxi-benzil, 2,4-dimetoxi-benzil, 2,4,6trimetoxi-benzil, 2,4,6-trimetil-benzil, pentametil-benzil, 3,4metilén-dioxi-benzil, benzhidril, 4,4'-dimetoxi-benzhidril, 2,2',4,4'-tetrametoxi-benzhidril, terc-butil, terc-amil, tritil, 4-metoxi-tritil, 4,4'-dimetoxi-tritil, 4,4',4''-trimetoxi-tritil, 2-fenil-prop-2-il, trimetil-szilil, terc-butil-dimetil-szilil, fenacil, 2,2,2-triklór-etil, β-[di(metil)-szilil]-etil, ptoluolszulfonil-etil, 4-nitrobenzil-szulfonil-etil, allil, cinnamil, 1-(trimetil-szilil-metil)-prop-1-en-3-il és hasonló csoportok. Előnyös karboxilcsoportot védő csoport a benzhidril. A védőcsoportokra további példákat találunk: E. Hasiam, Protective groups in organic chemistry, szerk. J.G. W. McOmie, Plenum Press, New York, N.Y., 1973, 5. fejezet; és T. W. Greene, Protective groups in organic synthesis, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981. 5. fejezet.

A jelen találmányban tárgyalt vegyületeknek legalább három aszimmetrikus központja van, melyeket a (XII) általános képletben csillagokkal jelölünk.

Az aszimmetrikus szénatomok jelenléte miatt a találmány szerinti vegyületek megjelenhetnek diasztereomerek elegyeként, racém elegyként vagy az egyes enantiomerek alakjában. Valamennyi aszimmetrikus forma, egyedi izomer és ezek kombinációja beletartozik a találmány oltalmi körébe.

Amint fentebb már említettük, az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag alkalmazható sói ugyancsak a találmány tárgyát képezik. Noha a találmány szerinti vegyületek általában semlegesek, rendelkezhetnek savas vagy megfelelően bázikus csoporttal vagy mindkettővel, és ennek megfelelően reagálhatnak számos szervetlen bázissal, illetve szervetlen és szerves savval, gyógyászati szempontból elfogadható sókat alkotva.

A fent említett gyógyászati szempontból alkalmazható só kifejezésen azokat a sókat értjük, melyek az élő szervezet számára lényegében nem toxikusak. A gyógyászati szempontból alkalmazható sókat általában úgy állítjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet egy ásványi vagy szerves savval vagy egy szervetlen bázissal reagáltatjuk. Ezek a sók, mint savaddiciós, illetve bázisaddíciós sók ismertek.

A savaddiciós sók előállítására használt sav lehet például: a hidrogén-klorid, hidrogén-bromid, hidrogén-jodid, kénsav, foszforsav és más szervetlen savak, illetve a p-toluolszulfonsav, metánszulfonsav, oxálsav, p-bróm-fenil-szulfonsav, szénsav, borostyánkősav, citromsav, benzoesav, ecetsav és hasonló szerves savak.

A gyógyászati szempontból alkalmazható só lehet például: egy szulfát, piroszulfát, hidrogén-szulfát, szulfit, hidrogén-szulfit, foszfát, monohidrogén-foszfát, dihidrogén-foszfát, metafoszfát, pirofoszfát, klorid, bromid, jodid, acetát, propionát, dekanoát, kaprilát, akrilát, formiét, izobutirát, kaproát, heptanoát, propiolát, oxalát, malonát, szukcinát, szuberát, szebakát, fumarát, maleát, butin-l,4-dioát, hexin-1,6-dioát, benzoát, klór-benzoát, metil-benzoát, dinitro-benzoát, hidroxi-benzoát, metoxi-benzoát, ftallát, szulfonát, xilolszulfonát, fenil-acetát, fenil-propionát, fenil-butirát, citrát, laktát, gamma-hidroxi-butirát, glikolát, tartarát, metánszulfonát, propánszulfonát, naftalin-l-szulfonát, naftalin-2-szulfonát, mandelát és hasonlók. Előnyös gyógyászati szempontból alkalmazható savaddiciós sók képezhetők az olyan ásványi savakkal, mint például a klór-hidrogénsav és a bróm-hidrogénsav, illetve szerves savaknál a maleinsav és a metánszulfonsav.Bázisaddíciós sókat képezhetünk az olyan szervetlen bázisokkal, mint például az ammónium-, alkálifém-, alkáliföldfém-hidroxid, -karbonát, -hidrogén-karbonátjai és hasonlók. A sók előállításához alkalmas bázis például a nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, ammónium-hidroxid, kálium-karbonát, nátrium-karbonát, nátrium-hidrogén-karbonát, kálium-hidrogén-karbonát, kalcium-hidroxid, kalcium-karbonát, stb. Különösen előnyösek a kálium- vagy nátriumsók.

Meg kell jegyezni, hogy a találmány szerinti bármelyik só képzéséhez felhasznált ellenion típúsa mindaddig nem döntő, amíg a teljes só gyógyászati szempontból elfogadható, illetve amíg az ellenion kedvezőtlen tulajdonságokat nem kölcsönöz a teljes sónak.

Előnyösek azok a találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek, ahol

R jelentése arilcsoport vagy telítetlen heterociklusos csoport;

jelentése kémiai kötés;

jelentése arilcsoport;

jelentése 0;

jelentése -CH₂~C(0)NH₂, -CH(CH₃)₂ képletű vagy -CH₂-C(0)-NR°-A-R^2a általános képletű csoport;

jelentése (IV) vagy (VI) általános képletű csoport;

jelentése -C(O)-NR⁴R⁴ általános képletű csoport, melyen belül

R^ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy

1-6 szénatomszámú alkilcsoport, vagy ezek gyógyászati szempontból alkalmazható sói.

Még előnyösebbek azok az (I) általános képletű vegyületek, ahol jelentése naftil-, kinolinil- vagy kinoxalinil-csoport, melyek mindegyike lehet szubsztituálatlan vagy 1-2 szubsztituenssel helyettesített, mely szubsztituens lehet hidrogénatom, halogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport vagy halogénatommal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

jelentése fenilcsoport;

Y¹ j elentése dekahidro-(4aS,8aS)-izokinolinil-csoport;

R¹ jelentése fenil- vagy naft-2-il-csoport;

R² jelentése

-CH2-C(O)NH2 csoport; és

R^3a jelentése

-C(0)-NH-(terc-butil) képletű csoport, vagy ezek gyógyászati szempontból alkalmazható sóik.

vegyületek közül a legelőnyösebbek azok, ahol

R¹ jelentése fenilcsoport; és jelentése helyettesítetlen vagy 1-2 szubsztituenssel helyettesített kinolinilcsoport, ahol a szubsztituens vagy lehet hidrogénatom, halogénatom, alkilcsoport vagy halogénatommal szénatomszámú alkilcsoport.

1-4 szénatomszámú helyettesített 1-4 gyógyászati szempontból alkalmazható sóik.

A legelőnyösebb vegyületek:

[1S-(ÍR* , 4S*,5S*) ]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

[2'R-(2'R*,3^,*,6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-il-tio-metil-4'-aza-5',8'-dioxo-6'-(N-(benzil-oxi- 20 -karbonil)-amino-8'-amino]-oktil-benzamid;

[IS-(ÍR*, 4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxi-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N-(terc-butil)-2'-[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2 ' ' -amino-2''-oxo-etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid; és [2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N-(terc-butil)-2'- [2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5, 8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid vagy ezek gyógyászati szempontból alkalmazható sóik.

Az alábbiakban megadjuk a vegyületek egy listáját a találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek további szemléltetésére:

[IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-izopropil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

IS-(1R*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2' '- (1' ' '-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-naft-2-il-karboxamid;

IS-(1R*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tere-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-8''''-metil-kinolin-2-il-karboxamid;

IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2'' - (1'¹'-N-(tere-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-6'*''-metil-kinolin-2-il-karboxamid;

IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tere-butil)-amino-1' ' '-oxo-metil)-fenil)]-hexil-4''''-metil-klór-kinolin-2-il-karboxamid;

is-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-imidazol-1-il-metil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tere-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-imidazol-1-il-metil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tere-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-indol-3-il-karboxamid;

IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-imidazol-1-il-metil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tere-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-benzotién-3-il-karboxamid;

IS-(1R*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-metil)-2-oxo-etil)-2~oxo-3~aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tere-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

[2'R-(2'R*,3R'*6'S*)]-N-(tere-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft• · ·· «··« • · · · • · · ·« · « ···· · · · · • · ·· ·· ··

- 22 -1-il-tio-metil-4'-aza-5’,8’-dioxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-8'-hidroxi]-oktil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R'*6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naftl-il-tio-metil-4'-aza-5'-oxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-oktil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R'*6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2’-hidroxi-3'-fenil-tio-metil-4'-aza-5',8'-dioxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-8'-amino]-oktil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3'R*6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-il-tio-metil-4'-aza-5',8'-dioxo-6'-[N-(fenil-etoxi-karbonil)-amino]-oktil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R'* 6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-il-tio-metil-4’-aza-5',9’-dioxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-9-amino]-nonil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R'* 6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-il-tio-metil-4'-aza-5',9'-dioxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-9-hidroxi]-nonil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R'*6'S*)]-N- (terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-fenil-tio-metil-4'-aza-5',9'-dioxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-9-amino]-nonil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R'*6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-il-tio-metil-4'-aza-5-'oxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-7'-fenil]-heptil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R'*6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft- 2-il-tio-metil-4'-aza-5'-oxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino « · · · • * « · ·

- 23 -7'-tienil]-heptil-benzamid;

[2'R-(2'R*,3R^,*6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-il-tio-metil-4'-aza-5'-oxo-6'-[N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-7'-furil]-heptil-benzamid;

[ IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2’-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2^,'-(l^,,,-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinoxalin-2-il-karboxamid;

[IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-naft-2-il-karboxamid;

[IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)- 2 -oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-izokinolin-2-il-karboxamid;

[IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-6''''-metil-kinolin-2 -il-karboxamid;

[IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil~5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-8''''-klór-kinolin2-i1-karboxamid;

· « · · · • 9 9 9» 9 • · · 0« ··« · •••4 · ·· · ·»«···«

- 24 [IS-(1R*,4S*,5S*)]-N-[1-(izopropil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1' ' '-N-(terc-butil)-amino1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

[IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(3'-amino-3'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

[IS-(1R*,4S*,5S*)]-N-[l-furil-metil-2-οχο-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

[IS-(1R*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-benzotién-2-il-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2' -[2-hidroxi-3-naftil-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-kinoxalin-2-il]-oktil-2-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*, 3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2' -[2-hidroxi-3-naft-l-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-izopropil-8-kinolin-2-il]-oktil-2-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3’S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2'-[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''9 · t · · ····

V · 4 * V · • · «·4 ··· · • · · · · » · » ·······

- 25 -amino-2''-oxo-etil)-8-benzotién-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*, 8aS*)]-N-(terc-butil)-2’ -[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-izopropil-8-kinolin-2-il]-oktil-2-dekahidro-izokinolin- 3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2*-[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(imidazol-4-il-metil)-8-kinolin-2-il]-oktil-2-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2' -[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2' ' -amino-2''-oxo-etil)-8-naft-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2' -[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2' ',2'¹ -dimetil-etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil) -2' -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2' ' -amino-2''-oxo-etil)-8-kinolin-8-il]-oktil-2-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2' -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-izokinolin-l-il]-oktil-dekahidro-izokino·»·<

* · * * * « « « · • · «·« ·»♦ · * · ·« » · · · · ·······

- 26 lin-3'-karboxamid;

[2R- (2R* ,3R* , 3’S*,8aS*)]-N-(tere-butil)-2’ -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-metil-8-kinolin-2-il]-oktil-2-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*, 3R*,3'S*,8aS*)]-N-(tere-butil)-2' -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2’’-amino-2''-oxo-etil)-8-naft-1-il]-oktil-2-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3’S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2’ -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-(6'''-metil-izokinoxalin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3'S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2* -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2' ' -amino-2''-oxo-etil)-8-(4''''-klór-naft-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3’S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2' -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-benzimidazol-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid;

[2R-(2R*,3R*,3’S*,8aS*)]-N-(terc-butil)-2' -[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2 *'-amino-2''-oxo-etil)-8-benzofur-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid.

A találmány szerinti vegyületeket az 1. ábrán bemutatott « ·*4 • 44·· •♦ · · « · ·«♦ ·* · · *··« ·· Λ · < * 4 Λ « « ·« ·

- 27 reakciófolyamaton keresztül állítjuk elő (I. reakciófolyamat). Az ábra képleteiben q jelentése 1 vagy 2; R, A, R², R^- és X jelentése azonos az (I) általános képlettel kapcsolatosan tett meghatározásokkal.

A megadott sorrendben elvégzett reakciófolyamatban, amint egy reakció teljes, a köztes terméket - ha szükséges - elkülöníthetjük az ismert módszerek valamelyikével, így például kristályosítással és a kristályos anyag kiszűrésével, az oldószer extrákcióval, bepárlással vagy leöntéssel történő eltávolításával. Ha szükséges, további felhasználás előtt a köztes termék tovább tisztítható olyan általánosan használt módszerekkel, mint például a kristályosítás, szilikagélen vagy alumínium-oxidon való kromatografálás.

Az 1.1 reakció a peptidszintézisnél általánosan alkalmazott kapcsolási reakció, mely során egy aprotikus oldószerben vagy oldószerek elegyében egy (II) általános képletű, megfelelően szubsztituált, amint egy megfelelően szubsztituált (III) általános képletű karbonsavval vagy aktivált származékával reagáltat juk. A reakciót előnyösen egy kapcsoló reagens jelenlétében hajtjuk végre. A reakcióhoz alkalmas tipikus oldószer például a tetrahidrofurán és a dimetil-formamid, előnyösen ezek elegye. A reakciót -30 és 25°C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. Az amint és a karbonsavat rendszerint ekvimoláris mennyiségben reagáltat juk egymással, ekvimoláris mennyiségű vagy kis feleslegben alkalmazott kapcsoló reagens jelenlétében. A kapcsoló reagens lehet egy karbodiimid ·*·· • 4««« « V « ·9 • · *44 444' ···«·· 4« * ·44«444

- 28 például a diciklohexil-karbodiimid (DCC) vagy az Ν,Ν'-dietil-karbodiimid egy imidazol - például karbonil-diimidazol valamint olyan reagensek, mitn a bisz(2-oxo~3-oxazolidinil) -foszfin-klorid (BOB-C1) vagy az N-etoxi-karbonil-2-etoxi-l,2-dihidro-kinolin (EEDQ). Előnyös kapcsoló reagens ehhez a reakcióhoz a DCC. Gyorsító ágenst is alkalmazhatunk a reakciónál, előnyösen például hidroxi-benzotriazol-hidrátot (HOBT.H₂0).

Az 1.2 reakcióban az 1.1 reakcióval előállított vegyületet oxidáljuk az ismert eljárások valamelyikével. így például az 1.1 reakció termékét szerves vagy vizes oldószerben -78 és 50°C közötti hőmérsékleten oxidálószerrel reagáltatjuk. Ilyen oxidálószer lehet például a hidrogén-peroxid, nátrium-jódát, kálium-permanganát, ozmium-tetroxid és a persavak, például perecetsav vagy a meta-klór-perbenzoesav. Tipikus oldószer a víz vagy halogénezett szénhidrogén, mint amilyen a metilén-klorid vagy a kloroform. Az oldószer mindaddig nem döntő, amíg a reakcióban közömbösen viselkedik és a reagenseket kellő mértékben oldja. A reakciót előnyösen metilén-kloridban hajtjuk végre -25 és 25°C közötti hőmérsékleten.

A (II) általános képletű vegyületek - mint fentebb már elmondtuk - felhasználhatók az (I) általános képletű vegyületek előállítására. A (II) általános képletű vegyűlet, ahol X jelentése (IV) általános képletű csoport előállítható a 2. ábrán bemutatott reakciófolyamat szerint (A reakciófolyamat). Az ábra • ·« ·μ *4«4 • 4 · 4 *» • I» ··· ···9 »444 4 ·t 4

4« ·«<*4

- 29 képleteiben R¹³ jelentése aminocsoportot védő csoport; és R¹, R^8a és Y jelentése azonos a fentebb tett meghatározásokkal.

Az A reakciófolyamatban az 1-6 reakciólépéseket végezzük el a megadott sorrendben. Amint egy reakció teljes, a köztesterméket - ha szükséges - elválaszthatjuk valamelyik ismert eljárással, így például kristályosítással és a kristályok szűréssel történő összegyűjtésével; az oldószer extrakcióval, bepárlással vagy leöntéssel történő eltávolításával. Ha szükséges, a további felhasználás előtt a köztesterméket tovább tisztíthatjuk az általánosan használt módszerekkel, például kristályosítással, szilikagélen vagy alumínium-oxidon való kromatografálással.

Az A.l reakcióban a megfelelően szubsztituált aromás, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos karbonsavat aktiváljuk, azaz tionil-kloriddal, tionil-bromiddal, foszfor-trikloriddal, főszfór-tribromiddal, foszfor-pentabromiddal vagy foszfor-pentakloriddal reagáltatjuk az ismert reakciókörülmények között, a megfelelő savkloridot vagy savbromidot nyerve. Az alkalmas aromás, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos karbonsav kereskedelemből beszerezhető vagy ismert módon előállítható.

Az A.2 reakcióban az A.l reakcióban előállított savkloridot vagy savbromidot ammóniával, H-NR⁴R⁴, (XIII) vagy (XIV) általános képletű primer vagy szekunder aminnal - ahol R^, R^, R⁸ és p jelentése azonos a fentebb tett meghatározásokkal - reagáltatjuk nem-poláris, aprotikus oldószerben vagy ilyen oldószerek elegyé30 ben, egy savmegkötő jelenlétében vagy anélkül, a megfelelő amidot nyerve. A reakciót -20 és 25°C hőmérséklet között végezzük. A reakció tipikus oldószere valamelyik éter vagy klórozott szénhidrogén, előnyösen a dietil-éter, kloroform vagy metilén-klorid. A reakciót előnyösen egy savmegkötő anyag, például egy tercier amin, előnyösen a trietil-amin, jelenlétében végezzük.

Az A.3 reakcióban az A.2 reakcióban előállított amidot egy :: erős bázissal reagáltatjuk oldódást elősegítő ágens jelenlétében, a megfelelő aniont nyerve, amit az A.4 reakcióban egy Weinreb amiddal reagáltatunk. A reakció eredménye egy keton. Az A.3 reakciót aprotikus oldószerben végezzük -78°C és 0°C közötti hőmérsékleten. Az A.3 reakcióban alkalmazott bázis lehet például a lítium-amid és az alkil-lítium bázisok valamelyike, előnyösen egy 1-4 szénatomszámú alkil-lítium bázis vagy egy lítium-di(1-4 szénatomszámú)-alkil-amid. Az A.3 reakció tipikus szolubilizálószerei a tetrametil-(1-4 szénatomszámú)-alkilén-diaminok, előnyösen a tetrametil-etilén-diamin. Az A.4 reakciót aprotikus oldószerben végezzük -80 és -40°C közötti hőmérsékleten. Az A. 3 és A.4 reakciók tipikus oldószerei az éterek, előnyösen a tetrahidrofurán. Az A. 4 reakcióban az aniont általában ekvimoláris mennyiségben vagy moláris feleslegben használjuk, előnyös két moláris felesleget alkalmazni a Weinreb amidhoz viszonyítva.

Az A.5 reakcióban az A.3 reakcióban elkészített ketont megfelelő redukálószerrel az illető alkohollá redukáljuk. A reakciót protikus oldószerben végezzük -25 és 15°C közötti hőI

- 31 mérsékleten. A reakcióhoz használt tipikus redukálószer lehet a nátrium-bór-hidrid, lítium-bór-hidrid, diizobutil-alumínium-hidrid vagy a nátrium-bisz(2-metoxi-etoxi)-alumínium-hidrid. Előnyös redukálószer a nátrium-bór-hidrid. A reakció tipikus protikus oldószerei az alkoholok, előnyösen az etanol.

Az A.6 reakció az aminocsoport védőcsoportjának a szokásos módon végrehajtott eltávolítása, melynek eredményeként megkapjuk a (II) általános képletű amint. Ezt az amint reagáltatjuk azután tovább az I. reakciófolyamatban ismertetett módon. Az amint reagáltathatjuk tisztítás nélkül is, de előnyösebb előzetesen megtisztítani.

A (II) általános képletű vegyületet, ahol X jelentése a (VII) általános képletű csoport, a 3. ábrán bemutatott B reakciófolyamat szerint állítjuk elő. Az ábra képleteiben R*⁵, R·*·, Y és R^b jelentése azonos a fentebb tett meghatározásokkal.

A B reakciófolyamat az egymás utáni sorrendben következő 1-7 reakciókon keresztül játszódik le. Amint az egyik reakció teljes, a köztesterméket - ha szükséges - elválaszthatjuk valamelyik ismert eljárással, így például kristályosítással és a kristályok szűréssel történő összegyűjtésével; az oldószer extrakcióval, bepárlással vagy leöntéssel történő eltávolításával. Ha szükséges, a további felhasználás előtt a köztesterméket tovább tisztíthatjuk az általánosan használt módszerekkel, például kristályosítással, szilikagélen vagy alumínium-oxidon való kromatografálással.

A B.l reakcióban a megfelelően szubsztituált aromás vagy telítetlen heterociklusos amint védjük, az aminocsoportot védő csoport felhelyezésére az ismert reakciókörülményeket alkalmazzuk. A B.2 - B.5 reakciókat lényegében azonos módon hajtjuk végre, mint ahogyan azt az A.3 - A.6 reakciónál már leírtuk, azzal a különbséggel, hogy a B reakciófolyamatban a B.l reakcióban felvitt aminocsoportot védő csoportot el kell távolítani. Ezt valamelyik ismert és általánosan használt eljárással elvégezhetjük, így például a B.l reakcióban felhelyezett t-Boc védőcsoportot egy erős savval, előnyösen trifluor-ecetsawal távolíthatjuk el.

A B.6 reakcióban a feltüntetett köztesterméket alkalmas savhalogeniddel, izocianáttal vagy klór-formiáttal acilezzük egy savmegkötő, például egy tercier-amin, előnyösen a trietil-amin jelenlétében. A reakciót -20 és 25°C közötti hőmérsékleten végezzük. A reakció tipikus oldószere valamelyik éter vagy halogénezett szénhidrogén, előnyösen dietil-éter, kloroform vagy metilén-klorid.

A B.7 reakció az aminocsoport védőcsoportjának szokásosan végrehajtott eltávolítása, melynek eredményeként hozzájutunk a (II) általános képletű vegyülethez, mely felhasználható az I. reakciófolyamathoz. Ez az amin tisztítás nélkül használható, de előnyös előzetes tisztítást végezni.

Az (I) általános képletű vegyületet, ahol X jelentése (VI) általános képletű csoport, a 4. ábrán bemutatott C l

reakciófolyamat szerint állítjuk elő. Az ábra képleteiben R¹, Y¹, _R3a és R3b jelentése azonos a fentebb tett meghatározásokkal; G jelentése halogénatom.

A C reakciófolyamat az 1-9 reakciókból áll, melyek a megadott sorrendben követik egymást. Amint az egyik reakció teljes, a köztesterméket - ha szükséges - elválaszthatjuk valamelyik ismert eljárással, így például kristályosítással és a kristályok szűréssel történő összegyűjtésével; az oldószer extrakcióval, bepárlással vagy leöntéssel történő eltávolításával. Ha szükséges, a további felhasználás előtt a köztesterméket tovább tisztíthatjuk az általánosan használt módszerekkel, például kristályosítással, szilikagélen vagy alumínium-oxidon való kromatografálással.

A C.l reakcióban egy β-laktont hozunk létre, a védett aminocsoportú szerint egy aprotikus oldószerben, -80 és 0°C közötti hőmérsékleten trifenil-foszfinnal és dietil-azo-dikarboxiláttal (DEAD) reagáltatva. A reakciót előnyösen egy éterben, például tetrahidrofuránban végezzük -80 és -50°C közötti hőmérsékleten.

A C.2 reakcióban a C.l lépésnél nyert lakton gyűrűjét felnyitjuk egy megfelelően szubsztituált -S-R¹ általános képletű - ahol R¹ jelentése azonos az (I) általános képlettel kapcsolatban tett meghatározásokkal - tioanionnal. A tioanionhoz előnyösen úgy jutunk, hogy a megfelelő tiolt erős bázissal, például nátrium-hidriddel vagy kálium-hidriddel reagáltatjuk. A reakciót tipikusan egy aprotikus oldószerben hajtjuk végre 0 és 40°C közötti hőmérsékleten és közömbös gáztérben, például nitrogéngázban. A reakció szokásos oldószere valamelyik éter, előnyösen a tetrahidrofurán.

A C.3 reakcióban a savat aktiváljuk, vagyis a C.2 reakcióban kapott megfelelően helyettesített terméket ismert körülmények alkalmazásával a megfelelő kevert anhidriddé alakítjuk. így például a C.2 reakcióból származó vegyületet 1-6 szénatomszámú alkil-klór-formiáttal vagy benzil-klór-formiáttal reagáltatjuk, előnyösen egy savmegkötő jelenlétében. Alkalmas savmegkötő lehet egy trialkil-amin, előnyösen a trietil-amin. Előnyös alkil-klór-formiát az izobutil-klór-formiát. A reakciót általában aprotikus oldószerben, például etil-acetátban végezzük. Az oldószer kiválasztása mindaddig nem kritikus, amíg az oldószer közömbös a reakció lefolyását illetően és a reagensek kellő módon oldódnak benne. A C.4 reakciólépésnél nyert kevert savanhidridet előnyösen további kinyerés és tisztítás nélkül használjuk fel a C.4 reakcióhoz.

A C.4 reakció maga is két lépésből áll. Az első lépésben éterrel, előnyösen dietil-éterrel fedett nátrium-hidroxid oldatot reagáltatunk N-metil-N-nitro-N-nitrozo-guanidin nagy feleslegével, diazometán reagenst nyerve. A nátrium-hidroxidot előnyösen vizes oldatként használjuk, ami literenként 1-6 mól nátrium-hidroxidot tartalmaz. Amint ez a reakció teljes, a szerves fázist szárítószer, például kálium-hidroxid felett meg szárítjuk. Ezt az oldatot azután a C.3 reakcióban nyert kevert anhidriddel reagáltatjuk, a megfelelő α-diazo-karbonil-vegyületet nyerve. A diazometán reagenst a reakcióban rendszerint anélkül alkalmazzuk, hogy elkülönítettük és tisztítottuk volna. A reakciót -50 és -20°C közötti hőmérsékleten végezzük, előnyösen -30°C-on.

A C.5 reakcióban a C.4 reakcióvei elkészített a-diazo-karbonil-vegyületet H-G általános képletű savval reagáltatjuk ahol G jelentése halogénatom - aprotikus oldószerben, például dietil-éterben. A reakció eredményeként a-halo-karbonilvegyülethez jutunk. Előnyös sav a hidrogén-klorid sav, melynek alkalmazásával α-klór-karbonil-vegyületet kapunk. A reakciót általában -30 és 0°C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. Az oldószer kívánatosán mindaddig nem kritikus, amíg a reakció lefolyása szempontjából közömbösen viselkedik és a reagenseket kellő mértékben oldja. A savreagenst rendszerint vízmentes gázként, kis adagokban adjuk a reakcióelegyhez, amíg a reakció lényegében nem teljes. A reakció előrehaladtát vékonyréteg-kromatográfiával követhetjük nyomon.

A C.6 reakcióban a C.5 reakciónál nyert vegyület karbonilcsoportját a szokásos körülmények között redukáljuk a-klór-hidroxi-vegyületet nyerve. így például a C.5 lépésnél előállított vegyületet oldószerelegyben redukálószerrel redukáltat juk. Redukálószerként általában bór-hidridet, lítium-bór-hidridet, cink-bór-hidridet, diizobutil-alumínium-hidridet vagy nátrium-bisz(2-metoxi-etoxi)-alumínium-hidridet használunk. Előnyös redukálószer a nátrium-bőr-hidrid. A reakcióhoz protikus és aprotikus oldószerek elegyét használjuk, például tetrahidrofurán/viz elegyet. Az oldószer kiválasztása mindaddig nem kritikus, amíg az alkalmazott oldószer a reakció lefolyását illetően közömbösen viselkedik és a reagenseket kellő mértékben oldja. A reakciót rendszerint -10 és 10°C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre, előnyösen 0°C-on.

A C.7 reakcióban a C.6 reakciónál nyert a-klór-hidroxi-vegyületet a szokásos körülmények között erős bázissal reagáltatjuk a megfelelő epoxidot képezve. így például az a-klór-hidroxil-vegyületet szerves oldószerben, például etil-acetátban kálium-hidroxid/etanol reagenssel reagáltatjuk. Az oldószer kiválasztása mindaddig nem kritikus, amíg a reakció lefolyását kedvezőtlenül nem befolyásolja és a reagenseket kellő mértékben oldja. A reakciót 0°C és az oldószer forráspontja közötti hőmérsékleten hajtjuk végre, előnyösen szobahőmérsékleten.

A C.8 reakcióban a C.7 reakcióban elkészített epoxidot protikus oldószerben és 70-100°C közötti hőmérsékleten (Vla) általános képletű heterociklusos vegyűlettel reagáltatjuk. Az oldószer kiválasztása mindaddig nem kritikus, amíg az oldószer a reakció lefolyása szempontjából közömbösen viselkedik és a reagenseket kellő mértékben oldja. A reakcióhoz oldószerként általában egy alkoholt, előnyösen etanolt használunk. A reakciót előnyösen 80°C hőmérsékleten végezzük.

A C.9 reakció az aminocsoport védőcsoportjának eltávolítására szolgál, melynek eredményeként a megfelelő amint kapjuk. A reakcióhoz az ismert eljárások valamelyikét használjuk. A nyert (II) általános képletű amint felhasználhatjuk az I. reakciófolyamathoz .

A C.8 reakcióban alkalmazott (Vla) általános képletű heterociklusos reagenst ismert módon előállíthatjuk, például a védett aminocsoportú megfelelő aminosavból, a savaktiválást követően alkil-aminnal reagáltatva az aktivált savat. A reakciót rendszerint savmegkötő, például N-metil-morfolin, jelenlétében hajtjuk végre. Az aminocsoport védőcsoportjának eltávolítására a szokásos eljárásokat alkalmazzuk, a C.8 reakcióban felhasználható heterociklusos reagenst nyerve.

Konkrétan a [3S-(3R*,4aR*,8aR*)]-dekahidro-izokinolin-3-N-terc-butoxi-karboxamid előállításához (2S)-1,2,3,4-tetrahidro-3-izokinolin-karbonsavat használunk és az alábbi reakciólépéseket hajtjuk végre:

1) aminocsoport védelme (t-Boc);

2) savaktiválás, reakció terc-butil-aminnal;

3) katalitikus hidrogénezés;

4) aminocsoport védőcsoportjának eltávolítása.

Az A.4 és a B.3 reakcióban alkalmazott Weinreb amidot úgy állítahtjuk elő, hogy a C.2 reakciónál nyert vegyületet aprotikus oldószerben vagy oldószerelegyben, gyorsítóágens, savmegkötő és • * 4

- 38 kapcsolóágens jelenlétében -25 és 25°C közötti hőmérsékleten N-metoxi-N-metil-aminnal reagáltatjuk. A reakcióban előnyös gyorsítóágens a HOBT.H2O. Előnyös savmegkötő lehet egy tercier alkil-amin, előnyösen a trietil-amin vagy N-metil-morfolin. Kapcsolóágensként előnyös az etil-dimetil-amino-propil-karbodiimid-hidrokloridot használni. Az így előállított Weinreb amidot előnyös kinyerni, mielőtt az A.4 és a B.3 reakciókhoz felhasználjuk. ?

Azok az 1.1 reakcióban felhasznált karbonsavak, melyek kereskedelmi forgalomból nem szerezhetők be, ismert módon előállíthatók.

A szakemberek előtt nyilvánvaló, hogy a fenti reakcióknál szükséges lehet a reagensek védőcsoportokkal történő védelme, hogy másodlagos reakciók ne játszódhassanak le. Bármelyik amint, alkil-amint vagy karbonsavat védhetjük a szokásos aminocsoportot vagy karboxilcsoportot védő csoporttal, feltéve, hogy nincsenek kedvezőtlen hatással a vegyület kívánt reakcióban való részvételére. A különféle védőcsoportok azután egyszerre vagy egymást követően eltávolíthatók a molekuláról a jól ismert módszerek valamelyikével.

Amint fentebb említettük, valamennyi aszimmetriás forma, az egyes izomerek ugyanúgy, mint ezek kombinációi részét képezik a találmánynak. Az ilyen izomerek a fenti eljárások alkalmazásával megfelelő előanyagokból vagy a racém elegy rezolválásával állíthatók elő. A rezolválást rezolváló ágens jelenlétében hajtjuk

- 39 végre kromatografálással, ismételt kristályosítással vagy az ismert módszerek kombinálásával. A rezolválásra részletes ismertetést kapunk Jacques és munkatársai: Enantiomers racemates, and resolutions című munkájában (John Wiley & Sons, 1981).

A jelen találmány szerinti vegyületek előállításának kiindulási vegyületei ismertek és amennyiben kereskedelmi forgalomból nem szerezhetők be, ismert módon könnyen előállíthatok. ;

A találmány szerinti gyógyászati szempontból alkalmazható sók tipikus előállítási módja, hogy az (I) általános képletű együletet sav vagy bázis egyenértéksúlynyi vagy feleslegben alkalmazott mennyiségével reagáltatjuk. A reagenseket általában valamelyik közös oldószerükben, savaddíciós sók elkészítéséhez, például dietil-éterben vagy benzolban, a bázisaddíciós sók elkészítéséhez vízben vagy egy alkoholban reagáltatjuk egymással. A sók egy órától tíz napig terjedő idő alatt rendszerint kicsapódnak és szűréssel vagy más módon kinyerhetők.

Az alábbiakban ismertetjük azokban a vizsgálatokat, melyekkel bizonyítható, hogy a találmány szerinti vegyületek gátolják a HÍV proteázt.

Az alábbi rövidítéseket használjuk:

BSA borjúszérumalbumin

BOC terc-butil-oxi-karbonil-csoport

BrZ 2-bróm-benzil-oxi-karbonil-csoport

2-C1Z 2-klór-benzil-oxi-karbonil-csoport « * · · « • · ··« ·♦· • · · · « · « • ·· *4 ·

DCC	diciklohexil-karbodiimid
DIEA	diizopropil-etil-amin
DTT	ditiotreitol
EDTA	etilén-diamin-tetraecetsav
FITC	fluoreszcein-izotio-karbamil-csoport
HEPES	4-(2-hidroxi-etil)-1-piperazin-etánszulfonsav
MES	4-morfolin-etánszulfonsav
PAM	fenil-acetamido-metil-csoport
TAPS	3-[trisz(hidroxi-metil)-metil]-amino-l-szulfonsav
TRIS	trisz(hidroxi-metil)-amino-metán
TOS	p-toluolszulfonil-csoport (tozilcsoport).

I. Proteáz és gag frakciók előállítása

A) E.coli K12 L507/pHP10D törzs tenyészete

A fagyasztva szárított E.coli K12 L507/pHP10D törzset a

Northern Régiónál Research Laboratorytól (Peoria, Illinois 61604) szerezhetjük be az NRRL B-18560 letéti számon (letétbe helyezve 1989. november 14-én). A liofilizátumokat 10 ml LB tápközeget (literenként 10 g Bacto-tryptone, 5 g Bacto élesztőkivonat és 10 g vizes nátrium-klorid, pH = 7,5) tartalmazó csövekbe töltjük és egy éjszakán át inkubáljuk 32°C hőmérsékleten.

Az így kapott tenyészet egy kis részét LB agarra helyezzük »· ··4 · · • ♦ · 4· • ♦ ·*« 4 · 4« • · · · · · · (LB tápközegben literenként 15 g Bacto agar), mely milliliterenként 12,5 μg tetraciklint tartalmaz. Az E.coli K12 L507/pHP10D törzs egyedülálló telepével 10 ml, milliliterenként 12,5 μς tetraciklint tartalmazó LB tápközeget oltunk, be és egy éjszakán át erőteljesen rázatjuk 32°C hőmérsékleten. Ezzel a 10 ml tenyészettel oltjuk be az ugyanilyen tetraciklinkoncentrációjú LB tápközeget és erőteljes rázatás mellett inkubáljuk, amíg a tenyészet a mid-log fázist el nem éri.

B) Az E.coli K12 L507/pHGAG tenyészet

A fagyasztva szárított E.coli K12 L507/pHGAG törzset az NRRL B-18561 letéti számon szerezhetjük be (letétbe helyezés ideje 1989. november 14.). Izoláljuk az E.coli K12 L507/pHGAG törzs egy kitisztított telepét és ebből kiindulva lényegében az E.coli K12 L507/pH10D törzsnél leírtak szerint mid-log fázisig növesztjük a tenyészetet.

C) A proteáz-frakció izolálása

Az E.coli K12 L507/pHP10D törzset mid-log fázisig növesztjük 32°C hőmérsékleten 12,5 gg/ml tetraciklint tartalmazó LB tápközegben. A tenyészet hőmérsékletét gyorsan 40°C-ra emeljük, hogy megindítsuk a génexpressziót, és a sejteket 2,5 órán át ezen a hőmérsékleten növesztjük, majd a tenyészetet jéggel gyorsan • · • · · · · · • · ·«« ·♦♦ · ···· · » * « ««·»···

- 42 lehűtjük. A sejteket centrifugáljuk, az üledéket 20 ml 50 mM MES pufferben (pH = 6,0) szuszpendáljuk, amiben 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF és 10 % glicerin van (A puffer). A sejteket ultrahangos kezeléssel feltárjuk, ehhez egy Fischer Model 300 dismembrator készüléket és mikrocsúcsot használva. A feltárt szuszpenziót 27000 g-én centrifugáljuk, a felülúszót A pufferral 60 ml össztérfogatra kiegészítjük és 2,0x19 cm-es QAE-Seharose oszlopra >visszük 4°C hőmérsékleten, 1 ml/perc átfolyási sebesség mellett.

Előzetesen az oszlopot A pufferral kiegyenlítjük. Az oszlopot 180 percen át izokratikusan mossuk, majd 120 percen át grádiens elúciónak vetjük alá, amihez A puffért használunk, melyben a nátrium-klorid koncentráció 0-ról 1,0 M-ra változik. Az enzimatikus aktivitást HPLC-vel mérjük SQNYPIV szintetikus peptidet használva, ahogyan azt Margolin és munkatársai leírják [Biochem. Biophys. Rés. Commun., 167: 554-560 (1990)]. A pl peptid (SQNY) termelődését mérjük.

Az aktív frakciókat egyesítjük, 1,2 M ammónium-szulfát koncentrációt állítunk be és 2,0x18 cm-es hexil-agaróz oszlopra visszük, amit előzőleg 1,2 M ammónium-szulfátot tartalmazó A pufferrel egyenlítünk ki. A mintát 1 ml/perc átfolyási sebességgel, 4°C hőmérsékleten visszük az oszlopra, ugyanezen sebességgel mossuk 240 percen át az oszlopot A pufferral, majd fordított lineáris gradienssel eluálunk 120 percen át, melyhez ugyanilyen átfolyási sebességgel A puffért használunk, amiben az ammónium-szülfát koncentrációja 1,2 M-ról nullára csökken.

Az aktív frakciókat egyesítjük, Amicon kevertetett cellában <· · « • · 4 « ·4 • · ··4 4*4· ···· * «·4 ₄· · · 4 · 4· ·

- 43 ΥΜ-10 membrán alkalmazásával 10 ml térfogatra tóményítjük és az oldatot 1,0x10 cm-es Mono S kationcserélő gyantaoszlopra visszük, amit előzőleg A pufferral kiegyenlítettünk. A minta rávitele 25°C hőmérsékleten történik 1 ml/perc átfolyási sebességgel. Miután 30 percen át izokratikusan mostuk az oszlopot, a proteázt lineáris gradiens elúcióval oldjuk le, melyhez A puffért használunk, amelyikben a vizes nátrium-klorid koncentrációja 40 perc alatt nulláról 0,45 M-ra emelkedik. Ezután 40 percen át izokratikusan mossuk az oszlopot 0,45 M vizes nátrium-kloridos A pufferrel.

Az aktív frakciókat egyesítjük, 200 μτπ térfogatra betöményítjük egy Amicon kevertetett cellában, YM-10 membrán alkalmazásával. A proteáz oldatot Superose 6 méretkizárásos gyantaoszlopra visszük, amit előzőén 0,1 M vizes nátrium-klorid koncentrációjú A pufferral egyenlítettünk ki. Az oszlopot izokratikusan 0,5 ml/perc átfolyási sebességnél ezzel a pufferral mossuk, a HÍV proteáz egyetlen csúcsban eluálódik az oszlopról.

A QAE-Sepharose-t és a hexil-agarózt a Sigma Chemical Company-tól, a Superose 6 és Mono S gyantákat a Pharmacia cégtől szereztük be. A pufferek és a reagensek a Sigma cégtől származnak.

D) A Gag frakció előállítása

Az előbbiekhez hasonló módon az E.coli K12 507/pHGAG törzset • *44·4

9 ·4»4 444· ···· 4 · ·· * <«····»

- 44 32°C hőmérsékleten mid-log fázisig növesztjük, majd 4-5 órára a hőmérsékletet 40°C-ra emeljük. A tenyészetet jégen lehűtjük, centrifugáljuk, majd a sejtüledéket 8 ml 5 mg/ml lizozimot tartalmazó lizáló pufferben szuszpendáljuk. A lizáló puffer összetétele: 50 mM Trisz-HCl (pH - 7,8), 5 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM NaCl, 1 gg/ml E64 és 2 Mg/ml aprotinin. A szuszpenziót 30-60 percen át inkubáljuk 4°C hőmérsékleten, majd Branson Cell Disrupter készülékben 60 %-os hatásfok mellett, háromszor 20 másodperces ultrahangos feltárásnak tesszük ki, az egyes kezelések között hűtést alkalmazva. A szuszpenziót 15000 g-én lecentrifugáljuk, a kifejletlen gag proteint tartalmazó felülúszót részlegesen tisztítjuk egy Sephadex G-50 méretkizárásos gyantaoszlopon és 50 % glicerint tartalmazó lizáló pufferben tároljuk -20°C hőmérsékleten.

II. Az N^a-biotin-Glv-Ser-Gln-Asn-Tvr-Pro-Ile-Val-Gly-Lvs(N⁶-FTIC)-OH képletű szubsztrát előálltása

A) Az N^a-biotin-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gly-Lys-OH előállítása

Az N^a-Boc-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr(Brz)-Pro-Ile-Val-Gly-Lys(2-Clz)-0CH₂~PAM gyanta védett fehérje/gyanta komplexet az Advanced Chemtech Model 200 peptidszintetizátoron állítjuk elő 1,5 mmól fokozatnál, a szokásos kettős páros eljárást alkalmazva. Az aminoterminális Boc csoportot metilén-kloridban 50 %-os ♦ · · ·> · · k · ··« ·«« · * » * · · ·· · *·····

- 45 trif luor-ecetsawal távolítjuk el és a gyantát 5 %-os diizopropil-etil-aminnal (DIEA) semlegesítjük metilén-kloridban.

A peptid/gyanta komplexhez 20 ml dimetil-szulfoxidban 1,1 g (4,5 mmól) biotint, majd 9 m metilén-kloridban 4,5 mmól diciklohexil-karbodiimidet (DCC) adunk. A reakciókeveréket 11 ml metilén-kloriddal 40 ml össztérfogatra hígítjuk, és hagyjuk reagálni 5 órán át. Az oldatot betöményítjük, a gyantát dimetil-szulfoxiddal, dimetil-formamiddal, majd metilén-kloriddal mossuk és 5 %-os metilén-kloridos DIEA-val semlegesítjük. Ezt a reakciót kétszer megismételjük, 12 órát hagyva az egyes reakciókra. A gyanta ninhidrines analízise azt mutatja, hogy a biotin és a glicin aminocsoportja között a reakció teljes. A végső peptid/gyanta komplexet dimetil-formamiddal és metilén-kloriddal alaposan kimosva, és megszárítva 4,9 g (98 %) terméket kapunk.

B) A védőcsoport eltávolítása ml hidrogén-fluorid/m-krezol oldatban 0°C hőmérsékleten történő egy órás kezeléssel eltávolítjuk a peptid védőcsoportját és lehasítjuk a peptidet a gyantáról. Vákuum-desztillációval eltávolítjuk a hidrogén-fluorid savat, és az m-krezolt 100 ml detil-éterrel kiextraháljuk a reakcióelegyből. A peptidet ezután 50 %-os vizes ecetsavban oldjuk, fagyasztjuk és így szárítjuk, 2,14 g terméket nyerve.

•4 ···«

C) Tisztítás

A nyers N^a-biotin-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gly-Lys~OH peptidet feloldjuk 200 ml 0,1 % trifluor-ecetsavat tartalmazó 5 %-os acetonitril vizes oldatában és 0,22 μ-os szűrőn átszűrjük. A szürletet rávisszük egy 2,2x25 cm méretű fordított fázisú oktadecil-szilikagél oszlopra (Vydac C-18), amit előzőleg ugyanezzel a közeggel kiegyensúlyoztunk. A peptidet 855 perces lineáris grádiens elúcióval, 2 ml /perc átfolyási sebességnél oldjuk le az oszlopról. A grádiens elúcióhoz az acetonitrilt 7,5 %-ról 25 %-ra emeljük. Az egyes frakciókat 4,6x250 mm méretű Vydac C-18 oszlopon HPLC-vel analizáljuk, azonos pufferkörülményeket alkalmazva. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, fagyasztjuk és szárítjuk, 1,206 g (62 %) terméket nyerve.

Az izolált N^a-biotin-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gly-Lys-OH peptid aminosavanalízisének eredményei: Asn 1,1, Ser 0,96, Gin 1,1, Pro, 1,1, Gly 2,1, Val 0,80, He 0,78, Tyr 1,1, Lys 1,1 - az elméletileg várt eredménynek megfelelően. A fast-atom bombardment tömegspektrometria szerint a molekulaion tömege: 1288, az elméletinek megfelelően.

D) Jelölés

A tisztított peptidet a C-terminálison a Pandex vizsgálatnál ·· »··· használt fluoreszcens markerrel jelöljük. 1,206 g (0,936 mmól) N^a-biotin-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gly-Lys-OH-t feloldunk 100 ml O,1M nátrium-borát puíferben (pH = 9,5). Az oldathoz 2 óra alatt 10 egyenlő adagban elosztva hozzáadjuk 3 g (7,7 mmól) fluoreszcein-izotiocianát 15 ml dimetil-szulfoxidban készült oldatát. Az utolsó adagolás utáni 2 órán át hagyjuk lejátszódni a reakciót. Az oldat kémhatását 5 n sósavval p H = 3 értékre állátjuk be, és a keletkezett csapadékot centrifugálással összegyűjtj ük.

A peptidoldat kémhatását 5 n nátrium-hidroxid-oldattal pH =

7,8 értékre állítjuk be, majd 0,1M ammónium-acetát oldattal (pH = 7,5) az össztérfogatot 200 ml-re egészítjük ki. A nyert oldatot 0,22 μ-os szűrőn átszűrjük, és 2,2-x25 cm méretű Vydac C-18 oszlopra visszük, amit előzőleg 0,1M ammónium-acetátban (p H = 7,5) készült 5 %-os acetonitril-oldattal kiegyensúlyoztunk. A peptidet 855 perc alatt lineáris grádienssel eluáljuk az oszlopról 2 ml/perc átfolyási sebesség mellett, mialatt az acetonitril koncentrációját 5 %-ról 25 %-ra emeljük. Az egyes frakciókat analitikai HPLC-vel elemezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, fagyasztjuk és így szárítjuk, 190,2 mg (12 %) terméket nyerve.

A tisztított peptid aminosavanalízisének eremdénye: Asn 1,1,

Ser 1,0, Gin 1,1, Pro 1,1, Gly 2,1, Val 0,8, Ile 0,8, Tyr 1,1,

Lys 1,0 - az elméletileg várt eredményeknek megfelelően. A fast-atom bombardment tömegspektrometriával kapott molekulatömeg:

·♦··

1678; megfelel az elméletileg várt értéknek.

E) Fluoreszcens HIV-1 proteáz gátlásának vizsgálata

A vizsgálatokban az alábbi összetételű pufferokat és oldatokat használjuk:

MES-ALB puffer:	0,05M 4-morfolin-etánszulfonsav, pH = 5,5 0,02M nátrium-klorid 0,002M EDTA 0,001M DTT 1,0 mg/ml BSA
TBSA puffer:	0,02M Trisz 0,15M nátrium-klorid 1,0 mg/ml BSA

Avidinnel borított gyöngyök szuszpenziója:

Enzimoldat:

0,1 % Fluorion Avidin Assay Particles-t tartalmazó szuszpenzió (0,6-0,8 μ átmérőjű polisztirol gyöngyökhöz konjugált Avidin TBSA pufferben) 27 IU/ml koncentrációjú tisztított HIV-1 proteáz oldat MES-ALB pufferben (1 UI megfelel annak az enzimmennyiségnek, ami 37°C hőmérsékleten percenként 1 gmól szubsztrátot hidrolizál el).

A 96 lukú lemez mindegyik lukénak aljába bemérünk 20 μΐ * · ··»·

- 49 enzimoldatot, majd hozzáadunk a vizsgálandó vegyület 20 %-os vizes dimetil-szulfoxidos oldatából 10 μΐ-t. A tisztított HIV-1 proteázt a fentiekben leírtak szerint kapjuk meg. A reakcióelegyet egy órán át inkubáljuk szobahőmérsékleten, majd 20 μΐ N^a-biotin-Gly-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gly-Lys(N^e-FITC) -OH szubsztrátot tartalmazó MES-ALB pufferben (1,5 μΐ/ml) készült oldatot adunk minden egyes lukhoz. Szobahőmérsékleten inkubálunk 16.:órán át, majd az egyes lukak tartalmát meghígítjuk 150 μΐ MES-ALB pufferrel.

Egy másik 96 lukú Pandex lemez minden lukéba bemérünk 25 μΐ avidinnel borított gyöngy szuszpenziót, majd 25 μΐ fenti hígított inkubált oldatot. Az elegyet alaposan összekeverjük és a lemezt Pandex készülékbe helyezzük, mossuk, kiürítjük és mérjük. A minta kiértékelésénél az excitációhoz 485 nm hullámhosszú fényt használunk, az epifluoreszcencia mérése 535 nm-en történik.

A találmány szerinti vegyületekre kapott IC₅q értékeket az

I. tábláaztban foglaljuk össze. Valamennyi érték az [IS-(ÍR*,4R*,5S*)]-N-(1-(2-amino-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-metil-5-hidroxi-6-(2-(1-terc-butil-amino)-1-oxo-metil)-fenil)

-hexil)-2-kinolinil-karboxamid pozitív kontrolljához viszonyított.

- 50 I. TÁBLÁZAT

Az (I) általános képletű vegyületek gátlási aktivitása a példa száma fluoreszcens vizsgálattal nyert

IC₅₀ érték ng/ml

kontroll	1,0
5.	0,16
6.	0,99
7.	0,88
8.	9,8
9.	0, 16
10 .	1,5
11.	0,72
12.	11,2

Amint már említettük, a találmány szerinti vegyületek alkalmasak a HÍV proteázának gátlására és ezen keresztül befolyásolják a vírust felépítő alkotórészek képződését, a vírus kialakulását. A találmány egyik alkalmazási módja, eljárás főemlősök Hív fertőzésének kezelésére vagy megelőzésére, mely abból áll, hogy a szervezetbe az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója hatásos mennyiségét juttatjuk be. A találmány másik alkalmazási módja, eljárás a főemlősök AIDS betegségének kezelésére és megelőzésére, mely abból áll, hogy a szervezetbe az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója hatékony mennyiségét juttatjuk be.

A találmány további alkalmazási módja, eljárás a HÍV szaporodásának gátlására, mely abból áll, hogy a HÍV fertőzött sejtbe, a HÍV fertőzésre fogékony sejtbe vagy a szervezetbe (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sója hatását mennyiségét juttatjuk be.

A hatásos mennyiség kifejezésen a találmány szerinti vegyületnek azt a mennyiségét értjük, ami a HIV-proteáz gátlásán keresztül képes gátolni a vírus alkotórészeinek termelődését és a vírus kialakulását. A jelen eljárás szerinti HÍV proteázgátlás jelent gyógyító és megelőző kezelést is. A gyógyító és/vagy megelőző hatás eléréséhez szükséges specifikus dózis természetesen az adott tényezőktől függ, igy például a beviendő vegyülettől, a bevitel módjától, a kezelendő szervezet állapotától és egyedi sajátosságaitól. A testsúly-kilogrammonkénti tipikus napi dózis 0,01 és 50 ng között változik. Előnyös, ha a napi adag 0,05-20 mg/kg, még előnyösebb, ha 0,1-10 mg/kg közé esik.

A vegyületeket különféle módon juttathatjuk be, úgy mint szájon át, végbélen át, bőrön keresztül, szubkután, intravénásán, izomba vagy orron keresztül. A találmány szerinti vegyületeket előnyös az adagolás előtt formulázni. A találmány egyik következő kivitelezési módja tehát a gyógyszerkészítmények előálltása, ami abból áll, hogy az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmas sója hatékony mennyiségét és gyógyászati szempontból alkalmas vívó-, hígító- vagy kötőanyagot gyógyszerkészítménynek feldolgozzuk.

A gyógyszerkészítmények 0,1-99,9 %-át (tömeg) teszi ki a hatóanyag. A gyógyászati szempontból alkalmazható kifejezésen azt értjük, hogy a vivő-, hígító- vagy kötőanyag kompatibilis a -gyógyszerkészítmény más alkotórészeivel és nem káros azok felvételére.

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények ismert módszerekkel előállíthatok, ismert és könnyen beszerezhető alkotóelemek felhasználásával. A gyógyszerkészítmény előállításánál a hatóanyagot általában összekeverjük a vívőanyaggal, hígítjuk a vívőanyagban vagy bezárjuk a vívőanyagba, ami lehet kapszula, tasak, papír vagy más alakban. Ha a vívőanyag hígítóként szerepel, az lehet folyékony, félfolyékony vagy szilárd halmazállapotú, lehet a hatóanyag hordozója, kötőanyaga vagy közege. A készítményt elkészíthetjük tabletta, pirula, por, lozeng, elixír, szuszpenzió, emulzió, oldat, szirup, aeroszol (szilárd vagy folyékony közegű) , 10 % (tömeg) hatóanyagot tartalmazó kenőcs, kúp, steril injektálható oldat, sterilen lezárt por alakjában, tasakba, kapszulába zárva, stb.

A hatóanyag kifejezésen az (I) általános képletű vegyűleteket vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sóit értjük.

Az elmondottak szemléltetésére az alábbiakban példákat adunk meg. A példák kizárólag szemléltető célzatúak, és a találmány oltalmi körét nem korlátozzák, a példákban használt rövidítések: op.: - olvadáspont, NMR - mágneses magrezonancia-spektrum, EIMS elektron ütközésű tömegspektrum, MS(FAB) - fast-atom borbardment tömegspektrum, MS(FD) field desorption tömegspektrum, IR infravörös-spektrum, UV - ultraibolya-spektrum, HPLC - nagyteljesítményű folyadékkromatográfia, TLC - vékonyrétegkromatográfia. Az IR spektrumnak csak a jellemző csúcsait nevezzük meg.

Az NMR-spektrumnál az alábbi rövidítéseket használjuk:

s - szinglett, d - dublett, dd - dublett dubletje, t - triplett, q - kvartett, m - multiplett, dm - multiplett dublettje, br széles. A J a kötési állandót jelenti Hertzben (Hz) kifejezve. Hacsak másként nem jelezzük, az NMR adatok a vegyületek szabad állapotára vonatkoznak.

A feltüntetett adatokat az alábbi készülékeken kaptuk:

NMR: Brüker Corp. 270 Hz vagy Generál Electric QE-300 300 MHz. A kémiai eltolódásokat delta értékben (δ) adjuk meg (ppm a tetrametilszilán csúcsától lefelé). MS(FD): Varian-MAT 731

Spectrometer,	szén dendrit emitter. EIMS: CEC 21-110 készülék,
Consolidated	Electrodynamics Corporation. MS(FAB): VG ZAB-3
spektrométer.	IR: Perkin-Elmer 281 készülék. UV: Cary 118

készülék. TLC: E.Merek szilikagél lemezen. Az olvadáspontok nem korrigáltak.

1. példa

A) (2R)-2-N-(terc-Butoxi-karbonil)-amino-3-naft-2-il-tio-

-propánsav

2,14 g (13,4 mmól) 2-naftalin-tiol 40 ml vízmentes tetrahidrofurában készült oldatához szobahőmérsékleten hozzáadjuk 0,54 g (13,5 mmól) nátrium-hidrid ásványi olajban készült szuszpenzióját. 15 perc elteltével 2,5 g (13,4 mmól) ^r(S)-N-(terc-butoxi-karbonil)-szerin~£-lakton 30 ml tetrahidrofuránban készült oldatát adjuk cseppenként az oldathoz. A reakcióelegyet 1 órán át hagyjuk reagálni, majd csökkentett nyomáson bepárolva, egy gumiszeru szilárd anyagot kapunk. Ezt a terméket flash-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként 1 % metanolt tartalmazó

etil-acetátot használva.	4,35 g (94 %)	terméket kapunk fehér
szilárd anyag	alakj ában.
ΧΗ NMR (CDC13)	: δ 10.25	(s, 1H), 7.	89	(s, 1H),
	7.78 (m,	3H) ,	7.46	(m,	3H), 5.39	(d,	1H) ,
	4.61 (m,	1H) ,	3.49	(m,	2H), 1.37	(s,	9H) .

B) (2R)-N-(Metoxi)-N-(metil)-[2-N-(terc-butoxi-karbonil)-

-amino-3-naft-2-il-tio]-propánamid

4,3 g (12,4 mmól) az 1A) pontban leírtak szerint előállított termék, 1,58 g (16,16 mmól) N,O-dimetil-hidroxil-amin-hidroklorid, 2,18 g (16,15 mmól) 1-hidroxi-benzotriazol

-hidrát (HOBT.H₂O), 2,24 ml (16,15 mmól) trietil-amin és 2,73 ml (24,86 mmól) N-metil-morfolin 100 ml metilén-kloridban készült 0°C hőmérsékletű oldatához hozzáadunk 2,62 g (13,67 mmól) 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid hidrokloridot (EDC). A reakcióelegyet szobahőmérsékleten hagyjuk reagálni egy éjszakán át. Az elegyet 100 ml hexánnal hígítjuk, 200 ml nátrium-hidrogén-karbonát telített oldatával, majd 200 ml sóoldattal mossuk. A fázisokat elválasztva, az szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepárolva, egy tiszta^ sárga olajos terméket kapunk.

H NMR (CDCI3):	δ 7 . !	90 (	S, 1H)	, 7.80 (m, 3H)	f
	7.49	(m,	3H) ,	5.41 (d, 1H),	4.92 (m, 1H
	3.59	(s,	3H) ,	3.18-3.46 (m.	2H) ,
	3.05	(s,	3H) ,	1.42 (s, 9H).

MS (FD): m/e 391 (M⁺), 390 (100).

C) (3R)-N-(terc-Butil)-2-[2'-oxo-3'-N-(terc-butoxi-karbonil)-

-amino-4'naft-2-il-tio]-butil-benzamid

8,60 g (45 mmól) N-(terc-butil)-2-metil-benzamid és 14,2 ml (95 mmól) N,N,N',N'-tetrametil-etilén-diamin 100 ml vízmentes tetrahidrofurában készült -78°C hőmérsékletű oldatához közömbös gáztérben lassan hozzáadjuk 111 ml (95 mmól) 0,85 M szek-butil-lítium hexános oldatát. Az oldat adagolásához fecskendőt hasz-nálunk. A szek-butil-lítium adagolása alatt ellenőrizzük a reakcióedény belső hőmérsékletét és biztosítjuk, hogy a hőmér56 séklet ne emelkedjen -57°C fölé. A reakcióelegyet 1 órán át hagyjuk -78°C-on reagálni, majd 7,90 g (20 mmól) az

1D) pontban leírtak szerint előállított köztes termék 80 ml tetrahidrofuránban készült oldatát adjuk cseppenként hozzá. Amikor az adagolás teljes, a reakcióelegy hőmérsékletét -20°C-ra emeljük és a reakciót leállítjuk ammónium-klorid telített oldatának hozzáadásával. A kapott reakcióelegyet 600 ml dietil-éterrel meghígítjuk, a fázisokat elválasztjuk, és a szerves fázist 1M nátrium-hidrogén-szulfát oldattal, majd sóoldattal mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepárolva, sárga olajat nyerünk. Ezt az olajos terméket flash-kromatográfiával tisztítjuk, grádiens elúciót alkalmazva, melyhez hexánban az etil-acetát koncentrációját 10 %-ról 50 %-ra emeljük. 8,5 g (82 %) kívánt köztes terméket kapunk.

1H	NMR	(CDC13)	: δ 7.91	0 (S, 1H)	, 7.79 (t, 3H),
			7.48	(m,	3H) ,	7.40 (d, 1H) , 7.29	(m,	2H)
			7.05	(d,	1H) ,	5.94 (br.s, 1H),
			5.65	(m,	1H) ,	4.65 (d, 1H),
			4.24	(d,	J=17	Hz, 1H) ,
			3.86	(d,	J=17	Hz, 1H), 3.66 (m,	1H) ,
			3.40	(m,	1H) ,	1.42 (s, 9H), 1.39	(s,	9H)
MS	(FD)	: m/e	521 (M+)	, 5	21 (100).

D) [(2R-(2R*,3R*)]-N-(tere-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-N-

-terc-butoxi-karbonil)-amino-4'-naft-2-il-tio]-butil-benzamid

3,49 g (6,7 mmól) az IC) pontban leírtak szerint előállított köztes termék 150 ml vízmentes etanolban készült oldatához hozzáadunk 0,51 g (13 mmól) nátrium-bórhidridet, és a nyert reakcióelegyet szobahőmérsékleten hagyjuk reagálni egy éjszakán át. A reakcióelegyet 0°C-ra hűtjük, a reakciót ammónium-klorid oldatának hozzáadásával leállítjuk és 550 ml metilén-kloridot adunk az oldathoz. A fázisokat elválasztjuk, a szerves fázist 1 n sósavval, 2 n nátrium-hidroxid-oldattal és sóoldattal mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepárolva, színtelen habos anyagot kapunk. Ezt a habot flash-kromatográfiával tisztítjuk, grádiens elúciót használva, melyhez etil-acetátban a hexán koncentrációt 10 %-ról 25 %-ra emeljük. 2,78 g (78 %) kívánt köztes terméket kapunk.

!h NMR (CDC13): 57.84 (s, 1H), 7.73 (m, 3H),

7.41	(m,	3H), 7.29	(t,	2H) ,	7.16	(t,	2H) ,
	6.53	(s,	1H), 5.32	(d.	1H) ,	3.86	(m,	2H) ,
	3.33	(m,	2H), 2.83	(m,	2H) ,	1.40	(s,	9H) .
MS (FD):	m/e 523 (M+)	, 522 (100).

Elemanalízis a képlet alapján:

számított: C: 68.94, H: 7.33, N: 5.36 %;

mért: C: 68.65, H: 7.34, N: 5.15 %.

E) [(2R-(2R*,3R*)]-N-(tere-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-

-amino-4'-naft-2-il-tio]-butil-benzamid

2,89 g (5,53 mmól) az 1D) pontban leírtaK szerint előállított köztes termék 100 ml metilén-kloridban készült 0°C hőmérsékletű oldatához hozzáadunk 18 ml trifluor-ecetsavat. A reakcióelegyet 1 órán át hagyjuk reagálni. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepárolva, habos anyagot kapunk, amit toluolban felveszünk és csökkentett nyomáson bepárolva egy habos terméket kapunk, amit flash-kromaotráfiával tisztítunk. Elúcióhoz 5 % metanolt tartalmazó metilén-kloridot használunk. 1,71 g (74 %) kívánt terméket kapunk fehér hab alakjában.

1H	NMR (CDCI3): 57.75-7.85	(m, 4H)	, 7.	.24-7.	.51 (m, 7H),
	6.06 (s, 1H)	, 3.75	(m,	1H) ,	3.61 (m, 1H),
	3.07 (m, 2H)	, 2.95	(m,	2H) ,	1.47 (s, 9H).
MS	(FD) : m/e 423 (M+) , 422 (	100) .
2.	példa

A) (2R)-2-N-(terc-Butoxi-karbonil)-amino-3-fenil-tio-propánsav

A kívánt vegyületet az 1A) pontban leirt eljárás szerint állítjuk elő. 5,1 g (95 %) kívánt terméket kapunk.

¹H NMR (CDCI3): δ 7.43 (m, 2H) , 7.22-7.34 (m, 3H) ,

5.31 (m, 1H) , 4.54 (m, 1H),

3.37-3.48 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).

MS (FD): m/e 297 (M⁺), 297 (100).

B) (2R)-N-(Metoxi)-N-(metil)-[2-N-(terc-butoxi-karbonil)-

-amino-3-fenil-tio]-propánamid

A kívánt vegyületet az 1B) pontban ismertetett eljárás szerint állítjuk elő. 4,40 g (79 %) kívánt terméket kapunk.

^ΧΗ NMR (CDC1₃): δ 7.33 (m, 2H), 7.17 (m, 2H),

7.09 (m, 1H), 5.53 (d, J=9 Hz, 1H),

4.73 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.19 (m, 1H), 2.95-3.06 (m, 4H), 1.33 (s, 9H).

MS (FD) : m/e 341 (M⁺), 340 (100).

C) (3R)-N-(terc-Butil)-2-[2'-oxo-3'-N-(terc-butoxi-karbonil)-

-amino-4'-fenil-tio]-butil-benzamid

A kívánt vegyületet az IC) pontban leírt eljárással állítjuk elő. 2,20 g (58 %) kívánt terméket kapunk.

1H NMR (CDCI3): δ 7.39 (m, 3H), 7.18-7.35 (m, 5H),

7.09	(d,	J=6 Hz,	1H) ,	6.00	(s,	1H) ,
5.63	(d,	J=7 Hz,	1H) ,	4.56	(m,	1H) ,
4.20	(d,	J=17 Hz,	1H)	t
3.84	(d,	J=17 Hz,	1H)	, 3.54	(m,	1H)
3.26	(m,	1H), 1.4	.1 (s	, 9H) .

D) [(2R-(2R*,3R*)]-N-(terc-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-

-N-terc-butoxi-karbonil)-amino-4'-fenil-tio]-butil-benzamid

A kívánt vegyületet az 1D) pontban leírt eljárás szerint állítjuk elő. 1,85 g 80 % kívánt terméket kapunk.

^XH NMR (CDCI3): δ 7.17-7.45 (m, 9H), 6.04 (br.s, 1H),

5.08 (m, 1H), 3.87 (m, 2H), 3.32 ( m, 2H),

2.90 (m, 3H), 1.47 (d, 18H).

MS (FD) : m/e 473 (M⁺) , 472 (100) .

»· «

- 60 Elemanalízis a C₂5H3gN₂O4S képlet alapján:

számított: C: 66.07, H: 7.68, N: 5.93 %;

mért: C: 66.09, H: 7.75, N: 5.86 %.

E) [(2R-(2R*,3R*)]-N-(terc-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-

-amino-4'-fenil-tio]-butil-benzamid

A kívánt vegyületet az 1E) pontban leírtak szerint állítjuk elő. 1,00 g (81 %) kívánt terméket kapunk.

^ΧΗ NMR (CDCI3): δ 7.19-7.43 (m, 9H) , 6.04 (br.s, 1H),

5.43 (br.s, 1H), 3.71 (m, 1H) ,

3.47 (m, 1H), 2.83-3.01 (m, 4H),

1.47 (s, 9H).

MS (FD): m/e 373 (M⁺), 372, 373 (100).

3. példa

A) (2R)-N-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-3-naft-2-il-tio-

-propánsav

1,28 g (8,00 mmól) naftalin-2-tiol 30 ml tetrahidrofuránban készült oldatához nitrogéngáz alatt lassan hozzáadunk 1,77 g (8,16 mmól) 60 %-os nátrium-hidridet. 15 perces kevertetés után 20 ml tetrahidrofuránban N-(benzil-oxi-karbonil)-szerin-B-laktont adunk lassan hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten hagyjuk reagálni 1 órán át, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot etil-acetátban oldjuk, az oldatot 0,5 n nátrium-hidroxi-szulfát oldattal és telített sóoldattal mossuk, A fázisokat elválasztva, a szerves fázist nátrium-szulfát felett

V » · · · · • · · · · · · « · ·**· · · · · szárítjuk, szűrjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítva, 2,08 g (68 %) kívánt terméket kapunk halványsárga szilárd anyag alakj ában.

ÍH NMR (CDCI3): δ 3.42-3.61 (br.m, 2H),

5.53-5.76 (br.s, 1H) ,
4.85-5.08	(br.m,	2H) ,
5.54-5.76	(br.s,	1H) ,
7.06-7.97	(m, 12H).
1.0, MeOH)

IR (KBr): 3348, 3048, 1746, 1715, 1674, 1560, 1550, 1269,

1200, 1060 cm¹.

MS (FD) : m/e 381 (M⁺) , 381 (100).

Elemanalizis a C2QH^gNO₄S képlet alapján:

számított: C: 66.12, H: 5.02, N: 3.67 %;

mért: C: 66.22, H: 5.04, N: 3.86 %.

B) (3R)-Benzil-[2-aza~3-(naft-2-il-tio-metil)-4-oxo-5-diazo-

-pentanoát]

15,38 g (40,3 mmól) a 3A) pontban leírtak szerint előállított köztes termék 230 ml etil-acetátban készült -30°C hőmérsékletű oldatához nitrogéngáz alatt lassan hozzáadunk 5,62 ml (40,3 mmól) trietil-amint egy fecskendő segítségével. A nyert oldathoz 7,84 ml (60,5 mmól) izobutil-klórformiátot adunk hozzá egy fecskendővel. Egy másik edényben 10 g N-(metil)-N-(nitro)-N-(nitrozo)-guanidinhoz óvatosan hozzáadjuk 170 ml dietil-éter és 170 ml 5 n nátrium-hidroxid-oldat kétfázisú keverékét. A « ·

reakciót nagymennyiségű gáz fejlődése kiséri. Amikor a reakció teljes, a vizes fázisról a szerves fázist kálium-hidroxidra öntjük és szárítjuk. A diazometán képzést és addíciót megismételjük azonos mennyiségű dietil-étert és nátrium-hidroxid-oldatot, valamint 30 g N-(metil)-N-(nitro)-N-(nitrozo)-guanidint használva. A nyert diazometán reaktánst hozzáadjuk a kevert anhidrid előzőekben elkészített oldatához és a reakcióelegyet -30°C hőmérsékleten hagyjuk reagálni 20 percen át. Amikor a reakció teljes - amit TLC-vel követhetünk nyomon - nitrogéngázt buborékoltatunk át az oldaton a diazometán felesleg eltávolítására. A gáz bevezetéséhez lángban kellően leolvasztott Pasteur pipettát használunk. Az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, a bepárlási maradékot flash-kromatrográfiával tisztítjuk, eluensként 10 % etil-acetátot tartalmazó metilén-kloridot használva. 13,62 g (83 %) kívánt terméket kapunk sárga olaj alakjában.

¹H NMR (CDCI3) : δ 3.32-3.46 (m, 2H), 4.40-4.67 (m, 1H) ,

5.00-5.09 (m, 2H), 5.44 (s, 1H),

5.76 (d, J=7.8 Hz, 1H),

7.25-7.86 (m, 12H).

C) (3R)-Benzil-[2-aza-3-(naft-2-il-tio-metil)-4-oxo-5-klór-

-pentanoát]

13,62 g (33,59 mmól) a 3D) pontban leírtak szerint előállított köztes termék 230 ml dietil-éterben készült -20°C hőmérsékletű oldatán 2 másodperc alatt vízmentes hidrogén• · «·· · · * · • ♦ · · · · « ·

- 63 -klorid gázt buborékoltatunk át. A reakció alatt gázfejlődés történik. Az eljárást megismételjük, vigyázva arra, hogy hidrogén-klorid felesleget ne adjuk a reakcióelegyhez. Amikor a reakció teljes - amit TLC-vel követünk nyomon az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként 10 % etil-acetátot tartalmazó metilén-kloridot használva. 12,05 g (87 %) kívánt terméket kapunk halvány cserbarna szilárd anyag alakjában.

¹H NMR (CDCI3): δ 3.41 (dd, J=12,6 Hz, 1H),

3.53 (dd, J=12,6 Hz, 1H),

4.18 (AB q, J=41.9 Hz, J=15.9 Hz, 2H),

4.77 (dd, J=9, 3 Hz, 1H),

5,04 (AB q, J=12 Hz, J=10.4 Hz, 2H),

5.59 (d, J=7 Hz, 1H),

7.24-7.85 (Komplex, 12H).

[a]_D -80.00’ (c 1.0, MeOH).

IR (CHCI3): 3426, 3031, 3012, 1717, 1502, 1340, 1230,

1228, 1045 cm’¹.

MS (FD): m/e 413 (M⁺), 413 (100).

Elemanalízis a C22^H20^NO3^sc3· képlet alapján:

számított: C: 63.84, H: 4.87, N: 3.38 %;

mért: C: 64.12, H: 4.95, N: 3.54 %.

D) [(3R-(3R*,4S*)]-Benzil-[2-aza-3-(naft-2-il-tio-

-metil)-4-hidroxi-5-klór-pentanoát]

530 mg (1,28 mmól) a 3C) pont szerint előállított köztes • · « * # · · » · »··· · · · ·

- 64 termék 10 ml tetrahidrofurán és 1 ml víz elegyében készült 0°C hőmérsékletű oldatához hozzáadunk 73 mg (1,92 mmól) nátrium-bórhidridet. Amikor a reakció teljes - TLC-vel követjük nyomon -, az oldat kémhatását 10 ml ammónium-klorid telített vizes oldatával és 500 μΐ, 5 n sósav oldattal pH 3 értékre állítjuk be. A nyert oldatot kétszer extraháljuk metilén-kloriddal, az egyesített szerves fázisokat vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot radiál-kromatográfiává tisztítjuk, eluensként metilén-kloridot használva. 212 mg (40 %) cserbarna szilárd anyag alakjában kapjuk meg a kívánt terméket.

*Η NMR (CDC1₃) : δ 3.40 (s, 2H) , 3.61-3.71 (m, 2H) ,

3.97-3.99 (m, 2H), 4.99 (s, 2H),

5.16 (br.s, 1H) , 7.21-7.83 (Komplex, 12H).

MS (FD): m/e 415 (M⁺), 415 (100).

[CC]_D -47.67' (c 0.86, MeOH) .

IR (CHCI3): 3630, 3412, 3011, 1720, 1502, 1236, 1044 cm-¹.

Elemanalízis a C22^H22^NO3^C1S képlet alapján:

számított: C: 63.53, H: 5.33, N: 3.37 %;

mért: C: 63.72, H: 5.60, N: 3.64 %.

E) [(3R-(3R*,4S*)]-Benzil-[2-aza-3-oxiranil-4-naft-

-2-il-tio-butanoát] mg (0,55 mmól) kálium-hidroxid 1 ml etanolban készült oldatát hozzáadjuk 190 mg (0,46 mmól) a 3D) pontban leírtak szerint előállított köztes termék 6 ml etanol/etil-acetát, 1:2

arányú elegyében készült oldatához. Amikor a reakció teljes TLC-vel követjük nyomon a reakcióelegyet víz/metilén-klorid keverékhez öntjük. A fázisokat elválasztjuk, a szerves fázist vízzel mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot radiál-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként 10 % etil-acetátot tartalmazó metilén-kloridot használva. 172 mg (99 %) kívánt terméket kapunk halvány cserbarna szilárd anyag alakjában.

1H NMR (CDC13): 5 2.76 (br.s, 2H) 3.01 (br.s, 1H) ,

3.31 (d, J=5 Hz, 2H), 3.77 (br.s, 1H),

5.05 (s, 2H), 5.22 (d, J=6 Hz, 1H),

7.25-7.85 («omplex, 12H).

[a]_D -125.42° (c 0.59, MeOH).

MS (FD): m/e 379 (M⁺) , 379 (100).

IR (CHCI3): 3640, 3022, 2976, 1720, 1502, 1235, 1045 cm' .

Elemanalízis a ^C22^H21^NO3^S képlet alapján:

számított:	C: 69.63,	H:	5.58,	N: 3.69 %;
mért:	C: 69.41,	H:	5.53,	N: 3.64 %.
F) [3R-(3R*	,4R*,3'S*,4a'	1 * 1 s	,8a'S*	)]-Benzil-[[2-aza-3-(naft-2-il-

-tio-metil)-4-hidroxi-5 -(3'-(1''-N-(tere-butil)-amino-1''-oxo-metil)-oktahidro-izokinolin-2'-il)]-pentanoát]

165 mg (0,40 mmól) a 3E) pontban leírtak szerint előállított köztes termék és 94 mg (0,43 mmól) 3-(1-N-(terc-butil)-amino-1-oxo-metil)-oktahidro-(2H)-izokinolin 5 ml etanolban készült

oldatát 80°C hőmérsékleten 19 órán át hagyjuk állni. Az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, csökkentett nyomáson bepároljuk, és a bepárlási maradékot radiál-kromatográfiával tisztítjuk.

Eluensként 10 % etil-acetátot tartalmazó metilén-kloridot használunk.. 103 mg (42 %) kívánt terméket kapunk szennyesfehér hab alakjában.

iH NMR (CDC1₃): δ 1.10-1.73 (m, 20H), 2.13-2.31 (m, 2H) ,

2.44-2.53 (m, 1H), 2.56-2.68 (m, 1H),

2.86-2.97 (m, 1H), 3.52 (br.s, 2H) , 4.02 (br.s, 2H), 4.98 (s, 2H), 5.65 (s, 1H), 5.94 (s, 1H) ,

7.25-7.83 (komplex, 13H).

MS (FD): m/e 629 (M⁺), 138 (100) .

[a]_D -92.45° (c 1.06, MeOH).

IR (CHCI3): 3429, 3010, 2929, 1713, 1670, 1514, 1455,

1047 cm^-1.

Elemanalís a C35H47N3O4S képlet alapján:

számított: C: 69.98, H: 7.67, N: 6.80 %;

mért: C: 69.86, H: 7.78, N: 6.58 %.

G) [2R-(2R*,3R*,3’S*,4a’S*,8a'S*)]-N-(terc-Butil)-2'-[2-hidroxi-3-amino-4-naft-2-il-tio]-butil-oktahidro-izokino-lin-3'-karboxamid

Ecetsavban feloldunk 50 mg (0,081 mmól) a 3F) példában leírtak szerint előállított köztes terméket és 1 ml 38 %-os hidrogén-bromid vizes oldatot. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten. hagyjuk reagálni 1 órán át, majd csökkentett nyomáson

bepároljuk. A bepárlási maradékot toluollal eldörzsöljük és a szuszpenziót csökkentett nyomáson bepároljuk. 61 mg kívánt köztes terméket kapunk. Ezt a vegyületet további tisztítás nélkül használjuk fel a 13. példában ismertetett eljáráshoz.

1H NMR (CDCI3)	: δ 1.14 (s, 1H), 1.17-2.07 (Komplex, 15H),
		2.66-2.87 (m,	2H), 3.21-3.25 (m, 2H),
		3.75 (d, J=12	Hz, 1H),
		3.85 (d, J=6 Hz, 1H), 4.36-4.47 (m, 1H),
		6.73 (s, 1H),	7.39-7.90 (Komplex, 7H).
MS	(FD): 483	(M+), 483 (100).
4.	példa

A) (2R)-2-N-(Benziloxi-karbonil)-amino-3-fenil-tio-propánsav

A kívánt köztes terméket a 3A) példában leírtak szerint állítjuk elő, 13,1 ml (127 mmól) tiofenolt, 4,6 g (117 mmól) 60 %-os nátrium-hidrid oldatot és 25,6 g (116 mmól) (L)-N- (benziloxi-karbonil) -szerin-E-laktont használva 450 ml tetrahidrofuránban. A bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk, grádiens elúciót alkalmazva, melyhez metilén-klorid/etil-acetát, 4:1 arányú elegyében az ecetsav koncentrációját 0 %-ról 2 %-ra emeljük. 27,9 g (72 %) kívánt terméket kapunk fehér szilárd anyag alakj ában.

^H NMR (CDCI3) : δ 7.55-7.18 (m, 10H) ,

5.55 (d, J=7 Hz, 1H), 5.08 (s, 2H),

4.73-4.60 (m, 1H), 3.55-3.30 (m, 2H).

IR (KBr): 3304, 3035, 1687, 1532, 736 cm'¹.

MS (FD): m/e 332, 288, 271, 181.

	- 68 -
Elemanalízis a C^H^NC^S	képlet alapján:
számított: C:	61.61,	H:	5.17,	N: 4.23 %;
mért: C:	61.69,	H:	5.22,	N: 4.47 %.

• · « * «A • · *·4 ♦«*· • · · ♦ « » · · * ·« f- ·* ·

B) (3R)-Benzil-[2-aza-3-(fenil-tio-metil)-4-oxo-5-diazo- pentanoát]

A kívánt köztes terméket a 3B) példában leírt eljárás szerint állítjuk elő 12,1 g (37 mmól) 4A) példában leírtak szerint előállított vegyületet, 5,09 ml (37 mmól) trietil-amint,

7,13 ml (55 mmól) izobutil-klór-formiátot, 146 mmól diazometán oldatát alkalmazva. A diazometán oldat elkészítéséhez 100 ml dietil-éterből, 150 ml 5 n nátrium-hidroxid-oldatból és 21 g (146 mmól) N-(metil)-N-(nitro)-N-(nitrozo)-guanidinből indulunk ki, és a 3B) példában ismertetett eljárást követjük. A bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk. A grádiens elúcióhoz metilén-kloridban az etil-acetát koncentrációját 0 %ról 5 %-ra emeljük. A kívánt terméket sárga olaj alakjában kapjuk meg (73 %).

1H NMR (CDC1₃) : δ 7.50-7.19 (m, 10H) ,

	5.62	(d,	J=7	Hz, 1H), 5.	.47 (br.s, 1H)
	5.11	(s,	2H)	, 4.50-4.32	(m, 1H),
	3.33	(d,	J=6	Hz, 1H).
IR (KBr):	3012, 2115,	17	20,	1501, 1367,	1228 cm'1.

MS (FD): m/e 356, 328, 242.

C) (3R)-Benzil-[2-aza-3-(fenil-tio-metil)-4-oxo-5-klór-

-pentanoát] *4 k · · 4 « 4

I · ·4· «· » * ·*·♦*····

- 69 A kívánt vegyületet a 3C) példában ismertetett eljárás szerint állítjuk elő, 22,3 g (63 mmól) a 4B) példában ismertetett módon előállított köztes terméket és kis mennyiségű hidrogén-klorid gázt használva 400 ml dietil-éterben. 21 g terméket kapunk fehér szilárd anyag alakjában. A terméket további tisztítás nélkül használjuk fel.

¹H NMR (CDC1₃): 57.50-7.15 (m, 10H),

5.56 (dd, J=2,6.7 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H),

4.78-4.67 (m, 1H),

4.20 (d, J=15.9 Hz, 1H),

4.12 (d, J=15.9 Hz, 1H),

3.48-3.23 (m, 2H).

IR (KBr): 3349, 1732, 1684, 1515, 1266 cm¹.

MS (FD): m/e 363 (M⁺).

Elemanalízis a C^gHigNOgSCl képlet alapján:

számított: C: 59.42, H: 4.99, N: 3.85 %;

mért: C: 59.57, H: 5.09, N: 4.13 %.

d) [3R-(3R*,4S*)1-Benzil-[2-aza-3-(fenil-tio-metil)-4-hidroxi- 5-klór-pentanoát]

A kívánt vegyületet a 3D) példában leírtak szerint állítjuk elő, 21 g (58 mmól) a 4C) példában leírtak szerint előállított köztes termékből 2,4 g (63 mmól) nátrium-bórhidridből kiindulva 300 ml tetrahidrofuránban. A bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk, a grádiens elúcióhoz metilén-kloridban a metanol koncentrációját 0 %-ról 2 %-ra emelve, ezt követően egy másik flash-kromatografálást is végzünk, ehhez a grádiens * · *♦ «·<· * · ♦ · · »*· *·· »

- ΊΟ elúciót kloroformmmal hajtjuk végre, melyben az etil-acetát koncentrációját 0 %-ról 2 %-ra emeljük. Végül a terméket metilén-kloridban -78°C-on átkristályosítjuk, 8,3 g (39 %) kívánt vegyületet nyerve.

XH	NMR	(CDC13):	δ 7.47-7.19	(m, 10H), 5.	22-5	.03 (m,	1H)
			5.09 (s, 2H)	, 4.01-3.89	(m,	2H) ,
			3.75-3.58 (m	, 2H), 3.32	(d,	J=4 Hz,	2H)
IR	(KBr	): 3321,	2951, 1688,	1542, 1246,	738	cm-1.
MS	(FD)	: m/e 366 (M+) , 119.

Elemanalízis a C₁gH₂QNO3SCl képlet alapján:

számított: C: 59.09, H: 5.51, N: 3.83 %;

mért: C: 59.03, H: 5.50, N: 3.96 %.

E) [3R-(3R*,4S*)]-Benzil-[2-aza-3~oxiranil-4-fenil-tio-butanoát]

A kívánt vegyületet a 3E) példában leírt eljárás szerint állítjuk elő, 8,3 g (23 mmól) a 4D) példában leírtak szerint nyert anyagból, és 1,4 g (25 mmól) kálium-hidroxidból 400 ml etanolban. A bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk, grádiens elúcióhoz metilén-kloridot alkalmazva, melyben az etil-acetát koncentrációját 0 %-ról 2 %-ra emeljük. 6,4 g (85 %) kívánt terméket kapunk fehér szilárd anyag alakjában.

1H NMR (CDC13): δ 7.45-7.15 (m, 10 H) , 5.12 (s, 1H) ,

5.08 (s, 2H), 3.77-3.62 (m, 1H) ,

3.21 (d, J=6 Hz, 2H), 2.99 (m, 1H),

2.77 (m, 2H).

IR (KBr): 3303 ,3067, 1694, 1538, 1257, 741 cm¹.

MS (FD) m/e 329.

Elemanalízis a C32H45N3O4S képlet alapján:

számított: C: 65.63, H: 5.81, N: 4.25 %;

mért: C: 65.48, H: 5.82, N: 4.29 %.

F) [3R-(3R*,4R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-Benzil-[[2-aza-3-(fenil-

-tio-metil)-4-hidroxi-5-(3'-(1''-N-(tere-butil)-amino-1''-oxo-metil)-oktahidro-izokinolin-2'-il)]-pentanoát]

A kívánt vegyületet a 3F) példában ismertetett eljárás szerint állítjuk elő, 6,3 g (19 mmól) a 4E) példában leírtak szerint előállított vegyületet, 5 g (21 mmól) 3-[N-(terc-butil)-amino-karbonil]-oktahidro-(2H)-izokinolint alkalamazva 300 ml etanolban. A bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk, a grádiens elúcióhoz metilén-kloridot használva, melyben az etil-acetát koncentrációját 0 %-ról 20 %-ra emeljük.

4,3 g (40 %) kívánt terméket kapunk fehér szilárd anyag alakj ában.

ÍH NMR (CDCI3): δ 7.41-7.11 (m, 10H),

5.90 (d, J=5 Hz, 1H), 5.64 (s, 1H),

5.05 (d, J=4 Hz, 2H), 4.08-3	.90	(m, 2H)
3.40 (d, J= 6, 2H), 3.05 (s,	1H)	t
2.95-2.85 (m, 1H), 2.62-2.45	(m,	2H) ,
2.28-2.15 (m, 2H), 2.05-1.88	(m,	2H) ,
1.78-1.10 (m, 7H), 1.29 (s,	9H) .

• 9

999·

IR(KBr):

3330, 2925, 2862, 1706, 1661, 1520, 1454, 1246, 738, 694 cm^-1.

m/e 568 (M⁺), 467

Elemanalízis a C23H45N3O4S képlet alapján:

számított:

C:

67.69, H: 7.99, N: 7.40 %;

mért:

C: 67.64, H: 8.20, N: 7.45 %.

G) [2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N-(terc-Butil)-2'-[2-

-hidroxi-3-amino-4-(naft-2-il-tio)]-butil-oktahidro-izokinolin-3’-karboxamid

A kívánt vegyületet a 3G) példában ismertetett eljárás szerint állítjuk elő, 1 g (1,8 mmól) a 4F) példában ismertetett eljárás szerint előállított vegyületet és 40 ml 30 %-os hidrogén-bromid ecetsavas oldatát alkalmazva, azzal a különbséggel, hogy a nyersterméket 30 ml metanolban oldjuk. A kapott oldathoz hozzáadunk 2 ml dietil-amint és 2 ml tömény ammónium-hidroxidot, majd a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot víz és etil-acetát keverékében oldjuk, a fázisokat szétválasztjuk, és a szerves fázist nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldatával, majd sóoldattal mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. Ezt a bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk, a grádiens elúcióhoz kloroformot használva, melynek 1000 ml-éhez 3 csepp ammónum-hidroxidot adtunk és, melyben a metanol koncentrációját 0 %-ról 10 %-ra emeljük. 0,54 g (71 %) kívánt terméket • ••ο

- 73 kapunk fehér hab alakjában.

1H	NMR (CDCI3): δ 7.41-7.16 (m, 5H), 6.07 (s,	1H) ,
	3.78-3.70 (m, 1H),	3.45-3.38	(m, 1H) ,
	3.03-2.84 (m, 3H),	2.38-2.20	(m, 3H) ,
	2.00-1.05 (m, 12H)	, 1.33 (s,	9H) .
IR	(KBr): 2924, 2862, 1660, 1517,	1454, 1439,	737,
	691 cm-1.
MS	(FD): m/e 434 (M+) , 293.
5.	példa

[IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-Amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid

100 mg (0,237 mmól) az 1E) példában leírtak szerint előállított köztes termék 2,5 ml tetrahidrofurán/dimetil-formamid, 4:1 arányú elegyében készült oldatához hozzáadunk 71,5 mg (0,249 mmól) (S) - 2 - (2-N-kinolinil-karboxi)-2,4-diamino-1,4 -butándioik savat és 32,5 mg (0,241 mmól) HOBT.H₂0-t. A reakcióelegyet -10°C hőmérsékletre hűtjük, majd hozzáadunk 49,6 mg (0,241 mmól) diciklohexil-karbodiimidet (DCC). 1 óra eltelte után a reakcióelegyet szobahőmérsékletre melegítjük és egy éjszakán keresztül hagyjuk állni. A reakcióelegyet ezután 0°C-ra hűtjük, és a fehér csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A szürletet csökkentett nyomáson bepároljuk, a bepárlási maradékot 25 ml etil-acetátban oldjuk és az oldatot nátrium-hidrogén-karbonát telített oldatával, vízzel, 5 %-os citromsav oldattal és végül sóoldattal mossuk. A fázisokat elválasztva, a szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük, majd csökkentett nyomáson bepárolva színtelen habot kapunk. Ezt a habos terméket flash-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként 5 % metanolt tartalmazó metilén-kloridot használva. Ezt követően HPLC tisztítást alkalmazunk, eluensként 20-25 % vizet tartalmazó metanollal. 93 mg (71 %) kívánt terméket kapunk fehér szilárd anyag alakj ában.

¹H NMR (CDCI3): δ 9.29 (d, J=7 Hz, 1H), 8.10 (m, 3H),

7.54-7.77 (m, 8H), 7.15-7.33 (m, 7H) ,

6.60	(br.	. s,	1H), 6.30 (s, 1H),
5.92	(br.	. s,	1H), 4.95 (m, 1H),
4.27	(m,	1H)	, 3.93 (m, 1H), 3.47
3.30	(m,	1H)	, 2.76-3.02 (m, 4H),
1.42	(s,	9H)

MS (FD): m/e 692 (M⁺), 691 (100).

Elemanalízis a C₃gH₄₁N5O₅S képlet alapján:

számított: C: 67.71, H: 5.97, N: 10.12 %;

mért: C: 67.97, H: 5.94, N: 9.96 %.

2. példa

A) [2'R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(terc-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'- naft-2-il-tio-metil-4'-aza-5',8'-dioxo-6'-(N-(terc-butoxi-karbonil)-amino-8'-amino]-oktil-benzamid

A kívánt vegyületet az 1. példában leírt eljárás szerint állítjuk elő 0,50 g (1,18 mmól) az 1E) példában leírtak szerint előállított köztesterméket, 0,289 g (1,24 mmól) (2S)-2-N-(terc-butoxi-karbonil)-3-karbamoil-propánsavat, 0,163 g (1,21 mmól)

H0BT.H₂0-t és 0,249 g (1,21 mmól) DCC-t alkalmazva 11,5 ml tetrahidrofurán/dimetil-formamid, 10:1,5 arányú elegyében. A nyert fehér szilárd terméket flash-kromatográfiával tisztítjuk, a grádiens elúcióhoz metilén-kloridot használva, melyben a metanol koncentrációját 1 %-ról 5 %-ra emeljük. 0,64 g (85 %) kívánt terméket kapunk.

1H NMR (CDCI3)

5 7.7	1-7 .	81	(m, 4H)	, 7.17-7.48 (m,	7H) ,
6.38	(br.	s,	1H), 6.	25 (br.s, 1H) ,
5.98	(m,	1H)	, 5.81	(br.s, 1H),
4.41	(m,	1H)	, 4.19	(m, 1H), 3.87	(m, 1H)
3 . 44	(m,	1H)	, 3.27	(m, 1H),
2.52-	2.91 (m	, 4H),	1.43 (s, 9H).

!

MS (FD): m/e 637 (M⁺) , 636 (100).

Elemanalízis a C₂₄H₄₄N₄0gS képlet alapján:

számított: C: 64.13, H: 6.96, N: 8.80 %;

mért: C: 64.09, H: 6.90, N: 8.81 %.

B) [2 ' R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(tere-Bútil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-

-2-il-tio-metil-4¹-aza-5',8'-dioxo-6',8'-dimaino]-oktil-benzamid

A kívánt vegyületet az 1E) példában leírtak szerint állítjuk elő, 0,64 g (1,00 mmól) a 2A) példában előállított köztes terméket használva 10 ml 15 % trifluor-ecetsavat tartalmazó metilén-kloridban. A terméket fehér habos anyag alakjában kapjuk meg, amit flash-kromatográfiával tisztítunk, grádiens elúcióhoz metilén-kloridot használva, melyben a metanol koncentrációját 5 %-ról 10 %-ra emeljük. A kívánt terméket fehér szilárd anyag alakjában kapjuk meg.

¹H NMR (CDCI3): 5 7.71-7.93 (m, 4H) , 7.17-7.47 (m, 7H) ,

6.18-6.39 (m, 2H), 5.71 (m, 1H),

4.23 (m, 1H) , 3.89 (m, 1H) , 3.59 (τη, 1H) ,

3.33-3.45 (m, 3H) , 2.76-2.97 (m, 2H),

2.60 (m, 1H), 1.80-2.26 (m, 4H),

1.45 (s, 9H).

MS (FD): m/e 537 (M⁺), 536 (100).

C) [2'R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(terc-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-

-2-il-tio-metil-4'-aza-5' , 8'-dioxo-6'-(N-(benzil-oxi-karbonil) -amino-8'-amino]-oktil-benzamid

0,032 g (0,19 mmól) benzil-klór-formiát 1 ml metilénkloridban készült oldatát cseppenként hozzáadjuk 0,10 g (0,19 mmól) a 2B) példában leírtak szerint előállított köztestermék és 0,026 ml (0,19 mmól) trietil-amin 5 ml metilén-klorid 0°C hőmérsékletű oldatához. A reakcióelegyet 1 órán át reagáltatjuk 0°C hőmérsékleten, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át. A reakcióelegyet vízzel meghígítjuk, a fázisokat elválasztjuk, és a szerves fázist nátrium-hidrogén-karbonát telített oldatával, vízzel, 5 %-os citromsav oldattal és végül sóoldattal mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A fehér habos bepárlási maradékot flash-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként etil-acetátot használva. 34 mg (29 %) kívánt terméket kapunk.

^ςΗ NMR (CDCI3): δ 7.71-7.82 (m, 4Η) , 7.17-7.48 (m, 12Η) ,

6.22	(m, 3H),	5.74	(m,	1H) ,	5.08	(s,	2H) ,
4.47	(m, 1H),	4.21	(m,	1H) ,	3.87	(m,	1H) ,
3.23-	-3.47 (m,	4H) ,	2.80	(m,	3H) ,
2.62	(m, 1H),	1.46	(s,	9H) .

MS (FD) : m/e 671 (M⁺) , 670 (100).

Elemanalízis a C3-7H42N4O6S képlet alapján:

számított:	C: 66.25, H: 6.31, N: 8.35 %;
mért:	C: 66.06, H: 6.37, N: 8.08 %.

7. példa [IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-[2'-Amino-2'-oxo-etil)-2-oxo~3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tere-bútil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid

A kívánt vegyületet az 1. példában leírtak szerint állítjuk elő, a 2E) példában leírtak szerint előállított köztes termékből és (S)-2-N-(kinolin-2-il-karbonil)-amino-3-karbamoil-propánsavból kiindulva. 116 mg (58 %) kívánt vegyületet kapunk.

¹H NMR (CDCI3):

MS (FD): m/e

δ 9.:	33 (	d , J:	= 8 Hz,	1H) ,
8.29	(q,	J=9	Hz, 2H),
8.18	(d,	J=9	Hz, 11	H) ,
7.88	(d,	J=8	Hz, 1H), 7	.79 ( m, 1H)
7.64	(m,	1H)	, 7.08	-7.42	(m, 9H),
6.03	(m,	2H)	, 5.89	(d,	J=6 Hz, 1H),
5.47	(m,	1H)	, 4.93	(m,	1H), 4.23 (m
3.90	(m,	1H)	, 3.32	(m,	2H) ,
2.79	-3.0	3 (m	, 4H) ,	1.47	(s, 9H).
642 (M	+) t	642	(100) .

/ , 1H) ,

Elemanalízis a	C35H39N5O5S képlet alapján:
számított:	C: 65.50, H: 6.12, N: 10.91 %;
mért:	C: 65.25, H: 6.13, N: 10.80 %.

8. példa [2'R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(tere-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-fenil-tio-metil-4'-aza-5' , 8'-dioxo-6'-(N-(terc-butoxi-karbonil)-amino- 8'-amino]-oktil-benzamid

A kívánt vegyületet a 2A) példában ismertetett eljárás szerint állítjuk elő, 0,545 g (1,47 mmól) az 1E) példában leírtak szerint előállított köztes termékből, 0,202 g (1,50 mmól) HOBT.H₂O-ból, 0,309 g (1,50 mmól) DCC-ból és 0,358 g (1,54 mmól) 2-N-(terc-butoxi-karbonil)-3-karbamoil-propánsavból kiindulva. A kívánt terméket 64 %-os kitermeléssel kapjuk meg.

iH NMR (CDCI3):

5 7.16-7.43 (m, 9H) , 5.84-5.99 (m, 4H) , 5.41 (m, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.23-3.38 (m, 2H) , 2.78-2.97 (m, 3H), 2.59 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).

MS (FD) : m/e 587 (M⁺) , 587 (100) .

Elemanalízis a	c30H42N4°6s képlet alapján:
számított:	C: 61.41, H: 7.22, N: 9,55 %;
mért:	C: 61.49, H: 7.18, N: 9.26 %.

B) [2'R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(tere-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-fenil-tio-metil-4'-aza-5',8'-dioxo-6',8'-diamino]-oktil-benzamid

A kívánt vegyületet a 2B) példában ismertetett eljárás szerint állítjuk elő 0,381 g (0,65 mmól) a 4A) példában leírtak szerint előállított vegyületből és 2,25 ml trifluor-ecetsavból kiindulva. A kívánt terméket 99 %-os hozammal kapjuk meg.

MS (FD): m/e 487 (M⁺), 487 (100).

C) [2'R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(terc-Butil)-2-[2'-hidroxi-3'-fenil-tio-metil-4'-aza-5',8'-dioxo-6'-N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-8'-amino]-oktil-benzamid

A kívánt vegyületet a 2C) példában leírtak szerint állítjuk elő a 4B) példában ismertetett eljárás szerint előállított köztes termékből. 82 mg (50 %) kívánt terméket kapunk.

ΧΗ NMR (CDC13):	δ 7.12-7.40 (m, 14H),
MS (FD): m/e	6.18 (d, J=7 Hz, 1H), 5.99 5.91 (d, J=6 Hz, 2H), 5.45 5.12 (m, 2H), 4.44 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.20-3.35 (m, 2.78-2.95 (m, 3H), 2.59 (m, 1.47 (s, 9H). 621 (M+) , 621 (100) .	(s, 1H), (br.s, 1H) , 4.15 (m, 1H) , 2H) , 1H) ,
Elemanalízis a	c33H40N4°6s képlet alapján:
számított:	C: 63.85, H: 6.50, N: 9.03 %;
mért:	C: 63.67, H: 6.34, N: 8.91 %.

9. példa [2R-(2R*,3R*,3¹S*,4a'S*,8a'S*) ] -N-(terc-butil)-2'-[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2¹'-oxo etil) -8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid

0,48 mmól, a 3G) példában leírtak szerint előállított köztes termék, 146 mg (0,51 mmól) (S)-2-N-(kinolin-2-il-karbonil)-amino-3-karbamoil-propánsav, 69 mg (0,51 mmól) 1-hidroxi-benztriazol-hidrát (HOBT.H₂O) és 160 ml 1,45 mmól) N-metil-morfolin (NMM) 10 ml vízmentes tetrahidrofuránban készült -10°C hőmérsékletű oldatához hozzáadunk 102 mg (0,49 mmól) 1,3-diciklohexil-karbodiimet (DCC). A reakcióelegyet szobahőmérsékleten reagáltat juk 72 órán át, majd jeges acetonos fürdőben lehűtjük és szűrjük. A szürletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A bepárlási maradékot etil-acetátban oldjuk, az oldatot vízzel, 10 %-os citromsav-oldattal, nátrium-hidrogén-karbonát telített oldatával, és végül sóoldattal mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot radiál-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként 5 % metanolt tartalmazó metilén-kloridot használva. 11 mg (31 %) kívánt terméket kapunk színtelen hab alakjában.

iH NMR (CDC1₃) : δ 1.08-2.48 (komplex, 27H) ,

2.64-2.81	(m	, 1H) ,	2.82-2.95 (m, 1H),
2.99-3.07	(m	, 1H) ,	3.31-3.45 (m, 2H),
4.07-4.14	(m	, 1H) ,	4.20-4.26 (m, 1H),
4.94-4.98	(m	, 1H) ,	6.03 (br.s, 1H),
6.37 (br.s	, 1H), 7	.29-7.36 (m, 3H),
7.56-7.81	(m	, 8H) ,	8.09-8.91 (m, 3H),

9.19 (d, J=7 Hz, 1H) .

[a]_D -79.49° (c 0.78, MeOH).

IR (CHCI3) 3328, 3055, 2924, 2861, 1661, 1521, 1500 cm¹.

MS (FD) : m/e 652 (M⁺) , 652 (100).

Elemanalízis a C42H₅₂N₆O5S képlet alapján:

számított: C: 66.99, H: 6.96, N: 11.16%;

mért: C: 66.80, H: 6.98, N: 10.91 %.

10. példa [2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N-(tere-Bútil)-2'-[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid

A kívánt vegyületet az 1. példában ismerteti eljárás szerint állítjuk elő, 0,5 g (1,16 mmól) a 4G) példában leírtak szerint előállított köztes termékből, 0,37 g (1,37 mmól) (S)-2-N-(kinolin-2-il-karbonil)-amino-3-karbamoil-propánsavból, 0,17 g (1,27 mmól) HOBT. ^O-ból, 0,25 ml (1,24 mmól) N-metil-morfolinból és 0,26 g (1,24 mmól) DCC-ből kiindulva, mely vegyületeket 20 ml tetrahidrofuránban reagáltatunk. A nyert terméket flash-kromatográfiával tisztítjuk, grádiens elúcióhoz kloroformot használva, melyben a metanol koncentrációját 0 %-ról 5 %-ra emeljük. Ezt követően HPLC-vel tisztítunk, 0,51 g (63 %) kívánt terméket kapva fehér szilárd anyag alakjában.

iH NMR (CDC1₃): δ 9.22 (d, J=7.5 Hz, 1H) ,

8.30-7.05 (m, 12H), 6.13 (br.s, 1H),

5.85 (s, 1H), 5.65 (br.s, 1H), 5.00-4.96 (m, 1H), 4.30-3.80 (m, 3H), 2.39-3.28 (m, 2H), 3.02-2.85 (m, 3H) , 2.65-2.60 (m, 1H),2.57 (d, J=7 Hz, 1H), 2.35-2.20 (m, 2H), 2.00-1.15 (m, 17H),

1.38 (s, 9H).

Elemanalízis a C38^H50^N6°5^s képlet alapján: számított: C: 64.93, H: 7.17, N: 11.96 %;

mért: C: 64.81, H: 7.29, N: 11.71 %.

11. példa

A keményzselatin kapszula tölteléke:

	mg/kapszula
hatóanyag	250
keményítő, szárított	200
magnézium-sztearát	10
összesen:	460 mg
12. példa
Tabletta összetétele:
	mg/tabletta
hatóanyag	250
cellulóz, mikrokristályos	400
szilicium-dioxid, kolloidális	10
sztearinsav	5
összesen:	665 mg

Az alkotórészeket összekeverjük és 665 mg-os tablettákat sajtolunk.

13. példa

Aeroszol oldatának összetétele:

hatóanyag metanol Propellant 22 (klór-difluor-metán)	0,25 mg 25,75 mg 70,00 mg
összesen:	100,00 mg

A hatóanyagot etanollal összekeverjük és hozzáadjuk a

Propellant 22 hajtóanyag egy részéhez. Lehűtjük -30°C hőmérsékletre, és egy töltőkészülékbe visszük. Kellő mennyiségű oldatot adagolunk a rozsdamentes acéltartályokba, majd a maradék hajtóanyaggal hígítunk, végül felhelyezzük a szelepet.

14. példa mg hatóanyagot tartalmazó tabletták összetétele:

hatóanyag	60 mg
keményítő	4 5 mg
cellulóz, mikrokristályos	3 5 mg
polivinil-pirrolidon	4 mg
(10 %-os vizes oldat)
nátrium-karboxi-metil-keményítő	4,5 mg
magnézium-sztearát	0,5 mg
talkum	1 mg
összesen:	150 mg

A hatóanyagot, a keményítőt és a cellulózt egy 45 mesh US

szitaszámú szitán átengedjük, és alaposan összekeverjük. A nyert port összekeverjük a polivinil-pirrolidon vizes oldatával és átengedjük egy 14 mesh US szitaszámú szitán. A kapott granulátumot 50°C hőmérsékleten szárítjuk és egy 18 mesh US szitaszámú szitán átszitáljuk. Az előzőleg egy 60 mesh US szitaszámú szitán átszitált nátrium-karboxi-metil-keményítőt, magnézium-sztearátot és talkumot hozzáadjuk a granulátumhoz, összekeverjük és a keveréket.:15 0 mg tömegű tablettákká sajtoljuk.

15. példa mg hatóanyagot tartalmazó kapszula töltelékének összetétele:

hatóanyag	80	mg
keményítő	59	mg
cellulóz, mikrokristályos	59	mg
magnézium-sztearát	2	mg
összesen:	200	mg

A hatóanyagot, a cellulózt, a keményítőt és a magnézium-sztearátot összeőröljük, átengedjük egy 45 mesh US szitaszámú szitán és keményzselatin kapszulába töltjük, kapszulánként 200 mg-ot.

16. példa

225 mg hatóanyagot tartalmazó kúp összetétele: hatóanyag 225 mg telített zsírsav-gliceridek 2000 mg összesen:

2225 mg

A hatóanyagot átengedjük egy 60 mesh US szitaszámú szitán és a port a szükséges legalacsonyabb hőfokon megolvasztott gliceridben szuszpendáljuk. A keveréket 2 g névleges kapacitású öntőformába töltjük és hagyjuk kihűlni.

17. példa ml adagban 50 mg hatóanyagot tartalmazó szuszpenzió összetétele::

hatóanyag50 mg nátrium-karboxi-metil-cellulóz50 mg szirup benzoesavoldat ízesítőanyag színezőanyag tisztított víz

1,25 ml

0,10 ml tetszés szerint tetszés szerint 5 ml térfogatra kiegészítve

A hatóanyagot 45 mesh US szitaszámú szitán átengedjük és összekeverjük a nátrium-karboxi-metil-cellulózzal, valamint a sziruppal egy homogén masszát képezve. A víz egy részével felhígítjuk a benzoesav oldatot, az ízesítőanyagot és a szirupot és kevertetés mellett hozzáadjuk a masszához. Megfelelő mennyiségű vízzel beállítjuk a kívánt végtérfogatot.

- 86 • · » · · · • · »«· ··· · ···· · ·· ·

18. példa

Az intravénásán adható oldat összetétele:

hatóanyag 100 mg izotóniás sóoldat 1000 ml

A fenti oldatot általában 1 ml/perc sebességei juttatjuk a szervezetbe.

Claims (15)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói, ahol az (I) általános képletben jelentése arilcsoport, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport;

   jelentése kémiai kötés, -(CH₂)_V-, “(CH₂)_m-O-(CH₂)_n- vagy

   -(CH₂)_mNR°-(CH₂)_n~ általános képletű vegyület;

   és jelentése egymástól függetlenül 0, 1 vagy 2;

   j elentése

   0, 1, 2 vagy 3;

   R° j elentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

   j elentése

   0, 1 vagy 2;

   R¹ j elentése arilcsoport vagy 5-7 szénatomszámú cikloalkilcsoport;

   R² jelentése aminosav-oldallánc, -CH₂-R^2a,

   -CH₂-C(0)-NR°-A-R^2a vagy -CH₂-C(0)-0R^2a általános képletű csoport, melyen belül

   R^2a

   Y¹ jelentése arilcsoport, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport;

   jelentése (IV), (V) vagy (VI) általános képletű csoport;

   jelentése arilcsoport vagy telítetlen heterociklusós csoport;

   jelentése heterociklusos csoport;

   R^3a jelentése -C(0)-NR⁴R⁴ általános képletű , (VII) vagy

   - 88 (VIII) általános képletű csoport;

   jelentése (IX), (X) vagy (XI) általános képletű csoport;

   p jelentése 4 vagy 5;

   1 jelentése 3, 4 vagy 5;

   R⁴ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy hidroxilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport; és

   R⁵ és r6 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, hidroxil-, 1-6 szénatomszámú alkil-, 1-6 szénatomszámú alkoxi-, amino-, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-, hidroxilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkil-, karboxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, karbamoil-, N-alkil-karbamoil-csoport, melyen belül az alkilcsoport 1-4 szénatomszámú, aril-, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti vegyűlet vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói, ahol az (I) általános képletben

   R jelentése aril- vagy telítetlen heterociklusos csoport;

   A jelentése kémiai kötés;

   jelentése arilcsoport;

   q jelentése 0;

   R² jelentése -CH₂-C(=O)NH₂, -CH(CH₃)₂ képletű vagy -CH₂-C(=0)-NR°-A-R^2a általános képletű csoport;

   X jelentése (IV) vagy (VI) általános képletű csoport; és • ·

   - 89 R^3a jelentése -C(=O)-NR^R^ általános képletű csoport, aholR^ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomszámú alkilcsoport.
3. 3. A 2. igénypont szerinti vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói, ahol az (I) általános képletben R jelentése naftil-, kinolinil- vagy kinoxalinil-csoport, melyek mindegyike lehet szubsztituálatlan vagy egy vagy két szubsztituenssel helyettesített, melyen belül a szubsztituens lehet hidrogénatom, halogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport vagy halogénatommal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

   Y jelentése fenilcsoport;

   Y¹ jelentése dekahidro-(4aS,8aS)-izokinolinil-csoport;

   R¹ jelentése fenil- vagy naft-2-il-csoport;

   R² jelentése -CH₂-C(=0)-NH₂ képletű csoport; és

   R^3a jelentése -C(=0)-NH-(terc-butil) képletű csoport.
4. 4. A 3. igénypont szerinti vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói, ahol az (I) általános képletben R¹ jelentése fenilcsoport; és

   R jelentése kinolinilcsoport, mely lehet szubsztituálatlan vagy egy vagy két szubsztituenssel helyettesített, ahol a szubsztituens lehet hidrogénatom, halogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport vagy halogénatommal· helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport.
5. 5. Az [IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-Amino-2'-oxo-etil)-2-oxo• · ·· • · * ► » · • 4 »*· 4 4 4 4

   4 *·«·*··· • · · * * · ·

   -90-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-Ν-(tercbutil) -amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-ilkarboxamid;

   [2'R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-i -tio-metil-4'-aza-5' , 8'-dioxo-6'-(N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-8'-amino]-oktil-benzamid;

   [IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1''’-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

   [2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N~(terc-butil)-2’-[2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid; vagy [2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N-terc-butil)-2'-[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid vegyületek vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sóik.
6. 6. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként az 1-5. igénypont szerinti bármelyik (I) általános képletű vegyületet vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sóját tartalmazza gyógyászati szempontból alkalmazható egy vagy több vivő-, hígító- vagy kötőanyag kíséretében.
7. 7. (II) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói, ahol az (II) általános képletben R¹ jelentése aril- vagy 5-7 szénatomszámú cikloalkilcsoport;

   « · · 4

   - 91 X jelentése (IV), (V) vagy (VI) általános képletű csoport;

   Y jelentése aril- vagy telítetlen heterociklusos csoport;

   Y¹ jelentése heterociklusos csoport;

   R^3a jelentése -C(=0)-NR⁴R⁴, (VII) vagy (VIII) általános képletű csoport;

   R^3b jelentése (IX), (X) vagy (XI) általános képletű csoport;

   p jelentése 4 vagy 5;

   1 jelentése 3, 4 vagy 5;

   R⁴ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy hidroxilcsoporttal helyettesített, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

   R⁵ és r6 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, hidroxilcsoport, 1-6 szénatomszámú alkil-, 1-6 szénatomszámú alkoxi-, amino-, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-, hidroxilcsoporttal helyettesített, 1-4 szénatomszámú alkil-, karboxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, karbamoil·-, N-alkil-karbamoil-csoport, melyen belül az alkilcsoport 1-4 szénatomszámú, aril-, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport.
8. 8. Eljárás az (I) általános képletű - ahol

   R jelentése arilcsoport, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport;

   A jelentése kémiai kötés, -(CH₂)_V~, -(CH₂)_m-0-(CH₂)_n~ vagy

   -(CH₂)_mNR°-(CH₂)_n~ általános képletű vegyület;

   m és n jelentése egymástól függetlenül 0, 1 vagy 2;

   4· v

   R°

   Q ν

   R° q

   jelentése 0, 1, 2 vagy 3;

   jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

   jelentése 0, 1 vagy 2;

   jelentése arilcsoport vagy 5-7 szénatomszámú cikloalkilcsöpört;

   jelentése aminosav-oldallánc, -CH₂-R^2a,

   -CH₂-C(0)-NR°-A-R^2a vagy -CH₂~C(0)-0R^2a általános képletű csoport, melyen belül

   R^2a jelentése arilcsoport, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport;

   jelentése (IV), (V) vagy (VI) általános képletű csoport;

   jelentése arilcsoport vagy telítetlen heterociklu sós csoport;

   jelentése heterociklusos csoport;

   R^3a jelentése -C(0)-NR⁴R⁴ általános képletű , (VII) vagy (VIII) általános képletű csoport;

   R^3b jelentése (IX), (X) vagy (XI) általános képletű csoport;

   jelentése 4 vagy 5;

   jelentése 3, 4 vagy 5;

   jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy hidroxilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport; és

   R⁵ és R⁶ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom,

   4 * *··· »

   ···:

   * hidroxil-, 1-6 szénatomszámú alk.il-, 1-6 szénatomszámú alkoxi-, amino-, 1-4 szénatomszámú alkil-amino-, hidroxilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkil-, karboxil-, 1-4 szénatomszámú alkoxi-karbonil-, karbamoil-, N-alkil-karbamoil-csoport, melyen belül az alkilcsoport 1-4 szénatomszámú, aril-, heterociklusos vagy telítetlen heterociklusos csoport vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói előál lítására, azzal jellemezve, hogy

   a) a (II) általános képletű vegyületet a (III) általános képletű vegyülettel vagy aktivált származékával ragáltatjuk

   - ahol a képletekben R, R¹, R² és X jelentése azonos a fentebb tett meghatározásokkal -;

   b) a keletkezett vegyületet adott esetben oxidáljuk;

   c) a keletkezett vegyületet adott esetben gyógyászati szempontból alkalmazható sóvá alakítjuk.
9. 9. A 8. igénypont szerinti eljárás (I) általános képletű ahol

   R jelentése aril- vagy telítetlen heterociklusos csoport;

   jelentése kémiai kötés;

   RÍ jelentése arilcsoport;

   q jelentése 0;

   R² jelentése -CH₂-C(=0)NH₂, -CH(CH₃)₂ képletű vagy -CH₂~C(=0)-NR°-A-R^2a általános képletű csoport;

   X jelentése (IV) vagy (VI) általános képletű csoport; és • ·· ♦·V··· ί· « · ··

   4 ··· *··* •«·« · ··»

   R^3a jelentése -C(=O)-NR⁴R⁴ általános képletű csoport, aholR⁴ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően helyettesített reagenseket reagáltatjuk egymással.
10. 10. A 9. igénypont szerinti eljárás (I) általános képletű ahol jelentése naftil-, kinolinil- vagy kinoxalinil-csoport, melyek mindegyike lehet szubsztituálatlan vagy egy vagy két szubsztituenssel helyettesített, melyen belül a szubsztituens lehet hidrogénatom, halogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport vagy halogénatommal helyettesített 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

    j elentése fenilcsoport;

    Y¹ j elentése dekahidro-(4aS,8aS)-izokinolinil-csoport;

    R¹ j elentése fenil- vagy naft-2-il-csoport;

    R² jelentése

    -CH₂-C(=0)-NH₂ képletű csoport; és

    R^3a j elentése

    -C(=0)-NH-(terc-butil) képletű csoport vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően helyettesí tett reagenseket reagáltatjuk egymással.
11. 11. A 10. igénypont szerinti eljárás (I) általános képletű ahol

    R¹ jelentése fenilcsoport; és

    - 95 R jelentése kinolinilcsoport, mely lehet szubsztituálatlan vagy egy vagy két szubsztituenssel helyettesített, ahol a szubsztituens lehet hidrogénatom, halogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport vagy halogénatommal helyettesített

    1-4 szénatomszámú alkilcsoport vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően helyettesített reagenseket reagáltatjuk egymással.
12. 12. A 11. igénypont szerinti eljárás a [IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-Amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-naft-2-il-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(tercbutil) -amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-ilkarboxamid;

    [2'R-(2'R*,3'R*,6'S*)]-N-(terc-butil)-2-[2'-hidroxi-3'-naft-2-i

    -tio-metil-4'-aza-5',8'-dioxo-6'-(N-(benzil-oxi-karbonil)-amino-8'-amino]-oktil-benzamid;

    [IS-(ÍR*,4S*,5S*)]-N-[1-(2'-amino-2'-oxo-etil)-2-oxo-3-aza-4-fenil-tio-metil-5-hidroxi-6-(2''-(1'''-N-(terc-butil)-amino-1'''-oxo-metil)-fenil)]-hexil-kinolin-2-il-karboxamid;

    [2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N-(terc-butil)-2'- [2-hidroxi-3-naft-2-il-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxo-etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid; vagy [2R-(2R*,3R*,3'S*,4a'S*,8a'S*)]-N-terc-butil)-2'-[2-hidroxi-3-fenil-tio-metil-4,7-diaza-5,8-dioxo-6-(2''-amino-2''-oxof ····

    - 96 ·· ·· ···· « · · · · ··· ··· « • · · *

    -etil)-8-kinolin-2-il]-oktil-dekahidro-izokinolin-3'-karboxamid vegyületek vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően helyettesített reagenseket reagáltatjuk egymással.
13. 13. Eljárás a 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-5. igénypontok bármelyike szerint előállított (I) általános képletű vegyületet vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sóját, mint hatóanyagot és a gyógyászati szempontból alkalmazható egy vagy több vivő-, kötővagy hígítóanyagot gyógyszerkészítménnyé feldolgozzuk.
14. 14. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sói, azzal jelelmezve, hogy a 8-12. igénypont szerinti eljárással állítjuk elő.
15. 15. Az 1-5. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból alkalmazható sójának felhasználása a pestis kezelésére alkalmas gyógyszer ipari előállítására.

    A meghatalmazott