HU231462B1 - Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására - Google Patents

Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására Download PDF

Info

Publication number
HU231462B1
HU231462B1 HUP2000240A HUP2000240A HU231462B1 HU 231462 B1 HU231462 B1 HU 231462B1 HU P2000240 A HUP2000240 A HU P2000240A HU P2000240 A HUP2000240 A HU P2000240A HU 231462 B1 HU231462 B1 HU 231462B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
syndecan
disease
monocytes
alzheimer
blood
Prior art date
Application number
HUP2000240A
Other languages
English (en)
Inventor
Anett 30% Hudák
Letoha Tamás 70% Dr.
Original Assignee
Pharmacoidea Kf
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharmacoidea Kf filed Critical Pharmacoidea Kf
Priority to HUP2000240A priority Critical patent/HU231462B1/hu
Priority to US18/017,375 priority patent/US20230296629A1/en
Priority to PCT/HU2021/000011 priority patent/WO2022018468A1/en
Priority to EP21759376.3A priority patent/EP4185874A1/en
Publication of HUP2000240A1 publication Critical patent/HUP2000240A1/hu
Publication of HU231462B1 publication Critical patent/HU231462B1/hu

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00Sampling; Preparing specimens for investigation
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483Physical analysis of biological material
    • G01N33/487Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49Blood
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701Details
    • G01N2333/4722Proteoglycans, e.g. aggreccan
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28Neurological disorders
    • G01N2800/2814Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2821Alzheimer

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására
Bejelentő: Pharmacoidea Kft
H-6726 Szeged, Derkovits fasor 7-11
Feltaláló:
Hudák Anett 30% Szarvas
Dr. Letoha Tamás 70% Szeged
Bejelentés napja: 2020. július
Képviselő:
Mármarosi Tamásné egyéni szabadalmi ügyvivő sí
Pl ©
R
SZTNH-100378262
Találmányunk tárgya az Alzhemier-kórt prognosztizáló diagnosztikai eljárás a vérben keringő monociták által kifejezett syndecan-3 szintjének mérésén keresztül.
A monocyták a veleszületett immunrendszer fontos sejttípusai, amik az invazív kórokozókkal szembeni védekezésben, az elhalt sejtek és a sejttörmelék fagocitózissal történő eltakarításában kiemelt szerepet játszanak [Fiala et al. 2005 (J. Alzheimer’s Dis. 7(3):255-262)]. A monociták számos betegség patogenezisében is részt vesznek: központi idegrendszer kóros leépülésével járó Alzheimer-kór esetén a keringő ill. az infiltráló monocitáknak fontos szerep jut a keringésben lévő amyloid-beta (Αβ) mikroaggregátumok és az agyi Αβ plakkok eltüntetésében. A krónikus gyulladásos betegségekben vagy autoimmun betegségekben a monociták gyakorisága megnövekszik a vérben.
A gyulladásos válaszban szerepet játszó fehérvérsejtek, így a monociták is számos felszíni molekulát expresszálnak felszínükön. A sejtfelszíni membránfehérjék egyik legnépesebb családja, a heparán szulfát proteoglikánok (HSPG-k) rendkívül változatos térszerkezetű heparán szulfát (HS) oldalláncaiknak köszönhetően számos citokin, növekedési faktor receptorául szolgálva fontos szerepet töltenek be a jelátviteli folyamatokban [Williams and Fuki 1997 (Curr. Opin. Lipidol 8(5), 253-262), Bishop, Schuksz et al. 2007 (Nature 446(7139) 1030-1037), Couchman 2010 (Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 26, 89-114), lozzo and Karamanos 2010 (FEBS J. 277(19), 3863)]. Az emlős sejteken két fajta HSPG található: az elsősorban a központi idegrendszerben (KIR-ben) kifejeződő, a membránhoz a glikozil-foszfatidil-inozitol által lehorgonyzott glypicanok, és a mindenütt jelen lévő transzmembrán syndecanok [Christianson and Belting 2014(Matrix Bioi. 35, 51-55)]. A syndecanok (SDC) négy izoformája ismert: a hám- és plazmasejteken kifejeződő syndecan-1, az endotélen és fibroblasztokon megtalálható syndecan2, a központi idegrendszerben expresszálódó syndecan-3, és az általánosan kifejeződő syndecan-4 [Tkachenko, Rhodes et al. 2005 (Circ. Res. 96(5), 488-500), Afratis, Nikitovic et al. 2017 (FEBS. J. 284(1), 27-41)].
A syndecan-3 (N-syndecan) egy 442 aminosav hosszú transzmembrán fehérje, amely leginkább az idegsejteken fejeződik ki [Tkachenko, Rhodes et al. 2005 (Ther. Deliv. 4(12), 1479-1481)]. A syndecan-3 N-terminálisan négy konzervált glükózaminoglikán kötőhelyet, ill. a membránhoz közel egyedi treonin-gazdag és mucinszerű régiókat tartalmaz. A syndecan-3 heparán szulfát régiója az agyban számos növekedési faktor, így az AgRP (Agouti related protein), HB-GAM (heparin binding growth associated molecule), a GDNF (glial cell line derived growth factor), NRTN (neurturin), artemin és a NOTCH, kötőhelyéül szolgál [Bespalov, Sidorova et al. 2011 (J Cell Biol.
Ilii ©
192(1):153-169), Creemers, Pritchard et al. 2006 (Endocrinology. 147(4): 1621-1631), Nolo, Kaksonen et al. 1995 (Neurosci Lett. 191(1-2): 39-42), Pisconti, Cornelison et al. 2010 (J Cell Biol. 190(3): 427-441), Reizes, Benoit et al. 2003 (Ann N Y Acad Sci. 994: 66-73)]. A syndecan3 a memória és a testsúly/metabolizmus szabályozásában is szerepet játszik [Kaksonen, Pavlov et al. 2002 (Mol. Cell. Neurosci. 21 (1), 158-172), Strader, Reizes et al. 2004 (J. Clin. Invest. 114(9(, 1354-1360), Reizes, Benoit et al. 2008 (Int. J. Bioche. Cell. Bioi. 40(1), 28-45)]. A syndecan-3 szintje, a syndecan-4-gyel egyetemben megemelkedik Alzheimeres betegek agyában [Liu, Zhao et al. 2016 (Sci. Trans. Med. 8(332), 332-344)].
A központi idegrendszeri szerepe mellett a syndecan-3 szerepe a periférián még kevéssé ismert. Azt azonban tudjuk, hogy a periférián a syndecan-3 a vírusfertőzésekben fontos szerepet tölt be: a syndecan-3 a HIV-1 vírus receptoraként segíti annak T-sejtekhez történő transzmisszióját [de Witte, Bobardt et al. 2007 (Nat. Acad. Sci. USA 10449,19464-19469)]. A szakirodalomban ismert, hogy az SDC3 kifejeződik a keringő monocitákon [Wegrowski, Milard et al. 2006 (Clin Exp Immunol. Jun; 144(3): 485-493)]. A monocitákon jelen lévő syndecan-3 pedig jó indikátora a gyulladásos folyamatoknak [Jackson 1997 (Biochem Soc Trans. 25(1):220-49].
Célul tűztük ki a monocytákon lévő syndecan-3, mint prognosztikai biomarker vizsgálatát az Alzheimer-kór esetében.
Kísérleteink során keringő monociták syndecan-3 szintjének változását vizsgáltuk az Alzheimerkór APPSWE-Tau egérmodelljében. A vizsgálatok során minimum 6 hónapos APPSWE-Tau (Taconic Biosciences) ill. egészséges C57BL/6 egerekből származó vérmintákban vizsgáltuk a keringő monociták syndecan-3 szintjét. Az egészséges kontroll ill. az APPSWE-Tau csoport egyedszáma 10-10 volt, mindkét csoportba egyenlő számú hím (5-5 egyed) és nőstény (5-5 egyed) került. A vérvétel előtt az egereket Avertinnel elaltattuk, szívpunkcióval vért vettünk tőlük, majd jéghideg PBS-sel történő transzkardinális perfundálás után (2 ml/perc, 8 percig) az agyat izoláltuk, frontálisan kettévágtuk és szárazjégben lefagyasztottuk a további mikroszkópos vizsgálatokhoz. A vérből származó monocitákat EasySep™ Mouse Monocyte Isolation Kit-tel szelektáltuk az agyi mintákat pedig az Alzheimer-kórra jellemző plakkokra festettük, ezzel ellenőrizve az állatokban lezajló agyi elváltozás súlyosságát. A vérből izolált monociták syndecan3 szintjének vizsgálata azt mutatta, hogy a beteg egerekből izolált monociták syndecan-3 szintje szignifikánsan (p<0.01) magasabb volt az egészséges kontrolokénál (1. ábra). (A monociták syndecan-3 szintét AMNIS FlowSight flow citométerrel mértük, a monociták APC-jelölt humán syndecan-3 ellenanyaggal a gyártó [R&D Systems, katalógus szám: FAB3539A] előírásai alapján. Minden méréshez 10 000 monocita syndecan-3 expresszióját vizsgáltuk, 3 egymástól független
M*i ft ft © © ft ft
Jfl @3 Pl
CB f'ft M kísérlet során. A perfundálás után izolált és frontálisan kettévágott agyat 18 óráig 4% paraformaldehidben fixáltuk, majd 30 pm vastagságra szelt szagittális metszetekben az Αβ plakkokat Αβ specifikus ellenanyaggal (MOAB-2, NOVUS Biologicals, kát. szám: NBP2-) ill. Alexa Fluor 488-jelölt másodlagos ellenanyaggal (ThermoFischer Scientific, kát. szám A-21141) jelöltük. Az így kapott agyi metszetekben a Αβ plakkok számát és nagyságát BioTek Cytation 3 automatizált mikroszkóppal detektáltuk.)
A vérből izolálható monociták syndecan-3 szintje pedig korrelált az APPSWE-Tau egerek agyában lezajló plakkosodással: azaz a központi idegrendszerben minél kiterjedtebb volt a neurodegeneráció kórlefolyását jellemző plakkosodás, a periférián izolálható monociták annál több syndecan-3-at expresszáltak (a Pearson korrelációs együttható [r] értéke 0.93 - lásd a 2. ábrát).
Fentiek alapján találmányunk alapja az a meglepő felismerés, hogy az Alzheimer-kórban a vérben keringő monociták syndecan-3 szintje szignifikánsan megnő, mégpedig úgy, hogy a vérből izolált monociták syndecan-3 szintje korrelál az Alzheimer-kórra jellemző központi idegrendszeri plakkosodással.
Találmányunk tárgya eljárás az Alzehimer-kór és vele rokon betegségek diagnosztizálására, oly módon, hogy a szisztémás keringésből izolált monociták syndecan-3 kifjeződését a syndecan-3 442 aminosav hosszú vázfehérjéjének bármely szakaszához specifikusan kötődő specifikus antitesttel vagy egyéb specifikus liganddal megmérjük és az egészséges kontrolihoz viszonyítjuk.
Az eljárás specificitását az antitest vagy ligand syndecan-3 442 aminosav hosszú vázfehérjéjének bármely szakaszához történő specifikus kötődése biztosítja
A syndecan-3 specifikus antitest vagy ligand önmagában vagy felülethez kapcsolva a monocitákon kifejeződő syndecan-3-hoz kötődik, így neurodegenerációs kórképekben diagnosztikai eljárásként alkalmazható.
A syndecan-3 specifikus antitestet, vagy ligandot önmagukban, vagy fluoreszcens vagy egyéb optikai jelet adó ágenssel konjugálva kontaktálhatjuk a vér monocitáival.

Claims (2)

Szabadalmi igénypontok
1. Eljárás a az Alzheimer-kór diagnosztizálására, azzal jellemezve, hogy a szisztémás keringésből izolált monociták syndecan-3 kifjeződését a syndecan-3 442 aminosav hosszú vázfehérjéjének bármely szakaszához specifikusan kötődő specifikus antitesttel vagy egyéb specifikus liganddal megmérjük és az egészséges kontrolihoz viszonyítjuk..
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a syndecan-3 442 aminosav hosszú vázfehérjéjének bármely szakaszához specifikusan kötődő antitest vagy ligand szolubilis formában vagy felülethez kötve van jelen.
í WBgg· © sZTNHft
HUP2000240A 2020-07-22 2020-07-22 Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására HU231462B1 (hu)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HUP2000240A HU231462B1 (hu) 2020-07-22 2020-07-22 Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására
US18/017,375 US20230296629A1 (en) 2020-07-22 2021-07-21 A diagnostic blood test method for the detection of alzheimer's disease
PCT/HU2021/000011 WO2022018468A1 (en) 2020-07-22 2021-07-21 A diagnostic blood test method for the detection of alzheimer's disease
EP21759376.3A EP4185874A1 (en) 2020-07-22 2021-07-21 A diagnostic blood test method for the detection of alzheimer's disease

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HUP2000240A HU231462B1 (hu) 2020-07-22 2020-07-22 Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP2000240A1 HUP2000240A1 (hu) 2022-01-28
HU231462B1 true HU231462B1 (hu) 2024-01-28

Family

ID=89658305

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUP2000240A HU231462B1 (hu) 2020-07-22 2020-07-22 Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20230296629A1 (hu)
EP (1) EP4185874A1 (hu)
HU (1) HU231462B1 (hu)
WO (1) WO2022018468A1 (hu)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU231426B1 (hu) * 2018-12-05 2023-08-28 Pharmacoidea Kft. Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére

Also Published As

Publication number Publication date
US20230296629A1 (en) 2023-09-21
HUP2000240A1 (hu) 2022-01-28
EP4185874A1 (en) 2023-05-31
WO2022018468A1 (en) 2022-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2015314783B2 (en) Detection of misfolded proteins
Pitschke et al. Detection of single amyloid β-protein aggregates in the cerebrospinal fluid of Alzheimer's patients by fluorescence correlation spectroscopy
ES2317845T3 (es) Uso de un polipeptido para detectar un estado patologico asociado con la esclerosis en placas.
ES2475540T3 (es) Procedimiento de diagnóstico de poliquistosis renal
AU2010315133B2 (en) Positively charged species as binding reagents in the separation of protein aggregates from monomers
ES2459165T3 (es) Método de determinación de megalina humana
ES2377151T3 (es) Inmunoensayos de alta sensibilidad y kits para la determinación de péptidos y proteínas de interés biológico
ES2561610T3 (es) HMGB1 y anticuerpos anti-HMGB1 para el pronóstico de trastornos neurológicos
Fan et al. Biomarkers for acute cardiorenal syndrome
Zhang et al. The small leucine-rich proteoglycan BGN accumulates in CADASIL and binds to NOTCH3
AU2011315938B2 (en) Biomarker and Method for Detecting a Chronic Inflammatory-Associated Disease
HU231462B1 (hu) Diagnosztikai eljárás az Alzheimer-kór vérből történő kimutatására
WO2013092951A2 (de) Standard zur quantifizierung von pathogenen aggregaten aus körpereigenen proteinen
Torelli et al. Sub-cellular localisation of fukutin related protein in different cell lines and in the muscle of patients with MDC1C and LGMD2I
JP7224691B2 (ja) 加齢黄斑変性の診断用複合マーカーおよびその用途
EP2591365A1 (en) Markers of vulnerability of the atherosclerosis plaque
HU231426B1 (hu) Syndecan-3 45-384 aminosav közti régiójára specifikus ligandok alkalmazása neurodegenerativ kórképek kezelésére
Jia et al. E-selectin expression increased in human ruptured cerebral aneurysm tissues
EP3290923B1 (en) Tropomyosin isoforms related to alzheimers disease and mild cognitive impairment
Korabelnikov et al. Modern biomarkers of acute kidney injury
Martínez-Rodríguez et al. Evaluation of hypothalamic-specific autoimmunity in patients with narcolepsy
KR102328709B1 (ko) 저분자 아밀로이드 베타 검출용 펩타이드 및 이의 용도
Claudon et al. Proteic composition of corpora amylacea in the bovine mammary gland
Minetti et al. Abnormalities in the expression of β‐spectrin in Duchenne muscular dystrophy
Peng et al. Non-invasive detection of acute renal allograft rejection by measurement of vascular endothelial growth factor in urine