HU228694B1 - Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same - Google Patents
Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same Download PDFInfo
- Publication number
- HU228694B1 HU228694B1 HU0501107A HUP0501107A HU228694B1 HU 228694 B1 HU228694 B1 HU 228694B1 HU 0501107 A HU0501107 A HU 0501107A HU P0501107 A HUP0501107 A HU P0501107A HU 228694 B1 HU228694 B1 HU 228694B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- plant
- sequence
- male
- promoter
- seed
- Prior art date
Links
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 230000035558 fertility Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 55
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 136
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 88
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 40
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 34
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 33
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 23
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 claims description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 20
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 18
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 claims description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 15
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 claims description 14
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 9
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 claims 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims 1
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 39
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 30
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 28
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 26
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 20
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 13
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 13
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 13
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 11
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 10
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 10
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 10
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 10
- 241000208202 Linaceae Species 0.000 description 9
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 8
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 7
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 7
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 7
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 6
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 101150075111 ROLB gene Proteins 0.000 description 5
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000023409 microsporogenesis Effects 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 4
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 4
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 4
- FUTAPPOITCCWTH-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FUTAPPOITCCWTH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 3
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 3
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- BUYHXYIUQUBEQP-AVGNSLFASA-N Ser-Phe-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N BUYHXYIUQUBEQP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 241000209072 Sorghum Species 0.000 description 3
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 3
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 3
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 3
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 3
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 3
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 3
- 238000009399 inbreeding Methods 0.000 description 3
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 3
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 3
- RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N Arg-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N Arg-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N Arg-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- POZKLUIXMHIULG-FDARSICLSA-N Arg-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N POZKLUIXMHIULG-FDARSICLSA-N 0.000 description 2
- XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N Arg-Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N XMGVWQWEWWULNS-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- YYSYDIYQTUPNQQ-SXTJYALSSA-N Asn-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O YYSYDIYQTUPNQQ-SXTJYALSSA-N 0.000 description 2
- VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N Asn-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N Asp-Trp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 2
- 108010016529 Bacillus amyloliquefaciens ribonuclease Proteins 0.000 description 2
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 2
- DZLQXIFVQFTFJY-BYPYZUCNSA-N Cys-Gly-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O DZLQXIFVQFTFJY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- SBDVXRYCOIEYNV-YUMQZZPRSA-N Cys-His-Gly Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N SBDVXRYCOIEYNV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Arg Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-His Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- IDGRADDMTTWOQC-WDSOQIARSA-N Leu-Trp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IDGRADDMTTWOQC-WDSOQIARSA-N 0.000 description 2
- WALVCOOOKULCQM-ULQDDVLXSA-N Lys-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O WALVCOOOKULCQM-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N Lys-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O CUHGAUZONORRIC-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- IMDJSVBFQKDDEQ-MGHWNKPDSA-N Lys-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IMDJSVBFQKDDEQ-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 2
- 241000723994 Maize dwarf mosaic virus Species 0.000 description 2
- VBGGTAPDGFQMKF-AVGNSLFASA-N Met-Lys-Met Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O VBGGTAPDGFQMKF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 2
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- MPGJIHFJCXTVEX-KKUMJFAQSA-N Phe-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MPGJIHFJCXTVEX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N Pro-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- VEUACYMXJKXALX-IHRRRGAJSA-N Pro-Tyr-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VEUACYMXJKXALX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N Ser-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N 0.000 description 2
- 108091027544 Subgenomic mRNA Proteins 0.000 description 2
- XOTBWOCSLMBGMF-SUSMZKCASA-N Thr-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XOTBWOCSLMBGMF-SUSMZKCASA-N 0.000 description 2
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- KERCOYANYUPLHJ-XGEHTFHBSA-N Thr-Pro-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KERCOYANYUPLHJ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N Thr-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- RPECVQBNONKZAT-WZLNRYEVSA-N Thr-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N RPECVQBNONKZAT-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 2
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 2
- JBBYKPZAPOLCPK-JYJNAYRXSA-N Tyr-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O JBBYKPZAPOLCPK-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025801 glycyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 2
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- UPMXNNIRAGDFEH-UHFFFAOYSA-N 3,5-dibromo-4-hydroxybenzonitrile Chemical compound OC1=C(Br)C=C(C#N)C=C1Br UPMXNNIRAGDFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000844498 Agatea Species 0.000 description 1
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 description 1
- 101900318283 Alfalfa mosaic virus Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GITAWLWBTMJPKH-AVGNSLFASA-N Arg-Met-His Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N GITAWLWBTMJPKH-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- NIELFHOLFTUZME-HJWJTTGWSA-N Arg-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NIELFHOLFTUZME-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- FBXMCPLCVYUWBO-BPUTZDHNSA-N Arg-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FBXMCPLCVYUWBO-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- HCAUEJAQCXVQQM-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HCAUEJAQCXVQQM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N Asn-Phe Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DAYDURRBMDCCFL-AAEUAGOBSA-N Asn-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DAYDURRBMDCCFL-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- KTDWFWNZLLFEFU-KKUMJFAQSA-N Asn-Tyr-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O KTDWFWNZLLFEFU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N Asn-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N Asp-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DYDKXJWQCIVTMR-WDSKDSINSA-N Asp-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DYDKXJWQCIVTMR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N Asp-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WWOYXVBGHAHQBG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- RRUWMFBLFLUZSI-LPEHRKFASA-N Asp-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RRUWMFBLFLUZSI-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Asp-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N Asp-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DINOVZWPTMGSRF-QXEWZRGKSA-N Asp-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DINOVZWPTMGSRF-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N Asp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- GIKOVDMXBAFXDF-NHCYSSNCSA-N Asp-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GIKOVDMXBAFXDF-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710150192 Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 239000005489 Bromoxynil Substances 0.000 description 1
- 101100067721 Caenorhabditis elegans gly-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100148606 Caenorhabditis elegans pst-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100533230 Caenorhabditis elegans ser-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 241000320752 Cottea Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000544061 Cuculus canorus Species 0.000 description 1
- IZUNQDRIAOLWCN-YUMQZZPRSA-N Cys-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N IZUNQDRIAOLWCN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OOULJWDSSVOMHX-WDSKDSINSA-N Cys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS OOULJWDSSVOMHX-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108010066133 D-octopine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 208000034951 Genetic Translocation Diseases 0.000 description 1
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RDDSZZJOKDVPAE-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RDDSZZJOKDVPAE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JJSVALISDCNFCU-SZMVWBNQSA-N Glu-Leu-Trp Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O JJSVALISDCNFCU-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N Glu-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YRMZCZIRHYCNHX-RYUDHWBXSA-N Glu-Phe-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(O)=O YRMZCZIRHYCNHX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ITVBKCZZLJUUHI-HTUGSXCWSA-N Glu-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ITVBKCZZLJUUHI-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- UCZXXMREFIETQW-AVGNSLFASA-N Glu-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O UCZXXMREFIETQW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- MXXXVOYFNVJHMA-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)CN MXXXVOYFNVJHMA-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N Gly-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- YYPFZVIXAVDHIK-IUCAKERBSA-N Gly-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CN YYPFZVIXAVDHIK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- QPCVIQJVRGXUSA-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QPCVIQJVRGXUSA-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Leu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- FCKPEGOCSVZPNC-WHOFXGATSA-N Gly-Ile-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 FCKPEGOCSVZPNC-WHOFXGATSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- CLNSYANKYVMZNM-UWVGGRQHSA-N Gly-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N CLNSYANKYVMZNM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N Gly-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(O)=O OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- YXBRCTXAEYSCHS-XVYDVKMFSA-N His-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N YXBRCTXAEYSCHS-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- RGPWUJOMKFYFSR-QWRGUYRKSA-N His-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RGPWUJOMKFYFSR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N His-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CN=CN1 LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N His-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FFYYUUWROYYKFY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- GVKKVHNRTUFCCE-BJDJZHNGSA-N Ile-Leu-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N GVKKVHNRTUFCCE-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- OTSVBELRDMSPKY-PCBIJLKTSA-N Ile-Phe-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OTSVBELRDMSPKY-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- QSXSHZIRKTUXNG-STECZYCISA-N Ile-Val-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QSXSHZIRKTUXNG-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 244000116484 Inula helenium Species 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HBJZFCIVFIBNSV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- REPPKAMYTOJTFC-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O REPPKAMYTOJTFC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QUAAUWNLWMLERT-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QUAAUWNLWMLERT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N Leu-Asn-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HFBCHNRFRYLZNV-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HFBCHNRFRYLZNV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N Leu-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O NEEOBPIXKWSBRF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- RTIRBWJPYJYTLO-MELADBBJSA-N Leu-Lys-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N RTIRBWJPYJYTLO-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- GOFJOGXGMPHOGL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C GOFJOGXGMPHOGL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N Leu-Tyr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 240000009043 Linum lewisii Species 0.000 description 1
- NLOZZWJNIKKYSC-WDSOQIARSA-N Lys-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 NLOZZWJNIKKYSC-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- DAOSYIZXRCOKII-SRVKXCTJSA-N Lys-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DAOSYIZXRCOKII-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- UDXSLGLHFUBRRM-OEAJRASXSA-N Lys-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O UDXSLGLHFUBRRM-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000785747 Mavirus Species 0.000 description 1
- 101150037717 Mavs gene Proteins 0.000 description 1
- FVKRQMQQFGBXHV-QXEWZRGKSA-N Met-Asp-Val Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FVKRQMQQFGBXHV-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- STTRPDDKDVKIDF-KKUMJFAQSA-N Met-Glu-Tyr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 STTRPDDKDVKIDF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- FYRUJIJAUPHUNB-IUCAKERBSA-N Met-Gly-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N FYRUJIJAUPHUNB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100384865 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cot-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000479842 Pella Species 0.000 description 1
- OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- AGYXCMYVTBYGCT-ULQDDVLXSA-N Phe-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AGYXCMYVTBYGCT-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N Phe-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QPVFUAUFEBPIPT-CDMKHQONSA-N Phe-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QPVFUAUFEBPIPT-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- WKLMCMXFMQEKCX-SLFFLAALSA-N Phe-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](CC3=CC=CC=C3)N)C(=O)O WKLMCMXFMQEKCX-SLFFLAALSA-N 0.000 description 1
- WWPAHTZOWURIMR-ULQDDVLXSA-N Phe-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 WWPAHTZOWURIMR-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JHSRGEODDALISP-XVSYOHENSA-N Phe-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JHSRGEODDALISP-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- APMXLWHMIVWLLR-BZSNNMDCSA-N Phe-Tyr-Ser Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 APMXLWHMIVWLLR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N Phosphinothricin Natural products CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005120 Plant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000710078 Potyvirus Species 0.000 description 1
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GRIRJQGZZJVANI-CYDGBPFRSA-N Pro-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GRIRJQGZZJVANI-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- UTAUEDINXUMHLG-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 UTAUEDINXUMHLG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- RUDOLGWDSKQQFF-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RUDOLGWDSKQQFF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SRBFGSGDNNQABI-FHWLQOOXSA-N Pro-Leu-Trp Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 SRBFGSGDNNQABI-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ABSSTGUCBCDKMU-UWVGGRQHSA-N Pro-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ABSSTGUCBCDKMU-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N Ser-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- MLSQXWSRHURDMF-GARJFASQSA-N Ser-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O MLSQXWSRHURDMF-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DLPXTCTVNDTYGJ-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)N)CC1=CC=CC=C1 JAWGSPUJAXYXJA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PJIQEIFXZPCWOJ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PJIQEIFXZPCWOJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YXEYTHXDRDAIOJ-CWRNSKLLSA-N Ser-Trp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O YXEYTHXDRDAIOJ-CWRNSKLLSA-N 0.000 description 1
- OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N Ser-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- 108091027568 Single-stranded nucleotide Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N Thr-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- KLCCPYZXGXHAGS-QTKMDUPCSA-N Thr-His-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O KLCCPYZXGXHAGS-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- RRRRCRYTLZVCEN-HJGDQZAQSA-N Thr-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RRRRCRYTLZVCEN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- BZTSQFWJNJYZSX-JRQIVUDYSA-N Thr-Tyr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BZTSQFWJNJYZSX-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- FYBFTPLPAXZBOY-KKHAAJSZSA-N Thr-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYBFTPLPAXZBOY-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N Thr-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- MVHHTXAUJCIOMZ-WDSOQIARSA-N Trp-Arg-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N MVHHTXAUJCIOMZ-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- RRVUOLRWIZXBRQ-IHPCNDPISA-N Trp-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N RRVUOLRWIZXBRQ-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- IIJWXEUNETVJPV-IHRRRGAJSA-N Tyr-Arg-Ser Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O IIJWXEUNETVJPV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N Tyr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- BBSPTGPYIPGTKH-JYJNAYRXSA-N Tyr-Met-Arg Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N BBSPTGPYIPGTKH-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- YSGAPESOXHFTQY-IHRRRGAJSA-N Tyr-Met-Asp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N YSGAPESOXHFTQY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N Tyr-Ser-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- DBOXBUDEAJVKRE-LSJOCFKGSA-N Val-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N DBOXBUDEAJVKRE-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- MDYSKHBSPXUOPV-JSGCOSHPSA-N Val-Gly-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N MDYSKHBSPXUOPV-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- BVWPHWLFGRCECJ-JSGCOSHPSA-N Val-Gly-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N BVWPHWLFGRCECJ-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N Val-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N Val-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 244000178289 Verbascum thapsus Species 0.000 description 1
- 235000010599 Verbascum thapsus Nutrition 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000005422 blasting Methods 0.000 description 1
- 108010083912 bleomycin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000004049 embossing Methods 0.000 description 1
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 108010060641 flavanone synthetase Proteins 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000000652 homosexual effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108010060857 isoleucyl-valyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000009120 phenotypic response Effects 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 238000003976 plant breeding Methods 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- MCJGNVYPOGVAJF-UHFFFAOYSA-N quinolin-8-ol Chemical compound C1=CN=C2C(O)=CC=CC2=C1 MCJGNVYPOGVAJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000008786 sensory perception of smell Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229940061368 sonata Drugs 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8287—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for fertility modification, e.g. apomixis
- C12N15/8289—Male sterility
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8217—Gene switch
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
- C12N15/823—Reproductive tissue-specific promoters
- C12N15/8231—Male-specific, e.g. anther, tapetum, pollen
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Botany (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Hímfertiiitást közvetítő nukíeotid-szekvsnciák és alkalmazásuk
A hibrid növények termesztésének fejlődése- számottevő előnyöket eredményezhet a termesztett növények minőségében és menynyi. cégében. A hibridizációs eljárások lehetővé teszik, a hozamok növelését és a kívánatos tulajdonságok kombinálását, mint amilyenek a betegség- és rovarrezísztencia, a hő- és szárazságtörés, vagy a növények Összetételének megváltoztatása. Ezek az eljárások gyakran a pollent szolgáltató, hímivarú szülőnövényre vannak alapozva.
A szántóföldi növényeket olyan technikákkal termesztik, amelyek előnyt biztosítanak a növény megmerzási módjának, önmegporzó egy növény, ha az egyik virág virágpora ugyanazt a virágot vagy ugyanazon növényen egy másik virágot termékenyít meg. Idegenmegporzás akkor történik, ha egy növény virágait egy másik növényről származó virágpor termékenyíti meg.
A káposzta (Brassiea) nemzetség növényei rendesen önsterilek és csak Idegen megporzással termékenyüinek, Az önbeporzó növényekben — mint amilyen a szója vagy a gyapot — a nő- és hímivarszervek anatómiailag egymás mellett helyezkednek el, A természetes beporzás során a hímivarszerv által szolgáltatott virágpor (pollen) termékenyíti meg ugyanazon virág nöivarssérvét.
A kukorica (áea maya L.) egyedülálló helyzetet képvisel, mert mind őnbeporző, mind idegenbeporzö technikákkal termeszthető. A kukoricának ugyanazon a növényen vannak himvirágai, amelyek a címerben helyezkednek el, és vannak nővirágai, amelyek a kukoricacsőben helyezkednek el. A kukorica ön- vagy ídegenbeporC* fc / zással termekenyülhet meg. A kukorica természetes beporzása úgy történik meg, hogy a címerekből a virágport a szél viszi a csövek csúcsán kítüremkedö „hajw-ra, arai a bibeszálak tömege.
Egy megbízható eljárás, amellyel a növények fertilítása szabályozható lenne, lehetőséget kínálna a növénynemesítés javítására. Ez különösen igaz a kukoricahiforidek nemesítésére, amelyek valamilyen himsteril rendszeren alapulnak, és ahol egy nősteril rendszer csökkenthetné a termelési költségeket.
Ά kukoricahibridek kifejlesztéséhez homozigóta, beltenyésztett vonalak kifejlesztésére, majd ezeknek a: vonalaknak a keresztezésére és a hibridek kiértékelésére van szükség. A leszármazási vonalak termesztése és az ismételt kiválogatás az a két eljárás, amivel beltenyésztett vonalakat hozhatunk létre egy populációból. A nemesitő programokban a kívánatos tulajdonságokat kombinálják két vagy több beltenyésztett vonalból vagy különböző, széles alapú forrásokból egy nemesítés! „tulajdonság-készlefc-be, amelyből új beltenyésztett vonalakat indítanak önmegtermékenyítéssel és a kívánt fenotapusok kiválogatásával. Egy hibrid kukorica-változat két ilyen beltenyésztett vonal keresztezésének eredménye, amelyek mindegyikének egy vagy több olyan kívánatos tulajdonsága van, amí a másikból hiányzik, vagy amelyek kiegészítik egymást. Az új beitenyésztett vonalak más beltenyésztett vonalakkal keresztezhetek, majd az így kapott hibridek megvizsgálhatok, hogy van-e· gazdasági jelentőségük. Az első generációs hibrid leszármazottak jele Fy. A hibridek létrehozásában csak az Fy növényeknek van jelentőségük. Az Fj hibrid életképesebb, mint a beitenyésztett szülők. Ez a hibridvígor
32/BE
X/
vagy heterósis-hatás számos módon, így például a fokozott vegetatív növekedésben. vagy a nagyobb terméshozamban is megnyílvaηυIhat.
A hibrid kukorica-vetőmag hímsteril rendszerben állítható elő, ami magában foglalja a kézi. címertelenítést („ címere zés) , A hibrid vetőmag termelése érdekében a címert, eltávolítják a beltenyésztett anyavonal fejlődő növényeiről, amelyek a szintén beltenyésztett apavonal növényeivel váltakozó sorokba vannak elvetve. Ennek következtében — feltéve, hogy az ültetvény kellően izolált a kukoricapollen más forrásaitól — az anyavonal csöveit csak az apavonal virágpora termékenyítheti meg. Az így kapott magvakból az Fy hibridnemzedék növényei keinek ki,
A növények fejlődésének környezeti variációi miatt előfordulhat, hogy egyes növényeken a címer az anyavonal címertelenítése után jelenik csak meg, vagy a címerezők nem távolítják el teljesen a címert. Bármi legyen is az ok, a következmény az, hogy az anyanövényeknek sikerül virágport termelniük és néhány közülük önbeporzéssal fog megtermékenyülni, aminek következtében a beitenyésztett anyavonal magvai keverednek a termelni kívánt hibrid vetőmagvakkal. Ezek a magok nem olyan termőképesek, mint az F'x magvak, ráadásul a beltenyésztett anyavonal magvaínak je~
1ΘΠ Léfcs | as el | adott v | etőmagban biztonsági kockázatot | jelent |
hibridé | t előáll | Lítő cég | számára. | |
Há | s megöl | dásfcént | a beltenyésztett anyanövények | géppel |
címerez | hetők. | A gépi | címerezés körülbelül annyira m | egbízhafc' |
mint a | kézzel | végzett, | de gyorsabb és olcsóbb, viszont | a legtö: |
címerez | ő gép t< | 5bb kárt | tesz a növényekben, mint a kézi | címerézé |
7€.702/BE így tehát jelenleg a eímertelenitésnek nincs teljesen kielégítő módja, és folyamatosan szükség van olyan megoldásokra, amelyekkel tovább csökkenthetők a termelési költségek és megszüntethető az anyavonal önbeporzása a hibriövetőmag termelése során.
A genetikai hímsterilitás egy megbízható rendszere előnyös lehetne, A munkaigényes olmerezés néhány genotípus esetében elkerülhető a eitoplazmás himsterii (CMS) beltenyésztett vonalak használatával. A fertilltást helyreállító gén hiányában egy CMS beltenyésztett vonal növényei a oitoplazmában. lévő faktorok miatt himsterilek. Ezt a tulajdonságot kizárólag az anyanövények örökítik a kukoricában, mivel csak az anyanövény ad óit©plazmát a megtermékényitett maghoz, A CMS növények más, nem himsterii vonalak pollenjével termékenyithetők meg. E másik beltenyésztett vonal pollenje tartalmazhatja azokat a géneket, amelyek a hibrid növényeket hímfertilissé teszik, de hiányozhatnak is belőlük. Rendszerint ugyanazon hibrid címertelenített normái kukoricával, illetve CMS vonallal Perzselt magvait keverik össze, hogy biztosítva legyen a megfelelő virágpor-mennyiség, amikor a hibrid növényeket termesztik és biztosítva, legyen a eitoplazmás diverzitás is.
A CMS vonalaknak azonban másféle hátrányaik is vannak. Az egyik egy már régen megfigyelt összefüggés a CMS egy meghatározott változata és bizonyos növénybetegségekre való érzékenység között. Ez a probléma elriasztólag hatott a CMS változatok széleskörű. alkalmazására a hibrid kukoricák előállításában és negatívan befolyásolta a CMS általában vett használatát a kukoricában.
A genetikai sterilitás egyik típusa az US 4,654,465 és
4,727,219 számé szabadalmi Iratokban van leírva. A genetikai 76.702/33 •X V •X hlmsterilitás ezen formája azonban több mutáns gén fenntartását követeli meg a genom különböző helyein,· és egy bonyolult mar kér rendszert ís igényel a gének nyomon követésére és a rendszer használatának megkönnyítésére. Az ÖS 3,861,709 és 3,710,511 számú szabadalmi iratokban is egy kroraoszóma-transzlokáciős genetikai rendszer van leírva, ami hatásos lehetne, de bonyolult.
Számos próbálkozás történt az ilyen hátrányok kiküszöbölésére, így például Fabijanskí és munkatársai több módszert fejlesztettek ki, amelyekkel növények hímsterillé tehetők (EP-0 89/3010153,8, PÜT/CA90/0ÖÖ37 és WO 90/08828 számú szabadalmi iratok), Az egyik módszer szerint egy hámszövet-specifikus promotorral kapcsolt gént juttatunk a növénybe, amely gén egy citotoxikus anyagot kódol. Egy másik módszer egy antíszensz rendszeren alapul, ahol először azonosítanak egy, a fértíirtáshoz nélkülözhetetlen gént, majd annak antíszensz párját ínszertáljak a növénybe, Mariani és munkatársai is több, citotox.ik.ns antíszensz rendszert Írtak le (EP 89/401,194 számú szabadalmi irat). Más rendszerekben „represszor géneket alkalmaznak, amelyek gátolják más, a hímfertilitás szempontjából kritikus gének működését ÍPCT/G890/00102 (WO 90/08839) számú szabadalmi irat],
E rendszer egy még további javítása az US 5, 478,369 szárma szabadalmi iratban van leírva, amit referenciaként tartunk számon, A módszer ellenőrizhető himsterilítást hoz létre azáltal, hogy elnémítja a növény egyik, a hímfertiiitáshoz. nélkülözhetetlen, eredeti génjét, majd a natív DNS-t ugyanazon génnel helyettesíti, de most már egy indukálható promoterral összekapcsolva, ami. a gén kifejeződését szabályozza- Ez a növény tehát konstitu'/'·<> s λΰ'2/'3&
tivan steril, de fertílíssé válik, ha promoter indukálódik és a hozzá kapcsolt himfertilitási gén kifejeződik.
észrevehető^ hogy a hímsterilitásr rendszerekhez vezető munka egyik, esszenciális lépése a hímfertilítást befolyásoló gének azonosítása.
Egy ilyen gén különböző rendszerekben — köztük az. itt leírtban is — lenne használható arra, hogy a himfertiiítást szabályozza, Korábban egy hlmfertxlitás-gént azonosítottak az Arabíoopszs fchaliana-ban és felhasználták hímsteril növények létrehozására. Az egyik ilyen, a hímfertílitás befolyásoló gént Aarts és munkatársai írták le [IVa tűre 363, 715-717 (1993); DS
5,473,369 számú szabadalmi irat). Jelen találmányban a feltalálók új: DNS-molekulákat és az általuk kódolt aminosav-szefcvenoiákat írnak le, amelyek nélkülözhetetlenek a. növények hímfertiirtása szempontjából. Ezek minden olyan rendszerben alkalmazhatók, ahol a fértiIrtás szabályozása hasznos lehet, köztük az alább leírtakban is.
így tehát találmányunk egyik célja egy nukieinsav-szekvencia biztosítása, amelynek kifejeződése nélkülözhetetlen a növények himf ertiiításához.
Találmányunk egy másik célja egy promoter és annak esszenciális szekvenciái biztosítása egy fenti nukleínsav-szekvsnciához,
Találmányunk további célja egy eljárás biztosítása, amelyben a fenti. DNS-molekulákat alkalmazzuk hzmfertílitás szabályozására növényekben.
Találmányunk további céljai az alábbi leírásból és igénypontokból ismerhetők meg.
?S. 70.2/SE
Találmányunk tárgyát olyan nukleinsav-szekvenciák és különösen DNS-molekulák, valamint, az általuk kódolt olyan amínosavszekvenciák képezik, amelyek nélkülözhetetlenek a hímfertilitáshoz. Azonosítottuk a DNS promoterát, valamint annak esszenciális szekvenciáit, A találmány tárgyát képezi továbbá az ilyen DNSmolekulák alkalmazása hímfertilitás szabályozására növényekben..
Az ábrák, rövid leírása
1. ábra. Az SBMu200 himsterilitás-gén lókusztérképe (E ~ EcoRI, X - Xbal, B - BamHX, D » Pstl és S - Sací) .
2. ábra. Egy Son.thern-.blot gél képe, amelyen egy himsterilitásra szegregéit Hu géncsaládból származó DNS EcoRI-vei emésztett és egy Mu8 próbával hihridízált fragmentumai láthatók.
3. ábra, Egy Northern-blot gél képe, ahol az SBMu200-3,1 kiónból izolált Psti-fragmentumot használtuk hibri.dizálásra,
4. ábra. Az SBMu200 szekvenciája {a cDNS szekvenciáját az 1. számú szekvenciavázlatban, a fehérje szekvenciáját a 2. számú szekvenciavázlatban mutatjuk be.
5. ábra. Az SBMulöO genomiális szekvenciája (7.. számú szekvenciavázlat} ,
S. ábra. Az SBHu20ö genomiális szekvenciájának és cDNS-e szekvenciád ának összehasonlítása..
7. ábra. Egy Rorthe.rn-bl.ot gél, amelyen az SBMuiöO gén kifejeződése látható a mikrosporogenezis folyamatában.
8. ábra. Az SBHu2öO teljes hosszúságú promotera {5. számú szekvencia váz lat} .
9. ábra. Az oszlopdiagram az SBHuSOö promoter 5'-delécióval kapott szakaszainak luci.feráz-rendszerrel mért aktivitását mutatja be.
Vb.?ö2/BE » φ
10. ábra. Az SBMu2ÖO promoter egyik esszenciális területe (€.
számú szekvenciavázlat) . A koordinátákat a vélelmezett TATA-fooxtói (aláhúzva) számítjuk. A P~motl vumokat dőlt karakterek jelzik, A linker-szkenning mutációkat ..... amelyek az aktivitást körülbelül 5 %-ra vagy kisebbre csökkentik — vastagltott karakterek jelzik. A jelentős, de kevésbé kifejezett hatású mutációk helyét a dőlt-vastsgított karakterek jelzik,
11. ábra. Az oszlopdiagramon, az SBMu2ÖÖ esszenciális promoter-fragmentumának kis (9-10 bp) szakaszain végrehajtott, restrikciós helyre irányuló linker-szkenning mutációk hatásait mutatjuk be.
12. ábra. Az SSHu200 cirokcimer és az SBMu2Ö0~3,l kukorica c'DNS szekvenciáinak összehasonlítása (a. cirok DNS~t a 3., a fehérjéjét a 4. számú szekvenciavázlaton mutatjuk be) .
Az összes hivatkozott közlést referenciaként tartjuk számon.
Hacsak másként nem definiáljuk, a találmányunkban előforduló összes technikai és tudományos fogalmat a szakemberek — akikre ez a találmány tartozik — által közönségesen használt értelemben alkalmazzuk, hacsak mást nem állítunk, az alkalmazott vagy figyelembe vett technikák standard módszerek, amelyeket jól ismernek a szakemberek. Az anyagok, eljárások és példák csak. bemutatásra és nem korlátozásra szolgáinak.
A genetikai himsteriiítas egy mutáció, szupresszió vagy bármilyen más, a mikrosporogenesís egy adott lépésében nélkülözhetetlen génre irányuló hatás következménye lehet; a mikrosporogenezís fogalom alatt a poilenképződés teljes folyamatát értjük. Ezeket a géneket együttesen hímfert11írási géneknek (vagy más megközeiitésből himsterilitási géneknek) nevezzük. Az egész fo76.7Ö2/3B ** * lyamaton. beiül számos olyan lépés van, amelyben a gének működése befolyásolja a fertilitást. Ezt megfelelően alátámasztani látszik a genetikai hímsterilitás gyakorisága a kukoricában. A hímsteril mutánsok áj alibijeit fedezik fel az elit beltenyésztett vonalaktól az adaptálatlan populációkig terjedő anyagokban. Napjainkig a genetikai hímsteriiitás kutatása főleg leíró jellegű maradt. Történtek erőfeszítések a kukorica sterilitási mechanizmusának feltárására, de ezek közül csak néhány volt sikeres. Ss nem is meglepő, ha figyelembe vesszük a gének számát., amelyek a himsteriIrtásért felelősnek, bizonyulhatnak. Nem valószínű, hogy egy mechanizmus lenne alkalmazható az összes mutációra.
Az US .5,478,369 számú, szabadalmi iratban szerepei egy módszer, amivel egy hlmsterilitási gén ragasztható· a kukorica 9. kromoszómájának végére. Korábban a 9. kromoszómán azonosított egyetlen hímsterilitási gén az MS2 volt, amit. sohasem klónoztak és szekvenáltak [Aibertsen és Phillips, Canad. 7'. Génét. Cytol. 23, 195-208 (1981)1. Az egyetlen fertílitás-gén, amit eddig klónoztak, az Arabidöpsis Aarts és· munkatársai (íd. közi.) által leírt génje volt.
A találmányunkban leirt SsMu20ö gén a. kukorica 1. kromoszómáján helyezkedik, el és domináns allélje nélkülözhetetlen a hímfertiIrtáshoz. A lókusztérkép az 1. ábrán látható. A gén a fent leírt vagy másféle rendszerekben használható a hímfert.ilitás befolyásolására .
A sterilitásra szegregált kukorica-család neve SBMnSöű, és azt találtuk, hogy ven egy körülbelül 5,5 kbp méretű EcoRl-fragméntúrna, ami hibrid!zálódik egy Mu8 próbával. A családból ize76·, ?C*2 /35;
» ♦ *
láltak egy genoRi-iális kiónt, ami agy Mu8 transzpozonfc tartalmas. Egy próbát készítettünk a transzpozont határoló DNS-bőif és azt találtuk, hogy az hibridizálédik a körülbelül 5,5 kbp SooR.1·fragmentummal. Ért a próbát használtuk a cDNS-klónok izolálására egy címer c:DNS-könyvtárból - Az SBIüa2G0 cDNS-e 1906 bp méretű, és a Mu inszertum a gén 1. exonjában van. A 9. ábrán látható a genomíális nukleotíd-szekvencía, amit még bővebben megbeszélünk. A Northern-anaiiziasel feltárt expressziés mintázatok címerspecifikus kifejeződést mutatnak, aminek csúcsa körülbelül a mikrosporogenezís kvartett stádiuma és kvartett-szétválási stádiuma között van.
A találmány szerinti nukleotid-szekvenciákat tartalmazó plazma.dókat 1998. 10. 16-··án helyeztük letétbe az American Type Culfcure Collectíon (ATCC) Patent üeposítory-jában (Manassas, Vi .) , ahol a 98931 nyilvántartási számot kapták. A letétbe helyezés a Budapesti Egyezménynek megfelelően történt. A letétet kizárólag a szakemberek kényelme érdekében létesítettük, és ne® annak elismeréseként, hogy szükséges.
Továbbá, a szakemberek számára nyilvánvaló, hogy a bemutatott teljes szekvenciánál kisebb fragmentumok, változatok és mutációk is használhatók, ha megőrizték a gén hímsteríiltást szabályozó tulajdonságát. Egy átlagosan képzett szakember könnyen.
felismerheti | az Ilyen variánsoka | t vagy | fragmentumokat, ha bejut- |
tatja azokat | az MS26 stabil hin | isterü | ái léi re homozigóta neve- |
nyek.be, majd | megfigyeli a növény | hímező' | zeteinek fejlődését. |
A talál | Hiányhoz tartoznak a | zok a | n u k 1 e o t i d- s z e k ve n c í á k is, |
amelyek szel | ektiven h lórid! záló< | Inak a; | ; SBMuzOO nufcleotid-szek- |
75.702/SS |
.♦·**·< **,,·♦ * * * X * * * » : ··.···..· venciákkal szigorú körülmények között. Az SBMu2ÖÖ szekvenciával „szelektíven hibrid!zálódó kifejezés egy olyan nukleo-tíd-szekvenciára utal, amely szigorú körülmények között kimutathatóan nagyobb (azaz a hátteret legalább kétszeresen meghaladó) mértékben hibridizáiődik egy megbatározott nukiectid-szekvenciávai, mint egy nem célzott nukleinsavval.
A ?,szigorú körülmények vagy „szigorú hibridizációs körülmények kifejezések azokra a körülményekre utalnak, amelyek, között egy próba kimutathatóan nagyobb (azaz a hátteret legalább kétszeresen meghaladó) mértékben hibridízálödik a célszekvenciájával, mint más szekvenciákkal. A szigorú körülmények a célszekvenciától függenek és a polínukieotíd szerkezetétől függően különbözőek lesznek. A híbridizálás és/vagy mosás szigorúságának szabályozásával olyan célszekvenciák azonosíthatók, amelyek 100 S-ban komplementerek a próbával (homológia-vizsgálat). Másrészt, a szigorú körülmények úgy is beállíthatók, hogy lehetővé tegyék a szekvenciák bizonyos fokú keveredését, amivel alacsonyabb fokú hasonlóságok is kimutathatók (hetsrolőgia-vizsgálat). Általában az ilyen típusú próbák bosszúsága körülbelül 1000-250 nukleotid.
A nnk.ieinsavak hibridízálásához részletes útmutatást találunk Tijssen: „Laboratory Technignes in Siochemíst.ry and Afcdecsl.ar BLology -- Aybridization tóth hucleic Acid Prcbec (Slsevier,
New York, 1993), Ausubel és munkatársai (eds.): „Current .Protocols in üolecular Sío.l.ogy' (Wiley - Interseience, hew York, 195) és Sambrook és munkatársai: „éfcleouia.r Cloníng; A iaborafozy Ms~ nual (2. kiadás, Cold Spring Hárbor Laboratory, Cold. Spring Har.feor, 19 89) ké z í könyve í ben,
7S.782/BS »*ií*
Általában azok a szekvenciák, amelyek megfelelnek a találmány szerinti nukleotid-szekvencíáknak és hibtidizálódnak a találmány szerinti nukleotid-szekvenciákkal, legalább 50 %-os, 70 %-os, vagy éppen SS %-os vagy nagyobb fokú homológ!át mutatnak a találmány szerinti szekvenciákkal. Ez azt jelenti, hogy a próba és a célszefcvencia közötti hasonlóság foka legalább körülbelül 50 %, körülbelül 70 % vagy éppen 85 %.
A specificítás tipikusan a hibridizáiás utáni mosás függvénye, ahol a kritikus tényezők az utolsó mo-sóoldat ionerőssége és hőmérséklete. A szigorú mosási körülmények között a hőmérsékletet általában körülbelül 5-2 °'C-kal alacsonyabbra állítjuk be, mint az adott szekvencia olvadáspontja íTm) egy meghatározott ionerősség és pH esetében. A DfíS .„megolvadása (denaturálódása) egy keskeny hőmérséklet-tartományban következik be, és tulajdonképpen a kettős spirál szétválását jelenti a komplementer egyes szálakra. A folyamatot az átmenet középpontjának hőmérsékletével jellemezzük (Tm>, amit olvadási hőmérsékletnek is neveznek. Az olvadási hőmérséklet meghatározására számos képletet ismer a szakterület.
A találmány szerinti nukleotid-szekvenciák számára előnyös hibridizációs körülmények közé tartozik a 42 ’C-on, SÖO g/1 formamid, őx SSC-ben, 5 g/1 SDS és 100 pg/ml lazacsperma-DNS jelenlétében végzett hibridizáiás. Példaszerűen gyenge szigorúéágú mosási körülményeket jelent a 42 °C.-on, 2x SSC-ben, 5 g/1 SDS jelenlétében, 30 percen át, majd ezt megismételve végzett hibrídizálás. Példaszerűen mérsékelt szigorúságé körülményeket jelent az 50 sCon, 2x SSC-ben, 5 g/1 SDS jelenlétében, 30 percen át 7Í.702/BE végzett és megismételt mosás. Példaszerűen erős szigorúságé körülményeket jelent a 65 ’C-οπ, 2x SSC-ben, 5 g/1 S.DS jelenlétében, 30 percen át végzett és megismételt mosás. A találmány szerinti promoternak megfelelő szekvenciák a fenti körülmények bármelyike között nyerhetők. Találmányunkban az erősen szigorú körülményeket használjuk.
A szekvenciák összehasonlításra szolgáié eljárások jól ismertek a szakterületen. Géneket hasonlíthatunk össze a BLAST algoritmussal {Basic Loca.1 Alígnment Search Tool; Altsebül et al., J. AÍg.L. Bioi. 215, 403-410 (1993); lásd még www.ncbi.nlm.nih.gov], az alap-beállítási paraméterek használatával, hogy azonosítsuk azokat a B.LA.ST „GEEEMBL adatbázisában tárolt szekvenciák segítségével. A találmány szerinti szekvenciák esetében az azonosság azt jelenti, hogy egy polinukieotid-szekvercia azonosság! foka legalább 65 %-os, előnyösebben legalább 70 %-os, előnyösebben legalább 75 %-os, előnyösebben legalább 80 %-os, előnyösebben legalább 85 %-os, előnyösebben legalább 90 %-os és legelőnyösebben legalább 95 %-os.
A promoter-területeket a szakemberek könnyen azonosíthatják, Megkeressük az ATG motívumot tartalmazó, vélelmezett, start-kodont, és a start-kodontöl felfelé eső terület a vélhető promotér. A ,,promoter a DNS egy szabályozó területe, amely rendszerint tartalmaz egy TATA-boxet, ami az RNS-polimeráz-ΙΙ-t irányítva megindítja az RNS szintézisét az adott fokozó szekvencia megfelelő transzkripciós kezdőhelyén. Egy promoter tartalmazhat még járulékos felismerő szekvenciákat is, amelyek általában a TATA-boxtői felfelé {5firányban) helyezkednek el és a transz7 5.702/BE kripcíó megindulásának sebességét szabályozzák (ezeket nevezzük felső promoter-eiemeknek} . nyilvánvaló, hogy ha azonosítottuk a találmány szerinti promoter nukleotid-szekveneiáiát, akkor a szakembereknek nem okoz nehézséget a további szabályozó elemek azonosítása az adott promoter TAfft-boxtol felfelé eső területén, így tehát a találmány szerinti promoter-területet általában tovább azonosíthatjuk a felső szabályozó elemek jelenléte alapján, amelyek a kódoló szekvencia szövetbe11 vagy időbeni kifejeződéséért felelősek, fokozok vagy hasonlók lehetnek. Hasonlóképpen azonosíthatók, izolálhatok es más promoter-magokkal felhasználhatók azok a promoter-elemek, amelyek a kifejeződést egy meghatározott, például hámszövetben teszik lehetővé.
A találmány szerinti, izolált promoter-szekvenciák módosíthatok, hogy megfelelő mértékű kifejeződést biztosítsanak idegen (heterológ) nukíeotid-szekvenciák számára. A teljes promoter-te~ rületnéi kisebb szakaszok is használhatók és megőrizhetik a por™ tok-specifikus kifejeződés vezérlésének képességét. Felismertük azonban, hogy a mRNS expresszrójának szintje szökkenhet, ha részeket távolítunk el a promoter-szekvenciából. Eszerint egy promotert módosíthatunk úgy, hogy gyenge vagy erős promoter legyen, általában a „gyenge promoter kifejezés alatt egy olyan promotert értünk, amely alacsony szinten működteti a. kódoló szekvencia expresszióját. Az „alacsony szint körülbelül 1/10.QGO-től körülbelül 1/100ÖüO-ig, vagy körülbelül 1/500.Oöö-ig terjedő transzkriptumot jelent. Ezzel szemben egy erős promoter magas szinten működteti egy kódoló szekvencia expressziéját, ami körülbelül 1/10-től körülbelül l/löö-ig, vagy körülbelül 1/1000-ig 75,TÖ2/BB «ν terjedő transzkriptumot jelent. Általában egy izolált promoterszekvenciábó.1 legalább körülbelül 30 nnkleotidot használunk egy nukleotid-szekvencia expressziójának működtetésére. Ismert, hogy a transzkripció szintjének emeléséhez £okozók, használhatók a találmány szerinti promoter-területekkel kombinálva. Λ fokozó (enh-anee.r) egy olyan nukleotld-szekvencia, amely serkenti egy promotor-terület kifejeződését. A. fokozok - mint amilyen az SVáO fokozó terület, a 35S fokozó elem és a hasonlók — jól ismertek a s zakte.rü.1 eten.
Azok a szekvenciák, amelyek hibridizálódnak a találmány szerinti szekvenciákkal, szintén találmányunk oltalmi körébe tartoznak. Azok a szekvenciák, amelyek megfelelnek a találmány szerinti promoter-s-zekveneiáknak és hibiridízáiódnak azokkal,, legalább 50 %-ban, 70 S-foan, vagy éppen 85 %~ban vagy nagyobb mértékben homológok a találmány szerinti szekvenciával.
A kisebb fragmentumok cég mindig birtokolhatják a promoter szabályozó tulajdonságait, igy a deiéciós analízis lehet az egyik módja az esszenciális területek azonosításának. A deiéciós analízis a szabályozó terület mindkét, 5'- és 3'-végén végrehajtható. Fragmentumokat helyre irányított mutagenezissel, polimeráz láncreakcióval végzett mutagenezissel és hasonlókkal nyerhetünk („tűre eted Mutagenesis: Ά Practicai App.roa.ch, IRL Press, 1991?. A 3*-deléciókkal körülhatárolható az esszenciális terület és megtalálható a 3' -vége,· amellyel ez a terület működőképes módon kapcsolható egy tetszőleges promoter-maghoz. Ha az esszenciális területet egyszer meghatóztuk, akkor egy exogén gén transzkrípcióját szabályozhatjuk az esszenciális uéíltfWt és egy promofer-mag együttesével. A prcmoter-mag bármely « * ter-xuag együttesével. A promoter-mag bármely ismert promoter-mag lehet, mint amilyen a karfiol mozaik vírus 35S vagy 19S proiaotera (US 5,352,605), az nbikvitín promoter (US 5,510,474), az IN2 promoter-mag (US 5, 364,780) vagy a görvéiyfü mozaik vírus proiaotara (Gruber et al., in: „áfethode in Plánt Molecniar Blology and Sioteohology^', pp. 89-119., CRC Press, 1993),
Az SBMu.2-00 szabályozó területét a vélelmezett TATA-boxtól felfelé elhelyezkedő, 1.005 bp hosszúságú területként azonosítottuk (8, ábra) - A fent körvonalazott módszerrel megállapítottuk azt is, hogy a promoter esszenciális területe a TATA-boxtöl felfelé elhelyezkedő -180 bp, amelyen belül különösen esszenciális a -176. bázispártól a -44.-ig terjedő szakasz.
Promoter-szekvenciák más növényekből is izolálhatok jól ismert technikákkal a találmány szerinti promoter-szekvenoiávai mutatott homológiájuk alapján. Ezekben az eljárásokban az ismert promoter-szekvencía egészét vagy egy részét használjuk próbaként, ami szelektíven hibrid!záióőík más szekvenciákkal, amelyek egy adott szervezetből származó, klónozott genom-DHS fragmentumok populációjában (azaz egy genom-könyvtárban.) vannak jelen. A nukieinsav-szekvenciák hibrid!zálásanak módszerei jól ismertek a szakterületen.
A teljes promoter-szekvencía. vagy annak egy része használható olyan próbaként, amely képes specifikusan hibrídizáiódni a megfelelő promoter-szekvenciákkal. Ahhoz, hogy különböző körülmények között is elérjük a specifikus hibrídizálódást, az ilyen próbáknak egyedi szekvenciákat kell tartalmazniuk, amelyek előnyösen legalább körülbelül 10, és legelőnyösebben legalább kő?b.7C<>/$S
ΦΦ * rülbelül 20 nukl.eot.id hosszúságúak. Az ilyen próbák felhasználhatók a megfelelő promoter-szekvenci.ák. sokszorczására egy kiválasztott szervezetből a polimeráz láncreakció (PCR) jól ismert eljárásával. Ez a technika használható járulékos promoter-szekvenciák izolálására egy kívánt szervezetből vagy annak megállapítására, hogy a promoter-szekvencía jelen van-e a szervezetben. A szélesztett DNS-könyvtárak hibridizációs szűrővizsgálatára Innis és munkatársai íeds.}: „PCR Frotocds, A Guíde to Methods and Applications' (Acad. Press, 1990} kézikönyvében találunk.
módsz e rekét.
Továbbá, a találmány szerinti promoter az SBMuzOO géntől, eltérő nukleotid-szekvenciához is kapcsolható, hogy heterológ nukleotid-szekvenciák ís kifejeződhessenek. A találmány szerinti promoter nukleotid-szekvenoíája, valamint annak, fragmentumai és változatai, expresszíős keretekbe foglalhatók a heterológ nukleotíd-szekvenciákkal együtt, hogy kifejeződhessenek az adott növényben, pontosabban a növény hámszövetében. Egy ilyen expreszszíős keret a restrikciós helyek sokaságát kínálja a nukieotidszekvencia ínszertálása számára, amely a promoter transzkripciós szabályozó hatása alá kerül. Ezek az expressziős keretek alkalmasak bármely növény genetikai módosítására a kívánt fenotí pu-sos válasz elérése érdekében. Az SBMuiOO promotert tartalmazó expresszíós vektorban idegen génként alkalmazható nukleotíd-szekvén-dákra példaként említjük a komplementer, nukieotíd-tipusű egységeket, például az antiszensz molekulákat (kalláz antíszensz RNS, barnáz antiszensz RNS, kalkon-színtetáz antiszensz RNS,
Ms4 5 antiszensz RNS), a ríbozimeket és külső vezető szekvencia76.702/SS kát, egy aptamert vagy egyszálű nukleot ido-kat- Az idegen nukleotid-szekvencía kódolhat auxinokat, rolB-t, citotoxinokafc, diftéria-toxint, SAM-metilázt, avídint, vagy egy prokariota szabályozó rendszerből származhat. így például Marian! és munkatársai ihVature 347, 737 (199ö)j kimutatták, hogy akár az Aspergú.Llus
-oryzae TI BKáza, akár a Saodllns amyJolíguefacrezís RNáza (amelyeket „barnáz^-nak neveztek) a tapsiamban kifejeződve a sejtek pusztulását és ezzel iiímsterilitást okoznak. Quaas és munkatársai [Sur. J, Biochem. 173, 617 (1988) I leírták a Ti RNáz kémiai szintézisét, míg a barnáz-gén na.fcleotid-szekveno-iáj át Hartley derítette fel |J. fíbl. Siói. 202, 913 (1988)]. Az Agrobacterium rhizogenes rolB génje egy enzimet, kódol, amely megzavarja az auxin-anyagoserét azáltal, hogy indulókat szabadit fel az índoxíl-p-glükozidokból, Kstruoh és munkatársai [SMBÖ Cl 11, 3125 (1991)1, valamint Sp-ena és munkatársai ÍTheor. Appl. G-enet, 84, 520 (1992)1 kimutatták, hogy a rolB gén portok-specifikus kifejeződése dohányban zsugorodott porzókat eredményez, amelyekben nagy mértékben lecsökken a poilezképződés, igy a rolB gén az egyik példa az olyan génekre, amelyek alkalmasak a pollentermo-
lődés szed | zályoző | sara. | Slighton és munkát áj | csal ío, Bioi. Chejn, |
261, 108 | (1985) } | irták | le a rolB gén nukle | ott d— s z e kv e ne t á j á t. A |
diftéría-t | oxint 1 | kódoló | gén DNS-moiekuláít a | z ATCC-tói lehet meg- |
kapni (No . | 39359 | és No | ο / a z 1lásd meg az | EP-A 90902754,2 számú |
szabadalmi | X. '.A u·’.»? | t) . A | BAM-metiiáz génjét | sterilitás o ko z á s á. r a |
használták | az US | 5, 68 9, | ö 4 9 é s PCT/U8 9 5/15 2 2 9 | számú szabadalmi ira- |
tokban ieirt eljárásokban. Az avídín gén alkalmazását sterilitás okozására az US 5,962,769 számú szabadalmi iratban Írták le.
75.702/BS
Találmányunkhoz tartoznak az SBMu200 gént tartalmazó vektorok is. A vektort úgy készítjük el, hogy tartalmazza az SBNu2Öö gént, egy promotert, ami a gént működtetni fogja a növényben, és egy terminátor-szakaszt.. Amint megjegyeztük, a szerkezetben a promoter lehet natív vagy lehet egy helyettesítő promoter, ami biztosítani fogja a kifejeződést a növényben. Az alkalmazott promoter lehet egy indukálható promoter, aminek következtében a szerkezetben lévő szánsz vagy antíszensz molekula kifejeződését az índuktorrai való expozíció fogja szabályozni.
A vektorban a gén szándékolt alkalmazásától függően további alkotórészek is lehetnek, amelyekre példák a szelektálható markerek, a célra irányító vagy szabályozó szekvenciák, a stabilizáló vagy vezető szekvenciák, és a többi. A növényi expressziős vektorok és riporter-gének általános leírását illetően Grube.r és munkatársai (id. mű) kézikönyvére utalunk. A megfelelő expreszsziös vektor kiválasztása a gazdaszervezettől és attól az eljárástól függ, amellyel sz expressziós vektort a gazdába kívánjuk juttatni. A szóban forgó idegen nukleotid-szekvencia 3f-végénél az expressziós keret tartalmazhat még egy transzkripciós és transzlációs terminátor-szakaszt is, amely működőképes a növényekben. A termínátor-szakasz natív lehet a találmány szerinti proBsofcer nukleotid-szekvenciája számára, natív lehet a szóban forgó DNS számára, vagy származhat idegen forrásból. Kényelmesen haszná iható t e.rminá t or- s za kas zo kát nyerhetűn k a z Apróba c téri um taisefaciens Ti-plazrnid j áböl ? ilyenek az oktopin-szintetáz vagy a nopaiin-szintetáz terminátor-szakaszok [Guerineau et ai., Mól.
141-144 (1991); Froudfoot, Ceil 64,
Gén e t
262
Proadfoot,
671-674
Gén.
76.70-2/ BE
5, 14.1-149 <1991} ; Mogen
(1991); San rácon et | ai., (lenes | Pev. 5, |
aΊ., flant Celu 2, | 1261-1272 | (1990) ; |
151-158 (1990) ; Bal | 1 a s e t; a 2 , , | duci. |
(1989) ; Joshi et al. | , Nucl, Aeids Pás. | |
Az expressziős | keretek járt | ílé kosán |
szekvenciákat is, Az ilyen vezető szekvenciák a transzlációt fokozhatják. A transzlációs vezetők jói ismertek a szakterületen: ilyenek a pl co mavírus vezetők [például az enkefaiomlokarditísz vírus 5* ne® kódoló területe; Slrov-Stein e<
Proc, Na £2 vezető; Alii són et ai., VÜrology 154
9-20
AeaoL Scí. (7SA 8 6, 6126-6130 (19895), a potyvirus vezetők [például a TEV (dohány karcoiatos vírus) vagy az MDMV (kukorica törpe mozaik vírus) (1989)], a humán immunglobulin nehéz láncát kötő fehérje [BiP, 'Macejak et ai,, Natúré 353, 90-94 (1991)), a lucerna mozaik vírus köpenyfehérja mBdS-ének le nem fordított vezetője [AMV RNA 4, -«Jobb 1 ing et ai ., Natúr© 325, 622-62S (1987)], a dohány mozaik vírus vezetője [TMV, Gallie et ai,., dóiecnlar Bioíogy of SNA, pp. 237-256 (1.939) ] , és a kukorica klorotikus foltosság vírus vezetője · (MQ4V, Tömmel et ai,, Firology 81, 332-385 (1951);
Della-Ciopps et al., Plánt Pávaiéi. 84, 965-968 (1987)}. A keret olyan szekvenciákat, például intronokat is tartalmazhat, amelyek fokozzák a transzlációt és/vagy a mRNS stabilitását.
Azokban az esetekben, amikor kívánatos lenne, hogy az idegen nukleoziő-szekveneía kifejeződött terméke egy meghatározott sejtszervecskére., például a plasztídokrs, amilopiasztrs vagy az endoplazmatíkus retíkulumra irányuljon, illetve a sejt felszínére vagy extraceliuiárisan kiválasztódjón, az expresszié© keret ?«. 7Ö2./B3E egy tranzit-pepiid kódoló szekvenciáját is tartalmazhatja. A tranzit-peptidek jól ismertek a szakterületen; ilyen például — nem kizárólag — az acil-karrier fehérje tran2it~peptidje, a EUBXSCO kis alegysége, a növényi EFSP-színtetáz és a hasonlók, A szakemberek számos módját ismerik egy termék egy meghatározott sejtszervecskében történő kirejeztetésének. így például az árpa «-amiláz szekvenciáját gyakran használják úgy, hogy az endoplazmatikus retíkulumban fejeződön ki a terméke [Rogers, J. Siói. Chem. 260, 3731-3738 (1985)]. A tranzit-peptidek használata jói ismert (CS 5,717,034 és 5,728,925),
Az expressziős keret elkészítésekor a különböző DNS-fragmentumokat ügy kezeljük, hogy a DNS-szekvenciák megfelelő irányultságúak és a megfelelő leolvasási keretben legyenek. Ennek érdekében adaptereket vagy linketeket alkalmazunk a DNS-fragmentamok összekapcsolásához, vagy más kezelést hajtunk végre, mint amilyen a kényelmes restrikciós helyek kialakítása, a felesleges DNS eltávolítása, restrikciós helyek -eltávolítása vagy hasonlók. Ilyen célokra az in vitro mutagenezis, a primer helyreállítás, a restrikciós emésztés, az összeolvasztás és az űjrahelyettesítési (tranzíciő és transzverzió) eljárások alkalmazhatók.
Amint említettük, találmányunk biztosit egy vektort, amely képes a szóban forgó géneket kifejeztetni egy promoter szabályozó hatása alatt. A vektornak általában növényi sejtekben kell működnie. Idővel előnyösek lehetnek az. olyan vektorok, amelyek £'. ooii-ban is működőképesek (például fehérje termelése antitestek indukálásához, DNS szekvencia-analízise, ínszertumofc szerkesztése, mennyiségek előállítása nukleínsavakből), Az E. co.lí7«.782/SS bán kifejeződő vektorokat és elkészítésük módját Sambrook és munkatársai (id. uü) kézikönyvében találhatjuk meg.
A transzformációs vektor, ami a találmány szerinti promoterszekvenciát tartalmazza működőképes módon összekapcsolva egy idegen szekvenciával egy expressziős keretben, tartalmazhatja még legalább egy gén nukieotid-szekvenciá ját a gazdaszervezet kotranszformáiása céljából. Más megoldásként a járulékos szekvencia egy másik transzformációs vektorban is bejuttatható.
A transzformációs vektorban riporteriének lehetnek jelen; az alkalmas riportergénekre számos példa van a szakirodalomban [Jefferson et alt, ín: „Plánt .Mbleouiar Síology éfeneal, pp. 133·., Gelvirt et ál., (eds.), Kluwer Academic Publishers, 1991;
DeWet et al., Hol. deli, Siói. 7, 725-737 (1987 5; Gof.f et al.,
PMBO 7. 9, 2517-2522 (1990); Kain et. al. , BioTeehnigyes 19,
850-655 (1995) és Chin et al., -Current Siói. Qf 325-330 (1996)].
A transzformáit sejtek 'vagy szövetek szelektálására alkalmas markergének is lehetnek a transzformációs vektorban. Az ilyen gének közé tartoznak az antibiotikum- és herbicid-rezisztenciát kölcsönző gének. A szelektálható- markergénekre nem. korlátozó példaként említjük az alábbiakat: kioramfeniko.l-reziszten.cia [Herrera-Estrella et al., SMBÖ ,J. 987-992 (1983)), metotrexátrezisztencia [He.rrera~Est.rel l.a et al., Natúré 303, 209-213 (1983); Meijer et al., Alant M?l. Siói. 16, 807-820 (1991)), higromicln-rezisztencia [Waidron et al., Plánt hfol. Bíol. 5, 103-103 (1985); Zhijian et al., Plánt Sci. 108, 219-227 (1995)), sz'treptomíoin-rezisztencia [Jones et al., Mól. Gén. Génét. 210, 86-91 (1987)1, szpektinomicin-rezisztencia [Bretagne-Sanard et
7S. 0.2/SS al., Tra&sgenic Pes. 5, 131-137 (1996)], bleomicin-rezisztencia (Hille et al., .Plánt Afol. Bioi. y, 171-176 (1990) ], szulfonamidrezisztencia (Guerineau et ai., Plánt Mól. Bioi. 15, 127-136 <1990)1, bromoxinii-rezisztencia [Stalker et al., Science 24.2, 419-423 (1983)}, glifozát-rezisztencla (Shaw et ah, Science
233, 478-481 (1986) j és foszfinotricin-rezisztencia [.DeBlock et ai., PMSÖ J. ő, 2513-2518 (1987)}.
A transzformáció és/vagy t.ranszfekciö módja nem kritikus a találmányunk szempontjából. Mindkét módszerhez számos eljárás áll rendelkezésünkre. Amint újabb eljárások válnak elérhetővé a növények és más gazdasejtek transzformálására, azonnal közvetlenül alkalmazhatók. Ennek megfelelően a módszerek széles választékát fejlesztették ki egy DNS-szekvenciának egy gazdasej tbe juttatására, hogy elérjék a szekvencia transzkripcióját vagy transzkripcióját és transzlációját, ami a szervezet fenotipusának megváltozásához vezet. így tehát bármely eljárás alkalmazható, ha hatásos transzformációt érhetünk el általa.
Azok az eljárások, amelyekkel expressziós vektorok juttathatók növényi szövetekbe, széles választékban állnak rendelkezésre, és a megcélzott növénynek megfelelően választhatók meg. A növények széles körének transzformálására alkalmas eljárások a
szakirodalomban vannak 1 | eírva [Miki. et al | ., „Procedu. | |
roducing | toréign DNS | lato Plánta, í: | n; „déthod |
Molecular | Bi o techn o-l-ogy | (már idézve) ; Kl< | sin et al. , |
logy 10, | 268 (1992) és | Weising et al. , | Anno. Pev. |
Xil
Bio/Techno421-477 (1988)]. így például a DNS-szerkezetek olyan technikákkal juttathatjuk be a növényi sejt genomjába, mint a mikrobelö7«.'7ü2/SK
Φ» * vés-e s szállítás [Klein et al,, Ma tűre 327, 70.....73 (1987)1, az eiektroporácíó [Fromm et al,, Proc. Nstl, Acad. .Ser. dSA 82, 58.24 (1.985)], a poiietilénglíkolos (PEG) ki-csapás (Paszkowskx et al., EM&G J. 3, 2717-2722 (1984)1, a közvetlen génbevitel (WO
85/01856 és EP 0 275 069), az ín vitro protoplaszt-transzformácíó {US 4,684,644) és a növényi protoplasztok vagy embriogén kaliusz míkroinjekciőzása [Crossway, Mól. Gén, Génét, 202, 179185 (1385)1. Sgy másik lehetőség a növényi szövet közös tenyésztése az ág'.robacta.ri:!rs twefaeí ens-szel, ahol a DNS-szerkezetet. egy kettős vektor-rendszerben helyezzük el [US 5,591,616; Ishída et al., .Natúré Blotechnoiogy 14, 745-750 (1996)], Ekkor az A.
twae-faciens virulencia-funkcíői irányítják a szerkezet ínszercíőját a növényi sejt DNS-ébe, miután a baktérium megfertőzte a sejtet [Hor-s-ch et all, Science 233, 496-498 (1984); Fraley et sí., Proc. Náfl, Acad. Ser, USA 80, 4803 (1983)].
Az olajrepce transzformálásának standard módszereit Möloney és munkatársai írták le [Plánt Cell Seports 8, 238-242' (1989)]. Gabona transzformálását. Fromm és munkatársai [Sio/leoiinoiogy 8, 833 (1990)] és Gordon-Kamm és munkatársai (id. közi.) írták le,
As Agrobaoferíum els< egyszikűt, így a kuk<
az U-S 5,550, 318 szám
>rban kéts | zikűeken s | í lkaimat) |
_cát is transzformál | tak vei | |
szabadalmi iratot). | A rizs | |
i (Plánt | J. 6, 271 | -282 (1 |
Siotechn, | 10, 239 | (1992)] |
áoad. Sca, | USA 88, | 6389 (1 |
? a rizs | fcranszform | álására |
ra.nszf ormi | íIható. A | cirok t |
76,702
Casas és munkatársai (id. közi.), illetve Wan és munkatársai íPlánt Physiol. 104, 37 (1994)] írfák le. A szója transzformálásáról számos közlemény szól,· köztük az OS 5,015, 580 számú szabadalmi irat.
Az alábbi példák az útm.utatást és illusztrálást szolgálják, de nem korlátozzák találmányunk oltalmi körét.
A SBMU20O azonosítása és koszegregálása
Egy mufator (Mu) populációból olyan növénycsaládokat válogatunk ki, amelyek növényei zömmel hímsterilek, egynek sem voltak porzói, vagy csak néhányon jelentek meg abnormális porzók, de egyben sem volt pollen. A hlmsterilítás okául feltételezzük, hogy egy Mu elem. integrálódott véletlenszerű módon egy génbe, ami a mikrosporogenezis bizonyos lépéseiért felelős, és .megzavarta annak depresszióját. Egy szegregé lódó· Fy család — amelyben a himsteril mutációt SBHu200~ként jelöljük — növényeit felneveljük és a hímfertílitás vagy sterilitás szerint osztályozzuk. Osztályonként körülbelül 20 növényről levélmintákat veszünk és izoláljuk belőlük a DNS-t,
A Mu és a sterilitás kapcsolatának igazolására Southern-analízist végzünk, ami a szakemberek által jói ismert technika. Ez a mindennapos eljárás magában foglalja a növényi DNS izolálását, restrikciós endonukleásokkal való feldarabolását, a DNS-darabok molekulatömeg szerinti frakcionálásit agarözgéien, mad átvitelüket nejlonmembránokra, hogy rögzítsük a szétválogatott DNS-t, Ezután ezeket a membránokat egy radioaktív jelöléssel ellátott .702/SS ♦ *· {32pp-dCTB~t tartalmazó) próba-fragmentummal hibridizál juk és SDS-oldattai mossuk ^Southern, J. Aöl, Bioi. .9 8, 503-517 1975)]. Egy szegregáXődö Fg SBMu2Q0 család növényeit felneveljük és hímfertilitás vagy sterilitás szerint osztályozzuk. Osztályonként körülbelül 20 növényről levélmintákat veszünk, amelyekből izoláljuk a DKS-t. Az 5 fertilís és 12 steril növényből származó DbS-t (körülbelül 7 pg) EcoRI-vei emésztjük, majd a fragmentumokat 0,75 %-os agarózgélen szétválasztjuk. Az emésztett DNS-t nejionmambránra visszük át, a membránt a Mu transzpozon agy belső fragmentumával hibridizáljuk, A membrán autórádiógramján (2. ábra) egy 5,5 kbp méretű EcoRI fragmentum kőszegregálódása látható a steril fenetípussal. Ez az EcoRI sáv szegregálóöott a fertilis növényben, ami arra utal, hogy az alléi heteroziaőta vad típusú.
Könyvtár készítése ás szűrővizsgálata
A cD^S-könyvtárak készítésének módja közismert a szakemberek körében és Sambrook és munkatársai már idézett kézikönyvében van leírva, A könyvtárakat az alábbi módon készítettük el.
Egy sterilia növényből származó DNS-t EcoRI-vei emésztünk és egy preparatív gélen megfuttatunk. Az 5,0 és 6,0 kbp közötti méretű DNS-sávokat kivágjuk a gélből, a DKS-t elefctroeiűciővai kinyerjük és etanoiial kicsapjuk. Ezt a DNS~t a Lambda Kap vektorba (Stratagene) ligáljuk a gyártó utasítása szerint. A ligáit DNS~t fágokba „csomagéijuk a Gígapack Goid (Stratagene) készlet alkalmazásával. Körülbelül 500.000 tarfoitképző egységet (BFU) ssélesztünk, majd emelünk fel nitro-cellulőz membránokra.. A membránokat az Mu8 próbával hibridizáljuk. A szűrővizsgálat harmadik körében egy tiszta kiónt kapunk. Az inszertumot plazmádként kivágjuk a fágból és SBMu20ö-3.1-nek neveztük el. A kiónból izolálunk egy PstI határoló fragmentumot és ellenőrző próbaként alkalmazzuk az eredeti EcoRI fragmentum koszgregáciős vizsgálatához. Az 5,5 kbp EcoRI fragmentum homozigóta az összes sterilig növényben, ami megerősíti, hogy a megfelelő Mu fragmentumot izoláltuk. A fér til is növények közül három bizonyult he te.ro zí góbénak az 5,5 kbp é.s egy 4,3 kbp EcoRI sávokra. A fertilís növények közül kettő volt homozigóta a 4,3 kbp Ecorl-sávra, ami feltételezhetően a vad típusé alléi..
Expressziem analízis ás a cDNS izolálása
A portok fejlődésére jellemző gének kifejeződését Northern-analízissel mutatjuk kí a mdkrosporogenezís különböző fázisaiban.. A Northern-analízis is jól ismert eljárás a szakemberek körében; hasonlít a Southern-analizishez azzal az eltéréssel, hogy nem DRS-t, hanem mWS-t Izolálunk és viszünk fel a gélre. Ezután
az Rí | 1S-t hib | rídizáljuk a | jelölt | próbáv |
ΆΓ -f- 7 tV<2 u .-i- . | Acad. Sói. ÜSA 78, | 6562-6( | >66 (19í | |
ben. | Génét. | 0 -i α q ? ις... 9 *} 4 | (1989 | ) } . Az |
Pst 1 | f raguién | t úrnőt használ | unk pr | öbának |
bán, | amit m; | ágból, éretle | n csőt | ő 1, cs |
szára | ja zó RNS- | •sel végzünk. | Csak egyetlen | |
-RNS- | ben, kö | rülbelül a a | íi kr os-po r ogene: |
~ » « »- * « * Φ * * » * * , ♦ * * ζ * (3. ábra). A transzkriptám körülbelül. 2,3 kbp hosszúságú. Ugyanezt a próbát használjuk egy másik cDNS-könyvtár szűrő-vizsgálatához, amely a meiotikustól a késői egymagvűig terjedő stádiumé portokokból származó- mRNS~ ról készült. E könyvtárból ~ amit S3Mu20Q~S.1-nek neveztünk — egy kiónt izoláltunk..
Az 38Mu2öö-3.I genom-klónt és az SBMu200-8.1 cDNS-klónt a Lofstrand Labs Ltd. s-zekvenálta Sanger és munkatársai módszerével [Proc. Ate ti, Acad. Ser. dSA 74, 5463-5467 (1977)]. A szekvenciákat a 4. és 5. ábrákon, összevetésüket a 6. ábrán mutatjuk be. A cDNS/genom összevetés 5 intron jelenlétét fedte fel a genom- kiónban. Az Mu8 inszertu® az 1. exonban van. A kodon-prefereúcia és a véletlenszerűségtől való eltérés vizsgálata minden
zíciójában egybeeső | eredményt | adott a cDNS | nagy ny | ilt |
keretével, ami val | ószínűieg | a fehérje-kő· | dőlő ny | üt |
keret. Egy vélelme. | iett Met | start kodon van a gén | om- | |
pozíciójában. A cG-f | ÍS: .homológiája a genom- | kiónnal | az | |
sotidnál kezdődik. | Sv £? *7 £5 V ·$-* iJv< övtA-U t-í | az SSMulOO—8. | I nem | egy |
teljes hosszúságú klón, mert 5 bázis hiányzik belőle a vélelmezett Met startkodon felett. Egy adatbázisban végzett kutatás jelentés homológiát mutatott ki. az élesztők, növények és emlősök P45Ö enzimei között. A 9150 enzimeket kiterjedten vizsgálták és három jellegzetes fehérje-doménjüket tárták fel. Az SBMu20ö-8.1 prediktált fehérjéje és a domének konszenzus aminosav-s-zekvenciúja összehasonlításával kimutattuk, hogy 1) a dioxi-gén-kötő do7S.702/3K » * · 4.
♦ * ¢, * ♦·<*♦ <·* mén azonossága 92 %-os; 2') a tridekapeptid {szteroidkötö} dómén azonossága 85 %-os; és 3) a -C-termináiis (hemkötő) dómén azonossága 100 %-os. Ezen túl expressziés vizsgálatot végeztünk a mikrosporcgenezis egyes stádiumaiban az SBMu200-8.1 cDNS-próbát használva. Jeleket a meiőzís 11/kvartett stádiumtól a késői egymagvű stádiumig kaptunk; a .legnagyobb jelek a korai és késői egymagvű stádiumokban jelentek meg (7. ábra).
5, példa:
A promoter és esszenciális területeinek azonosítása
Egy vélelmezett TATA-fooxot azonosítottunk primer extenziós analízissel, Ausubel és munkatársai leírása szerint (íd. mű} .
A portok-gének szabályozó területei, például a promoterok, genom-alklónokban azonosíthatók funkcíó-analízissel, amit rendszerint a riportergén expressziéjának a portok-szövetekben való megfigyelhetősége illetve a portoktól eltérő szövetekben megfigyelhető hiánya vagy csökkent megjelenése erősít meg. Annak lehetőségét, hogy a szabályozó területek a transzláció kezdő helyétől „felfelé, azaz 5'-irányban helyezkednek el, úgy vizsgáljuk, hogy egy, a területet magában foglaló DNS·-fragmentumot expressz iós vektorokba alkiónoznnk átmeneti expressziős kísérletek céljára. Várható, hogy a kisebb szubgenom~fragmentumok fogják tartalmazni azokat a szakaszokat, amelyek elengedhetetlenek a himszövet-preferálő kifejeződéshez. így például a CaMVláS és 35S promoterok esszenciális területeit nagyobb genom-darabokból származó, viszonylag kis fragmentumokban azonosították (OS
E. 3 £ £ A C \ z s> Ο·ά ? v u s? ; >
76.?í>2/BS:
f ragment umo kba n ., ·> ’*·· , . « » . »♦ > » í . ··*’ ί » -* τν* # *
A megfelelő expresszfős· vektor — amellyel a funkcionális kifejeződés vizsgálható — és az eljárás, — amellyel a vektor a gazdaszervezetbe juttatható — kiválasztása a gazdaszervezettől függ; az ilyen vektorok és eljárások jól ismertek a szakterületen. A vektorban, lévő területek magukban foglalják azokat a szakaszokat, amelyek szabályozzák a transzkripció megindulását és folyamatát az e-ukar.iótákban. Ezekhez a területekhez működőképes módon kapcsolódik egy riportergén, például az UídA, amely β—glukuronidázt (GUS) vagy iuciferázt kódol. A növényi expressziős vektorok és riportergének leírását -Grufoer és munkatársai (id. mű) kézikönyvében találhatjuk meg. A GUS expresszíós vektorok és génkeretek megvásárolhatók a Genentech-tól (Palo Alto, Ca.}, mig a luciferáz expresszíós vektorokat a Prómega Corp. (Madison, Ui.) árusítja. A Ti plazmidokat és más Agrobacterű um-vektorokat
Ishida és munkatársai (id. közi.) írták le, illetve az US 5,591,616 .számú szabadalmi, iratban, szerepelnek.
Az expresszíós vektorok, amelyek a feltételezett szabályozó területekét tartalmazzák a géhom-fragmentumokban, bejuttathatok, ép szövetekbe, például kifejlődött portokokba, illetve embriókba vagy kalluszokba. A DNS bejuttatása történhet mikroszemcsés bombázással, injektálással, eiektroporácíőval vagy Agrab&cterlw®közvetltésü génátviteliéi (Gruber et ai., id. mű; Ishida et al., id, közi,; US 5,591,616). A növényi szövetek tenyésztésének általános módszereit is a fentiekben találjuk meg.
.Az átmeneti kifejeződés vizsgálatához kifejlődött, izolált portokokat helyezünk címer-tenyésztő tápközegre [Pareddy és Petelinó, Crop Sci. c. 29, 1564-1566 (1989)], amit 0,5 % Phytagel7S.702/3K
lel (Szama, St. Looís) vagy más szilárdító adalékkal szilárdítunk meg. Az expressziős vektor DN'S-ét 5 órán belül juttatjuk be mikroszesicsés bombázással (1,2 pm átmérőjű szemcsék, 6880-7568 kPa nyomás) . A IMS bejuttatása után a portokokat 26 °C-on in kubaijuk ugyanazon a tápközegen, 17 órán át, majd teljesszövet~ho~ mogenizátumot készítünk belőlük, aminek megmérjük a GüS- vagy uc i £e r á z - a kt í vi/fc á s á t.
Az SSMuzöö valószínűsíthető transzlációs startkodon j ától félteié 1088 bp DNS van jelen az SBMu2ÖG— 3 «1 genom-klónbanEgy kialakított hool restrikciós hely segítségével az utóbbit a luciferázt és β-glukuronidázt kódoló riportergénekhez kapcsoljuk megvizsgálandó, hogy van-e ennek a DbS-fragmentómnak promoteraktivitása a növényi szövetben. Az aktivitást kimutattak a portokokban, de nem a szíklevelekfoen, gyökerekben és kalluszokban, ami portok-preferáló vagy -specifikus promoter-aktivitást jelez.
Egy valószínű TATA-boxot figyeltünk meg körülbelül 83-77' bázispárral felfelé a transzlációs startkodontól. így tehát az SBMu2C?0-3„ 1 genom-klón körülbelül 1005 bázispárt foglal magában, a lehetséges TATA-boxtől felfelé. A tipikus növényi génekben a transzkripció kezdőheíye 26-36 bázispárral a TATA-box alatt van, ami az SBMu2GÖ mKNS-hez egy körülbelül 48-58 bp hosszúságú, nem lefordítható, S'-vezető szakaszt ad. A teljes, 1088 bp hosszúságú SBMuZÖÖ szubgenom-fragmentum — amely magában foglalja a nem lefordítható vezető szakaszt, a transzkripció kezdőhelyét, a TATA-fooxot és a TATA-boxtől felfelé eső szekvenciákat — elégségesnek bizonyult a promoter-aktlvitáshoz (8. ábra, 5. számú szekvenciavázlat), Az ábrán a vélelmezett TATA-boxot (TATATCA) aláhű7S.7C2/SS * » »'♦’ /*>
, „ Ζ * » t, '«k sással jelöljük. így tehát találmányunkhoz tartozik egy, az 5. számú szekvenciáváziatban megadott (vagy azzal azonos) szekvenciajö UhS-moiekuIa, aminek hámszövet-preferáló szabályozó funkciója van.
A szabályozó terület mindkét, 5f~ és 3'-végén delécíós analízist végzünk: a fragmentumokat helyre irányított vagy PCR-mutagenezissel és hasonlókkal nyerjük. A hámszövet-preferáló szabályozó terület 3'-vége meghatározható a TATA-box közelségéből vagy szükség esetén 3-kivágásokkal. Ezután, az esszenciális terület működőképes módon egy tetszőleges promoter-maghcz kapcsolható, Ha az esszenciális területet egyszer azonosítottuk, akkor egy idegen gén kifejeződését már vezérelhet juk az SBMu200 himszövet-preferáló területével és egy promoter-maggal. A promotermag bármely ismert promoter-mag lehet, mint amilyen a karfiol mozaik vírus 35S vagy 19S promotera (US 5,352,605}, az ubikvitin promoter-mag (US 5,510,474), az IN-2 promoter-mag vagy a görvélyfa mozaik vírus promotera (Gruber et al., id, mű). A promoter előnyösen egy hímszövet-preferálő gén promoter-mag ja vagy a CaMV35S promoter-mag. Előnyösebbe:: a promoter egy hímszövet-pref erálő gén promotera, még előnyösebben az SBMuzOO promoter-mag.
A további — például iinker-szkenning-gel, egy jól ismert módszerrel végzett ..... mutációs analízissel kisebb szakaszok azonosíthatók, amelyek a portok-preferslő kifejeződéshez szükséges szekvenciákat tartalmazzák. Ezek a mutációk a működést módosíthatják, például a kifejeződés szintjét, időzitettségéc vagy a szövetet, ahol történik. A mutációk azonban némák is lehetnek, amelyeknek nincs megfigyelhető hatása.
A fenti eljárásokat használjuk az SBMuiöO promoter esszenci7Ö-.7Ö2/BS ális területeinek azonosítására, Miután a promotert a iuciferáz markér génhez kapcsoltuk, deléciós analízist végzünk a p romot érnék a TATA-boxtól felfelé eső szakaszán (9. ábra). Az oszlopdiagram ^-tengelyén a TATA-boxtől közvetlenül felfelé elhelyezkedő, megtartott bázispárok száma látható az 3·'-végnél kezdett, sorozatos levágások után. Az y~tengelyen a normalízáit luciferáz-aktivitas van megadva a teljes hosszúságú promoter aktivitásának százalékában.
Az ábrából nyilvánvaló, hogy a TATA-boxtől felfelé eső, körülbelül 176 bp hosszúságú szakasz — ha a promoter-maghoz kapcsoltuk — és az 5f nem lefordítható vezető szakasz elégséges volt az átmeneti kifejeződéshez a portokban. Ezzel szemben a lucíferáz-aktivítás minimális volt, ha a kivágást az 5' -végtől a 91. házaspárig hajtottuk végre. Ezt a 176 bázispárt a TATA-box fölött a nem lefordítható szakasszal együtt tekinthetjük a minimális promoternak, ami a lö. ábrán látható (a TATA-boxofc aláhúzás jelöli). A teljes hosszúságú promoterból kivágva a TATA-boxtől számított -176. és -92, bázispárok közötti szakaszt, az aktivitás a vad típusú promoter aktivitásának körülbelül 1 %-ára csökken. Ha a -39, - -8» szakaszt vágjuk ki, az aktivitás nem csökken nagy mértékben. így tehát a -176. — -44. bázispárok közötti szakasz egy esszenciális területet tartalmaz és egy felfelé eső fokozó elemet képez, ami portok-specifIkus kifejeződést biztosit a promoternak és ezért „portok-box^-nak neveztük el.
A portok-boxon belül, 9-10 bp-os lépésekben, linker-szkenníng analízist végzünk. A szubsztitúciók helyét a 10. ábrán, a mutánsok kifejeződését a vad típusú szekvenciához képest a 11, ?e.7Ö2/&S ábrán mutatjuk be. A portokban zajló átmeneti kifejeződésre gyakorolt, legdrasztikusabb hatást az LS12 és LSI 3 mutánsok esetében figyeltük meg (a TATA-fooxtől felfelé eső 52. és 71. bázispárok közötti szakasz). Nagyobb hatást figyeltünk meg az LS06, LSQ7, LSÖ8 és LS10 mutánsok esetében (82. és 131. .bázispárok között} ». így tehát a portokban végbemenő- átmeneti kifejeződés vad típusú intenzitásához a portok-boxon. belüli -52. — -131, területre, különösen a -52. — -71. szakaszra van szükség.
A cirok (címer RT-J?CR> és a kukorica sonlitása
Amint írtuk, az SBMu200 egy hímfertilitás-gén, amelynek mutatása him-sterí ütést eredményez. A cirokban azonosítottuk az SSMu.280 egy homológját. A cirok-SBMu2ÖO cDNS-t izoláltuk a kukorica SBMu2'ŐÖ gén primer jelnek alkalmazásával egy polimeráz láncreakcióban, ahol a cirokéímer cDNS-et használtuk terápiát ként. Az így kapott oDNS-fragmentumot a fent leírt módon szekvenáltuk, majd összehasonlítottuk a kukorica SBMu200· cDNS-ével. A nukleotid-szekvanciák 90 %-os azonosságot mutatnak (10, ábra),
A fentiekből nyilvánvaló, hogy az SBMu2C-0 gén nélkülözhetetlen a növények hímfertilitásához.
Látható tehát, hogy találmányunk végül minden célját elérte.
•?S,7ö2/BE :Iatok kői <1.10> Pioneer Hí-Bred International, Inc.
<12:0 Himfertilitást közvetítő nukieotiá-szekvenciák és alkalmazásuk <210> 1 <2ll> 1906 <212> DNS
<213> <•7 x-z - | 2ea mays (kukor Koooio saskveno ί. j. . . ib3o) , xoaz | Ica) .X 176?) |
<210> | 2 | |
<211 > | 588 | |
<212> | BRT (protein) | |
<213> | 2 e a ma y s (k.u ko r | Ica) |
<2.10 > | 3 | |
<2il> | ο | |
< z i2 | DNS | |
<213> | oorgnam s.p. len | rok) |
<22I> | módosított házi | |
<222> | (1)..(494) | |
<223> | n lehet a, t, | c, g. |
<210> | Λ íi | |
< z' 1 i > | 158 | |
<2i2> | BRT (protein) | |
<213> | Sorghum so< (ci | rok) |
óiS <22 !> MOD_RS.S (egy aminosav-maradék poszt transzlációs· .módosulása) <222> (1),.(158) <223> Xaa lehet bármely, másik vagy ismeretien aminosav-maradék
0. 702 / <211:> 1092
Ρ.·.ό> Zea maya pruKorrca;
12> DNS <213> Ze.a mavs (kukorica):
-7s6,?02/Bg/MZ ♦ φφ ΦΦΦΧ φ ΦΦ»·* ** » φ > φ * « » « X *«* Φ * * * * ♦ X φ ί Φ χφ* Φ> φφλ φ* χ »>»:
ftöiToUíA
SEQUENCE LISTISG:
<11 Ö> Plöaser Hi-Bred TnternaLIghaT, Inc,
<120> | NUCLEÖTIDE SEQUENGES M METHOD OF US ING SAME | EDI ATT | NG MALE FÉRT ILITV AND |
<130> | 1148-PGT | ||
< 14ö> <141> | 09/678,153 2000-09-26 | ||
< 160 > | 7 | ||
< 170> | PatentIn Ver. 2.1 | ||
<210> <211> <212> | 1 1906 DNA |
<213> Zea mays <220>
<221> COS <222> {:1..1638, 1642:..1767:) <400> 1 gaa ttc ggc acg agg gaa get cac ctc acg ccg gcg acg cca teg cca 48
Glu Phe Gly Thr Arg Glu Alá His Len Thr Pro Alá Thr Pro Ser Pro
5 10 15 tte t'te cca. cta gea agg cet cac aag tac atc gcg ctc ett ctg gtt 96
Phe: Phe Pro Leu Alá Gly Pro His Lys Tyr Ile Alá Leu Leu Leu Val
25 30 gtc ctc tea tgg atc ctg gtc cag agg tgg age ctg agg aag cag aaa 144
Val lett Ser Trp Ile lett Val Gin Arg Trp Ser Leu Arg Lys Gin. Lys:
40 45 ggc ccg aga tea tgg cca gtc atc ggc gea acg gtg aag cag ctg agg 192
Gly Pro Arg Ser Trp Pro Val Ile Gly Alá Thr Val Glu Gin Leu Arg
55 60 aac tac cac egg atg cac gac tgg ett gtc ggg tac ctg tea egg cac 240
Asn Tyr His Arg Met His Asp Trp Leu Val Gly Tyr Leu Ser Arg His ' 78 ' ' 75 88 agg aca gtg acc gtc gac atg ccg ttc act tcc. tac acc tac atc get 288
Arg Thr: Vai Thr Val Asp Met Pro: Thr Ser Tyr Thr Tyr Ile Alá
98 95:
gac ccg gtg aat gtc gag cat gtc ctc aag act aac ttc acc aat tac 336
Asp Pro Val Asn Val Gin His Val Leu Lys Thr Asn Phe Thr Asn Tyr
100 105 110 ccc aag gga atc gtg tac aga tcc tac atg gac gtg ctc ctc ggt gac. 384
Pro Lys Gly Ile Val Tyr Arg Ser Tyr Met Asp Val Leu Léu Gly Asp
115 120 125 ggc atc ttc aac gcc gac ggc gag ctg tgg agg aag cag agg aag acg 432
Gly Ile Phe Asn Alá Asp Gly Glu Leu Trp Arg Lys Gin Ara Lys Thr
0: 135 * ' 140 gcg agt ttc gag ttc gcc tcc aag aac ctg agg gat ttc aac gcc att 480
Alá Ser Phe Glu Phe Alá Ser Lys Asn Leu Arg Asp Phe Sér Alá Ile
1:45 150 155 < 168
gtg Val | tte Phe | aga Arg | gag Glu | tac Tyr; 165 | tcc Ser | ctg leu | aag lys | ctg leu | heg Ser 170 | ggt· Gly | © t ?! He | ctg leu | agc Ser | cag Gin 175 | gea Alá | 528 |
tcc | aag | gea' | ggc | aaa | gtt | gtg | gac | atg | cag | Cj:íia.. | ett | tac | atg | agg | atg | 576 |
Sec | lys | Alá | Gly 180 | lys | Val | Val | Asp | Met 165 | Gin | Glu | leu | Tyr | Met 190 | Arg | Met | |
acg | ctg | gac | tcc | atc | tgc | aag | gtt; | ggg· | ttc | ggg | gtc | gag | atc | ggc | acg | 624 |
Thr | let; | Asp 195 | Ser | lle | Cys | Ivs | Val 200; | Gly | Phe; | Gly | Val | Glu 2:05 | lle; | Gly | Thr | |
ctg | lég: | cea | gat | ctc | eee | gag | aac | agc | tíC | gcg | cag | gcg | ttc | gat | gce | 672 |
leu | Ser 210 | Pro | Asp | leu | Pro | Glu 215 | Asn | Ser | Phe | Alá | Gin 220 | Alá | Phe | Asp | Alá | |
gcc | aac | atc | atc | atc | acg | ctg | egg | ttc | atc | gac | ccg | ctg | tgg | ege | atc | 720 |
Alá 225 | Asn | lle | lle | 11© | Thr 230 | leu | Arg | Phe | lle | Asp 235 | Pro | Leu | Trp | Arg | lle 2;4;í} | |
aag | agg | ttc | ttc | cac | gtc | ggg | tea | gag | gcc | ctc | cta | gcg | cag | agc | atc | 768 |
Lys | Arg | Phe | lle. | HlS- 245: | Val | Gly | Ser | Glu | Kla 250 | leu | leu | Alá | Gin | Ser 255 | lle | |
aag | ctc | gtg | gac | gag | ttc | acc | tac | agc | gtg | atc | ege | egg | agg | aag | gcc | 816 |
Lys | Leu | Val | Asp 260 | Glu | Ph© | Thr | lyr | Ser 265 | Val | lle | Arg | Arg | Arg 270 | Lys | Alá | |
gag | atc | gtc | gag | gtc | egg | gce | agc | ggc | aaa | cag | gag | aag | atg | aag | cac | 864 |
Gly | lle | Val 275 | Glu | Val | Arg | Alá | Ser 280 | Gly | lys: | Gin | GlU | lys 285 | Met | lys: | HÍS | |
gac | ate | ctg | tea | egg | tte | atc | gag | ctg | ggc | gag | gcc | ggc | gac | gac | ggc | 912; |
Asp | 11© 2áO: | leu | Ser | Arg | Phe; | 11© 215 | Glu- | leu | Gly | Glu | Alá 300 | Gly | Asp | Asp | Gly | |
ggc | ggc | ttc | ggg | gac | gat | aag | 5.CJC | ©te | egg | gac | gtg | gtg | ctc | aac | ttc | 960 |
Gly 305 | Gly | Phe> | Gly | Asp | Asp 310 | lys | Ser | leu. | Arg | Asp 315 | Val | Val | leu | Asn | Phe 32 0: | |
gtg | ate | gcc | ggg | egg | gac | acg | acg | gcg | acg | acg | ctg | teg | tgg | ttc | acg | 1008 |
Val | lle | Alá | Gly | Arg 325 | Asp | Ilit | Thr | Ála | Thr 330 | Thr | leü | Ser | Trp | Phe 335 | Thr | |
cac | atg | gcc | atg | tcc | cac | ccg | gac | gtg | gcc | gag | aag | ctg | ege | ege | gag | 1056 |
HiS | Met | Alá. | Met 340 | Ser | His | Pro | Asp | Val 345 | Alá | Glu- | lys | leu | Arg 350; | Arg | Glu | |
ctg | tgc | gcg | tte | gag | gcg | gag | ege | gcg | ege | gag | gag | ggc | gtc | acg | ctc | 110;4 |
leu | Cys | Alá 355 | Phe | Glu | Alá | Glu | Arg 36ö | Alá | Arg | Glu | Glu | Gly 365 | Val | Thr | leu | |
gtg | cte: | tgc | ggc | ggc | get | gac | gcc | gac | gac | aag | gcg | tte | gcc | gcc | ege | 1152 |
Val | leu 370 | cys | Giy | Gly | Alá | Asp 375 | Alá | Asp | Asp | Lys | Alá 380 | Phe | Alá | Alá | Arg | |
gtg | gcg | cag | tte | gcg | ggc | ctc | ctc | acc | tac | gac | agc | ctc | ggc | aag | Ctg | 1:200 |
Vaí 385 | Alá | Gin | Phe | Alá | Gly 390 | leu | leu | Thr | lyr | Asp 395 | Ser | leu | Gly | lys | Leu 4« | |
gtc | tae. | ctc | cae | ggc | tgc | gtc | acc | gag | acg | ctc | cgc: | ctg: | tac | ec© | gcc | 1246 |
Val | Tyr: | leu | His | Alá 405 | Cys | Val | Thr | Glu | Thr 410· | leu | Arg | Leu | lyr | Pro 415 | Alá |
gtc Val. | cet Pro | cag Gin | gac Asp 42Θ | ecc Pro | aag Lys | ggg Gly | atc lle | ctg gag gac | gac Asp | gtg Val | ctg Leu 430 | ccg Pro | gac Asp | 1296 | ||
Leu 425 | Glu | Asp | ||||||||||||||
ggg | acg | aag | gtg | agg | gcc | gge | ggg | atg | gtg | acg | tac | gtg | ccc | tac | tcg | 1344 |
Gly | Thr | Lys | Val | Arg | Alá | Gly | Gly | Met | Val | Thr | Tyr | Val | Pro | Tyr | Ser | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
atg | ggg | cgg | atg | gag | tac | aac | tgg | gge | ccc | gac | gcg | gcg | agc | tte | cgg | 1392 |
Met | Gly | Arg | Met | Glu | Tyr | Asn | Trp | Giy | Pro | Asp | Alá | Alá | Ser | Phe | Arg | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
üCCf | gag | cgg | tgg | atc | aac | gag | gat | gge | gcg | tte | ege | aac | gcg | tcg | ccg | 1440 |
Pro | Gin | Arg | Trp | lle | Asn | Glu | Asp | Gly | Alá | Phe | Arg | Asn | A'lá | Ser | Pro | |
465 | 47Ό | 475 | 488 | |||||||||||||
tte | aag | tte | acg | gcg | tte | cag | gcg | ggg | ccg | agg | atc | tgc | ctg | gge | aag | 1488 |
Eke | Lys | Phe | Thr | Alá | Phe | Gin | Alá- | Gly | .Pro | Arg | lle | Cys | Lee | Gly | Lys | |
485 | 490 | 495 | ||||||||||||||
gac | tcg | gcg | tac | ctg | cag | atg | aag | atg | gcg | ctg | gcc | atc | ctc | ctc | ogc | 153 6 |
Asp | Ser | Alá | Tyr | Leu | Gin | Met | Lys | Met | Alá | Leu | Alá | lle | Leni | Phe | Arg | |
500 | .585 | 510 | ||||||||||||||
tte | tac | agc | tte | cgg | ctg | ctg | gag | ggg | cac | ccg | gtg | cag | tac | ege | atg | 1584 |
Eke | Tyr | Ser | Phe | Arg | Leu | Leu | Glu | Gly | Hig | Pro | Val | Gin | Tyr | Arg | Met | |
51.5 | 520 | 525 | ||||||||||||||
atg | agg' | atc | ctc | tcc | atg | gcg | cac | gge | ctc | aag | gtc | ege | gtc | cet | agg | 1632 |
Met | The | lle | Leu | Ser | Met | Alá | His | Gly | Leu | Lys | Val | Arg | Val | Ser | Arg | |
530 | 535 | 540 | ||||||||||||||
gcc | gtc | tga | tgt | cat | gge | gat | ttg | gat | atg | gat | atc | gtc | ccg | ett | aat | 1680 |
Alá | Val | Cys | His | Gly | Asp | Len | Asp | Met | Asp | Lle | Val | Pro | L:eu | Asn | ||
545 | 550 | 555 | ||||||||||||||
cca | cga | caa | ata | acg | ctc | gtg | tta | caa | att | tgc | atg | cat | gca | tgt | aag | 1728 |
Pro | Arg | Gin | 'Lle | Thr | Leu | Val | Len | Gin | I le | Gys | Met | His | Alá | Gys | Lys: | |
560 | 565 | 570 | 578 | |||||||||||||
gga | aag | cga | tgg | gtt | t ca | ttg | gtg | ggt | tgg | ett | aag | cet | taaaaactcc | 1777 | ||
Giy | Lys | Arg | Trp | Val | Ser | Leu' | Val | Alá | Tip | Leü | Lys | Pro | ||||
580 | 585 |
gtcgggtctt gcgaaceacc acatcactag tgttttgtae tctactcctc agtggaagtg 1837 tagtgacagc atacaagttc atcatatata ttatcctctt tcttaaaaaa aaaaaaaaaa 1897 aaaetegag 1906 <210> 2 <211> 588 <212> PRT <213< Zea maya <400> 2
Glu . 1 | Phe | Giy | Thr | Arg 5 | Gin. Alá | His· | Leu | Thr 18' | Pro | Alá | Thr | Pro Ser Pro 15 |
Phe | Phe | Pro | Leu | Alá | Gly Pro | His | Lys | Tyr | lle | /A. 3. η | Len | Leu Leu Val |
20 | 25 | 30' | ||||||||||
Val | Len | Ser | Trp | lle | Leu Val | Gin | Arg | Trp | Ser | Len | Arg | Lys Gin Lys |
40 45:
Gly | Pro 5:0: | Arg | Ser | Trp:: | ΡΉ | Val SS | He | Gly | Alá: | Thr | Val: 60 | Glu | Gin | leu | Arg |
Asn 65 | Tyr | fi is | Arg | 'Met | His 70 | Asp | Trp | leu | Val | Gly: < 75: | Tyr | leu | Ser | Arg | His AQ |
Arg | Thr | Val | Thr | Val 85 | Asp | Mét | Pro | Phe | Thr 90 | Ser | Tyr | Thr | Tyr | He 95 | Aia |
Asp | Pro: | Val | Asn 10© | Val | Glu. | His | Val | leu 105 | Lys | Thr | Asn | Phe | Thr 110 | Asn | Tyr |
Pro | Lys: | Gly 115 | Ile | Val | Tyr | Arg | Ser 120 | Tyr | Met | Asp | Val. | Leu 125 | Leu | Gly | Asp |
Gly | tle: 130 | Phe | Asn | Alá | Asp: | Giy 135 | Glu | leu | Trp | Arg | Lys 140 | Gin | Arg | Lys | Thr |
Aia 14:5 | Ser | Phe | Giu | Phe | Alá 15Θ | Ser | Lys | Asn | Leu | Arg 155 | A.sp | Phe | Ser | Alá | Ue 100: |
Val | Phe | Arg | Giu: | Tyr 105: | Ser | leu | iys | Leu | Ser 170 | Giy | Ile | leu | Ser | Gin 17:5 | Alá |
Ser | ly:s< | Alá | Gly ISO: | Lys· | Val | Val | AS'p: | Klet 18:5 | Gin | Giu | Len | Tyr | Met 190 | Arg | Met: |
Thr | Leu | Asp :1:9:5: | Ser | Ha | Cys | Lys | Val 200 | Gly | Phe: | Gly | Val | Glu 205 | He | Gly | Thr |
Leu | Ser 210' | Pro | Asp | leu | Pro: | Giu 215 | Asn | Ser | Phe | Alá | Gin: 22:0 | Aia | Phe | Asp | Alá |
Alá 225 | Asn | Iie | Iie: | He | Thr 228 | leu. | Arg | Phe | Il:e | Asp 235 | Pro: | leu | Trp | Arg | ίίθ 240 |
lys | Arg | Phe | Phe | His· 245 | Val | Gly | Ser | Glü | Alá 250 | Leu | Lén: | Alá | Gin | Ser 2:55: | He |
Lys: | leu | Val | Asp 2:60: | Giu | Phe | Thr | Tyr | Ser 265 | Val | He | Arg·. | Arg | Arg 270 | Lys | AH: |
GM | He | Val 2 75 | Giu | Val | Arg | •Aia | Ser 280 | Gly | lys | Gin | Glu | Ly s 2:0:5 | Méh | lys | His |
Asp | Ile 290 | Leu | Ser | Arg | Phe | Ile 295 | Glu | leu | Gly | GlU: | Aia 300: | Giy | Asp | Asp | Gly |
Gly 3:05 | Gly | Phe: | Gly | Asp | Asp 310: | Lys | Ser | leu | Arg | Asp 315 | Val | Val | len | Asn | Phe: 320 |
Val | Ile | Alá | Gly | Arg 32:5 | Asp | Thr | Thr | Alá | Thr 330 | Thr | Leu | Ser | Trp | Phe 33:5: | Thr |
His | Met | Alá | Met 3:4:0: | Ser | HLs | Pro | Asp | Val 345 | Aia | Gin | Lys: | Leu | Arg 350 | Arg | Glu |
Leu | Cys | Alá :3:5:5: | Phö: | Glu | Alá: | GiÜ: | Arg 3:60: | Alá | Arg | Glu | Gin | Gly 365 | Val | Thr | len |
Val | len 370 | Cys | Gly | Gly | Alá | Asp: 375 | Aia. | Asp | .Asp: | Lys: | Aia: 380 | Phe | Aia | Alá | Arg |
Val | Aia | Gin | Phe:: | Alá: | Gly | Leu | Leu | Thr | Tyr | Asp | Ser | Leu | Gly | Lys | Leu |
385: | 300 | 3:05: | 400 | ||||||||||||
Val | Tyr | ÁeU: | His | Ála | Cys | Val | Thr | Glu | Thr | Len | Arg | Leu | Tyr | PrO: | Alá |
405 | 410 | 415: | |||||||||||||
Val | Pro | Glh | Asp | Pro | Lys | Gly | He | Leu | Glu | Ásp | Ásp | Val | Leu | PtÖ: | Asp |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Gly | Thr | Lys | val | Arg | Alá | Sly | Gly | Met | Vai | Thr | Tyr | Val | Pro | Tyr | Ser |
435 | 44:0 | 445 | |||||||||||||
Méh | Gly | Arg | Met | Giu | Tyr | Asn | Trp | Sly | Pro | Ásp | Ála | Ála | Ser | Pha- | Arg |
45Θ | 455 | 40Θ | |||||||||||||
Pro: | Gla | Arg | Trp | Ile | Asn | Gin | Asp | siy | :Á:la | Phe | Arg | Asn | Alá | ser | Pro |
4 65 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Phe: | Ey:S:: | Bhg: | Thr | Alá | Phe | Gin | Ai-a | Gly | Pro | Arg | Hfi: | Cys | Leu | Gly | Lys: |
485 | 490 | 405 | |||||||||||||
Asp- | Ser | Ála | Tyr | Len | Gin | Met | Lys | Met | Alá | Leu | Alá | He | Leu | Phe | Atg· |
5:00 | 505: | 510 | |||||||||||||
Phe | Tyr | Ser | Phe | Arg | Leu | Leu | Glu | Gly1 | His | Pro | Val | Gin | Tyr | Arg | Met |
515: | 520 | 525 | |||||||||||||
Met | Thr | Us | Leu | Ser | Met | Ál a | His | Gly | Tea | L-y-s- | val | Arg | Val | Ser | Arg |
53Ö | 535 | 540: | |||||||||||||
Ál a | Val | Cys | His | Gly | Asp | Leu | Asp | Met | Asp | He | Val | Pro | Leu | Asn | Pro: |
545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
Árg | Gin | He | Thr | Leu | Vai | :Lea | Gin | He | Cys | Met: | Mis | A : U | Gys: | Lys | Gly: |
565 | 570 | 5:V5: | |||||||||||||
Lys | Arg | Trp | Val | Ser | Leu. | Val | .Alá | Trp | Leu | Lys | Pro | ||||
580 | 585 |
<21®> 3 <211> 494 <212> DNA <213> Sorghum sp.
<22 0>
<221> modified_base <222> (1)..(4-94) <223> η bases may be a, t, c, g, other or unknown <40O> 3
ggaattegge | ttatgccgtt | cacttcctac | a-cetacatcg | ctgacccggt | gaatgtcgag | 60 |
catgtechea | agáctá-aeht· | eaco aa ttac | cccaaggggg | acgtgtacag | ahcetaeatg | 12:0 |
gatgtgctcc | tcggtgacgg | eatattcaac | gctgacggcg | agctgtggag | gaagcagagg | 180 |
aagacggcga | gtttcgagtt | cgcctccaag | aacctgaggg | atttcagtgc | caatgttttc | 240 |
agagagtact | ccctgáagct | gtcgggcata | ctgagtcagg | catccaaggc | aggcaáagtt | 300: |
gttgacatgc· | aggaacttta | catgaggatg | acaetggact | cgatctgcaa | ngttgggttc | 30(0- |
gggctcua.ua | tcggcacgct | gtcnccggat | ctccccgagá | acagcttcnc | ccaagogfcte | 420: |
gatgccgcta | acatcatcgt | Eacnctgegg | ttcatccacc | cnctgtggcg | catccagaag | 480: |
ttctfecccn | gtea: | 494 |
<210> <2H> <212> <213> | 4 158 PRT Sorghüt | ti :S:p |
£ <220>
<221:> MGD_:RE:S <222> (1)..(153)
<223> Xaa | ittsy | be anv, | other or unfenown amino | add |
<4Q0> 4- | ||||
Met: Pro Éhe | Thr | Ser Tyr | Thr Tyr ile· Alá Asp Erő | Val Asn Val Glu |
1 | 5 | IÖ | 15: | |
His Vai Lsu | Lys | Thr Ágh | Éhe Thr Asn- Tvr Pro Lys· | Gly Asp Val Tyr |
2:0 | 25 | 30 | ||
Arg Ser Tyr | Kel | Asp Val | Leu Leu Gly Asp Giy Ile | Phe Asn Alá Asp |
35 | 45 | 45 | ||
Gly Glu Leu | Trp | Arg Lys | Gin Arg Lys Thr Aia Sér | Phe Glu Phe Alá |
50 | 55 69 | |||
Ser Lys Asn | Leu | Arg Asp | Éhe Ser Aia Asn Vai Phe | Arg Glu Tyr Ser |
63 | 70 | 75 | 80: | |
Leu L:ys: Len | Ser | Gly Ile | Leu Ser Gin Aia. Ser Lys | Aia Gly Lys Val |
85 | 95 | 95 | ||
Val Asj> Miét | Gin | Glu Len | Tyr Met Arg Met Thr· Leu | Asp Ser ile Cys |
100 | 105: | 110 | ||
Xaa Val Gly | Phe | Gly Val | Xaa Tie Giy Thr: Leu: Ser | Pro Asp Leu Pro |
115 | 120 | 125 | ||
Glu Asn Ser | Phe | Xaa Gin | Aia Phe Asp: Aia Aia Asn | Ile: He Val Thr |
130 | 135 140: | |||
Leu Arg Ebe | Ile | His: Ere | Leu Trp' Arg Ile Gin: Lys | Phe: Phe |
145· | 159 | 155: |
<21ö> 5 <211> 1092 <2:1:2> DMA <213> Zea mays <4Q:O> 5) gaattccaag cgaggccctt gtagcagaga gtgttgctga tgcagtcggc ggaaatgagt 60 gegtgctgág agcaácgctg aggggttcca gggatggcaa tggctatggc aatcggctag 120 aggtggagga caaggtggtg aggattggga gggcaaccta tggcaagttg gtgaagaggc 180 acgcaatgag agatctattc agacttacac tggatgccgc caacaaattc aacctttaga 240 ttttgatact gtcactccta cfcttatfcccfc tggt.tgggca acttccaata ggcteatgtt 300 aatcaatgat tagtgattat teagcaaata ttcttgtttg tttgacattt ataatatgtg 360 gggtgagacg gattaaatat catccatgag agctttatct tcatgctctc ttgattttgg 420 fctteagafcea t:fcc:ttt:ca:gfc gfetcacaaga afetttcteag t.ttggtcsat gtaatttttg: 48:0 aagtgaqgtt ccttaaattt cattatgett cctttettt-t ctagactagc aactgcatga 540 cttttcacfct tgggttcaca aattgactca caagaaaaca aattcacttt tgggttcaca 600 aattcctctt eaggatgtac ttttcacttg aactgtcatg tataggaaca aggaatggct 660 cagtttttaa ggaacaatgt acagatttca tttcagaact ctttctggtt ggttgagttt 720 cagacttttt gtaccaagct gatggatcac aatacttgtt tccaaagtct gataacagaa 780 actggcaact cctaattgat aataaaaaga ataaaataca gtatcagata tctcattttc 840 ttggttggca gatcacaaaa aggaacacaa aggcfcaagcc cectacttgt tcgggagtta 900 ggtcagggac accatatgaa tgaaagaaat cttaatttgg ggtcacaeca agattgtcte 960 tctcgaggtt ggggggtccc taaggttggt agtagcaata cccaatatat cacctaacaa 1020 acccaatcca tgctacatac afeacatagca tcc.atcactt gtagactgga cccttcatca 1080 agagcaceat gg 1092 <210> 6 <211> 267 <2i_> DNA <213> Zea rnays <4SS;> 6 ceccatctca ttttcttggt tggcagatea caaaaaggaa cacaaaggct aagcctccta 60: ettgttcggg agttaggtca gggacaeeat atgaafegaaa gáaatcttaa tttggggtca 120 caccaagatt gtctctctcg aggttggggg gtccctaagg ttggtagtág caatacccaa 180 tata.tca.cct aacaaaccca atccatgcta catacataca tagcatccat cacttgtaga 240 efeggáccctt' eatcaágagc· accatgg 2&l <21Ö> 7 <211> 3897 <212> DNA <213> Zea .maya <40 ö> 7 gaatt.ccaag cgaggccctt gtagcagaga gtgttgctga tgcagtcggc ggaaatgagt 60 gcgtgctgag agcaacgctg aggggttcca gggatggcaa tggetatggc aatcggctag 120 aggtggagga caaggtggtg aggattggga gggcaaccta tggcaagttg gtgaagaggc 180: acgcaatgag agatc-tattc agacttacac tggatgecgc caacaaattc aacetttaga 240
c.tttgatact gtcactccta ctttattcct tggttgggca acttccaata ggctcatgtt 30Ό aatcaatgat tagtgattat tcagcaaata ttcttgtttg tttgacattt ataatatgtg 360 gggtgagacg gattaaatat catccatgag agctttatct tcatgctcte ttgattttgg 420
t.ttcagatca tcctttcagt gttcacaaga attttctcag tttggtccat gtaatttttg 480 aagtgaggtt cettaaattt cattatgctt cctttctttt ctagactagc aactgcatga 540 cttttc-actt· tgggttcaca aattgactea c.aagaa.aaoa aattcacttt tgggttcaca: 600 aatfccctott caggatgtac fctttcacttg aactgtcatg tataggaaca aggaatggct 660 cagtttttaa'ggaacaatgt acagatfetca tetteagaaét cfettctggtt ggttgagttfc 720 cagacttttt gtaccaagct gatggatcac aatacttgtt tccaaagtct gataacagaa 780 actggcaact cetaattgat aataaaaaga ataaaataca gtatcagata tcfccattttc 840 ttggttggca gatcacaaaa aggaacacaa aggctaagcc tcctacttgt tcgggagtta 900 ggtcagggac accatatgaa tgaaagaaat etbaafcfctgg ggtcacacca agattgtctc 960 tctcgaggtt ggggggtccc feaaggttggt agfeagcaata cccaatatat cacetaacaa 1020 acccaatcca tgctacatac atacatagca tccatcactt gtagactgga .cccttcatea. 1080 agagcaccat ggaggaaget cacatcacgc cggcgacgcc atcgccattc ttcccactag 1140 cagggeetca caagtacatc gcgctcctcc tggttgtcct ctcatggatc ctggfcccaga 1200 ggtggagcct gaggaagcag aaaggcccga gatcatggcc agtcatcggt gcaacggtgg 1260 agcágctgag gaactaccac cggatgcacg acfcggcttgt cgg.gt.acctg tcacggcaca 1320 ggacagtgac cgtcgacatg ccgttcactt cctaeaccta catcgetgac ccggtgaatg 1380 tcgagoatgt cctcaagact aacttcacca attaccccaa ggtaaatgae ctgaactcac 144ű: tgatgttcag tcttcggaaa teagagcfega aagctgaate gaatgtgcct gaacaccgtg 1500 tagggaatcg tgtacagate ctacatggác gtgctcctcg gtgacggeat cttcaacgcc 1560 gaeggegage tgtggaggaa gcagaggaag acggcgagtt tegagttege ctccaagaac 1620 ctgagggatt tcagcgccat tgtgttcaga gagtactccc tgaagctgtc gggtatactg 1680:
agccaggcat ccaaggcagg caaagttgtg gacatgcagg tgagateact gctccctt.gc 1740 cattgccaac atgagcattt caacctgaga caegagagct acOttgccga ttcaggaact 1800 fetaca.tgagg afegaegetgg actccacctg caaggttggg ttcggggfccg agatcggcac 1860 gctgtcgccg gatctccccg agaacagctt cgcgcaggcg ttcgatgccg ccaacatcat 1920 cgtcacgetg eggtteateg acccgctgtg gcgcatcaag aggttcttcc aegtegggte 1980 agaggccctc ctagcgcaga gcafceaagct cgtggacgag tteaeetaca gcgtgatccg 2040 ceggaggaag gccgagatcg tcgaggcccg ggccagcggc aaacaggaga aggtacgtgc 2100:
acsatgac.tgt teegattett eagttcafccg tettggeegg gatggacctg atcctgattg 2160 attatatatc cgtgtgactt gtgaggacaa attaaaatgg gcagatgaag cacgacatcc 2220 tgtcacggtt catcgageta ggcgaggccg: gcgacgacgg eggeggette ggggacgaca 2280:
agagcct'ccg ggacgtggtg ctcaacttcg tg.afccgccgg gegggaeacg aeggegaega 2340 cgctgtcgtg gttcacgcac atggccatgt cccacecgga egtggecgag aagetgcgcc 2400 gegagctgtg egegttegag gcggagcgcg egegegagga gggcgtcgcg ctcgtgccct 2460 geggeggege tgacgccgac gacaaggcgt tcgocgcccg cgtggcgcag ttcgcgggcc 2520: tcctcaccta cgaeagcetc ggeaagctgg tctacctcca cgcctgcgtc aeegagaege 2580 tccgcctgta ccecgccgtc cctcaggfcga gcgcgcccga cacgcgacct ecggteeaga 2640 gcacagcatg cagtgagtgg acctgaatge aatgcacatg cacttgcgeg cgcgcaggac 2700 cccaagggga tcctggagga cgacgtgctg ccggacggga cgaaggtgag qgccggcggg 2760: atggtgácgt acgtgeccta ctcgátgggg cggatggagt aeaactgggg ccccgacgcg 2820 gcgagcttcc ggccggagcg gtggatcaac ga gga tgg cg cgttccgeaa cgcg-tcgccg 2880 ttcáagttca cggegttcca: ggcggqgccg aggatctgcc tgggcaagga ctcggcgtac 2240 ctgcágatgá ágatggcgct ggccatcctc ttgcgcttct acagcttccg gctgctggag 3000 gggcacccgg tgcagtaccg cgtgatgacc atcctctcca tggcgcacgg cctcaaggtc 3060 cgcgtctcta gggccgtctg atgtca-tggc gatttgggat atcát-Cccgc ttaatcctta 3120 aaaatttgca tgcatgcatg taagggaaag cgatgggttt cattggtggc ttggcttaag 3180 cettaaaaac tccgtcgggt ettgegaacc accacatcac tagtgttttg tactctac.tc 3240 etcágtggaa gtgtagtgac agcatacaag ttcateatat atatfcatcet etttettege 3300 eggatgette ccgggacctt ttggagacca ttactgacag gegtgtgaaa aaaaggcttc 3360 ttctgcggcg aagttttggg tteagagtet tggcgtct.tt gcagcagaaa aaaggtttgg 3420 aaggatctga accctgaacc gaaaatggct teggaaatat gctcgcatcg gggcggggcc 3480 gtcactcggg atgacgacaa gcccacaagc agtgagagcg áagegatett tggagtttgg 3540 ágáeactctc ggaeceetcg gegetecgcg ageteatett cgcctcetet gtcgtgtccg 3600 tggcggcaee gcgcccgccc gcctcgtgtt cgaccaaatc ccgegccccg accggttegt 3660 gtacaacaec ctcatecgcg gegecgcgcg cagtgacacg cccegggaeg ccgtatacat 3720 ctataaatea tggtattgta etttatttte aaacggcctt aacácááceá tatttttatg 3780 gtaaacacgt tcaaaattga eacaaattta aaacaggcac aaaeegtagc taaacataag 3840 ágáátgagag aeaacccaaa ggttagagat gaaataagct gagtaaaega egaatte 3897
Claims (8)
- Szabadatmi igénypontok ♦ * » » * * *A ««X * « ♦ * » *1. Növény, amelyben a hímfertilitást egy olyan. eis<T*X ♦ X X « » * * nukleotid-szekvencia kifejeződésének szabályozása, befolyásolja,. ;» « .amely az illető növényben hímfertilitást közvetít, és amely: :« ♦ ♦ ♦ β (a) egy, a 2. vagy 4. számú szekvenciával megadott aminosav*·;»,» -szekvenciát kódoló nakleotίά-szekvencia, vagy egy olyan szekvencia, amely a 2, vagy 4. számú szekvenciával megadott aminosav-szekvenciát kódoló nnkleotid-szekvenciávai erősen szigorú körülmények között hibridizál; vagy (bi egy, az I., 3. vagy 7. számú szekvenciával megadott nukieotid-szekvencía, vagy egy olyan szekvencia, amely az 1., 3. vagy 7. számú szekvenciával megadott nukleotid-szekvenciával erősen szigorú körülmények között hibridizál, vagy egy olyan szekvencia, amely az I., 3. vagy 7. számú szekvenciával legalább 70% szekvencia-azonosságot matat, ahol erősen szigorú körülmények 2XSSC-ben, 0,5 (töm../tf.) % SDS jelenlétében, 65&C-on 30 percen át végzett és megismételt mosást jalanténak,
- 2. Az 1, igénypont szerinti növény, amelyben az illető első szekvencia kifejeződése himsteriliást eredményezve el van nyomva.
- 3. A 2. igénypont szerinti növény, amelyben az első nukleotid”szekvencia kifejeződése:(aj az. első nakleotid-szekvencla mutációjával; vagy (rd egy, az első nokieoti.d~szekvenc.ia kifejeződését elnyomó második nukleotid-szekvencia beiktatásával van elnyomva.
- 4- A 3. igénypont szerinti növény, amelyben az illető második nukleotid-szekvencia az első nukleotid-szekvenciához ké— 'vrzmz/SK/muuvm Gr?pest antiszensz irányban orientált, ezáltal elnyomja annak kifei-;.:.* ,♦ jezödését.* «« « *S. Az. 1, igénypont szerinti nővény, amelyben egy 1. igény-*·ζ* « 6 « * ♦ X pontban meghatározott gént tartalmazó natív gén el van nemítva^ \ » ♦ Λ Λ egy 1. igénypontban meghatározott további szekvencia pedig egyb.* * ♦ indukálható promóterhoz van kapcsolva úgy, hogy a növény konstig. : tutivan hímsteril, és a fertilífeás a promoter redukálásával idézhető elő.€. Mag, amely egy, a következőket magában foglaló eljárással kapható·:•a) egy szelektált himfertilis szüiönövénytöl származó első mag és egy
- 5. igénypont szerinti hímsteril anyai szülőnövénybö'l szelektált második mag keresztbeporzást elősegítő szomszédságban való elvetése;(b) a magok érett növényekké való felnevelése olyan körülmények között, amelyek nem indukálják az 5, igénypont szerinti további szekvencia kifejeződését;te) a hímsteril anyai növény keresztbeporzása a himfertilis növényből származó pollennel; és (d) a magok betakarítása a hímsteril anyai növényekből.'7. Himfertilis növény, amely az 5. igénypont szerinti hímsteril növénynek egy, a hámszövetnek az 1, igénypontban meghatározott szabályozott szekvencia által való tönkretételét megakadályozó terméket produkáló gént tartalmazó növénnyel való kereszt -megtermékenyítésével, az Illető hímsteril kapott mag leszáfásával és az illető magból himfertilis növény felnevelésével kapható.8. Hímsteril növény, amely egy S. igénypont szerinti himsteril növénynek egy 5. igénypont szerinti olyan második nö~A 0 0 00 Φ *XV · * Φ Φ Α 0 0 Φ Φ· * χ«« φvénnyel való keresztezésével kapható, aminek során a második nöb.;,.* X vény az indukáld anyag hatásának van kitéve, vagyis hímfértiiisv»:** V ♦ 0 és olyan magot terem, amely olyan harmadik növénnyé nő fel*,·*·*X * » * 0 Φ amely hímsteril.0 « 0 X9. Mag, amely a 8. igénypont szerinti harmadik növénynek.'.X 0 Φ egy negyedik, himfertilis növénnyel való keresztezésével és 5s.J himfertilis növénytől való magoknak a betakarításával kapható.ID. Mag, amely egy 8. igénypont szerinti, harmadik, hímsteril növénynek egy negyedik, a kívánt gén jellegzetességet szabályzó gént tartalmazó himfertilis növénnyel való keverésével kapható.lí< Eljárás egy 5. igénypont szerinti, kívülről szabályozható hirn.ster.il it ássál rendelkező növény szaporítására, azzal jellemezve, hogy:ía) az '5. igénypont szerinti növény magvait elvetve hímsteril növényeket nevelünk;(fel kiváltjuk a fejlődő növények himfertilis formába, való átalakulását olyan körülmények között, amelyek indukálják a promótert, hogy az 5. igénypont szerinti további szekvencia az 1, igénypontban meghatározottak szerint kifejeződjön;(c) az izolációban fejlődő növényeket megtermelés céljából szabadon beporozzuk; és tó) betakarítjuk a magvakat,12. Izolált hímszövet-preferáló szabályozó régió, amely: ta) az 5. számú szekvenoiaváziattal megadott nukleotid-szekvenciát;íö) egy, az 5. számú szekvenciával legalább 70% szekvencia-azonossággal rendelkező nukieotíd-szekvenoiát;u. ne ma/mu zen Gr?♦ » «» « φ « (ej az
- 6. számú szefcvenciaváziattal megadott nukleo-tid-szekí..:.* Φ véneiá; VJ « ♦«X s (dj sz 5. vagy S< számú nakieotid-szekveneia. sgy fragffientu**fΦ κ Φ « X « mát tartalmazó hámszövet specifikus szabályozó elemed; *..» · «Φ vaay » * < * « Φ x χ Φ (ej egy, a €« számú szekvenciával erősen szigorú körülményeik. :között hibridizáiő nnkleotid-szekveneiát — ahol erősen szigorú körülmények 2X SSC-ben, 0,5 (töm./fcf.:)% SDS jelenlétében, 65öC~on 30 percen át végzett és megismételt mosást jelentenek — tartalmaz.13, A 12. igénypont szerinti szabályozó régié, amely körülbelül 130 összefüggő bázispártéi álló nukleotid-szekyenciákat tartalmaz a 7. számú szekvencia TATA-boxától számított körülbelül -38. és magasabb helyzettől npstream, ahol a TATA-boxot a 7, számú szekvencia 100.5-tói 1012.-ig terjedő nukleotidjai alkotják.
11. A 12.· igénypont szerinti szabályozó régió, amely; (aj a 7, számú szekvencia TATA borától npstream -44. hely- zettói -180 . helyzetig terjedő szekvenciát; (b) a 7. számú szekvencia TATA boxától npstream -92. hely- zettói -176 , helyzetig terjedő szekvenciát; tej a 7. számú szekvencia TATA boxától upstre-am -4 4. heiy- zettói -89. helyzetig terjedő szekvenciát; tdj a 7. számú szekvencia TATA boxától npstream -52, he.ly- zettói -131 . helyzetig terjedő szekvenciát; Get a 7. számú szekvencia TATA boxától npstream -52. hely- zettói -71, heiycetig terjedő szekvenciát; (zt a 7. számú szekvencia TATA boxától npstream -82. hely- rétiét -131 . helyzetig terjedő szekvenciát; 70, 703/ 3Z/m>rip27 2 ··gKit vagy egy, az ía) - {f) szekvenciák bármelyikével erősen szig-orjí.j.* « körülmények között hibridízáló nukleotid-szekvenciát tartaimaz\p:ΚΛ «.♦ <· ahol erősen szigorú körülmények 2X SSC-ben, 0,5 (töm./fcf, ) % Sö'S*·*M ♦ β * * ♦ jelenlétében, 65 01---00 30 percért át végzett és megismételt mosási ‘ ** jelentenek. , »· '* * ♦S-4 ♦15. Expresszíós vektor, amely egy, a 12. igénypont (c), (db : vagy (e) része szerinti hiraszovetspeciíikus szabályozó elemmel működőképesen kapcsolt promótert tartalmaz.16. A 15. igénypont szerinti expresszíós vektor, amely még egy, a promőterhöz működőképesen kapcsolt exogén gént tartalmaz.17. A 16, igénypont szerinti expresszíós vektor, amelyben a promőter a CAMV35-S, S'GBG, MS45 vagy 5126 promőter.18. A 17, igénypont szerinti expresszíós vektor, amelyben az exogén gén terméke tönkreteszi a hímszövet működését.19. Növényi sejt, amely a 15.· igénypont szerinti vektort tartalmazza.20. Eljárás himfértiirtás közvetítésére egy növényben, azzal jellemezve, hogy a növénybe transzformációval bejuttatjuk a 16, igénypont szerinti expresszíós vektort, ahol a 16. igénypontban meghatározott exogén gén befolyásolja a növény himfertilátását, és a promóterral kapcsolatban levő szabályozó elem szabályozza az exogén gén kifejeződését.21. A 2-0, igénypont szerinti eljárás, amelyben az exogén gén tönkreteszi a növény hámszövetének működését azt okozva, hogy a növény hímsterillé válik,22. · A 21. igénypont szerinti eljárás, amelyben a promóterral kapcsolatban levő szabályozó elem indukálható.23. A 22. igénypont szerinti eljárás, amelyben a növény konstítutívan himsterrl, amikor a promőter és a szabályozó elem76.7 37 /KB V -U pí >_ÖK B nincsenek, indukálva, viszont himfertílis, araikor a promoter és g,:.* <· X szabályozó elem indukálva vannak, %♦»;'♦·♦ V x £24. A 21. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez vér·* φ » ΦΦ * V hogy magában foglalja továbbá még a himsteril növény kereszt-meg~ \Λ X #.<· termékenyítését egy második növénnyel, amely második növény e^y.·, «« X olyan exogén oént tartalmas, amelynek terméke megakadályozza ;a. I hámszövetnek a 16. igénypontban meghatározott exogén gén által való tönkretételét ezzel hímfertilis növényt eredményezve.2:5. A 20-24. igénypontok bármelyike szerinti eljárással kapható növény.26. Mag, amely egy, a következőket magában foglaló eljárással kapható:(a) egy olyan első szülőnövény létrehozása, amely egy 1:2., 13, vagy 14, igénypont szerinti szabályozó régiót tartalmaz egy, a növény himfertilitását befolyásoló olyan exogén génnel működőképesen kapcsolva ágy, hogy a növény hím-steril, és egy második szülőnövény létrehozása, amely hímfertilis; és (b; az első szüiönövény és a második szülőnövény kereszt-megtermékenyitése mag termelésére.27. himsteril növény, amely egy 25. igénypont szerinti első, himsteril növénynek egy 25. igénypont szerinti második növénnyel való keresztezésével kapható, ahol a második növény ki. van téve az indukáló anyag hatásának, azaz hímfertilis, igy olyan magot terem, mely olyan harmadik növénnyé nő fal, amely hímsteril ,28. Mag, amely a 27. igénypont szerinti harmadik növénynek egy negyedik, hímfertilis növénnyel való keresztezésével és a himsteril növényből való magnak a betakarításával kapható. - 7a . 752Οϊ/ΪΑ&υΐί OO ««XX29. Mag, amely egy 27. igénypont szerinti, harmadik^.í„ ♦.hímsteril növénybői. származó magnak egy negyedik, a kívánt gtíy«| *>«
- 9 * jellegzetességet szabályzó gént tartalmazó himtertiiis növénnyé!·»* * 9 ♦ * .való keresztezésével kapható.30, Az i~10.vény vagy vetőmag.vagy 25---29, igénypontok bármelyike szerint amely kukorica növény vagy vetőmag.nü· *«x9 x 9 β «.* X*31. Izolált nukleotid-szekvencia, amely növényekben hímfartintást közvetít, és a következőket tartalmazza:<ai agy, a 2. vagy 4, számú szekvencia által megadott aminosso-szekvemciát kódoló nukleotid-szekvencia;;b! egy, a .1., 3. vagy 7. számú szekvenciával megadott nukleotid-szekvencia, vagy egy ezekkel legalább 55% szekvencia-azonosságot mutató szekvencia.32. A 31. igénypont (b) része szerinti szekvencia, amelyben a szekvencia-azonosság legalább 90% vagy 95%,33. Expressziós vektor, amely egy 31. vagy 32. igénypont szerinti DNS szekvenciát tartalmaz,34. Növényi sejt, amely a 33.. igénypont szerinti vektort tartalmazza>35. Nukleotid-szekvencia, ahogy az ATCC 98935. számon letétben szerepel.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US67015300A | 2000-09-26 | 2000-09-26 | |
PCT/US2001/029886 WO2002026789A2 (en) | 2000-09-26 | 2001-09-25 | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUP0501107A2 HUP0501107A2 (en) | 2006-06-28 |
HU228694B1 true HU228694B1 (en) | 2013-05-28 |
Family
ID=24689201
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU0501107A HU228694B1 (en) | 2000-09-26 | 2001-09-25 | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7098388B2 (hu) |
EP (1) | EP1320618B1 (hu) |
AR (2) | AR030961A1 (hu) |
AT (1) | ATE548458T1 (hu) |
AU (3) | AU2001291228B2 (hu) |
BR (1) | BR0114199A (hu) |
CA (2) | CA2760906C (hu) |
HU (1) | HU228694B1 (hu) |
MX (1) | MXPA03002572A (hu) |
WO (1) | WO2002026789A2 (hu) |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2001291228B2 (en) * | 2000-09-26 | 2007-01-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
US7517975B2 (en) * | 2000-09-26 | 2009-04-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
US7612251B2 (en) * | 2000-09-26 | 2009-11-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
CN104293826A (zh) * | 2003-12-16 | 2015-01-21 | 先锋高级育种国际公司 | 显性基因抑制性转基因及其使用方法 |
AU2011265403B2 (en) * | 2003-12-16 | 2012-07-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Dominant gene suppression transgenes and methods of using same |
US20070169227A1 (en) | 2003-12-16 | 2007-07-19 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Dominant Gene Suppression Transgenes and Methods of Using Same |
US20080244765A1 (en) * | 2004-12-16 | 2008-10-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for pollination disruption |
US7919676B2 (en) | 2007-08-03 | 2011-04-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Msca1 nucleotide sequences impacting plant male fertility and method of using same |
US7915478B2 (en) | 2007-08-03 | 2011-03-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Msca1 nucleotide sequences impacting plant male fertility and method of using same |
US7910802B2 (en) | 2007-08-03 | 2011-03-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | MSCA1 nucleotide sequences impacting plant male fertility and method of using same |
EP2257076B1 (en) * | 2009-05-28 | 2015-02-25 | Advanced Digital Broadcast S.A. | Video data signal, system and method for controlling shutter glasses |
EA201491670A1 (ru) | 2012-03-13 | 2015-07-30 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Генетическое снижение мужской репродуктивной функции у растений |
WO2013138309A1 (en) | 2012-03-13 | 2013-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genetic reduction of male fertility in plants |
BR112015023304A2 (pt) | 2013-03-14 | 2017-07-18 | Pioneer Hi Bred Int | método para melhorar a tolerância ao estresse abiótico de uma planta, planta e semente |
BR112015023700A2 (pt) | 2013-03-15 | 2017-07-18 | Pioneer Hi Bred Int | método de aprimoramento da tolerância ao estresse abiótico em uma planta de cultura agrícola , planta de milho transgênica, célula vegetal, semente, método de regulação negativa de um gene de acc oxidase endógeno em uma planta de milho. |
US20160201072A1 (en) | 2013-08-22 | 2016-07-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genome modification using guide polynucleotide/cas endonuclease systems and methods of use |
BR112017000482A2 (pt) | 2014-07-11 | 2017-11-07 | Du Pont | métodos para produzir uma planta mutante e para gerar uma planta, planta, semente, rna, métodos para produzir uma célula, para duplicar um fragmento gênico, para substituir uma primeira sequência promotora, para inserir um elemento regulador em uma sequência de nucleotídeos e para inserir um íntron em uma sequência de nucleotídeos, planta de milho e célula vegetal |
WO2016100309A1 (en) | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Restoration of male fertility in wheat |
AU2016223151A1 (en) | 2015-02-25 | 2017-08-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Composition and methods for regulated expression of a guide RNA/Cas endonuclease complex |
US11371050B2 (en) | 2015-05-15 | 2022-06-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Rapid characterization of Cas endonuclease systems, PAM sequences and guide RNA elements |
MX2018004809A (es) | 2015-10-20 | 2018-06-08 | Pionner Hi Bred Int Inc | Metodos y composiciones para la modificacion genomica exenta de marcadores. |
BR112018007796A2 (pt) | 2015-11-06 | 2018-10-30 | Du Pont | plantas de soja, partes de plantas de soja ou sementes de soja, método para selecionar uma célula de soja, métodos de seleção de uma célula de soja e de produção de um locus e molécula de ácido nucleico |
US20190161742A1 (en) | 2016-03-11 | 2019-05-30 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas9 systems and methods of use |
BR112018076027A2 (pt) | 2016-06-14 | 2019-03-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | método para modificar uma sequência-alvo no genoma de uma célula vegetal; método para editar uma sequência de nucleotídeos no genoma de uma célula vegetal; método para modificar simultaneamente múltiplas sequências-alvo no genoma de uma célula vegetal; método para modificar uma sequênciaalvo de dna no genoma de uma célula vegetal e modelo de modificação de polinucleotídeo |
US20190100745A1 (en) | 2016-06-20 | 2019-04-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas systems and methods of use |
WO2018202800A1 (en) | 2017-05-03 | 2018-11-08 | Kws Saat Se | Use of crispr-cas endonucleases for plant genome engineering |
WO2019043082A1 (en) | 2017-08-29 | 2019-03-07 | Kws Saat Se | BLUE ALEURONE ENHANCED AND OTHER SEGREGATION SYSTEMS |
BR112020007343A2 (pt) | 2017-10-13 | 2020-10-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | método para gerar um embrião de planta haploide, micrósporo embriogênico, embrioide ou tecido embriogênico, célula vegetal compreendendo um cassete de expressão, população de células vegetais |
US20220240467A1 (en) | 2019-04-18 | 2022-08-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Embryogenesis factors for cellular reprogramming of a plant cell |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5608142A (en) * | 1986-12-03 | 1997-03-04 | Agracetus, Inc. | Insecticidal cotton plants |
US5689041A (en) * | 1989-08-10 | 1997-11-18 | Plant Gentic Systems N.V. | Plants modified with barstar for fertility restoration |
US5432068A (en) * | 1990-06-12 | 1995-07-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Control of male fertility using externally inducible promoter sequences |
US5478369A (en) | 1990-06-12 | 1995-12-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
US5656531A (en) | 1993-12-10 | 1997-08-12 | Micron Technology, Inc. | Method to form hemi-spherical grain (HSG) silicon from amorphous silicon |
US5470359A (en) * | 1994-04-21 | 1995-11-28 | Pioneer Hi-Bred Internation, Inc. | Regulatory element conferring tapetum specificity |
US5837850A (en) * | 1994-04-21 | 1998-11-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Regulatory element conferring tapetum specificity |
PT787189E (pt) * | 1994-10-28 | 2005-10-31 | Pioneer Hi Bred Int | Sequencias nucleotidicas que medeiam a fertilidade masculina e metodo de utilizacao das mesmas |
US5763243A (en) * | 1994-12-08 | 1998-06-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Reversible nuclear genetic system for male sterility in transgenic plants |
US5789166A (en) * | 1995-12-08 | 1998-08-04 | Stratagene | Circular site-directed mutagenesis |
US6037523A (en) * | 1997-06-23 | 2000-03-14 | Pioneer Hi-Bred International | Male tissue-preferred regulatory region and method of using same |
AU7975598A (en) | 1997-06-23 | 1999-01-04 | Colgate-Palmolive Company, The | Microemulsion all purpose liquid cleaning compositions |
IL131095A0 (en) | 1999-07-25 | 2001-01-28 | Israel State | A method for obtaining 100% male sterile plants to serve as the female parent in hybrid seeds production |
AU2001291228B2 (en) * | 2000-09-26 | 2007-01-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
US7517975B2 (en) * | 2000-09-26 | 2009-04-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
US7612251B2 (en) * | 2000-09-26 | 2009-11-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same |
US6878531B1 (en) * | 2003-11-10 | 2005-04-12 | Medical College Of Georgia Research Institute | Method for multiple site-directed mutagenesis |
US7750207B2 (en) * | 2004-09-01 | 2010-07-06 | Monsanto Technology Llc | Zea mays ribulose bisphosphate carboxylase activase promoter |
US20060141495A1 (en) * | 2004-09-01 | 2006-06-29 | Kunsheng Wu | Polymorphic markers and methods of genotyping corn |
US7919676B2 (en) * | 2007-08-03 | 2011-04-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Msca1 nucleotide sequences impacting plant male fertility and method of using same |
-
2001
- 2001-09-25 AU AU2001291228A patent/AU2001291228B2/en not_active Ceased
- 2001-09-25 CA CA2760906A patent/CA2760906C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-25 BR BR0114199-6A patent/BR0114199A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-09-25 HU HU0501107A patent/HU228694B1/hu unknown
- 2001-09-25 AU AU9122801A patent/AU9122801A/xx active Pending
- 2001-09-25 AR ARP010104519A patent/AR030961A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-09-25 EP EP01971332A patent/EP1320618B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-25 AT AT01971332T patent/ATE548458T1/de active
- 2001-09-25 MX MXPA03002572A patent/MXPA03002572A/es active IP Right Grant
- 2001-09-25 WO PCT/US2001/029886 patent/WO2002026789A2/en active Application Filing
- 2001-09-25 CA CA2423480A patent/CA2423480C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-12-14 US US10/021,657 patent/US7098388B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-04-11 US US10/412,000 patent/US7151205B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-05-11 US US11/432,758 patent/US20060212971A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-03-12 AU AU2007201072A patent/AU2007201072C1/en not_active Ceased
-
2008
- 2008-01-02 US US11/968,557 patent/US20080134362A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-07-07 AR ARP100102457A patent/AR077402A2/es not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2760906C (en) | 2016-11-29 |
US7151205B2 (en) | 2006-12-19 |
US20020083483A1 (en) | 2002-06-27 |
HUP0501107A2 (en) | 2006-06-28 |
WO2002026789A3 (en) | 2003-02-13 |
EP1320618B1 (en) | 2012-03-07 |
CA2423480A1 (en) | 2002-04-04 |
AR030961A1 (es) | 2003-09-03 |
AU2007201072A1 (en) | 2007-03-29 |
AU2001291228B2 (en) | 2007-01-11 |
ATE548458T1 (de) | 2012-03-15 |
BR0114199A (pt) | 2006-01-31 |
WO2002026789A9 (en) | 2003-07-03 |
US20030182689A1 (en) | 2003-09-25 |
AR077402A2 (es) | 2011-08-24 |
US7098388B2 (en) | 2006-08-29 |
EP1320618A2 (en) | 2003-06-25 |
US20060212971A1 (en) | 2006-09-21 |
CA2423480C (en) | 2012-02-14 |
CA2760906A1 (en) | 2002-04-04 |
AU9122801A (en) | 2002-04-08 |
AU2007201072C1 (en) | 2010-02-11 |
AU2007201072B2 (en) | 2009-09-17 |
WO2002026789A2 (en) | 2002-04-04 |
MXPA03002572A (es) | 2004-08-12 |
US20080134362A1 (en) | 2008-06-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU228694B1 (en) | Nucleotide sequences mediating male fertility and method of using same | |
JP3143120B2 (ja) | 変更された花、種又は胚芽をもつ植物 | |
JP3595335B2 (ja) | アブラナ亜種のタペータムに特異的なプロモーター | |
JPH04504355A (ja) | ハイブリッド種子生産の分子的方法 | |
JPH02503988A (ja) | 改変雄蕊細胞を有する植物 | |
CA2193123A1 (en) | Plant virus resistance gene and methods | |
KR100505908B1 (ko) | 조건적 자성 불임을 사용하는 잡종 종자 생산 방법 | |
JP2000510342A (ja) | アポミクト種子の作成 | |
ES2211864T3 (es) | Secuencias de adnc especificas de antera, secuencias de adn genomico y secuencias de adn recombinante. | |
BG104154A (bg) | Индуциране на мъжка стерилност в растения чрез експресия на високи нива авидин | |
HU228695B1 (en) | Nucleotide sequence mediating male fertility and method of using same | |
AU5070699A (en) | Process to collect metabolites from modified nectar by insects | |
US6573428B1 (en) | Soybean promoter expressed preferentially in pods | |
AU779284B2 (en) | Method for lowering pollen fertility by using pollen-specific zinc finger transcriptional factor genes | |
JP2001517450A (ja) | 花弁特異的プロモーターおよび花弁のない花を有する植物を作出する方法 | |
JP3952246B2 (ja) | 花粉特異的ジンクフィンガー転写因子の遺伝子を用いて花粉稔性を低下させる方法 | |
WO2002078427A2 (en) | Specification of meiocyte and tapetal cell layers in plants | |
CA2373071C (en) | Tapetum-specific promoters | |
US6815577B1 (en) | Method of hybrid seed production using conditional female sterility | |
ZA200101339B (en) | Process to collect metabolites from modified nectar by insects. | |
JP2003092937A (ja) | 花粉特異的ジンクフィンガー転写因子の遺伝子を用いて花粉稔性を低下させる方法 | |
US20040158893A1 (en) | Final segregation of male meiotic products in plants | |
JP2003319780A (ja) | 花粉特異的ジンクフィンガー転写因子の遺伝子を用いて花粉稔性を低下させる方法 | |
JP2001145429A (ja) | タペート層特異的ジンクフィンガー転写因子の遺伝子を用いて花粉稔性を低下させる方法 | |
JP2007202561A (ja) | 花粉特異的ジンクフィンガー転写因子の遺伝子を用いて花粉稔性を低下させる方法 |