HU227108B1 - Eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemû anyagokban való jelenlétének kimutatására és számszerû meghatározására - Google Patents
Eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemû anyagokban való jelenlétének kimutatására és számszerû meghatározására Download PDFInfo
- Publication number
- HU227108B1 HU227108B1 HU0500591A HUP0500591A HU227108B1 HU 227108 B1 HU227108 B1 HU 227108B1 HU 0500591 A HU0500591 A HU 0500591A HU P0500591 A HUP0500591 A HU P0500591A HU 227108 B1 HU227108 B1 HU 227108B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- measurement
- measuring
- medium
- cell
- measuring cell
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 33
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 title claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims 2
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 62
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 42
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 9
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 7
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 4
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 22
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 21
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 7
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 238000002847 impedance measurement Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 3
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- YABZBTUZPWUEKP-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;azide Chemical compound [N-]=[N+]=[N-].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O YABZBTUZPWUEKP-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N Azide Chemical compound [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960001506 brilliant green Drugs 0.000 description 1
- HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N brilliant green cation Chemical compound C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000027734 detection of oxygen Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000007269 microbial metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004094 preconcentration Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002824 redox indicator Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000004832 voltammetry Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemű anyagokban való jelenlétének redoxpotenciál-mérésen alapuló kimutatására és számszerű meghatározására. A találmány alkalmazása döntően, de nem kizárólagosan az élelmiszeriparhoz kapcsolódó mikrobiológiai minőség-ellenőrzés, kutatás-fejlesztés, valamint fermentációs folyamatok nyomon követése területén várható.
A mikrobiológiai minőség-ellenőrzéssel kapcsolatos feladatok utóbbi évtizedekben való igen nagy mértékű növekedése támasztotta azt az igényt, hogy a mikroorganizmusok kimutatására szolgáló klasszikus élősejtszám-meghatározási módszereket jelentősen gyorsabb, és emellett automatizálható új vizsgálati eljárásokkal váltsák fel.
A vizsgálati idő csökkentése céljából fejlesztették ki a különböző műszeres mérési módszereket.
A módszerek egy része (ATP-mérés, turbidimetriás mérés, flow cytometriás mérés stb.) az összes mikrobaszám (élő és holt sejtek együttes száma) meghatározására alkalmas.
A műszeres mérési módszerek másik nagy csoportja az élő mikroorganizmusok jelenlétének kimutatását, illetve számuk meghatározását célozza meg, a mikrobák élettevékenységének következtében létrejött anyagcseretermékek kimutatásával, illetve az elektrokémiai jellemzők környezetbeli változásának mérésével.
Az élősejtszám gyors meghatározására napjainkban az impedancia (konduktancia) mérésen alapuló vizsgálati eljárásokat és berendezéseket széles körben használják. Ezen új módszerek előnye, hogy a klasszikus tenyésztéses élősejtszám-meghatározás 2-6 napos időigényével szemben 1-2 nap alatt szolgáltatnak eredményt, és a vizsgálatok nagymértékben automatizálhatok. A legelterjedtebb berendezések (MALTHUS, BacTrac, RABIT) működési elve megegyezik.
Az 1970-es évektől kezdődően kifejlesztett, impedimetrián alapuló gyors vizsgálati módszerek alapja, hogy a mikroorganizmusok anyagcseréjük során megváltoztatják a tápközeg összetételét, s ez a közeg elektromos ellenállásának és kapacitanciájának változását eredményezi. A tápközegbe merülő elektródákra szinuszos váltófeszültséget kapcsolva, a mérhető impedancia változása tükrözni fogja a tápközeg ellenállásának és kapacitanciájának változásait. A mikrobiális anyagcsere eredményeként általában nő a vezetőképesség és a kapacitancia, ami az impedancia (Z) csökkenéséhez vezet. Detektálva az admittancia (1/Z) értékeket az idő függvényében, eredményül egy olyan görbéhez jutunk, amely kapcsolatba hozható a vizsgált mikroorganizmusok szaporodásával. A pS egységekben kifejezett admittanciaértékeknek egy előírt mértékű változásához szükséges idő, az úgynevezett detektációs idő (TTD, Time To Detection) lineáris kapcsolatban áll a kiindulási élősejtszám logaritmusával (IgN). Meghatározva az összetartozó TTD-IgN értékek egyenletét, egy olyan kalibrációs görbéhez jutunk, amelynek alapján a kiindulási élősejt-szám meghatározható.
Az impedimetriás mérési eljárás alkalmazhatóságát az alábbi hátrányok korlátozzák.
(1) A táptalaj kezdeti impedanciáját a tápoldat összetétele határozza meg. Nagy sókoncentrációjú oldatok esetén (például Salmonella-, Listeria-szelektív táptalajok) a mikroorganizmusok szaporodása kicsi impedanciaváltozást eredményez. Ezekben az esetekben a tápközeg impedanciájának változása csak bizonytalanul mérhető.
(2) Az impedanciamérés csak a speciálisan kialakított mérőcellában végezhető el, így a minta mennyisége meghatározott, (3) A mértjei erősen hőmérséklet-érzékeny, ezért nagy pontosságú és igen költséges termosztát alkalmazását teszi szükségessé (RABIT berendezés esetén az alumínium blokk-termosztát hőmérsékletszabályozása ±0,002 °C pontosságú).
A mikroorganizmusok élettevékenysége által a környezetben okozott elektrokémiai változások (döntően redoxpotenciál-csökkenés) detektálását a XX. század első harmada óta alkalmazzák mikroorganizmusok jelenlétének kimutatására és koncentrációjuk közelítő meghatározására.
A mikroorganizmusok szaporodása csökkenti a közeg redoxpotenciálját. Ez a csökkenés általában az oxigénfogyasztás és a redukáló anyagcseretermékek felszaporodásának következménye (ADAMS, M. R. and MOSS, M. 0. Food Microbiology, The Royal Society of Chemistry, 1995. p. 27.).
A redoxpotenciál-változás kimutatása érdekében redoxindikátorokat (kezdetben metilénkéket, az 1930-as évektől rezazurint, majd az 1960-as évektől tetrazóliumsókat) adtak a vizsgálandó mintákhoz és megfigyelték a mikrobák okozta redukció miatt bekövetkező színváltozást. A módszer csak tájékoztató jellegű eredményeket adott. Főleg nyerstej mikrobiológiai minősítésében alkalmazták.
Az elektrokémiai paraméterek műszeres mérésére alapozott mikrobaszám-meghatározási eljárások az 1980-as évektől kezdtek terjedni. A mérési eljárásokat és műszaki megoldásokat az alábbi publikációk és szabadalmak jellemzik.
Tengerdy, R. P., Nagy, J. G. and Martin, B. (1967): Quantitative measurement of bacterial growth by the reduction of tetrazolium salts. Applied Microbiology 15, (4) 954-955.
Szerzők közleményükben a mikrobakoncentrációra az anyagcsere-aktivitás miatt bekövetkező TTC-redukciót jellemző vörös szín intenzitásának meghatározásával, optikai denzitást mérve következtetnek.
Nishikawa, S., Sakai, S., Karube, L, Matsunaga, T. and Suzuki, S. (1982): Dye-coupled elektródé system fór the rapid determination of cell populations in polluted water. Applied and Evironmental Microbiology 43, (4)814-818.
Szerzők a közleményükben ismertetett eljárásban üzemanyagcella típusú elektródát használtak, amelynek anódjához membránszűrt mikrobákat rögzítettek és redoxfestéket tartalmazó foszfátpufferoldatba merít2
HU 227 108 Β1 ve mérték a cellaáramot (μΑ). A mikrobaszámra az aktuális cellaáram nagyságából következtettek.
WO 80/02849 A1 (1980): Pulsed Voltammetric Detection of Microorganisms
Az eljárás az 1. főigénypont szerint oxigénfogyasztó mikroorganizmusok kimutatására pulzáló voltammetríás mérést, adott geometriájú, két elektródával ellátott elektroanalitikai mérőcellákat alkalmaz. Az adott geometriájú cella miatt a vizsgálandó minta mennyisége korlátozott. A mikrobaszuszpenziót tartalmazó, néhány ml térfogatú cellákban 600-1200 ms időtartamú,
-0,35--0,90 mV amplitúdójú feszültségimpulzusokat hoz létre és méri az ennek hatására kialakuló cellaáramot, majd a feszültségimpulzusok közötti időben a cellafeszültséget. A cellafeszültség mérési gyakorisága az elektrokémiai cella egyensúlyi potenciáljának 5 perces beállási időigénye miatt korlátozott. Mikrobák jelenlétére és koncentrációjára az oxigénfogyásra visszavezethető cellaáram-csökkenésből, illetve a cellafeszültség időbeli változásából következtet. A detektációs idő értékét a maximális értékkel normalizált cellaáram, adott mértékű (például 20 vagy 40%-os) megváltozásához szükséges idővel jellemzi. Mikrobaszám-meghatározáshoz a cellafeszültség-mérést a paraméter mikrobafajoktól függő eltérő érzékenysége miatt nem tartja megbízhatónak.
\NO 91/06670 A1 (1991) Methods of Determining Bacteria Populations Electrochemically;
WO 92/09700 A1 (1992): Methods of and Apparátus fór Determining Microorganism Populations Electrochemically;
US5254461 A (1993): Method of and Apparátus fór Determining Microorganism Populations Electrochemically.
A három dokumentum tulajdonképpen ugyanannak az eljárásnak a szabadalmaztatását jelenti, főigénypontjaik szó szerint azonosak.
A dokumentumok 1. főigénypontja tartalmazza a vizsgálandó mikroorganizmusoknak a hordozóközegtől szűréssel történő elválasztását, és az elektrokémiai mérések mikrobamentes szűrletben történő elvégzését. A mikroorganizmusok mennyiségére áramló rendszerben végzett mérésekkel, az áramló közeg elektrokémiai jellemzőinek a szeparált mikrobatömegen történő átáramlásakor bekövetkező változásából (jellemzően ΔΕ, mV) következtetnek.
Jelen találmány tárgya egy mikroorganizmusok jelenlétének kimutatására és számszerű meghatározására szolgáló, redoxpotenciál-mérésen alapuló eljárás, amely az impedanciás mérési módszereknél szélesebb körben alkalmazható, olcsóbb, valamint a hasonló célra kifejlesztett elektroanalitikai mérési módszerekhez viszonyítva jelentősen egyszerűbb mérési elrendezést és üzemeltetést igényel.
Oxigénigényük alapján a mikroorganizmusok szaporodása csak bizonyos redoxpotenciál-tartományban megy végbe, ennek megfelelően a redoxpotenciál változásának detektálásával esetenként a mikroorganizmusok jellegére (aerob, anaerob, fakultatív anaerob, aerotoleráns anaerob) is következtethetünk. Az eltérő anyagcsere-típusú mikrobacsoportok (Bacillusok, Enterobacteriumok, Coliform mikrobák, Enterococcusok stb.) jellegzetes redoxgörbéjük alakja alapján felismerhetőkké válnak. Erre az impedimetriás mérések nem adnak lehetőséget.
Az eljárás során a mikroorganizmusok anyagcsereaktivitását kísérő redoxpotenciál-változást szakaszos rendszerben, egy termosztált edényben lévő, mikrobákat tartalmazó tápközegbe merülő kombinált redoxelektródával mérjük, s a mérési eredményeket online számítógépes feldolgozással értékeljük.
A detektációs idő meghatározása a redoxpotenciál idő szerinti első differenciahányadosából történik.
A találmány tárgyát képező eljárásnál a mérőelektróda nincs szilárdan összeépítve a mikrobákat és a táplevest tartalmazó edénnyel, ezért a mérés tetszőleges méretű tartályban, különböző mennyiségű mintával, bármely folyékony tápközegben (szabványos tápleveseket is beleértve) elvégezhető. (A továbbiakban a tápközeget és a mikrobákat tartalmazó edény és a hozzá csatlakoztatott redoxelektróda együttesét mérőcellának nevezzük.) Ennek megfelelően jelen találmány a rögzített méretű, szilárdan beépített elektródájú mérőcellákkal dolgozó eljárásokkal szemben előnyösen alkalmazható. A szakaszos mérési elrendezés jelentősen egyszerűbb az áramlásos méréstechnikát alkalmazó WO 91/06670, WO 92/09700 és US5254461 dokumentumokban ismertetett folytonos rendszerű, bonyolult felépítésű berendezéseknél, nem igényli a mikrobáknak a vizsgált közegből való előzetes kiszűrését, redoxreagensek alkalmazását. Amennyiben a mikrobák membránon való előzetes koncentrálása szükséges, a mérés a mikrobákat tartalmazó membránnak a mérőcellába való helyezésével rendkívül egyszerűen megoldható. Hasonló módon szilárd halmazállapotú minták mikrobaszáma is meghatározható, amire az előzőekben bemutatott dokumentumokban leírt módszerek egyike sem alkalmas.
A mérésekben alkalmazott táplevesek redoxpotenciál-értékét a hőmérséklet ingadozása csak kismértékben befolyásolja. 1 °C hőmérséklet-emelkedés tápközegtől függően 0,5-1,5 mV csökkenést eredményez, ami messze elmarad a detektációs kritériumként előírt redoxpotenciál-változástól. Jelen találmány nem igényli az impedanciaméréshez előírt nagy pontosságú termosztátok alkalmazását, elegendő a normál mikrobiológiai gyakorlatban alkalmazott, ±0,5 °C pontosságú termosztátok, vízfürdők felhasználása a mérőcellák hőmérsékletének állandó értéken tartásához.
A találmány szerinti eljárás lényege, hogy a vizsgálni kívánt minták élősejt-számát egy erre a célra kifejlesztett, számítógép-vezérlésű, sokcsatornás redoxpotenciál-mérő rendszer és szoftver segítségével határozzuk meg.
A redoxpotenciál méréséhez kereskedelmi forgalomból beszerezhető kombinált mérőelektródokat használunk.
A moduláris felépítésű mérőrendszer a mérési igényeknek megfelelően bővíthető. Minimális csatornaszám: 4, maximális csatornaszám: egy készülékben csatorna, de szükség esetén a készülékek láncolha3
HU 227 108 Β1 tóak, így több készülék összekapcsolásával 64 (külön tápegységgel ellátott készülékek láncolásával maximum 256) csatornaszám érhető el.
Minimális kiépítésben a rendszer elemei készülékház, a következő elemekkel és funkciókkal:
- szükség szerinti számú kártyahely a bemeneti modulok fizikai fogadására,
- belső tápellátási rendszer,
- címbusz a csatornacímzéshez,
- analóg busz a transzformált analóg bemeneti jel és referenciafeszültségek multiplexeléséhez,
- analóg/digitális konverter,
- mikrokontroller a csatornakiválasztás, digitalizálás és a számítógéppel folytatott kommunikáció menedzselésére,
- 1 db 16 csatornás bemeneti modul (max. 4 modulhellyel, 16*4=64 csatornához),
- külső hálózati tápegység (adapter) a készülék tápellátásához.
A rendszer működtetéséhez szükséges egy IBMkompatibilis személyi számítógép szabványos RS232C interfésszel (COM port), vagy USB porttal, konverterkábelen keresztül. A hardver irányítás szempontjából a PC konfigurációja nem kritikus, a vezérlőés adatfeldolgozó szoftver szempontjából ajánlott minimális konfiguráció:
- P4 processzor (min. Celeron 300 MHz),
- 256 Mb RAM,
- min. 10 Gb HDD,
- CD-olvasó,
- Win2000 vagy WinXP operációs rendszer.
Elektromos jellemzők:
- analóg bemenetek (valamennyi bemenet ekvivalens):
- kombinált redox elektródok bemeneti csatlakozói: BNC,
- csatornánként független chopper-stabilizált instrumentációs bemeneti modul,
- bemeneti impedancia: >1 teraohm (1012 Ω),
- bemeneti jelszint: +1-2 V,
- max. feszültség a bemeneten: +/-12 V.
Digitális egység
- digitalizálás módja: kettős integrálású (Dual Slope) a pontosság és zajelnyomás érdekében,
- felbontás: 4,5 digit (0,1 mV),
- konverziós idő: 16 csatornára max. 3 s.
Kommunikációs egység
A kommunikáció a mérőrendszer és a PC között soros porton (RS232) keresztül történik.
Ennek protokollja:
9600 baud, no parity, 8 data bits, 1 stop bit (9600, n, 8, 1).
Hardver handshake nincs.
A PC egy STX (ASCII) parancsot küld a készüléknek és a készülék egy n-6 ASCII karakteres eredményt küld vissza válaszként (n: a csatornaszám). Konverziós idő: 16 csatornára maximum 3 s. A csatornánkénti 6 karakter jelentése sorrendben:
- előjel (+/-),
- a mért eredmény mV-ban kifejezett értékének számjegyei,
- ezres helyi érték,
- százas helyi érték,
- tízes helyi érték,
- egyes helyi érték,
- 1. tizedes helyi érték.
A vezérlés és adatfeldolgozás céljára kifejlesztett program működésének leírása
Adatgyűjtés
A program a „Mérés>Start” menüponttal történő indítás után folyamatos adatgyűjtést végez, minden mérőcsatornát kiolvas. A beolvasott adatok rögzítése csak akkor történik meg, ha a csatorna beállításai szerint ez szükséges. Az elektronika triggerelése után csatornánként 300 ms számítható várakozási időnek (a számítógép okozta csúszások és egyéb várakozási idők miatti tartalékkal). A csatornák számától függően a mintavételezés lehetséges minimális periódusideje az 1. táblázatban található.
1. táblázat
A mintavételezés lehetséges minimális periódusideje
| Csatornaszám | Mintavételezés |
| 16-ig | 5 s (16*300 ms=4800 ms) |
| 32-ig | 10 s (32*300 ms=9600 ms) |
| 64-ig | 20 s (64*300 ms=19 200 ms) |
A redoxpotenciál-mérés jellemző periódusideje 5-10 min, ezért még a 64 csatornás készülék 20 s periódusa is elfogadható.
Zajszűrés
A zajos környezetben történő adatgyűjtés támogatására bekapcsolható a simítás. Az algoritmus a forráskódban rögzített ideig (legalább 5 beolvasás ajánlott) megkapott adatok közül törli a legkisebb és legnagyobb értékeket, a maradékot (legalább 3 adat) pedig átlagolja.
Paraméterezés
Az adatgyűjtés csatornánként egyedileg paraméterezhető a 2. táblázatban foglaltak szerint
2. táblázat
Az adatgyűjtés paraméterezése
| Paraméter | Értéke |
| Mérési gyakoriság | Szabadon választható, de értéke legalább a mintavételezés periódusa legyen. |
HU 227 108 Β1
2. táblázat (folytatás)
| Paraméter | Értéke |
| Indítás | Manuális: felhasználói beavatkozás hatására azonnal. Késleltetett: az adatrögzítés késleltetése a mérés indítóparancsához képest. |
| Leállítás | Manuális: felhasználói beavatkozást igényel. Mérési idő: a beállított időintervallum eltelte után automatikusan leáll. |
Tárolás, mentés
A begyűjtött adatokat táblázatban tárolja a szoftver, amely táblázat egyben és csatornánként is elmenthető. A mentés formátuma ASCII tagolt szöveg. A tizedesjelet az operációs rendszer területi beállításai adják, így a telepített táblázatkezelő és statisztikai programokba könnyen beolvasható konverzió nélkül. A csatornánként történő mentés során az adatok értékelése is mentésre kerül. A csatornák egyedi paraméterezhetősége miatt minden esetben az adatok mellett a tárolás - mérés kezdetétől mért - relatív ideje is mentésre kerül.
Referenciaérték
A redoxpotenciál-mérés során mV értékeket mér az elektronika, melyek korrigálhatóak egy additív (például normál hidrogénelektródra vonatkozó) referenciaértékkel. A jelölés ekkor „E, mV”-ról „Eh, mV”-ra változik.
Detektációs idő számítása
A detektációs idő (TTD) az a pillanat, amikor a mért idősorban a mV értékek idő szerinti differenciahányadosa meghaladja a választott határértéket. A véletlen mérési hibák kiküszöbölése miatt beállítható, hogy több egymást követő, a határértéket meghaladó differenciahányados esetén jelölje csak az adott pontot detektációs időként.
A szoftverben beállítható paraméterek
- kritikus differenciahányados (detektációs kritérium) értéke (mV/perc),
- a kritikus értéket meghaladó mérési pontok minimálisan megkívánt száma (a pozitív mérések száma, javasolt: 3),
- értékelés kezdete (perc),
- sejtszám-határérték, amely felett a minta mikrobiológiai állapota kifogásolandó (Nkrit).
Értékelés
Az értékelés kezdete beállításával az idősor eleje nem vesz részt a számításban. A mérés elejének bizonytalanságai így kiküszöbölhetőek. A detektációs idő számított értékét (TTD) az előzetesen meghatározott kalibrációs görbe egyenletébe helyettesítve, kiszámítható a vizsgált minta mikrobaszáma.
A számított és a felhasználó által megadott sejtszámok összehasonlításából meghatározható a csatorna mérésének mikrobiológiai értékelése: elfogadható (PASSED), vagy elutasított (FAILED). Ha a számított érték eléri a felhasználó által megadott határt, az értékelés: FAILED.
Grafikus megjelenítés
A grafikus megjelenítés az egyes csatornák által mért redoxpotenciál-görbék (idő függvényében mért mV értékek) különböző csoportosítását teszi lehetővé. Az eljárásra jellemző, tipikus redoxpotenciál-görbét szemlélteti a 2. ábra.
Grafikontípusok
A következő grafikontípusok választhatóak:
- összesített: minden mérő csatorna megjelenik egyetlen közös ábrában,
- mozaik: minden csatorna önálló grafikonnal jelenik meg,
- csoportosított: kijelölt adatsorok egy grafikonon jelennek meg (maximum 4 csoport hozható létre).
A mozaik típusnál a képernyőn minden egyedi grafikonon látható a detektációs idő értéke (ha van), és annak alapján számított sejtszám, valamint a sejtszám szerinti értékelés. A mozaik elrendezésben a grafikonok színkódokkal is jelöltek az egyszerű áttekinthetőség érdekében:
- kék: futó mérés (RUNNING),
- piros: elutasított eredményű mérés (FAILED),
- zöld: elfogadott eredményű mérés (PASSED),
- szürke: befejezett mérés.
A színeket a program ini fájlban tárolja, szabadon szerkeszthetőek hexadecimális formátumban.
Fájlformátumok
A program minden esetben ASCII szöveges állományokat használ a könnyű szerkeszthetőség érdekében. A használt állományok:
- redox.ini: általános beállítások és fordítások szövegei,
- redox.eq: egyenletek a sejtszámszámításhoz,
- redox.plt: mérőprogramok listája,
- *.prg: mérőprogramok egyedi csatornákra, vagy összesítve minden csatornára. A mérőprogramok és beállítások állományainak szerkezete megegyezik a Windows INI fájlok szabványos szerkezetével.
A mentett adatok szintén szöveges állományba kerülnek:
- *.prn: egyszerű lista a csatornák legfontosabb beállításairól és adatairól. Ezek a fájlok csak adatokat tartalmaznak. Szerkezetük - a forráskód alapján is - könnyen visszafejthető, de közvetlen módosításuk nem javasolt.
- *.xls: minden ismert Excel verzió által támogatott, tabulátorral tagolt szöveges formátum, amely az összes csatorna adatait tartalmazza.
Port monitor
Az aktuális adatok folyamatos követésére beépítve található egy port monitorablak, amely a port olvasás
HU 227 108 Β1 periódusidejével frissülve minden aktív csatorna adatát megmutatja.
Ábrák felsorolása
1. ábra Redoxpotenciál-mérőcella általános kialakítása.
2. ábra Escherichia coli-mérés redoxgörbéje.
3. ábra Escherichia coli-mérések linearitása.
4. ábra Enterococcus faecalis kalibrációs görbe.
5a., 5b., 5c., 5d. ábra Víz kóliformszám mérések eredményei.
Az ábrákon általánosan alkalmazott jelölések t Idő, általában órában (h) kifejezve
Eh Normál hidrogénelektródra vonatkoztatott redoxpotenciál (mV) lgN A telepképző egységekben (cfu, colony forming units) kifejezett élősejt-szám 10-es alapú logaritmusa
TTD Detektációs idő, általában órában (h) kifejezve.
A találmány alkalmazása során, amennyiben szükséges, először a vizsgálni kívánt mikroorganizmus kalibrációs görbéjét határozzuk meg. A kalibrációs görbe ismeretében lehetőségünk van a későbbiek során a vizsgált minták élősejtszámának meghatározására.
A kalibrációs görbéhez a mérőcellában, (amelynek egy lehetséges kialakítását mutatja be az 1. ábra) lévő steril d tápoldatot beoltjuk a mintával, vagy az izolált, esetleg színtenyészetből származó mikroorganizmus szuszpenziójával, majd a cellát lezárjuk az előzetesen fertőtlenített a mérőelektródot tartalmazó c mérőfejjel. A levegőzés, illetve a képződő gázok eltávozása a b légnyíláson át biztosítható. Anaerob tenyésztés esetén a levegőztetőcsonk zárható. A beoltást a vizsgálandó minta, vagy mikroorganizmus különböző koncentrációival megismételjük. A beoltott mérőcellákat ezután megfelelő hőmérsékletre beállított termosztátba helyezzük és az elektródkábeleket csatlakoztatjuk a mérőrendszerhez. Negatív kontrollként steril táptalajt használunk. A mérőrendszer szoftveres inicializálása után elindítjuk a mérést. A mérőrendszer a folyamatosan mért értékekből felveszi a redoxpotenciál-görbéket (2. ábra) és az idő szerinti első differenciahányadosokból meghatározza a detektációs időket. A 2. ábráról meghatározott detektációs idő TTD=3,17 óra.
A mérés elindításával egyidejűleg klasszikus tenyésztéses mikrobiológiai módszerekkel (lemezöntés, szélesztés, határhígítás) meghatározzuk a vizsgált minták élősejt-számát (N, cfu/ml). A tenyésztéses élősejtszám-meghatározási módszerek jellegéből fakadóan az eredményt esetenként csak több nap elteltével kapjuk meg.
Az összetartozó TTD-IgN értékekből (3. ábra) lineáris regresszióval kiszámítjuk a kalibrációs görbe egyenletét, melyet betáplálunk a programba.
A 3. ábra adataiból számított kalibrációs görbe: lgN/100 ml=8,55-1,19-TTD (h).
Egy minta élősejt-számának meghatározásához a mikrobiológiai gyakorlatnak megfelelő előkészítés (homogénezés, hígítás, membránszűrés stb.) után ismert mennyiséget viszünk a mérőcellába, majd a kalibrációs görbe felvételénél leírt módon elvégezzük a műszeres mérést. Negatív kontrollként steril táptalajt, pozitív kontrollként a vizsgálandó mikroba ismert koncentrációjával oltott táptalajt használunk. A mérőrendszer felveszi a redoxgörbét, meghatározza a detektációs időt (ha van) és a kalibrációs görbe alapján kiszámítja a minta kezdeti élősejt-számát. Az élősejt-szám (N) ismeretében, ha a mikrobaszámra vonatkozó határértéket előzetesen betápláljuk, a rendszer dönt a minta elfogadhatóságáról (5a-5d. ábrák).
A találmány előnyösen alkalmazható a klasszikus membránszűréses élősejtszám-meghatározási módszerek helyettesítésére. Ivóvíz, üdítőitalok, ásványvizek összcsíraszámának ellenőrzésekor általában a minta több hígításából ismert mennyiséget szűrnek és a kiszűrt mikrobákat tartalmazó membránokat szilárd táptalaj felületére helyezve, kitenyésztik a mikroorganizmusokat. A különböző mértékű hígítások alkalmazásának oka, hogy a telepszámok előírás szerint csak egy bizonyos tartományban (30-300) értékelhetők megbízhatóan. Tekintettel arra, hogy kalibrációs görbefelvétel esetén jelen találmánnyal igen széles (1—106) sejtszámtartományban megbízhatóan határozható meg az élősejt-szám (3. ábra), a mintákból elegendő egyetlen membránszűrés elvégzése. A minta megfelelő mennyiségének szűrése után a membrán mérőcellába való helyezését követően a mérés a fent ismertetett módon elvégezhető és kiértékelhető.
Az 5a-5d. ábrákon 4 különböző vízminta kóliformszámának membránszűréssel meghatározott eredményei láthatók. Az eredmények értelmezése az 5a. ábrán bemutatott adatok alapján:
TTD = 8,01 óra,
IgN = -0,99,
N = 1,03-10-1 cfu/ml (a vizsgált minta 1 ml-ére vonatkozó mikrobaszám),
PASSED megfelelő a minta, a sejtszám kisebb, mint az előírt határérték.
Az 1 ml mintára vonatkoztatott eredmények 2 tizedesjegyre kerekítve az 5a. ábráról N=1,0-10-1 cfu/ml, az 5b. ábráról N=4,1-10-2 cfu/ml, az 5c. ábráról N=1,1-10-2 cfu/ml, az 5d. ábráról N=6,7-10-3 cfu/ml.
A találmány különösen előnyösen alkalmazható például ásványvizek és egyéb tápanyagszegény folyékony termékek közvetlen vizsgálatára, amikor mérőcellaként magát a terméket tartalmazó kiszerelési egységet alkalmazzuk. Ilyenkor (például palackos ásványvíz esetében) a vizsgálandó mikroorganizmus szaporodásához szükséges tápanyagokat adva a termékhez, az elektród bemerítése után a mérés elvégezhető. Az előkészítés anyagigénye minimális és viszonylag nagy (1-2 liternyi) mintamennyiség közvetlenül vizsgálható. A mérési elrendezés különösen alkalmas terméksterilitási vizsgálatok elvégzésére.
A találmány alkalmazása előnyös megoldást nyújt mindazon esetekben, ahol a minőségi előírások nem engedik meg bizonyos mikroorganizmusok (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) jelenlétét például
HU 227 108 Β1 ivóvízben, ásványvízben (null-tolerancia). Ilyenkor tételminősítésre, 5, 10, 20 minta vizsgálatára vonatkozóan is érvényes az előírás, ami a klasszikus membránszűréses vizsgálatok számát (egyúttal költségét is) erősen megnöveli. Jelen találmány alkalmazásával a vizsgálat nagymértékben egyszerűsíthető. Mivel az összes mintaelemre vonatkozik a null-tolerancia, a membránszűrőket együttesen helyezzük be egyetlen mérőcellába és úgy végezzük el a mérést.
A találmány szerinti eljárást - korlátozó jelleg nélkül -a következő kiviteli példákkal szemléltetjük.
1. példa
Enterococcus faecalis kalibrációs görbe felvétele
Enterococcus faecalis kalibrációs görbéjét víz mikrobiológiai vizsgálatok céljára vesszük fel.
Enterococcus faecalis 37 °C-os 24 órás ferde tenyészetéből 1 kémcsőnyit 10 ml fiziológiás konyhasóoldatban lemosunk. Az így készített törzsszuszpenzióból fiziológiás konyhasóoldattal tízes léptékű hígítási sort készítünk a 8. hígítási szintig. A hígítási sor tagjaiból lemezöntést végezve, 37 °C-os 48 órás tenyésztéssel meghatározzuk a törzsszuszpenzió élősejt-számát (No).
A redoxpotenciál-méréseket Azid-Dextróz tápoldatban végezzük (MERCK 1.01590), Pt-Ag/AgCI kombinált redoxelektród alkalmazásával.
A táptalajt úgy készítjük, hogy 35 g Azid portáptalajt 1000 ml ionmentes vízbe bemérünk, melegítéssel feloldjuk, 100 ml-enként a mérőcellaként használt, sterilezhető műanyag csavaros kupakkal ellátott táptalajüvegekbe adagoljuk, lezárjuk és autoklávban 121 °C-on 15 percig sterilezzük. A pH-érték 7,3±0,2.
A táptalajt sterilezés után legalább 24 órán át pihentetni kell a redoxpotenciál kiegyenlítődése céljából.
A mérés megkezdésekor aszeptikus körülmények között, a kupakot lecsavarjuk a táptalajt tartalmazó mérőcellákról és a hígítási sor 3-7. tagjaiból 1-1 ml-t a mérőcellákba pipettázunk. Beoltás után az előzetesen sterilezett mérőfejjel lezárjuk a mérőcellákat, majd azokat a 37 °C-ra beállított hőmérsékletű termosztátba helyezzük. Az elektródákat csatlakoztatjuk a mérőberendezéshez, majd elindítjuk az előzetesen inicializált mérőprogramot.
Inicializálási paraméterek:
- referenciaérték: 198 mV,
- detektációs kritérium: -1 mV/min,
- mérési időköz: 10 min,
- pozitív mérések száma: 3,
- indítás: manuális,
- értékelés kezdete: 60 min,
- leállítás: manuális.
A képernyő grafikus beállítása tetszőleges.
A különböző cellákhoz tartozó mérési eredményeket a rendszer a 2. ábrán bemutatotthoz hasonló görbék formájában jelzi ki. A képernyőről az adott hígításhoz tartozó detektációs idők leolvashatók, illetve a számítógépből előhívhatók.
A bemutatott példánál kapott adatok az alábbiak voltak:
No=1,O-1O8 cfu/ml (2 nappal a redoxmérés után megkapott eredmények)
3. táblázat
Enteroccus faecalis kalibrációs görbe adatai
| Hígítási szint | IgN/mérőcella | TTD (h) |
| 3. | 5,0 | 6,33 |
| 4. | 4,0 | 7,67 |
| 5. | 3,0 | 9,33 |
| 6. | 2,0 | 11,00 |
| 7. | 1,0 | 12,33 |
A 3. táblázatban összefoglalt adatokból a kalibrációs görbe (4. ábra) egyenletét Excel programmal határoztuk meg:
lgN/mérőcella=9,1155-0,6511 -TTD (h)
R2=0,9981
A görbe paramétereit a számítógépbe betáplálva, a mérőrendszer a továbbiakban a kalibrációs görbét Enterococcus faecalis számának meghatározására felhasználhatja.
2. példa
Sajt Escherichia coli számának meghatározása
A mérést Brillantzöld-epe-laktóz tápoldatban (BBL) végezzük (MERCK 1.05454).
A táptalajt úgy készítjük, hogy 40 g BBL portáptalajt 1000 ml ionmentes vízbe bemérünk, melegítéssel feloldjuk, 500 ml-enként táptalajüvegekbe adagoljuk és autoklávban 121 °C-on 15 percig sterilezzük. A pH-érték 7,2±0,2.
A táptalajt sterilezés után legalább 24 órán át pihentetni kell a redoxpotenciál kiegyenlítődése céljából.
A mérés megkezdésekor a táptalajt - aszeptikus körülmények között - 90 ml-enként az előzetesen sterilezett mérőcellákba adagoljuk.
A vizsgálandó sajtmintákból 10-10 g-ot steril Stomacher-zacskókba bemérünk és 90 ml steril fiziológiás konyhasóoldatot, (vagy egyéb alkalmas hígítóoldatot) öntünk hozzá. A mintákat Stomacher-berendezésben 1 percig homogenizáljuk. A képződött szuszpenzióból 10-10 ml-t a mérőcellákba pipettázunk, majd a cellákat az előzetesen sterilezett mérőfejjel lezárjuk.
Méröelektród: Pt-Ag/AgCI redoxelektród.
Pozitív kontroll 104 cfu/ml koncentrációjú E. coli szuszpenzió.
Negatív kontroll steril BBL táptalaj.
A mérőcellákat behelyezzük a megfelelő hőmérsékletű termosztátba (példánkban T=44 °C). Csatlakoztatjuk a mérőcellákat a mérőberendezéshez, és beállítjuk a megfelelő paramétereket. Inicializálási paraméterek:
- referenciaérték: 192 mV,
- detektációs kritérium: -1 mV/min,
- mérési gyakoriság: 10 min,
- pozitív mérések száma: 3,
- indítás: manuális,
HU 227 108 Β1
- értékelés kezdete: 60 min,
- leállítás: manuális,
- kalibrációs görbe: lgN/mérőcella=
5,711-0,222-TTD (h),
- kifogásolás határértéke: 100 cfu/g sajt=
100 cfu/méröcella.
A képernyő grafikus beállítása tetszőleges.
A berendezés a megadott paraméterek alapján kiszámolja a minta mikrobaszámát és az 5a-5d. ábrákon bemutatott módon jelzi, hogy a minta megfelelő (PASSED), vagy nem megfelelő (FAILED).
3. példa
Ásványvíz mezofil aerob élősejt-számának meghatározása membránszűréssel A mérést Tripton-szója tápoldatban (TSB) végezzük (MERCK 1.05459).
A táptalajt úgy készítjük, hogy 15 g TSB táptalajt 1000 ml ionmentes vízbe bemérünk, melegítéssel feloldjuk, 500 ml-enként táptalajüvegekbe adagoljuk és autoklávban 121 °C-on 15 percig sterilezzük. A pH-érték 7,3±0,2.
A táptalajt sterilezés után legalább 24 órán át pihentetni kell a redoxpotenciál kiegyenlítődése céljából.
A mérés megkezdésekor a táptalajt - aszeptikus körülmények között - 100 ml-enként az előzetesen sterilezett mérőcellákba adagoljuk.
Mérőelektród: Pt-Ag/AgCI redoxelektród.
A vizsgálandó minta 100 ml-ét 0,45 pm pórusméretű, 49 mm átmérőjű membránszűrőn átszűrjük. A membránt a mérőcellába helyezzük és az 1. példában leírt módon elindítjuk a mérést. Termosztálási hőmérséklet 30 °C.
A mérés paraméterei:
- referenciaérték: 203 mV,
- detektációs kritérium: -0,5 mV/min,
- mérési gyakoriság: 10 min,
- pozitív mérések száma: 3,
- indítás: manuális,
- értékelés kezdete: 60 min,
- leállítás: manuális,
-kalibrációs görbe egyenlete: IgN/mérőcella=8,206-0,4560-TTD (h),
- kifogásolás határértéke: 20 cfu/ml víz=
2000 cfu/membrán=2-103 cfu/mérőcella.
A képernyő beállítása tetszőleges.
Pozitív kontroll legalább 103 cfu/ml koncentrációjú vegyes szuszpenzió, membránon szűrve.
Negatív kontroll steril TSB táptalaj.
A berendezés a megadott paraméterek alapján kiszámolja a minta mikrobaszámát és az 5a-5d. ábrákon bemutatott módon jelzi, hogy a minta megfelelő (PASSED), vagy nem megfelelő (FAILED).
4. példa
Ásványvíz mezofil aerob élősejt-számának közvetlen meghatározása A mérést a 0,5 literes műanyag palackban lévő ásványvízben, 40 ml steril 187,5 g/l koncentrációjú Tripton-szója tápoldat (TSB, MERCK 1.05459). hozzáadása és elkeverése után, közvetlenül a kiszerelési egységben végezzük.
A táptalajt úgy készítjük, hogy 187,5 g TSB táptalajt 1000 ml ionmentes vízbe bemérünk, melegítéssel feloldjuk, szűréssel sterilezzük és aszeptikus körülmények között steril táptalajüvegekbe adagoljuk.
A mérés megkezdése előtt az 500 ml-nyi ásványvízből - aszeptikus körülmények között - 40 ml-t kiveszünk és helyébe 40 ml tápoldatot adagolunk. Az elektród behelyezése után az előző példák metódusa szerint indítjuk a mérést. A kifogásolási határérték számításakor figyelembe vesszük a kivett térfogat mikrobaszám-csökkentő hatását. Tekintettel arra, hogy ebben az esetben a mérőcella térfogata 500 ml, a 100 ml-es mérőcellában meghatározott kalibrációs görbét át kell számítani 500 ml térfogatra.
100 ml-es cellára meghatározott kalibrációs görbe:
lgN/100 ml=8,206-0,4560-TTD (h)
500 ml-es cellára átszámított kalibrációs görbe: lgN/500 ml=lgN/100 ml+lg5=8,905-0,4560-TTD (h) Mérőcella-térfogat: 500 ml.
Mérőelektród: Pt-Ag/AgCI redox elektród.
Termosztálási hőmérséklet 30 °C.
A mérés paraméterei:
- referenciaérték: 203 mV,
- detektációs kritérium: -0,5 mV/min,
- mérési gyakoriság: 10 min,
- pozitív mérések száma: 3,
- indítás: manuális,
- értékelés kezdete: 60 min,
- leállítás: manuális,
- kalibrációs görbe egyenlete: lgN/500 ml=
8,905-0,4560-TTD (h),
- kifogásolás határértéke: 20 cfu/ml= 20-(500-40)=9,2-103 cfu/500 ml.
A képernyő beállítása tetszőleges.
Pozitív kontroll legalább 103 cfu/ml koncentrációjú vegyes szuszpenzió hozzáadása.
Negatív kontroll steril termék, melyet az 500 ml ásványvízhez 10 ml 3%-os H2O2 hozzáadásával állítunk elő.
A berendezés a megadott paraméterek alapján kiszámolja a minta mikrobaszámát és az 5a-5d. ábrákon bemutatott módon jelzi, hogy a minta megfelelő (PASSED), vagy nem megfelelő (FAILED).
Claims (6)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemű anyagokban való jelenlétének kimutatására és számszerű meghatározására egy termosztált mérőcellában lévő, a vizsgálandó mintából származó mikrobákat tartalmazó tápoldat redoxpotenciáljának mérésével, azzal jellemezve, hogy a kimutatás és a számszerű meghatározás a redoxpotenciál idő szerinti első diffe8HU 227 108 Β1 renciahányadosának számításával, egy adott változási sebesség eléréséhez szükséges detektációs idő alapján, egy erre a célra kifejlesztett szoftveres mérő- és kiértékelőrendszer felhasználásával, automatikusan történik.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizsgálandó szilárd vagy folyékony minta ismert mennyiségét eredeti formájában adjuk a mérőcellában lévő tápoldathoz.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizsgálandó szilárd vagy folyékony minta ismert mennyiségét a mikrobiológiai vizsgálati gyakorlatnak megfelelően hígítjuk, s hígított formában adjuk a mérőcellában lévő tápoldathoz.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a folyékony vagy légnemű vizsgálandó anyagban lévő mikroorganizmusokat membránszűréssel koncentráljuk, s a membránszűrőt adjuk a mérőcellában
- 5 lévő tápoldathoz.5. Az 1. és 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a mérőcellában lévő tápoldathoz egyszerre több membránszűrőt is adunk.
- 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, 10 hogy mérőcellaként magát a vizsgálandó terméket tartalmazó eredeti kiszerelési egységet használjuk (pl. palackos ásványvizet), s a mérést tápanyag hozzáadását követően az elektród termékbe való merítésével végezzük el.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0500591A HU227108B1 (hu) | 2005-06-14 | 2005-06-14 | Eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemû anyagokban való jelenlétének kimutatására és számszerû meghatározására |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0500591A HU227108B1 (hu) | 2005-06-14 | 2005-06-14 | Eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemû anyagokban való jelenlétének kimutatására és számszerû meghatározására |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU0500591D0 HU0500591D0 (en) | 2005-08-29 |
| HUP0500591A2 HUP0500591A2 (en) | 2006-12-28 |
| HU227108B1 true HU227108B1 (hu) | 2010-07-28 |
Family
ID=89986084
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0500591A HU227108B1 (hu) | 2005-06-14 | 2005-06-14 | Eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemû anyagokban való jelenlétének kimutatására és számszerû meghatározására |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU227108B1 (hu) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017141063A1 (en) | 2016-02-17 | 2017-08-24 | Waterscope International Zrt. | Digital holographic automatic microscope with through flowing cell |
-
2005
- 2005-06-14 HU HU0500591A patent/HU227108B1/hu unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017141063A1 (en) | 2016-02-17 | 2017-08-24 | Waterscope International Zrt. | Digital holographic automatic microscope with through flowing cell |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU0500591D0 (en) | 2005-08-29 |
| HUP0500591A2 (en) | 2006-12-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sonnleitner et al. | Biomass determination | |
| US4220715A (en) | Apparatus for and method of detection of significant bacteriuria in urine samples through measurement of head space gas oxygen consumption in a closed-vial system | |
| CN102796660B (zh) | 用于水质在线监测的检测装置及水质在线监测方法 | |
| AT505306B1 (de) | Vorrichtung zur überwachung von wasser auf mikrobielle keime | |
| DE102010063033A1 (de) | Verfahren zur Inbetriebnahme eines Messgeräts | |
| CN103843184A (zh) | 生物需氧量传感器 | |
| US20040009572A1 (en) | Apparatus for the analysis of microorganisms growth and procedure for the quantification of microorganisms concentration | |
| Junker et al. | On-line and in-situ monitoring technology for cell density measurement in microbial and animal cell cultures | |
| CN205581046U (zh) | 基于微生物传感器的热带养殖水体bod在线测定装置 | |
| CN103528915A (zh) | 智能型压感式bod测定仪 | |
| EP0821231B1 (de) | Vorrichtung zur Analyse von Flüssigkeiten | |
| CN110530957A (zh) | 一种细菌耐药性电化学检测方法 | |
| HU227108B1 (hu) | Eljárás mikroorganizmusok szilárd, folyékony, légnemû anyagokban való jelenlétének kimutatására és számszerû meghatározására | |
| CN204964400U (zh) | 同时检测菌落总数和大肠菌群的多道快速检测系统 | |
| CN100455672C (zh) | 菌数测定方法、菌数测定装置及用于该装置的放置室 | |
| EP0304406B1 (en) | Apparatus for automatically counting the microorganisms possibly present in liquids, particularly in waters for human use | |
| JP2000287699A (ja) | 細菌数測定方法およびその装置 | |
| Sachse et al. | On the use of electrochemical multi-sensors in biologically charged media | |
| CN204594978U (zh) | 一种生物反应器型bod在线分析测定仪 | |
| CN203117162U (zh) | 一种快速检测大肠杆菌的一体化薄膜生物传感器 | |
| Thomas et al. | A microprocessor‐controlled photometer for monitoring microbial growth in multi‐welled plates | |
| CN204490880U (zh) | 一种血液样本培养装置 | |
| CN107843624A (zh) | 用于检测食品中菌落总数的检测装置及其检测方法 | |
| TW201226896A (en) | Microbe or cell inspection system and method thereof | |
| DE102012109026A1 (de) | Detektionsvorrichtung und Detektionsverfahren zur automatischen Bestimmung von Biomasse |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HC9A | Change of name, address |
Free format text: FORMER OWNER(S): NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU |
|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: DR. JOZWIAK AKOS, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: DR. BARANYAI LASZLO, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: DR. FELFOELDI JOZSEF, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: DR. REICHART OLIVERNE, HU Free format text: FORMER OWNER(S): DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU |
|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: DR. JOZWIAK AKOS, HU Free format text: FORMER OWNER(S): NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: DR. BARANYAI LASZLO, HU Free format text: FORMER OWNER(S): NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: DR. FELFOELDI JOZSEF, HU Free format text: FORMER OWNER(S): NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: NADASKI DAVID, HU Free format text: FORMER OWNER(S): NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU Owner name: DR. REICHART OLIVERNE, HU Free format text: FORMER OWNER(S): NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. REICHART OLIVER, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU; DR. JOZWIAK AKOS, HU; NADASKINE DR. SZAKMAR KATALIN, HU |