HU226418B1 - Photodynamic treatment and uv-b irradiation of a thrombocyte suspension - Google Patents
Photodynamic treatment and uv-b irradiation of a thrombocyte suspension Download PDFInfo
- Publication number
- HU226418B1 HU226418B1 HU0301717A HUP0301717A HU226418B1 HU 226418 B1 HU226418 B1 HU 226418B1 HU 0301717 A HU0301717 A HU 0301717A HU P0301717 A HUP0301717 A HU P0301717A HU 226418 B1 HU226418 B1 HU 226418B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- suspension
- irradiation
- platelet
- radiation
- photoactive
- Prior art date
Links
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title claims description 33
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 title description 34
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 title description 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 19
- 239000003634 thrombocyte concentrate Substances 0.000 claims description 17
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 8
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229950000688 phenothiazine Drugs 0.000 claims description 7
- WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 10H-phenothiazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3SC2=C1 WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000906 photoactive agent Substances 0.000 claims description 4
- DDGMDTGNGDOUPX-UHFFFAOYSA-N 7-methyliminophenothiazin-3-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2SC3=CC(=[NH+]C)C=CC3=NC2=C1 DDGMDTGNGDOUPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KFZNPGQYVZZSNV-UHFFFAOYSA-M azure B Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(NC)=CC=C3N=C21 KFZNPGQYVZZSNV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 125000001484 phenothiazinyl group Chemical group C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 claims 1
- KUUVQVSHGLHAKZ-UHFFFAOYSA-N thionine Chemical group C=1C=CC=CSC=CC=1 KUUVQVSHGLHAKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 14
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 10
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 7
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 6
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 6
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 6
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 6
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 5
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 description 3
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 3
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 3
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 3
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PPBOKXIGFIBOGK-BDTUAEFFSA-N bvdv Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PPBOKXIGFIBOGK-BDTUAEFFSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 2
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 description 1
- PGWTYMLATMNCCZ-UHFFFAOYSA-M azure A Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGWTYMLATMNCCZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- -1 azure dyes A Chemical class 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 235000019577 caloric intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000004546 suspension concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000000009 viral human pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0215—Disinfecting agents, e.g. antimicrobials for preserving living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0278—Physical preservation processes
- A01N1/0294—Electromagnetic, i.e. using electromagnetic radiation or electromagnetic fields
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/19—Platelets; Megacaryocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/10—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person
- A61K41/17—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person by ultraviolet [UV] or infrared [IR] light, X-rays or gamma rays
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0082—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using chemical substances
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electromagnetism (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Radiation-Therapy Devices (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás vírusok inaktiválására és leukociták elölésére trombocitaszuszpenziókban fotodinamikus kezelés és UV-B-besugárzás kombinálásával.
Ismert, hogy a vérkészítmények gyógyászati felhasználásakor fennáll annak a veszélye, hogy a vérkészítményt kapott személy vírusokkal fertőződik. Ezek közé a vírusok közé tartozik például hepatitis B és C (HBV és HBC) vírus, valamint a HÍV—1 és HIV-2 vírus; az utóbbiak az AIDS kórokozói. Ez a kockázat fokozottan lép fel, ha a készítmény előállítási műveletsorába nem iktattak be vírusinaktiváló vagy vírusmentesítő lépéseket.
A tisztított plazmafehérje-koncentrátumok (például az albumin-, Vili. faktor és IX. faktor készítmények) előállítási műveletsora mindig tartalmaz vírusinaktiváló vagy vírusmentesítő lépést, így ezek a készítmények vírusbiztosaknak minősülnek. Olyan megoldások is ismertek, amelyekkel legalább visszaszorítható a friss vérplazma beadásakor fellépő vírusfertőzés kockázata. Ilyen megoldás például a zárolt tárolás. Ebben az esetben a plazmát 3-6 hónapon keresztül mélyfagyasztva tárolják, és csak akkor adják ki felhasználásra, ha a donortól vett újabb vérminta a megismételt HBV-, HCV-, HIV-1- és HIV-2-szűrővizsgálatokban is negatívnak bizonyult. Ez a megoldás azonban sejtes vérkészítmények, például eritrocita- és trombocitakoncentrátumok esetén nem alkalmazható, mert ezek csak körülbelül 7 hétig, illetve körülbelül 5 napig tárolhatók. A sejtes vérkészítmények esetén a plazmafehérje-koncentrátumok és a plazma vírusmentesítő kezelésére alkalmasnak bizonyult oldószeres-detergenses kezelés sem használható, mert ilyen körülmények között az eritrociták és a trombociták lízist szenvednek.
Széles körben törekedtek a sejtes vérkészítmények fotodinamikus eljárással való szennyezésmentesítésére. A fotodinamikus vírusinaktiválás azon alapul, hogy a készítményt oldatban vagy szuszpenzióban egy fotoaktív anyag (azaz egy fotoszenzibilizátor) jelenlétében megvilágítják. A besugárzott fénynek olyan hullámhosszúnak kell lennie, amit a fotoaktív anyag abszorbeálni képes. Ezáltal a fotoaktív anyag aktiválódik, és aktiválódási energiáját vagy közvetlenül egy szubsztrátumra viszi át, ami ennek hatására szétroncsolódik vagy károsodik, vagy oxigénmolekuláknak adja át az aktiválódási energiát; az így képződött aktivált oxigénformák (oxigéngyökök vagy egyatomos oxigén) erős vírusölő hatással rendelkeznek. Kedvező esetben a beadagolt fotoaktív anyag a víruskomponensek (például a víruseredetű nukleinsavak) iránt nagy affinitással rendelkezik, míg a készítmény egyéb komponenseivel szembeni affinitása csekély. így a vírusok inaktiválódása során az egyéb komponensek nem változnak. Jelenleg csak a 0 491 757-B1 számú európai szabadalomban ismertetett fotodinamikus eljárást használják szélesebb körben friss plazmában lévő vírusok inaktiválására. A műszaki gyakorlatban fotoaktív anyagként elsősorban metilénkéket (egy fenotiazinszínezék) használnak. Metilénkék helyett toluidinkék is alkalmazható. A metilénkék demetilezett származékai, így az A, B és C azúrszínezék, továbbá a tionin is fotoaktív anyag, és ezek is felhasználhatók vírusok fotodinamikus inaktiválására.
Az 5 545 516 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom sejten kívüli vírusok inaktiválását ismerteti fenotiazinszínezékek és látható fény kombinált felhasználásával. Az idézett szabadalom szerint a készítményekből a fotodinamikus kezelés előtt speciális szűrő segítségével eltávolítják a leukocitákat, mert a vírusinaktiválási módszer nem éri el a sejthez kötött vírusokat és provírusokat. Ezzel a módszerrel a vérben előforduló burkolat nélküli kis vírusok, például a hepatitis A vírusok (HAV) sem inaktiválhatók. Az eljárás azonban alkalmas a lipidburkolattal rendelkező szabad vírusok, így például az AIDS-okozó HIV-1 vírusok és a hepatitis B és C vírusok (HBV, HCV) inaktiválására. A WO 00/04930 és WO 96/08965 számú nemzetközi közzétételi irat további eljárásokat ismertet biológiai mintákban lévő kórokozók inaktiválására olyan fotoaktív anyagok felhasználásával, amelyek többek között az UV-A tartományban abszorbeálnak, és az UV-A-tól a látható tartományig terjedő hullámhosszú fénnyel besugározva aktiválhatok.
A vérkészítményekben lévő leukociták UV-besugárzással elölhetők. Trombocitaszuszpenziók esetén az UV-B-besugárzás (hullámhossztartomány: 290-320 nm) bizonyult célszerűnek, mert egy 1-3 J/cm2 mértékű energiabevitel a leukocitamentesítéshez rendszerint már elegendő, ugyanakkor azonban ez az energia a trombocitákat még nem károsítja túlzott mértékben, tehát terápiásán felhasználhatóak maradnak. UV-B-besugárzással, 10 J/cm2-t meghaladó mértékű energiabevitellel már vírusölő hatás is elérhető [K. N. Prodoux, J. C. Fratanoni, E. J. Boone és R. F. Bonner: Blood 70(2), 589-592 (1987)]. Ekkor azonban a trombociták már olyan nagy mértékben károsodnak, hogy felhasználhatóságuk legalábbis kétségessé válik [J. C. Fratanoni és K. N. Prodoux: Transfusion 30(6), 480-481 (1990)].
Célul tűztük ki olyan eljárás kidolgozását, amivel a trombocitaszuszpenziókban, elsősorban a trombocitakoncentrátumokban (TK) lévő humánpatogén vírusok és leukociták hatékonyan inaktiválhatók. A trombocitakoncentrátumókát vagy differenciális centrifugálással különítik el a véradóktól levett vérből, vagy közvetlenül a véradás folyamán választják el gépi trombocitaferézissel. Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy ha a trombocitaszuszpenziókat (a trombocitakoncentrátumokat is beleértve) UV-B-besugárzással kombinálva vetjük alá fotodinamikus kezelésnek, a fotodinamikus kezeléssel elérhető vírusok hatásos Ínaktiválódása mellett a közegben lévő leukociták is elpusztulnak; ennek eredményeként kiküszöbölhető a sejthez kötött vírusokkal és provírusokkal való megfertőződés veszélye. Meglepő módon azt is tapasztaltuk, hogy a kombinált kezelés alkalmazásakor a leukociták elöléséhez szükséges UV-B-besugárzás intenzitása lényegesen kisebb lehet annál, mintha a leukociták elöléséhez kizárólag UV-B-besugárzást használnánk. Hasonlóan meglepő az a felismerésünk, hogy a fotodinamikus ke2
HU 226 418 Β1 zelés hatásossága jelentősen fokozódik, ha a trombocitaszuszpenziókat járulékosan olyan intenzitású UV-B-besugárzásnak vetjük alá, ami önmagában a vírusok inaktiválására csaknem teljesen hatástalan.
A találmány tárgya tehát eljárás trombocitaszuszpenzió kezelésére oly módon, hogy (A) a szuszpenziót 400-750 nm hullámhosszú, előnyösen 550-700 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki egy vagy több olyan fotoaktív anyag jelenlétében, amelyek az adott hullámhossztartományban egy vagy több abszorpciós maximummal rendelkeznek, és (B) a szuszpenziót 0,1-10 J/cm2 energiabevitellel egy 270-320 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki, mimellett az (A) és (B) lépést tetszőleges sorrendben és/vagy időben egymással átfedve hajtjuk végre, és a (B) lépést az ott alkalmazott besugárzás hullámhossztartományában abszorpciós maximummal rendelkező fotoaktív anyag távollétében végezzük.
Fotoaktív anyagokként előnyösen fenotiazinszínezékeket, célszerűen tionint, metilénkéket, toluidinkéket és/vagy A, B és C azúrszínezéket használhatunk.
Az (A) lépésben a fotoaktív anyagot előnyösen 0,5-10 pmol, célszerűen 0,5-5 μίτιοΙ koncentrációban használhatjuk.
A (B) lépésben a besugárzás intenzitását előnyösen úgy választjuk meg, hogy a trombocitakoncentrátumban lévő T-limfociták proliferációképessége legalább 50%-kal, célszerűen több mint 75%-kal csökkenjen.
A (B) lépésben az energiabevitel 0,1-10 J/cm2, előnyösen 0,5-3 J/cm2 lehet.
A (B) lépésben a szuszpenziót előnyösen 290-320 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki.
Trombocitaszuszpenzióként előnyösen trombocitakoncentrátumot használunk. A trombocitaszuszpenzió vagy trombocitakoncentrátum például véradótól levett vérből utólag elkülönített anyag vagy trombocitaforézissel elkülönített anyag lehet.
Egy előnyös megoldás szerint az (A) lépés és/vagy a (B) lépés során a szuszpenziót a mindenkori sugárzást átbocsátó műanyag tartályban kezeljük. Ez a műanyag tartály például átáramoltatókészülék is lehet.
A találmány szerinti kezeléssel a szuszpenzió víruskoncentrációját 10-es alapú logaritmusos skálán véve előnyösen legalább 5, célszerűen legalább 6 egységgel csökkentjük.
Egy további előnyös megoldás szerint a találmány tárgya eljárás trombocitaszuszpenzió kezelésére oly módon, hogy (A) a szuszpenziót 400-750 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki egy vagy több olyan fotoaktív anyag jelenlétében, amelyek az adott hullámhossztartományban egy vagy több abszorpciós maximummal rendelkeznek, és (B) a szuszpenziót 0,1-3 J/cm2 energiabevitellel egy 270-320 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki, mimellett az (A) és (B) lépést tetszőleges sorrendben és/vagy időben egymással átfedve hajtjuk végre.
A trombocitaszuszpenzió koncentrációja előnyösen 5*10® trombocita/ml-nél nagyobb, különösen előnyösen 109 trombocita/ml-nél nagyobb lehet. A trombociták például plazmában vagy tetszőleges plazmatartalmú trombocita-tárolóközegben szuszpendálhatók.
A találmány szerinti eljárás (A) lépésében a trombocitaszuszpenziót fotodinamikus kezelésnek vetjük alá úgy, hogy fotoaktív anyag jelenlétében látható fénnyel besugározzuk; míg a (B) lépésben a készítményt - azaz a trombocitákat tartalmazó szuszpenziót - az UV-B tartományba eső hullámhosszú fénnyel sugározzuk be. A leírásban az UV-B tartományba eső hullámhosszon a 270-330 nm-es hullámhossztartományt értjük.
A beadagolt fotoaktív anyag koncentrációját, valamint a megvilágítással és az UV-B tartományba eső hullámhosszú fénnyel való besugárzással bevitt energia mennyiségét úgy választjuk meg, hogy az adott esetben jelen lévő vírusok inaktiválódjanak, és a trombocitaszuszpenzióban lévő leukociták elpusztuljanak, ugyanakkor azonban a trombociták funkcióképesek maradjanak.
A trombocitaszuszpenziók kezelését az UV-B fényt áteresztő tartályokban végezhetjük. Ezek a tartályok előnyösen műanyag tartályok lehetnek, és alakjuk például tasakszerű lehet. Más megoldás szerint a fotodinamikus kezelést és az UV-B-besugárzást külön tartályokban végezhetjük.
Eljárhatunk úgy is, hogy a trombocitaszuszpenziót akkor kezeljük UV-B fénnyel, amikor a szuszpenziót az egyik tartályból egy másik tartályba töltjük át.
Fotoaktív anyagokként például fenotiazinszínezékeket, így metilénkéket, azúr A-t, B-t vagy C-t vagy tionint használhatunk. A találmány értelmében azonban a szakirodalomban ismertetett (például vérkészítményekben lévő vírusok inaktiválására javasolt) más fotoaktív anyagokat is használhatunk az ott megadott koncentrációkban. A fenotiazinszínezékek (például a tionin) koncentrációtartománya előnyösen körülbelül 0,1-10 pmol, célszerűen körülbelül 0,5-5 pmol vagy 1-5 pmol lehet.
A fotodinamikus kezeléshez - elsősorban akkor, ha tionint használunk - fényforrásként előnyösen kisnyomású nátriumgőzlámpákat használhatunk, amelyek fénykibocsátási maximuma az 590 nm-es hullámhossz körül van. Ez közelítőleg megfelel a tionin abszorpciós maximumának, ami vizes oldatban 595 nm körüli érték. A találmány szerint azonban más fényforrásokat is felhasználhatunk, különösen akkor, ha olyan fotoaktív anyagokat alkalmazunk, amelyek például a tioninétól eltérő hullámhossztartományban abszorbeálnak.
Az UV-B-besugárzáshoz olyan speciális csöveket, lámpákat vagy lézert használhatunk, amelyek körülbelül 270-330 nm hullámhossztartományú ultraibolya fényt bocsátanak ki. Az UV-B-besugárzással bevitt energia mértéke 0,1-10 J/cm2, előnyösen 0,3-6 J/cm2, célszerűen 0,5-3 J/cm2 lehet.
HU 226 418 Β1
A találmány további részleteit a következőkben ismertetendő kísérletekkel és azok eredményeivel szemléltetjük.
A kísérletek általános ismertetése
A következőkben ismertetendő kísérleteket egyedi véradóktól izolált, vérplazmában szuszpendált trombocitakoncentrátumokon végeztük. Fotoaktív anyagként tionint használtunk, amit a kísérletekben esetenként Th-val jelölünk. Megjegyezzük azonban, hogy más fotoaktív anyagok (például metilénkék és származékai, azaz Azúr A, B és C) használatakor is hasonló eredmények érhetők el.
Anyagok és módszerek
A kísérletekhez felhasznált trombocitakoncentrátumokat trombocitarotátorokban tároltuk legfeljebb 5 napig. A tárolóedények kereskedelmi forgalomban kapható PVC-tasakok voltak. A fotodinamikus kezelés és UV-B-kezelés céljára a trombocitakoncentrátumokat UV-B-áteresztő poliolefinből készült műanyag tasakokba töltöttük át. A tionin jelenlétében végzett besugárzáshoz kisnyomású nátriumgőzlámpával felszerelt készüléket használtunk; a tasakokat mindkét oldalukon megvilágítottuk. Az UV-B-besugárzáshoz főként 290-320 nm hullámhosszú ultraibolya fényt kibocsátó UV csövekkel felszerelt sík besugárzókészüléket használtunk.
Tesztvírusként általában vezikuláris sztomatitisz vírust (VSV) használtunk, ez a vírus ugyanis sejttenyészetben könnyen tenyészthető, így a kezelés citopatikus hatása (CPH) megfelelő mérőmódszerekkel mennyiségileg is megadható. Az 1. kísérlet során ezenkívül még egy sor más vírust is használtunk. A VSV-t Vero-sejtekben tenyésztettük. Ugyanezeket a sejteket használtuk a fertőzőképességi vizsgálatokban is, amelyek során a vírusfaktort határoztuk meg. A sejttenyésztéshez tenyésztőközegként 10% borjúmagzatszérummal és antibiotikumokkal kiegészített RPMI 1640 táptalajt használtunk. A vizsgálatokat mikrotitrálólemezeken végeztük. A megfelelő mintákat 1-3 lépésben tovább hígítottuk. Hígításonként 8-8 párhuzamos mérést végeztünk. A vírusfaktort log-,ο TCID50 egységekben (a szövettenyészetet 50%-ban megfertőző dózis 10-es alapú logaritmusa) fejeztük ki; a log10 TCID50 értékeket Kárber és Spearman módszerével számítottuk ki [G. Kárber: Naunym-Schmiedebers Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 162, 480-483 (1931); C. Spearman: Br. J. Psychol. 2, 277-282 (1908)].
A trombociták funkcióképességét hipotóniás sokkreakcióval és kollagénnel indukált aggregációval vizsgáltuk.
A véradótól levett vérből sűrűséggradiens-centrifugálással mononukleáris sejteket különítettünk el. A megfelelő kísérletekben az így elkülönített sejteket 5*105 sejt/ml koncentrációban adtuk a trombocitaszuszpenziókhoz. A fotodinamikus kezelés, valamint az UV-B-besugárzás után a szuszpenzióból mintát vettünk, amit 4 percig 1500 fordulat/perc sebességgel centrifugáltunk. Az így kapott sejtpelletet tenyésztőközeggel (10% borjúmagzatszérummal és antibiotikumokkal kiegészített RPMI 1640 táptalaj) háromszor mostuk, majd ugyanebben a tenyésztőközegben újraszuszpendáltuk. A sejtkoncentrációt 5*105 sejt/ml-re állítottuk be. A proliferációképesség vizsgálatára a sejteket 2 pg/ml konkanavalin A-val (ConA) serkentettük, majd 200 μΙ-es aliquotokban inkubátorban 3-4 napig CO2-bevezetés közben 37 °C-on inkubáltuk. Ezután hozzáadtuk a sejttenyészetekhez, és 4 óra elteltével 450 nm hullámhosszon (OD450) spektrofotometriásán mértük a bróm-dezoxiuridin (BRDU) beépülésének mértékét. Az extinkcióértékek arányosak a BRDU beépülésének mértékével, következésképpen a sejtek életképességével.
1. kísérlet
Trombocitakoncentrátumban lévő vírusok inaktiválása fotodinamikus kezeléssel (megvilágítás tionin jelenlétében)
Ebben a kísérletben azt vizsgáltuk, hogy a kísérletbe vont vírusok inaktiválhatók-e tionin jelenlétében végzett megvilágítással, és ha igen, milyen mértékben. A fotoaktív anyagot 1 pmol koncentrációban használtuk. A vizsgálatokat a következő vírusokon végeztük: VSV (vezikuláris sztomatitisz vírus),
CSFV (klasszikus sertéslázvírus) - az emberi hepatitis C vírus modellvírusa,
BVDV (szarvasmarhadiaré-vírus) - az emberi hepatitis C vírus modellvírusa,
SFV (Semliki Forest vírus),
HIV-1 (1. típusú humán immunhiányvírus),
SHV-1 (1. típusú Suid herpeszvírus),
SV-40 (Simian vírus 40).
A vírusfaktor csökkenését log10 TCID50 egységekben adtuk meg. Az eredményeket az 1. táblázatban közöljük, ahol az ssRNS rövidítés egyszálú RNS-t, a dsDNS rövidítés kettős szálú DNS-t jelent.
1. táblázat
| A vírus adatai | Megvilá- gítási időtar- tam, perc | A vírusfaktor csökkenése | ||
| Név | Család | Genom | ||
| VSV | Rhabdo | ssRNS | 30 | 4,4 |
| CSFV | Flavi | ssRNS | 5 | >5,5 |
| BVDV | Flavi | ssRNS | 5 | >4,9 |
| SFV | Tóga | ssRNS | 5 | >5,2 |
| HÍV—1 | Retro | ssRNS | 30 | >5,7 |
| SHV-1 | Herpes | dsDNS | 10 | >3,6 |
| SV-40 | Papova | dsDNS | 30 | 3,9 |
Miként az 1. táblázatból megállapítható, a vizsgált vírusok érzékenysége eltérő: a BVDV és CSFV vírusok (az emberi hepatitis C vírus modellvírusai) és az SFV vírus már 5 perces megvilágítás után is szinte teljes mértékben inaktiválódtak, míg a VSV és SV-40 vírusok még 30 perces megvilágítás után sem váltak teljesen életképtelenekké.
HU 226 418 Β1
2. kísérlet
Trombocitakoncentrátumban lévő VSV vírusok inaktiválása UV-B-besugárzással Az eredményeket a 2. táblázatban foglaljuk össze.
2. táblázat
| A besugárzás időtartama, perc | J/cm2 | Vírusfaktor l°9io TCIDso | A vírusfaktor csökkenése log10 tcid50 |
| 0 | 0 | 6,44 | 0 |
| 10 | 3,25 | 5,48 | 0,96 |
| 20 | 6,5 | 4,53 | 1,91 |
| 30 | 9,75 | 4,35 | 2,09 |
| 40 | 13 | 3,28 | 3,16 |
| 50 | 16,25 | 2,33 | 4,11 |
| 60 | 19,5 | 1,61 | 4,83 |
Miként a 2. táblázat adataiból megállapítható, a VSV vírus UV-B-besugárzásra rendkívül rezisztens.
A vírus még 60 perces besugárzás, azaz közei 20 J/cm2 energiabevitel hatására sem inaktiválódott 25 teljes mértékben. Ugyanakkor körülbelül 10 perces besugárzástól kezdődően (ami körülbelül 3 J/cm2 energiabevitelnek felel meg) már károsodnak a trombociták funkciói, és csökken a trombociták tárolhatósága (az adatokat a táblázat nem tartalmazza). 30
3. kísérlet
Trombocitakoncentrátumban lévő VSV vírusok inaktiválása fotodinamikus kezeléssel, UV-Bbesugárzással és ezek kombinálásával 35
A fotodinamikus kezeléshez a tionint 1 pmol koncentrációban használtuk; a megvilágítás időtartama 30 perc volt. Az UV-B-besugárzás időtartama 8 perc, a besugárzással bevitt energia 2,4 J/cm2 volt. Két vizsgálatsorozatot végeztünk, amelyek eredményeit a 3. 40 táblázatban közöljük.
3. táblázat
| Kezelés | Fertőzőképesség l°9io TCIDjg | ||
| Tionin/meg- világítás | UV-B | 1. vizsgálat | 2. vizsgálat |
| nincs | nincs | 7,28±0,29 | 6,68±0,21 |
| van | nincs | 2,86±0,31 | 2,68±0,12 |
| nincs | van | 5,07±0,12 | 4,71±0,17 |
| van | van | á0,24±0,0 | 0,42±0,21 |
Miként a 3. táblázat adataiból megállapítható, a fotodinamikus kezelés egymagában a fertőzőképességet csak 4, illetve 4,2 log10 egységgel, míg az UV-B-besugárzás egymagában a fertőzőképességet mindössze 1,97, illetve 2,21 log10 egységgel csökkentette. A kombinált kezelés hatására azonban az 1. vizsgálatban a fertőzőképesség gyakorlatilag megszűnt (a csökkenés mértéke >7,04 log10 egység), míg a 2. vizsgálatban a fertőzőképesség igen tetemesen (6,26 log10 egységgel) csökkent.
4. kísérlet
Fotodinamikus kezelés, UV-B-besugárzás és kombinációjuk trombociták funkcióira gyakorolt hatásának vizsgálata
Ebben a kísérletben a csak fotodinamikus kezelésnek (tionin/megvilágítás), csak UV-B-besugárzásnak és a két kezelés kombinálásának alávetett trombociták funkcióképességét mértük a 3. kísérletnél megadott körülmények között végzett kezelések után 1 és 3 nappal. Három vizsgálatsorozatot végeztünk. A hipotóniás sokkreakció-képességet (%-osan kifejezve) a 4. táblázatban, a kollagénnel kiváltott aggregációképességet (%-osan kifejezve) az 5. táblázatban közöljük.
Miként a 4. és 5. táblázat adataiból megállapítható, a trombociták funkcióit a kombinált kezelés nem rontotta lényegesen jobban, mint a kizárólagos fotodinamikus kezelés.
4. táblázat
| Kezelés | 1. vizsgálat | 2. vizsgálat | 3. vizsgálat | |||
| 1. nap | 3. nap | 1. nap | 3. nap | 1. nap | 3. nap | |
| Kontroll | 71,98 | 63,07 | 66,71 | 60,78 | 78,16 | 62,59 |
| Csak fotodinamikus | 65,49 | 49,16 | 56,24 | 52,61 | 69,30 | 55,49 |
| Csak UV-B-besugárzás | 61,06 | 57,09 | 56,26 | 48,80 | 65,67 | 52,49 |
| Kombinált | 47,86 | 51,16 | 42,37 | 30,26 | 54,45 | 48,31 |
5. táblázat
| Kezelés | 1. vizsgálat | 2. vizsgálat | 3. vizsgálat | |||
| 1. nap | 3. nap | 1. nap | 3. nap | 1. nap | 3. nap | |
| Kontroll | 88,00 | 23,00 | 83,33 | 30,00 | 79,67 | 30,33 |
| Csak fotodinamikus | 73,25 | 13,75 | 84,67 | 27,67 | 69,67 | 15,67 |
HU 226 418 Β1
5. táblázat (folytatás)
| Kezelés | 1. vizsgálat | 2. vizsgálat | 3. vizsgálat | |||
| 1. nap | 3. nap | 1. nap | 3. nap | 1. nap | 3. nap | |
| Csak UV-B-besugárzás | 76,25 | 11,25 | 73,33 | 24,50 | 75,67 | 20,00 |
| Kombinált | 69,75 | 16,75 | 76,67 | 53,50 | 58,33 | 30,33 |
5. kísérlet 10
Trombocitakoncentrátumban lévő T-limfociták egyedüli vagy fotodinamikus kezeléssel kombinált UV-B-besugárzás hatására bekövetkező inaktiválódásának vizsgálata
A trombocitakoncentrátumhoz 5*105 sejt/ml kon- 15 centrációban mononukleáris sejteket adtunk, majd a mintákat változó ideig UV-B-besugárzásnak vetettük alá. Esetenként ezt a kezelést fotodinamikus kezeléssel kombináltuk; az utóbbit 2 pmol tionin jelenlétében végeztük 30 perces megvilágítási idővel. A T-limfociták inaktiválódásának meghatározására a sejteket a besugárzás, illetve fotodinamikus kezelés után ConA-val serkentettük, majd a korábban közöltek szerint 450 nm-nél mértük a minta abszorpcióját. Az eredményeket a 6. táblázatban közöljük. A 6. táblázatban feltüntetett abszorpcióértékek három meghatározás átlagértékei, és a BRDU sejtekbe való beépülésének mértékét jellemzik 3 napos tenyésztési idő után. Miként már közöltük, ezek az értékek arányosak a sejtek életképességével.
6. táblázat
| UV-B-besugárzás (J/cm2) | Tionin/megvilágítás | ConA-aktiválás | Abszorpció OD450 nm | Megjegyzés |
| 0 | 0 | - | 0,276 | negatív kontroll |
| 0 | 0 | + | 2,269 | pozitív kontroll |
| 0,6 | - | + | 1,767 | |
| 0,9 | - | + | 0,747 | |
| 1,2 | - | + | 0,297 | |
| 0,6 | + | + | 1,020 | |
| 0,9 | + | + | 0,387 | |
| 1,2 | + | + | 0,240 |
Miként a 6. táblázat adataiból megállapítható, a sejtek teljes inaktiválásához legalább 4 perces UV-B-besugárzásra (1,2 J/cm2) volt szükség. Abban az esetben azonban, amikor a trombocitakoncentrátumot fotodina- 40 mikus kezelésnek is alávetettük, a teljes inaktiváláshoz szükséges időtartam mintegy 3 percre rövidült le, annak ellenére, hogy a fotodinamikus kezelés önmagában a sejtek proliferációjára semmiféle hatást nem gyakorolt.
Claims (13)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás trombocitaszuszpenzió kezelésére, azzal jellemezve, hogy (A) a szuszpenziót 400-750 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki egy vagy több olyan fotoaktív anyag jelenlétében, amelyek az adott hullámhossztartományban egy vagy több abszorpciós maximummal rendelkeznek, és (B) a szuszpenziót 0,1-10 J/cm2 energiabevitellel egy 270-320 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki, mimellett az (A) és (B) lépést tetszőleges sorrendben és/vagy időben egymással átfedve hajtjuk végre, 60 és a (B) lépést az ott alkalmazott besugárzás hullámhossztartományában abszorpciós maximummal rendelkező fotoaktív anyag távollétében végezzük.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fotoaktív anyagként egy fenotiazinszínezéket használunk.
- 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fenotiazinszínezékként tionint, metilénkéket, tolui45 dinkéket és/vagy Azúr A-t, B-t és C-t használunk.
- 4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (A) lépésben a fotoaktív anyagot 0,
- 5-10 pmol, előnyösen 0,5-5 pmol koncentrációban használjuk.50 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (B) lépésben a trombocitaszuszpenzióban lévő T-limfociták proliferációképességét legalább 50%-kal, célszerűen több mint 75%-kal csökkentő intenzitású besugárzást alkalmazunk.55
- 6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (B) lépésben 0,1-10 J/cm2, előnyösen 0,5-3 J/cm2 energiabevitelnek megfelelő mértékű besugárzást végzünk.
- 7. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (B) lépésben a szuszpenziótHU 226 418 Β1290-320 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki.
- 8. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy trombocitaszuszpenzióként trombocitakoncentrátumot használunk. 5
- 9. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy trombocitaszuszpenzióként vagy trombocitakoncentrátumként véradótól levett vérből elkülönített vagy trombocitaforézissel elkülönített anyagot használunk. 10
- 10. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (A) és/vagy a (B) lépés során a szuszpenziót a mindenkori sugárzást átbocsátó műanyag tartályban kezeljük.
- 11. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljá- 15 rás, azzal jellemezve, hogy az (A) és/vagy a (B) lépés során a szuszpenziót a mindenkori sugárzást átbocsátó átáramoltatókészülékben kezeljük.
- 12. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szuszpenzió víruskoncentrációját 10-es alapú logaritmusos skálán véve legalább 5, célszerűen legalább 6 egységgel csökkentjük.
- 13. Eljárás trombocitaszuszpenzió kezelésére, azzal jellemezve, hogy (A) a szuszpenziót 400-750 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki egy vagy több olyan fotoaktív anyag jelenlétében, amelyek az adott hullámhossztartományban egy vagy több abszorpciós maximummal rendelkeznek, és (B) a szuszpenziót 0,1-3 J/cm2 energiabevitellel egy 270-320 nm hullámhosszú sugárzás hatásának tesszük ki, mimellett az (A) és (B) lépést tetszőleges sorrendben és/vagy időben egymással átfedve hajtjuk végre.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10031851A DE10031851B4 (de) | 2000-07-04 | 2000-07-04 | Photodynamische Behandlung und UV-B-Bestrahlung einer Thrombozyten-Suspension |
| PCT/DE2001/002410 WO2002002152A1 (de) | 2000-07-04 | 2001-07-04 | Photodynamische behandlung und uv-b- bestrahlung einer thrombozyten-suspension |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0301717A2 HUP0301717A2 (hu) | 2003-08-28 |
| HUP0301717A3 HUP0301717A3 (en) | 2005-12-28 |
| HU226418B1 true HU226418B1 (en) | 2008-12-29 |
Family
ID=7647321
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0301717A HU226418B1 (en) | 2000-07-04 | 2001-07-04 | Photodynamic treatment and uv-b irradiation of a thrombocyte suspension |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040072139A1 (hu) |
| EP (1) | EP1307241B1 (hu) |
| CN (1) | CN1264577C (hu) |
| AT (1) | ATE296118T1 (hu) |
| AU (2) | AU7955601A (hu) |
| BR (1) | BR0111958A (hu) |
| CA (1) | CA2415063C (hu) |
| CZ (1) | CZ300018B6 (hu) |
| DE (2) | DE10031851B4 (hu) |
| DK (1) | DK1307241T3 (hu) |
| EA (1) | EA004246B1 (hu) |
| ES (1) | ES2241850T3 (hu) |
| HU (1) | HU226418B1 (hu) |
| MX (1) | MXPA02012663A (hu) |
| PL (1) | PL363076A1 (hu) |
| PT (1) | PT1307241E (hu) |
| SK (1) | SK1002003A3 (hu) |
| WO (1) | WO2002002152A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA200300257B (hu) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6843961B2 (en) * | 2000-06-15 | 2005-01-18 | Gambro, Inc. | Reduction of contaminants in blood and blood products using photosensitizers and peak wavelengths of light |
| US9044523B2 (en) | 2000-06-15 | 2015-06-02 | Terumo Bct, Inc. | Reduction of contaminants in blood and blood products using photosensitizers and peak wavelengths of light |
| EP1469891B1 (en) * | 2002-02-01 | 2009-04-15 | CaridianBCT Biotechnologies, LLC | Reduction of contaminants in blood and blood products using photosensitizers and peak wavelengths of light |
| EP1496114A1 (de) * | 2003-07-07 | 2005-01-12 | Margraf, Stefan, Dr.med. | Verfahren zur Inaktivierung von Mikroorganismen |
| DE102010017687A1 (de) * | 2010-07-01 | 2012-01-05 | Claas Selbstfahrende Erntemaschinen Gmbh | Verfahren zur Einstellung zumindest eines Arbeitsorganes einer selbstfahrenden Erntemaschine |
| CN105561359B (zh) * | 2016-02-02 | 2019-04-05 | 汪相伯 | 一种基于核黄素光化学法的血液制品处理系统 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6348309B1 (en) * | 1989-09-13 | 2002-02-19 | Blutspendedienst Der Landesverbaende Des Deutschen Roten Kreuzes Niedersachsen, Oldenburg Und Bremen G.G.M.B.H. | Process for inactivating viruses in blood and blood products |
| DE3930510A1 (de) * | 1989-09-13 | 1991-03-21 | Blutspendedienst Dt Rote Kreuz | Verfahren zur inaktivierung von viren in blut und blutprodukten |
| US5545516A (en) * | 1990-05-01 | 1996-08-13 | The American National Red Cross | Inactivation of extracellular enveloped viruses in blood and blood components by phenthiazin-5-ium dyes plus light |
| US6077659A (en) * | 1990-05-15 | 2000-06-20 | New York Blood Center, Inc. | Vitamin E and derivatives thereof prevent potassium ion leakage and other types of damage in red cells that are virus sterilized by phthalocyanines and light |
| AU691672B2 (en) * | 1994-09-22 | 1998-05-21 | Baxter International Inc. | Photodynamic inactivation of viral and bacterial blood contaminants with halogenated coumarin and furocoumarin sensitizers |
| DE69637181T2 (de) * | 1995-07-14 | 2008-04-17 | Caf - Dcf Cvba - Scrl | Vorrichtung zur inaktivierung von viralen verunreinigungen in blutprodukten |
| US20010053547A1 (en) * | 1995-12-04 | 2001-12-20 | Slichter Sherrill J. | Method for preparing a platelet composition |
| CA2278245A1 (en) * | 1997-01-21 | 1998-07-23 | The American National Red Cross | Intracellular and extracellular decontamination of whole blood and blood components by amphiphilic phenothiazin-5-ium dyes plus light |
| US6258577B1 (en) * | 1998-07-21 | 2001-07-10 | Gambro, Inc. | Method and apparatus for inactivation of biological contaminants using endogenous alloxazine or isoalloxazine photosensitizers |
-
2000
- 2000-07-04 DE DE10031851A patent/DE10031851B4/de not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-07-04 AT AT01957701T patent/ATE296118T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-07-04 WO PCT/DE2001/002410 patent/WO2002002152A1/de active IP Right Grant
- 2001-07-04 US US10/332,108 patent/US20040072139A1/en not_active Abandoned
- 2001-07-04 CA CA002415063A patent/CA2415063C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-04 CN CNB018122973A patent/CN1264577C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-04 AU AU7955601A patent/AU7955601A/xx not_active Withdrawn
- 2001-07-04 PL PL01363076A patent/PL363076A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-07-04 DK DK01957701T patent/DK1307241T3/da active
- 2001-07-04 AU AU2001279556A patent/AU2001279556B2/en not_active Ceased
- 2001-07-04 DE DE50106329T patent/DE50106329D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-04 ES ES01957701T patent/ES2241850T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-04 HU HU0301717A patent/HU226418B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-07-04 BR BR0111958-3A patent/BR0111958A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-07-04 MX MXPA02012663A patent/MXPA02012663A/es active IP Right Grant
- 2001-07-04 PT PT01957701T patent/PT1307241E/pt unknown
- 2001-07-04 EP EP01957701A patent/EP1307241B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-04 EA EA200300111A patent/EA004246B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-07-04 SK SK100-2003A patent/SK1002003A3/sk unknown
-
2003
- 2003-01-03 CZ CZ20030015A patent/CZ300018B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2003-01-09 ZA ZA200300257A patent/ZA200300257B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE50106329D1 (de) | 2005-06-30 |
| ZA200300257B (en) | 2003-11-04 |
| BR0111958A (pt) | 2003-07-01 |
| CZ200315A3 (cs) | 2003-05-14 |
| DE10031851A1 (de) | 2002-01-24 |
| DK1307241T3 (da) | 2005-08-08 |
| HUP0301717A3 (en) | 2005-12-28 |
| CN1264577C (zh) | 2006-07-19 |
| EA200300111A1 (ru) | 2003-06-26 |
| MXPA02012663A (es) | 2004-07-30 |
| SK1002003A3 (en) | 2003-06-03 |
| ATE296118T1 (de) | 2005-06-15 |
| EA004246B1 (ru) | 2004-02-26 |
| AU2001279556B2 (en) | 2006-07-06 |
| PT1307241E (pt) | 2005-08-31 |
| AU7955601A (en) | 2002-01-14 |
| EP1307241B1 (de) | 2005-05-25 |
| WO2002002152A1 (de) | 2002-01-10 |
| DE10031851B4 (de) | 2005-10-13 |
| PL363076A1 (en) | 2004-11-15 |
| CZ300018B6 (cs) | 2009-01-14 |
| ES2241850T3 (es) | 2005-11-01 |
| HUP0301717A2 (hu) | 2003-08-28 |
| US20040072139A1 (en) | 2004-04-15 |
| EP1307241A1 (de) | 2003-05-07 |
| CA2415063C (en) | 2006-10-03 |
| CN1440297A (zh) | 2003-09-03 |
| CA2415063A1 (en) | 2002-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wagner | Virus inactivation in blood components by photoactive phenothiazine dyes | |
| JP2831155B2 (ja) | 細胞含有組成物中のウイルスの光力学的不活性化 | |
| US6294361B1 (en) | Processes for photoreactive inactivation of a virus in blood cell or coagulation factor containing compositions and use thereof for preparing compositions useful for transfusion | |
| CA1294411C (en) | Method for eradicating infectious biological contaminants in body tissues | |
| Mohr et al. | Photodynamic virus inactivation of blood components | |
| US6548241B1 (en) | Storage solution containing photosensitizer for inactivation of biological contaminants | |
| KR100258377B1 (ko) | 생물학적 조성물의 살균 방법 및 이에 의해 생성된 생성물 | |
| Wagner et al. | Approaches to the reduction of viral infectivity in cellular blood components and single donor plasma | |
| US9044523B2 (en) | Reduction of contaminants in blood and blood products using photosensitizers and peak wavelengths of light | |
| KR100630520B1 (ko) | 광역-스펙트럼 펄스광을 사용하는 병원체의 불활성화 방법 | |
| US6348309B1 (en) | Process for inactivating viruses in blood and blood products | |
| HU226418B1 (en) | Photodynamic treatment and uv-b irradiation of a thrombocyte suspension | |
| Corash | New technologies for the inactivation of infectious pathogens in cellular blood components and the development of platelet substitutes | |
| JPH11506029A (ja) | ウイルス性および細菌性血液混入物の不活化の方法 | |
| CORASH | Virus inactivation in cellular components | |
| AuBuchon et al. | Inactivation of microbial contaminants of blood components | |
| Rezvani-Boroujeni et al. | The Effect of Methylene Blue in Combination with Red Visible Light on Model Viruses Inactivation and Coagulation Factors in Fresh Frozen Plasma | |
| Corash | Inactivation of Viruses, Bacteria, Protozoa, and Leukocytes in Labile Blood Components by Using Nucleic Acid Targeted Methods | |
| Pehta | Viral Inactivation of Blood Components |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |