HU224715B1 - Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus - Google Patents
Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus Download PDFInfo
- Publication number
- HU224715B1 HU224715B1 HU0100937A HUP0100937A HU224715B1 HU 224715 B1 HU224715 B1 HU 224715B1 HU 0100937 A HU0100937 A HU 0100937A HU P0100937 A HUP0100937 A HU P0100937A HU 224715 B1 HU224715 B1 HU 224715B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- liposomes
- peptides
- spc3
- sequence
- liposome
- Prior art date
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims description 63
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 37
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 title description 7
- 101001128694 Homo sapiens Neuroendocrine convertase 1 Proteins 0.000 claims description 36
- 101000828971 Homo sapiens Signal peptidase complex subunit 3 Proteins 0.000 claims description 36
- 101000979222 Hydra vulgaris PC3-like endoprotease variant A Proteins 0.000 claims description 36
- 101000979221 Hydra vulgaris PC3-like endoprotease variant B Proteins 0.000 claims description 36
- 102100023789 Signal peptidase complex subunit 3 Human genes 0.000 claims description 36
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 7
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- -1 acrylic ester Chemical class 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 3
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical class [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 206010042772 syncope Diseases 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000008297 Nuclear Matrix-Associated Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010035916 Nuclear Matrix-Associated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 239000002259 anti human immunodeficiency virus agent Substances 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000008316 intracellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 210000000299 nuclear matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány tárgyát többszörösen elágazó peptidkonstrukciókat („Multiple Branch Peptide Construction, MBPC) tartalmazó liposzómák képezik, amelyek alkalmasak humán immundeficiencia vírus (HÍV) okozta fertőzés kezelésére. Az MBPC-k prezentálása liposzómákban lényegesen megnöveli az MBPC-k aktivitását. A találmány tárgyát képezik a találmány szerinti liposzómákat tartalmazó gyógyászati készítmények.
A találmány szerinti liposzómák, gyógyászati készítmények és eljárások HIV-fertőzés kezelésére alkalmazhatók.
Az MBPC-k kifejlesztése a HIV-fertőzés kezelésére irányuló kutatások terén elért új eredmény. Egy MBPC lényegében magmátrixból áll, amelyhez 2-64, előnyösen 4-16 peptid kapcsolódik. A magmátrix dendritikus polimer, amely elágazó, és amelynek előnyösen mindegyik ága azonos. A magmátrix alapját magmolekula képezi, amely legalább két funkciós csoportot tartalmaz, amelyekhez terminális funkciós csoportokat hordozó molekuláris ágak kapcsolódnak kovalens kötéssel. Magmolekula lehet például ammónia vagy etilén-diamin. Molekuláris ágakként alkalmazhatunk például akril-észter-monomereket, amelyeket a magmolekulára polimerizálunk. Ilyen molekulák előállíthatok úgy, hogy azok különböző számú ágakat tartalmazzanak, a magmolekulából elágazó monomerek számától függően. Magmolekulaként előnyösen lizint alkalmazhatunk. Egy központi lizint két lizinnel kapcsolunk össze - mindegyiket karboxilcsoportján keresztül úgy, hogy azok a központi lizin aminocsoportjainak egyikéhez kapcsolódjanak. Ily módon négy aminocsoportot tartalmazó molekulát kapunk, amely négy peptidet hordozó MBPC magmátrixát képezheti. Más eljárás szerint, nyolc ágat hordozó molekulát állíthatunk elő oly módon, hogy négy lizin aminosavat kötünk karboxilcsoportjaikon keresztül a központi lizinhez kapcsolt lizin aminosavak aminocsoportjainak egyikéhez. Ez a molekula nyolc peptidet hordozó MBPC magmátrixát képezheti; vagy ahhoz nyolc lizin kapcsolható, miáltal tizenhat peptidet hordozó MBPC magmátrixa jön létre.
Az MBPC-ben a peptidek C-végei kovalens kötéssel kapcsolódnak a magmátrix egyes ágaihoz. A peptidek előnyösen lehetnek azonosak, vagy különbözhetnek egymástól. A kész molekula peptidek halmazát tartalmazza felszínén, és belső magmátrixot tartalmaz, amely nem prezentálódik, ezért antigénhatást nem fejt ki.
Kívánt esetben távtartó szekvenciát iktathatunk a peptid és a magmátrix közé. Az első lizin aminosav karboxilcsoportját szabadon hagyhatjuk, amidálhatjuk, vagy β-alaninhoz vagy más blokkolóvegyülethez kapcsolhatjuk. A peptidek D- vagy L-aminosavakat egyaránt tartalmazhatnak. A D-aminosavak in vivő stabilabbak, mivel azokat peptidázok nehezebben hasítják, de az L-aminosavak aktivitása jobb. Az említetteken felül, peptidek helyett alkalmazhatunk peptidanalógokat, szintetikus konstrukciókat, amelyekben a peptidek szénvázát megtartjuk, de amelyekből a -CONH- peptidkötéseket kihagyjuk. Nyilvánvaló tehát, hogy amikor a leírásban peptideket említünk, azokon peptidanalógokat is érthetünk. Elfogadott, hogy a peptidanalógok peptidázokkal szemben sokkal rezisztensebbek, és in vivő tovább intaktak maradnak. Amennyiben a peptid túl hosszú, az MBPC antigénhatásúvá válik. Ennek megfelelően a peptid legfeljebb tíz, és előnyösen legfeljebb kilenc aminosav hosszúságú.
MBPC-k alkalmazását HIV-fertőzések kezelésére először Sabatier J. M. írta le (lásd WO 95/07 929 számú nemzetközi közzétételi irat). Az általa ismertetett MBPC-k a GPGR-szekvenciát (a gp120-nak nevezett HÍV felszíni glikoprotein V3-hurokrégiójából származó szekvenciát) magukban foglaló peptideket tartalmaznak, amelyben a fenti szekvenciát 0-4 aminosav előzi meg, és 2-4 aminosav követi. Az IGPGR és IXXGPGR aminosavszekvenciák (ahol X jelentése bármely aminosav) alkalmazását kizárták. Legelőnyösebben ezek az MBPC-k lizin aminosavakból felépülő magot tartalmaznak, amelyhez nyolc GPGRAF-peptid kapcsolódik. A peptid a következő általános képlettel jellemezhető; (GPGRAF)8-(K)4-(K)2-K-6A-OH, ahol a OH-vég a β-alanin karboxilcsoportját jelöli. Más eljárás szerint, ezt a karboxilcsoportot karboxamidvéggé módosíthatjuk. Ezt a vegyületet a leírásban SPC3-nak nevezzük. Ezek az MBPC-k - és különösen az SPC3 - gátolják a vírusburok és sejtmembrán fúzióját, valamint a fertőzött sejt membránjának és nem fertőzött sejt membránjának fúzióját - mindkét lépést elengedhetetlennek tartják a sejtfertőzéshez, a vírusszaporodáshoz és a vírus szóródásához a gazdaszervezetben -, oly módon, hogy - feltehetően a CD4-kötő receptortól eltérő membránkoreceptorokhoz kötődve - blokkolják a sejteken, például limfocitákban és makrofágokban jelen lévő CD4-receptorokat anélkül, hogy a sejt ezáltal elvesztené azt a képességét, hogy más antigének vagy mitogének által aktiválódjék.
Nemrégiben Sabatier J. M. és munkatársai további MBPC-ket írtak le, amelyek hatásosak lehetnek HIV-fertőzés kezelésére. Ezekben a gp41-nek nevezett HIV-burok transzmembrán-glikoproteinből származó peptideket alkalmaznak. A peptidek az RQGY-szekvenciát tartalmazzák, és azokban a fenti szekvenciát 0-4 aminosav előzi meg, és 2-4 aminosav követi. Legelőnyösebben ezek az MBPC-k lizin aminosavakból felépülő magot tartalmaznak, amelyhez nyolc RQGYSPL-peptid kapcsolódik. A peptid a következő általános képlettel jellemezhető; (RQGYSPL)8(Κ)4-(Κ)2-Κ-βΑ-ΟΗ, ahol a OH-vég a β-alanin karboxilcsoportját jelöli. Más eljárás szerint, ez a karboxilcsoport karboxamidvéggé módosítható. Ezt a vegyületet a leírásban SPC RL-nek nevezzük. Feltételezzük, hogy ezek az MBPC-k - és különösen az SPC RL - gátolják a vírus és sejt fúziójának kulcsfontosságú lépését.
A találmány tárgyát képezik liposzómák, amelyek elég nagy méretűek ahhoz, hogy fehérvérsejtek felvegyék azokat, és amelyek HIV-fertőzés kezelésére alkalmas MBPC-t tartalmaznak. Természetszerűleg, MBPC-kként a technika állása szerint előnyösen a WO/95/07 929 és WO 98/29 443 számú nemzetközi
HU 224 715 Β1 közzétételi iratokban ismertetett MBPC-ket alkalmazzuk, amelyek lizinmagot és 8-16, GPGR-szekvenciát (de nem IGPGR- vagy IXXGPGR-szekvenciát) vagy RQGY-szekvenciát magukban foglaló peptidet tartalmaznak. Legelőnyösebben GPGRAF- és RQGYSPLszekvenciát magában foglaló peptideket tartalmazó MBPC-ket alkalmazunk, és különösen előnyösen az SPC3-nak és SPC RL-nek nevezett MBPC-ket alkalmazzuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá gyógyászati készítmény, amely a találmány szerinti liposzómákat tartalmazza gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal elegyítve. Gyógyászatilag elfogadható hordozóanyagként előnyösen 0,9%-os steril fiziológiás sóoldatot alkalmazunk, bár alkalmazhatunk bármely más, liposzómaszuszpenzió tárolására és embernek történő injektálásra alkalmas hordozóanyagot. A találmány szerinti gyógyászati készítmény előnyösen legalább 10 mg/ml koncentrációban tartalmazza az MBPC-t, az injektálandó térfogat alacsonyan tartása érdekében.
Az említetteken felül a találmány tárgyát képezi eljárás HIV-fertőzött beteg kezelésére, amely szerint a betegnek találmány szerinti gyógyászati készítményt adunk be intravénás injektálással. Az aktív hatóanyag 20-100 mg, előnyösen 20-60 mg mennyiségét adjuk be dózisonként; az adagolást a vírusterheléstől függően naponta egyszeri vagy hetente egyszeri adagolás közé eső gyakorisággal végezzük. Világos, hogy a kezelés nem szükségszerűen folyamatos (bár lehet az is), hanem végezhető három hét és egy hónap közé eső szakaszokban, majd megszakítható addig, amíg a vírusterhelés ismét emelkedik. A betegek a találmány szerinti kezelés során és azt követően továbbra is részesülnek a már alkalmazott kezelésben (hármas terápia és hasonlók). Mivel az MBPC-k hatásmechanizmusa olyan, hogy hatásuk független a vírustörzstől, az MBPC-vel szemben nem alakul ki rezisztencia. Ezáltal a kezelés ismételhető, ami jelenleg RT vagy proteázinhibitorok esetében nem lehetséges.
Az anti-MBPC-ket - például SPC3-at és SPC RL-t - azzal a szándékkal építjük liposzómákba, hogy azok hozzáférhetőbbek legyenek a limfoid rendszer, valamint limfociták és makrofágok számára, amelyek a HIV-vírus, egyúttal az anti-HIV hatóanyagok célsejtjei. Előzetes klinikai adatok azt mutatják, hogy az SPC3 bizonyos mértékű aktivitást fejt ki HIV-fertőzött betegekben, de az alkalmazott dózisban (20 mg/nap; intravénásán, iv.) aktivitása rendszerint nem elegendő. Bár feltételeztük, hogy ezek az MBPC-k membránreceptorokon hatnak, nem volt ismert, hogy azok a membrán belső vagy külső oldalán fejtik ki hatásukat. Amennyiben belülről hatnak, a szabad peptidek nagymértékű hidrofil tulajdonsága előnytelen az MBPC-k sejtbe történő bejutása szempontjából, és az MBPC-k liposzómákba történő beépítésével megkönnyíthetjük azok bejutását a sejtekbe. Igen kis méretű, például 100-150 nm átmérőt el nem érő méretű liposzómákat nem könnyen fognak be a fehérvérsejtek, így előnyösen nagyobb, 150 nm átlagos átmérőnél nagyobb liposzómákat alkalmazunk. Legelőnyösebben körülbelül 250-400 nm átlagos átmérőnél nagyobb liposzómákat alkalmazunk.
A találmány szerinti liposzómákat bármely ismert eljárással előállíthatjuk, de előnyösen azokat Bangham és munkatársai eljárásával állítjuk elő [J. Mól. Bioi. 13, 238 (1964)]. A liposzómákat kalibrált filtereken extrudálhatjuk, miáltal kívánt méretű liposzómákat kapunk. A liposzómákat dializálhatjuk, hogy a be nem épült, de a liposzómák külső felszínén elektrosztatikusán kötve maradt MBPC-ket eltávolítsuk. Előnyösen a liposzómák lehető legtöbb MBPC-t foglalják magukban (dialízist követően a liposzómák több mint 8%-át MBPC-k teszik ki), annak érdekében, hogy az MBPC-ket az injekciós készítményben a fent leírtak szerint koncentrálhassuk, és az injekciós térfogatokat alacsonyan tartsuk. A liposzómákat előállíthatjuk tojás-foszfatidil-kolinból és foszfatidil-glicerinből, a két komponens 4:1-20:1, előnyösen 9:1 moláris koncentrációjának alkalmazásával.
SPC3-tartalmú liposzómák vírusellenes aktivitását üres liposzómák, SPC3 és SPC RL aktivitásával hasonlítottuk össze. Az SPC3-tartalmú liposzómákat dialízist követően és dializálás nélkül is teszteltük a liposzómák külső felszínéhez elektrosztatikusán kötődő SPC3 hatásának meghatározására. A liposzómakészítményekben található SPC3 mennyisége valamennyi esetben megegyezett a szabad formában alkalmazottéval.
Fúziós vizsgálat: szincíciumképződés gátlása
C8166-sejteket inkubáltunk 37 °C-on a HIV-1 Hx10-klónnal [Hahn B.: University of Alabama, USA) tesztvegyületek (SPC3; SPC RL; 110 nm és 250 nm átlagos méretű üres liposzómák, valamint SPC3-tartalmú, a fenti méretű dializált és dializálatlan liposzómák) jelenlétében, továbbá tesztvegyület hozzáadása nélkül (kontroll). A mintákat 96 lyukú lapos fenekű tenyésztőlemezeken inkubáltuk, majd 48 és 72 óra múlva fáziskontraszt-mikroszkóppal megvizsgáltuk, és a szincíciumképződést értékeltük. A kísérleteket három alkalommal, duplikátumok alkalmazásával végeztük, és az egyes kísérletekben azonos eredményeket kaptunk. Eredményeinket az 1. táblázatban összegeztük. A szincíciumok jelenlétét (+) jellel jelöltük, az alábbiak szerint:
| +++ | kontroll |
| ++ | =50%-os csökkenés |
| + | =90%-os csökkenés |
| +/- | =>95%-os csökkenés |
HU 224 715 Β1
1. táblázat Szincíciumképződés
| Tesztvegyület | A fertőzés után 2 nappal | A fertőzés után 3 nappal | ||
| Koncentráció | Koncentráció | |||
| 10-5 mol/l | 10-® mol/l | 10-5 mol/l | 10-6 mol/l | |
| Semmi (kontroll) | +++ | +++ | +++ | +++ |
| SPC3 | - | +/- | - | +/- |
| SPC RL | - | +/- | - | +/- |
| 100 nm átmérőjű üres liposzómák | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 100 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, dializált | - | +/- | - | +++ |
| 100 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, nem dializált | - | +/- | - | + |
| 250 nm átmérőjű üres liposzómák | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 250 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, dializált | - | - | - | - |
| 250 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, nem dializált | - | - | - | - |
Fertőzési kísérlet: sejtfertőzés gátlása
C8166-sejteket RPMI-tápközegben egyszer mostunk, majd HIV-1 Hx10-klónnal fertőztünk oly módon, hogy a sejteket 2 órán át, 37 °C-on tesztvegyületek 30 (SPC3; SPC RL; 110 nm és 250 nm átlagos méretű üres liposzómák, valamint SPC3-tartalmú, a fenti méretű dializált és dializálatlan liposzómák) jelenlétében és tesztvegyület hozzáadása nélkül (kontroll) inkubáltuk. Inkubációt követően a vírusokat eltávolítottuk, és a 35 sejteket friss tápközegben inkubáltuk 37 °C-on, a tesztvegyület jelenlétében vagy tesztvegyület hozzáadása nélkül (kontroll). A fertőzést és sejttenyésztést 96 lyukú lemezeken végeztük. A HIV-vírusok termelődését úgy követtük, hogy ELISA-eljárással mértük a sejtmentes p24 koncentrációját a felülúszóban, Gluschankof és munkatársai eljárása szerint (1987), az AMPAK amplifikációs reagenskészlet (DAKO, Trappes, Franciaország) alkalmazásával. Eredményeinket a 2. táblázatban összegeztük, és a 4. napon kapott adatokat a csatolt ábrán grafikusan is ábrázoltuk.
2. táblázat
A p24-termelődés meghatározása
| Az oszlop száma a grafikonon | Tesztvegyület | A fertőzést követően 3 nappal | A fertőzést követően 4 nappal |
| 1 | Semmi (kontroll) | 1,633 | 1,705 |
| 2 | SPC3 | 0,400 | 0,415 |
| 3 | SPC RL | 0,441 | 0,463 |
| 4 | 100 nm átmérőjű üres liposzómák | 1,641 | 1,633 |
| 5 | 100 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, dializált | 0,934 | 1,047 |
| 6 | 100 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, nem dializált | 0,124 | 0,166 |
| 9 | 250 nm átmérőjű üres liposzómák | 1,539 | 1,581 |
| 8 | 250 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, dializált | 0,049 (=0,32 ng/ml) | 0,024 |
| 7 | 250 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák, nem dializált | 0,046 (=0,28 ng/ml) | 0,008 |
HU 224 715 Β1
A 100 nm átmérőjű SPC3-tartalmú dializált liposzómák aktivitása még az SPC aktivitásától is elmaradt, bár az aktivitás háromszorosára történő növekedését figyeltük meg akkor, amikor ezeket a liposzómákat dialízis nélkül alkalmaztuk. Figyelembe véve azt, hogy az igen kis méretű, 100-150 nm átmérőnél kisebb liposzómákat a fehérvérsejtek nem fogják be könnyen, ezért azok nem is jutnak be a sejtekbe, ezek az eredmények nem meglepőek vagy jelentősek. A 250 nm átmérőjű SPC3-tartalmú liposzómák alkalmazásával azonban valóban rendkívüli eredményeket kaptunk. A nem dializált készítmény esetében a fertőzési kísérlet 3. napján 8,7-szeres, a 4. napján 52-szeres javulás volt kimutatható a szabad SPC3 alkalmazásához képest. Csekély, statisztikailag nem szignifikáns különbség volt megfigyelhető a dializált és nem dializált liposzómák aktivitásában; a nem dializált készítmények kismértékben aktívabbnak bizonyultak. Ezek a 250 nm átmérőjű liposzómák a HIV-fertőzés igen hatásos inhibitorainak bizonyultak mind a fúziós kísérletben (szincíciumképződés), mind a fertőzési kísérletben. Mindkét esetben a vírusellenes hatás egyértelműen felülmúlta a szabad SPC3 alkalmazásakor megfigyelt hatást.
Toxicitás
A toxicitás meghatározására a 250 nm átmérőjű SPC3-tartalmú dializált liposzómákat 8 egérnek injektáltuk intravénásán, 50 mg/kg SPC3 dózisban. Megjegyzendő, hogy ez rendkívül magas dózis, mintegy 50-szer magasabb, mint a fentiekben ajánlott dózisok. Nem észleltünk tüneteket sem a beadást közvetlenül követően, sem 12 vagy 24 órával később. Amennyiben a fenti dózisban szabad SPC3-at adtunk be, toxicitásra utaló tüneteket tapasztaltunk.
Váratlan volt, hogy peptid liposzómába történő beépítése ilyen nagyságrendben megnöveli annak aktivitását in vitro (azaz a megoszlás, a metabolizmus vagy szervhez történő célba juttatás javításától függetlenül). Még nem ismert, hogy a javulás a feltételezett módon érvényesülő aktivitás javulásából (azaz a HÍV fúziós receptorainak blokkolásából) adódik-e, vagy más intracelluláris mechanizmusokon keresztül érvényesül. Bármelyik esetben a liposzómákon keresztül eljuttatott SPC3 sokkal alkalmasabb lehet HIV-fertőzés kezelésére, mint a szabad SPC3 adagolása, mivel a napi dózis káros mellékhatások nélkül nagymértékben csökkenthető; a toxicitás alacsonyabbnak tűnik, mint a szabad SPC3 alkalmazásakor; és a beadási rend úgy módosítható, hogy például napi adagolás helyett heti adagolásra lehet áttérni. Mindez az SPC3-at az anti-HIV terápiás stratégia részeként alkalmazható ígéretesebb jelöltté teszi, annak ellenére, hogy intravénásán kell adagolni.
Claims (12)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Liposzóma, amely 150 nm-nél nagyobb átlagos méretű, és amely HIV-fertőzés kezelésére alkalmas többszörösen elágazó peptidkonstrukciót („Multiple Branch Peptide Construction”; MBPC) tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti liposzóma, amelynek átlagos mérete 250-400 nm közötti.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti liposzóma, amely 8 tömeg-%-nál több MPBC-t tartalmaz.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely lizinmagot magában foglaló MPBC-t tartalmaz.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely 8 vagy 16 peptidet tartalmazó MBPC-t tartalmaz.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely a GPGR-szekvenciát magában foglaló peptideket tartalmaz, amely peptidekben a GPGR-szekvenciát 0-4 aminosav előzi meg és 2-4 aminosav követi, és amely peptidek IGPGR- vagy IXXGPGR-szekvenciát nem tartalmaznak, ahol X jelentése bármely aminosav.
- 7. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely GPGRAF-szekvenciájú peptideket tartalmaz.
- 8. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely MBPC-ként SPC3-at tartalmaz.
- 9. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely az RQGY-szekvenciát magában foglaló peptideket tartalmaz, amelyekben a fenti szekvenciát 0-4 aminosav előzi meg és 2-4 aminosav követi.
- 10. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely RQGYSPL-szekvenciájú peptideket tartalmaz.
- 11. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma, amely MBPC-ként SPC RL-t tartalmaz.
- 12. Gyógyászati készítmény, amely az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti liposzómát tartalmazza gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal elegyítve.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9727424.5A GB9727424D0 (en) | 1997-12-31 | 1997-12-31 | Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus |
| PCT/EP1998/008579 WO1999034777A1 (en) | 1997-12-31 | 1998-12-28 | Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0100937A2 HUP0100937A2 (hu) | 2001-06-28 |
| HUP0100937A3 HUP0100937A3 (en) | 2004-06-28 |
| HU224715B1 true HU224715B1 (en) | 2006-01-30 |
Family
ID=10824280
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0100937A HU224715B1 (en) | 1997-12-31 | 1998-12-28 | Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6610304B1 (hu) |
| EP (1) | EP1043974B1 (hu) |
| JP (1) | JP2002500175A (hu) |
| AT (1) | ATE215361T1 (hu) |
| CA (1) | CA2317107C (hu) |
| DE (1) | DE69804674T2 (hu) |
| DK (1) | DK1043974T3 (hu) |
| ES (1) | ES2174548T3 (hu) |
| GB (1) | GB9727424D0 (hu) |
| HU (1) | HU224715B1 (hu) |
| PT (1) | PT1043974E (hu) |
| WO (1) | WO1999034777A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA9811877B (hu) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9727424D0 (en) * | 1997-12-31 | 1998-02-25 | Armel Sa | Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus |
| US7285621B2 (en) * | 1999-06-29 | 2007-10-23 | Ambrilia Biopharma | Multiple branch peptide construction |
| JP2007531705A (ja) * | 2003-05-20 | 2007-11-08 | セルペップ ソシエテ アノニム | 増大した活性および細胞膜親和性を有する修飾抗ウイルス性ペプチド |
| US7676835B2 (en) * | 2004-08-31 | 2010-03-09 | International Business Machines Corporation | System and method for regulating access to objects in a content repository |
| WO2010135714A2 (en) | 2009-05-22 | 2010-11-25 | The Methodist Hospital Research Institute | Methods for modulating adipocyte expression using microrna compositions |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5709879A (en) * | 1990-06-29 | 1998-01-20 | Chiron Corporation | Vaccine compositions containing liposomes |
| IL110929A0 (en) * | 1993-09-13 | 1994-11-28 | Armel Sa | Multiple branch peptide constructions and pharmaceutical compositions containing them |
| GB9627114D0 (en) * | 1996-12-31 | 1997-02-19 | Centre Nat Rech Scient | Multiple branch peptide constructions |
| GB9727424D0 (en) * | 1997-12-31 | 1998-02-25 | Armel Sa | Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus |
-
1997
- 1997-12-31 GB GBGB9727424.5A patent/GB9727424D0/en not_active Ceased
-
1998
- 1998-12-28 CA CA002317107A patent/CA2317107C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-28 AT AT98966710T patent/ATE215361T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-12-28 DE DE69804674T patent/DE69804674T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-28 WO PCT/EP1998/008579 patent/WO1999034777A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-28 ZA ZA9811877A patent/ZA9811877B/xx unknown
- 1998-12-28 EP EP98966710A patent/EP1043974B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-28 HU HU0100937A patent/HU224715B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-12-28 DK DK98966710T patent/DK1043974T3/da active
- 1998-12-28 PT PT98966710T patent/PT1043974E/pt unknown
- 1998-12-28 JP JP2000527228A patent/JP2002500175A/ja active Pending
- 1998-12-28 ES ES98966710T patent/ES2174548T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-06-30 US US09/607,726 patent/US6610304B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69804674D1 (de) | 2002-05-08 |
| PT1043974E (pt) | 2002-09-30 |
| DE69804674T2 (de) | 2002-10-31 |
| CA2317107C (en) | 2008-03-11 |
| HUP0100937A3 (en) | 2004-06-28 |
| ATE215361T1 (de) | 2002-04-15 |
| ZA9811877B (en) | 1999-08-05 |
| HUP0100937A2 (hu) | 2001-06-28 |
| CA2317107A1 (en) | 1999-07-15 |
| GB9727424D0 (en) | 1998-02-25 |
| EP1043974B1 (en) | 2002-04-03 |
| EP1043974A1 (en) | 2000-10-18 |
| WO1999034777A1 (en) | 1999-07-15 |
| ES2174548T3 (es) | 2002-11-01 |
| US6610304B1 (en) | 2003-08-26 |
| JP2002500175A (ja) | 2002-01-08 |
| DK1043974T3 (da) | 2002-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| MXPA02001344A (es) | Peptidos que bloquean la infeccion viral y metodos para su uso. | |
| IE904292A1 (en) | Pharmaceutical for subcutaneous administration containing polypeptides | |
| US5189022A (en) | Composition for the treatment of chronic fatigue syndrome | |
| HU224715B1 (en) | Liposomes containing multiple branch peptide constructions for use against human immunodeficiency virus | |
| RU2357749C2 (ru) | ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ УЛУЧШЕННОГО ВВЕДЕНИЯ ПЕПТИДОВ, ПРОИСХОДЯЩИХ ОТ gp41 ВИЧ, И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В ТЕРАПИИ | |
| EP0719281B1 (en) | Multiple branch peptide constructions for use against hiv | |
| US6537967B1 (en) | Pentamer peptide amide, ALGPGNH2, which inhibits viral infectivity and methods of use thereof | |
| AU684713B2 (en) | Peptide T and related peptides in the treatment of inflammatory bowel disease | |
| EP1075270B1 (en) | Short peptide for treatment of neurological degenerative diseases | |
| US6379679B1 (en) | Multiple branch peptide construction | |
| EP0432693A1 (en) | Liposomes cytotoxic to virus-infected cells | |
| US7285621B2 (en) | Multiple branch peptide construction | |
| CN100444848C (zh) | HIV gp41-衍生肽的改善用药的药物组合物 | |
| CN101906147B (zh) | 两根Arg-Gly-Asp-Ser链通过Lys与一根脂肪醇链的偶联物、它们的合成及在医学中的应用 | |
| US20030060599A1 (en) | Tripeptide amides that block viral infectivity and methods of use thereof | |
| JPH0688904B2 (ja) | ウイルスに対する増殖抑制剤 | |
| JPH09504273A (ja) | Ｈｉｖに対して使用するための多分岐ペプチド構築物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20051205 |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |