HU200473B - Process for producing polypeptides containing difluorocyclostatine and pharmaceutical compositions comprising same - Google Patents

Process for producing polypeptides containing difluorocyclostatine and pharmaceutical compositions comprising same Download PDF

Info

Publication number
HU200473B
HU200473B HU855069A HU506985A HU200473B HU 200473 B HU200473 B HU 200473B HU 855069 A HU855069 A HU 855069A HU 506985 A HU506985 A HU 506985A HU 200473 B HU200473 B HU 200473B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
formula
mixture
compound
amino
preparation
Prior art date
Application number
HU855069A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT46042A (en
Inventor
Dannis Jay Hoover
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of HUT46042A publication Critical patent/HUT46042A/hu
Publication of HU200473B publication Critical patent/HU200473B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0227—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the (partial) peptide sequence -Phe-His-NH-(X)2-C(=0)-, e.g. Renin-inhibitors with n = 2 - 6; for n > 6 see C07K5/06 - C07K5/10
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás új difluor-ciklosztatint tartalmazó polipeptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására.
A körülbelül 40.000 molekulasúlyú renint, mely egy proteolitikus enzim, a vese termeli és juttatja a véráramba. Ez az enzim ismert módon in vivő hasítja a természetben előforduló plazma-glikoproteint, az angiotenzint, humán angiotenzin esetén a 10. aminosav leucin és a 11. aminosav valin között, az angiotenzinogén (A) általános részképletű N-terminálisán. A renin hasítása során ily módon keletkezett angiotenzin I N-terminális dekapeptidet, mely a vérkeringésben van, a szervezet tovább bontja angiotenzin Π-ként ismert oktapeptiddé. Az angiotenzin Π hatékony presszor vegyület, azaz olyan vegyület, mely a vérnyomás jelentős növelésére képes, és hatását oly módon fejti ki, hogy a véredények összehúzódását és a mellékvesékben a nátrium-visszatartó aldoszteron hormon elválasztását idézi elő. Ily módon a renin-angiotenzinogén rendszer a hipertenzió és különböző szívbetegségek egy lehetséges előidézője.
A renin-angiotenzinogén rendszer hátrányos működése megelőzésének egyik módja, hogy a szervezetbe olyan anyagot adagolunk, mely a renin-angíotenzinogént hasító aktivitását gátolja. Számos ilyen anyag ismert, ilyen például az antirenin-antitestek, pepsztatin és természetben előforduló foszfolipid-vegyületek. A 45,665 számú európai nyilvánosságra hozatali irat számos olyan renin-gátló polipeptid-származékot ismertet, melyek az
X-Y-Pro-Phe-His-A-B-Z-W általános képletnek felelnek meg, ahol X jelentése hidrogénatom vagy amino-védőcsoport, Y adott esetben hiányozhat,
B lipofil aminosav,
Z valamely aromás aminosav,
W hidroxilcsoport, és
A többek között valamely (B) részképletű csoport, melyben
R1 és R2 lipofil vagy aromás oldallánc.
A fenti nyilvánosságra hozatali iratban található definíciók szerint nem történik említés olyan vegyületekrők, melyekben vagy A vagy Z sztatin és B lizin lenne.
A 77,O28A számú európai nyilvánosságra hozatali irat számos olyan renin-gátló polipeptidet ismertet, mely nem-terminális sztatin- vagy sztatin-származékot tartalmaz. Ezek közé a vegyületek közé tartozik például a fenil-alanin-hisztidin-sztatin szekvencia.
A 132.304A számú európai nyilvánosságra hozatali irat sztatint tartalmazó polipeptideknek renin-gátló antihipertenzív szerekként történő alkalmazását ismerteti, míg a 114,993A számú európai nyilvánosságra hozatali irat olyan cikiosztatint tartalmazó polipeptideket ismertet, melyek renin-gátló antihipertenzív szerek.
Bizonyos, sztatinnal rokon fluoro-ketonokat tartalmazó polipeptideket és azok pepszin-inhibitor hatásait is ismertetik Gelb és munkatársai, Biochemistry, 24, 1814 (1985) cikkükben.
Úgy találtuk, hogy bizonyos, 5-ciklohexil-(S)-4-amino-(S)- vagy (R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsavat és 5-ciklohexil-4(R,S)-amino-3-oxo-2,2-dífluor-pentánsavat tartalmazó polipeptidek renin-gátló szerekként alkalmazhatók, hipertenzió és bizonyos szívelégtelenségek kezelése során.
A találmány szerinti új polipeptidek és polipeptid-származékok az (1) általános képletnek felelnek meg. A képletben
X jelentése (a) vagy (b) képletű csoport, és
Rl 1-3 szénatomos alkoxicsoport, vagy 1-3 szénatomos alkil-amino-csoport.
Előnyösek azok a vegyületek, melyekben
X (a) vagy (b) képletű csoport, és
Rl metil-amino-csoport
Ahol az lehetséges volt, a leírásban az aminosavak jelölésére általánosan alkalmazott rövidítéseket használtuk. így például a fenil-alanint Phe és a hisztidint a His jellel jelöltük. A terc-butoxi-kaibonil amino-védőcsoport rövidítése Boc, míg a hisztidin imidazolgyűrűjének védésére alkalmazott N-terc-butoxi-karbonil-csoportot imBoc-cal jelöljük.
A szerkezetében fluoratomot tartalmazó, módosított ciklosztatin-maradékot a (C) részképlet jelöli, ahol
X jelentése az előzőekben megadott.
Ezeket a szerkezeteket abban az esetben, ha X (a) képletű csoport, 2,2-difluor-ciklohexilSta, míg ha X (b) képletű csoport, 2,2-difluor-epi-ciklohexilSta rövidítéssel jelöljük. A megfelelő ketonokat 2,2-difluor-3-oxo-ciklohexilSta-val jelöljük.
A találmány szerinti vegyületekben, illetve a szabadalmi leírásban valamennyi természetben előforduló aminosav az L-konfigurációjában van jelen, hacsak másképpen nem említjük.
Ugyancsak a találmány tárgya eljárás olyan terápiás szerek előállítására, melyek hatóanyagként az (I) általános képletű vegyületeket tartalmazzák.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek in vivő emlősökön, ideérte az embert is, antihipertenzív hatással rendelkeznek. Ezen hatás legalábbis részlegesen abból adódik, hogy e vegyületek az angiotenzinogének renin által történő hasadását gátolják. Anélkül, hogy a fenti mechanizmus elméletét részletesen kifejtenénk, valószínű, hogy a találmány szerinti vegyületek renin-gátló hatásáért azok reninhez történő szelektív kötődése (az angiotenzinogénnel összhasonlítva) felelős. A találmány szerinti vegyületek olyan enzimgátló hatást fejtenek ki, mely szelektív reninre nézve, és lényegesen magasabb, mint más enzimekkel, például katepszin D-vel szemben. Kis molekulasúlyuk következtében vizes közegben igen jól oldhatók, ezért orális adagolásra különösen alkalmasak, és szintézisük viszonylag gazdaságos.
A találmány szerinti vegyületek ugyancsak alkalmasak szívelégtelenségek kezelésére is.
A találmány szerinti vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy egy (V) általános képletú vegyületet jégecet-víz eleggyel kezelünk szobahőmérsékleten, majd a terméket izoláljuk. A kiindulási anyagok szintézise során egy aminosav védetlen α-amino-csoportját acilezzük valamely (acilezési célra) aktivált karboxilcsoporttal rendelkező aminosavval, mely egyidejűleg saját a-nitrogénatomján megfelelő védőcsoportot tartalmaz. Ily módon a két aminosav között peptidkötést alakítunk ki, majd lehasítjuk az előzőekben említett védőcsoportot. Ezt a kapcsolási és védőcsoport lehasítási műveletet ismételten végrehajtjuk polipeptid felépítésére a molekulaszerkezet C-terminális végétől kiindulva, és így eljutva az N-terminális végig.
A találmány szerinti vegyületek előállítása során alkalmazott aminosavak kereskedelmi forgalomban,
HU 200473 Β például szabad savként, sóként vagy észtéiként, stb. hozzáférhetők, mind α-amino-védett, mind védeüen formában.
A 2,2-difluor-ciklohexil Sta vázát alkotó intermedier szintézisét úgy kezdjük, hogy N-terc-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint etil-bróm-difluor-acetáttal reagáltatunk, melynek során a (IV) képletű 3-S és R epimerek elegyét kapjuk
A kapott észternek alkil-aminnal történő ammonolfzise során a megfelelő N-alkil-amidot nyerjük.
Az amidokat vagy észtereket dioxánban sósavval kezeljük, azok aminocsoportjáról lehasítjuk a terc-butoxi-karbonil-védőcsoportot. Ezután a kapott aminosav-észtereket vagy amidokat BocPheHis(imBoc) peptiddel, 1-hidroxi-benzotriazol és diciklohexil-karbodiimid jelenlétében kezelve kapjuk a találmány szerinti szekvenciának megfelelő, védett vegyületet
Ezután az imidazolgyűrűri levő védőcsoportot, például ecetsav-víz eleggyel lehasítjuk, és így nyerjük a kívánt terméket.
A ketont tartalmazó, találmány szerinti polipeptideket úgy állítjuk elő, hogy a megfelelő R- vagy S-hidroxi-polipeptideket dimetil-szulfoxidban és triklór-ecetsav-anhidridben oxidáljuk.
A találmány szerinti vegyületeknek a renin angiotenzinogén-hasítást gátló aktivitását oly módon határozhatjuk meg, hogy
1. a renin angiotenzinogén-hasításának in vitro gátlását vizsgáljuk, vagy
2. ezekenk az in vivő exogén renin-indukált presszor antagonista hatását határozzuk meg.
A találmány szerinti vegyüietek antihipertenzív szerként orálisan vagy parenterális módon egyaránt adagolhatók, míg az orális adagolás előnyösebb a kezelt személy kényelme szempontjából. Általában ezeket az antihipertenzív vegyületeket orálisan, 0,5-50 mg/kg testúly/nap és parenterálisan 0,1-5 mg/kg testsúly/nap dózisban adagoljuk, természetesen ettől eltérő adagolás is alkalmazható a kezelt személy állapotától és az adagolt vegyülettől függően. Általában a kezelést alacsony napi dózisokban végezzük, és csak akkor emeljük, ha arra ténylegesen szükség van. A találmány szerinti vegyüietek gyógyászatilag elfogadható hordozóanyagokkal együtt is adagolhatók, az előzőekben már ismertetett módszerekkel, és az adagolás vagy egyszeri vagy többszöri dózisban egyaránt történhet
A találmány szerinti új vegyüietek a legkülönbözőbb dózisformákban adagolhatók, így például megfelelő, gyógyászatilag elfogadható inért hordozóanyagokkal keverve tabletta, kapszula, pirula, keménycukorka, por, spray, vizes szuszpenzió, elixtr, szirup és hasonló alakban. A hordozóanyagok például szilárd hígító- vagy töltőanyagok, steril, vizes közegek és különböző nem-toxikus szerves oldószerek, stb. Ezenkívül az orális gyógyászati készítmények célszerűen édesítő- és/vagy ízesítőszereket tartalmaznak, melyeket egyébként általánosan alkalmaznak ilyen célokra. Általában a találmány szerinti vegyüietek a orális dózisformákban, 0,5-90 súly% mennyiségben vannak jelen, olyan mennyiségben, amely a kívánt dózisegység előállításánál szükséges.
Orális adagolás esetén a tabletták különböző hordozóanyagokat, így például a nátrium-citrátot, kalcium-karbonátot és kalcium-foszfátot tartalmaznak, és ugyancsak tartalmazhatnak különböző szétesést elősegítő szereket, például keményítőt, és előnyösen burgonya- vagy tápióka-keményítőt, alginsavat és különböző komplex szilikátokat, ezenkívül különböző kötőanyagokat, például polivinil-pirrolidont, szaccharózt, zselatint és acacia-L A tablettázásnál ugyancsak gyakran alkalmazhatók csúsztatószerek, például magnézium-sztearát, nátrium-lauril-szulfát és talkum is. Hasonló jellegű sziláid készítményeket ugyancsak alkalmazhatunk töltőanyagként, puha és kemény zselatinkapszulák töltésére; az ilyen töltetekben előforduló előnyős anyagok például a kővetkezők: laktóz vagy tejcukor, valamint nagy molekulasúlyú polietilén-glikol. Ha vizes szuszpenziókat és/vagy elixíreket alkalmazunk orális adagolásra, a hatóanyagot különböző édesítő- vagy ízesítőszerekkel, színezőanyagokkal vagy festékekkel, és kívánt esetben emulgeálóés/vagy szuszpendálószerekkel, is keverhetjük, más, szokásos hígítószerekkel, például vízzel, etanollal, propilén-glikollal, glicerinnel és hasonlókkal, valamint ezek kombinációival együtt
Az alábbi példákban a találmány szerinti eljárást részletesen is ismertetjük.
/. példa
BocPheHis-22-Difluor-ciklohexilSta-N-metil-atnid [(I) általános képlet, ahol X = (a) képletü csoport és Rí = -NHCH3]
IA. Etil-5-cikIohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino-(R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentanoát és 3-(S) epimerje
0,798 g, vizes sósav-oldattal, etanollal és éterrel történő mosással, majd szárítással aktivált cinkpor 4 ml száraz tetrahidro-fiiranos elegyéhez keverés közben 25 ’C hőmérsékleten 0,179 ml titán-tetrakloridot adunk, és a kapott szuszpenziőt 15 percen át keverjük, és 0 ’C hőmérsékletre hűtjük. Ezt a szuszpenziót 3 perc alatt 1,04 g tisztított N-terc-butoxi-karbonil-hexahidro-L-fenil-alaninnal és 0,52 ml etil-bróm-difluor-acetát 4 ml száraz tetrahidro-furánnal készített oldatához adjuk. Az elegyet 30 percen át 25 ’C hőmérsékleten keverjük, majd 0,179 ml titán-tetraklorídot adunk hozzá. Az elegyet 15 percen át keverjük, majd erős keverés közben éter, víz és nátrium-hidrogén-karbonát-oldat elegyébe öntjük. Az éteres eXtraktumokat egyesítjük, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert vákuumban lepároljuk, és a kapott 1,4 g maradékot 130 g szilikagélen kromatografáljuk, kezdeti eluensként etil-acetát-hexán (1:6 tf) elegyet alkalmazva. Az eluenst ezután a fenti oldószerek 1:5 tf arányú elegyével cseréljük ki, és így 460 mg kevésbé poláros 3-(R) izomert és 453 mg polárosabb 3-(S) izomert kapunk.
IB. 5-Ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino-(R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsav-N-metil-amid
215 mg etil-5-ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino-(R)-3-hidioxi-2,2-difluor-pentanoát 2 ml metanollal készített elegyét 25 ’C hőmérsékleten metil-amin-gázzal kezeljük, és a reakcióelegyet zárt edényben 2 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, és a maradékot először 10 g szilikagélen, 500 ml etil-acetát-hexán (1:5 tf) eleggyel, majd egy második kromatográfiával ugyanezen oldószerek 1:1 térfogatarányú elegyével kromatográfiát 3
HU 200473 Β végzünk, és ily módon 155 mg kívánt terméket kapunk.
IC. 5-Ciklohexil-(S)~4-amino-(R)-3-hidroxb22-difluor-pentánsav-N-metil-amid-hidroklorid
139 mg 5-ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino-(R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsavat 2 ml 4 n dioxános sósavban oldunk 25 ’C hőmérsékleten. 1 óra elteltével az elegyet vákuumban bepároljuk, és a maradékot szárítva 119 mg cím szerinti, sárga, poralakú terméket kapunk.
ID. BocPheHis(imBoc)-22-difluor-ciklohexilSta-N-metil-amid
115 mg 5-ciklohexil-(S)-4-amino-(R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsav-N-metil-amid-hidroklorid 1 ml metilén-kloriddal készített oldatához 0 ’C hőmérsékleten 0,069 ml trietil-amint, 211 mg BocPheHis (imBoc)-t, 97 mg 1-hidroxi-benzotriazolt és néhány perces keverés után 87 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 0 ’C hőmérsékleten, 5-6 órán át keverjük, majd 25 ’C hőmérsékletre hagyjuk melegedni, ahol a keverés további 12 órán át folytatjuk.
Az elegyet szűrjük, a szilárd anyagot metilén-kloriddal mossuk, és a mosófolyadékot és szűrletet egyesítjük, majd szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetátban újra oldjuk, és az oldatot kétszer 2 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldattal, majd telített nátrium-kloridoldattal mossuk, és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot 13 g szilikagélen kromatografáljuk, 200-200 ml, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0 és 6,0 %-os metilénkloridos etanollal. A megfelelő frakciókat egyesítjük és szárazra pároljuk, ily módon színtelen habként 209 mg terméket kapunk.
IE. BocPheHis-2,2-Difluor-ciklohexilSta-N-metil-amid
200 mg BocPheHis(imBoc)-2,2-difluor-ciklohexilSta-N-metil-amid 1,6 ml jégecettel készített oldatához 0,4 ml vizet adunk, és a reakcióelegyet 25 ’C hőmérsékleten 2,5 órán át, majd 0 ‘C hőmérsékleten 15 órán át keverjük. Az elegyet vákuumban bepároljuk, és a kapott maradékot dietil-éterrel ismét bepárolva 180 mg fehér, poralakú terméket kapunk.
*H-NMR-spektrum, DMSO-de, 250 mHz, részleges, ppm TMS-ből:
1,32 (s, 9H, Boc), 2,69 (d, 3H, CH3N), 3,38 és
4,17 (m, 2H ea), 3,97, 4,48, 8,09 és 8,82 (m, IH ea), 6,87 és 7,58(s, IH ea,imidazolil CH),7,58 (m, IH) 7,08 (d, IH), 7,15-7,35 (m, kb. 6H, aromás).
2. példa
BocPheHis-2 2-Difluor-epbciklohexilSta-N-metil-amid [(I) általános képlet, ahol X = (b) képletű csoport és Rí = -NHCH3]
2A. 5-Ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino· -(S)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsav-bl-metil-amid
122,5 mg etil-5-ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino-(S)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentanoátból (IA. példa) kiindulva, és az IB. példa szerinti eljárást megismételve, azzal a különbséggel, hogy a rekcióelegyet 4 órán át 25 ’C hőmérsékleten keverjük, a kívánt terméket fehéres porként 97 %-os kitermeléssel nyerjük.
2B. 5-Ciklohexil-(S)-4-amino-(S)-3-hidroxb22-difluor-pentánsav-N-metil-amid-hidroklorid
Az IC. példában leírtak szerint járunk el, és 99 mg 5-ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-ammo-(S)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsav-N-dimetil-amidból indulunk ki. Ily módon a kívánt terméket sárga porként kvantitatív kitermeléssel állítjuk elő.
2C. BocPheHis( imBoc )-2 2 -Difluor-epi-ciklohexil-Sta-N-metibamid
Az ID. példában leírtak szerint járunk el mindenben, azonban kiindulási anyagként 82,6 g 5-ciklohexil-(S)-4-amino-(S)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentánsav-N-metil-amid-hidrokloridot alkalmazunk, és így a kívánt terméket színtelen habként 62 %-os kitermeléssel állítjuk elő.
2D. BocPheHis-2,2 -Difluor-epi-ciklohexilSta-N-metil-amid
Mindenben az ID. példában leírtak szerint járunk el, kiindulási anyagként 119,7 mg BocPheHis (imBoc)-2,2-difluor-epi-ciklohexilSta-N-metil-amidot alkalmazva. A kívánt terméket kvantitatív kitermeléssel, színtelen porként állítjuk elő.
’H-NMR-spektrum, DMSO-dö, 250 mHz, részleges, ppm TMS-ből:
1,32 (3, 9H, Boc), 2,70 (d, 3H, NCH3), 3,0 (m, 2-3H), 3,96-4,27 (átfedés m, 3H), 4,51 (q, IH), 6,88 és 7,48 (s, IH ea, imidazolil CH), 7,1-7,35 (m, 6-8H, aromás és NH), 7,84, 7,95 és 8,60 (m, IH ea, NH).
3. példa
BocPheHis-2 2 -Difluor-ciklohexilSla-etil-észter
1(1) általános képlet, ahol X = (a) képletű csoport] és Rí = -OC2H5]
3Λ. Etil-5-ciklohexil-(S)-4-amino-(R)-3-hidroxi-22-difluor-pentanoát-hidroklorid mg etil-5-ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino-(R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentanoátot 2 ml 4 n dioxános sósavval kezelünk 25 ’C hőmérsékleten 30 percen át. Az elegyet vákuumban szárazra párolva 57 mg cím szerinti terméket kapunk, színtelen porként.
3B. BocPheHis(imBoc)-2,2-Difluor-ciklohexilSta-etil-észter
Az ID. példában leírtak szerint járunk el, oly módon, hogy 53 mg etil-5-ciklohexil-(S)-4-amino-(R)-3-hidroxi-2,2-difluor-pentanoátot 0,5 ml metilén-kloridban 0,03 ml trietil-aminnal semlegesítünk, majd 89 mg BocPheHis(imBoc)-al kapcsolunk 42 mg 1-hidroxi-benzotriazolt és 36 mg diciklohexilkarbodiimidet alkalmazva. A terméket 4 g szilikagélen kromatografáljuk, eluensként 2 % etanolt tartalmazó metilén-kloridot alkalmazva, és ily módon 104 mg sárga, hab alakú terméket kapunk.
3C. BocPheHis-22-difluor-ciklohexilSta-etil-észter mg BocPheHis(imBoc)-2,2-difluor-ciklohexilSta-etil-észtert 1,5 ml jégecet-víz (4:1) tf elegyben oldunk, és 25 ’C hőmérsékleten 18 órán át keverünk. Az elegyet ezután vákuumban bepároljuk, dietil-éterrel újra bepároljuk, majd súlyállandóságig szárítjuk, és ily módon 87 mg színtelen, hab-alakú terméket kapunk.
Hasonló módon, etil-5-ciklohexil-(S)-4-terc-butoxi-karbonil-amino-(S)-3-hidroxi-2,2-dífluor-pentanoátból kiindulva, és a 3A- 3C. eljárások szerint eljárva BocPheHis-2,2-difluor-epi-ciklohexilSta-etil-észtert állítunk elő.
HU 200473 Β 'H-NMR-spektrum, DMSO-dő, 300 mHz, részleges, ppm TMS-ból:
1,27 (t, 3H, etil CH3), 1,30 (s, 9H, Boc), 2,70, 3,90 és 4,44 (m, 1H ea), 2,90 és 4,16 (m, 2H ea), 4,29 (q, 2H, etil CH2), 6,86 és 7,52 (s, 1H ea, imidazolil CH), 7,05, 7,65 és 8,13 (d,'lH ea, NH), 7,15-735 (m, aromás és NH, 6-7H).
4. példa
N-terc-Butoxi-karbonil-L-fenil-alanil-L-N(im-terc-butaxi-karbonil-hisztidin [BocPheHis(imBoc)]
A. Boc-L-fenil-alanil-L-hisztidin-metil-észter
36,4 g L-hisztidin-metil-észter-dihidroklorid 1 1 diklór-metánnal készített szuszpenzióját 5 ’C hőmérsékletre hűtjük, és 52 ml trietil-aminnal kezeljük. 10 perc elteltével 40 g Boc-L-fenil-alanint adunk hozzá, majd ezt követően 30,6 g 1-hidroxi-benzotriazolt, végül további 5 perc után 30,8 g diciklohexil-karbodiimidet, és az elegyet 0 ’C hőmérsékleten 4 órán át és 20 ‘C hőmérsékleten 90 órán át keveijük. Az elegyet ezután szüljük, és a szüredék diklór-metánnal mossuk, majd az egyesített szerves fázisokat bepároljuk, és a maradékot 1 1 etil-acetátban oldjuk. 10 perces keverés után az elegyet leszűrjük, és a szűrietet háromszor 150 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldattal, telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfát felett szántjuk és bepároljuk, ily módon 45,9 g színtelen, szilárd anyagot kapva, melyet további tisztítás nélkül használunk fel a B. lépésben.
B. BocPheHis(imBoc)
Az A. lépésben nyert szilárd anyag 40 g-ját 600 ml metanolban és 200 ml vízben oldjuk, majd a 0 ’C hőmérsékletre hűtött elegyet 40 g vízmentes kálium-karbonáttal kezeljük, 15-20 ’C hőmérsékleten
2,5 órán át, 28 ’C hőmérsékleten 1,5 órán át keverjük, majd 10 ’C hőmérsékletre hűtjük, és pH-ját 12 n sósav hozzáadásával 4,2 értékre állítjuk. A fenti oldatot körülbelül 250 ml térfogatúra koncentráljuk, és 70 ml νϊζβζ majd 660 ml dioxánt adunk hozzá. Az oldat pH-értékét 0 ‘C hőmérsékleten 13,5 értékre állítjuk és 29 mg di-terc-butil-dikarbonátot adunk hozzá. Félóra elteltével, mely idő alatt a hőmérséklet 20 ’C-ra emelkedik, a pH-értéket 9,5-re csökkentjük, és 10 ml di-terc-butil-dikarbonátot adunk az elegyhez. 1 óra elteltével a pH-érték 8,0, és a reakció teljesen lejátszódik, fordított fázisú HPLC szerint. Az elegyet ezután bepároljuk, és ily módon eltávolítjuk a dioxánt, majd 300 ml vizet adunk hozzá, és az elegyet kétszer éterrel mossuk, majd 500 ml etil-acetátot adunk hozzá, és tömény pH-értékét 10 ’C hőmérsékleten
1,2-re állítjuk, tömény sósav adagolásával. A szerves fázist elválasztjuk, és a vizes fázist kétszer etil-acetáttal mossuk. Az etil-acetátos fázisokat egyesítjük, vízzel, majd telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, nátrium- szulfát felett szárítjuk és bepároljuk, majd éterrel többször újra bepároljuk és 25 ’C hőmérsékleten szárítjuk. Ily módon színtelen habot kar púnk, melynek súlya: 44 g. HPLC: 60/40 acetonitril/pH 2,1, 0,1 mólos foszfát-puffer, töltet: Zorbax C-8 25 cm x 4,6 mm, 214 nm, 1,5 ml/perc retenciós idő, 3,23 (a teljes abszorpció 94 %-a 10 perc alatt).

Claims (5)

1. Eljárás (I) általános képletű peptidek előállítására, ahol
Rl 1-3 szénatomos alkoxicsoport vagy 1-3 szénatomos alkil-amino-csoport, és
X (a) vagy (b) képletű csoport, azzal jellemezve, hogy valamely (V) általános kép» letű vegyületet jégecet-víz eleggyel kezelünk szobahőmérsékleten, majd izoláljuk a kapott terméket
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 4:1 tf/tf arányú jégecet-víz elegyet alkalmazunk, és a terméket a reakcióelegy bepárlásával választjuk el.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol
Rl metil-amino-csoport, és X (a) képletű csoport, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált vegyűletekból indulunk ki.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol
Rl metil-amino-csoport, és X jelentése (b) képletű csoport, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált vegyűletekból indulunk ki.
5. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-4. igénypontok bármelyike szerint előállított (I) általános képletű peptidet, ahol Rí és X az 1. igénypontban megadott, gyógyszerkészítmények előállításánál általánosan alkalmazott adalékanyagokkal összekeverünk és szokásos dózisformává alakítunk.
HU855069A 1985-11-01 1985-11-01 Process for producing polypeptides containing difluorocyclostatine and pharmaceutical compositions comprising same HU200473B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US1985/002177 WO1987002675A1 (en) 1985-11-01 1985-11-01 Difluorocyclostatine containing polypeptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT46042A HUT46042A (en) 1988-09-28
HU200473B true HU200473B (en) 1990-06-28

Family

ID=22188920

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU855069A HU200473B (en) 1985-11-01 1985-11-01 Process for producing polypeptides containing difluorocyclostatine and pharmaceutical compositions comprising same

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP0222523A3 (hu)
JP (1) JPS63218697A (hu)
KR (1) KR890004365B1 (hu)
AU (1) AU592122B2 (hu)
DK (1) DK521186A (hu)
FI (1) FI872890A (hu)
HU (1) HU200473B (hu)
IL (1) IL80431A0 (hu)
NZ (1) NZ218116A (hu)
PT (1) PT83654B (hu)
WO (1) WO1987002675A1 (hu)
ZA (1) ZA868305B (hu)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4599198A (en) * 1985-08-02 1986-07-08 Pfizer Inc. Intermediates in polypeptide synthesis
GB8619182D0 (en) * 1986-08-06 1986-09-17 Sandoz Ltd Peptides & derivatives
US5238923A (en) * 1989-05-26 1993-08-24 Warner-Lambert Company Amino-substituted heterocycles as renin inhibitors
US5071837A (en) * 1990-11-28 1991-12-10 Warner-Lambert Company Novel renin inhibiting peptides
IL108031A0 (en) * 1992-12-22 1994-04-12 Procter & Gamble Difluoro pentapeptide derivatives and pharmaceutical compositions containing them
US7348055B2 (en) 2001-12-21 2008-03-25 Surmodics, Inc. Reagent and method for providing coatings on surfaces

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1245217A (en) * 1981-12-10 1988-11-22 Joshua S. Boger Renin inhibitory peptides having phe su13 xx deletion
CA1254699A (en) * 1984-03-12 1989-05-23 Jasjit S. Bindra Renin inhibitors containing statine or derivatives thereof
DE3674131D1 (de) * 1985-04-19 1990-10-18 Upjohn Co Substituierte dihalo-statin-reninhemmungsmittel.
US4599198A (en) * 1985-08-02 1986-07-08 Pfizer Inc. Intermediates in polypeptide synthesis

Also Published As

Publication number Publication date
HUT46042A (en) 1988-09-28
PT83654A (en) 1986-11-01
EP0222523A2 (en) 1987-05-20
FI872890A0 (fi) 1987-06-30
NZ218116A (en) 1988-10-28
WO1987002675A1 (en) 1987-05-07
DK521186D0 (da) 1986-10-31
KR890004365B1 (ko) 1989-10-31
IL80431A0 (en) 1987-01-30
JPS63218697A (ja) 1988-09-12
FI872890A (fi) 1987-06-30
AU6458186A (en) 1987-05-07
AU592122B2 (en) 1990-01-04
KR870005011A (ko) 1987-06-04
EP0222523A3 (en) 1988-12-07
PT83654B (pt) 1989-05-31
ZA868305B (en) 1988-06-29
DK521186A (da) 1987-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5744451A (en) N-substituted glutamic acid derivatives with interleukin-1 β converting enzyme inhibitory activity
JP3912798B2 (ja) 新規アミノ酸誘導体、それらの調製方法及びこれらの化合物を含む医薬組成物
US4863904A (en) Dipeptides as renin inhibitors
KR890003602B1 (ko) 옥사-및 아자호모사이클로스타틴 폴리펩티드의 제조방법
CA1288547C (en) 1-(3-mercapto-2-methylpropanoyl) prolyl amino acid derivatives and salts thereof, processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing such compounds
EP0216539A2 (en) Novel amino acid derivatives
JPH03386B2 (hu)
EP0577775A1 (en) Anti-thrombotic peptides and pseudopeptides
HU204285B (en) Process for producing renin-inhibiting polypeptides of small molecule mass and pharmaceutical compositions containing them
US3853836A (en) Psychopharmacologically active peptides related to acth
EP0728746B1 (en) Azepinone compounds useful in the inhibition of ACE and NEP
US4216209A (en) Tripeptide angiotensin converting enzyme inhibitors
EP0009898B1 (en) Novel anti-hypertensive mercaptoacylamino acid derivatives, their preparation and use
KR900009022B1 (ko) 비 펩타이드성 레닌 억제제
HU200473B (en) Process for producing polypeptides containing difluorocyclostatine and pharmaceutical compositions comprising same
US4855303A (en) Fluorine containing renin inhibitors
EP0297815A2 (en) Fluorine containing renin inhibitors
WO1997028183A1 (en) Peptide inhibitors of hematopoietic cell proliferation
US4853463A (en) Amino acid derivatives
HU200475B (en) Process for producing renin-inhibiting peptides and pharmaceutical compositions comprising such compounds
JPH0694477B2 (ja) 燐含有レニン阻害剤
EP0272583B1 (en) 5-substituted amino-4-hydroxy-pentenoic acid derivatives and their use
US4859654A (en) Homocyclostatine and cyclostatine containing polypeptides as antihypertensive agents
KR870000371B1 (ko) 폴리펩타이드 유도체의 제조방법
HU203250B (en) Process for producing di- and oligopeptide derivatives and pharmaceutical compositions comprising same

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee