HU191865B

HU191865B - Process for manufacturing peptides antagonistic to lh-rh

Info

Publication number: HU191865B
Application number: HU832619A
Authority: HU
Inventors: Jean E F Rivier; Wylie W Vale
Original assignee: Salk Inst For Biological Studi
Priority date: 1982-07-26
Filing date: 1983-07-25
Publication date: 1987-04-28
Also published as: DD216923A5; NZ204692A; KR840005710A; NO832671L; US4444759A; PH18967A; DK328183D0; KR900003096B1; JPS5946253A; IL69098A0; ATE33252T1; GR78886B; IL69098A; IE55580B1; CA1263500A; PT77067A; ES524370A0; PT77067B; EP0100218B1; MX7312E

Description

ELJÁRÁS LH—RH ANTAGONISTA PEPTIDEK ELŐÁLLÍTÁSÁRA (57) KIVONAT

A találmány tárgya eljárás új LH-RH antagonista peptidek előállítására. E vegyületek az (I) általános képlettel jellemezhetők, ahol

X 1-4 szénatomos alkanoilcsoport vagy benzoilcsoport,

R₂ jelentése 4—Cl-D-Phe, 4-F-D-Phe,

4-NO₂ —D-Phe vagy 4—Br-D—Phe,

R₅ jelentése Tyr vagy 2-Cl-Phe,

Re jelentése 4-NH₂ -D-Phe vagy D-Arg,

R₇ jelentése Leu vagy N“Me-Leu, és

Rio jelentése Gly—NH₂, -NHCH₂CH₃ vagy

D-Ala-N₂.

X -/3-D-2NAL-R₂ -D-Trp-Ser-R₅ -R$ -R₇ -ArgPro- R₁₀1

-1.1

191 865

A találmány tárgya eljárás új peptidek előállítására, amelyek emlősöknél — beleértve az embert - gátolják a hipofízis gonadotropin-termelését és alkalmasak az ovuláció gátlására és/vagy szteroid hormonok leadásának visszaszorítására. Közelebbről meghatározva a találmány szerint olyan peptideket állítunk elő, amelyek gátolják az ivarmirigyek működését és szteroid hormonok, mint progeszteron és tesztoszteron termelését.

A hipofízis nyélen keresztül kapcsolódik a hipotalamuszként ismert agyalapi részhez. A hipofízis termeli 1 egyebek mellett a follikulus-stimuláló hormont (FSH) és a luteinizáló hormont (LH), melyeket gonadotropinoknak vagy gonadotrop hormonoknak is nevezünk. E hormonok együttesen szabályozzák az ivarmirigyek funkcióját, amikor azok a herében tesztoszeront és a petefészek- 1 ben progeszteront termelnek, és szabályozzák a csírasejtek termelését és érését is.

Az agyalapi mirigy elülső lebenyének hormontermeléséhez általában a hipotalamuszban képződő más hormoncsoport előzetes felszabadulása szükséges. A hipotalamuszhormonok egyike gonadotrop hormonok, főleg az LH felszabadulását megindító faktorként („releasing factor”) hat, és e hormont e leírásban GnRH-nak nevezzük, bár az LH—RH és az LRF megjelölés is használatos.

A GnRH-t a következő szerkezetű dekapeptidként \ izolálták és jellemezték:

p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-ProGly-NH₂.

A peptidek két vagy több aminosavat tartalmazó vegyületek, melyekben az egyik aminosav karboxilcsoportja a másik sav aminocsoportjához kapcsolódik.

A GnRH fenti képlete összhangban áll a peptidek szokásos jelölésével, ahol az aminocsoport a bal oldalon és a i karboxilcsoport a jobb oldalon helyezkedik el. Az aminosavmaradék helyzetének azonosítása céljából az aminosavmaradékot balról jobbra menve számozzák. A GnRH esetében a glicin karboxilcsoportjának hidtoxilrészét aminocsoport (NH₂) helyettesíti. A fenti aminosav- maradékok rövidítései szokványosak és az aminosavak triviális nevén alapulnak, így p—Glu = piroglutaminsav

His = hisztidin

Trp = triptofán

Ser = szerin

Tyr - tirozin

Gly = glicin

Leu = leucin

Arg = arginin

Pro = prolin

Phe = fenil-alanin és

Ala =alanin.

Ezeket az aminosavakat a valinnal, izoleucinnal, treoninnal, lizinnel, aszparaginsavval, aszparaginnal, glutaminnal, ciszteinnel, metioninnal, fenil-alaninnal és prolinnal együtt általában szokványos, természetes előfordulású, vagy fehérje-eredetű aminosavaknak tartják.

A glicin kivételével a találmány szerinti peptidek aminosavai L-konfigurácíójúak, ha erre nézve külön utalás nincs.

Ismeretes, hogy ha a GnRli dekapeptid 6-helyzetében a Gly-t D-aminosavak helyettesítik, a kapott peptid anyag emlősöknél mintegy 1-35-ször hatásosabban serkenti az 2

LH és egyéb gonadotropinok hiopofízis általi leadását, mint a GnRH. K. U. Prasad és munkatársai szerint [J.

Med. Chem. 19, 492 (1976)] a nagyobb hatékonyság úgy is elérhető, hogy a 3-helyzetben 3-(l -naftilj-Ala szubsztituenst alkalmazunk. E felszabadító hatás bekövetkezik, ha emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan, orálisan, intranazálisan vagy intra-, vaginálisan alkalmazzák a GnRH-analógot.

Az is ismeretes; hogy a GnRH dekapeptid 2-helyzeté0 ben a His különböző aminsavakkal való helyettesítése (vagy a His elhagyása) olyan analógokhoz vezet, melyek emlősöknél gátolják az LH és más gonadotropinok hipofízis általi leadását.

Bizonyos okokból az ovuláció meggátlása kívánatos nőstény emlősöknél, és az ovuláció megakadályozása céljából a GnRH normális működését antagonizáló GnRHanalógokat alkalmazzák. Emiatt széles körben vizsgálják a GnRH-antagonista GnRH-analógoknak fogamzásgátlásra vagy a fogamzási periódusok szabályozására ?0 való esetleges alkalmazását. Az ilyen antagonisták hím emlősöknél is hasznosnak bizonyultak a gonadotropinok kiválasztásának szabályozására és ezért az utóbbiaknál fogamzásga'tlókként alkalmazhatók. Olyan peptidek létrehozására van szükség, amelyek hatásos antagonistái

Í5 az endogén GnRH-nak és amelyek megakadályozzák az LH szekrécióját és az emlősök ivarmirigyeinek szteroidtermelését.

A találmány céljául annak a feladatnak a megoldását tűztük ki, hogy emlősöknél — beleértve az embert 30 gonadotropin-felszabadulást gátló peptideket állítsunk elő, továbbá eljárást dolgozzuk ki hím és nőstény emlősök ivarmirigyei szteroid-termelésének gátlására. A tökéletesített GnRH-analógok GnRH-antagonisták és emlősöknél gátolják a szaporodási folyamatot. Ezen analógok a gonadotropinok és szexuálhormonok képződésének gátlására használhatók különböző körülmények között, beleértve a korai nemi érést, hormon-dependens rosszindulatú daganatokat, menstruációs zavarokat és endometriózist.

Általában a találmány szerint olyan peptideket szintetizálunk, amelyek emlősöknél — beleértve az embert — erősen gátolják a gonadotropinok hipofízis általi szekrécióját és/vagy gátolják az ivarmirigyek szterojdtermelését. E peptidek olyan GnRH-analógok, ahol 1-helyzetű szubsztitúció van /3-(2-naftil)-D-alanin (a továbbiakban βD-2NAL) formájában 3-helyzetű szubsztitúció D-Trp formájában, 6-helyzetű szubsztitúció és 2-helyzetben is szubsztituens foglal helyet, az 1-helyzetű szubsztituens úgy módosítható, hogy α-amino-csoportja acilcsoportot, például formil-, acetil- vagy benzoilcsoportot tartalmaz; előnyben részesítjük az acetilcsoportot (Ac). A 2-helyzetben módosított D-Phe van jelen, ami a benzolgyűrű specifikus módosítása következében fokozott antagonisía aktivitást eredményez. A Phe benzolgyűrűje a paravagy 4-helyzetben klór-, fluor- vagy brómatommal vagy nitrocsoporttal szubsztituált, melyek közül előnyben részesítjük a klór- és a fluoratomot. A 6-helyzetben 4-NH₂ -D-Phe vagy D-Aig foglal helyet. Az 5-, 7- és 10helyzetben a szubsztitúció tetszőleges. Ha az 5- helyzetben Cl-Phe szubsztitúciót alkalmazunk, a klóratom az orto- vagy vagy 2-pozícióban helyezkedik el.

Minthogy ezek a peptidek igen hatásosan gátolják az LH-felszabadulást, gyakran GnRH-antagonistáknak nevezik őket. E peptidek nőstény emlősöknél gátolják az ovulációt, ha igen alacsony dózisszinten a proösztrusz-22

191 865 bán alkalmazzuk őket, és hatásosan segítik elő a megtermékenyített peték reszorpcióját is, röviddel a fogamzás után alklalmazva. E peptidek hím emlősök kontraceptív kezelésére is használhatók.

Közelebbről meghatározva, a találmány szerint elő- 5 állított peptidek a következő általános képlettel ábrázolhatok:

Χ-β-D—2NAL—R₂ —D—Trp—Ser—R_s -R« -R₇ Arg-Pro—R₁₀, ahol 10

X 1-4 szénatomos alkanoilcsoport vagy benzoilcsoport,

R₂ jelentése 4-Cl-D-Phe, 4-F-D-Phe,

4-N0₂-D-Phe vagy 4-Br-D-Phe;

R₅ jelentése Tyr vagy 2-Cl-Phe; 15

Re jelentése D-Arg vagy 4-NH₂ —D-Phe;

R₇ jelentése Leu vagy N®ME-Leu; és

R₁₀ jelentése Gly—NH₂, -NHCH₂CH₃ vagy

D-Ala—NH₂.

β—D—NAL alatt az alanin D-izomerjét értjük, melyet 20 a β-szénatomon naftilcsoport szubsztituál. Előnyösen a β—D—2NAL aminosavat alkalmazzuk, ami azt jelenti, hogy a β-szénatom a naftalinhoz a gyűrűszerkezet 2helyzetében kapcsolódik.

A találmány szerinti peptidek klasszikus eljárással 25 oldószerben szintetizálhatok, vagy szilárd fázisú technikával állíthatók elő klórmetilezett gyantát, metil-benzhidril-amin-gyantát (MBHA) vagy benzhidril-amin-gyantát, (BHA) használva. A szilárd fázisú szintézist lépésenként módszerrel hajtjuk végre, a láncot egyenként 30 növelve a soron következő aminosav hozzákapcsolásával (az eljárást részletesen ismerteti a 4,211,693 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás).; Előnyösen a peptidkémiában jól ismert oldalláncvédő csoportokat adunk a Ser, Tyr, Arg és His aminosavak-,35 hoz, mielőtt hozzákapcsolnák őket a gyantán épülő j lánchoz. Az ilyen eljárás teljesen védett intermedier^;peptidgyantát eredményez.

A találmány szerinti intermedierek a következő általános képlettel szemléltethetők: 40

Χ-β-D—2N AL-R₂ —D—Trp(X² )-Ser-(X³ )Rs (X⁴ )-R« (X⁵ )-R7 - Arg(X⁵ )-Pro-X⁶, ahol

X² hidrogénatom, vagy az indol-nitrogén védőcsoport- 45 ja, például formil- vagy benzilcsoport; sok szintézisnél azonban nincs szükség a Trp megvédésére.

X³ hidrogénatom vagy a Ser alkoholos hidroxilcsoportjának védőcsoportja, és jelentése például acetil-, benzoil-, tetrahidropiranil-, ferc-butil-, tritil-, BO benzil- vagy 2,6-diklór-benzil-csoport. Előnyben részesítjük a benzilcsoportot.

X⁴ . hidrogénatom vagy a Tyr fenolos hidroxilcsoportjának védőcsoportja és jelentése például tetrahidropiranil-, terc-butil-, tritil-, benzil-, benzil-oxi-karbo- 55 il-, 4-bróm-benzil-oxi-karbonil- vagy 2,6-diklórbenzil-oxi-karbonil- vagy 2,6-diklór-benzil-csoport. Előnyben részesítjük a 2,6-diklór-benzil-csoportot.

X^s az Arg nitrogénatomjának védőcsoportja és jelentése például nitro-, Tos, benzil-oxi-karbonil-, ada- θθ mantil-oxi-karbonil-csoport vagy Boc. X⁵ azonban hidrogénatom is lehet, ami azt jelenti, hogy nincsenek védőcsoportok az Arg oldalláncbeli nitrogénatomjain. Előnyben részesítjük a Tos csoportot.

X⁶- jelentése Gly—O-CH₂-[gyantahordozó];

-O-CH₂-[gyantahordozó]; D-Ala-OCH₂-[gyantahordozó]; Gly-NH-[gyantahordozó]; D-Ala-NH-[gyantahordozó]; és Gly-hez vagy D-Ala-hoz, vagy közvetlenül Pro-hoz kapcsolódó OH-, észter-, amid-vagy hidrazidcsoport.

Az X²—X⁵ oldallánc-védőcsoportok megválasztásának kritériuma, hogy a védőcsoport stabil legyen a reagenssel szemben annak a reakciónak a körülményei között, melyet a szintézis minden lépésénél az a-aminocsopcrt eltávolítására alkalmazunk. A védőcsoportnak nem szabad lehasadnia a kapcsolás körülményei között, és ekávolíthatónak kell lennie a kívánt aminosav-szekvencia szintézisének befejezése után, a peptidláncot nem befolyásoló reakciókörülmények között.

Ha X⁶ jelentése Gly—0—CH₂ -[gyantahordozó], D-Ala-0-CH₂-[gyantahordozó] vagy -0CH₂-[gyantahordozó], a polisztirol gyantahordozó számos funkciós ’ csoportja egyikének észterrésze vesz részt a kötés létrehozásában. Ha az X⁶ csoport Gly-NH-[gyantahordozó] vagy D-Ala-NH-[gyantahordozó], úgy amidkötés kap: csolja a Gly-t vagy a D-Ala-t a BHA gyantához vagy ί MBHA gyantához.

Ηι X jelen van a végső képletben, akkor X védőcsoportként használható a D-NALa-aminocsoportjához, és ebben az esetben ezen utolsó minosavnak a peptidlánchoz való kapcsolása előtt alkalmazhatjuk.

A teljesen megvédett peptid a klórmetilezett gyantahordozóról ismert módon ammonolízissel hasítható le és így teljesen megvédett amid-köztiterméket kapunk.

; A peptid védöcsoportjainak eltávolítását, valamint a pep; tíd lehasítását a benzhidril-amín gyantáról 0 ⁴ C-on hidro' gén-fiuorid (HF) segítségével hajtjuk végre. A HF-os kezelés eiőtt előnyösen anizolt adunk a pepiidhez. A HF vákuumban való eltávolítása után a lehasított, védőcsoport mentesített peptidet célszerűen éterrel kezeljük, dekantáljuk, híg ecetsavban felvesszük és liofilizáljuk.

A peptidet ioncserélő kromatográfiával tisztítjuk karboxi-metil-cellulóz (CMC)· oszlopon, majd megoszlásos kroriatográfiát alkalmazunk Sephadex G-25 oszlopon Ϊ n-butanol/0,1 n ecetsav (1:1 térfogatarány) eluenst hasz; nálva, vagy ismert módon nagyteljesítményű folyadék kromatográfiai (HPLC) alkalmazunk.

: A találmány szerinti peptidek 100 Mg per testsúly-kg• nál alacsonyabb dózisszinteken gátolják nőstény patkáί nyok ovulációját, ha déltájban a proösztrusz napján alkalmazzuk őket. Az ovuláció tartós visszaszorítása céljából körülbelül 0,1-2,5 mg per testsúly-kg dózisszintek alkalmazása szükséges. A találmány szerinti antagonisták hatásos fogamzásgátlók akkor is, ha szabályos ütemben hím emlősöknél alkalmazzuk őket. Mivel e vegyületek csökkentik a tesztoszteronszintet (nemkívánatos következmény normális, szexuálisan aktív hímeknél), célszerű lehet tesztoszteron utánpótlási dózisokat alkalmazni a GnRH-antagonistával együtt. Ezen antagonisták más célból is használhatók a gonadotropinok és nemi hormonqk képződésének szabályozására, mint fentebb említettük.

-3.1

191 865

Példa

Az I. táblázatban feltüntetett peptidek

X—β—D- 2NAL—R₂ —D—Trp—Ser—R_s — R₆ —Leu—Arg— Pro—Rjo általános képletűek, melyeket a fentebb említett szilárd fázisú tecnikával állítunk elő:

I. táblázat

Foigatóképesség [a]”

Példa száma	X	R,	R.	R,	R,	Rio	(c=l, 50 %-os ecetsavban)
1.	Ac	4-F-D-Phe	Tyr	D—Arg	Leu	Gly-NH₂	-29,1°
2.	Ac	4-F-D-Phe	Tyr 4-	-NH₂-D-	-Phe Leu	Gly-NHj	-44,5°
3.	Ac	4_C1—D—Phe	Tyr	D—Arg	Leu	Gly-NH₂	-33,8°
4.	Ac	4—Cl—D—Phe	Tyr	D—Arg	Leu	NHCH₂CH₂	-33,6°
5.	Ac	4-NOj-D-Phe	Tyr	D—Arg	Leu	nhch₂ch₃	-20,Γ
6.	Ac	4—Br-D-Phe	Tyr	D—Arg	Leu	nhch₂ch₃	-23,Γ
7.	Ac	4-F-D-Phe	Tyr	D-Arg	N“-Mé-Leu -	D-Ala-NH₂	-27,2°
8,	Ac	4-F-D-Phe	Tyr	D—Arg	Leu	Gly-NHj	-45,5³
9.	Ac	4_F—D-Phe	2—Cl—Phe	D-Arg	Leu	Gly-NH₂	-25,7°
10.	Bz	4-F-D-Phe	Tyr	D-Arg.	Leu	Gly-NH₂	-11,2°
11.	Ac	4-F-D-Phe	2—Cl—Phe	D—Arg	N“-Me-Leu	Gly-NHj	• -46,3°
12,	Ac	4-C1-D—Phe	Tyr	D-Arg	Leu	Gly-NHj	-40,6°
13,	Ac	4-F—D—Phe	Tyr	D-Arg	Leu	NHCH₂CH₃	-28,8°

Példaképpen a fenti 1. számú, [Ac— -D-2NAL^{* 1 11}, 4-F—D-Phe², D-Trp³, D-Arg⁶ ]- GnRH jelölésű peptid jellemző szilárd fázisú szintézisét ismertetjük az alábbiakban. E peptid képlete a következő:

Ac-0-D-2NAL-4-F-D-Phe-D-Tip-Ser-TyrD-Arg—Leu-Arg-Pro—Gly-NH₂.

BHA gyantát használunk, és Boc-védett Gly-t kapcsolunk a gyantához metilén-dikloridban (CH₂C1₂) 2 óra alatt; a Boc-származékot háromszoros feleslegben alkalmazzuk és aktivátorként DCC-t használunk. A glicin-rész a BHA-részhez amidkötéssel kapcsolódik.

Minden aminosavrész hozzákapcsolása után a mosást, védőcsoportlehasítást és a következő aminosavrész hozzákapcsolását az alábbi munkamenet szerint hajtjuk végre automatizált készüléket használva és körülbelül 5 g gyantából kiindulva:

Keverési

Lépés Reagensek és műveletek idők (perc)

CH₂C1₂ mosás - 80 ml (kétszer) 3

Metanol (MeOH) mosás — 30 ml 3 (kétszer) 3

CH₂C1₂ mosás - 80 ml (háromszor) 3

50 % trietanol-amin (TEA)+5 % 1,2-etánditiol CH₂C1₂ -ben - 70 ml (kétszer) 10

CH₂C1₂ mosás — 80 ml (kétszer) 3

12,5 % TEA CH₂ Cl₂ -ben - 70 ml (kétszer) 5

Me OH mosás — 40 ml (kétszer) 2

CH₂ Cl₂ mosás — 80 ml (háromszor) 3

Boc-aminosav (10 millimól) 30 ml dimetil-formamidban (DMF) vagy CH₂Cl₂-ben, függően az illető védett aminosav oldhatóságától (egyszer), plusz DCC (10 millimól) CH₂ Cl₂ -ben 30-300

MeOH mosás — 40 ml (kétszer) 3

12,5 % TE A CH₂ Cl₂ -ben - 70 ml (egyszer) 3 θ_α 12 MeOH mosás — 30 ml (kétszer) 3

II táblázat folytatása

191 865 dehidro—Pro¹, 4-F-D-Phe², D-Trp³’⁶]-GnRHt, vagy pedig a vizsgálandó peptidet adjuk 0,01—10 nanomól koncentrációban. A csak GnRH-val kezelt mintákban szekretált LH mennyiségét összevetjük a pepiiddel plusz GnRH-val kezelt mintákban kiválasztott LHmennyiséggel.

Kisebb, mint

0,1 [antagonista] l[GnRH] arány mellett a standard peptid általában 50 %-át blokkolja a GnRH hatására felszabadult LH mennyiségének.

A fent leírt peptid nőstény patkányok ovulációjára gyakorolt gátló hatását is meghatározzuk. E próbában adott s?ámú (6 darab), 225-250 g testsúlyú ivarérett nőstény Sprague-Dawley patkányt beoltunk kukoricaolajban felvett 10 gg pepiiddel, déltájban a proösztrusz napján. A proösztrusz az ösztrusz (ovuláció) előtti délutánra esik. Kontrollként külön nőstény patkánycsoportot használunk, melynek nem adunk peptidet. A kontroll nőstény patkányok mindegyikénél ovuláció következik be az ösztrusz idején; a kezelt patkányok egyikénél sem jön létre ovuláció. így tehát a peptid nagyon hatásosan gátolja a nőstény patkányok ovulációját igen alacsony dózisokban, és a peptidet tökéletesen hatásosnak tartjuk körülbelül 10 gg dózisban. További próbákat végzünk alacsonyabb dózisokkal, melyeknek eredményeit a II. táblázatban adjuk meg.

A fennmaradó 2—7. számú peptidet hasonlóan szintetizáljuk és tisztítjuk. Az aminosavelemzés elvégzése után a tisztaságot HPLC útján állapítjuk meg különböző oldószenendszereket alkalmazva. A hasonló módon végrehajtott in vitro próba azt mutatja, hogy az összehasonlító standard pepiidhez viszonyítva mindegyik vizsgált peptid hatásos, Az in vivő próbát különböző dózisokkal hajtjuk végre. Az eredményeket a II. táblázat tartalmazza.

II táblázat

Peptid száma	In vitro hatékonyság	In vivő
dózis (gg)	ovuláló állatok sz.
1.	0,44	10 5 2,5 1 0,5	0/6 0/8 0/10 0/8 2/11
2.	1,4	5	3/6
3.		.1	0/10
	0,56	0,5	2/10
4.	0,38	10 5 2,5 1	0/8 0/7 0/10 0/4
		0,5	6/6
5.	0,20	5	4/10
6.	0,46	2,5	9/10
7.	0,63	1 0,5	1/10 7/10
8.		1 0,5	0/5

Pépid In vitro szánta hatékonyság	In vivő
dózis (pg)	ovuláló állatok sz.
9.	1	0/7
10.	0,5 1	0/4
11.	2	1/10
12.	1 1,5	5/10 6/7
13.	10	0/10
= [Ac-dehidro-Pro¹	, 4-F-D-	-Phe², D-Trp³*}-

GnRH-hoz viszonyítva.

Mindegyik vizsgált peptid alkalmas koncentrációban in vitrc igen hatásosan gátolja a GnRH-indukált LHszekréciót. bár legtöbbjük in vitro valamivel kevésbbé hatásos az összehasonlító standardnál; e peptidek azonban in vivő sokkal hatásosabbak.

Mindegyik peptid igen kis dózisokban hatásosan gátolja nőstény emlősök ovulációját, és némelyikük legalább kétszer hatásosabb bármely eddig ismert és vizsgált GnRH-antagonistánál.

A találmány szerinti peptideket alkalmazhatjuk gyógyszerészetileg elfogadható,' nem mérgező sók, mint savaddíciós sók, vagy fémkomplexek, például cinkkel, báriummal, kalciummal, magnéziummal, alumíniummal és hasonlókkal képezett sók (melyeket itt addíciós sóknak tekintünk), vagy a kettő kombinációjának formájában. Jellemző savaddíciós só a hidroklorid, hidrobromid, szulfát, foszfát, nitrát, oxalát, fumarát, glükonát, tannát, maleát, acetát, citrát, benzoát, szukcinát, algmát, pamoát, malát, aszkorbát, tartarát és hasonlók. Ha a hatóanyagot tabletta formájában kívánjuk alkalmazni, a tabletta gyógyszerészetileg elfogadható hígítót tartalmazhat, kötőanyaggal, mint tragakanttal, kukoricakeményítővel vagy zselatinnal; szétesést elősegítő szerrel, mint alginsavval; és síkosító anyaggal, mint magnéziumsztearáttal együtt. Ha folyékony formát akarunk alkalmazni, a gyógyszerészetileg elfogadható hígító részeként édeútő és/vagy ízesítő anyag használható. Intravénás adagoláshoz izotóniás sóoldatot, foszfát puffer oldatokat és has onlókat alkalmazhatunk.

A gyógyászati készítmények a peptidet általában szokványos, gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval együtt tartalmazzák. A dózis szokásosan mintegy 1100 pg peptid per testsúly-kg intravénás kezelés esetén; az orális dózisok magasabbak. E peptidekkel a betegek kezelését általában ugyanúgy hajtjuk végre, mint a klinikai kezelést egyéb GnRH-antagonistákkal.

E peptidek emlősöknek intravénásán, szubkután, intiamuszkulárisan, orálisan, intranazálisan vagy intravagináiisan alkalmazhatók megtermékenyülés-gátlás és/ vagy -szabályozás céljából. Használhatók továbbá az ivarmirigyek működésének reverzibilis visszaszorítására, mint például korai pubertás esetén, vagy sugár- vagy kemoterápiás kezelés folyamán. A hatásos dózisok az alkalmazás módjától és a kezelt emlős fajtájától függnek. Jellemző dózisforma például a fiziológiás konyhasóoldatban oldott peptid, melyet körülbelül 0,1-2,5 mg per testsúly-kg tartományban alkalmazunk. Orálisan a peptid szilárd vagy folyékony formában adható.

191 865

Bár a találmányt előnyös megvalósításának figyelembevételével írtuk le, mégis a szakember előtt nyilvánvaló módon benne változtatások és módosítások hajthatók végre a találmány szellemétől való eltérés nélkül. így például a peptidkémiában ismert egyéb szubsztitúciók, amelyek nem csökkentik jelentősen a peptidek hatékonyságát, szintén alkalmazhatók a találmány szerinti peptidekben. Például az Rjo-re megadott szubsztituensek helyett Gly-OCH₃ vagy Gly—OCH₂OCH₃ vagy Gly—NHNH₂ vagy Sár—NH₂ (Sár = szarkozin) csoport használható, melyek egyenértékűek a korábban meghatározott szubsztituensekkel.

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás X-/3-D-2NAL-R₂-D-Trp-Ser-R_sR₆-R₇-Arg-Pro-R₁₀ (I) általános képletü peptidek előállítására, ahol

X 1-4 szénatomos alkanoilcsoport vagy benzilcsoport,

R₂ jelentése 4—Ci—D Phe, 4—F—D—Phe, 4—NO₂ — D—Phe vagy r—4Br—D—Phe,

R₅ jelentése Tyr vagy 2-Cl-Phe

Re jelentése 4—NH₂ —D—Phe vagy D-Arg,

R₇ jelentése Leu vagy N“Me—Leu, és

R₁₀ jelentése Gly-NH₂, -NHCH₂CH₃ vagy DAla-NH₂, azzal jellemezve, hogy

X -β—D—2NAL—R₂ —D—Trp—Ser(X² )-R5 (X³ )-R6 (X⁴)-R₇-Arg(X⁴)-Pro—X⁵ általános képletü védett pepiidről, ahol

X^I hidrogénatom vagy a peptidkémiában ismert a-amino-védőcsoport,

X²h hidrogénatom vagy a Ser alkoholos hidroxilcsoportjának peptidkémiában ismert védőcsoportja,

X³ hidrogénatom vagy a Tyr fenolos hidroxilcsoportjának peptidkémiában ismert védőcsoportja,

X⁴ hidrogénatom vagy az Arg nitrogénatomjainak a peptidkémiában ismert védőcsoportja, és

X^s jelentése Gly—O-CH₂-(gyantahordozó),-O-CH₂(gyantahordozó), D—Alá—O—CH₂ -(gyantahordozó), Gly-NH-(gyantahordozó), D-Ala-NH-(gyantahordozó), Gly-NH₂, -NHCH₂ CH₃,

D-Ala-NH₂, vagy a Gly vagy D-Ala peptidkémiában ismert módon karboxilcsoportján védett származéka, és X, R₂, R₅, R₆, R₇ és Rjo a fenti, a jelenlevő X¹ -X⁵ védőcsoportokat a peptidkémiában ismert módon lehasítjuk, és a peptidláncot az X⁵ csoportban bennefoglalt gyantahordozóról lehasítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü peptid előállítására, ahol

R₂ jelentése 4-Cl-D-Phe vagy 4-F-D-Phe, és

X, R₅, R₆, R₇ és R₁₀ az 1. igénypontban megadott.

azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és védett peptid-származékokból indulunk ki.
3. A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü peptid előállítására, ahol

5 R7 jelentése Leu,

R₂ a 2. igénypontban, és

X, R_s, Rí és Rio az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és

0 védett peptid-származékból indulunk ki.
4. A 3. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános , képletü peptid előállítására, ahol

Ro jelentése D-Arg,

R₇ a 3. igénypontban, és g

X, R₂, R_s és Rio az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és védett peptid-származékokból indulunk ki.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás olyan (1) általános C képletü peptid előállítására, ahol

R_s jelentése Tyr,

Ro a 4. igénypontban, és

X, R₂, R₇ és Rio az 1. igénypontban megadott, ü azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és védett peptid-származékokból indulunk ki.
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü peptid előállítására, ahol

X jelentése acetil-csoport,

10 R_s az 5. igénypontban, és

R₂, Ro, R₇ és R_l0 az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és védett peptid-származékokból indulunk ki.

15
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü peptid előállítására, ahol X jelentése acetil-csoport,

Ro jelentése D-Arg, és

10 R₂, R_s, R₇ és Rio az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és védett peptid-származékokból indulunk ki,
8. A 7. igénypont szerinti eljárás olyan (1) általános képletü előállítására, ahol

15 R₂ jelentése 4-Cl-D-Phe,

X és Re a 7. igénypontban, és R_s, R₇ és Rio az 1. igénypontban megadott, azzal

50 jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és védett peptid-származékból indulunk ki.
9. A 7. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü peptid előállítására, ahol

R₂ jelentése 4—F—D—Phe,

X és Re a 7. igénypontban, és

R_s, R₇ és R₁₀ az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített és védett θθ peptid-származékból indulunk ki.

Ábra nélkül