HU190897B - Method for intensifying the growth or utilization of feeding stuffs at animals by increasing the protein rate of growth hormone - Google Patents

Abstract

A találmány tárgya eljárás emlősállatoknál és szárnyasoknál a növekedési szint vagy a táplálékhasznosítás fokozására, vagy a zsír-hús arány növelésére képes növekedési hormon fehérjeszint növelésére, oly módon, hogy az állatokat növekedési hormon fehérjeanyag-tartalmú egyedi sejtfehérjét tartalmazó táplálékkal közvetlenül táplálják. -1-

Description

A találmány tárgya eljárás állatok növekedési hormon fehérjeszintjének növelésével a növekedés vagy táplálékhasznosítás fokozására vagy a zsír-húsarány növelésére növekedési hormon fehérjét tartalmazó egyedi sejtekkel való közvetlen táplálás útján.

A fiziológiailag aktív anyagok - vakcinák, hormonok, antibiotikumok és más hasonlók - adagolása állatoknak az általában ismert módszerek szerint, közvetlenül injekciózással történik, amelynek hátránya, hogy igen idő- és költségigényes. A leggyakrabban alkalmazott fiziológiailag aktív fehérjék, a növekedési hormonok esetében az előállítási eljárás - termelő sejtekből történő kivonás - is igen költséges. A költségeket tovább növeli, hogy a fenti anyagokat általában injekciók vagy inplantátumok formájában adagolják, így minden egyes állat esetében külön eszköz szükséges.

A találmány célja olyan eljárás megvalósítása, amely a növekedési hormon fehérjék adagolását idő-, költség- és munkamegtakarítással oldja meg, azokat olyan formában adagolja az állatoknak, hogy azoknak fiziológiás hatása legyen.

A találmány alapja az a felismerés, hogy a növekedési hormon fehérjék adagolása állatoknak történhet fiziológiailag aktív fehérjét tartalmazó egyedi sejtek közvetlen etetésével. Ez az eljárás igen gazdaságos idő-, munka- és költségráfordítás szempontjából egyaránt.

A találmány értelmében a növekedési hormon fehérje meghatározás olyan fehérjét jelent, amely élő állatokban növekedés- vagy táplálékhasznosítást fokozó hatással rendelkezik. így megkülönböztetjük azoktól a fehérjéktől, amelyeknek az állatok csak a tápértékét hasznosítják. Ez utóbbi fehérjék közvetlenül az őket alkotó aminosavakká bomlanak le, és a szervezet ezeket hasznosítja mint tápanyagforrásokat. Ezzel szemben a növekedési hormon fehérjékre az jellemző, hogy azokat a szervezet lényegében érintetlen, intakt formában hasznosítja, és így céljuk nem tápláló, hanem fiziológiai hatás elérése.

A növekedést elősegítő fiziológiailag aktív fehérjék olyan növekedési hormonok, amelyek általában fajtaspecifikusak, vagyis jellemzőjük, hogy az egyes hormonok hatása azoknál a fajoknál, amelyekből származnak, nagyobb. így például a szarvasmarha hormon hatásosabb a Bős nemzetség tagjainál, a sertés növekedési hormon hatásosabb a Sus scofra fajták tagjainál, míg a csirke növekedési hormon hatásosabb a Gallus gallus fajtáknál való alkalmazás esetén.

A növekedési hormon fehérjéket állatoknál alkalmazhatjuk a táplálékfeldolgozás elősegítésére is. így például a sertés növekedési hormon módosíthatja a zsír/hús arányt a hústermelésben.

A találmány szerinti eljárásban bármilyen baktérium, gomba vagy élesztő organizmus alkalmazható, amelynek genetikus anyagát a technika állása szerint ismert eljárásokkal úgy módosíthatjuk, hogy képessé tegyük őket a kívánt növekedési hormon fehérjék előállítására. (R. Williamson szerkesztésében: „Genetic Engineering 4. kötet, Academic Press 1983, 163-169; Goeddel és mtársai: „Direct Expression in E. coli of a DNA sequence coding fór humán growth hormoné” Natúré, 287, (1979), 544-548.) E folya2 matnál a gének kódolását végezhetjük természetes fehérjeforrás felhasználásával, vagy szintetikus géneket állíthatunk elő aminosav vagy nukleotid sorozatinformáció-felhasználással, vagy alkalmazhatjuk a kettő kombinációját is. A gén beépítését a mikroorganizmusba genetikus kezeléssel végezzük. Újabban alkalmaznak olyan eljárásokat is, amelyek során organizmusokból távolítanak el olyan géneket, amelyek bizonyos anyagok termelését kódolják, majd ezeket a géneket egy másik organizmusba beépítve alkalmassá teszik őket a kívánt anyagok termelésére. A plazmidok és bakteriofágok alkalmas hordozók a fiziológiailag aktív anyagok termelésére kódoló anyagok átvitelére bizonyos organizmusokba, így például az E. coli organizmusba. A 0-036-259-A-2 számú Europa-bejelentésben és a 81/02426 számú PCT bejelentésben ismertetnek olyan genetikus kezelési eljárásokat, amelyek sikerrel alkalmazhatók idegen gének bizonyos mikroorganizmusokba való klónozására. Hasonló eljárásokat alkalmaztunk baktériumokból és gombákból történő növekedési hormonok (humán, szarvasmarha, sertés, juh), előállítására.

A találmány szerinti eljárásnál gombák, élesztők és baktériumok alkalmazhatók.

Alkalmas gomba- és élesztő-fajok az alábbi nemzetségekhez tartozó fajok: Candida, Hansenula, Neurospora, Rhodotorula, Torulopsis, Saccharomyces, Schizosaccharomyces, Pichia, Debaryomyces, Kluyveromyces, Lipomyces, Cryptococcus, Nematospora és Brettanomyces.

Példák az alkalmas fajokra:

Candida myeoderma Candida stellatoidea Candida claussenii Brettanomyces petrophilium Hansenula saturnus Hansenula mrakii Hansenula polymorpha Hansenula capsulata Hansenula henricii

Hansenula philodendra Torulopsis bolmii Torulopsis glabrata Torulopsis numodendra Torulopsis pinus Pichia polymorpha

Pichia pinus Pichia trehalophila Phodotorula rubra

Saccharomyces fragilis Saccharomyces acidifaciens Saccharomyces rouxii Saccharomyces fractum

Candida boidinii Candida utilis Candida robusta Candida rugósa Hansenula minuta Hansenula californica Hansenula silvicola Hansenula wickerhamii Hansenula glucozyma Hansenula nonfermentans Torulopsis candida Torulopsis versatilis Torulopsis molishiana Torulopsis nitratophila Pichia farinosa Pichia membranaefaciens Pichia pastoris Neurospora crassa Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces roser Saccharomyces elegáns Saccharomyces lactis Schizosaccharomyces pombe

Alkalmas baktériumok az alábbi nemzetségekhez tartozó fajok: Bacillus, Escherichia, Streptomyces, Micromonospora, Streptoverticillium, Nocardia, Pseudomonas, Methanomonas, Protaminobacter, Methylococcus, Arthrobacter, Methylomonas, Bre-23

190.897 vibacterium, Acetobacter, Micrococcus, Rhodopseudomonas, Corynebacterium, Archromobacter és Microbacterium.

Példák az alkalmas fajokra:

Bacillus subtilis Bacillus pumilis Bacillus globigii

Bacillus niger

Escherichia coli

Pseudomonas methanolica

Pseudomonas orvilla

Pseudomonas fluorescens

Pseudomonas oleovorans

Pseudomonas boreopolis

Pseudomonas methylphilus

Pseudomonas acidovorans

Brevibacterium roseum

Brevibacterium lactofermentum

Brevibacterium ketoglutamicum

Bacillus nato

Bacillus amyloliquefaciens

Bacillus atenimus Bacillus licheniformis

Pseudomonas ligustri

Pseudomonas methanica

Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Pseudomonas pyocyanes

Pseudomonas aerogenes Pseudomonas brevis Corynebacterium simplex

Corynebacterium alkanum

Streptomyces aureofaciens

Pseudomonas methanoloxidans

Protaminobacter ruber

Streptomyces rimosus

Corynebacterium hydrocarbooxydans Corynebacterium oleophilus

Streptomyces coelicolor Corynebacterium glutamicum

Streptomyces griseus

Streptomyces cyaneus Streptomyces venezuelae Cornebacterium hydrocarboclastus

Corneybacterium viscosus

Micrococcus rhodius

Corynebacterium dioxydans

Micrococcus cerificans

Arthrobacter rufescens Arthrobacter simplex

Methanomonas methanica Methylomonas agile

Arthrobacter parafficumMethylomonas rubrum

Arthrobacter citreum Methanomonas methanoxidans Methylomonas albus

Methylomonas methanolica Nocardia salmonicolor Nocardia corallina

Rhodopseudomonas capsulatus

Mycobacterium phlei

Mycobacterium brevicale

Archromobacter coagulans

Nocardia minimum

Nocardia butanica

Microbacterium ammoniaphilum

Brevibacterium butanicum Brevibacterium flavum Brevibacterium paraffinolyticum Brevibacterium insectíphilium Mycobacterium rohochrons

Norcardia minimum

Előnyös mikroorganizmus törzsek az Escherichia coli, Bacillus subtilus, Saccharomycescerevisiae,Neurospora crassa és a Streptomyces coelicolor, mivel laboratóriumi kísérleteink során széles körű ismereteket szereztünk ezek genetikai információinak átvitelére.

A fenti mikroorganizmusokat tenyészthetjük szakaszos vagy folyamatos fermentációs eljárással, oxigén, szén és energiaforrás, valamint asszimilálódó nitrogénforrás jelenlétében. Különböző, a technika állása szerint ismert fermentációs eljárások alkalmazhatók, így például a 3 982 998 számú amerikai szabadalmi leírásban ismertetett habtöltésű fermentáló.

A fermentációs eljárásnál az oxigént alkalmazhatjuk levegő vagy oxigénnel dúsított levegő formájában. Nitrogénforrás lehet bármely szerves vagy szervetlen nitrogéntartalmú vegyület, amelyből a nitrogén olyan formában szabadítható fel, amely alkalmas a növekvő organizmusban a metabolikus felhasználásra. Szerves vegyületként alkalmazhatunk fehérjéket, aminosavakat, karbamidot és más hasonlókat, szervetlen nitrogéntartalmú vegyületként ammóniát, ammónium-hidroxidot, ammónium-nitrátot és más hasonlókat:

A fenti mikroorganizmusokhoz szénforrásként számításba jöhet bármilyen szénhidrát vagy keményítőtartalmú anyag, így például glukóz (keményítő hidrolízis-termék), szacharóztartalmú cukor vagy hicrolizált szacharóz. Szénforrásként 1-16 szénatomos alkoholokat, előnyösen 1-6 szénatomos egyenes szénláncú alkoholokat, még előnyösebben etanolt vagy metanolt, legelőnyösebben metanolt alkalmazunk. Példák az alkalmas alkoholokra: metanol, etanol 1-propanol, 1-butanol, 1-oktanol, 1-dodekanol, 1-hexadekanol, 2-propanol, 2-butanol, 2-hexanol és hasonlók, de ezek keverékét is alkalmazhatjuk. Más, oxidált szénhidrogének, mint ketonok, aldehidek, savak, észterek és éterek is felhasználhatók, ezek szér atomszáma rendszerint 1-20, de alkalmas szubsztrátumok az 1-20 szénatomszámú normál paraffinok is.

A mikroorganizmusok követelményeitől függően a fermentációs folyamatnál megfelelő mennyiségű vizet is alkalmazunk. Az ásványi anyagok, növekedési faktorok, vitaminok és más hasonlók mennyisége szintén a mikroorganizmustól függ és a területen jártas szakember által könnyen meghatározhatók.

A mikroorganizmusok tenyésztése érzékeny a hőmérsékletre, és minden egyes mikroorganizmusnak optimális tenyésztési hőmérséklete van. A fermentációs hőmérséklet-tartomány általában például 20 °C és 60 ’C között van.

A fermentációs nyomás általában 10,13 és 101,32 kPa, közötti érték általában 101,3 és 303,9 kPa, előnyösen 101,3 és 506,5 kPa, mivel a nagyobb nyomás a vizes közegben nagyobb oldott oxigénszintet, és így nagyobb termelékenységet jelent.

A szakterületen j ártas szakemberek előtt általában ismert, hogy sok organizmus fermentálható anaerob (levegőtől elzárt) és aerob (levegővel dúsított) körülmények között egyaránt. A beépített genetikai információk kifejezésre juttatása szempontjából nem döntő a fermentációs folyamat anaerob vagy aerob jellege, így a találmány szerinti eljárásnál is azonosan 3

190.897 alkalmazható mindkét típusú eljárás. Egyes esetekben, a növelt hatás és a fiziológiailag aktív fehérjék sejten belüli felhalmozása érdekében az anaerob fermentációs eljárást alkalmazzuk.

A fermentációs folyamat befejeztével az összegyűjtött mikrobás sejtek - amelyeket egyedi sejt-fehérje forrásként alkalmazhatunk - növekedési hormon fejérjét tartalmaznak. E fehérjékből eljárásokkal tabletta-, paszta-, por-formájú vagy egyéb, állatok etetésére szolgáló készítményeket állíthatunk elő a találmány szerinti eljárásnál történő alkalmazáshoz.

Előnyös, ha a növekedési hormon fehérjéket tartalmazó egyedi sejteket az adagolás vagy további feldolgozás előtt a mikrobás sejtek életképtelenné tétele érdekében kezeljük. Alkalmas kezelés, ha a sejteket 70 °C-on 10 percig vagy 85 °C-on 4 percig tartjuk, de alkalmazható eljárás, ha a mikrobás sejteket etilén-oxiddal kezeljük.

A találmány szerinti eljárásnál eljárhatunk úgy is, hogy a növekedési hormon fehérjéket tartalmazó egyedi sejteket az állatok szokásosan alkalmazott tápanyagaihoz (például szójabab-liszt, lucerna-lliszt, gabona-liszt, gyapotmagolaj-liszt, lenmagolaj-liszt, nád-melasz, karbamid, kukoricacsutka-liszt stb.) keverve alkalmazzuk.

A találmány szerinti eljárásnál alkalmazható készítmények előnyösen 0,1-50%-ban tartalmazzák a növekedési hormon fehérjéket tartalmazó egyedi sejteket, a többi állati táplálék. A mennyiségek ilyen széles tartománya azért előnyös, mert így a készítmények formázásában a tápanyag követelményeitől, valamint a kívánt fiziológiás hatástól függően nagyobb rugalmasság engedhető meg.

A találmány szerinti eljárásnál a növekedési hormon fehérjét tartalmazó egyedi sejtfehérjét adagolhatjuk az állatoknak közvetlenül is, de kombinálhatjuk bármilyen állati táplálékkal is. Alkalmas állatok közé bármely olyan állat tartozik, amely egyedi sejtfehérjéből formázott fehérjetartalmú táplálékkal táplálható. Ilyenek például: tej- és hús-marhák, lovak, kecskék, ökrök, nyulak, juhok, sertések, csirkék, pulykák, libák, halak, rákok, homárok, kutyák, macskák és más hasonlók.

Bár megállapítottuk, hogy a fehérjék nagy része a táplálék felvételekor elbomolhat, a bélrendszerben jelentős mennyiségű intakt fehérje megtalálható. A bélfalakon keresztül felszívódó fehérje mennyisége a fehérje természetétől és az állat fejlettségétől függ. így a találmány szerinti eljárással elegendő mennyiségű növekedési hormon fehérje biztosítható a kívánt fiziológiai hatás eléréséhez.

A találmány szerinti eljárásnál a növekedési hormon fehérjét tartalmazó egyedi sejtfehérje anyagot az emésztési folyamat lassítása érdekében erre a célra alkalmas anyagokkal kezelhetjük. Ilyen kezeléssel csökkenthetjük a fehérjék érzékenységét a fehérjebontó hatással szemben. Ez azért is kívánatos, mivel ily módon elkerülhetjük, hogy a fehérje nagy része a gyomorban emésztődjön és elbomoljon, csökkentve ezáltal a bélfalon keresztül felszívódó fehérje mennyiségét. Erre a célra alkalmas anyagok: dimetil-karbamid, tripszin-inhibitorok, emészthetetlen poliszacharidok, így például gumi-agar, agaragar, Na-alginát stb.

Ki kell hangsúlyoznunk, hogy a találmány szerinti eljárással adagolt fehérje-készítmények a nyálkahártyán - például az orrjáraton - keresztül is felszívódhatnak. így a normális táplálkozási folyamatnál a fehérjeszerű anyagok egy részét az állatok belélegzik, ily módon is kiegészítve a növekedési hormon fehérjék felvételét.

A következő számított példán keresztül bemutatjuk a növekedési hormon fehérjeszint növeléséhez szükséges egyedi sejt és fiziológiailag aktív fehérje arányát egy kiválasztott állat, fejlett sertés esetén.

Számított példa

Egy átlagos, fejlett sertés súlya 90 kg, napi táplálék mennyisége 8,1 kg, amelynek kb. 18% fehérjét kell tartalmaznia. Ez a mennyiség részben vagy egészben lehet egyedi sejt-fehérje anyag. Ily módon a teljes fehérje mennyiséget gombából származó egyedi sejtfehérje esetén (ez kb. 60% teljes fehérjét tartalmaz) 2,7 kg táplálékmennyiséggel, míg baktériumból származó egyedi sejtfehérje (SCP) anyag esetén (ez 75% teljes fehérjét tartalmaz) 2,3 kg táplálékmennyiséggel fedezhetjük.

A genetikai úton átalakított egyedi sejtfehérje növekedési hormon tartalma 5-10% a teljes fehérjetartalomra számítva. Ily módon, ha a teljes fehérjemennyiséget egyedi sejtfehérje anyaggal biztosítjuk, a táplálék 1,8% növekedési hormont tartalmazhat, így a táplálékkal 146 g növekedési hormont adagolunk az állatnak. Attól függően, hogy a fehérje milyen mértékben emésztődik és szívódik fel, szükséges lehet a teljes fehérjeszükséglet egy részét más fehérjeforrásból, például szójababbal biztosítani. A táplálék útján adagolt 146 g növekedési hormon 1,6 g/kg.

Feltételezve, hogy az emésztési folyamat során 99%-os fehérjelebomlás következik be, a fentmaradó 1% pedig a bélfalon keresztül felszívódik, ez a mennyiség esetünkben még mindig 0,16 mg/kg testsúly intakt növekedési hormon véráramba kerülését jelenti.

Ismeretes, hogy sertéseknél injekcióval történő adagolással 0,03 mg/testsúlykilogramm mennyiségű növekedési hormon elegendő hatást eredményez. A fentiek alapján látható, hogy a találmány szerinti eljárással, a genetikusán módosított egyedi sejtfehérje anyagok táplálékba keverése útján jelentős mennyiségű növekedési hormon adagolható rutinszerűen az állatoknak.

Megállapítható, hogy a bélfalon keresztül való felszívódás jellegzetesebb fejletlen állatoknál, így ezeknél a táplálékkészítést kisebb mennyiségű genetikailag átalakított SCP anyaggal végezhetjük, vagy olyan egyedi sejtfehérje anyagot alkalmazhatunk, amelyek növekedési hormontartalma kisebb.

A találmány oltalmi körén belül sok a variációs és módosítási lehetőség.

Orálisan adagolt GHRH hatása csirkék növekedési hormon (GH) szintjére.

1984. június 22-én kikelt brojler csirkéket elektromos fűtésű keltetőben 24 órán át világosban tartottuk, majd nyolcasával ketrecekben helyeztük el és etetésükről és itatásukról folyamatosan gondoskodtunk. A csirkéket kísérleteinkhez a kikelés utáni 17. illetve 18. napon alkalmáztuk.

A kezeléshez GHRH 1-29 amid-oldatot készítet-47

190.897 tünk, úgy, hogy 550 mg GHRH 1-29 amidot 44 ml sótalanított vízében oldottunk, ily módon 12,5 mg/ml koncentrációjú oldatot nyertünk, amelyből hígítással 2,5 mg/ml koncentrációjú oldatot is készítettünk. Ezeket ill. kontrollként vizet adagoltunk orálisan a kísérleti állatoknak olyan mennyiségben, hogy a beadagolt GH mennyiség a következő legyen.

mg/csirke mg/csirke 10 mg/csirke

A kezelési kísérletet két ismétlésben végeztük a 17 illetve 18 napos csirkéken. A GHRH-kezelést megelőzően 2 órával már nem etettük őket. A kezelés során 4 ml oldatot adagoltunk a kísérleti állatok begyébe vezetett csövön keresztül Pipetman P5000 adagoló rendszer segítségével.

A kísérleti állatok vérében kimutatható GH-szinlet eláltatott és éber állatok vérében határoztuk meg GHRIA-módszer (Proudman és Wentworth; Gén. Comp. Endocr. 36, 1978, 194-200) segítségével. Standardként pulyka GH-készítményt (B166B) használtunk.

A kapott eredményeket az 1. és 2. táblázatban foglaltuk össze.

/. táblázat

Elaltatott brojler-csirkék plazmájában kimutatható CH ng!m!-ben GHRH (E84-17) orális adagolása után

GHRH	Az adagolás titán eltelt idő (perc)
(mg)	0	20	40	60	90
0	274,1	228, P	268,3	226,9	243,5
10	284,6“	273,2·*	233,1	253,1“	234,5“
50	248,8“	333,a2	256,2“	243,3“	242,7“

ab

Az eltérő felsöindexű, adott időszakon belüli átlagértékek szignifikánsan különböznek (P % 0,05)

2. táblázat

Éber brojler-csikrékplazmaszintje (0 idő %-ában GHRH (E84-10) orális adagolása után

GHRH	Az adagolás után eltelt idő (perc)
(mg)	20	40	60	90
0	109,9 + 5,8’b	104,4 + 9,1“	103,4+ 7,6“	100,2 + 5,2“
1	96,6 ± 6,8b	110,9+8,6“	97,9+ 7,0“	96,5 + 6,7“
1	103,9 + 5,2“b	108,8+8,5“	108,2+ 4,0“	101,1+5,4“
10	94,4 + 6,5b	104,9 + 7,8“	95,6 + 10,4“	92,4 + 8,9’
50	142,8 + 27,4“	108,7 + 4,9“	106,0 + 4,9“	104,5 ± 7,4’

X ± SE

A szignifikáns kezelés valószínűsége 20 perces perióduson belül; 0,10 (Anova szeirnt). A Duncan-féle „több-tartományu” vizsgálat (multiple rangé test) 5%-os valószínűségi szinten szignifikáns különbséget mutatott.

Claims (9)

1. Szabadalmi igénypontok

   1. Eljárás emlősállatoknál és szárnyasoknál a növekedési szint vagy a táplálékhasznosítás fokozására, vagy a zsír-hús arány növelésére képes növekedési hormon fehérjeszint növelésére, azzal jellemezve, hogy az állatokat növekedési hormon fehérjeanyagtartalmú egyedi sejtfehérjét tartalmazó táplálékkal közvetlenül tápláljuk.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy sertés vagy szárnyas növekedési hormont alkalmazunk.
3. 3. Az 1-2. igénypontok szerinti eljárások bármelyike, azzal jellemezve, hogy a növekedési hormon fehérjét tabletta, por vagy paszta formájában alkalmazzuk.
4. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez50 ve, hogy 0,1-50 súly% mennyiségben növekedési hormon fehérjetartalmú egyedi sejtfehérjét tartalmazó állati tápot alkalmazunk.
5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy növekedési hormon fe55 hérje termelésére genetikai úton képessé tett mikrobás sejtek tenyésztésével nyert egyedi sejtfehérjét alka’mazunk.
6. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkalmas kezeléssel életképtelenné tett mik60 robás sejteket alkalmazunk.
7. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hő- vagy etilén-oxidos kezeléssel életképtelenné tett mikrobás sejteket alkalmazunk.
8. 8. Az 5-7. igénypontok bármelyike szerinti eljá®5 rás, azzal jellemezve, hogy az emésztési folyamat las5

   190.897 sítása érdekében kezelt, előnyösen dimetil-karbamiddal, tripszin-inhibitorokkal vagy nehezen emészthető diszacharidokkal kezelt mikrobás sejteket alkalmazunk.
9. 9. Az 5-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikrobás sejtként élesztő gomba vagy baktérium mikroorganizmust alkalma zunk.