HK1000552B - Anti-inflammatory factor, method of isolation, and use - Google Patents

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HK1000552B
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R. Beck Lee
Peter Fuhrer J.
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Stolle Milk Biologics, Inc.
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Claims (17)

  1. Procédé pour purifier un facteur anti-inflammatoire à partir de lait écrémé (MAIF) comprenant :
    (i) l'ultrafiltration dudit lait à travers un filtre avec une limite de poids moléculaire de 10 000 Daltons ;
    (ii) la récupération d'un perméat de < 10 000 Daltons de l'étape (i) ;
    (iii) l'application dudit perméat à une première colonne d'échange ionique et le lavage de ladite colonne avec de l'eau désionisée ;
    (iv) la récupération de l'éluat de l'étape (iii) ;
    (v) la séparation de l'éluat de l'étape (iv) sur une colonne de chromatographie préparatoire HPLC d'exclusion de taille et la récupération de l'éluat ; et
    (vi) la réalisation de l'extraction par partage organique de l'éluat obtenu à partir de la chromatographie préparatoire HPLC d'exclusion de taille et l'obtention de l'extrait aqueux à partir de l'extraction.
  2. Procédé selon la revendication 1 comprenant en outre l'étape de chromatographie d'échange d'anion faible de l'extrait aqueux.
  3. Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2 dans lequel la résine dans la première colonne d'échange ionique est une résine d'échange ionique à écoulement rapide de diéthylaminoéthyl (DEAE)-Sepharose.
  4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel la colonne de HPLC préparatoire d'exclusion de taille est une colonne d'exclusion de taille TSK G2500PW.
  5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel, dans l'étape (vi), l'extraction de partage organique comprend en outre :
    (i) l'extraction avec de l'hexane et NH4OH ;
    (ii) de nouveau l'extraction de la phase aqueuse de l'étape (i) avec de l'acétate d'éthyle ; et
    (iii) la récupération de l'extrait d'acétate d'éthyle.
  6. Procédé selon la revendication 5, comprenant en outre :
    (i) l'application de l'extrait d'acétate d'éthyle à une colonne d'échange d'anion faible ; et
    (ii) le développement de la colonne avec un système d'élution à trois parties.
  7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel l'étape d'ultrafiltration commence avec environ 90 à 225 litres de lait écrémé et l'étape d'échange ionique commence avec environ 60 à 150 litres de perméat.
  8. Procédé selon la revendication 7 dans lequel on commence la chromatographie HPLC d'exclusion de taille avec 100 mg de MAIF provenant de l'étape d'échange ionique de DEAE.
  9. Facteur anti-inflammatoire purifié pouvant être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8.
  10. Facteur anti-inflammatoire purifié pouvant être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour l'utilisation en médecine.
  11. Utilisation de MAIF pouvant être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 dans la préparation d'un agent pour :
    inhiber la migration neutrophile ;
    inhiber la réponse inflammatoire ;
    inhiber l'adhérence des neutrophiles aux cellules endothéliales chez un mammifère ;
    détacher les neutrophiles qui ont adhéré aux cellules endothéliales chez un mammifère ;
    inhiber l'interaction entre les antigènes de surface de cellules CD18 présents chez un mammifère et les molécules qui sont capables de se lier aux antigènes de
    surface de cellule CD18 ;
    inhiber l'émigration des leucocytes provenant du système veineux d'un mammifère ; ou
    supprimer la réponse mitogène des lymphocytes chez un
    mammifère hôte vis-à-vis d'antigènes étrangers.
  12. Utilisation selon la revendication 11 dans la préparation d'un agent pour détacher les neutrophiles qui ont adhéré aux cellules endothéliales chez un mammifère, dans laquelle les neutrophiles ont adhéré aux cellules endothéliales en réponse au facteur d'activation des plaquettes.
  13. Utilisation selon la revendication 11 dans la préparation d'un agent pour inhiber l'émigration des leucocytes provenant du système veineux d'un mammifère, dans laquelle les leucocytes sont des neutrophiles.
  14. Utilisation selon la revendication 11 dans la préparation d'un agent pour supprimer la réponse mitogène des lymphocytes chez un mammifère hôte vis-à-vis d'antigènes étrangers, dans laquelle les antigènes sont sur la surface de la cellule.
  15. Utilisation selon la revendication 14, dans laquelle les cellules sont des leucocytes ou des lymphocytes.
  16. Utilisation de MAIF pouvant être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 dans la préparation d'un agent pour le traitement ou la prophylaxie de l'inflammation ou de conditions inflammatoires comme la bursite aiguë et subaiguë, la tendinite aiguë non spécifique, le lupus érythémateux systémique, la dermatomyosite systémique, la cardite rhumatismale aiguë, le pemphigus, la dermatite bulleuse, maladie herpétiforme, l'érythème sévère, la dermatite exfoliative multiforme, la cirrhose, la rhinite chronique saisonnière, l'asthme bronchique, la dermatite ectopique, la maladie du sérum, la kératite, l'iritis ophtalmique, l'uvéite diffuse, la névrite optique de la choroïde, l'ophtalmie sympathique, la sarcoïdose symptomatique, le syndrome de Loeffler, la bérylliose, l'anémie hémolytique, la mastite, la mastoïdite, la dermatite de contact, la conjonctivite allergique, le rhumatisme psoriasique, la spondylite ankylosante, l'arthrite goutteuse aiguë et l'herpes zoster.
  17. Formulation pharmaceutique comprenant le MAIF pouvant être obtenu par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 conjointement avec un diluant pharmaceutiquement acceptable.
HK97102084A 1994-10-03 1995-09-08 Anti-inflammatory factor, method of isolation, and use HK1000552A1 (en)

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