HK1000552B - Anti-inflammatory factor, method of isolation, and use - Google Patents

Claims (17)

1. Verfahren zur Reinigung eines entzündungshemmenden Faktors aus Magermilch (MAIF), das folgende Schritte umfasst:

   i) Ultrafiltration der Milch durch ein Filter mit einer Molekülgewicht-Abtrennung von 10.000 Dalton;

   ii) Sammeln eines < 10.000 Dalton Permeats aus Schritt (i);

   iii) Aufbringen des Permeats auf eine erste Ionenaustauschsäule und Waschen der Säule mit deionisiertem Wasser;

   iv) Sammeln des Eluats aus Schritt (iii);

   v) Trennen des Eluats aus Schritt (iv) in einer präparativen Größenausschluss-HPLC-Chromatographiesäule und Sammeln des Eluats; und

   vi) Durchführung einer organischen Verteilungsextraktion von dem Eluat, das aus der präparativen Größenausschluss-HPLC-Chromatographie erhalten wurde und Gewinnen des wässrigen Extraktes aus der Extraktion.
2. Verfahren nach Anspruch 1, welches weiters den Schritt einer schwachen Anionenaustauschchromatographie des wässrigen Extraktes umfasst.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei das Harz in der ersten Ionenaustauschsäule ein Schnell-Durchfluss-Diethyl-Aminoethyl (DEAE)-Sepharose-Ionenaustauschharz ist.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die präparative Größenausschluss-HPLC-Säule eine TSK G2500PW Größenausschlusssäule ist.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei, in Schritt (vi), die organische Verteilungsextraktion weiters umfasst:

   i) Extraktion mit Hexan und NH₄OH;

   ii) Rückextraktion der wässrigen Phase aus Schritt (i) mit Ethylacetat; und

   iii) Sammeln des Ethylacetat-Extrakts.
6. Verfahren nach Anspruch 5, welches weiters umfasst:

   i) Aufbringen des Ethylacetat-Extrakts auf eine schwache Anionenaustauschsäule; und

   ii) Entwickeln der Säule mit einem dreiteiligen Elutionssystem.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei der Ultrafiltrationsschritt mit etwa 90 bis 225 Liter Magermilch beginnt und der Ionenaustauschschritt mit etwa 60 bis 150 Liter des Permeats beginnt.
8. Verfahren nach Anspruch 7, wobei man die HPLC-Größenausschlusschromatographie mit 100 mg MAIF aus einem DEAE-Ionenaustauschschritt beginnt.
9. Gereinigter entzündungshemmender Faktor, der aus einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 erhältlich ist.
10. Gereinigter entzündungshemmender Faktor zur Verwendung in der Medizin, der aus einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 erhältlich ist.
11. Verwendung von MAIF, das aus einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Herstellung eines Mittels zur:

    Hemmung der neutrophilen Migration;

    Hemmung der Entzündungsreaktion;

    Hemmung neutrophiler Teilchen vom Anhaften an Endothelzellen in Säugetieren;

    Abtrennung neutrophiler Teilchen, die sich an Endothelzellen in Säugetieren angeheftet haben;

    Hemmung der Wechselwirkung zwischen in Säugetieren vorhandenen CD18-Zelloberflächen-Antigenen und Molekülen, die in der Lage sind, an die CD18-Zelloberflächen-Antigene zu binden;

    Hemmung des Abwanderns von Leukocyten aus dem venösen System von Säugetieren; oder

    Unterdrückung der mitogenen Antwort von Lymphocyten in einem Säugetier-Wirt auf fremde Antigene.
12. Verwendung nach Anspruch 11 zur Herstellung eines Mittels zur Abtrennung von neutrophilen Teilchen, die sich an Endothelzellen in Säugetieren angeheftet haben, wobei die neutrophilen Teilchen sich als Antwort auf den Thrombocyten-Aktivierungsfaktor an die Endothelzellen geheftet haben.
13. Verwendung nach Anspruch 11 zur Herstellung eines Mittels zur Hemmung der Abwanderung von Leukocyten aus dem venösen System von Säugetieren, wobei die Leukocyten neutrophile Teilchen sind.
14. Verwendung nach Anspruch 11 zur Herstellung eines Mittels zur Unterdrückung der mitogenen Antwort von Lymphocyten in einem Säugetier-Wirt auf fremde Antigene, wobei die Antigene auf der Zelloberfläche sind.
15. Verwendung nach Anspruch 14, wobei die Zellen Leukozyten oder Lymphocyten sind.
16. Verwendung von MAIF, die aus einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 erhältlich sind, zur Herstellung eines Mittels zur Behandlung oder Prophylaxe einer Entzündung und entzündlichen Zuständen wie akute und subakute Bursitis, akute unspezifische Tendonitis, systemische Lupus Erythematosus, systemische Dermatomyositis, akute rheumatische Carditis, Pemphigus, bulöse Dermatitis, Herpetiformis, schwere Verbrennungen, multiforme abblätternde Dermatitis, Zirrhose, saisonbedingte dauernde Rhinitis, bronchiales Asthma, ektopische Dermatitis, Serum Sickness, Hornhautentzündung, Ophthalmicus Iritis, diffuse Ureitis, Chorditis, Entzündung des Sehnervs, sympathische Bindehautentzündung, symptomatische Sarcoidosis, Loeffler's Syndrom, Berylliose, hämolytische Anämie, Mastitis, Mastoiditis, Kontaktdermatitis, allergische Konjunktivitis, psoriatische Arthritis, versteifende Spondylitis, akute gichtische Arthritis und Herpes Zoster.
17. Pharmazeutische Formulierung welche MAIF, das aus einem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 erhalten werden kann, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel.