FR3124947A1

FR3124947A1 - Composition ingérable (Ci) pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal

Info

Publication number: FR3124947A1
Application number: FR2107546A
Authority: FR
Inventors: Cécile Bize
Original assignee: King Tree; Societe dExploitation de Produits pour les Industries Chimiques SEPPIC SA
Current assignee: King Tree; Societe dExploitation de Produits pour les Industries Chimiques SEPPIC SA
Priority date: 2021-07-12
Filing date: 2021-07-12
Publication date: 2023-01-13

Abstract

Composition ingérable (Ci) comprenant un extrait de bois (Cb) pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal.

Description

Composition ingérable (Ci) pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal

La présente invention est relative à une composition ingérable (Ci) pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal chez l’Homme.

La peau constitue l’interface entre l’organisme et l’environnement extérieur. Sa raison d’être est d’assurer une mission de protection en formant une véritable barrière qui est vitale. En effet, qu’elles soient d’ordre physique (facteurs mécaniques, thermiques, rayonnements UV, etc.), chimique (tensioactifs, solvants, allergènes, etc.) ou biologique (agents infectieux), la peau est quotidiennement soumise à de multiples agressions.

En plus de cette fonction d’obstacle à la pénétration d’éléments extérieurs, la peau permet de lutter contre la déshydratation en limitant la diffusion de l’eau hors de l’organisme.

Cette barrière cutanée est en grande partie assurée par la couche la plus superficielle de la peau, l’épiderme. Ainsi, l’épiderme joue à la fois un rôle de :

barrière hydrique correspondant au maintien d’un gradient de la teneur en eau entre les couches profondes de l’épiderme et la couche cornée.
barrière physique offrant à la peau une résistance mécanique, un contrôle de la perte en eau et de l’entrée et sortie des molécules extérieures potentiellement toxiques.
barrière antioxydante protégeant la peau du stress oxydant grâce à un système de défense qui protège les cellules en détruisant les radicaux libres en excès ; ces systèmes sont de nature enzymatique (superoxyde dismutase, catalase, peroxydase du glutathion,…) ou moléculaire.
barrière photo-protectrice : la peau constitue la première cible des rayonnements UV. Plusieurs mécanismes de photoprotection sont mis en place au sein de l’épiderme où les rayonnements UV peuvent être réfléchis ou absorbés.
barrière antimicrobienne : l’épiderme est sans cesse exposé aux micro-organismes dont certains peuvent être pathogènes. Pour lutter contre cette agression, les cellules épidermiques impliquées dans l’immunité innée, à savoir les kératinocytes et les cellules de Langerhans, jouent un rôle majeur de barrière immunologique.

Ainsi, une des fonctions primordiales de la peau est de maintenir une homéostasie hydrique en prévenant une perte massive en eau corporelle. En effet, l’homéostasie hydrique est une condition indispensable requise pour un fonctionnement physiologique cutané normal. Le taux d’hydratation influence non seulement les paramètres macroscopiques, visibles à la surface cutanée, tels que douceur cutanée et rugosité, les propriétés physiques et mécaniques de la peau telles que la souplesse, mais aussi des paramètres moléculaires, les activités enzymatiques et la signalisation cellulaire au sein de l’épiderme. La peau est capable de remplir cette fonction, grâce au maintien d’une barrière épidermique efficace et réactive. Cette fonction barrière est essentiellement portée par les couches les plus superficielles de la peau, en particulier par le stratum corneum, résultant d’un programme de différenciation des kératinocytes épidermiques finement régulé.

Le terme « peau normale » est largement utilisé pour décrire une peau équilibrée. Une peau normale :

a une bonne circulation sanguine,
a une texture douce, lisse et veloutée,
a un aspect translucide frais et une couleur rosée uniforme,
n’a pas d'imperfection,
n’est pas sensible.

Lorsque la barrière cutanée est intacte, elle peut agir plus efficacement pour retenir l'eau et protéger contre les agressions extérieures. Une peau avec une barrière cutanée forte et saine est plus belle et fonctionne mieux avec le temps.

Les facteurs tels que la pollution, les UV, le tabac ou encore le stress et la fatigue, induisent des effets néfastes sur toutes les composantes de la fonction barrière de la peau :

une baisse du système antioxydant naturel qui rend la peau plus vulnérable,
une altération du processus de desquamation qui affine l’épiderme,
une modification du pH et de la fonction microbienne qui diminue la protection de la peau et affaiblit ses défenses immunitaires,
une augmentation de la perte insensible en eau.

Ainsi, c’est toute l’organisation de la peau qui est déséquilibrée.

Comme l’intestin, la peau est une interface entre l’organisme et le milieu extérieur. Comme l’intestin, la peau exerce une fonction de barrière : la surface de l’intestin représente environ 250 m², la peau 2 m². Comme l’intestin, la peau est constituée d’un épithélium (épiderme). De plus, intestin et peau sont vascularisés et innervés et intestin et peau ont un microbiote.

Par microbiote, on entend au sens de la présente invention, l’ensemble des micro-organismes (bactéries, virus, champignons, levures, etc.) vivant naturellement dans un environnement ou écosystème donné.

Par microbiome, on entend au sens de la présente invention, l'ensemble des gènes présents dans ce microbiote.

L'un des principaux régulateurs de l'axe peau-intestin est la façon dont le microbiote intestinal communique avec la peau. Cette communication se fait principalement via des interactions complexes avec le système immunitaire pour réguler l'inflammation systémique et locale.

Le microbiote intestinal se compose d’environ 10¹⁴micro-organismes (virus, bactéries, parasites, champignons) qui entretiennent une relation symbiotique avec l’Homme. Le microbiote joue un rôle important dans les fonctions digestives, métaboliques, immunitaires et neurologiques de l’hôte. Des altérations qualitatives ou quantitatives de sa composition (dysbiose) sont associées à certaines maladies (maladie de Crohn, colite ulcérative, obésité, diabète, maladies cardio-vasculaires, dermatite atopique, etc.).

Ainsi, de nombreuses maladies chroniques résulteraient de la présence, en portage initialement asymptomatique dans un microbiote complexe, de micro-organismes pathogènes. Mais de nombreuses maladies chroniques résulteraient aussi, non pas de l’agression de micro-organismes pathogènes, mais d’une rupture de l’équilibre de la population bactérienne présente dans l’intestin.

Dans le cas d'une barrière intestinale altérée, les bactéries intestinales ainsi que leurs métabolites peuvent pénétrer dans la circulation sanguine, s'accumuler dans la peau et perturber le microbiome cutané.

De plus, quand la muqueuse intestinale est enflammée ou que sa fonction est altérée, cela induit à la fois un affaiblissement du système immunitaire et une inflammation de bas grade se dispersant par voie sanguine dans tout l’organisme y compris la peau.

Par ailleurs, les nutriments essentiels sont moins bien absorbés du fait de la perte de structure de la cellule intestinale. Les malabsorptions freinent alors les processus de régénération de l’épiderme alors que la peau a besoin de nutriments pour assurer son bon fonctionnement.

L’hyperperméabilité de l’intestin est un trouble fonctionnel qui pourrait être induit par:

un déséquilibre de la flore intestinale (dysbiose);
une prise de médicaments sur une longue période (antibiotique, anti-inflammatoire, chimiothérapie, etc.);
l’alimentation moderne assez déséquilibrée, l’alcool, le tabac ;
les intolérances alimentaires : gluten, lactose, etc.,
une pratique sportive intense;
le stress, etc...

De nombreuses pathologies, certes multifactorielles, présentent un lien avec une perméabilité intestinale défaillante, dont divers problèmes de peau tels que :

l’eczéma, l’urticaire,
l’acné,
la rosacée,
la photosensibilisation,
les maladies auto-immunes telles que le psoriasis ou le vitiligo, etc...

Par exemple, des travaux suggèrent une relation potentielle entre la rosacée et Helicobacter pylori, une bactérie pathogène trouvée dans l'estomac et l'intestin grêle. Une étude récente démontre une prévalence significativement plus élevée de l'infection à Helicobacter pylori chez les personnes atteintes de rosacée par rapport aux témoins et l'éradication des bactéries a conduit à une amélioration significative des symptômes cutanés.

Dans le cas de la dermatite atopique, le manque de diversité microbiologique au cours des premiers stades de la vie pourrait affecter la maturation de l'immunité innée et adaptative conduisant à une inflammation chronique. Ainsi, des recherches ont montré que les nourrissons atteints de dermatite atopique avaient de faibles quantités de bifidobactéries et de bactéroïdes.

Bien que l'acné soit causée par de nombreux facteurs, le microbiome intestinal peut jouer un rôle clé dans la progression et la gravité de la maladie. Le microbiote intestinal peut influer sur les profils lipidiques et les acides gras des tissus et peut influer sur la production de sébum ainsi que sur la composition en acides gras du sébum. De plus, le stress émotionnel qui accompagne l'acné peut altérer le microbiome intestinal, notamment les espèces Lactobacillus et Bifidobacterium. Une étude russe (Volkova LA et al., Impact of the impaired intestinal microflora on the course of acne vulgaris. Klin Med (Mosk) 2001:79:39-41) a d’ailleurs révélé que 54% des patients souffrant d’acné présentaient des altérations importantes de la flore intestinale.

De même, différentes recherches démontrent que les patients atteints de psoriasis présentent des profils microbiens perturbés.

Ainsi, les troubles gastro-intestinaux sont souvent accompagnés de manifestations cutanées et le microbiome intestinal semble jouer un rôle clé dans le développement de nombreux troubles inflammatoires de la peau.

Partant de là, un problème qui se pose est de fournir une composition permettant de traiter des troubles cutanés induits par un ou des troubles intestinaux.

Les inventeurs ont avantageusement mis en évidence le lien étroit entre une dysbiose intestinale et une altération de la fonction barrière de l’intestin, cette altération ayant pour conséquence des effets sur l’intégrité de la peau et notamment sur la fonction barrière cutanée, sur l’hydratation de la peau, sur l’homéostasie de la peau, sur l’état inflammatoire cutané.

Il a été avantageusement démontré qu’un extrait de bois, préférentiellement un extrait de bois de châtaignier, est capable de restaurer la barrière cutanée en restaurant les paramètres relatifs à l’intégrité de la peau tels que la fonction barrière cutanée, l’hydratation, l’homéostasie ou l’état inflammatoire cutané.

Une solution de la présente invention est une composition ingérable (Ci) comprenant un extrait de bois (Cb) pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal.

La composition (Ci) selon l’invention peut se présenter sous toute forme physique, plus particulièrement sous la forme d’un solide ou d’un liquide.

Selon un autre cas particulier, la composition ingérable (Ci) se présente sous la forme d’un liquide, plus particulièrement sous la forme d’une émulsion eau-dans-huile, d’une émulsion huile-dans-eau, d’une dispersion, d’une solution ou d’un mélange d’huiles

Selon le cas, la composition (Ci) selon l’invention peut présenter une ou plusieurs des caractéristiques suivantes :

le trouble cutané est induit par une dysbiose intestinale du côlon et/ou de l’intestin grêle,
le trouble cutané est choisi parmi le vieillissement, l’inflammation, l’irritation, la déshydratation, le psoriasis, l’eczéma, la dermatite atopique, l’ichtyose.
la composition (Ci) comprend une concentration en extrait de bois (Cb) supérieure ou égale à 1 milligramme et inférieure ou égale à 1 gramme; de préférence la composition (Ci) comprend une quantité supérieure ou égale à 20 milligrammes et inférieure ou égale à 800 milligrammes, d’extrait de bois (Cb), encore plus particulièrement supérieure ou égale à 40 milligrammes et inférieure ou égale à 600 milligrammes d’extrait de bois (Cb) ;
l’extrait de bois (Cb) est choisi parmi les familles suivantes : Anacardiacea (exemple genre Rhus), Leguminosae (exemple genre Caesalpina), Fagaceae (exemples genre Quercus ou Castanea ou Myroxylon ou Prosopis), Combetaceae (exemple genre terminalia), Myrtaceae (exemple genre Eucalyptus), Rosaceae (exemples genre Prunus ou Rubus), Saxifragaceae (exemple genre Ribes), Theaceae (exemple genre Camelia) et Vitaceae (exemple genre Vitis),
l’extrait de bois (Cb) est un extrait de la famille Fagaceae, et est choisi parmi les bois appartenant au genre Quercus, Castanea, ou Myroxylon, et plus particulièrement l’extrait de bois est un extrait de Castanea sativa,
l’extrait de bois (Cb) se présente sous la forme d’un solide pulvérulent,
l’extrait de bois (Cb) comprend pour 100% de sa propre masse entre 1% et 10% massique d’eau, de préférence entre 1% et 8% massique d’eau, et encore plus particulièrement entre 1% et 7% massique d’eau et entre 90% et 99% massique de matière sèche (Ms), de préférence entre 92% et 99% massique de matière sèche (Ms), et encore plus particulièrement entre 93% et 99% massique de matière sèche (Ms).
la matière sèche (Ms) de l’extrait de bois (Cb) comprend pour 100% de sa masse :

De 30% à 89,5% massique de composés polyphénoliques (PP) choisis parmi les éléments de la famille des tanins comprenant les tanins galliques, les tanins ellagiques, les tanins complexes, les tanins condensés,
De 10% à 65% massique d’au moins un glucide choisi parmi les éléments du groupe constitué par le fucose, le xylitol, le rhamnose, l’arabinose, le glucose, le xylose, le galactose, le mannose, le fructose, le sorbitol,
De 0,5% à 5% massique d’au moins un sel d’au moins un cation monovalent ou multivalent (CMETAL) et d’au moins un anion monovalent ou multivalent (AN) organique ou inorganique.

La composition ingérable (Ci) comprend au moins un excipient administrable par voie orale, ledit excipient étant un additif technologique (AT) pharmaceutiquement ou nutritionnellement acceptable choisi parmi un agent diluant, un agent d’écoulement, un agent liant ou un agent délitant.

Les inventeurs ont avantageusement démontré qu’un extrait de bois selon l’invention, préférentiellement un extrait de bois de châtaignier, permet de traiter un trouble cutané induit par un trouble intestinal.

On entend par « trouble cutané induit par un trouble intestinal », un trouble cutané causé par une altération de la barrière intestinale conséquence d’une dysbiose du microbiote intestinal.

Les inventeurs ont en effet avantageusement mis en évidence le lien étroit entre une dysbiose intestinale et une altération de la fonction barrière de l’intestin. Cette altération a pour conséquence des effets sur l’intégrité de la peau et notamment sur la fonction barrière cutanée, sur l’hydratation de la peau, sur l’homéostasie de la peau, sur l’état inflammatoire cutané.

Il a été avantageusement démontré qu’un extrait de bois, préférentiellement un extrait de bois de châtaignier est capable de restaurer la barrière cutanée en restaurant les paramètres relatifs à l’intégrité de la peau tels que la fonction barrière cutanée, l’hydratation, l’homéostasie et l’état inflammatoire cutané.

Comme mentionné précédemment, le trouble cutané induit par le trouble intestinal est choisi parmi le vieillissement, l’inflammation, l’irritation, la déshydratation, le psoriasis, l’eczéma, la dermatite atopique ou l’ichtyose.

Inflammation

La dysbiose intestinale entraîne une augmentation de l’infiltration mastocytaire dans la peau, caractéristique d’une augmentation de l’état inflammatoire cutané. Il a été observé une diminution significative de l’infiltration des mastocytes dans le derme des souris infectées après 2 mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette diminution traduit une restauration de l’état inflammatoire cutané. On note une restauration significative de l’état inflammatoire cutané de 115% après 2 mois de traitement.

Irritation

La dysbiose intestinale entraîne une augmentation de la perte insensible en eau, caractéristique d’une altération de la fonction barrière de la peau. Cette altération de la fonction barrière rend la peau plus perméable aux agressions extérieures et donc aux phénomènes d’irritation. Il a été observé une diminution significative de la perte insensible en eau chez les souris infectées après 2 mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette diminution traduit une restauration de la fonction barrière de la peau et donc une plus faible irritabilité. On note une restauration significative de la perte insensible en eau de 103% après 2 mois de traitement.

De plus, la quantité de céramides joue un rôle essentiel dans la structuration et le maintien de la fonction barrière de la peau. Ainsi, une altération de la barrière cutanée est associée à une diminution des céramides (Coderch L et al., Ceramides and skin function. Am J Clin Dermatol 2003:4:107-129; Feingold, K.R. The outer frontier: the importance of lipid metabolism in the skin. J Lipid Res 2009: 50: 417-422). Il a été observé une augmentation significative de la quantité de céramides dans la peau des souris infectées après 2 mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette augmentation traduit une restauration de la fonction barrière de la peau et donc une plus faible irritabilité. On note une restauration de la quantité de céramides de 64% après 2 mois de traitement (à la limite de la significativité).

Déshydratation

Les inventeurs ont démontré que la dysbiose intestinale entraîne une diminution de la cornéométrie, caractéristique d’une diminution de l’état d’hydratation de la peau. La peau déshydratée perd son rebond naturel : des ridules peuvent apparaître. Il a été observé une augmentation significative de la cornéométrie chez les souris infectées après 2 mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette augmentation traduit une amélioration de l’hydratation de la peau. On note une restauration significative de l’état d’hydratation de 62% après 2 mois de traitement.

Vieillissement

Le vieillissement cutané résulte d'une part de facteurs propres à chaque individu (caractéristiques du patrimoine génétique propre à chaque individu) et d'autre part de facteurs environnementaux, comme par exemple l'exposition aux rayonnements ultra-violets, l'exposition à la pollution atmosphérique, à la fumée de cigarette, les stress psychologiques, émotionnels et nerveux. La préservation et l'amélioration de l'état de la couche la plus extérieure de la peau, à savoir l'épiderme, est un moyen de limiter ou de prévenir le vieillissement cutané. Plus particulièrement le maintien ou l’amélioration de l’état d’hydratation de stratum corneum à un niveau optimal et satisfaisant de façon à diminuer sa déshydratation, permet de limiter ou de prévenir le vieillissement cutané.

Par conséquent, l’observation d’une restauration significative de l’état d’hydratation après 2 mois de traitement des souris avec l’extrait de bois de châtaignier permet de prévenir ou de limiter le vieillissement de la peau.

Psoriasis

Le psoriasis est une maladie de la peau qui se caractérise généralement par l'apparition d'épaisses plaques de peau qui desquament (qui se détachent sous formes « d'écailles » blanches). Les plaques apparaissent à différents endroits du corps, le plus souvent sur les coudes, les genoux et le cuir chevelu. Le psoriasis est une maladie d'origine inflammatoire, due à un renouvellement trop rapide de l'épiderme.

Différentes recherches démontrent que les patients atteints de psoriasis présentent des perturbations dans la composition du microbiote intestinal (Codoner FM et al., Gut microbial composition in patients with psoriasis. Scientific Reports 2018: 8:3812; Huang L et al., Dysbiosis of gut microbiota was closely associated with psoriasis. Sci China Life Sci 2018:61, Zákostelská Z, Málková J, Klimešová K, et al. Intestinal Microbiota Promotes Psoriasis-Like Skin Inflammation by Enhancing Th17 Response. PLoS ONE 2016 ; 11(7): e0159539).

Eczéma de contact

L’étymologie du terme eczéma nous renseigne sur son sens premier : il vient du grec ekzéô qui signifie « bouillonner », et d’éczêma qui signifie éruption cutanée. Les plaques d'eczéma sont érythémateuses (un érythème est une rougeur qui disparaît lorsqu'on appuie dessus), et sèches et/ou recouvertes de petites vésicules.

L’eczéma de contact est une réaction allergique à un allergène spécifique. Ainsi, en cas d'allergie, une plaque d'eczéma apparaîtra au niveau de la zone ayant été en contact avec l’allergène. Lorsqu'il n'y a pas de contact avec l'allergène, les plaques d'eczéma sont inexistantes.

Il s’agit donc d’une réaction inflammatoire souvent accompagnée d’une altération de la barrière cutanée.

Dermatite atopique

L'eczéma atopique, plus communément appelé dermatite atopique, est une maladie inflammatoire chronique de la peau. Elle est caractérisée par une sécheresse cutanée associée à des lésions de type eczéma (rougeurs et démangeaisons, vésicules, suintement et croûtes) qui évoluent par poussées.

Par ailleurs, les personnes atteintes de dermatite atopique peuvent présenter un défaut dans la synthèse de la filaggrine, protéine jouant un rôle dans le maintien de l’hydratation et du niveau d’acidité de la peau (pH cutané). La barrière cutanée est alors altérée, laissant l’eau s’évaporer et facilitant la pénétration d’allergènes potentiels dans l’épiderme. Cette invasion engendrerait une réaction inflammatoire.

Dans le cas de la dermatite atopique, le manque de diversité microbiologique au cours des premiers stades de la vie pourrait affecter la maturation de l'immunité innée et adaptative conduisant à une inflammation chronique (Abrahamsson TR et al., Low diversity of the gut microbiota in infants with atopic eczema. J Allergy Clin Immunol. 2012:129:434-440; Nylund L et al. Severity of atopic disease inversely correlates with intestinal microbiota diversity and butyrate-producing bacteria. Allergy 2015:70:241-244). Ainsi, des recherches ont montré que les nourrissons atteints de dermatite atopique avaient de faibles quantités de bifidobactérie et de bactéroïdes (Kim JE & Kim,HS. Microbiome of the Skin and Gut in Atopic Dermatitis (AD): Understanding the Pathophysiology and Finding Novel Management Strategies. J Clin Med 2019: 8: 444; Lee SY et al., Microbiome in the gut-skin axis in atopic dermatitis, Allergy Asthma Immunol Res 2018:10:354-362).

Ichtyose

L'ichtyose (du grec Ichtyos "poisson") est une maladie génétique rare atteignant principalement la peau. Elle se caractérise par une peau extrêmement sèche, rugueuse ainsi que par la présence d’une quantité excessive de «pellicules de peaux mortes» (squames) qui se détachent continuellement. Cette sécheresse excessive peut être accompagnée d’une inflammation de l’épiderme. Ainsi, l'ichtyose est caractérisée par déshydratation excessive ainsi qu’une altération de la fonction barrière.

L’extrait de châtaignier permet à la fois de restaurer :

la fonction barrière de la peau : on note une restauration significative de la perte insensible en eau de 103% après 2 mois de traitement, ainsi qu’une restauration de la quantité de céramides de 64% ;

l’état d’hydratation de la peau : on note une restauration significative de l’état d’hydratation de 62% après 2 mois de traitement ;
l’état inflammatoire cutané : on note une restauration significative de l’état inflammatoire cutané de 115% après 2 mois de traitement.

Selon un mode de réalisation le trouble cutané est induit par une dysbiose intestinale du côlon et/ou de l’intestin grêle.

Selon un mode de réalisation, l’excipient administrable par voie orale est un additif technologique (AT) pharmaceutiquement ou nutritionnellement acceptable.

Par « additif technologique», on désigne toute substance chimique ou toute composition chimique dont la fonction technique est de permettre et/ou de faciliter le mélange des différents constituants de ladite composition (Ci), de faciliter et/ou d’optimiser les propriétés physiques de ladite composition (Ci), comme par exemple de faciliter et/ou d’optimiser son écoulement, sa stabilité, et son incorporation dans une formulation pharmaceutique et/ou nutritionnelle ultérieure, et qui sont susceptibles de respecter les conditions requises par les réglementations en vigueur pour la mise sur le marché d’une formulation pharmaceutique et/ou d’une formulation nutritionnelle.

Par « additif technologique pharmaceutiquement acceptable », on désigne un additif technologique tel que défini ci-dessus dont l’utilisation répond aux exigences de la réglementation pharmaceutique en vigueur dans un pays concerné.

Par « additif technologique nutritionnellement acceptable », on désigne un additif technologique tel que définie ci-dessus dont l’utilisation répond aux exigences de la réglementation relative aux compléments alimentaires en vigueur dans un pays considéré.

La composition ingérable (Ci) selon l’invention pourra comprendre au moins un additif technologique (AT) choisi parmi les agents diluants, les agents d’écoulement, les agents liants ou les agents délitants.

Typiquement, l’agent diluant est choisi parmi au moins un des éléments du groupe constitué par le lactose, le sucrose, le saccharose, le glucose, la maltodextrine, le mannitol, le sorbitol, le xylitol, l’isomalt, l’hydrogénophosphate de calcium, la cellulose microcristalline, les amidons et plus particulièrement les amidons de maïs, les amidons de blé, les amidons de pommes de terre, le phosphate dicalcique, le dibasic calcium phosphate anhydre, le carbonate de sodium, le carbonate de calcium et le carbonate de magnésium, les monoglycérides et/ou les diglycérides d’acides gras comportant de 8 à 24 atomes de carbone,

Typiquement, l’agent d’écoulement est choisi parmi au moins un des éléments du groupe constitué par le stéarate de magnésium, le talc, le Stéarylfumarate de sodium, les huiles végétales hydrogénées, la silice colloïdale anhydre, le benzoate de sodium et le dioxyde de silice.

Typiquement, l’agent liant est choisi parmi au moins un des éléments du groupe constitué par les amidons sous forme d’empois, les amidons prégélatinisés, l’hydroxypropylméthyl cellulose, la méthylcellulose, les sirops de saccharose et la gomme d’acacia.

Typiquement, l’agent délitant est choisi parmi au moins un des éléments du groupe constitué par les amidons, le glycolate d’amidon sodique, l’acide alginique, l’alginate de sodium, la croscarmellose sodique, la crospovidone, la polyvinylpyrrolidone.

Selon un aspect particulier, la composition ingérable (Ci) se présentant sous la forme d’un solide, prend la forme d’un comprimé, d’une gélule, d’une capsule molle, d’une poudre, d’une dragée ou d’un granulé.

La présente invention concerne également l’utilisation de la composition ingérable selon l’invention pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal.

De même, la présente invention concerne également l’utilisation de la composition ingérable selon l’invention pour le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal.

Les termes « traitement » ou « méthode de traitement », ne sont pas des termes absolus et, lorsqu’ils sont appliqués à des troubles cutanées induit par un trouble intestinal tels que le vieillissement, l’inflammation, l’irritation, la déshydratation, le psoriasis, l’eczéma, la dermatite atopique ou l’ichtyose, ils désignent une procédure ou un plan d’action conçu, même avec une probabilité de succès faible mais devant induire un effet bénéfique global tel que le retard d’apparition du trouble cutané, la diminution de la gravité du trouble cutané ou la stabilisation du trouble cutané.

La présente invention a également pour objet un complément alimentaire pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal, ledit complément alimentaire comprenant une composition ingérable (Ci) selon la présente invention.

La présente invention concerne également l’utilisation d’un complément alimentaire pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal, ledit complément alimentaire comprenant une composition ingérable (Ci) selon la présente invention.

De même, la présente invention concerne également l’utilisation d’un complément alimentaire pour le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal, ledit complément alimentaire comprenant une composition ingérable (Ci) selon la présente invention.

Par « Complément alimentaire » on entend une denrée alimentaire dont le but est de compléter le régime alimentaire normal et qui constitue une source concentrée de nutriments ou d'autres substances ayant un effet nutritionnel ou physiologique seuls ou combinés. Le complément alimentaire permet d’éviter certaines carences ou de répondre à des besoins spécifiques dans le régime d’alimentation d’un individu, notamment lors d’un effort physique. Cette définition du « complément alimentaire » est donnée dans l’article 2 du Décret n° 2006- 20 352 du 26 mars 2006 de la République Française relatif aux compléments alimentaires et dans la directive 2002/46/CE du parlement européen et du conseil du 10 juin 2002.

Selon le cas, le complément alimentaire selon l’invention peut présenter une ou plusieurs des caractéristiques suivantes :

le complément alimentaire est sous forme solide ou liquide ;
le complément alimentaire est sous forme solide et prend la forme d’un comprimé, d’une gélule, d’une capsule molle, d’une poudre, d’une dragée ou d’un granulé ;
le complément alimentaire comprend pour 100% de sa masse de 5% à 70% massique, plus particulièrement de 10% à 70% massique, et encore plus particulièrement de 25% à 70% massique, de ladite composition ingérable (Ci) ;
le complément alimentaire comprend en outre au moins un principe actif choisi parmi les lipides bioactifs, les sels d’oligo-éléments hydrosolubles ou hydro-dispersibles, les vitamines hydrosolubles ou liposolubles, les prébiotiques, les probiotiques, les protéines et/ou les concentrats de protéines laitières, les enzymes végétales ou animales, les acides aminés, les peptides, les sucres.

Plus précisément, le complément alimentaire selon l’invention peut également se présenter sous toute forme galénique connue de l’homme du métier, comme par exemple sous la forme d’un comprimé, d’une gélule, d’une dragée, d’un granulé, d’une capsule molle, d’un sirop, d’une poudre, comme par exemple une poudre à libération immédiate, d’une poudre à libération différée ou d’une poudre pour boissons reconstituées, d’un liquide, d’un stick, d’un gel.

Les formes solides utilisées dans les industries de la pharmacie humaine ou vétérinaire, ou des compléments alimentaires, se présentent généralement sous la forme de comprimés, de gélules, de dragées, de granulés, qui comprennent au moins un principe actif pharmaceutique ou au moins un ingrédient nutritionnel, et au moins un agent excipient. Ces formes solides peuvent être préparées par la mise en œuvre de nombreuses techniques connues de l’homme du métier, comme par exemple les techniques de compression, de pelletisation, de granulation, de compactage ou d’extrusion.

Lorsque le complément alimentaire selon l’invention se présente sous la forme d’une poudre, il est obtenu par introduction de ses différents constituants dans un mélangeur équipé d’au moins un système mécanique d’agitation, comme par exemple des pâles d’agitation plates ou de type hélice, et le mélangeur est éventuellement un mélangeur par retournement, et le mélangeur est éventuellement équipé d’un système de type émotteur. Cette opération de mélange est généralement réalisée à température ambiante.

Le complément alimentaire peut se présenter sous toute forme de produit alimentaire connue de l’homme du métier, comme une boisson, et plus particulièrement une boisson aqueuse, une solution, un jus de fruit, une boisson aromatisée, une boisson énergétique, une boisson alcoolisée, une boisson à base de café, une boisson à base de chocolat, une boisson à base de thé, un produit laitier, et plus particulièrement du lait, du yaourt, un dessert lacté, du yaourt à boire, un fromage, une crème glacée, une barre chocolatée, un produit céréalier, et plus particulièrement une barre de céréale, un biscuit, des céréales pour le petit déjeuner, des farines, des produits de panification, un produit de nutrition spécialisée, plus particulièrement un produit de nutrition infantile, un produit de nutrition pour préparer à l’effort physique, un produit de nutrition clinique, un substitut de repas, des confiseries, plus particulièrement des gommes à mâcher, des bonbons, des caramels, des dragées, des berlingots, des guimauves, des loukoums, des nougats, des pâtes de fruits, des réglisses.

Comme lipides bioactifs éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer les phytostérols, comme ceux extraits des huiles végétales, et plus particulièrement les extraits de l’huile d’argousier, de l’huile de maïs, de l’huile de soja ; les complexes de phytostérols, isolés des huiles végétales, comme par exemple la cholestatine, composée de campestérol, de stigmastérol et de brassicastérol ; les phytostanols ; les caroténoïdes, qui appartiennent à la famille des terpénoïdes, extraits des algues, des plantes vertes, des champignons, des bactéries ; les acides gras polyinsaturés du groupe oméga-3, comme par exemple l’acide alpha-linolénique, l’acide eicosapentaénoïque, l’acide docosahexanoïque ; les acides gras polyinsaturés du groupe oméga-6, comme par exemple l’acide linoléique, l’acide γ-linolénique, l’acide eicosadiénoïque, l’acide dihomo-γ20 linolénique, l’acide arachidonique, l’acide docosadiénoïque, l’acide docosatétraénoïque, l’acide docosapentaénoïque.

Comme exemples de sels d’oligo-éléments hydrosolubles ou hydro-dispersibles éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer le carbonate ferreux, le chlorure ferreux tétrahydraté, le chlorure ferrique hexahydraté, le citrate ferreux hexahydraté, le fumarate ferreux, le lactate ferreux tétrahydraté, le sulfate ferreux monohydraté, le sulfate ferreux heptahydraté, le chélate ferreux d'acides aminés hydratés, le chélate de fer de glycine ; l'iodate de calcium hexahydraté, l'iodate de calcium anhydre ; l'iodure de sodium, l'iodure de potassium ; l'acétate de cobalt tétrahydraté, le carbonate basique de cobalt monohydraté, le carbonate de cobalt hexahydraté, le sulfate de cobalt heptahydraté, le sulfate de cobalt monohydraté, le nitrate de cobalt hexahydraté ; l'acétate cuivrique monohydraté, le carbonate basique de
cuivre monohydraté, le chlorure cuivrique dihydraté, le méthionate de cuivre, le sulfate cuivrique pentahydraté, le chélate cuivreux d'acides aminés hydratés, le chélate cuivreux de glycine hydraté, le chélate de cuivre de Phydroxy-analogue de méthionine ; le carbonate manganeux, le chlorure manganeux tétrahydraté, le phosphate acide de manganèse trihydraté, le sulfate manganeux tétrahydraté, le sulfate manganeux monohydraté, le chélate de manganèse d'acides aminés hydraté, le chélate de manganèse de glycine hydraté, le chélate de manganèse de l'hydroxy-analogue de méthionine ; le molybdate d'ammonium, le molybdate de sodium, le sélénite de sodium, le sélénate de sodium ; la forme organique du sélénium produite par saccharomyces cerevisiae, la sélénomethionine (levure séléniée inactivée), et la séléno méthionine produite par Saccharomyces cerevisiae (levure séléniée inactivée).

Comme exemples de vitamines hydrosolubles ou liposolubles éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer : la vitamine A, plus particulièrement sous sa forme de rétinol, d’acétate de rétinyle, de palmitate de rétinyle ou de bêta-carotène ; la vitamine D2, plus particulièrement sous sa forme dergocalciférol, ou de 25-hydrox calciférol, la vitamine D3, plus particulièrement sous sa forme de cholécalciférol, la vitamine K, plus particulièrement sous sa forme de phylloquinone (phytoménadione) ou de Ménaquinone, la vitamine B1, plus particulièrement sous sa forme de chlorhydrate de thiamine, de mononitrate de thiamine, de chlorure de thiamine monophosphate, ou de chlorure de thiamine pyrophosphate, la vitamine B2, plus particulièrement sous sa forme de riboflavine, de riboflavine 5’-phosphate de sodium, la vitamine B6, plus particulièrement sous sa forme de chlorhydrate de pyridoxine, de pyridoxine 5’-phosphate, ou de pyridoxal 5’-phosphate, la vitamine B12, plus particulièrement sous sa forme de cyanocobalamine, d’hydroxocobalamine, de 5’-déoxyadénosylcobalamine, ou de méthylcobalamine, la vitamine C, plus particulièrement sous sa forme d'acide L-ascorbique, de L-ascorbate de sodium, de L-ascorbate de calcium, de L-ascorbate de potassium, de sels de calcium de l'acide palmityl-6-L-ascorbique, de sodium ascorbylmonophosphate, l’acide pantothénique, plus particulièrement sous sa forme de D-pantothénate de calcium, de D-pantothénate de sodium, de Dexpanthénol, ou de Pantéthine, la vitamine PP, plus particulièrement sous sa forme d'acide nicotinique, de niacine, de nicotinamide, ou d’hexanicotinate d’inositol (hexaniacinate d’inositol), la vitamine B9, plus particulièrement sous sa forme d'acide folique, les folates, plus particulièrement sous leur forme d’acide ptéroylmonoglutamique, de L-méthylfolate de calcium, d’acide (6S)-5- méthyltétrahydrofolique sous forme de sel de glucosamine, la vitamine H2, B7 ou BW, plus particulièrement sous sa forme de biotine, la choline, plus particulièrement sous sa forme de chlorure de choline, de choline dihydrogène citrate, de bitartrate de choline, l'inositol, la carnitine, plus particulièrement sous sa forme de L-carnitine, L-carnitine-L-tartrate, la taurine.

Comme exemples de pré-biotiques éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer l’inuline, les transgalactooligosaccharides, les fructanes et les manno-oligosaccharides.

Comme exemples de probiotiques éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer différentes souches de Saccharomyces cerevisiae, de Bacillus cereus var toyoi, de Bacillus subtilis seul ou en combinaison avec le Bacillus licheniformis, ou encore des souches d'Enterococcus faecium. Ces souches de microorganismes sont généralement associées à un support solide, par exemple le carbonate de calcium, le dextrose ou le sorbitol.

Comme exemples de protéines et/ou de concentrats de protéines laitières éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer les protéines laitières issues du cracking du lait, tels que le colostrum sous forme de poudre lyophilisée ou atomisée, le lactosérum sous forme de poudre, de fractions purifiées ou enrichies en IgG, en lactoferrine, en lactoperoxydase.

Comme exemples d’enzymes végétales ou animales éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer la promutase, la superoxyde dismutase (SOD), la 3-phytase, la 6-phytase, les endo-l,4-betaglucanases, les endo-l,4- betaxylanases, ou encore d'autres enzymes améliorant ou favorisant la digestion.

Comme exemples de peptides éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer les peptides de l’avocat, les peptides de lupin, les peptides de quinoa, les peptides de maca, les peptides de soja fermentés ou non, les peptides de riz, les peptides présents dans l'extrait de graines d'Acacia macrostachya, les peptides présents dans les extraits de graines de passiflore.

Comme exemples d’acides aminés éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer l’alanine, l’arginine, l’asparagine, l’acide aspartique, la cystéine, l’acide glutamique, la glutamine, la glycine, l’histidine, l’isoleucine, la leucine, la lysine, la méthionine, la phénylalanine, la proline, l’hydroxy-proline, la pyrrolysine, la sélénocystéine, la sérine, la thréonine, le tryptophane, la tyrosine, la valine, la sarcosine, l’ornithine.

Comme exemples de sucres éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer les polysaccharides solubles dans l'eau, les sucres de poids moléculaire inferieur, tels que les oligosaccharides, mono- ou disaccharides, comme par exemple le glucose, le lactose, le dextrose.

Comme exemples d’excipients éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer les exhausteurs de goût et les agents aromatisants.

Comme exemples d’exhausteurs de goût éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer les glutamates, comme par exemple l’acide glutamique, le glutamate monosodique, le glutamate monopotassique, le diglutamate de calcium, le glutamate d'ammonium, le diglutamate de magnésium ; les guanylates, comme par exemple l’acide guanylique (guanosine monophosphate), le guanylate disodique, le Guanylate dipotassique, le Guanylate de calcium, les inosinates, comme par exemple l’acide inosinique, l’inosinate disodique, l’inosinate dipotassique, l’inosinate de calcium.

Comme exemples d’édulcorants éventuellement présents dans le complément alimentaire objet de la présente invention, on peut citer les extraits de Stevia, les rébiaudosides.

L’invention va être décrite plus en détail à l’aide des exemples ci-dessous.

Le principe général du modèle animal est d’induire une altération de l’épithélium intestinal, via une infection bactérienne, et d’étudier l’impact sur la fonction cutanée. L’infection bactérienne est réalisée sur une femelle souris gestante pour avoir un microbiote infecté chez les descendants.

La société VibioSphen propose un modèle in vivo de souris colonisées avec une souche de Escherichia coli (E. coli). Il s’agit d’un modèle original de transmission verticale naturelle du microbiote de la mère gestante aux souriceaux, permettant une implantation physiologique d’E. coli dans le microbiote intestinal des nouveau-nés.

Ainsi, une souche d’E. coli (SP15) sera administrée par voie orale aux souris gestantes, altérant leur microbiote intestinal. Lors de la mise à bas, ce microbiote altéré sera transmis naturellement aux souriceaux.

Sur ce modèle, il a été étudié quels étaient les impacts d’une altération du microbiote intestinal (dysbiose) sur la peau. Le modèle a donc été adapté sur des souris sans poils (SKH1 Hairless) et les paramètres à évaluer sur la peau ont été choisis.

Il a été préalablement démontré que la dysbiose à E. coli (établissement d’un environnement micro-inflammatoire dans l’intestin des nouveau-nés) entraîne une altération de la fonction barrière intestinale qui a un impact sur l’intégrité de la peau.

Ensuite, l’objectif a été d’évaluer les effets de l’extrait de bois de châtaignier (Cb) (Castanea sativa) sur :

la perméabilité intestinale,
l’altération de la fonction barrière cutanée.

L’extrait de châtaignier (Cb) testé présente un taux de matière sèche supérieur à 92% massique.

Protocole général :

La souche SP15 d’E. coli est administrée aux souris gestantes par voir orale (109 cfu - colony-forming unit, en français unité formant colonie) au 18ème jour de gestation (durée totale de la gestation chez la souris 20-21 jours).

Au jour 15, quelques souriceaux sont sacrifiés (8 souriceaux sains, 8 souriceaux infectés). La perméabilité intestinale est évaluée.

Afin de s’assurer de l’établissement d’un environnement micro-inflammatoire dans l’intestin des nouveau-nés, du Dextran Sodium Sulfate (DSS) à 1% leur est administré à J16.

A partir de J45, les souris sont gavées quotidiennement avec 200 µL de PBS (Phosphate Buffer Solution, solution tampon de phosphate salin, soluté physiologique) ou 200µL d’une solution à 0,5% d’extrait de bois de châtaignier (Cb) (200 µL/souris), pendant 1 à 2 mois. Des souris par groupe sont sacrifiées à 1 mois et 2 mois :

8 souris saines (souris gestantes gavées avec du PBS à la place de la souche SP15 d’E. coli),
8 souris infectées non traitées (gavage PBS),
8 souris infectées et traitées avec l’extrait du bois de châtaignier.

La illustre le protocole d’évaluation selon l’invention.

Expression des résultats :

Les éléments statistiques suivants ont été utilisés :

- Les expérimentations ont été réalisées en 8 réplicas (8 souris/groupe).

- Les valeurs ont été exprimées en moyenne +/- sd (standard deviation = écart type).

- Pour chaque condition, un pourcentage d’effet ainsi qu’un pourcentage de restauration ont été calculés comme suit :

L’analyse statistique a été réalisée par un test de Student et un seuil de significativité fixé à 5%, en comparant les conditions deux à deux. L’efficacité du produit a été considérée :

- Significative si p < 0,05,

- Dite « à la limite de significativité » si 0,05 ≤ p < 0,1,

- Et non significative si p > 0,1.

Effet sur la barrière intestinale :

La détermination de la perméabilité intestinale permet de rendre compte de l’intégrité de la barrière intestinale. En effet, une augmentation de la perméabilité de la barrière intestinale traduit une altération de sa fonction barrière.

Principe de la méthode

Afin d’évaluer la perméabilité intestinale, pour chaque souris, deux fractions du côlon proximal ont été montées dans les chambres Ussing afin d’évaluer l’intégrité de l’épithélium intestinal.

La mesure des flux de FITC-dextran 4kDa (FITC = Fluorescein Isothiocyanate = Isothiocyanate de fluorescéine) au travers l’échantillon prélevé permet de déterminer la perméabilité intestinale du côlon durant 1h d’exposition.

Résultats

	Perméabilité intestinale (FITC-dextran flux - pmol/h/cm²)
	1 mois	2 mois
Souris saines	20,62	18,97
Souris infectées E. coli	52,16 +153%*** vs souris saines	39,60 +109%* vs souris saines
Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier	33,20 +60%** de restauration vs souris infectées	22,68 +82%* de restauration vs souris infectées

*: p<0.05, **: p<0.01, ***: p<0.001.

Tableau 1 :Résultats de perméabilité intestinale.

La illustre les résultats de perméabilité intestinale.

La dysbiose à E. coli entraîne une augmentation de la perméabilité intestinale traduisant une altération de la fonction barrière du côlon. On observe une diminution significative de la perméabilité intestinale chez les souris infectées dès un mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette diminution traduit une restauration de la fonction barrière intestinale. On note une restauration significative de la perméabilité intestinale de 82% après 2 mois de traitement.

Effets sur l’intégrité de la peau :

Afin de déterminer les effets de l’extrait de bois de châtaignier (Cb) sur l’intégrité de la peau, différents paramètres ont été étudiés :

la fonction barrière cutanée :
- la perte insensible en eau (PIE) qui est le reflet de la barrière cutanée permettant d’évaluer une altération de la fonction barrière : plus la barrière cutanée est abîmée, plus l'eau s'évapore facilement, plus la PIE est élevée;
- la quantité de céramides : ces lipides jouent un rôle essentiel dans la structuration et le maintien de la fonction barrière de la peau. Ainsi, une altération de la barrière cutanée est associée à une diminution des céramides.
l’hydratation de la peau :
- l’hydratation des couches superficielles de la peau par cornéométrie : plus la valeur est faible, plus la peau est sèche.
l’homéostasie de la peau :
- quantification des NMF (Natural Moisturizing Factor = facteurs naturels d’hydratation) qui est constitué de l’ensemble de substances hygroscopiques (acides aminés, acide pyrrolidone carboxylique, …), localisées dans le stratum corneum, issues de la protéolyse de la filaggrine;
- quantification de la filaggrine.
l’état inflammatoire cutané :

évaluation de l’infiltration des mastocytes par coloration Toluidine blue : une augmentation de l’infiltration des mastocytes sur les souris infectées, caractéristique une augmentation de l’état inflammatoire cutané.

Effets sur la fonction barrière cutanée :

Principe de la méthode

Perte en Eau (PIE) : La chambre de mesure cylindrique a été appliquée au-dessus de l’insert pour lequel un joint a permis d’assurer l’étanchéité entre la cellule de mesure et le tissu. La valeur de la vitesse d'évaporation de l’eau (exprimée en g/m²/h) a été déterminée automatiquement. Les conditions environnementales pendant les expériences de mesure PIE ont été contrôlées, à une température stable de 20°C et une humidité relative de 50%. L’appareil utilisé est un TEWAMETER TM300 (Courage & Khazaka).
Quantification des céramides : Les céramides sont mesurées par la méthode consistant en une chromatographie LC-MS/MS utilisant un système consistant en HPLC UltiMate 3000 liquid (ThermoScientific) couplé à un spectromètre de masse MSQ Plus (ThermoScientific), équipé d’une ionisation chimique à pression atmosphérique (APCI). Les valeurs obtenues à l’issue de la mesure des Céramides sont exprimées en unité arbitraire (u.a.) par milligramme de protéines.

Résultats

	PIE (g/m²/h) +/- SD
	1 mois	2 mois
Souris saines	5,7 +/- 1,6	6,8 +/- 1,1
Souris infectées E. coli	7,9 +/- 1,6 +40%* vs souris saines	8,1 +/- 1,3 +20%* vs souris saines
Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier	7,1 +/- 1,3 +36% de restauration vs souris infectées	6,7 +/- 0,4 +103%*** de restauration vs souris infectées

*p<0,05, *** p<0,001

Tableau 2 :Résultats de perte insensible en eau.

La illustre les résultats de perte insensible en eau.

La dysbiose intestinale entraîne une augmentation de la perte insensible en eau, caractéristique d’une altération de la fonction barrière de la peau. On observe une diminution significative de la perte en eau chez les souris infectées après 2 mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette diminution traduit une restauration de la fonction barrière cutanée. On note une restauration significative de la PIE de 103% après 2 mois de traitement.

Ces résultats sont corroborés par la quantification des céramides cutanées.

	Céramides (UA/mg de prot) Moyenne +/- SD
	2 mois
Souris saines	52,0 +/- 10,1
Souris infectées E. coli	37,5 +/- 5,2 -28%** vs souris saines
Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier	46,8 +/- 9,8 +64%^LSde restauration vs souris infectées

LS 0,1<p<0,05, ** p<0,01

Tableau 3 :Evolution de la quantité de céramides dans la peau.

La dysbiose intestinale entraîne une diminution de la quantité de céramides dans la peau. Or, une altération de la barrière cutanée est associée à une diminution des céramides.

Après 2 mois de traitement avec l’extrait de châtaignier, une augmentation de la quantité de céramides est observée, caractéristique d’une restauration de la barrière cutanée. On note une restauration de la quantité de céramides de 64% après 2 mois de traitement. La illustre cette restauration de la quantité de céramides après 2 mois de traitement.

Effets sur l’hydratation de la peau :

Principe de la méthode

L’hydratation a été évaluée par cornéométrie (mesure de la teneur en eau du stratum corneum). L’analyse par cornéométrie de la peau a pour objet de déterminer l’état d’hydratation des couches supérieures de l’épiderme (stratum corneum) par la mesure des propriétés électriques de celles-ci.

Cette analyse par cornéométrie est réalisée par la méthode consistant en la mesure de capacitance du milieu diélectrique. Tout changement d’hydratation de la surface de la peau engendre une modification de ces constantes diélectriques, et par conséquent de la mesure de capacitance. Le cornéomètre mesure cette capacitance des couches les plus superficielles de l’épiderme, à l’aide d’une sonde appliquée verticalement sur la peau, avec une pression constante. Pendant la mesure, un champ électrique pénètre les couches superficielles de la peau et la constante diélectrique est mesurée. La mesure est obtenue 1 seconde après l’application. Elle est exprimée en unité arbitraire allant de 0 à 125 et désigne un indice d’hydratation (6-10 : peau très sèche - 10-50 : peau sèche - 50-125 : peau hydratée). Le cornéomètre utilisé dans le cadre de cette étude était un Cormeometer® CM825 (Courage & Khazaka).

Résultats:

	Cornéométrie (u.a.) +/- SD
	1 mois	2 mois
Souris saines	41,3 +/- 10,1	49,3 +/- 5,7
Souris infectées E. coli	33,3 +/- 3,4 -19%* vs souris saines	40,7 +/- 7,4 -17%* vs souris saines
Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier	34,5 +/- 8,8 +15% de restauration vs souris infectées	46,1 +/- 3,8 +62%* de restauration vs souris infectées

* p<0,05

Tableau 4 :Evolution de l’hydratation des couches superficielles de l’épiderme par cornéométrie.

La illustre cette évolution de l’état d’hydratation des couches superficielles de l’épiderme (Résultats de cornéométrie).

La dysbiose intestinale entraîne une diminution de la cornéométrie, caractéristique d’une diminution de l’état d’hydratation de la peau. On observe une augmentation significative de la cornéométrie chez les souris infectées après 2 mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette augmentation traduit une amélioration de l’hydratation de la peau. On note une restauration significative de l’état d’hydratation de 62% après 2 mois de traitement.

Effets sur l’homéostasie cutanée :

Principe de la méthode

Quantification des NMFs : Les NMFs sont mesurés par la méthode de chromatographie LC-MS/MS utilisant un système consistant en HPLC Agilent 1100 (Agilent Technologies) couplé à un spectromètre de masse Micromass Quattro Micro API (Waters), équipé d’une ionisation par électro-pulvérisation. Les valeurs obtenues à l’issue de la mesure des NMFs sont exprimées en microgrammes par milligrammes de protéines.

Quantification de la filaggrine : Les tissus (morceaux de peau des souris) sont placés dans du formol 10% pendant 48 heures, puis inclus en paraffine. Des sections de 5µm d’épaisseur sont réalisées à l’aide du microtome (Microm HM 340E, Thermo Scientific). Les échantillons imbibés de paraffine sont d’abord déparaffinés et réhydratés pour permettre aux réactifs d’interagir avec les échantillons. Afin de faciliter la reconnaissance de l’antigène par l’anticorps, le démasquage est effectué par l’action d’un tampon de citrate à pH 6 chauffé. Les échantillons sont ensuite saturés avec une solution de sérum de chèvre pour réduire les liaisons non spécifiques des anticorps. Les échantillons sont alors incubés avec l’anticorps primaire dirigé contre la cible d’intérêt, la filaggrine, puis avec l’anticorps secondaire marqué dirigé contre l’anticorps primaire. Enfin, pour faciliter l’observation de toutes les cellules, les noyaux sont colorés avec Hoechst. L’observation est faite avec un microscope à fluorescence. Les photos sont ensuite analysées avec le logiciel NIS. L’aire de fluorescence, correspondant au marquage de la filaggrine, est quantifiée. Afin de normaliser les résultats obtenus, l’aire correspondant au marquage des noyau (marquage Hoechst) est également quantifiée.

Les valeurs obtenues à l’issue de l’analyse des photos sont exprimées en aire de marquage de la filaggrine normalisée par l’aire de marquage des noyaux (Hoechst).

Résultats

	NMFs (µg/mg de prot) Moyenne +/- SD
	2 mois
Souris saines	43,3 +/- 4,7
Souris infectées E. coli	60,9 +/- 14,9 +41%* vs souris saines
Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier	47,7 +/- 8,4 +75%^LSde restauration vs souris infectées

LS 0,1<p<0,05, * p<0,05

Tableau 5 :Evolution de la quantité de NMFs dans la peau.

La illustre l’évolution de la quantité de NMFs dans la peau.

L’augmentation des NMF traduit une perturbation de l’homéostasie cutanée. Il s’agit d’un phénomène compensatoire, d’un rétrocontrôle, en réponse à la diminution de l’hydratation de la peau. Pour contrer la diminution de la teneur en eau de l’épiderme, il y a une activation de la protéolyse de la filaggrine entraînant une surproduction de NMF. Cette observation est confirmée par l’analyse du marquage filaggrine des tissus. En effet, chez les souris infectées, on observe une diminution de la quantité de filaggrine au sein de l’épiderme confirmant l’activation de la protéolyse de la filaggrine entraînant une surproduction de NMF.

Le traitement avec l’extrait de bois de châtaignier (Cb) permet de restaurer l’expression protéique de la filaggrine traduisant une amélioration de l’homéostasie cutanée ainsi qu'une amélioration de la différenciation des kératinocytes et par là même de la fonction barrière de la peau.

	Filaggrine (aire de marquage normalisée) +/- SD
	2 mois
Souris saines	0,24 +/- 0,04
Souris infectées E. coli	0,11 +/- 0,07 -56%** vs souris saines
Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier	0,34 +/- 0,16 +173%* de restauration vs souris infectées

* p<0,05 ; ** p<0,01

Tableau 6 :Evolution de la quantité de filaggrine au sein des tissus.

Effets sur l’état inflammatoire de la peau :

Principe de la méthode

La coloration avec le colorant bleu de toluidine, permet de marquer spécifiquement les mastocytes présents dans le derme. Les mastocytes sont des cellules du tissu conjonctif qui contiennent des granules à l’intérieur de leur cytoplasme renfermant de nombreux médiateurs. Les mastocytes, une fois infiltrés dans la peau, peuvent libérer les médiateurs proinflammatoires contenus dans les granules dont de l’histamine, des prostaglandines et de la tryptase. De plus, l'infiltration de la peau, par un nombre anormal de mastocytes, est caractéristique d’un état inflammatoire.

Les tissus (morceaux de peau des souris) sont placés dans du formol 10% pendant 48 heures, puis inclus en paraffine. Des sections de 5µm d’épaisseur sont réalisées à l’aide du microtome (Microm HM 340E, Thermo Scientific). Ces sections sont déparaffinées puis colorées avec le bleu de toluidine et enfin déshydratées.

Les coupes sont observées à l’aide d’un microscope inversé. Les photos sont ensuite analysées avec le logiciel NIS. L’aire de marquage des mastocytes (en violet) est quantifiée.

Résultats

	Moyenne des aires +/- SD
	2 mois
Souris saines	3,2 +/- 1,4
Souris infectées E. coli	6,1 +/- 2,7 +88%*** vs souris saines
Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier	2,9 +/- 0,9 +115%*** de restauration vs souris infectées

*** p<0,001

Tableau 7 :Evolution de l’état inflammatoire cutané.

La dysbiose intestinale entraîne une augmentation de l’infiltration mastocytaire dans la peau, caractéristique d’une augmentation de l’état inflammatoire cutané. On observe une diminution significative de l’infiltration des mastocytes dans le derme des souris infectées après 2 mois de traitement avec l’extrait de bois de châtaignier. Cette diminution traduit une restauration de l’état inflammatoire cutané. On note une restauration significative de l’état inflammatoire cutané de 115% après 2 mois de traitement.

La illustre l’évaluation de l’infiltration des mastocytes par coloration avec le bleu de toluidine (grossissement x 40).

Bilan des tests réalisés :

Cette étude met clairement en évidence les effets de l’extrait de bois de châtaignier (Cb) pour restaurer la barrière cutanée dont l’altération est la conséquence d’une altération de la barrière intestinale conséquence directe d’une dysbiose du microbiote intestinal.

TABLEAU RECAPITULATIF

		Souris infectées E. coli (dysbiose)	Souris infectées E. coli +0,5% extrait de bois de châtaignier pendant 2 mois
Barrière intestinale	Perméabilité intestinale	+109%* vs souris saines	+82%* de restauration
Barrière cutanée	PIE	+20% vs souris saines	+103%*** de restauration
Barrière cutanée	Céramides	-28%** vs souris saines	+64%^LSde restauration
Hydratation	Cornéométrie	-17%* vs souris saines	+62%* de restauration
Homéostasie cutanée	NMF	+41%* vs souris saines	+75%^LSde restauration
Homéostasie cutanée	Filaggrine	-56%** vs souris saines	+173%* de restauration
Inflammation cutanée	Infiltration des mastocytes	+88%*** vs souris saines	+115%*** de restauration

LS 0,1<p<0,05; * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001

Tableau 8 : Bilan des résultats obtenus.

CONCLUSIONS GENERALES :

Le modèle in vivo développé a permis de mettre en évidence le lien étroit entre une dysbiose intestinale et une altération de la fonction barrière de l’intestin. Cette altération a pour conséquence une altération de la fonction barrière de la peau.

En effet, l'altération de la barrière de la peau est une conséquence directe et indissociable de celle de barrière intestinale, conséquence elle-même d’une dysbiose du microbiote intestinal.

L’extrait de bois de châtaignier (Cb) est capable de restaurer la barrière cutanée dont l’altération est la conséquence d’une altération de la barrière intestinale conséquence directe d’une dysbiose du microbiote intestinal.

L’extrait de bois de châtaignier (Cb) est capable de restaurer la fonction barrière intestinale altérée par une dysbiose du microbiote intestinal (à E. coli) et par là même de restaurer la fonction barrière cutanée et trouve ainsi et avantageusement son application dans le traitement de pathologies cutanées induites par un trouble intestinal.

Claims

Composition ingérable (Ci) comprenant un extrait de bois (Cb) pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal.
Composition ingérable (Ci) selon la revendication 1, caractérisée en ce que le trouble cutané est induit par une dysbiose intestinale du côlon et/ou de l’intestin grêle.
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le trouble cutané est choisi parmi le vieillissement, l’inflammation, l’irritation, la déshydratation, le psoriasis, l’eczéma, la dermatite atopique, l’ichtyose.
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu’elle comprend une concentration en extrait de bois (Cb) supérieure ou égale à 1 milligrammes et inférieure ou égale à 1 gramme.
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l’extrait de bois (Cb) est choisi parmi les familles suivantes : Anacardiacea, Leguminosae, Fagaceae, Combetaceae, Myrtaceae, Rosaceae, Saxifragaceae, Theaceae et Vitaceae.
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l’extrait de bois (Cb) est un extrait de la famille Fagaceae, et est choisi parmi les bois appartenant au genre Quercus, Castanea, ou Myroxylon, et plus particulièrement l’extrait de bois est un extrait de Castanea sativa.
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l’extrait de bois (Cb) se présente sous la forme d’un solide pulvérulent.
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l’extrait de bois (Cb) comprend pour 100% de sa propre masse entre 1% et 10% massique d’eau et entre 90% et 99% massique de matière sèche (Ms).
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que la matière sèche (Ms) de l’extrait de bois (Cb) comprend pour 100% de sa masse :
De 30% à 89,5% massique de composés polyphénoliques (PP) choisis parmi les éléments de la famille des tanins comprenant les tanins galliques, les tanins ellagiques, les tanins complexes, les tanins condensés,

De 10% à 65% massique d’au moins un glucide choisi parmi les éléments du groupe constitué par le fucose, le xylitol, le rhamnose, l’arabinose, le glucose, le xylose, le galactose, le mannose, le fructose, le sorbitol,

De 0,5% à 5% massique d’au moins un sel d’au moins un cation monovalent ou multivalent (CMETAL) et d’au moins un anion monovalent ou multivalent (AN) organique ou inorganique.
Composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins un excipient administrable par voie orale, ledit excipient étant un additif technologique (AT) pharmaceutiquement ou nutritionnellement acceptable choisi parmi un agent diluant, un agent d’écoulement, un agent liant ou un agent délitant.
Complément alimentaire pour une utilisation dans le traitement d’un trouble cutané induit par un trouble intestinal, ledit complément alimentaire comprenant une composition ingérable (Ci) selon l’une des revendications 1 à 10.
Complément alimentaire selon la revendication 11, caractérisé en ce qu’il comprend pour 100% de sa masse de 5% à 70% massique, plus particulièrement de 10% à 70% massique, et encore plus particulièrement de 25% à 70% massique, de ladite composition ingérable (Ci).
Complément alimentaire selon l’une des revendications 11 ou 12, caractérisé en ce qu’il comprend en outre au moins un principe actif choisi parmi les lipides bioactifs, les sels d’oligo-éléments hydrosolubles ou hydro-dispersibles, les vitamines hydrosolubles ou liposolubles, les prébiotiques, les probiotiques, les protéines et/ou les concentrats de protéines laitières, les enzymes végétales ou animales, les acides aminés, les peptides, les sucres.