FR3085275A1 - Composition hydratante et procédé de production de celle-ci - Google Patents
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Abstract
La présente invention se rapporte au domaine des produits chimiques à usage quotidien. Une composition hydratante et un procédé de production de celle-ci et les produits de soins de la peau de celle-ci sont divulgués. La composition hydratante de la présente description est formée de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d’Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl, et Dendrobium officinale, Tremella fuciformis, Dictyophora indusiata et Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl ont un rapport massique de (1~4) : (1~4) : (1~4) : (1~4). Dendrobium officinale, Tremella fuciformis, Dictyophora indusiata et Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl sont utilisés dans des proportions ayant un effet hydratant supérieur à celui de chaque ingrédient seul. La composition de la présente description peut être utilisée dans des produits de soins de la peau à usage externe sur la peau sous des formes posologiques telles qu’un gel, un nettoyant pour le visage, une crème, une lotion, etc.
Description
Description
Titre de l'invention : Composition hydratante et procédé de production de celle-ci
RENVOI À DES APPLICATIONS CONNEXES [0001] Cette demande revendique la priorité de la Demande de Brevet Chinois N° 201810988013.2, déposée le 28 août 2018, et dont les divulgations sont incorporées par la présente par renvoi.
DOMAINE [0002] La présente description se rapporte au domaine des produits cosmétiques à usage quotidien, en particulier à une composition hydratante et au procédé de production de celle-ci.
ARRIÈRE-PLAN [0003] La peau peut être divisée en épiderme, derme et graisse sous-cutanée. La couche la plus externe de l’épiderme est le stratum comeum. En raison de la fonction barrière et d’absorption d’eau du stratum comeum, et des facteurs naturels d’hydratation contenus dans le stratum corneum, c’est-à-dire, les acides aminés, le lactate et les sucres, le stratum comeum maintient une certaine teneur en eau pour prévenir la sécheresse de la peau. Le stratum corneum de la peau normale contient généralement entre 10% et 30% d’humidité afin de maintenir la douceur et l’élasticité de la peau. Cependant, avec l’augmentation de l’âge, la teneur en eau u stratum comeum de la peau va diminuer progressivement. Lorsque la teneur en eau du stratum comeum est inférieure à 10%, la peau sera sèche, tendue, rugueuse et desquamante. En général, la teneur en eau de la peau humaine change en fonction de facteurs tels que l’âge, la saison, l’environnement, l’état de santé, etc. Lorsque la teneur en eau de la peau est faible, la peau devient rugueuse et foncée, le vieillissement de la peau est accéléré, et même des symptômes tels que les démangeaisons, la rougeur, les picotements et la sensibilité peuvent apparaître. Par conséquent, le maintien de l’humidité dans la peau n’est pas seulement à des fins de beauté, mais surtout de maintien de la santé de la peau. La peau est toujours en contact direct avec l’environnement extérieur. Si elle n’est pas protégée, elle est plus ou moins exposée à la sécheresse, ce qui affecte directement l’apparence de la peau. Pour ceux qui veulent avoir une peau saine, lisse, élastique et brillante, la chose la plus importante est de maintenir la peau bien hydratée et d’avoir une bonne rétention d’eau.
[0004] Il existe plusieurs substances dans la peau qui peuvent aider à retenir l’humidité. Ici, L’aquaporine AQP3 est une protéine de transport qui transporte des petites molécules telles que l’eau, le glycérol, l’urée, etc., à travers la membrane, et participe à des fonctions telles que l’hydratation de la peau, la barrière cutanée, etc. La protéine de jonction serrée ZO-1 a pour fonction de bloquer l’espace intercellulaire et est une barrière qui inhibe la diffusion de la substance, en séparant les cellules du fluide corporel externe. La filaggrine FLG et plusieurs protéines associées impliquées dans le processus de différenciation épidermique ont d’importantes fonctions barrière qui empêchent la perte d’eau et réduisent au minimum l’invasion des allergènes et des microorganismes. La loricrine est le composant principal de l’enveloppe de cellules cornées, ce qui renforce l’enveloppe de cellules cornées, améliore la barrière de perméabilité, et interagit avec le filament intermédiaire, augmentant la flexibilité de la structure d’enveloppe de cellules cornées. Cependant, certains facteurs externes peuvent provoquer une inflammation de la peau, en générant un excès de cytokines inflammatoires telles que TNF-α, ce qui augmentera la perméabilité de la peau et réduira l’intégrité, affectant la fonction barrière de la peau.
[0005] Actuellement, les humectants sur le marché utilisent principalement des procédés de « blocage de l’eau + hydratation » pour résoudre le problème de sécheresse de la peau. Ces dernières années, comme les consommateurs accordent de plus en plus d’attention à leurs propres santé et sécurité, les matières premières qui sont dérivées de substances naturelles, très efficaces et comestibles deviennent plus populaires par rapport à plusieurs matières cosmétiques synthétisées par voie biochimique. Par conséquent, il est nécessaire de développer un produit hydratant plus sûr et plus efficace.
RÉSUMÉ [0006] Dans ce contexte, un objet de la présente description consiste à fournir une composition hydratante, et dont les principes actifs sont tous des principes actifs naturels, qui agissent ensemble pour accomplir des fonctions de blocage de l’eau et d’hydratation, obtenant un effet hydratant sûr et efficace.
[0007] Afin d’atteindre l’objectif de la présente description, la présente description fournit la solution technique suivante :
[0008] une composition hydratante, qui est constituée de Dendrobium officinale, de Tremellafuciformis, de Dictyophora indusiata et d’Ophiopogon japonicas (Linn.f.) Ker-Gawl.
[0009] Ici, Dendrobium officinale est une plante épiphyte vivace d’Orchidaceae Dendrobium, répartie principalement dans le sud-ouest et des régions situées au centre et le cours inférieur du fleuve Yangtsé en Chine. Dès les dynasties Qin et Han, le « Herbal Classic » de Shen Nong a décrit Dendrobium officinale comme « principalement utilisé pour traiter les viscères, pour guérir le rhumatisme ou l’engourdissement provoqué par un courant d’air, le froid, l’humidité, etc., pour abaisser le qi, pour être ajouté en complément en cas de maladie de consommation et de faiblesse dans les cinq organes internes, pour renforcer le Yin et pour être bénéfique aux intestins après une administration à long terme ». Dans « Compendium of Materia Medica », Shizhen Li pense que Dendrobium officinale est « l’élément de première qualité du classique, sucré, léger, légèrement salé principalement utilisé pour traiter les viscères, pour guérir le rhumatisme ou Γengourdissement provoqué par un courant d’air, le froid, l’humidité, etc. pour abaisser le qi, pour être ajouté en complément en cas de manque dans les organes internes, pour apaiser le qi de l’estomac, pour gagner des muscles, pour être bénéfique à l’intelligence et pour éliminer les chocs, et pour prolonger la vie ». Des études ont montré que Dendrobium officinale est riche en polysaccharides et que Dendrobium officinale a une quantité et une teneur d’alcaloïdes supérieures à celles de Dendrobium nobile Lindl. Les acides aminés contenus dans Dendrobium officinale sont principalement l’acide aspartique, l’acide glutamique, la glycine, la valine et la leucine, et les deux derniers sont des « acides aminés essentiels » pour les êtres humains. Des études pharmacologiques ont montré que le polysaccharide de Dendrobium officinale a des fonctions d’anti-oxydation, d’abaissement de la glycémie, d’amélioration de l’immunité et anti-tumorales.
[0010] En Chine, Tremella fuciformis est un champignon comestible extrêmement précieux et un champignon médicinal de haute valeur économique, et est un aliment et un médicament traditionnels. Tremella fuciformis contient des glucides, des protéines, des vitamines et une variété d’acides aminés. C’est un bon médicament pour nourrir et renforcer le corps. Le polysaccharide est l’ingrédient le plus important de Tremella fuciformis, représentant 60% à 70% de son poids sec.
[0011] Dictyophora indusiata, également appelé « champignon du bambou », est un terme général pour une large classe de champignons du genre dictyophora. Ce produit est publié pour la première fois dans « Nutritional Materia Medica » sous le nom de matelas de bambou. Il est décrit comme « après une pluie dans une forêt de neosino calamus affinis en été, des gouttelettes tombent au sol et génèrent un matelas qui ressemble à du bois, et est blanc et comestible ». Dictyophora indusiata a pour fonctions de nourrir et de renforcer, de nourrir le qi et le cerveau, d’apaiser l’esprit et de renforcer le corps, d’enrichir le qi et de nourrir le Yin, d’humidifier les poumons et de réduire la toux, et de dégager la chaleur et de favoriser l’humidité, etc. Dictyophora indusiata peut protéger le foie et réduire l’accumulation de graisse dans la paroi abdominale, il est donc communément connu comme ayant une fonction « d’élimination de matière grasse ». Les recherches modernes ont également montré que Dictyophora indusiata possède l’effet d’inhibition de tumeur, d’anti-oxydation et de bactériostase.
[0012] Ophiopogon japonicas (Linn. f ) Ker-Gawl est sucré, légèrement amer et légèrement froid, ayant pour fonctions de nourrir le Yin et d’humidifier les poumons, d’être bénéfique à l’estomac et de favoriser le fluide corporel, de dégager la chaleur et de supprimer les mauvaises humeurs. Des études pharmacologiques modernes ont montré qu’ Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl a également des fonctions d’antioxydant, d’abaissement de la glycémie, d’anti-fatigue, d’anti-arythmie, antibactériennes, etc. Le polysaccharide &Ophiopogon japonicas (Linn.f) Ker-Gawl représente l’une des matières premières cosmétiques communément utilisées, son rôle principal consiste à hydrater et à retarder le vieillissement.
[0013] De préférence, le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis , de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl est égal à (1~4) : (1-4) : (1-4) : (1-4).
[0014] Dans certains modes de réalisation, le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn.f) Ker-Gawl est égal à 4 : 3 : 4 : 3.
[0015] Dans certains modes de réalisation, le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn.f) Ker-Gawl est égal à 3 : 4 : 3 : 4.
[0016] Dans certains modes de réalisation, le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn.f) Ker-Gawl est égal à 1 : 1 : 1 : 1.
[0017] La présente description fournit un procédé de production de la composition, comprenant la pulvérisation de matières premières et le tamisage ; l’extraction avec de l’eau ; la réalisation d’une filtration de raffinage à chaud et d’une filtration de raffinage à froid successivement ; et la collecte d’une solution d’extrait.
[0018] De préférence, le tamisage est réalisé par passage à travers un tamis à mailles 100.
[0019] De préférence, l’extraction avec de l’eau est réalisée par ajout de l’eau à un rapport matière-liquide de 1 : (75-85), et par extraction à une température de 55~65°C pendant 110-130 min. Dans certains modes de réalisation, l’extraction avec de l’eau est réalisée par ajout de l’eau à un rapport matière-liquide de 1 : 80, et par extraction à 60°C pendant 120 min.
[0020] Dans la présente description, avant l’extraction, un procédé de trempage est inclus. Le trempage est bénéfique pour l’extraction des principes actifs, et réduit également le temps de décoction, évitant des pertes et des dommages excessifs des parties des principes actifs dans le médicament dus à un temps de décoction excessivement long.
[0021] De préférence, le temps de trempage est de 0,5 h.
[0022] De préférence, la filtration de raffinage à chaud est réalisée en plaçant le papier filtre H60 dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait chaude à 50-60°C pour mouiller le papier filtre complètement, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire. Ici, le diamètre de pore du papier filtre utilisé dans la filtration de raffinage à chaud est de préférence égal à 1 pm.
[0023] Dans le procédé de la présente description, une étape de filtration de raffinage à froid est incluse pour éliminer les précipitations dues à la diminution de température.
[0024] De préférence, la filtration de raffinage à froid est réalisée en plaçant le papier filtre H70 dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait à température ambiante, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire. Ici, le diamètre de pore du papier filtre utilisé dans la filtration de raffinage à froid est de préférence égal à 0,45 pm.
[0025] Dans le procédé de la présente description, après la filtration de raffinage à froid, la turbidité de la solution d’extrait est régulée de manière à être < 2,0 FNU.
[0026] La composition dans la présente description peut être utilisée sous des formes posologiques telles qu’un gel, un nettoyant pour le visage, une crème, une lotion, etc. dans des produits de soins de la peau à usage externe.
[0027] La présente description fournit en outre un produit de soins de la peau hydratant, qui comprend la composition hydratante et un substrat.
[0028] Dans certains modes de réalisation, la quantité de la composition dans le produit de soins de la peau est de préférence égale à 0,25% en poids.
[0029] En outre, dans certains modes de réalisation, le substrat est constitué du glycérol, du
1,2-pentanediol, d’un copolymère acrylate d’hydroxyéthyle/acryloyldiméthyltaurate de sodium, de phénoxyéthanol/éthylhexylglycérol et de l’eau.
[0030] Le substrat peut être préparé par le procédé suivant qui consiste :
[0031] (1) à chauffer la matière de Phase A (glycérol, 1,2-pentanediol et eau) à 80°C et à bien mélanger pour l’utilisation ;
[0032] (2) à agiter et à refroidir jusqu’à 60°C, à ajouter la matière de Phase B, copolymère acrylate d’hydroxyéthyle/acryloyldiméthyltaurate de sodium (SEPINOV EMT 10), et à agiter uniformément ;
[0033] (3) à agiter et à refroidir jusqu’à une température inférieure à 40°C, à ajouter la matière de Phase C, phénoxyéthanol/éthylhexylglycérol (EUXYL PE 9010), et à agiter uniformément ; et [0034] (4) à agiter et à refroidir, et à évacuer à 38°C pour obtenir le substrat.
[0035] Dans la présente description, la solution d’extrait de la composition se présente sous la forme de poudres après séchage, qui est dissoute dans de l’eau et mélangée au substrat afin d’obtenir un produit de soins de la peau pour retenir l’humidité. Selon la préférence, la quantité d’ajout des poudres de composition est égale à 0,25% en poids.
[0036] La présente invention fournit en outre un procédé de rétention d’humidité dans la peau, comprenant l’application de la composition de la présente description ou du produit de soins de la peau contenant la composition de la présente description à la surface de la peau, par exemple, l’application du gel, de la crème ou de la lotion contenant la composition de la présente description ; ou le nettoyage de la peau du visage ou d’autres parties avec un nettoyant pour le visage contenant la composition de la présente description ; ou l’utilisation des produits de soins de la peau constitués du substrat et de la composition de la présente description.
[0037] Ainsi, la présente description fournit une composition hydratante, un procédé de production de celle-ci et un produit de soins de la peau de celle-ci. Dans la présente description, la composition hydratante est constituée de Dendrobium officinale, de Tremellafuciformis, de Dictyophora indusiata et d’Ophiopogon japonicas (Linn.f.) Ker-Gawl, et le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et à.'Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl est égal à (1-4) : (1-4) : (1-4) : (1-4). Dendrobium officinale, Tremellafuciformis, Dictyophora indusiata et Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl sont utilisés dans des proportions ayant un effet hydratant supérieur à celui de chaque ingrédient seul. La composition de la présente description peut être utilisée sous des formes posologiques telles qu’un gel, un nettoyant pour le visage, une crème, une lotion, etc. dans des produits de soins de la peau à usage externe.
Brève description des dessins [0038] Afin de décrire les solutions techniques dans des modes de réalisation de la présente description ou dans les arts classiques, les dessins à utiliser dans la description des modes de réalisation et des arts classiques seront brièvement illustrés ici.
[0039] [fig.l] montre le résultat comparatif du taux d’absorption d’humidité de chaque ingrédient.
[0040] [fig.2] montre le résultat comparatif du taux de rétention d’humidité de chaque ingrédient.
[0041] [fig.3] montre le résultat comparatif du changement de la teneur en eau dans chaque exemple.
[0042] [fig.4] montre le résultat comparatif du changement de la perte d’eau transépidermique dans chaque exemple.
[0043] [fig.5] montre les courbes de viabilité cellulaire de principes actifs (g) avec différentes concentrations dans l’exemple 3.
[0044] [fig.6] montre les images de la détection de fluorescence de la Loricrine après traitement avec le principe actif (g) dans l’Exemple Expérimental 3.
[0045] [fig.7] montre les images de la détection de fluorescence de la Filaggrine après traitement avec le principe actif (g) dans l’Exemple Expérimental 3.
[0046] [fig.8] montre les images de la détection de fluorescence de Zonula Occludens-1 après traitement avec le principe actif (g) dans l’Exemple Expérimental 3.
[0047] [fig.9] montre les images de la détection de fluorescence de l’Aquaporine 3 après traitement avec le principe actif (g) dans l’Exemple Expérimental 3.
[0048] [fig.10] montre la tendance entre le principe actif (g) et la quantité de sécrétion de cytokine inflammatoire TNFa.
Description des modes de réalisation [0049] La présente description divulgue une composition hydratante, un procédé de production de celle-ci et l’utilisation de celle-ci. L’homme du métier peut apprendre du contenu de ce document et améliorer de manière appropriée les paramètres de procédé. Il convient de noter que toutes ces alternatives et modifications sont évidentes pour l’homme du métier et sont considérées comme étant incluses dans la présente invention. Les procédés et les produits de la présente description ont été décrits en termes de modes de réalisation préférés. Il sera évident pour l’homme du métier que la présente description peut être mise en pratique et mise en pratique par des modifications ou une combinaison et des changements appropriés sans s’écarter de l’esprit et de l’étendue de l’invention.
[0050] Afin de mieux comprendre la présente description, les solutions techniques dans les modes de réalisation de la présente description seront complètement décrites en détail en liaison avec les modes de réalisation de la présente description. Evidemment, les modes de réalisation décrits sont uniquement des parties des modes de réalisation de la présente description, mais pas tous les modes de réalisation. Tous les autres modes de réalisation obtenus par l’homme du métier sur la base des modes de réalisation de la présente description sans efforts de créativité entrent dans l’étendue de protection de la présente description.
[0051] Sauf indication contraire, les réactifs utilisés dans les modes de réalisation de la présente description sont des produits commerciaux, qui peuvent être achetés sur le marché.
[0052] Exemple 1 [0053] Dendrobium officinale a été pesé et ajouté dans un bêcher propre avec de l’eau déionisée à un rapport matière-liquide égal à 1 : 80 et trempé pendant 0,5 h. Par la suite, le mélange a été chauffé et agité, et extrait à 60°C pendant 120 min. Une filtration de raffinage à chaud a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H60 (taille de pore de 1 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait chaude à 50-60°C pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire. Une filtration de raffinage à froid a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H70 (taille de pore de 0,45 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant la solution d’extrait à température ambiante pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0054] Exemple 2 [0055] Tremella fuciformis a été pesé et ensuite soumis à un prétraitement, à une extraction, à une filtration de raffinage à chaud et à une filtration de raffinage à froid selon le procédé de l’Exemple 1 pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0056] Exemple 3 [0057] Dictyophora indusiata a été pesé et ensuite soumis à un prétraitement, à une extraction, à une filtration de raffinage à chaud et à une filtration de raffinage à froid selon le procédé de l’Exemple 1 pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0058] Exemple 4 [0059] Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl a été pesé et ensuite soumis à un prétraitement, à une extraction, à une filtration de raffinage à chaud et à une filtration de raffinage à froid selon le procédé de l’Exemple 1 pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0060] Exemple 5 [0061] Dendrobium officinale, Tremella fucifomis, Dictyophora indusiata et Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl ont été pesés à un rapport massique de 4 : 3 : 4 : 3, et ajoutés dans un bêcher propre avec de l’eau déionisée à un rapport matière-liquide de 1 : 80 et trempés pendant 0,5 h. Par la suite, le mélange a été chauffé et agité, et extrait à 60°C pendant 120 min. Une filtration de raffinage à chaud a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H60 (taille de pore de 1 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait chaude à 50-60°C pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire. Une filtration de raffinage à froid a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H70 (taille de pore de 0,45 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant la solution d’extrait à température ambiante pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0062] Exemple 6 [0063] Dendrobium officinale, Tremellafuciformis, Dictyophora indusiata et Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl ont été pesés à un rapport massique de 3 : 4 : 3 : 4, et ajoutés dans un bêcher propre avec de l’eau déionisée à un rapport matière-liquide de 1 : (80+5) et trempés pendant 0,5 h. Par la suite, le mélange a été chauffé et agité, et extrait à 60±5°C pendant 120+10 min. Une filtration de raffinage à chaud a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H60 (taille de pore de 1 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait chaude à 50-60°C pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire. Une filtration de raffinage à froid a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H70 (taille de pore de 0,45 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant la solution d’extrait à température ambiante pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0064] Exemple 7 [0065] Dendrobium officinale, Tremellafuciformis, Dictyophora indusiata et Ophiopogon japonicas (Linn. f ) Ker-Gawl ont été pesés à un rapport massique de 1 : 1 : 1 : 1, et ajoutés dans un bêcher propre avec de l’eau déionisée à un rapport matière-liquide de 1 : (80+5) et trempés pendant 0,5 h. Par la suite, le mélange a été chauffé et agité, et extrait à 60+5°C pendant 120+10 min. Une filtration de raffinage à chaud a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H60 (taille de pore de 1 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait chaude à 50-60°C pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire. Une filtration de raffinage à froid a ensuite été réalisée en plaçant un papier filtre H70 (taille de pore de 0,45 pm) dans un entonnoir de Buchner, en remplissant la solution d’extrait à température ambiante pour mouiller le papier filtre, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que tout le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0066] Exemple 8 [0067] Dendrobium officinale, Dictyophora indusiata et Ophiopogon japonicas(Linn. f )
Ker-Gawl ont été pesés à un rapport massique de 2 : 1 : 1, et ensuite soumis à un prétraitement, à une extraction, à une filtration de raffinage à chaud et à une filtration de raffinage à froid selon le procédé de l’Exemple 1 pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0068] Exemple 9 [0069] Dendrobium officinale et Dictyophora indusiata ont été pesés à un rapport massique de 2 : 1, et ensuite soumis à un prétraitement, à une extraction, à une filtration de raffinage à chaud et à une filtration de raffinage à froid selon le procédé de l’Exemple 1 pour obtenir une solution d’extrait claire (la turbidité a été régulée de manière à être < 2,0 FNU).
[0070] Exemple expérimental 1. Test de performance d’absorption d’humidité et de rétention d’humidité [0071] 1) Matériels expérimentaux [0072] Du Sulfate d’ammonium, une boîte de Pétri, un dessiccateur sécheur en verre [0073] 2) Procédé de test [0074] 1. Les solutions d’extrait de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d’Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl préparées dans les exemples 1 à 4 ont été respectivement soumises à une lyophilisation pour obtenir les poudres lyophilisées. La lyophilisation a été réalisée à une pression de 60-70 mTorr à 76°C pendant 24 h.
[0075] 2. Les poudres lyophilisées ont été pesées directement comme échantillons, et il y avait trois équivalents pour chaque échantillon (les poids secs de l’échantillon ont été enregistrés comme Ml).
[0076] 3. Chaque échantillon a été placé dans une boîte de Pétri et ensuite placé dans un sécheur dans lequel l’humidité relative était de 81% après le traitement avec une solution saturée de sulfate d’ammonium. Après 96 h, les échantillons ont atteint un équilibre d’absorption d’humidité et ont été pesés (le poids de l’échantillon après absorption d’humidité a été enregistré comme M2). Le taux d’absorption d’humidité de chaque échantillon a été calculé selon les poids de l’échantillon avant et après l’absorption.
[0077] La formule de calcul du taux d’absorption d’humidité est :
[0078] Taux d’absorption d’humidité (%) = (M2-M1)/M 1*100% [0079] 4. L’échantillon qui a atteint réquilibre d’absorption d’humidité a été placé dans un sécheur dans lequel l’humidité relative était de 46% après le traitement avec une solution saturée d’acétate de potassium. Après 96 h, les échantillons ont atteint un équilibre de déshydratation et ont été pesés (le poids de l’échantillon après absorption a été enregistré comme M3). Le taux de rétention d’humidité de chaque échantillon a été calculé selon les poids de l’échantillon avant et après la déshydratation.
[0080] La formule de calcul du taux de rétention d’humidité est :
[0081] Taux de rétention d’humidité (%) = { 1-[(M2-M1)-(M3-M1)/(M2-M1)]]x100% [0082] 3. Résultats [0083] Le taux d’absorption d’humidité et le taux de rétention d’humidité de chaque ingrédient sont présentés dans les figures 1 et 2 et les tableaux 1 et 2.
[0084] [Tableaux 1]
| Nom | Taux d’Absorption d’Humidité |
| Tremella fuciformis | 58,89%±0,0141 |
| Dictyophora indusiata | 41,84%±0,0169 |
| Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl | 23,69%±0,0142 |
| Dendrobium officinale | 23,64%±0,00541 |
[0085] Taux d’absorption d’humidité de chaque ingrédient [0086] [Tableaux2]
| Nom | Taux de Rétention d’Humidité |
| Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl | 38,76%±0,0637 |
| Dendrobium officinale | 30,73%±0,0117 |
| Dictyophora indusiata | 24,19%±0,0107 |
| Tremella fuciformis | 13,24%±0,00684 |
[0087] Taux de rétention d’humidité de chaque ingrédient [0088] Les résultats ci-dessus permettent de conclure que :
[0089] (1) en ce qui concerne le taux d’absorption d’humidité, Tremella fuciformis > Dictyophora indusiata > Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl > Dendrobium officinale ; et [0090] (2) en ce qui concerne le taux de rétention d’humidité, Ophiopogon japonicas (Linn.
f.) Ker-Gawl > Dendrobium officinale > Dictyophora indusiata > Tremella fuciformis.
[0091] Exemple Expérimental 2. Test de l’effet hydratant sur la peau humaine [0092] 1) Principes actifs [0093] (a) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de
Dendrobium officinale dans l’Exemple 1 à une lyophilisation.
[0094] (b) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de Tremella fuciformis dans l’Exemple 2 à une lyophilisation.
[0095] (c) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de Dictyophora indusiata dans l’Exemple 3 à une lyophilisation.
[0096] (d) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait d’
Ophiopogon japonicas (Linn.f.) Ker-Gawl dans l’Exemple 4 à une lyophilisation.
[0097] (e) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de composition dans l’Exemple 5 à une lyophilisation.
[0098] (f) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de composition dans l’Exemple 6 à une lyophilisation.
[0099] (g) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de composition dans l’Exemple 7 à une lyophilisation.
[0100] (h) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de composition dans l’Exemple 8 à une lyophilisation.
[0101] (i) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de composition dans l’Exemple 9 à une lyophilisation.
[0102] La lyophilisation a été réalisée à une pression de 60-70 mTorr à -76°C pendant 24 h. [0103] 2) Substrat [0104] Le tableau 3 montre la formule du substrat en parties en masse.
[0105] [Tableaux3]
| Phase | No. | Nom de l’ingrédient | Nom INCI | Quantité d’ajout |
| A | 1 | Eau déionisée | Eau | 83,3 Parties |
| 2 | Glycérol | Glycérol | 3 Parties | |
| 3 | 1,2-pentanediol | 1,2-pentanediol | 2 Parties | |
| B | 4 | SEPINOV EMT 10 | Copolymère acrylate d’hydroxyéthyle/acryloyldiméthylta urate de sodium | 1 Partie |
| C | 5 | EUXYL PE 9010 | Phénoxyéthanol/éthylhexylglycérol | 0,7 Partie |
[0106] Formules du substrat [0107] Procédé de préparation du substrat :
[0108] (1) les ingrédients de la Phase A ont été chauffés à 80°C et mélangés uniformément pour l’utilisation ;
[0109] (2) le produit résultant a été agité et refroidi jusqu’à 60°C, et l’ingrédient de la Phase
B a été ajouté et agité uniformément ;
[0110] (3) le produit résultant a été agité et refroidi jusqu’à une température inférieure à
40°C, l’ingrédient de la Phase C a été ajouté et agité uniformément ;
[0111] (4) le produit résultant a été agité et refroidi, et évacué à 38°C pour obtenir le substrat.
[0112] 3) Échantillons de test [0113] En parties en masse, 0,25 partie de chaque principe actif (poudres lyophilisées obtenues par lyophilisation) a été ajoutée à 9,75 parties d’eau, et mélangée avec 90 parties du substrat sous agitation jusqu’à homogénéité.
[0114] 4) Test de la teneur en eau [0115] Le procédé de la capacité électrique-CORNEOMETRE a été utilisé pour détecter la teneur en eau. Le résultat est présenté par le taux de changement d’une valeur de mesure d’humidité définie (MMV). Les teneurs en eau de la peau des sujets ont été testées 30 min, 1 h, 2 h et 4 h après l’application de l’échantillon. L’équipement expérimental était le Cornéomètre CM825 (société CK, Allemagne).
[0116] La formule de calcul du changement de la teneur en eau était : changement de la teneur en eau = Tn-TO. Dans la formule : T0 était la valeur de base de la teneur en eau de la peau avant l’application des échantillons ; et Tn était la valeur à chaque instant. Plus le changement de la teneur en eau était élevé, plus l’effet hydratant était évident. Les résultats ont été montrés dans la Figure 3 et le Tableau 4.
[0117] [Tableaux4]
| No. | Instant | ||||
| 5 min | 30 min | 60 min | 120 min | 240 min | |
| a | 54,382Aa | 20,164Aa | 16,373 Aa | 16,900 Aa | 15,709“ |
| b | 56,255Bb | 21,909Bb | 17,727 Bb | 17,173 Cb | 16,709' |
| c | 58,200Cc | 20,636“ | 18,436 “ | 18,427 “ | 16,255ABa |
| d | 59,491“ | 21,946“ | 18,118“ | 19,346 Bd | 17,227Cb |
| e | 62,809“ | 25,309“ | 22,291 “ | 19,746 “ | 17,236Cb |
| f | 65,682Ff | 26,318 | 22,391 Ef | 19,346 Bf | 17,500Fe |
| g | 64,855¾ | 26,082¾ | 22,500¾ | 19,627 | 18,027Gf |
| h | 60,6911111 | 24,282“ | 22,891Hh | 16,936 Ah | 16,491¾ |
| i | 57,764n | 23,473n | 21,536 E | 18,755 Gi | 16,318Ba |
| Témoin Positif (Acide Hyaluronique à 0,1%) | 57,873jj | 19,355jj | 15,846 Jj | 17,873 « | 16,173Ah |
| Substrat | 53,782“ | 18,782“ | 13,327 “ | 15,109 Ik | 13,900e |
[0118] Changements de la teneur en eau [0119] Commentaire : Le test de l’étendue multiple de Duncan a été utilisé pour analyser les données. Dans la même colonne, le marquage avec des lettres majuscules différentes a indiqué que les différences entre les groupes étaient extrêmement significatives (p < 0,01) ; le marquage avec des minuscules différentes a indiqué que les différences entre les groupes étaient significatives (p < 0,05) ; le marquage avec la même lettre a indiqué que les différences entre les groupes n’étaient pas significatives (p > 0,05). Ici, le témoin positif était de l’acide hyaluronique à 0,1%, et le substrat était présenté dans le Tableau 3.
[0120] Les résultats ci-dessus du test de la teneur en eau montrent que :
[0121] (1) 5 min après l’application de l’échantillon, les différences entre les 11 échantillons étaient significatives (P < 0,01), et les valeurs étaient selon l’ordre f>g>e>h>d>c > témoin positif > i > b > a > substrat ; et l’effet de la composition était supérieur à celui d’un seul ingrédient ;
[0122] (2) 30 min après l’application de l’échantillon, les différences entre les 11 échantillons étaient significatives (P < 0,01), et les valeurs étaient selon l’ordre f > g > e>h>i>d>b>c>a> témoin positif > substrat ; et l’effet de la composition était supérieur à celui d’un seul ingrédient ;
[0123] (3) 60 min après l’application de l’échantillon, les différences entre les 11 échantillons étaient significatives (P < 0,01), et les valeurs étaient selon l’ordre h > g > f>e>i>c>d>b>a> témoin positif > substrat ; et l’effet de la composition était supérieur à celui d’un seul ingrédient ;
[0124] (4) 120 min après l’application de l’échantillon, les différences entre les 11 échantillons étaient significatives (P < 0,05), et les valeurs étaient selon l’ordre e > g > f>d>i>c> témoin positif > b > h > a > substrat ;
[0125] (5) 240 min après l’application de l’échantillon, les différences entre c et i, d et e n’étaient pas significatives (P > 0,05).
[0126] Au vu de ce qui précède, l’effet hydratant de la composition de la présente description est supérieur à celui de chaque ingrédient seul, et il y avait des différences significatives (P < 0,01) entre les échantillons et le substrat.
[0127] 5) Test de perte d’eau transépidermique [0128] Les sujets et l’environnement de test étaient les mêmes que ceux du test de la teneur en eau de la peau.
[0129] Le test était conçu selon le principe de diffusion découvert par A. Lick. Le changement de pression de vapeur d’eau près de la surface de la peau est mesuré pour évaluer la perte d’eau transépidermique de la surface de la peau. La perte d’eau transépidermique est présentée comme TEWL, et dont l’unité est g/hm2. Plus la valeur est basse, meilleur est l’effet de prévention de perte d’eau transépidermique, et meilleure est la fonction barrière de la peau. Les sujets ont été soumis à un test de perte d’eau transépidermique 30 min, 1 h, 2 h et 4 h après l’application des échantillons. L’équipement expérimental était le Tewamètre TM300 (société CK, Allemagne).
[0130] La formule de calcul du taux de changement de la perte d’eau transépidermique est : taux de changement de la perte d’eau transépidermique % = (Tn-T0)/T0xl00. Dans la formule, T0 est la valeur de base avant l’application des échantillons ; et Tn est la valeur de données à chaque instant. Plus la valeur négative du taux de changement de la perte d’eau transépidermique était basse, plus l’effet hydratant était évident. Les résultats ont été présentés dans la Ligure 4 et le Tableau 5.
[0131] [Tableaux5]
| No. | Temps | ||
| 60 min | 120 min | 240 min | |
| a | -25,27%Aa | -16,30%Aa | -3,49%Aa |
| b | -34,07%Bb | -25,58%Bb | -15,75%Bb |
| c | -21,26%Cc | -20,7 l%Cc | -6,95%Cc |
| d | -38,67%Dd | -27,83%Dd | -12,47%Dd |
| e | -25,6 l%Ee | -ll,94%Ee | -28,95%Ee |
| f | -20,52%Ef | -23,00%Ff | -24,70%Ef |
| g | -22,75%¾ | -19,41%¾ | -24,97%¾ |
| h | -14,38%“ | -15,59%“ | -25,97%“ |
| i | -23,16%H | -21,71%E | -28,36%H |
| Témoin Positif (Acide Hyaluronique à 0,1%) | -35,39%Jj | -31,81%JJ | -11,94%JJ |
| Substrat | -19,50%“ | -20,47%“ | -8,66%“ |
[0132] Taux de changement de la perte d’eau transépidermique [0133] Commentaire : Le procédé de test de l’étendue multiple de Duncan a été utilisé pour analyser les données. Dans la même colonne, le marquage avec des lettres majuscules différentes a indiqué que les différences entre les groupes étaient extrêmement significatives (p < 0,01) ; le marquage avec des minuscules différentes a indiqué que les différences entre les groupes étaient significatives (p < 0,05) ; le marquage avec la même lettre a indiqué que les différences entre les groupes n’étaient pas significatives (p > 0,05).
[0134] Les résultats ci-dessus du test de perte d’eau transépidermique montrent que :
[0135] (1) 1 h, 2 h et 4 h après Tapplication de l’échantillon, en ce qui concerne la perte d’eau transépidermique, les différences entre les 11 échantillons étaient significatives (p < 0,01) ; et [0136] (2) après une stabilisation de 4 h, l’effet de la composition sur la prévention de la perte d’eau transépidermique était supérieur à celui du seul ingrédient.
[0137] Exemple Expérimental 3. Test des protéines associées à l’hydratation et à la barrière dans les cellules épidermiques [0138] 1) Principe actif [0139] (g) Les poudres lyophilisées obtenues en soumettant la solution d’extrait de composition dans l’Exemple 7 à une lyophilisation. La lyophilisation a été réalisée à une pression de 60-70 mTorr à -76°C pendant 24 h.
[0140] 2) Échantillons de test [0141] Le principe actif (poudres lyophilisées obtenues par lyophilisation) a été dilué avec un solvant ou de l’eau selon les exigences de chaque expérience sur les cellules.
[0142] 3) Dosage MTT [0143] Le dosage MTT, également connu sous le nom de dosage colorimétrique MTT, est un procédé de détection de la viabilité et de la croissance des cellules. Le principe du dosage MTT est que la succinate déshydrogénase dans les mitochondries de cellules viables est capable de réduire le MTT exogène en Formazan qui est un cristal violet insoluble dans l’eau et déposé dans les cellules, mais les cellules mortes ne sont pas en mesure de le faire. Le diméthylsulfoxyde (DMSO) était capable de dissoudre le formazan dans les cellules, et le poste de travail de dosage d’immunoabsorption par enzyme liée peut détecter la valeur d’absorbance à des longueurs d’onde de 540 nm ou 720 nm, ce qui reflète indirectement le nombre de cellules viables. Ainsi, afin de garantir la dose maximale tolérée d’administration de l’expérience sur les cellules de l’efficacité d’hydratation et de garantir que les cellules soient maintenues à un taux de viabilité relativement élevé pour éviter l’effet sur le jugement, 7 concentrations d’administration de la concentration élevée à la concentration basse ont été définies, et un essai de cytotoxicité sur les kératinocytes a été réalisé. Les résultats de cytotoxicité ont été présentés dans la Figure 5 et le Tableau 6.
[0144] Les cellules expérimentales étaient des kératinocytes (Guangdong Boxi Biological Technology Co., Ltd.).
[0145] [Tableaux6]
| Concentration de l’échantillon (ppm) | Taux de survie (%) |
| 25 | 102,54+6,34 |
| 50 | 101,64+0,58 |
| 100 | 109,64+8,31 |
| 200 | 101,31+8,68 |
| 500 | 99,27+0,76 |
| 1000 | 89,99+1,43 |
| 2000 | 83,25+8,23 |
| Témoin Négatif (DMSO à 4%) | 20,67+2,51 |
| Groupe Blanc | 100,00+2,40 |
[0146] Résultats d’essai de cytotoxicité du principe actif [0147] Les résultats d’essai de cytotoxicité ci-dessus montrent que : à une dose d’administration de 1000 ppm, la viabilité cellulaire était supérieure à 90%. Ainsi, une dose d’administration inférieure à 1000 ppm peut être utilisée pour réaliser les expériences suivantes sur les cellules.
[0148] 4) Test des protéines associées à l’hydratation et à la barrière dans les cellules épidermiques [0149] Sur la base des résultats du dosage MTT, la dose maximale tolérée d’administration des échantillons pour les kératinocytes était de 1000 ppm. Sur cette base, les détections des niveaux de la Loricrine, de la Filaggrine, de Zonula Occludens-1 et de l’Aquaporine 3 dans les kératinocytes ont été réalisées. Egalement, une expérience d’inhibition de la sécrétion de cytokine inflammatoire TNF a sous une stimulation aux UVB est réalisée. Dans les expériences ci-dessus, le procédé d’immunofluorescence a été utilisé pour détecter les niveaux d’expression de la Loricrine, de la Filaggrine, de Zonula Occludens-1 et de l’Aquaporine 3 dans les kératinocytes.
[0150] Principe du procédé d’immunofluorescence : haute spécificité entre l’anticorps et l’antigène. L’anticorps est utilisé pour détecter les substances antigèniques congénères dans un tissu ou une cellule. Comme le complexe d’antigène et d’anticorps est incolore, l’immunofluorescence est utilisée pour la coloration et la quantification. Le logiciel Image-pro Plus (IPP) est utilisé pour analyser l’intensité de la fluorescence verte dans une image de cellules sous lumière bleue, et l’intensité de la fluorescence par unité de surface est calculée. La densité optique moyenne (IOD/surface) est utilisée comme indice pour l’expression de protéines. Plus la IOD/surface est élevée, plus le niveau d’expression de protéines est élevé.
[0151] Dans cette expérience, tous les échantillons de test ont été dissous dans de l’eau et le témoin positif acide rétinoïque a été dissous dans DMSO. Il y avait deux groupes de témoin négatif, SC (solution témoin, c’est-à-dire, milieu de culture) et DMSO à l%o, SC (solution témoin contenant DMSO à l%o), respectivement.
[0152] Les figures 6 à 9 montrent la détection de fluorescence de chaque protéine, et les données sont présentées dans le Tableau 7.
[0153] [Tableaux7]
| Élément | Nom de l’Échantillon | IOD/Surface |
| Détection de la Loricrine | Témoin négatif de principe actif (SC) | 48,843+3,025 |
| 500 ppm de principe actif | 57,008+3,519 * | |
| Témoin négatif d’acide rétinoïque (DMSO à l%0, SC) | 43,477+3,149 | |
| Acide rétinoïque à 2,5 μΜ | 44,449+3,204 | |
| Détection de la Filaggrine (LFG) | Témoin négatif de principe actif (SC) | 38,413+1,487 |
| 500 ppm de principe actif | 43,557+1,794* | |
| Témoin négatif d’acide rétinoïque (DMSO à l%0, SC) | 38,653+0,672 | |
| Acide rétinoïque à 2,5 μΜ | 53,421+2,370** | |
| Détection de la protéine de jonction serrée (ZO-1) | Témoin négatif de principe actif (SC) | 33,760+0,582 |
| 500 ppm de principe actif | 45,716+1,757 ** | |
| Témoin négatif d’acide rétinoïque (DMSO à l%0, SC) | 34,312+1,749 | |
| Acide rétinoïque à 2,5 μΜ | 45,059+1,391** | |
| Détection de T Aquaporine (AQP3) | Témoin négatif de principe actif (SC) | 36,869+2,072 |
| 500 ppm de principe actif | 43,555+0,432** | |
| Témoin négatif d’acide rétinoïque (DMSO à l%0, SC) | 42,416+3,440 | |
| Acide rétinoïque à 2,5 μΜ | 50,858+0,766* |
[0154] Tests des protéines associées à l’hydratation et à la barrière dans les cellules épidermiques [0155] Commentaire : Le test T a été utilisé pour réaliser une analyse statistique ; * a indiqué que la différence était significative (P < 0,05) par rapport au témoin négatif (SC) ; et ** a indiqué que la différence était extrêmement significative (P < 0,01).
[0156] Les résultats des tests de protéines associées à l’hydratation et à la barrière dans les cellules épidermiques montrent que : par comparaison avec le témoin négatif (SC) du principe actif, lorsque le principe actif était administré à une dose de 500 ppm, les niveaux d’expression des protéines associées à la barrière de la peau, la Loricrine et la Lilaggrine, dans les kératinocytes étaient significativement améliorés (P < 0,05). Les niveaux d’expression des protéines associées à l’hydratation de la peau, Zonula Occludens-1 et Γ Aquaporine 3, dans les kératinocytes étaient significativement améliorés (P < 0,01).
[0157] 5) Expérience d’inhibition de la sécrétion de cytokine inflammatoire TNF-a [0158] Certains facteurs externes peuvent provoquer une inflammation de la peau et générer un excès de cytokines inflammatoires telles que TNF-α, ce qui augmentera la perméabilité de la peau et réduira l’intégrité, affectant la fonction barrière de la peau. Les influences du principe actif sur le soulagement de l’inflammation et l’amélioration de la barrière de la peau peuvent être évaluées en testant les effets du principe actif sur le facteur de nécrose tumorale (TNF-α). Le groupe de témoin négatif, les groupes d’échantillons et le groupe de témoin positif ont été soumis à un traitement par irradiation aux UVB selon les exigences expérimentales afin d’établir un modèle cellulaire pour la génération de cytokines inflammatoires. Le kit ELISA de TNF-a humain a été utilisé pour la détection.
[0159] Dans cette expérience, tous les échantillons de test ont été dissous dans de l’eau et le témoin positif dexaméthasone a été dissous dans DMSO. Il y avait deux groupes de témoin blanc, SC (solution témoin, c’est-à-dire, milieu de culture) et DMSO à l%o, SC (solution témoin contenant DMSO à l%o), respectivement, sans irradiation à la lumière UV. L’irradiation à la lumière UV a été utilisée pour provoquer des lésions de cellules afin d’établir un modèle dans lequel les cytokines inflammatoires étaient sécrétées en excès. Deux groupes de témoin négatif ont été mis en place comme témoin négatif du groupe d’échantillons, respectivement, SC (solution témoin, c’est-à-dire, milieu de culture) sous irradiation à la lumière UV et DMSO à l%o, SC (solution témoin contenant DMSO à l%o) sous irradiation à la lumière UV.
[0160] Les résultats ont été présentés dans la Figure 10 et le Tableau 8.
[0161] [Tableaux8]
| Échantillon | Concentration de TNF-a (pg/mL) |
| Groupe de témoin Blanc 1 (SC, DMSO à l%o, UVB-) | 40,42+7,32Aa |
| Groupe de témoin Négatif 1 (SC, DMSO à l%o, UVB+) | 84,41+10,17Bb |
| Groupe de témoin Positif (dexaméthasone à 0,1%) | 59,22+17,34 Bc |
| Groupe de témoin Blanc 2 (SC, UVB-) | 43,69+4,19 Aa |
| Groupe de témoin Négatif 2 (SC, UVB+) | 60,73+2,3Ab |
| 500 ppm de principe actif | 55,96+8,85 Aa |
[0162] Résultats de test de cytokine inflammatoire TNF-a [0163] Commentaire : Le test T a été utilisé pour réaliser une analyse statistique. Dans la même colonne, le marquage avec des lettres majuscules différentes a indiqué que les différences entre les groupes étaient extrêmement significatives (P < 0,01) ; le marquage avec des minuscules différentes a indiqué que les différences entre les groupes étaient significatives (P < 0,05) ; le marquage avec la même lettre a indiqué que les différences entre les groupes n’étaient pas significatives (P > 0,05).
[0164] Les résultats du test de cytokine inflammatoire TNF-α indiquent que : par comparaison avec le groupe de témoin blanc 1 (SC, DMSO à l%o, UVB-), la quantité de sécrétion de cytokine inflammatoire TNF-α dans le groupe de témoin négatif 1 (SC, DMSO à l%o, UVB+) a significativement augmenté (P < 0,01), indiquant que le traitement par irradiation aux UVB dans l’expérience était efficace. Par comparaison avec le groupe de témoin négatif 1 (SC, DMSO à l%o, UVB+), le groupe de témoin positif (dexaméthasone à 0,1%, UVB+) a un effet significativement inhibiteur (P < 0,05) sur la sécrétion de cytokine inflammatoire TNF-a.
[0165] Par comparaison avec le groupe de témoin blanc 2 (SC, UVB-), la sécrétion de cytokine inflammatoire TNF-α dans le groupe de témoin négatif 2 (SC, UVB+) a significativement augmenté (P < 0,05), indiquant que le traitement par irradiation aux UVB dans Γexpérience était efficace. Par comparaison avec le groupe de témoin négatif 2 (SC, UVB+), lors de l’administration à une dose de 500 ppm, le principe actif a un effet inhibiteur sur la sécrétion de cytokine inflammatoire TNF-a.
[0166] Exemple Expérimental 4. Evaluation de la sécurité [0167] 1) Principe actif [0168] La solution d’extrait obtenue dans l’Exemple 7 (contenant un polysaccharide, > 3 mg/mL).
[0169] 2) Échantillon de test [0170] Le principe actif a été dilué avec un solvant ou de l’eau selon les exigences de concentration de chaque test.
[0171] 3) Test d’hémolyse des globules rouges [0172] Le principe actif a été dilué avec PBS (solution tampon de phosphate) à une concentration de 40%. Le test est conçu conformément au principe selon lequel les produits chimiques peuvent endommager la membrane cellulaire. Le résultat de test est évalué en testant la densité optique de l’hémoglobine ayant échappée dans des globules rouges fraîchement séparés qui sont incubés avec l’échantillon de test dans des conditions standard. Plus le taux hémolytique est élevé, plus l’irritation de l’échantillon est importante. L’intensité d’irritation des échantillons légèrement irritants est prédite par les résultats de test du test d’hémolyse des globules rouges. Le test est rapide et très efficace, et permet de faire un pronostic rapide et relativement précis sur l’irritation des matériels végétaux. Les résultats ont été présentés dans le Tableau 9.
[0173] [Tableaux9]
| Échantillon de Test/ Échantillon Témoin | Taux Hémolytique % | Phénomène après centrifugation |
| Principe actif à 40% | 0 | La couche supérieure était jaune clair et transparente, et il y avait une précipitation au fond. |
| Témoin Positif (SDS (dodécylsulfate de Sodium) à 0,02%) | 100 | Le surnageant était rouge et transparent, et il y avait une faible précipitation rouge au fond. |
| Témoin Négatif (PBS) | 0 | Le surnageant a une couleur variant du jaune clair au rouge clair, est transparent, et il y avait une précipitation rouge au fond. |
[0174] Résultats de la solution de principe actif à 40% dans le test d’hémolyse des globules rouges [0175] Les résultats du test d’hémolyse des globules rouges montrent que : le taux d’hémolyse du principe actif à une concentration de 40% était de 0%, indiquant que la composition de ΓExemple 7 n’est pas irritante.
[0176] 4) Test d’irritation de la peau sur les animaux [0177] Le principe actif a été dilué avec de l’eau distillée à une concentration de 60%. 24 h avant le test, la fourrure des deux côtés de la partie arrière de la colonne vertébrale des animaux a été rasée avec une surface rasée de 3 cm x 3 cm. 0,5 g de l’échantillon de test a été administré sur la peau sur un côté avec une surface de 2,5 cm x 2,5 cm. L’échantillon a été administré une fois/jour, successivement durant 14 j. La peau sur l’autre côté était le groupe témoin. A partir du 2ème jour, à chaque fois avant l’administration, la fourrure a été rasée, et de l’eau tiède ou un solvant non irritant a été utilisé(e) pour nettoyer l’échantillon de test résiduel. Les résultats ont été testés 1 h plus tard, et un score leurs a été attribué selon le formulaire d’évaluation du test d’irritation/corrosion de la peau dans Cosmetic Safety Technical Specification (Edition 2015). Après le test, les scores totaux moyens de chaque animal ont été calculés chaque jour pour estimer l’intensité d’irritation de la peau. Plus le score total est élevé, plus l’irritation est importante. Les résultats ont été présentés dans le Tableau 10.
[0178] [TableauxlO]
| Jours après l’administration | Nombre des animaux | Score de l’animal | ||
| Érythème | Œdème | Score total | ||
| 1 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 2 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 3 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 4 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 5 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 6 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 7 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 8 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 9 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 10 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 11 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 12 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 13 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| 14 | 4 | 0/4 | 0/4 | 0 |
| Score moyen | 0 | |||
| Degré d’intensité d’irritation | Pas d’irritation |
[0179] Résultats de la solution de principe actif à 60% dans le test d’irritation de la peau sur les animaux [0180] Commentaire : 0/4 dans la colonne d’Erythème/Œdème a indiqué que le score de l’animal chaque jour était de 0, et le nombre d’animaux expérimentaux était de 4. La formule de calcul a été présentée ici :
[0181] Score moyen de chaque animal chaque jour = y d’ dème nombre d'ammaux expérimentaux [0182] Les résultats du test d’irritation de la peau sur les animaux montrent que : 14 jours après l’administration de la solution de principe actif à 60%, le score moyen de chaque animal par jour était de 0, indiquant qu’il n’y avait pas d’irritation.
[0183] 5) Test d’irritation sur les yeux d’un animal [0184] Le principe actif a été dilué avec de l’eau distillée à une concentration de 80%. La solution de principe actif à 80% a été administrée sous forme de gouttes dans le sac conjonctival d’un lapin, et n’a pas irrigué l’œil pendant les prochaines 24 h, et enfin l’examen clinique et l’évaluation ont été réalisés. La cornée, l’iris et la conjonctive ont été observés et d’autres lésions doivent être enregistrées et avoir un score. Les résultats ont été évalués conformément à la norme pour l’évaluation des degrés de lésion oculaire/irritation oculaire dans Cosmetic Safety Technical Specification (Edition 2015). Plus le score est élevé, plus l’irritation est importante. Les résultats ont été présentés dans le Tableau 11.
[0185] [Tableauxll]
| Nombr e d’anim aux | Site d’Obser va-tion | 1 h | 24 h | 48 h | 72 h | ||||
| Échanti lion | Témoi n | Échanti lion | Témoi n | Échanti lion | Témoin | Échanti lion | Témo in | ||
| 1 | Conjonct ive | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Iris | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Cornée | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 2 | Conjonct ive | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Iris | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Cornée | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 3 | Conjonct ive | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Iris | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Cornée | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Moyenne du score total | 0 | ||||||||
| Résultats de l’évaluation | Pas d’irritation |
[0186] Résultats de la solution de principe actif à 80% dans le test d’irritation des yeux d’animaux [0187] Les résultats du test d’irritation sur les yeux d’un animal ont montré que : 1 h, 24 h, 48 h et 72 h après l’administration de la solution de principe actif à 80% au sac conjonctival d’un lapin, il n’y avait pas d’irritation pour la conjonctive, l’iris et la cornée, indiquant qu’il n’y avait pas d’irritation.
[0188] 6) Test de phototoxicité d’absorption du rouge neutre par 3T3 [0189] La solution originale du principe actif a été utilisée dans le test de phototoxicité d’absorption du rouge neutre par 3T3. Le rouge neutre est un colorant cationique faible, qui a facilement pénétré dans la membrane cellulaire sous forme de diffusion non ionique et est agrégé dans un lysosome. Avec l’action de certains produits chimiques et de certaines conditions externes, la sensibilité de la surface de la cellule et de la membrane lysosomale a changé, entraînant des changements irréversibles tels que l’augmentation de la fragilité de la membrane lysosomale, de sorte que la capacité de la cellule à absorber le rouge neutre diminue. En testant le changement de capacité de la cellule à absorber le rouge neutre après le traitement synthétique des fibroblastes 3T3 avec des produits chimiques et un rayonnement de lumière UV, le produit chimique a été évalué pour déterminer s’il est phototoxique. Les paramètres expérimentaux PIF (facteur de photo-irritation) et MPE (photo-effet moyen) ont été utilisés pour évaluer la phototoxicité. Les normes d’évaluation sont présentées dans le Tableau 12, et les résultats ont été présentés dans le Tableau 13.
[0190] [Tableauxl2]
| Données Expérimentales | Évaluation du résultat |
| PIF <2,0 ou MPE <0,1 | Pas de phototoxicité |
| PIF > 2,0 et < 5,0, ou MPE > 0,1 et < 0,15 | Il pourrait y avoir une phototoxicité. |
| PIF >5,0 ou MPE >0,15 | Phototoxicité |
[0191] Normes d’évaluation du test de phototoxicité d’absorption du rouge neutre par 3T3 in vitro [0192] Commentaire :
[0193] 1. Toutes les valeurs moyennes du témoin positif à DO540 étaient supérieures à 0,4 et le témoin positif chlorhydrate de chlorpromazine satisfaisait les conditions suivantes, indiquant que l’expérience était établie.
[0194] CI50(+UV) se trouvait dans la plage allant de 0,1 à 3,0 pg/mL.
[0195] CI50(-UV) se trouvait dans la plage allant de 7,0 à 90,0 pg/mL.
[0196] PIF > 6.
[0197] 2. PIF (facteur de photo-irritation) = CI50(-UV)/CI50 (+UV) [0198] 3. MPE (photo-effet moyen). En comparant les courbes de réaction de concentration amenant une cytotoxicité obtenues dans deux conditions (avec éclairage (+UV) et sans éclairage (-UV)) sur les grilles de concentration, et la plage de concentration d’exposition a été choisie à partir d’une plage de concentration commune du test avec éclairage (+UV) et sans éclairage (-UV). Un logiciel spécial (PHOTO32) a été utilisé pour calculer le photo-effet moyen (MPE).
[0199] [Tableaux 13]
| Échantillon de Test/le témoin | CI50 (pg/mL) | PIE | MPE | Phototoxi-cité | |
| Sans éclairage | Avec éclairage | ||||
| Principe actif | > 1000,0 | > 1000,0 | *1 | 0,01 | — |
| Le témoin positif (chlorhydrate de chlorpromazine) | 17,05 | 0,66 | 21,08 | 0,41 | + |
[0200] Résultats du principe actif dans le test de phototoxicité d’absorption du rouge neutre par 3T3 [0201] Commentaire : *1 : il n’y avait pas de cytotoxicité à la concentration admissible la plus élevée (1000,0 pg/mL) ;
[0202] + : affirmation de la présence de phototoxicité ;
[0203] - : affirmation de l’absence de phototoxicité.
[0204] Les résultats du test de phototoxicité d’absorption du rouge neutre par 3T3 montrent que : les valeurs de CI50 de la solution originale du principe actif dans des conditions avec ou sans éclairage étaient supérieures à 1000,0 pg/mL, et les valeurs de PIL étaient toutes *1, et les valeurs de MPE étaient toutes inférieures à 0,1. Selon les normes d’évaluation de test de phototoxicité du Tableau 13, la solution originale de principe actif ne présente pas de phototoxicité.
[0205] Au vu de ce qui précède, la composition dans l’Exemple 7 présente un taux d’hémolyse de 7%, ne présente aucune irritation liée à l’hémolyse, aucune irritation de la peau et des yeux, aucune phototoxicité et présente une sécurité élevée.
[0206] Les tests de sécurité ci-dessus ont également été réalisés sur les compositions des Exemples 5 et 6, et les résultats étaient similaires à ceux de la composition dans l’Exemple 7. Les compositions des exemples 5 et 6 ne présentent aucune irritation liée à l’hémolyse, aucune irritation de la peau et des yeux, aucune phototoxicité et présentent une sécurité élevée.
Claims (1)
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Revendications [Revendication 1] Composition hydratante, qui est constituée de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl, et le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d’ Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl est égal à (1—4) : (1-4) : (1~4) : (1—4). [Revendication 2] Composition selon la revendication 1, dans laquelle le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl est égal à 4 : 3 • 4 · T [Revendication 3] . H- . J. Composition selon la revendication 1, dans laquelle le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn. f.) Ker-Gawl est égal à 3 : 4 • T · 4 [Revendication 4] . J . H-. Composition selon la revendication 1, dans laquelle le rapport massique de Dendrobium officinale, de Tremella fuciformis, de Dictyophora indusiata et d'Ophiopogon japonicas (Linn.f) Ker-Gawl est égal à 1 : 1 •1-1 [Revendication 5] .1.1. Procédé de production de la composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, comprenant la pulvérisation de matières premières et le tamisage ; l’extraction avec de l’eau ; la réalisation d’une filtration de raffinage à chaud et d’une filtration de raffinage à froid successivement ; et la collecte d’une solution d’extrait. [Revendication 6] Procédé selon la revendication 5, dans lequel le tamisage est réalisé par passage à travers un tamis à mailles 100 ; et l’extraction avec de l’eau est réalisée par ajout de l’eau à un rapport matière-liquide de 1 : (75-85), par trempage pendant 0,5 h, et par extraction à une température de 55~65°C pendant 110-130 min. [Revendication 7] Procédé selon la revendication 5, dans lequel la filtration de raffinage à chaud est réalisée en plaçant le papier filtre H60 dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait chaude à 50-60°C pour mouiller le papier filtre complètement, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en [Revendication 8] [Revendication 9] [Revendication 10] [Revendication 11] veillant à ce que le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire ; et la filtration de raffinage à froid est réalisée en plaçant le papier filtre H70 dans un entonnoir de Buchner, en remplissant une solution d’extrait à température ambiante, en appliquant une pression négative en ouvrant une pompe aspirante, de sorte que le papier filtre soit fixé de manière étanche à l’entonnoir tout en veillant à ce que le papier filtre soit mouillé, pour obtenir une solution d’extrait claire.Produit de soins de la peau hydratant, comprenant la composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 et un substrat.Produit de soins de la peau selon la revendication 8, dans lequel la quantité de la composition est de 0,25% en poids.Produit de soins de la peau selon la revendication 8 ou 9, dans lequel le substrat est constitué du glycérol, du 1,2-pentanediol, d’un copolymère acrylate d’hydroxyéthyle/acryloyldiméthyltaurate de sodium, de phénoxyéthanol/éthylhexylglycérol et de l’eau.Procédé pour retenir l’humidité, comprenant l’application de la composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 ou du produit de soins de la peau selon l’une quelconque des revendications 8 à 10 à la surface de la peau.
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