FR3072022A1 - Composition pharmaceutique pour controler helicobacter pylori - Google Patents

Abstract

La présente invention porte sur une composition pharmaceutique comprenant de la metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues pour son utilisation dans le contrôle et/ou l'éradication d'Helicobacter pylori.

Description

COMPOSITION PHARMACEUTIQUE POUR CONTROLER HELICOBACTER PYLORI

DOMAINE TECHNIQUE DE L’INVENTION

La présente invention a trait au domaine médical et concerne plus particulièrement Eutilisation de compositions pharmaceutiques pour contrôler et/ou éradiquer Hélicobacter pylori.

ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE DE L’INVENTION

L’infection par la bactérie Hélicobacter pylori (H. pylori) est l’une des infections bactériennes chroniques les plus répandues dans le monde. Environ 20 à 90 % des individus adultes sont infectés selon les pays, avec une fréquence plus importante dans les pays en voie de développement. L’infection à H. pylori entraîne chez les patients infectés l’apparition d’une gastrite chronique, correspondant à une inflammation gastrique, qui reste asymptomatique dans la majorité des cas. Cette gastrite chronique peut cependant évoluer vers un ulcère gastrique ou duodénal, vers un adénocarcinome ou un lymphome gastrique du MALT.

Afin d’éradiquer cette bactérie, différents traitements sont aujourd’hui disponibles sur le marché. Ces traitements conventionnels sont basés sur la combinaison de deux ou trois antibiotiques en association avec un inhibiteur de la pompe à protons.

Par exemple, dans le cas où H. pylori est sensible à la clarithromycine, une trithérapie de quatorze jours associant 1 g d’amoxicilline 2 fois par jour, 500 mg de clarithromycine 2 fois par jour, et 20 mg de rabéprazole ou 40 mg d’ésoméprazole 2 fois par jour, peut être prescrite au patient infecté par H. pylori. En cas de résistance à la clarithromycine, cet antibiotique peut être remplacé par une prise de 500 mg de lévofloxacine 2 fois par jour. En cas de résistance à la fois à clarithromycine et à la lévofloxacine, ces antibiotiques peuvent être remplacés par une prise de 500 mg de métronidazole 2 fois par jour. La durée de ces trithérapies est de 10 ou 14 jours en fonction des protocoles thérapeutiques choisis et sont relativement contraignantes pour le patient au vu du grand nombre de comprimés à prendre. En outre, les phénomènes de résistance d’H. pylori vis-à-vis de ces antibiotiques conduisent à un échec thérapeutique dans 30 % des cas.

Pour lutter contre ces problèmes, de nouveaux schémas thérapeutiques de traitement ont été développés tels qu’une quadrithérapie comprenant la prise d’un médicament associant de la tétracycline, du métronidazole, et du citrate de bismuth, récemment commercialisé sous le nom de Pylera®, en combinaison avec une prise d’oméprazole. Toutefois, l’inconvénient majeur de ce médicament pour les patients repose sur le grand nombre de comprimés ou gélules à avaler chaque jour (douze comprimés par jour). En outre, des échecs thérapeutiques d’éradication d’H. pylori sont actuellement observés dans environ 10 % des cas.

Ainsi, les différents traitements utilisés jusqu’à présent pour éradiquer H. pylori ne garantissent pas systématiquement un succès thérapeutique. Ce pourcentage d’échec varie en fonction des pays et est estimé à 30% en France, ce qui est relativement important pour le traitement d’une infection bactérienne. En outre, ces traitements sont très contraignants pour le patient car ils nécessitent la prise orale de nombreux comprimés ou gélules par jour car une association d’au moins deux antibiotiques et d’un inhibiteur de la pompe à protons est nécessaire.

H existe donc aujourd’hui un réel besoin de développer de nouveaux protocoles thérapeutiques efficaces pour éradiquer une infection liée à H. pylori, tout en étant les moins contraignants possible pour le patient.

RESUME DE L’INVENTION

Devant cette problématique, les inventeurs ont découvert de manière surprenante que la metformine, couramment utilisée actuellement dans le traitement du diabète, pouvait éradiquer de manière efficace la bactérie H. pylori. Contrairement aux traitements conventionnels décrits ci-dessus qui nécessitent la prise de plusieurs antibiotiques en association avec la prise d’un inhibiteur de la pompe à proton, un traitement à base de metformine pourrait présenter l’avantage non négligeable de réduire fortement le nombre de prises, et donc de rendre le traitement beaucoup moins contraignant pour le sujet infecté.

Ainsi, la présente invention concerne une nouvelle application thérapeutique de la metformine, et plus précisément rutilisation de la metformine pour contrôler et/ou éradiquer Hélicobacter pylori.

L’objet de la présente invention porte donc sur une composition pharmaceutique comprenant de la metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues pour son utilisation dans le contrôle et/ou l’éradication & Hélicobacter pylori.

Dans un mode particulier, la composition pharmaceutique selon l’invention est destinée à être administrée par voie orale ou par voie parentérale, de préférence par voie orale. Plus particulièrement, la composition pharmaceutique selon l’invention comprend en outre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable, de préférence choisi parmi un agent humectant, un agent liant, un agent lubrifiant, un agent de remplissage, un désintégrant, et/ou un antioxydant. De manière encore plus particulière, la composition pharmaceutique selon l’invention est formulée sous forme d’un comprimé, d’une poudre, d’une gélule, ou d’une pâte.

Un autre objet de l’invention concerne aussi la composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d’une maladie induite par Hélicobacter pylori.

LEGENDE DES FIGURES

Figure IA : Photographies des puits de culture d’H. pylori en milieu liquide après 24 heures de traitements (Liquide A : contrôle ; Liquide B : Metformine à 10 mM ; Liquide C : Pénicilline/Streptomycine (P/S) à 100 U/mL).

Figure IB : Ensemencement de 200 pL de chaque liquide A, B, et C sur des géloses adaptées à la pousse d’H. pylori.

Figure 2 : Courbes de survies dans le temps d’H. pylori SS1 (Figure 2A) et d’H. pylori 7.13 (Figure 2B) sans traitement (Contrôle) et avec un traitement à la metformine à 2 mM, 5 mM, et 10 mM.

Figure 3 : Co-culture in vitro de lignées cellulaires de cancer gastrique AGS et de la bactérie H. pylori 7.13 en absence ou en présence de metformine à 10 mM.

Figure 4A : Protocole du test in vivo chez des souris C57BL/6 femelles gavées avec une suspension d’H. pylori SS 1/B47, puis traitées avec de la metformine par voie orale à une dose de 10 mg/jour/souris ou avec un tampon phosphate salin (PBS).

Figure 4B : Quantification du nombre de bactéries H. pylori SS 1/B47 dans l’estomac des souris C57BL/6 femelles utilisées dans le protocole du test in vivo de la Figure 4A.

Figure 4C : Marquage immunohistochimique d’H. pylori SS1/B47 sur des coupes d’estomacs de souris C57BL/6 infectées et traitées ou non avec la metformine.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L’INVENTION

La metformine est un antidiabétique oral de la famille des biguanides normoglycémiants répondant à la formule suivante :

La metformine a donc pour effet de stabiliser la glycémie dans le sang et est classiquement utilisée dans le traitement de diabète de type 2.

De manière inattendue et telle que démontrée dans les exemples, les inventeurs ont mis en avant un effet thérapeutique supplémentaire de la metformine, et plus particulièrement, ses propriétés antibiotiques vis-à-vis de la bactérie Hélicobacter pylori.

La présente invention fournit donc une composition pharmaceutique comprenant de la metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues pour son utilisation dans le contrôle et/ou l’éradication d'Helicobacler pylori.

De façon plus générale, la présente invention fournit une composition pharmaceutique comprenant un biguanide, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues pour son utilisation dans le contrôle et/ou l’éradication d'Helicobacterpylori. Par exemple, le biguanide est choisi parmi la phenformine, la metformine, la buformine et le proguanil. De préférence, le biguanide est la phenformine ou la metformine.

La présente invention porte également sur une méthode pour contrôler et/ou éradiquer Hélicobacter pylori chez un sujet infecté par Hélicobacter pylori, comprenant l’administration d’une quantité ou d’une dose efficace de metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues chez ce sujet.

La présente invention porte aussi sur l’utilisation de la metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues pour fabriquer une composition pharmaceutique pour contrôler Hélicobacter pylori.

Dans le contexte de la présente invention, les expressions « contrôler Hélicobacter pylori » et le « contrôle à'Helicobacler pylori » incluent sans limitation la réduction, l’élimination, l’éradication, ou le fait de tuer la bactérie H. pylori. Le contrôle d’H. pylori comprend également la prévention et/ou le traitement d’H. pylori chez un sujet infecté. Il comprend aussi le traitement d’une infection à H. pylori. Selon un autre mode de réalisation particulier, il comprend la réduction d’une prolifération d’H. pylori ou l’arrêt de la croissance d’H. pylori chez un sujet infecté.

Tel qu’utilisé ici, « Hélicobacterpylori » est un terme générique de la bactérie et englobe notamment toutes les souches issues de cette bactérie. Des souches d'H. pylori sont par exemple H. pylori 7.13 et H. pylori SS1, ainsi que toute autre souche d’H. pylori isolée de patients ou de sujets.

Un « sujet » au sens de la présente invention correspond à n’importe quel organisme susceptible d’être infecté par H. pylori. Dans un mode préféré, le sujet est un mammifère, de préférence un être humain.

La metformine utilisée dans la présente invention comprend également ses sels pharmaceutiquement acceptables. L’expression sel(s) pharmaceutiquement acceptable(s) désigne les sels de la metformine qui possèdent l'activité biologique souhaitée. Les sels pharmaceutiquement acceptables comprennent des sels de groupes acides ou basiques présents dans le composé spécifié. Les sels d'addition acide pharmaceutiquement acceptables comprennent, mais ne sont pas limités à, des sels de chlorhydrate, bromhydrate, iodhydrate, nitrate, sulfate, bisulfate, phosphate, phosphate acide, isonicotinate, acétate, lactate, salicylate, citrate, tartrate, pantothénate, bitartrate, ascorbate, succinate, maléate, gentisinate, fumarate, gluconate, glucaronate, saccharate, formate, benzoate, glutamate, méthanesulfonate, éthanesulfonate, benzènesulfonate, ptoluènesulfonate, embonate et le pamoate (c'est-à-dire, 1,1'- méthylène-bis-(2-hydroxy3-naphtoate)). Des sels de base adaptés comprennent, mais ne sont pas limités à, des sels d'aluminium, calcium, lithium, magnésium, potassium, sodium, zinc, et diéthanolamine. Une liste de sels pharmaceutiquement acceptables est notamment publiée dans la revue de Berge et al. (J. Pharm. Sci. 1977, 66(1), 1-19). Un sel pharmaceutiquement acceptable de la metformine préféré est le chlorhydrate de metformine ou l’embonate de metformine, le chlorhydrate de metformine étant hautement préféré.

Par « prodrogue », on entend un composé qui, après administration, est métabolisé dans le corps en un composé pharmaceutiquement actif. Dans la présente invention, il s’agit d’une prodrogue de biguanide. En particulier, il s’agit d’une prodrogue de metformine. Des exemples de prodrogues de metformine sont par exemple décrits dans Huttunen et al. J. Med. Chem. 2009 52(14), p.4142-4148, dans Markowicz-Piasecka et al. Eur. J. Pharmacol. 2017, 811, p.208-221, dans Markowicz-Piasecka et al. Oxidative Medicine and Cellular Longevity 2017, ID7303096 ou dans la demande WO 2010/100337.

Par « quantité efficace », on entend une quantité de metformine capable d’obtenir un contrôle suffisant d’/7. pylori tel que défini ci-dessus. Par exemple, un contrôle suffisant d'H. pylori est obtenu quand au moins 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, et de préférence 100 %, c’est-à-dire la totalité des bactéries H. pylori sont contrôlées ou, plus spécifiquement, éradiquées chez un sujet infecté. L’homme du métier est capable d’adapter cette quantité en fonction de la sévérité de l’infection et du sujet à traiter. Par exemple, une quantité efficace de metformine est comprise entre 0,01 et 10000 mg, entre 0,01 et 3000 mg, entre 10 et 2000 mg, entre 50 et 1500 mg, entre 50 et 1000 mg, entre 100 et 1000 mg. De préférence, une quantité efficace de metformine est de 500, 700, 850, ou 1000 mg. Cette quantité efficace peut être prise par le sujet une seule fois ou de manière occasionnelle telle qu’une fois par semaine, deux fois par semaine ou trois fois par semaine, ou de façon plus fréquente telle qu’une ou plusieurs fois par jour, par exemple deux ou trois fois par jour. De préférence, cette quantité est prise quotidiennement, c’est-à-dire une fois par jour, par le sujet infecté.

Ainsi, selon un mode préféré, la metformine comprise dans la composition pharmaceutique de l’invention est destinée à être administrée chez un sujet à une dose comprise entre 0,01 et 10000 mg par jour, de préférence entre 0,01 et 3000 mg par jour, entre 10 et 2000 mg par jour, entre 50 et 1000 mg par jour, entre 100 et 1000 mg par jour, et de manière encore plus préférée à une dose de 500, 700, 850, ou 1000 mg par jour. Selon un autre mode préféré, la metformine comprise dans la composition pharmaceutique de l’invention est destinée à être administrée chez un sujet à une dose comprise entre 0,01 et 50 mg/kg/jour, de préférence entre 1 et 30 mg mg/kg/jour, entre 1 et 20 mg/kg/jour, entre 5 et 20 mg/kg/jour, et de manière encore plus préférée à une dose d’environ 10, 15 ou 20 mg/kg/jour.

L’homme du métier est également capable d’adapter la durée du traitement en fonction de la sévérité de l’infection à H. pylori. Par exemple, le traitement peut être pris par le sujet pendant au moins 1, 2, 5 jours, une semaine, 10 jours, 14 jours ou deux semaines, 15 jours, un mois ou 30 jours, deux mois, une année ou 365 jours, ou pendant une période suffisante pour éradiquer ou contrôler la totalité des bactéries chez le sujet infecté.

Ainsi, selon un mode préféré, la metformine comprise dans la composition pharmaceutique de l’invention est destinée à être administrée chez un sujet pendant au moins 15 jours, de préférence pendant au moins 365 jours.

La composition pharmaceutique utilisée selon la présente invention peut être administrée par tout type de voies connues de l’homme du métier. On peut citer par exemple la voie orale ou la voie parentérale. La voie parentérale désigne toute sorte de voie d’administration d’un médicament par injection, à l’exception de la voie entérale. La voie parentérale englobe donc une injection par intraveineuse, une injection sous-cutanée, une injection intradermique, et une injection intramusculaire.

Ainsi, selon un mode particulier, la composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande est destinée à être administrée par voie orale ou par voie parentérale, de préférence par voie orale.

La composition pharmaceutique utilisée selon l’invention peut comprendre en outre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Par « excipient pharmaceutiquement acceptable », on entend tout excipient permettant de formuler la composition pharmaceutique de l’invention sous la forme galénique souhaitée sans induire d’effets néfastes pour le sujet.

L’homme du métier est capable de choisir la nature et la proportion des excipients pharmaceutiquement acceptables en fonction de la formulation adaptée à la voie d’administration envisagée. Par exemple, dans le cas d’une administration par voie orale, on peut citer comme excipients pharmaceutiquement acceptables, sans limitation, les agents humectants, les agents liants, les agents lubrifiants, les agents de remplissage, les désintégrants et les antioxydants.

Des agents humectants sont, par exemple, le propylène glycol, la glycérine, le sorbitol, et le polyéthylène glycol. Des agents liants sont, par exemple, l’alcool polyvinylique, la polyvinylpyrrolidone, les copolymères de vinylpyrrolidone et d’acétate de vinyle, la maltodextrine, la carboxymethylcellulose, l’acide alginique, les gommes telles que la gomme arabique, la gomme d’acacia, la gomme de xanthane, la gomme de guar, les carraghénanes, la gélatine, l’amidon, l’amidon prégélatinisé, l’hydroxypropyl cellulose, la cellulose microcristalline. Des agents lubrifiants sont notamment le polyéthylène glycol, le stéarate de magnésium ou de calcium, l’acide stéarique, l’huile végétale, le stéaryle fumarate de sodium, le talc, et la silice. Des agents de remplissage sont notamment la maltodextrine, la cyclodextrine, le lactose, le talc, la silice, les silicates, les phosphates, la cellulose, la croscarmellose, et les polysaccharides. Des désintégrants sont, par exemple, la croscarmellose, la crospovidone, l’hydroxypropyl cellulose, et l’amidon. Des exemples d’antioxydants sont notamment l’acide ascorbique, les métabisulfites de sodium et de potassium, le bisulphite de sodium, le butylhydroxyanisole, le butylhydroxytoluène, et l’acide gallique. Il est bien entendu que les listes de ces différents excipients adaptés à une formulation pour une administration orale ne sont pas exhaustives et l’homme du métier peut aisément les compléter à l’aide de ses connaissances générales. De plus, il est connu de l’homme de métier que certains excipients peuvent avoir différentes fonctions, tels que par exemple, le polyéthylène glycol qui peut être à la fois un agent humectant ou un agent lubrifiant, et l’amidon qui peut être un agent liant ou un agent désintégrant.

Ainsi, selon un mode particulier, la composition pharmaceutique utilisée selon l’invention comprend au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable choisi parmi un agent humectant, un agent liant, un agent lubrifiant, un agent de remplissage, un désintégrant, et/ou un antioxydant.

Une composition pharmaceutique préférée selon l’invention comprend entre 100 et 1000 mg, de préférence 500, 700, 850, ou 1000 mg de metformine, d’un de sels pharmaceutiquement acceptables ou d’une de ses prodrogues et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable tel que décrit ci-dessus.

Particulièrement, la composition pharmaceutique est formulée sous une forme adaptée à une administration par voie orale, et est préférentiellement un comprimé, une poudre, une gélule, ou une pâte.

Selon un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande peut être utilisée en association avec d’autres traitements comprenant notamment un ou plusieurs antibiotiques couramment utilisés pour contrôler et éradiquer H. pylori. Comme antibiotiques efficaces pour éradiquer H. pylori, on peut citer notamment l’amoxicilline, la clarithromycine, la lévofloxacine, le métronidazole, la tétracycline, la rifampicine, les sels de Bismuth ou tout antibiotique connu de l’homme du métier pour son action efficace dans le contrôle ou l’éradication d’H. pylori.

Ainsi, un objet de l’invention concerne un kit comprenant (a) une composition pharmaceutique comprenant de la metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues telle que décrite dans la présente demande et (b) une composition comprenant au moins un autre antibiotique pour une utilisation simultanée ou séquentielle dans le contrôle ou l’éradication d’H. pylori.

Par utilisation « séquentielle », on entend une utilisation séparée dans le temps de la metformine et d’au moins un antibiotique. Ainsi, la metformine et le au moins un autre antibiotique peuvent être administrés successivement chez le sujet, et inversement, notamment au bout de quelques secondes, quelques minutes, quelques heures, dans la même journée, ou un jour sur deux. Par utilisation « simultanée », on entend une utilisation de la metformine et d’au moins un autre antibiotique au même moment. Ainsi, la metformine et le au moins un autre antibiotique sont administrés dans le même intervalle de temps chez le sujet.

Au vu des propriétés antibiotiques de la metformine vis-à-vis de la bactérie H. pylori, la composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande peut aussi être utilisée dans la prévention et/ou le traitement d’une maladie induite par Hélicobacter pylori.

Un objet de l’invention concerne donc une composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d’une maladie induite par Hélicobacter pylori.

Un autre objet de l’invention concerne également une méthode pour prévenir et/ou traiter une maladie induite par Hélicobacter pylori, comprenant l’administration d’une quantité ou d’une dose efficace de metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues chez un sujet infecté par Hélicobacter pylori.

En effet, la metformine permet de contrôler la prolifération d’H. pylori ou d’éradiquer cette bactérie chez un sujet infecté, et permet donc de protéger ce sujet des maladies qui pourraient résulter de la prolifération de cette bactérie. Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, la prévention ou le traitement préventif mettant en œuvre la composition pharmaceutique permet d’éviter le déclenchement, l’apparition ou le développement d’une maladie induite par H. pylori chez un sujet infecté.

Selon un autre mode de réalisation, la composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande peut aussi être utilisée dans le traitement d’une maladie induite par Hélicobacter pylori. Dans ce mode de réalisation, la composition pharmaceutique est notamment utilisée à un stade précoce ou à un stade avancé de la maladie et permet ainsi de retarder ou guérir une maladie induite par H. pylori en contrôlant et/ou en éradiquant la bactérie responsable de la maladie.

Des exemples de maladies induites par Hélicobacter pylori sont notamment les ulcères, ou les gastrites, voire même les cancers qui peuvent survenir à des stades plus avancés d’une infection par H. pylori. Les ulcères incluent notamment un ulcère gastrique et un ulcère duodénal. Les gastrites peuvent être de nature chronique ou atrophique. Comme exemples de cancers, on peut citer le cancer gastrique incluant notamment Γ adénocarcinome gastrique et le lymphome gastrique du MALT, et le cancer de l’estomac.

Ainsi, un objet de la présente invention est une composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d’une maladie induite par Hélicobacter pylori choisie parmi un ulcère, de préférence un ulcère gastro-duodénal, ou une gastrite chronique ou atrophique.

Un autre objet de la présente invention est une composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d’un cancer induit par Hélicobacter pylori, en particulier un cancer gastrique, et notamment un adénocarcinome gastrique ou un lymphome gastrique du MALT. Selon un mode préféré, la composition pharmaceutique peut être aussi utilisée pour bloquer le changement phénotypique épithélial de cellules cancéreuses, en particulier de cellules cancéreuses gastriques, et éviter ainsi l’apparition d’un phénotype mésenchymateux (« hummingbird »). L’invention concerne donc également une méthode pour maintenir le phénotype épithélial et/ou éviter l’apparition du phénotype mésenchymateux de cellules cancéreuses chez un sujet souffrant d’un cancer, de préférence un cancer gastrique, comprenant l’administration d’une quantité efficace d’une composition pharmaceutique telle que décrite dans la présente demande chez ledit sujet.

Un autre objet de la présente invention porte également sur une méthode pour prévenir et/ou traiter une maladie induite par Hélicobacter pylori chez un sujet infecté comprenant :

- une étape de détection de la présence d’H. pylori par toute méthode adaptée et connue de l’homme du métier, et

- une étape d’administration d’une quantité ou d’une dose efficace de metformine, d’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou d’une de ses prodrogues chez ledit sujet.

Un autre objet de la présente invention porte aussi sur un kit comprenant une quantité ou une dose efficace de metformine, d’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou d’une de ses prodrogues, et une fiche d’instructions pour contrôler Hélicobacter pylori ou pour prévenir et/ou traiter une maladie induite par Hélicobacter pylori. Dans un mode particulier, le kit comprend en outre des moyens de détection de la présence d’H. Pylori.

Dans un autre mode de réalisation de l’invention, la composition pharmaceutique est utilisée en combinaison avec un traitement efficace pour traiter une maladie induite par H. pylori. Par exemple, la composition pharmaceutique peut être utilisée avec n’importe quel traitement efficace pour traiter un cancer, en particulier un cancer gastrique.

D’autres aspects et avantages de l’invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.

EXEMPLES

Exemple 1 : Tests In vitro en milieu liquide

H. pylori a été mis en culture dans trois milieux liquides A, B, et C. A correspond au milieu liquide témoin ou contrôle. Une solution de 10 mM de metformine a été ajoutée dans le milieu liquide B et une solution de 100 U/mL de pénicilline/streptomycine (P/S) a été ajoutée dans le milieu liquide C.

Après 24 heures de traitement, il a été observé un grand nombre de bactéries vivantes qui forment des amas en se regroupant, pour le milieu liquide témoin A (Figure IA). Dans les milieux liquides traités respectivement avec la metformine (milieu liquide B) et P/S (milieu liquide C), les bactéries étaient mortes, non mobiles, et il n’y avait plus d’amas de bactérie (Figure IA).

200 pL de chaque milieu liquide A, B, et C ont été ensemencés sur des géloses adaptées à la pousse d’H. pylori.

Après 24 heures en microaérobie, il a été observé que la bactérie ne poussait pas en présence de metformine ou de P/S (Figure IB, géloses B et C), confirmant la mort d’/7. pylori par rapport à la condition contrôle pour laquelle un tapis bactérien s’était développé (Figure IB, gélose A).

Des antibiogrammes ont également été réalisés sur 2 souches de référence d’/7. pylori, 1 souche de référence H. felis, et sur 5 souches d’H. pylori issues de patients selon le protocole du CNRCH (Centre National de Référence des Campylobacters et Helicobacters). La valeur des diamètres d’inhibition autour d’un disque imprégné de metformine à 0,1 M, 0,5M, ou 1,0 M a été mesurée et est reportée dans le tableau 1 ciaprès.

Tableau 1 :

	Diamèl	.res d’inhibitions
Bactérie	0,1 M	0,5 M	IM
H. pylori 7.13 WT (3 McF)	0	11	21
H. pylori SS 1 WT (3 McF)	0	10	13
H. pylori patient 4195 (3 McF)	14	20	28
H. pylori patient 4196 (3 McF)	0	18	28
H. pylori patient 4197 (3 McF)	0	17	24
H. pylori patient 4198 (3 McF)	0	15	30
H. pylori patient 4199 (3 McF)	0	24	44
H.felisCSl (3 McF)	0	14	24

Les résultats du tableau 1 montrent un effet antibiotique de la metformine pour chacune des souches qui augmente avec la concentration de metformine.

Des courbes de survie en milieu liquide ont aussi été réalisées avec les souches H. pylori SS1 et H. pylori 7.13 (Figures 2A et 2B). Les bactéries ont été cultivées en milieu liquide (Brucella) en présence de différentes concentrations de metformine (0 (contrôle), 2 mM, 5 mM, et 10 mM). Après 0, 5, 10, et 24 heures, un aliquot de 100 pL a été prélevé. Des dilutions successives de cet aliquot et un ensemencement de ces dilutions sur des géloses adaptées à la pousse d’H. pylori ont permis de quantifier le nombre de bactéries vivantes.

Les résultats de la figure 2A montrent une prolifération importante d’H. pylori SS1 au cours du temps sans traitement avec la metformine. Une concentration de 2 mM de metformine maintient le nombre de bactéries vivantes H. pylori SS1 au cours du temps. Une concentration de 5 et 10 mM de metformine diminue le nombre de bactéries vivantes H. pylori SS1 au cours du temps.

Les résultats de la figure 2B montrent une légère augmentation des bactéries vivantes H. pylori 7.13 dans la condition sans metformine et, au contraire, une diminution du nombre de bactéries vivantes dès 2 mM de metformine, et cette diminution est accrue avec un traitement à la metformine à 5 mM, et 10 mM.

Les inventeurs ont ainsi démontré un effet antibiotique de la metformine vis-à-vis d'Helicobacler pylori qui est notamment comparable à celui des antibiotiques pénicilline/streptomycine.

Exemple 2 : Tests In vitro sur des cellules épithéliales gastriques

Des lignées cellulaires épithéliales gastriques ont été infectées par la bactérie H. pylori 7.13 et ont été mis en culture pendant 24 heures avec ou sans la présence de metformine à une concentration de 10 mM dans le milieu.

Au bout de 24 heures, les phénotypes de ces cellules épithéliales gastriques ont été analysés (Figure 3). Il en ressort qu’en absence de metformine, les cellules ont acquis un phénotype allongé mésenchymateux ou « hummingbird ». Au contraire, en présence de metformine dans le milieu à une concentration de 10 mM, les cellules présentent un phénotype normal épithélial avec la présence de bactéries mortes (indiquées par des flèches).

Les inventeurs ont ainsi démontré que la metformine permettait de bloquer le changement phénotypique induit par la bactérie (effet « hummingbird ») sur des cellules épithéliales de cancer gastrique, c’est-à-dire de maintenir ou conserver le phénotype épithélial des cellules cancéreuses, et de réduire considérablement le nombre de bactéries vivantes.

Exemple 3 : Tests In vivo

Pour confirmer les tests In vitro, les inventeurs ont réalisés un test In vivo selon le protocole illustré à la figure 4A. Des souris C57BL/6 femelles de 5 semaines ont été infectées par gavage avec une suspension d’//. pylori SS1/B47 pendant trois jours consécutifs. Ensuite, la moitié de ces souris ont été traitées avec de la metformine par voie orale à une dose de 10 mg/jour/souris et l’autre moitié des souris ont été traitées avec un tampon phosphate salin (PBS, placebo). Après 10 jours de traitement, l’estomac a été récupéré puis la moitié a été broyée pour extraire les bactéries. Des dilutions successives de ces broyats ont été ensemencées sur des géloses adaptées à la pousse d’H. pylori afin de quantifier le nombre de bactéries vivantes présentes dans les estomacs. Le nombre de bactéries a été normalisé par rapport au poids de la portion d’estomac de souris prélevée et broyée. Ainsi la quantification du nombre de bactéries, exprimé en nombre de bactéries par mg d’estomac, est comparable entre chaque souris.

Les résultats de la figure 4B montrent que les souris traitées avec la metformine ont significativement moins de bactéries vivantes que les souris non-traitées du groupe contrôle.

La deuxième moitié de l’estomac a été incluse en paraffine, et des marquages immunohistochimiques anti-/7. pylori ont été réalisés sur des coupes de ces estomacs. La figure 4C montre que la quantité de bactéries H. pylori dans les glandes gastriques est diminuée lorsque les souris ont été traitées avec la metformine, par rapport aux souris traitées avec le PB S (« Contrôle »).

En conclusion de ces différents exemples, les inventeurs ont démontré l’efficacité antibiotique de la metformine vis-à-vis d’H. pylori, qui est notamment comparable aux traitements conventionnels basés sur plusieurs molécules antibiotiques. Ainsi, un traitement efficace à base de metformine, ou d’un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues, pour contrôler H. pylori présenterait l’avantage considérable d’être moins contraignant pour le sujet infecté en réduisant le nombre de prise(s) journalière(s) par rapport aux traitements existants. De plus, sur les deux souches de référence d’H. pylori et sur les cinq souches d’H. pylori isolées de patients, aucun phénomène de résistance n’a été détecté.

Claims (7)

1. REVENDICATIONS

   1. Composition pharmaceutique comprenant de la metformine, un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou une de ses prodrogues pour son utilisation dans le contrôle et/ou l’éradication àHélicobacterpylori.
2. 2. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 1, dans laquelle la composition comprend en outre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
3. 3. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 2, dans laquelle ledit au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable est choisi parmi un agent humectant, un agent liant, un agent lubrifiant, un agent de remplissage, un désintégrant, et/ou un antioxydant.
4. 4. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle la composition est formulée sous forme d’un comprimé, d’une poudre, d’une gélule, ou d’une pâte.
5. 5. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans la prévention et/ou le traitement d’une maladie induite par Hélicobacter pylori.
6. 6. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 5, dans laquelle la maladie induite par Hélicobacter pylori est choisie parmi un ulcère, de préférence un ulcère gastro-duodénal, une gastrite chronique ou atrophique.
7. 7. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 5, dans laquelle la maladie induite par Hélicobacter pylori est un cancer, de préférence un cancer gastrique, et encore plus préférentiellement un adénocarcinome, gastrique ou un lymphome gastrique du MALT.