FR3059549B1 - COSMETIC USE OF AN EXTRACT FROM ULEX EUROPAEUS. - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Ulex europaeus pour protéger la peau des effets délétères des UV. L'invention concerne également l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Ulex europaeus dans une composition cosmétique protégeant la peau des effets délétères des UV.The invention relates to the cosmetic use of an extract of Ulex europaeus to protect the skin from the deleterious effects of UV. The invention also relates to the cosmetic use of an extract of Ulex europaeus in a cosmetic composition protecting the skin from the deleterious effects of UV.
Description
UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT D' ULEX EUROPAEUS. L'invention concerne l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Ulex europaeus pour protéger la peau des effets délétères des UV.
La peau, encore appelée tégument (du latin tegumentum, couverture), est l'organe le plus lourd et le plus étendu de l'organisme. Chez l'homme adulte, sa surface 2 représente 2 m pour une masse d'environ 4 kg. Son épaisseur varie de 0,05 mm au niveau des paupières à 4 mm au niveau de la paume des mains et de la plante des pieds. Cependant, la peau n'est pas une simple enveloppe corporelle ; elle assure en effet de multiples fonctions : fonction de protection vis-à-vis des agressions extérieures (stress mécaniques, chimiques, thermiques et infectieux), de conservation des fluides, de thermorégulation, d'échanges, fonction métabolique (synthèse de vitamine D, de lipides) et fonction sensorielle (toucher, douleur). L'ensemble de ces fonctions est assuré par une structure complexe, associant des éléments tissulaires variés (épithéliaux, conjonctifs, vasculaires et nerveux), organisés en trois compartiments distincts qui sont, de la surface vers la profondeur : l'épiderme, le derme et 1'hypoderme.
Les types cellulaires rencontrés dans la peau sont nombreux et ont de multiples fonctions :
La couche cornée se compose de cornéocytes, cellules gorgées de kératine, à forte résistance mécanique et qui sont le stade terminal de différentiation des kératinocytes de l'épiderme sous-jacent. L'épiderme vivant, qui se renouvelle tous les 28 jours, se compose de quatre types cellulaires : les kératinocytes (90 %) qui vont former la très résistante couche cornée, les mélanocytes (3 %), qui jouent un rôle dans la pigmentation et la défense de la peau contre les rayons ultra-violets (UV), les cellules de Merkel, qui agissent en tant que mécanorécepteurs, et les cellules de Langerhans, qui assurent la première ligne de défense immunitaire contre les antigènes de l'environnement.
Le derme est responsable des propriétés biomécaniques de la peau, fermeté et élasticité. Le derme et l'épiderme sont reliés par une zone d'adhérence, la jonction dermo-épidermique (JDE), une interface très complexe qui contrôle le transfert des signaux et des nutriments entre le derme et l'épiderme. Le derme contient le système vasculaire cutané et est irrigué par des vaisseaux sanguins. Dans le derme, on rencontre des fibroblastes qui synthétisent une matrice extracelullaire contenant les collagènes (essentiellement les collagènes de type I et III), les protéoglycannes et l'élastine, des dendrocytes et des cellules du système immunitaire qui peuvent être recrutées si besoin après stress ou dommages dûs aux UV. L'hypoderme agit principalement comme réservoir d'hormones et de facteurs de croissance. Isolant thermique et mécanique, il est composé de cellules mésenchymateuses et d'adipocytes.
Le vieillissement intrinsèque de la peau, ou vieillissement chronologique, est le résultat de changements qui s'opèrent au fil du temps. Ce vieillissement intrinsèque affecte de la même manière la peau et les autres organes. Ces changements sont principalement le résultat d'une accumulation d'espèces réactives de l'oxygène (ROS, de son acronyme anglo-saxon « Reactive Oxygen Species ») ou du raccourcissement des télomères, structures particulières qui se trouvent aux extrémités des chromosomes qui constituent notre patrimoine génétique. D'une manière similaire au vieillissement d'autres systèmes, le vieillissement cutané chronologique est caractérisé par le déclin d'un grand nombre de fonctions de la peau : perte des capacités prolifératives des kératinocytes, diminution de la réparation cutanée, déclin des fonctions sensorielles, réduction du nombre de cellules épidermiques de Langerhans, chute de la fonction immunitaire et diminution des fonctions de protection mécanique de la barrière cutanée.
Le vieillissement extrinsèque s'ajoute au vieillissement intrinsèque. 111 fait intervenir des événements extérieurs, comme la pollution atmosphérique, le tabac, mais surtout principalement les rayonnements UV.
Les rayons UV font augmenter l'expression de métalloprotéinases (MMP), responsables de la dégradation de nombreux composants matriciels. Parmi elles, on trouve la MMP-1, clivant le collagène de type I, la MMP-2 capable de dégrader l'élastine ou la fibrilline aussi bien que le collagène de type VII présent dans la JDE. La MMP-3, quant à elle, a une spécificité de substrat plus large et peut dégrader le collagène de type IV (JDE), la laminine (JDE), les protéoglycannes (derme), la fibrilline (derme) et la fibronectine (derme).
Outre la dégradation des collagènes matriciels, les UV inhibent également la synthèse des collagènes de type I et III : après irradiation de peau humaine, la synthèse de procollagène de type I est significativement diminuée dans les huit heures, puis atteint son niveau maximum de réduction d'approximativement de 70 % dans les 24 heures, avant de retourner à un niveau constitutif trois jours après.
Il existe au moins deux mécanismes expliquant cette diminution de la synthèse collagénique : d'une part l'irradiation de la peau aux UV active AP-1 et NF-kappaB, deux protéines particulières appelées facteurs de transcription qui se fixent à l'ADN (Acide Désoxyribonucléique) et inhibent l'expression du collagène I. D'autre part, cette irradiation inhibe la voie de signalisation du TGF-beta, connu pour augmenter principalement l'expression du collagène I.
La partie du rayonnement solaire qui pénètre notre peau est composée : de rayons visibles (40 % du total) ; d'infrarouges (IR) (50 %) ; et d'ultraviolets pour les 10 % restants, principalement les UV-A et UV-B.
Les UV, bien que minoritaires en pourcentage, sont la fraction du spectre solaire la plus active biologiquement. Les radiations UV-C (100-280 nm) sont arrêtées par la couche d'ozone alors que les UV-B (280-320 nm) sont absorbés par l'épiderme, et que les UV-A (320-400 nm) traversent l'épiderme et sont absorbés par le derme. Les UV-B sont plus énergétiques que les UV-A, mais bien moins représentés que ces derniers dans le spectre lumineux.
Les UV peuvent réagir avec l'ADN, de manière directe en attaquant l'ADN, et/ou de manière indirecte. Quand il y a attaque de l'ADN, il y a atteinte des 4 bases de l'ADN, véritable « alphabet » de l'ADN porteur du message génomique : les bases puriques, Guanine (G) et Adénine (A), et les bases pyrimidiques, Cytosine (C) et Thymine (T). Ces 4 bases de l'ADN sont organisées en double hélice complémentaire où une base purique d'une hélice est associée (via des liaisons faibles dites « hydrogène ») à sa base pyrimidique complémentaire. C'est la lumière UV-B, la plus énergétique, qui est la plus dommageable pour le génome : les photons UV-B sont directement absorbés par l'ADN, dans lequel ils induisent des réactions photochimiques. Les principales cibles en sont les bases pyrimidiques (T et C) qui, si elles sont situées en position adjacente dans la double hélice de l'ADN, réagissent deux à deux pour créer de nouvelles liaisons covalentes. La structure chimique des bases est ainsi fortement altérée puisqu'elles se retrouvent sous forme de photoproduits, classés en deux catégories : les « cyclobutane pyrimidine », ou CPD (avec formation de dimères de pyrimidines, ie dimères de C ou de T) et les photoproduits (appelés photoproduits 6-4), ces appellations faisant référence à la nature des liaisons formées pour créer le dommage. L'ADN n'absorbe en revanche que très peu les UV-A et il a longtemps été pensé que ces rayons UV-A n'intervenaient principalement que dans la production d'espèces réactives de l'oxygène, ses effets sur l'ADN n'étant alors essentiellement qu'indirects. En fait, les UV-A sont également générateurs de photoproduits sur l'ADN, la nature de ces photoproduits induits par les rayonnements UV-A et UV-B étant très différente. En effet, l'exposition aux UV-A ne conduit qu'à la formation de dimères cyclobutane pyrimidine avec une absence totale de photoproduits 6-4.
Ces modifications de l'ADN sont à l'origine de la mort cellulaire, ou à l'inverse de modifications de structures de l'ADN et de mutations qui peuvent déclencher les processus impliqués dans l'apparition de tumeurs.
Les espèces réactives de l'oxygène sont des dérivés oxygénés radicalaires et non radicalaires. En présence de rayonnements, de métaux ou d'enzymes, le dioxygène (02) est capable de capter un électron pour donner le radical superoxyde ·02 , qui est un radical peu stable. Ce radical est le substrat d'enzymes essentielles, les SOD (« SuperOxyde Dismutases ») , qui le transforment en eau oxygénée (H2O2). L'eau oxygénée peut avoir plusieurs destinées : - en présence de métaux, en particulier le + + fer ferreux Fe , elle est transformée en radical hydroxyl •OH par la réaction de Fenton. Ce dernier est très réactif et va oxyder très rapidement les molécules voisines, formant parfois d'autres radicaux libres ; - l'eau oxygénée peut aussi subir des réactions de détoxication catalysées par la catalase, la glutathione peroxydase ou les peroxyrédoxines. De même, plusieurs composés, notamment les vitamines E et C, peuvent interagir avec les radicaux et éviter leur accumulation.
Par ailleurs, le monoxyde d'azote (NO·) est un radical libre aux propriétés physiologiques reconnues qui, lorsqu'il interagit avec 1'anion superoxyde ·02 , donne le peroxynitrite, composé extrêmement réactif et toxique. C'est le déséquilibre entre la formation des ROS et la détoxication des molécules oxydées qui constitue le « stress oxydatif ».
Toutes les macromolécules cellulaires sont potentiellement la cible des ROS : les bases nucléiques sont susceptibles d'être oxydées, en particulier la Guanine (G) conduisant à la formation de 8-oxo-guanine (8-oxo-G), à l'origine de mutations géniques. Ce phénomène explique sans doute la génotoxicité des radicaux libres ; les protéines sont aussi les cibles des ROS, en particulier certains acides aminés (bases structurelles des protéines) comme la cystéine, la méthionine et la tyrosine. Cette oxydation joue un rôle dans la maturation et dans la signalisation mais peut aussi conduire à une toxicité cellulaire, chaque molécule oxydée, instable, devenant à son tour une ROS, et pouvant se stabiliser en oxydant une molécule voisine. Une oxydation plus « franche » des protéines peut conduire en outre à leur carbonylation et à leur dénaturation et donc à une perte de leur fonction (voire à une fonction « toxique » de la protéine) ; - Les ROS réagissent aussi avec les acides gras insaturés, conduisant à la formation d'hydroperoxydes. En particulier, une péroxydation lipidique touche les membranes de toutes les cellules de la peau et forme un composé nommé malondialdéhyde (MDA). Le MDA constitue donc un bon marqueur du stress oxydant sur les lipides.
En conclusion, lors du vieillissement extrinsèque,
-les UV peuvent générer des modifications néfastes de l'ADN ; soit directement, via la formation de dimères de cyclobutane ou de photoproduits, soit indirectement, via les ROS qui peuvent attaquer l'ADN (formation de 8-oxo-G) ou les autres molécules du vivant comme les lipides (formation de MDA), ou les protéines. -Les UV, en activant les MMPs, peuvent en outre dégrader les protéines de la matrice extracellulaire dermique, dont la fibrilline.
La demanderesse a mis en évidence de manière surprenante qu'un extrait d'Ulex europaeus protège la peau des effets délétères des UV.
On entend par effets délétères des UV sur la peau les effets des UV sur l'ADN des cellules cutanées, sur les membranes cellulaires épidermiques ainsi que sur les protéines matricielles. L'extrait d'Ulex europaeus protège la peau des effets délétères des UV, c'est-à-dire qu'il protège l'ADN des cellules cutanées par limitation de la formation de dimères de pyrimidine, il protège les membranes cellulaires épidermiques du stress oxydatif et enfin il protège les protéines matricielles. De ce fait, l'extrait d'Ulex europaeus prévient la perte d'élasticité cutanée due au soleil. On entend par perte d'élasticité cutanée l'atteinte des fibres du derme due aux méfaits des UV se traduisant par un aspect ridé, éventuellement pigmenté, des couches supérieures de l'épiderme.
La présente invention concerne donc l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Ulex europaeus pour protéger la peau des effets délétères des UV, pour protéger les membranes cellulaires épidermiques du stress oxydatif et pour protéger les protéines matricielles. L'invention se rapporte également à l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Ulex europaeus pour prévenir la perte d'élasticité cutanée due au soleil. L'extrait d'Ulex europaeus peut également être avantageusement utilisé dans une composition cosmétique protégeant la peau des effets délétères des UV. L'utilisation selon l'invention est particulièrement adaptée à une application à des peaux saines. Dans le cadre de la présente invention, on désigne par peau saine une peau qui ne présente pas de pathologie cutanée.
Ulex europaeus est un arbuste vivace à feuilles persistantes de 1 à 2 mètres de hauteur appartenant à la famille des Fabacées. Il est de couleur vert cendré et a de nombreuses tiges épaisses et dressées. Ce buisson est épineux avec des épines robustes, très vulnérantes. Les feuilles persistantes sont aciculaires et en général plus courtes que les épines. Les nombreuses fleurs de cette plante sont isolées ou disposées en grappes et font entre 1,5 et 2,5 cm de long. Ces fleurs ont une odeur caractéristique d'huile de noix de coco. Le fruit est une gousse ovale noire, large de 1 à 2 cm. Très velu, il est plus long que le calice persistant et contient de 1 à 7 graines.
Ulex europaeus est une légumineuse arbustive originaire de l'Europe (plutôt centrale et de l'Ouest et en particulier la Bretagne, la Grande-Bretagne et la Galice) . Son aire de répartition en Europe s'est étendue pour inclure des pays en dehors de sa zone d'origine, comme l'Autriche, la Belgique, la République Tchèque, le Danemark, la Suède ou la Norvège. Au cours du siècle dernier, son aire s'est considérablement élargie en Australie, en Nouvelle-Zélande, à Hawaii, au Chili et au Costa Rica, ainsi que le long de la côte du Pacifique et de l'Atlantique, en Amérique du Nord, où elle est considérée comme une espèce invasive. Désormais, Ulex europaeus aurait été introduit sur tous les continents. Sous les latitudes froides ou tempérées, il est présent au niveau de la mer, sous les tropiques entre 1000 et 2500 mètres et au niveau de l'équateur entre 2000 et 3500 mètres.
Le premier usage d'Ulex europaeus découle de ses qualités alimentaires pour le bétail. On le nommait « luzerne des pays pauvres ». On utilise aussi les fleurs d'Ulex europaeus qui ont une odeur caractéristique d'arômes de vanille et de noix de coco en alimentaire. Elles peuvent être mangées crues ou en salade, ou marinées comme les câpres. Elles sont aussi utilisées pour la conception de vin et pour ajouter couleur et goût au whisky irlandais.
Cette plante n'est pas très connue en phytothérapie, et il y a peu de données disponibles sur ses vertus médicales. Il n'y a qu'en Espagne qu'on relate l'usage traditionnel de ses fleurs avant maturité pour leurs vertus cardiotoniques et dépuratives du foie. Des composés ayant une activité antivirale ont été isolés à partir de tiges et feuilles d'Ulex europaeus. De plus, des pectines issues de graines sont utilisées dans des techniques d'agglutination ou de détermination du groupe sanguin.
Les cendres de bois d'Ulex europaeus étaient utilisées pour faire du savon. L'écorce d'Ulex europaeus était utilisée pour fabriquer un colorant vert foncé et les fleurs donnaient, elles, des colorants jaunes et verts. L'utilisation cosmétique selon la présente invention met préférentiellement en œuvre un extrait d'Ulex europaeus ou une composition cosmétique comprenant un tel extrait. L'extrait selon l'invention est un extrait d'Ulex europaeus, préférentiellement un extrait des parties aériennes et plus particulièrement des parties aériennes fleuries. De façon avantageuse, cet extrait est un extrait obtenu par extraction au CO2 supercritique utilisant un cosolvant de triglycérides caprylique/caprique. L'extrait ainsi obtenu est donc contenu dans un co-solvant de triglycérides caprylique/caprique. Il est obtenu selon un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - Récolte des parties aériennes (fleuries) d'Ulex europaeus qui sont mises à sécher. - Broyage dans un broyeur réfrigéré. - Extraction au CO2 supercritique à l'aide du co-solvant Triglycéride Caprique/Caprylique. L'extraction est effectuée à une pression de 170-190 bars, et une température de 50-70°C, la quantité des parties aériennes séchées étant de 35-45%. - Evaporation sous vide à une température de 60-80°C. - Ajustement à 0.3% d'insaponifiables avec le co-solvant de triglycérides caprylique/caprique. L'extrait des parties aériennes fleuries d'Ulex europaeus utilisé selon l'invention est un liquide trouble jaune-vert à vert d'odeur caractéristique. Il présente les caractéristiques analytiques suivantes : - Densité relative à 20°C : 0.94-.96 - Indice de réfraction à 20°C : 1.446-1.452 - Indice d'acide (mg KOH/g): < 10 - Indice de saponification (mg KOH/g):320-350 - Indice de peroxyde (meq Cq/kg): < 10 - Insaponifiables : > 0.2 % - Contenu en eau < 0.2% - Chromatographie couche mince des insaponifiables : présence de stérols.
On entend par utilisation cosmétique l'utilisation d'une composition cosmétique, c'est-à-dire une formulation convenant à une application cutanée, comprenant l'extrait d'Ulex europaeus ainsi que des excipients cosmétiquement acceptables. C'est ainsi que les compositions selon l'invention peuvent comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques tels que, à titre d'exemples et de façon non limitative, des adoucissants, des colorants, des actifs filmogènes, des tensioactifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines comme la vitamine E, des filtres UV, etc. Grâce à ses connaissances en matière de cosmétique, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter aux compositions de l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées.
Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétologie et de la dermatologie sans autre restriction galénique que l'application sur le visage et sur le corps. De façon avantageuse, les compositions selon l'invention se présentent sous la forme d'un gel, d'une crème, d'une lotion, d'un masque, d'une huile, d'un lait, d'un spray, etc.
De préférence, la composition cosmétique selon l'invention comprend de 0,01 à 10% d'un extrait d'Ulex europaeus en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. Avantageusement, la composition comprend de 0,01 à 5% d'un extrait d'Ulex europaeus en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
La demanderesse a démontré que l'extrait d'Ulex europaeus utilisé selon l'invention ainsi que la composition cosmétique le comprenant peuvent être utilisés par application sur la peau pour la protéger des effets délétères des UV.
La présente invention se rapporte encore à un procédé pour protéger la peau des effets délétères des UV comprenant l'administration cutanée d'un extrait d'Ulex europaeus ou d'une composition cosmétique comprenant ledit extrait.
Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation de l'effet d'un extrait d'Ulex europaeus vis-à-vis du stress UVB par analyse des dimères de pyrimidine, sur la protection des membranes cellulaires épidermiques par dosage de MDA et enfin vis-à-vis du stress UVA par analyse de la quantité de fibrilline 1. D'autre part les exemples ci-après concernent des compositions objets de la présente invention.
Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles : - La figure 1 représente le pourcentage de cellules présentant des dimères de pyrimidine après exposition aux UVB selon les différentes conditions. - La figure 2 représente le taux de peroxydation lipidique (dosage du MDA) dans 10 mg d'épiderme exposé aux UVA selon les différentes conditions. - La figure 3 représente 1'immuno-détection de la fibrilline dans des expiants exposés aux UVA selon les différentes conditions.
I.EVALUATION DE L'ACTIVITE D'UN EXTRAIT O'ULEX EUROPAEUS SUR LES EFFETS DELETERES DES UV.
A. MATERIELS ET METHODES
Des échantillons de peau humaine normale (2 donneurs) ont été obtenus à partir d'une plastie abdominale d'unefemme de 55 ans et d'une réduction mammaire d'une femme de 62 ans. Un échantillon de peau a été conservé à JO dans le formol et congelé en OCT (Optimal Cutting Température compound) à -32°C.
Les fragments de peau ont été déposés dans des inserts (1 cm2) eux-mêmes mis en place sur des puits de culture. Du milieu de culture assurant la survie de la peau (DMEM « Dulbecco's Modified Eagle Medium »)a été ajouté dans le fond des puits, le passage du milieu de culture vers le inserts s'effectuant par diffusion lente entre les deux compartiments par l'intermédiaire d'une membrane poreuse (12 pm).
B. REALISATION DU MODELE DE STRESS OXYDATIF
Pour être appliquées sur les échantillons de peau, on réalise 2 formulations cosmétiques basiques contenant l'extrait d'Ulex europaeus à 0.2 et 0.3% dans du 012-15 alkyl benzoate QSP 100%. Une formule placebo est réalisée avec 100% de 012-15 alkyl benzoate.
On applique ces 2 formules quotidiennement, en topique à la concentration de 2 mg/cm2 de J0 à J4. 2 modèles de rayonnement sont réalisés à J4 après la dernière application des topiques: - modèle d'irradiation par une séance d'UVB à 8 J/cm2 afin d'obtenir des altérations de l'ADN des cellules épithéliales ; - modèle d'irradiation par une séance d'UVA à 16 J/cm2 afin d'obtenir des altérations des membranes cellulaires de l'épithélium et des altérations dermiques, notamment au niveau des fibres élastiques. A J5, chaque fragment a été coupé en 3 : - fixation dans le formol et inclusion en paraffine pour l'analyse histologique - congélation à -32°C en OCT pour analyse immuno-histochimique - congélation à -32°C pour dosage des MDA.
C.ANALYSES 1) Analyse histologique
La coloration par 1'hémalun-éosine permet de vérifier l'éventuelle cytotoxicité des 2 formules. 2) Mise en évidence immunohistochimique de l'altération de l'ADN par quantification des dimères de cyclobutane pyrimidine (CPP) L'ADN des cellules de l'épithélium altérées par les UV a été mis en évidence à l'aide d'un anticorps anti-CPD (Abnova, clone KTM53, monoclonal de souris) (à partir de 2 thymines, formation sous UV de dimères de cyclobutane pyrimidine) . Les noyaux cellulaires marqués ont été révélés en fluorescence verte (anticorps secondaire fluorescent marqué FITC (Fluorescein IsoThioCyanate)) . Les coupes sont montées à l'aide du milieu de montage
Vectashield (Vector, H-1300) permettant de contre-colorer l'ADN des noyaux cellulaires en rouge au propidium ionide. L'expression des dimères de pyrimidine n'étant pas présente sur l'ensemble de la peau, le nombre de cellules marquées est compté au niveau de 3 champs positifs au grossissement 40 et rapporté au nombre total de cellules de l'épiderme des-dits champs. Un calcul du pourcentage de cellules comportant des altérations de l'ADN est donc effectué. 3) Mise en évidence biochimique de la peroxydation lipidique des membranes cellulaires
La peroxydation des lipides au niveau des membranes cellulaires génère des composés de type MalonDiAldehyde (MDA) et constitue un marqueur de stress oxydatif. La peroxydation des lipides est dosée à l'aide d'un kit SIGMA, référence MAK085.
Pour cette analyse, 10 mg d'épiderme sont extraits dans 300 μΐ de tampon contenant du BHT (Butylated hydroxytoluen). Après centrifugation, le surnageant d'extraction est utilisé pour doser la fixation de 2 molécules d'acide thiobarbiturique (TBA) sur une molécule de MDA. Le chromogène rose ainsi produit est dosé par sprectrophotométrie à 532 nm.
Une courbe d'étalonnage est réalisée à l'aide d'une solution de MDA standard à 4,17 M. La quantité de MDA est rapportée au poids d'épiderme. Les résultats sont donc exprimés en nM de MDA / mg d'épiderme. 4) Détection immunohistochimique de la fibrilline L'immunodétection est réalisée à l'aide d'une technique d'immunoperoxydase indirecte en 3 couches (kit ABC Peroxydase, Vector Laboratories) et révélée en AEC. L'évaluation est effectuée à l'aide de scores semi-quantitatifs (0 à 4) précisant l'intensité du marquage de la fibrilline 1 au niveau des fibres élastiques.
D.RESULTATS 1) Analyse histologique A 0.3%, l'extrait d'Ulex europaeus n'induit pas d'effet cytotoxique au niveau de la peau. A 0.2% un effet cytotoxique modéré est observé. 2) Mise en évidence immunohistochimique de l'altération de l'ADN par quantification des dimères de cyclobutane pyrimidine (CPP)
Après traitement par les UVB, 21,6% des kératinocytes comportent la présence de dimères de pyrimidine (témoignant de laltération de l'ADN) par rapport au témoin. Le pré-traitement des peaux par 0.3% d'extrait d'Ulex europaeus permet de prévenir les altérations de l'ADN en protégeant les kératinocytes avec seulement 6,6% de CPD dans l'épiderme. La protection obtenue correspond ainsi à une diminution de la formation de dimères de pyrimidine d'environ 53% par rapport au placebo. Le pré-traitement des
peaux par la concentration de 0.2% d'extrait d'Ulex europaeus ne protège pas la peau vis-à-vis des altérations par les UVB. 3) Mise en évidence biochimique de la peroxydation lipidique des membranes cellulaires
L
Le taux de MDA mesuré après application des produits seuls n'est pas différent de celui mesuré au niveau de la peau témoin.
Après traitement par les UVA, une augmentation de la peroxydation des lipides membranaires est observée avec 700,5 nM/mg de MDA en comparaison avec la
peau témoin où le taux est de 343,5 nM/mg (augmentation d'un facteur 2).
Le pré-traitement des peaux avec 0.2% d'extrait d'Ulex europaeus permet de diminuer la péroxydation des lipides avec seulement 203,5 nM/mg de MDA dans l'épiderme. Ce qui correspond à une diminution d'environ 70% par rapport au placebo. Avec 0.3% d'extrait d'Ulex europaeus le résultat n'est pas différent du placebo. 4) Détection immunohistochimique de la fibrilline
Après irradiation par les UVA, une diminution de la quantité de fibrilline-1 est observée dans le derme superficiel avec un score de 2,9 versus 3,8 pour la peau témoin. L'extrait d'Ulex europaeus à 0.2% et 0.3% permet de protéger le tissu élastique avec des scores semi-quantitatifs respectivement de 3,3 à 3,4. Ce qui correspond respectivement à un taux de protection de la fibrilline de 132% et 136% par rapport au placebo.
III.EXEMPLES DE COMPOSITIONS COSMETIQUES
CREME VISAGE PROTECTRICE O, "o ACRYLATES/C10-30 ALKYL ACRYLATE CROSSPOLYMER 0,35 PHENOXYETHANOL............................... 0,40 GLYCERIN..................................... 5,0 0 XANTHAN GUM.................................. 0,2 0 BUTYLOCTYL SALICYLATE........................ 5,00 BUTYL METHOXYDIBENZOYLMETHANE............... 3,00 CETEARYL ALCOHOL & CETEARYL GLUCOSIDE....... 3,00 HOMOSALATE.................................. 9,0 0 DIMETHICONE................................. 3,0 0 02-15 ALKYL BENZOATE....................... 3,00 TOCOPHEROL.................................. 0,0 6 TOCOPHERYL ACETATE.......................... 0,20 BUTYROSPERMUM PARKII (SHEA) BUTTER.......... 5,00 DIMETHICONE/VINYL DIMETHICONE CROSSPOLYMER & SILICA & BUTYLENE GLYCOL.................... 1,00 TROMETHAMINE................................ 0,25 PARFUM...................................... 0,50 ULEX EUROPAEUS EXTRACT...................... 0,3 EAU DEMINERALISEE.......................... Q.S.P 100
LAIT CORPS PROTECTEUR O, "o ACRYLATES/C10-30 ALKYL ACRYLATE CROSSPOLYMER 0,20 CARBOMER.................................... 0,10 02-15 ALKYL BENZOATE........................ 3,00 BUTYLENE GLYCOL.............................. 5,00 DISODIUM EDTA................................ 0,20 POTASSIUM SORBATE............................ 0,10 PHENOXYETHANOL............................... 0,60 TROMETHAMINE................................. 0,40 POTASSIUM CETYL PHOSPHATE.................... 1,00 TOCOPHERYL ACETATE........................... 0,20 VP/EICOSENE COPOLYMER........................ 2,00 ETHYLHEXYL METHOXYCINNAMATE & BHT............ 7,50 OCTOCRYLENE..................................10,00 BUTYL METHOXYDIBENZOYLMETHANE................ 3,00 ETHYLHEXYL SALICYLATE........................ 3,00 DIMETHICONE.................................. 8,00 ALOE BARBADENSIS LEAF JUICE & SODIUM BENZOATE 1,00 DIMETHICONE.................................. 8,00 ULEX EUROPAEUS EXTRACT....................... 0,30 PARFUM...................................... 0,40 EAU DEMINERALISEE........................... Q.S.P 100
BASE DE TEINT PROTECTRICE MINERALE O, "o DISODIUM EDTA............................... 0,10 SODIUM CHLORIDE............................. 1,00 PHENOXYETHANOL.............................. 0,60
AQUA/WATER/EAU & STYRENE/ACRYLATES COPOLYMER & PENTYLENE GLYCOL & AMMONIUM HYDROXIDE..... 12,00 DIMETHICONE & TITANIUM DIOXIDE & POLYGLYCERYL-3
POLYDIMETHYLSILOXYETHYL DIMETHICONE & ALUMINUM HYDROXIDE & STEARIC ACID.................... 20,00 NYLON-12.................................... 3,00 DIMETHICONE & PEG/PPG-18/18 DIMETHICONE..... 3,00 DIMETHICONE................................. 5,00 ISODODECANE................................. 5,0 0 ALCOHOL..................................... 4,0 0 ULEX EUROPAEUS EXTRACT...................... 0,30 PARFUM...................................... 0,4 0 EAU DEMINERALISEE........................... Q.S.P 100
COSMETIC USE OF AN EXTRACT FROM ULEX EUROPAEUS. The invention relates to the cosmetic use of an extract of Ulex europaeus to protect the skin from the deleterious effects of UV.
The skin, also called tegument (from the Latin tegumentum, cover), is the heaviest and most extensive organ of the body. In the adult man, its surface 2 represents 2 m for a mass of about 4 kg. Its thickness varies from 0.05 mm at the level of the eyelids to 4 mm at the level of the palms of the hands and the soles of the feet. However, the skin is not a simple body envelope; it provides multiple functions: protection function against external aggressions (mechanical, chemical, thermal and infectious stresses), fluid conservation, thermoregulation, exchanges, metabolic function (vitamin D synthesis, of lipids) and sensory function (touch, pain). All these functions are provided by a complex structure, associating various tissue elements (epithelial, connective, vascular and nervous), organized into three distinct compartments which are, from the surface to the depth: the epidermis, the dermis and 1'hypoderme.
The cell types encountered in the skin are numerous and have multiple functions:
The stratum corneum consists of corneocytes, cells filled with keratin, with high mechanical resistance and which are the end stage of differentiation of the keratinocytes of the underlying epidermis. The living epidermis, which is renewed every 28 days, consists of four cell types: keratinocytes (90%) that will form the very resistant stratum corneum, melanocytes (3%), which play a role in pigmentation and the defense of the skin against ultraviolet rays (UV), Merkel cells, which act as mechanoreceptors, and Langerhans cells, which provide the first line of immune defense against antigens in the environment.
The dermis is responsible for the biomechanical properties of the skin, firmness and elasticity. The dermis and epidermis are connected by a zone of adhesion, the dermo-epidermal junction (JDE), a very complex interface that controls the transfer of signals and nutrients between the dermis and the epidermis. The dermis contains the cutaneous vascular system and is irrigated by blood vessels. In the dermis, there are fibroblasts that synthesize an extracelullary matrix containing collagens (mainly type I and III collagens), proteoglycans and elastin, dendrocytes and cells of the immune system that can be recruited if necessary after stress or damage due to UV. The hypodermis acts mainly as a reservoir of hormones and growth factors. Thermal and mechanical insulation, it is composed of mesenchymal cells and adipocytes.
The intrinsic aging of the skin, or chronological aging, is the result of changes that take place over time. This intrinsic aging affects the skin and other organs in the same way. These changes are mainly the result of an accumulation of Reactive Oxygen Species (ROS) or telomere shortening, particular structures found at the ends of the chromosomes that make up our genetic heritage. In a similar way to the aging of other systems, chronological skin aging is characterized by the decline of a large number of skin functions: loss of proliferative capacities of keratinocytes, reduction of skin repair, decline of sensory functions, reduction of the number of epidermal cells of Langerhans, fall of the immune function and decrease of the functions of mechanical protection of the cutaneous barrier.
Extrinsic aging adds to intrinsic aging. 111 involves external events, such as air pollution, tobacco, but especially mainly UV radiation.
UV rays increase the expression of metalloproteinases (MMPs), which are responsible for the degradation of many matrix components. Among them are MMP-1, cleaving type I collagen, MMP-2 capable of degrading elastin or fibrillin as well as type VII collagen present in the JDE. MMP-3, on the other hand, has a broader substrate specificity and can degrade Type IV collagen (JDE), laminin (JDE), proteoglycans (dermis), fibrillin (dermis) and fibronectin (dermis). ).
In addition to the degradation of matrix collagens, UV also inhibits the synthesis of type I and III collagens: after irradiation of human skin, procollagen type I synthesis is significantly reduced within eight hours, and then reaches its maximum level of reduction. approximately 70% within 24 hours, before returning to a constitutive level three days later.
There are at least two mechanisms that explain this decrease in collagen synthesis: on the one hand, UV-irradiation of the skin activates AP-1 and NF-kappaB, two particular proteins called transcription factors that bind to DNA ( Deoxyribonucleic acid) and inhibit the expression of collagen I. On the other hand, this irradiation inhibits the TGF-beta signaling pathway, known to increase mainly the expression of collagen I.
The part of the solar radiation that penetrates our skin is composed of: visible rays (40% of the total); infrared (IR) (50%); and ultraviolet for the remaining 10%, mainly UV-A and UV-B.
UV, although a minority in percentage, is the most biologically active fraction of the solar spectrum. UV-C radiation (100-280 nm) is stopped by the ozone layer while UV-B (280-320 nm) is absorbed by the epidermis, and UV-A (320-400 nm) cross the epidermis and are absorbed by the dermis. UV-B is more energetic than UV-A, but much less represented than the latter in the light spectrum.
UV can react with DNA, directly by attacking DNA, and / or indirectly. When there is DNA attack, the four bases of DNA are attacked, a true "alphabet" of DNA carrying the genomic message: the purine bases, Guanine (G) and Adenine (A), and pyrimidine bases, Cytosine (C) and Thymine (T). These 4 bases of DNA are organized in complementary double helix where a purine base of a helix is associated (via weak bonds called "hydrogen") with its complementary pyrimidine base. It is the UV-B light, the most energetic, which is the most damaging for the genome: the UV-B photons are directly absorbed by the DNA, in which they induce photochemical reactions. The main targets are the pyrimidine bases (T and C) which, if they are located adjacent in the double helix of the DNA, react two by two to create new covalent bonds. The chemical structure of the bases is thus strongly altered since they are found in the form of photoproducts, classified in two categories: "cyclobutane pyrimidine", or CPD (with formation of pyrimidine dimers, ie dimers of C or T) and the photoproducts (called photoproducts 6-4), these designations referring to the nature of the bonds formed to create the damage. On the other hand, DNA absorbs very little UV-A and it has long been thought that these UV-A rays mainly intervene only in the production of reactive oxygen species, its effects on DNA. being then essentially only indirect. In fact, UV-A also generate photoproducts on DNA, the nature of these photoproducts induced by UV-A and UV-B radiation being very different. Indeed, exposure to UV-A only leads to the formation of cyclobutane pyrimidine dimers with a total absence of 6-4 photoproducts.
These DNA modifications are at the origin of cell death, or conversely of changes in DNA structures and mutations that can trigger the processes involved in the appearance of tumors.
The reactive oxygen species are oxygen radical derivatives and not radical radicals. In the presence of radiation, metals or enzymes, the oxygen (02) is able to capture an electron to give the radical superoxide · 02, which is an unstable radical. This radical is the substrate of essential enzymes, SOD (Superoxide Dismutases), which transform it into hydrogen peroxide (H2O2). Hydrogen peroxide can have several uses: - in the presence of metals, in particular Fe + ferrous iron, it is converted into a hydroxyl • OH radical by the Fenton reaction. The latter is very reactive and will oxidize very quickly the neighboring molecules, sometimes forming other free radicals; - Oxygenated water can also undergo detoxification reactions catalyzed by catalase, glutathione peroxidase or peroxyredoxins. Similarly, several compounds, including vitamins E and C, can interact with radicals and prevent their accumulation.
In addition, nitric oxide (NO ·) is a free radical with known physiological properties which, when it interacts with the superoxide · 02 anion, gives peroxynitrite, an extremely reactive and toxic compound. It is the imbalance between the formation of the ROS and the detoxification of the oxidized molecules which constitutes the "oxidative stress".
All cellular macromolecules are potentially the target of ROS: the nucleic bases are likely to be oxidized, in particular Guanine (G) leading to the formation of 8-oxo-guanine (8-oxo-G), at the origin of gene mutations. This phenomenon probably explains the genotoxicity of free radicals; proteins are also targets of ROS, especially certain amino acids (structural bases of proteins) such as cysteine, methionine and tyrosine. This oxidation plays a role in maturation and in signaling but can also lead to cellular toxicity, each oxidized molecule, unstable, becoming in turn a ROS, and can stabilize by oxidizing a neighboring molecule. A more "pure" oxidation of the proteins can further lead to their carbonylation and denaturation and thus to a loss of their function (or even to a "toxic" function of the protein); - ROS also react with unsaturated fatty acids, leading to the formation of hydroperoxides. In particular, lipid peroxidation affects the membranes of all skin cells and forms a compound called malondialdehyde (MDA). MDA is therefore a good marker of oxidative stress on lipids.
In conclusion, during extrinsic aging,
UV can generate harmful modifications of DNA; either directly, via the formation of cyclobutane dimers or photoproducts, or indirectly via ROS that can attack DNA (8-oxo-G formation) or other living molecules such as lipids (MDA formation), or proteins. The UV, by activating the MMPs, can further degrade the proteins of the extracellular dermal matrix, including fibrillin.
The Applicant has surprisingly demonstrated that an extract of Ulex europaeus protects the skin from the deleterious effects of UV.
By deleterious effects of UV on the skin is meant the effects of UV on the DNA of cutaneous cells, on epidermal cell membranes as well as on matrix proteins. The extract of Ulex europaeus protects the skin from the deleterious effects of UV, that is to say, it protects the DNA of cutaneous cells by limiting the formation of pyrimidine dimers, it protects epidermal cell membranes from oxidative stress and finally it protects the matrix proteins. As a result, the extract of Ulex europaeus prevents the loss of skin elasticity due to the sun. Loss of skin elasticity is understood to mean the involvement of the dermis fibers due to UV damage resulting in a wrinkled, possibly pigmented, appearance of the upper layers of the epidermis.
The present invention thus relates to the cosmetic use of an extract of Ulex europaeus to protect the skin from the deleterious effects of UV, to protect epidermal cell membranes from oxidative stress and to protect matrix proteins. The invention also relates to the cosmetic use of an extract of Ulex europaeus to prevent the loss of cutaneous elasticity due to the sun. The extract of Ulex europaeus may also be advantageously used in a cosmetic composition protecting the skin from the deleterious effects of UV. The use according to the invention is particularly suitable for application to healthy skin. In the context of the present invention, the term "healthy skin" denotes skin that does not exhibit skin pathology.
Ulex europaeus is a perennial evergreen shrub 1 to 2 meters tall belonging to the Fabaceae family. It is ash green and has many thick, upright stems. This bush is thorny with thorns robust, very vulnerable. The evergreen leaves are acicular and usually shorter than the spines. The many flowers of this plant are isolated or arranged in clusters and are between 1.5 and 2.5 cm long. These flowers have a characteristic smell of coconut oil. The fruit is a black oval pod, 1 to 2 cm wide. Very hairy, it is longer than the evergreen calyx and contains 1 to 7 seeds.
Ulex europaeus is a shrub legume native to Europe (rather central and western and especially Brittany, Britain and Galicia). Its range in Europe has expanded to include countries outside its area of origin, such as Austria, Belgium, the Czech Republic, Denmark, Sweden or Norway. Over the last century, its area has expanded considerably in Australia, New Zealand, Hawaii, Chile and Costa Rica, as well as along the Pacific and Atlantic coast in North America where it is considered an invasive species. From now on, Ulex europaeus would have been introduced on all the continents. In cold or temperate latitudes, it is present at sea level, in the tropics between 1000 and 2500 meters and at the equator between 2000 and 3500 meters.
The first use of Ulex europaeus stems from its nutritional qualities for livestock. It was called "alfalfa of the poor countries". Ulex europaeus flowers are also used which have a characteristic smell of vanilla and coconut flavors in food. They can be eaten raw or in salad, or marinated like capers. They are also used for wine design and to add color and taste to Irish whiskey.
This plant is not well known in herbal medicine, and there is little data available on its medical virtues. It is only in Spain that the traditional use of its flowers before maturity is described for their cardiotonic and depurative virtues of the liver. Compounds with antiviral activity were isolated from stems and leaves of Ulex europaeus. In addition, seed pectins are used in agglutination or blood grouping techniques.
Wood ash from Ulex europaeus was used to make soap. The bark of Ulex europaeus was used to make a dark green dye and the flowers gave yellow and green dyes. The cosmetic use according to the present invention preferably implements an extract of Ulex europaeus or a cosmetic composition comprising such an extract. The extract according to the invention is an extract of Ulex europaeus, preferably an extract of the aerial parts and more particularly the flowering aerial parts. Advantageously, this extract is an extract obtained by supercritical CO2 extraction using a caprylic / capric triglyceride cosolvent. The extract thus obtained is therefore contained in a caprylic / capric triglyceride co-solvent. It is obtained according to a process comprising at least the following stages: - Harvesting of the aerial parts (flowers) of Ulex europaeus which are dried. - Grinding in a refrigerated mill. - Extraction with supercritical CO2 using Co-solvent Caprique / Caprylic Triglyceride. The extraction is carried out at a pressure of 170-190 bar, and a temperature of 50-70 ° C, the amount of dried aerial parts being 35-45%. Evaporation under vacuum at a temperature of 60-80 ° C. - Adjustment to 0.3% of unsaponifiables with caprylic / capric triglyceride co-solvent. The extract of the aerial flower parts of Ulex europaeus used according to the invention is a cloudy yellow-green liquid with a characteristic green odor. It has the following analytical characteristics: - Relative density at 20 ° C: 0.94-.96 - Refractive index at 20 ° C: 1.446-1.452 - Acid number (mg KOH / g): <10 - Saponification index ( mg KOH / g): 320-350 - Peroxide value (meq Cq / kg): <10 - Unsaponifiable:> 0.2% - Water content <0.2% - Thin layer chromatography of unsaponifiable matter: presence of sterols.
Cosmetic use is understood to mean the use of a cosmetic composition, that is to say a formulation suitable for a cutaneous application, comprising the Ulex europaeus extract as well as cosmetically acceptable excipients. Thus, the compositions according to the invention may comprise one or more formulating agents or additives of known and conventional use in cosmetic compositions such as, by way of examples and in a nonlimiting manner, softeners, colorants film-forming active agents, surfactants, perfumes, preservatives, emulsifiers, oils, glycols, vitamins such as vitamin E, UV filters, etc. With his knowledge of cosmetics, the skilled person will know which formulating agents add to the compositions of the invention and in what quantities according to the desired properties.
The compositions according to the invention may be in any form known to those skilled in the field of cosmetology and dermatology with no other pharmaceutical restriction than the application on the face and on the body. Advantageously, the compositions according to the invention are in the form of a gel, a cream, a lotion, a mask, an oil, a milk, a spray, etc.
Preferably, the cosmetic composition according to the invention comprises from 0.01 to 10% of an extract of Ulex europaeus by weight of dry matter relative to the total weight of the composition. Advantageously, the composition comprises from 0.01 to 5% of an extract of Ulex europaeus by weight of dry matter relative to the total weight of the composition.
The Applicant has demonstrated that the Ulex europaeus extract used according to the invention as well as the cosmetic composition comprising it can be used by application to the skin to protect it from the deleterious effects of UV.
The present invention also relates to a method for protecting the skin from the deleterious effects of UV comprising the cutaneous administration of an extract of Ulex europaeus or a cosmetic composition comprising said extract.
The following examples relate, on the one hand, to the evaluation of the effect of an extract of Ulex europaeus on UVB stress by analysis of pyrimidine dimers, on the protection of epidermal cell membranes by assaying MDA and finally vis-à-vis the UVA stress by analysis of the amount of fibrillin 1. On the other hand the examples below relate to compositions object of the present invention.
The examples refer to the following figures in which: - Figure 1 shows the percentage of cells with pyrimidine dimers after exposure to UVB under different conditions. FIG. 2 represents the lipid peroxidation rate (MDA assay) in 10 mg of epidermis exposed to UVA under different conditions. FIG. 3 shows the immuno-detection of fibrillin in explants exposed to UVA under different conditions.
I. EVALUATION OF THE ACTIVITY OF A O'ULEX EUROPAEUS EXTRACT ON THE DELETE EFFECTS OF UV.
A. MATERIALS AND METHODS
Normal human skin samples (2 donors) were obtained from a tummy tuck of a 55-year-old woman and a breast reduction of a 62-year-old woman. A skin sample was stored at 0 ° C in formalin and frozen in OCT (Optimal Cutting Temperature Compound) at -32 ° C.
The skin fragments were deposited in inserts (1 cm 2) themselves placed on culture wells. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) was added to the bottom of the wells, the passage of the culture medium to the inserts being carried out by slow diffusion between the two compartments by the intermediate of a porous membrane (12 μm).
B. REALIZATION OF OXIDATIVE STRESS MODEL
To be applied to the skin samples, two basic cosmetic formulations are prepared containing 0.2% and 0.3% Ulex europaeus extract in 100% 012-15 alkyl benzoate QSP. A placebo formula is performed with 100% 012-15 alkyl benzoate.
These 2 formulas are applied daily, topically, at a concentration of 2 mg / cm 2 from day 0 to day 4. 2 models of radiation are carried out on day 4 after the last application of the topicals: - model of irradiation by a session of UVB with 8 J / cm2 in order to obtain alterations of the DNA of the epithelial cells; - Irradiation model with a UVA session at 16 J / cm2 in order to obtain alterations of the cell membranes of the epithelium and dermal alterations, in particular with regard to the elastic fibers. On D5, each fragment was cut into 3: - formalin fixation and paraffin embedding for histological analysis - freezing at -32 ° C in OCT for immunohistochemical analysis - freezing at -32 ° C for MDA assay .
C.ANALYSIS 1) Histological analysis
Staining with hemalun-eosin makes it possible to check the possible cytotoxicity of the two formulas. 2) Immunohistochemical evidence of DNA damage by quantification of cyclobutane pyrimidine dimers (CPP) DNA of UV-disrupted epithelial cells was detected using an antibody anti-CPD (Abnova, clone KTM53, mouse monoclonal) (from 2 thymines, UV formation of cyclobutane pyrimidine dimers). The labeled cell nuclei were revealed in green fluorescence (fluorescent secondary antibody labeled FITC (Fluorescein IsoThioCyanate)). The cuts are mounted using the mounting medium
Vectashield (Vector, H-1300) to counterstain the DNA of the nuclei in red propidium ionide. Since the expression of pyrimidine dimers is not present on the whole of the skin, the number of labeled cells is counted at the level of 3 positive fields at magnification 40 and relative to the total number of cells of the epidermis des-dits fields. A calculation of the percentage of cells comprising DNA alterations is therefore performed. 3) Biochemical evidence of lipid peroxidation of cell membranes
The lipid peroxidation at the cell membranes generates MalonDiAldehyde (MDA) compounds and is a marker of oxidative stress. Peroxidation of lipids is assayed using a SIGMA kit, reference MAK085.
For this analysis, 10 mg of epidermis are extracted in 300 μl of buffer containing BHT (butylated hydroxytoluen). After centrifugation, the extraction supernatant is used to assay the binding of 2 molecules of thiobarbituric acid (TBA) on an MDA molecule. The pink chromogen thus produced is determined by sprectrophotometry at 532 nm.
A standard curve is made using a standard 4.17 M MDA solution. The amount of MDA is based on the weight of the epidermis. The results are therefore expressed in nM of MDA / mg of epidermis. 4) Immunohistochemical Detection of Fibrillin Immunodetection is performed using a 3-layer indirect immunoperoxidase technique (ABC Peroxidase kit, Vector Laboratories) and revealed in AEC. The evaluation is carried out using semi-quantitative scores (0 to 4) indicating the intensity of the labeling of fibrillin 1 in the elastic fibers.
D.RESULTS 1) Histological analysis At 0.3%, the extract of Ulex europaeus does not induce a cytotoxic effect on the skin. At 0.2% a moderate cytotoxic effect is observed. 2) Immunohistochemical detection of DNA damage by quantification of cyclobutane pyrimidine dimers (CPP)
After treatment with UVB, 21.6% of the keratinocytes contain the presence of pyrimidine dimers (testifying to the alteration of the DNA) relative to the control. Pre-treatment of skins with 0.3% Ulex europaeus extract prevents DNA damage by protecting keratinocytes with only 6.6% CPD in the epidermis. The protection obtained thus corresponds to a reduction in the formation of pyrimidine dimers of approximately 53% compared with placebo. Pre-treatment of
skin by the concentration of 0.2% Ulex europaeus extract does not protect the skin vis-à-vis alterations by UVB. 3) Biochemical evidence of lipid peroxidation of cell membranes
The
The level of MDA measured after application of the products alone is not different from that measured in the control skin.
After treatment with UVA, an increase in peroxidation of membrane lipids is observed with 700.5 nM / mg MDA compared with
control skin where the level is 343.5 nM / mg (2-fold increase).
Pre-treatment of the skin with 0.2% Ulex europaeus extract reduces lipid peroxidation with only 203.5 nM / mg MDA in the epidermis. This corresponds to a decrease of about 70% compared to placebo. With 0.3% Ulex europaeus extract the result is no different from the placebo. 4) Immunohistochemical Detection of Fibrillin
After irradiation with UVA, a decrease in the amount of fibrillin-1 is observed in the superficial dermis with a score of 2.9 versus 3.8 for the control skin. The extract of Ulex europaeus at 0.2% and 0.3% can protect the elastic tissue with semi-quantitative scores of 3.3 to 3.4 respectively. This corresponds respectively to a fibrillin protection rate of 132% and 136% compared to placebo.
III.EXAMPLES OF COSMETIC COMPOSITIONS
PROTEIN FACE CREAM O, "o ACRYLATES / C10-30 ALKYL ACRYLATE CROSSPOLYMER 0.35 PHENOXYETHANOL ............................... 0,40 GLYCERIN ..................................... 5,0 0 XANTHAN GUM ... ............................... 0.2 0 BUTYLOCTYL SALICYLATE ............. ........... 5,00 BUTYL METHOXYDIBENZOYLMETHANE ............... 3,00 CETEARYL ALCOHOL & CETEARYL GLUCOSIDE ....... 3,00 HOMOSALATE .................................. 9.0 0 DIMETHICONE .......... ....................... 3.0 0 02-15 ALKYL BENZOATE .................. ..... 3,00 TOCOPHEROL .................................. 0,0 6 TOCOPHERYL ACETATE. ......................... 0,20 BUTYROSPERMUM PARKII (SHEA) BUTTER .......... 5,00 DIMETHICONE / VINYL DIMETHICONE CROSSPOLYMER & SILICA & BUTYLENE GLYCOL .................... 1,00 TROMETHAMINE ................. ............... 0,25 PERFUME ............................... ....... 0,50 ULEX EUROPAEUS EXTRACT ...................... 0,3 DEMINERALIZED WATER .......... ................ QSP 100
MILK PROTECTIVE BODY O, "o ACRYLATES / C10-30 ALKYL ACRYLATE CROSSPOLYMER 0.20 CARBOMER ............................... ..... 0.10 02-15 ALKYL BENZOATE ........................ 3.00 BUTYLENE GLYCOL ........ ...................... 5,00 DISODIUM EDTA ....................... ......... 0,20 POTASSIUM SORBATE ............................ 0,10 PHENOXYETHANOL .... .................................. 0.60 TROMETHAMINE ................... .............. 0,40 POTASSIUM CETYL PHOSPHATE .................... 1,00 TOCOPHERYL ACETATE ..... ...................... 0,20 VP / EICOSENE COPOLYMER ..................... ... 2.00 ETHYLHEXYL METHOXYCINNAMATE & BHT ............ 7.50 OCTOCRYLENE ....................... ........... 10,00 BUTYL METHOXYDIBENZOYLMETHANE ................ 3,00 ETHYLHEXYL SALICYLATE ............. ........... 3,00 DIMETHICONE .................................. 8 , 00 ALOE BARBADENSIS LEAF JUICE & SODIUM BENZOATE 1.00 DIMETHICONE .................................. 8, 00 ULEX EUROPAEUS EXTRACT ....................... 0,3 0 PERFUME ...................................... 0,40 DEMINERALIZED WATER ..... ...................... QSP 100
MINERAL PROTECTIVE BASE O, "o DISODIUM EDTA ............................... 0.10 SODIUM CHLORIDE ... .......................... 1,00 PHENOXYETHANOL .................... .......... 0.60
AQUA / WATER / WATER & STYRENE / ACRYLATES COPOLYMER & PENTYLENE GLYCOL & AMMONIUM HYDROXIDE ..... 12.00 DIMETHICONE & TITANIUM DIOXIDE & Polyglyceryl-3
POLYDIMETHYLSILOXYETHYL DIMETHICONE & ALUMINUM HYDROXIDE & STEARIC ACID .................... 20.00 NYLON-12 ...................... .............. 3,00 DIMETHICONE & PEG / PPG-18/18 DIMETHICONE ..... 3,00 DIMETHICONE ................................. 5,00 ISODODECANE ................................. 5,0 0 ALCOHOL ........ ............................. 4,0 0 ULEX EUROPAEUS EXTRACT .............. ........ 0.30 PERFUME ...................................... 0.4 0 DEMINERALIZED WATER ........................... QSP 100
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