FR3055545A1 - Principe actif obtenu a partir de rose bulgare et utilisation cosmetique pour un effet bien vieillir - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est l'utilisation dans une composition cosmétique à application topique, d'un principe actif issu de rose bulgare comme principe actif cosmétique bien vieillir. L'invention a également pour objet un principe actif particulier, des compositions cosmétiques l'incluant et un procédé de traitement cosmétique.
Description
Titulaire(s) : SOCIETE INDUSTRIELLE LIMOUSINE D'APPLICATION BIOLOGIQUE Société anonyme.
Demande(s) d’extension
Mandataire(s) : AQUINOV.
PRINCIPE ACTIF OBTENU A PARTIR DE ROSE BULGARE ET UTILISATION COSMETIQUE POUR UN EFFET BIEN VIEILLIR.
_ L'objet de l'invention est l'utilisation dans une composition cosmétique à application topique, d'un principe actif issu de rose bulgare comme principe actif cosmétique bien vieillir. L'invention a également pour objet un principe actif particulier, des compositions cosmétiques l'incluant et un procédé de traitement cosmétique.
FR 3 055 545 - A1
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PRINCIPE ACTIF OBTENU A PARTIR DE ROSE BULGARE
ET UTILISATION COSMETIQUE POUR UN EFFET BIEN VIEILLIR
La présente invention concerne l'utilisation en cosmétique d'un principe actif de rose bulgare pour un effet « bien vieillir ».
L'invention se rapporte également à des principes actifs particuliers obtenus par hydrolyse de rose bulgare, ainsi qu'à des compositions cosmétiques incluant de tels principes actifs et à un procédé de traitement cosmétique pour un effet « bien vieillir » sur la peau.
Selon une enquête IPSOS, après 50 ans, deux attitudes se dessinent face au vieillissement. D'une part, le vieillissement est redouté, ce qui se traduit par « je cherche toujours à avoir l'air plus jeune » une vision qui trouve sa solution dans les soins anti-âge. D'autre part, le vieillissement est assumé avec un « j'assume mon vieillissement, ce qui compte avant tout, c'est d'être en forme, en bonne santé et rester séduisante. » c'est dans ce contexte que la nouvelle approche du « bien vieillir » émerge.
La philosophie du mouvement « bien vieillir » est basée sur des idées positives. Elle implique de ne pas aller contre le processus naturel de vieillissement. Faire plus jeune que son âge n'est pas une préoccupation. Les femmes osent afficher leur âge réel et souhaitent exhiber la beauté de la maturité de façon naturelle. Face au vieillissement, elles souhaitent être accompagnées et maintenir le capital santé et beauté de leur peau. Les femmes acceptent ainsi le vieillissement si ce dernier se fait sainement.
A ce jour, la problématique du « bien vieillir » est décrite à l'échelle de l'individu. De nombreux travaux ont permis d'identifier les paramètres conditionnant le vieillissement de la population. Toutefois, ces études se sont souvent focalisées sur des éléments extrinsèques tels que leur mode de vie et leur environnement. A l'échelle de la peau, et d'un point de vue biologique, aucune donnée scientifique n'établit les critères discriminant une personne bien vieillissant d'une personne mal vieillissante. A l'échelle moléculaire, le constat est le même. Aucun marqueur ou voie biologique n'est décrit comme spécifiquement impliqué dans le bien vieillir.
Dans ce contexte, basés sur l'expertise en biométrologie, en cartographie génétique et en reconstruction 3D, des modèles développés par le demandeur ont permis l'identification de paramètres cutanés des personnes bien vieillissantes et mal vieillissantes et des voies biologiques des cellules bien vieillissantes et mal vieillissantes.
Le bien vieillir renvoie d'abord aux notions de dynamisme, de naturel et d'hygiène de vie. Le charme, l'allure et les signes de vieillissement arrivent seulement dans un second temps.
Au niveau de la peau, la modélisation in vivo discrimine les paramètres cutanés des personnes bien vieillissantes, de ceux des personnes mal vieillissantes. Ce sont les rides, la fermeté cutanée, l'éclat du teint et l'hydratation. Ces paramètres ont été décrits par des consommatrices et validés par voie instrumentale.
La modélisation in vitro a monté que, pour une même tranche d'âge, il est possible d'identifier d'un point de vue génétique et fonctionnel des fibroblastes bien vieillissants de fibroblastes mal vieillissants. Les principaux facteurs modifiés sont la prolifération, la migration et l'adhésion. Ces trois paramètres sont significativement altérés lorsque les cellules sont mal vieillissantes. Ces trois paramètres ont une incidence majeure sur la reconstruction d'un modèle cutané 3D. Enfin, ces trois paramètres constituent des cibles pour ramener les cellules et tissus d'un état mal vieillissant vers un état bien vieillissant. L'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif à effet bien vieillir capable de rétablir le profil génétique et fonctionnel des cellules et tissus cutanés mal vieillissants pour retrouver un phénotype spécifique du bien vieillissant. En particulier, l'objectif de l'invention est de fournir un principe actif cosmétique capable :
D'accroître la prolifération et la longévité des cellules de la peau,
D'accélérer la migration des cellules de la peau,
De faciliter l'adhésion des cellules de la peau,
De dynamiser le métabolisme des cellules de la peau, de façon à augmenter l'hydratation de la peau, renforcer le tissu de soutien et réduire le relâchement au niveau du visage, lisser les rides au niveau du cou, atténuer les rides de la patte d'oie et raviver l'éclat du teint.
Pour répondre à cet objectif, l'invention propose d'utiliser un principe actif obtenu à partir de rose bulgare.
Le genre botanique des Roses, Rosa L. de la famille des Rosacées contient 200 espèces et plus de 18 000 cultivars. L'industrie de la parfumerie et de la cosmétique utilise principalement les roses des espèces Roso domosceno, Roso centifolia et Roso rugoso, essentiellement. L'espèce Rose bulgare ou rose de Damas ou Rosa damascena Herrm. est différenciable des Rosa gallica, Rosa rugosa ou Rosa centifolia.
Des extraits de rose bulgare, en particulier des huiles essentielles, sont déjà utilisés traditionnellement en parfumerie, et des activités anti HIV, anti bactérienne et anti oxydante ont aussi été attribuées à l'huile essentielle de rose bulgare.
De façon surprenante, un principe actif issu de rose bulgare, en particulier un hydroysat de rose bulgare, notamment un hydrolysat de fleurs de rose bulgare, et préférentiellement un hydrolysat de rose bulgare comprenant au moins 25% de carbohydrates, présente une action cosmétique bien vieillir et appliqué sur la peau, permet d'améliorer les paramètres cutanés des peaux mal vieillissantes en activant les voies biologiques impliquées dans le bien vieillir.
L'invention vise ainsi l'utilisation dans une composition cosmétique à application topique, d'un principe actif issu de rose bulgare comme principe actif cosmétique bien vieillir. L'invention a également pour objet un principe actif cosmétique caractérisé en ce qu'il comprant au moins 25% de carbohydrates en poids de matière sèche. Préférentiellement il s'agit d'un hydrolysat de rose bulgare.
Enfin, l'invention vise aussi une composition cosmétique incluant un tel principe actif ainsi qu'un procédé de traitement cosmétique pour un effet bien vieillir comprenant l'application sur la peau d'une composition incluant un principe actif issu de rose de bulgare.
D'autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description en détail de l'invention qui va suivre, en regard des figures annexées sur lesquelles :
La Figure la représente un test de prolifération cellulaire correspondant à des fibroblastes cutanés de donneurs âgés « bien vieillissants »,
La Figure lb représente un test de prolifération cellulaire correspondant à des fibroblastes cutanés de donneurs âgés « mal vieillissants »,
La Figure 2a représente un test de migration cellulaire correspondant à des fibroblastes cutanés de donneurs âgés « bien vieillissants »,
La Figure 2b représente une image du résultat d'un test de migration cellulaire correspondant à des fibroblastes cutanés de donneurs âgés « mal vieillissants »,
La Figure 3a représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « bien vieillissants ». II permet la visualisation de l'épaisseur du compartiment épidermique.
La Figure 3b représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « mal vieillissants ». II permet la visualisation de l'épaisseur du compartiment épidermique.
La Figure 4a représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « bien vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse du Ki-67,
La Figure 4b représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « mal vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse du Ki-67,
La Figure 5a représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « bien vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse d'intégrine a2,
La Figure 5b représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « mal vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse d'intégrine a2,
La Figure 6a représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « bien vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse de procollagène I,
La Figure 6b représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « mal vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse de procollagène I,
La Figure 7a représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « bien vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse d'acide hyaluronique,
La Figure 7b représente un épiderme reconstruit à partir de fibroblastes et kératinocytes âgés « mal vieillissants ». II permet la visualisation de la synthèse d'acide hyaluronique,
La Figure 8 représente le profil chromatographique (HPLC/RI) des carbohydrates de l’hydrolysat de l'exemple 1,
La Figure 9 est une représentation schématique des tests in vivo effectués sur volontaires pour démontrer l'efficacité de l'invention,
La Figure 10 représente l'échelle de score utilisée pour l'étude in vivo de l'effet de l'invention sur les rides de la patte d'oie,
La Figure 11 représente l'illustration de la matrice et des fibres d'un morphotype de peau jeune et d'un morphotype de peau âgée,
La Figure 12 représente l'échelle de score utilisée pour l'étude in vivo de l'effet de l'invention sur l'aspect de la matrice dermique,
La Figure 13 représente l'échelle de score utilisée pour évaluer le relâchement au niveau de la commissure des lèvres,
La Figure 14 représente l'échelle de score utilisée pour évaluer le relâchement au niveau de la partie latérale de la joue,
La Figure 15 représente l'échelle de score utilisée pour évaluer les rides du cou, La Figure 16 représente une CCM (Chromatographie sur couche mince) des sucres des extraits obtenus selon deux procédés différents.
La Figure 17 représente des profils HPTLC (Chromatographie haute performance sur couche mince) de différentes espèces de Rose.
DEFINITIONS
Par « actif cosmétique » ou « principe actif cosmétique » au sens de l'invention, on entend au moins une molécule, préférentiellement un ensemble de molécules présentant un effet sur les cellules de la peau.
Par « principe actif issu de rose bulgare » au sens de l'invention, on entend tout principe actif issu de rose bulgare, préférentiellement un hydrolysat de rose bulgare.
Par « hydrolysat de rose bulgare » au sens de l'invention, on entend tout principe actif issu de rose bulgare obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique de rose bulgare, préférentiellement enzymatique.
Par « rose bulgare » au sens de l'invention, on entend la rose nommée botaniquement Rosa damascena Herrm.
Par « effet bien vieillir » au sens de l'invention, on entend une action sur l'ensemble des paramètres cutanés des personnes mal vieillissantes à savoir :
l'hydratation l'éclat du teint la fermeté cutanée les rides.
Par « peau mal vieillissante » ou « tissus cutanés mal vieillissants » au sens de l'invention, on entend une peau/les tissus cutanés présentant l'ensemble des paramètres suivants au niveau des tissus et cellules cutanées :
une réduction de l'épaisseur de l'épiderme, une réduction de la capacité de prolifération et d'adhésion des fibroblastes, liée en particulier à une diminution des synthèse de Ki-67 et d'intégrine a2, et un métabolisme ralenti des tissus cutanés lié en particulier à une altération des synthèses de procollagène I et d'acide hyaluronique.
Par « personne bien vieillissante » on entend une personne n'ayant pas une peau mal vieillissante.
Par « personne mal vieillissante » on entend une personne ayant une peau mal vieillissante.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
L'invention se rapporte donc à une application cosmétique bien vieillir sur les peaux mal vieillissantes.
Deux modélisations ont été mises en place, pour établir :
in vivo, les caractéristiques cutanées des personnes bien vieillissantes et celles mal vieillissantes, in vitro, la carte d'identité génétique des cellules cutanées bien vieillissantes et celles mal vieillissantes.
L'étude in vivo a été réalisée sur 42 femmes réparties en 7 groupes d'âge (40 à 65 ans) et présentant des types de peau différents (grasse, sèche, etc.). Au cours d'entretiens, la notion de bien vieillir a été abordée par une série de questions sur la problématique du « bien vieillir » ou « mal vieillir ». Les propos ont été enregistrés, retranscrits et analysés par un logiciel informatique. Les 50 mots exprimés majoritairement ont été extraits. Les quatre principaux items sont l'hydratation, la fermeté, l'absence de rides et l'éclat du teint.
Pour confirmer scientifiquement ces données recueillies auprès de volontaires, une étude a été réalisée pour vérifier si l'altération des paramètres identifiés précédemment étaient significativement corrélée au statut « peau mal vieillissante ». Une analyse a été réalisée sur les paramètres ayant trait à l'hydratation, aux propriétés biomécaniques cutanées, à la ride de la patte d'oie, ainsi qu'à l'éclat du teint, à l'aide d'une méthode d'analyse multivariée nommée MDS (« MultiDimensional Scaling ») qui permet d'obtenir une représentation géométrique optimisée pour étudier les similarités ou dissimilarités entre les sujets. L'axe des âges a ensuite été projeté dans cette représentation : les individus les plus jeunes se trouvent regroupés à gauche et les individus les plus âgés sont situés vers la droite. Sur cette représentation, il a été observé qu'un certain nombre de sujets ne se classe pas dans la zone correspondant à leur âge chronologique. En effet, certains individus se trouvent dans la zone d'individus plus âgés qu'eux et sont considérés comme mal vieillissant.
II existe donc bien des paramètres qui discriminent les profils des personnes mal vieillissantes des personnes bien vieillissantes. Ces paramètres sont les rides, le relâchement cutané, l'éclat du teint et l'hydratation.
Pour compléter, une modélisation in vitro a été réalisée pour déterminer les paramètres génétiques et biologiques associés au « bien vieillir » par comparaison au « mal vieillir ». Dans un premier temps, il a été établi la signature génétique de fibroblastes issus de donneurs jeunes (âge inférieur à 30 ans) et de donneurs âgés (âge supérieur à 60 ans) grâce à une analyse par puces transcriptomiques. Cette analyse a montré que la signature moléculaire des donneurs jeunes est significativement différente de celle des donneurs âgés. En outre, il a été constaté au sein des donneurs âgés, deux signatures significativement distinctes suggérant un état de vieillissement différent. Une analyse plus approfondie des gènes a montré que trois voies biologiques permettent la discrimination des deux souspopulations âgées : la prolifération, la migration et l'adhésion cellulaire.
Dans un deuxième temps l'étude a consisté à rechercher si ces différences d'expression génique avaient une incidence sur la fonctionnalité de ces cellules. Pour cela une analyse à l'échelle macroscopique des différents paramètres identifiés a été réalisée. Une parfaite corrélation a été établie entre la signature moléculaire et la fonctionnalité cellulaire en identifiant à nouveau deux comportements distincts pour les donneurs âgés. Pour une même tranche d'âge, deux populations de fibroblastes ont été mises en:
Une population bien vieillissante avec de fortes capacités de prolifération (Figure la) et de migration (Figure 2a) ;
Une population mal vieillissante présentant des capacités de prolifération (Figure lb) et de migration réduite (Figure 2b).
Enfin, il a été recherché si, replacées dans un environnement 3D, les cellules bien vieillissantes ou mal vieillissantes permettaient l'obtention de peaux reconstruites présentant des structures significativement différentes. Grâce à ces modèles 3D, il a été démontré que les peaux reconstruites élaborées à partir de cellules mal vieillissantes présentent :
Une structure modifiée : réduction de l'épaisseur de l'épiderme (Figure 3b) par rapport aux épidermes reconstruits avec des cellules bien vieillissantes (Figure 3a);
Une réduction du taux de prolifération et d'adhésion : diminution des synthèses du Ki-67 (Figure 4b) et de l'intégrine a2 (Figure 5b) par rapport aux épidermes reconstruits avec des cellules bien vieillissantes (respectivement, Figures 4a et 5a);
Un métabolisme ralenti : altération des synthèses de procollagène I (Figure 6b) et acide hyaluronique (Figure 7b) par rapport aux épidermes reconstruits avec des cellules bien vieillissantes (respectivement, Figures 6a et 7a).
Cette modélisation in vitro a ainsi permis de démontrer que pour une même tranche d'âge il est possible d'identifier d'un point de vue génétique et fonctionnel des fibroblastes bien vieillissants ou mal vieillissants. Les principaux facteurs modifiés sont : la prolifération, la migration et l'adhésion. Ces trois paramètres sont significativement altérés lorsque les cellules sont mal vieillissantes. Ils ont une incidence majeure sur la reconstruction d'un modèle 3D.
Ces paramètres constituent des cibles pour ramener les cellules et tissus d'un état mal vieillissant vers un état bien vieillissant.
Ces modèles ont donc permis l'identification de paramètres cutanés et de voies biologiques impliquées dans le phénomène bien vieillir.
L'invention a pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique à application topique, d'un principe actif obtenu à partir de rose bulgare, préférentiellement d'un hydrolysat de rose bulgare, comme principe actif cosmétique bien vieillir.
En effet, selon l'invention, un principe actif issu de rose bulgare, en particulier un hydrolysat, est capable d'agir sur les voies biologiques impliquées dans le bien vieillir :
Il normalise le comportement cellulaire des fibroblastes mal vieillissant en activant la prolifération et la migration cellulaire : en particulier il augmente la clonogénicité et la synthèse du Ki-67,
Il facilite l'adhésion : en particulier il stimule la synthèse d'intégrine oc2,
Il exerce un effet sur la longévité cellulaire en améliorant les 2 marqueurs de longévité SIRT1 et FOXO3A,
Il dynamise le métabolisme cellulaire avec l'activation de la synthèse de procollagène I et d'acide hyaluronique.
Avantageusement, en agissant sur ces voies biologiques impliquées dans le bien-vieillir, un hydrolysat de rose bulgare permet aux cellules et tissus cutanés mal vieillissant de revenir au phénotype spécifique du bien vieillissant.
Un hydrolysat de rose bulgare appliqué sur la peau peut donc être utilisé pour améliorer l'état des peaux mal vieillissantes, notamment pour améliorer les paramètres cutanés de ces peaux et en particulier pour :
- augmenter l'hydratation,
- atténuer les rides de la patte d'oie,
- renforcer le tissu de soutien contribuant ainsi au renfort des propriétés biomécaniques et à la réduction du relâchement du bas du visage,
- diminuer les rides au niveau du cou,
- raviver l'éclat du teint.
L'invention permet ainsi d'assurer le rétablissement des critères majeurs du bien vieillir, permettant de retrouver une peau en bonne santé, hydratée et moins fatiguée.
Préférentiellement, le principe actif utile selon l'invention est un hydrolysat de rose bulgare, en particulier un hydrolysat de fleur de rose bulgare, et encore plus préférentiellement un hydrolysat de rose bulgare particulier tel que décrit en suivant.
En effet, selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet un principe actif cosmétique obtenu à partir de rose bulgare comprenant au moins 25% de carbohydrates en poids de matière sèche du principe actif, préférentiellement au moins 50%, en particulier au moins ίο
60%. Préférentiellement le principe actif est un hydrolysat de rose bulgare. Selon un mode de réalisation préféré, l'hydrolysat est obtenu à partir de fleurs de rose bulgare.
Une partie des carbohydrates du principe actif selon l'invention sont préférentiellement des oligosaccharides de masses molaires comprises entre 360 et 6000 (ce qui correspond à des oligosaccharides de degré de polymérisation compris entre 2 et 33). La masse molaire moyenne des oligosaccharides présents dans le principe actif selon l'invention est comprise entre 500 et 2000 Da, préférentiellement entre 800 et 1500, encore plus préférentiellement 1100 Da.
La détermination des masses molaires est préférentiellement réalisée par chromatographie d'exclusion stérique.
La masse molaire moyenne correspond à la moyenne des masses molaires pondérée par l'intensité des signaux obtenus pour chaque masse molaire.
De façon préférée, les oligosaccharides de masses molaires comprises entre 360 et 6000Da représentent au moins 8% en poids de matière sèche de l'hydrolysat et/ou représentent au moins 33% en poids des carbohydrates présents dans l'hydrolysat.
Le reste des carbohydrates présents dans l'hydrolysat sont préférentiellement des monosaccharides de masses molaires inférieures ou égales à 180 Da.
Les carbohydrates présents dans le principe actif selon l'invention sont préférentiellement principalement constitués de fructose, glucose et acide galacturonique.
Préférentiellement l'hydrolysat selon l'invention est un hydrolysat enzymatique, encore plus préférentiellement un hydrolysat obtenu par hydrolyse de rose bulgare avec une carbohydrase. L'objectif de l'hydrolyse de rose bulgare dans le cadre l'invention est en effet d'hydrolyser les carbohydrates présents naturellement dans la plante.
Le principe actif peut contenir d'autres molécules, notamment des protéines et des cendres. Les protéines, si elles sont présentes, représentent préférentiellement moins de 20% de protéines en poids de matière sèche de l'hydrolysat.
Selon un mode de réalisation adapté, le principe actif utile selon l'invention se présente sous forme liquide. II présente préférentiellement au moins une des caractéristiques suivantes, préférentiellement toutes :
- Un taux de matières sèches compris entre 13 et 20 g/l, préférentiellement entre et 50 g/l,
- Une teneur en carbohydrates comprise entre 5 et 9 g/l, préférentiellement entre 1.9 et 22.5 g/l, soit au moins 25% en poids de matières sèches de l'hydrolysat,
- La présence de protéines inférieure à 20% en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat,
- Une teneur en cendres inférieure à 30% en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat,
- Un taux de composés polyphénoliques inférieur à 0,1% en poids par rapport au poids de matières sèches de l'hydrolysat.
Le taux de matières sèches peut être mesuré par passage à l'étuve à 105°C d'un échantillon jusqu'à obtention d'un poids constant.
La teneur globale en carbohydrates peut être déterminée par la méthode de DUBOIS (Dubois M. et ol., Analytical chemistry, 28, 3, 350-356,1956). La caractérisation de la masse molaire des carbohydrates présents dans le principe actif de la présente invention est réalisée par méthode HPLC/RI. Les conditions opératoires sont préférentiellement les suivantes :
Colonne : Polymer Laboratories (Varian) PLaquagel-OH 60, aquagel-OH 40 et aquagel-OH 30 de dimension 300 x 7,5 mm (en séries) avec pré-colonne de mêmes caractéristiques Solvant : tampon NaNO3 0,3 M et NaH2PO4-2H2O 0,01 M, pH7 en mode isocratique Détecteur : RI (Indice de Réfraction)
Le dosage des sucres simples est réalisé par chromatographie liquide ionique.
La teneur en composés peptidiques est déterminée par la méthode de LOWRY (Lowry et al., Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem., 193, 265,1951).
La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération des échantillons du principe actif à 550°C dans un four à moufle électrique. La teneur en composés polyphénoliques est évalué par chromatographie liquide.
Au lieu d'une forme liquide, le principe actif peut également se présenter sous forme de poudre atomisée par exemple.
Le principe actif selon l'invention peut être obtenu partout procédé, préférentiellement par tout procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse de rose bulgare. De façon préférentielle, il est obtenu par un procédé comprenant une étape d'hydrolyse enzymatique, en particulier d'hydrolyse enzymatique à l'aide d'au moins une carbohydrase.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif est obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- Solubilisation de poudre de rose bulgare, préférentiellement de fleurs de rose bulgare, dans l'eau, préférentiellement à raison d'au moins 20g/l,
- Hydrolyse enzymatique, afin d'hydrolyser les carbohydrates, préférentiellement à l'aide d'une carbohydrase, choisie parmi les carbohydrases suivantes : cellulase, galactomannanase, glucosidase, amylase, chitinase, galactosidase, glucuronidase, pullulanase, glucocerebrosidase, inulinase, pectinase, xylanase, arabinase dans les conditions (pH, température, concentration) préconisées par le fournisseur.
- Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble préférentiellement par centrifugation, décantation ou filtration,
- Inactivation enzymatique selon les préconisations du fournisseur de l'enzyme utilisée,
- Filtration pour éliminer les molécules de poids moléculaire supérieur à 20kDa,
- Concentration en carbohydrates, afin d'obtenir une matière sèche supérieure à 5g/l, préférentiellement supérieure ou égale à 13g/l.
Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs présentant les caractéristiques de l'invention, en particulier la présence d'oligosaccharides présentant un poids moléculaire compris entre 360 et 6000 Da qui présentent une activité bien vieillir de l'hydrolysat. Certaines étapes sont ajoutées afin d'obtenir un actif particulier, comme une étape de :
- Clarification ayant pour but de retirer les composés rendus insolubles lors d'un traitement thermique, cette clarification peut, par exemple, être réalisée par filtration sur tamis,
- Filtration stérilisante sur filtre 0,22μ ou un autre moyen de stérilisation ayant pour but d'éliminer les micro-organismes qui pourraient être présents dans le produit.
Ces étapes prises individuellement sont usuelles dans le domaine des extractions d'actifs à partir de plantes et l'homme du métier est à même d'en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales et de la documentation des fournisseurs des enzymes, des filtres, etc.
L'étape d'hydrolyse peut être importante. En effet si l'on compare les produits obtenus avec un procédé 1 comprenant une simple solubilisation de poudre de fleur de Roso
Damascena dans l'eau, et un procédé 2 comprenant en plus de cette solubilisation une étape d'hydrolyse enzymatique avec une carbohydrase et séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble, on constate une amélioration du rendement d'extraction des sucres de 12% avec le procédé 2 (9,9 g/l pour le procédé 1 et 14 g/l pour le procédé 2), et la présence sur la chromatographie sur couche mince de sucres différents dans le procédé 2 par rapport au procédé 1 (cf Figure 16). La proportion de sucres dans le procédé 2 (41% de la matière sèche)est 29% plus importante que celle dans le procédé 1 (53% de la matière sèche).
Le principe actif selon l'invention est un principe actif cosmétique caractérisé en ce qu'il s'agit d'un principe actif issu de Rose bulgare, et non d'une autre espèce de Rose.
Une étude comparative portant sur des hydrolysats de fleurs de rose d'espèces différentes a montré que seul l’hydrolysat de l'invention de fleurs de rose bulgare présente l'efficacité cosmétique recherchée.
Le principe actif selon l'invention est préférentiellement utilisé dans des compositions, ces compositions comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. Il s'agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée.
Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huile-danseau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide.
Il peut s'agir de compositions comprenant au moins 0,25% d'un principe actif issu de rose bulgare selon la présente invention, préférentiellement entre 0,25 et 10%.
Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements.
Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi :
- les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles,
- les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba,
- les élastomères de silicone,
- les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères,
- les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires,
- les épaississants et/ou gélifiants,
- les humectants, tels que les polyols comme la glycérine,
- les filtres organiques,
- les filtres inorganiques,
- les colorants, les conservateurs, les charges,
- les tenseurs,
- les séquestrants,
- les parfums,
- et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.
Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingrédient Dictionary and Handbook publié par le Personal Core Product Council).
Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée.
Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées pour un effet bien vieillir. L'invention vise ainsi également un procédé non thérapeutique, à savoir un procédé cosmétique de soin de la peau pour un effet bien vieillir, en particulier pour augmenter l'hydratation des peaux mal vieillissantes, et/ou réduire le relâchement au niveau du visage des personnes ayant une peau mal vieillissante, et/ou lisser le microrelief au niveau du cou des personnes ayant une peau mal vieillissante, et/ou raviver l'éclat du teint des personnes ayant une peau mal vieillissante, comprenant l'application sur la peau d'une composition incluant un principe actif issu de rose de bulgare, préférentiellement un hydrolysat selon l'invention. De façon préférée, la composition est une composition selon l'invention.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, la composition est appliquée au moins une fois par jour sur la peau du visage.
Afin d'illustrer ces effets cosmétiques sur la peau, les exemples suivants avec leurs résultats d'essais sont présentés.
EXEMPLES
Exemple 1 : Principe actif selon l'invention
Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en œuvre des étapes suivantes :
- Solubilisation de poudre de fleurs de rose bulgare, dans l'eau, à raison de 20g/l,
- Hydrolyse enzymatique à l'aide de xylanase, dans les conditions (pH, température, concentration) préconisées par le fournisseur,
- Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble par centrifugation,
- Inactivation enzymatique par traitement thermique-selon les préconisations du fournisseur de l'enzyme utilisée,
- Filtration pour éliminer les molécules de poids moléculaire supérieur à 20kDa,
- Concentration afin d'obtenir une matière sèche supérieure à 13g/l,
- Filtration stérilisante sur filtre 0.22μ.
Le principe actif obtenu est un liquide limpide jaune clair présentant une matière sèche de 14,7g/l, et une teneur en carbohydrates (méthode de Dubois) de 6,3g/l, soit 40% de la matière sèche. II contient aussi des protéines à raison de l,7g/l, soit 10% de la matière sèche et 3,4g/l de cendres soit 22% et 0,012g/l de polyphénols totaux, soit 0,08%.
33% des carbohydrates du principe actif sont des oligosaccharides de masses molaires comprises entre 360 et 6000 Da. La détermination des masses molaires est réalisée par HPLC avec détection RI. Le profil chromatographique HPLC/RI de la fraction glucidique de ce principe actif est présenté sur la Figure 8.
Les carbohydrates sont composés à 49% de fructose, à 35% de glucose, 11% d'acide galacturonique, 3% de galactose, 2% d'arabinose.
Il est soluble en milieux aqueux, soluble en milieu alcoolique jusqu'à un taux 40/60 éthanol/eau, peut supporter des températures allant jusqu'à 80°C, peut être utilisé à des pH compris entre 2 et 10.
Il est préférentiellement utilisé dans une composition cosmétique entre 1 et 2,5%.
Exemple 2 : Principe actif selon l'invention
Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- Solubilisation de poudre de fleurs de rose bulgare, dans l'eau, à raison de 60g/l,
- Hydrolyse enzymatique à l'aide d'inulinase, dans les conditions (pH, température, concentration) préconisées par le fournisseur,
- Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble par centrifugation,
- Inactivation enzymatique par traitement thermique-selon les préconisations du fournisseur de l'enzyme utilisée,
- Filtration pour éliminer les molécules de poids moléculaire supérieur à 20kDa,
- Concentration afin d'obtenir une matière sèche supérieure à 15g/l,
- Filtration stérilisante sur filtre 0.22μ.
Le principe actif obtenu est un liquide jaune clair présentant une matière sèche de 16,0g/l, et une teneur en carbohydrates (méthode de Dubois) de 7,3g/l, soit 46% de la matière sèche. Il contient aussi des cendres à raison de 3,lg/l, soit 19% et des protéines l,7g/l, soit 11% et 0g/l de polyphénols totaux.
% des carbohydrates du principe actif sont des oligosaccharides de masses molaires comprises entre 360 et 6000 Da. La détermination des masses molaires est réalisée par HPLC avec détection RI.
Il est soluble en milieux aqueux, soluble en milieu alcoolique jusqu'à un taux 40/60 éthanol/eau, peut supporter des températures allant jusqu'à 80°C, peut être utilisé à des pH compris entre 2 et 10.
Il est préférentiellement utilisé dans une composition cosmétique entre 1 et 2,5%.
Exemple 3 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un gel démaquillant
La composition a la formulation suivante :
| A. | Eau | 100% | |
| Conservateur | 1% | ||
| B. | Principe actif de l'exemple 1 | 2,5% | |
| Glycérine | 0,5% | ||
| C. | SEPIMAXZEN | (Seppic) | 0,8% |
| SEPINOV EMT 10 | (Seppic) | 0,3% | |
| ORAMIX NS 10 | (Seppic) | 0,5% |
Le pH de la composition est de 4,8.
II s'agit d'un gel transparent fluide, brillant, légèrement odorant. II présente une 5 application aisée, légèrement moussant au contact à l'eau. II a un bon pouvoir nettoyant, un rinçage rapide, un fini doux et glissant.
La composition peut être obtenue en mettant en oeuvre les étapes suivantes :
- Mélanger A.
- Veiller à bien disperser le conservateur sous agitation à 50°C.
- Mélanger B.
- Mélanger C.
- Ajouter B, puis C à A.
- Homogénéiser.
Exemple 4 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un sérum
La composition a la formulation suivante :
| A. | Eau | qsp 100% | |
| Conservateur | 1% | ||
| Xanthane | 0,1% | ||
| B. | Eau | 10% | |
| Principe actif de l'exemple 2 | 2,5% | ||
| Glycérine | 16,6% | ||
| SEPINOV EMT 10 | (Seppic) | 0,5% | |
| C. | MONTANOV 202 | (Seppic) | 1,4% |
| LANOLP | (Seppic) | 0,6% | |
| VASELINE ML13 | (Aiglon SAS) | 5% | |
| DUBSIP | (Stéarinerie Dubois) | 6,8% | |
| DC556 | (Dow Corning) | 2% | |
| DC 2503 | (Dow Corning) | 10% |
Le pH de la composition est de 4,5.
Le sérum se présente sous forme d'une émulsion blanche, brillante, liquide et sans odeur. II présente un étalement très doux, une pénétration très rapide, un fini sec et mat et une sensation de légèreté.
La composition peut être obtenue en mettant en oeuvre les étapes suivantes :
- Chauffer A, à 50°C sous agitation.
- Ajouter B, dans l'ordre indiqué.
- Chauffer A/B et C, séparément, au bain-marie à 80°C, sous agitation mécanique.
- A 80°C, Emulsionner C dans A/B, sous rotor stator à 2800 tr/min.
- Laisser sous agitation jusqu'à complet refroidissement.
Exemple 5 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de jour
La composition a la formulation suivante :
| A. | Eau Conservateur Glycérine | qsp 100% 1% 8% | |
| B. | SENSANOV WR | (Seppic) | 1% |
| MONTANOV 202 | (Seppic) | 2,5% | |
| LANOL99 | (Seppic) | 3% | |
| LANOLP | (Seppic) | 3% | |
| DUB MCT5545 | (Stéarinerie Dubois) | 5% | |
| SOPHIDERM | (Sophim) | 6,5% | |
| C. | Principe actif de l'exemple 1 | 2,5% | |
| D. | SEPIPLUS400 | (Seppic) | 0,5% |
| E | NaOH | qsp pH 5 |
La crème de jour présente un pH de 5.
Elle se présente sous forme d'une émulsion légèrement ambrée, épaisse, brillante et sans 5 odeur.
La composition peut être obtenue en mettant en oeuvre les étapes suivantes :
- Mélanger A sous agitation magnétique à 50°C.
- Mélanger B.
- Chauffer A et B séparément, au bain marie, à 80°C.
- Emulsionner B dans A, sous rotor stator à 1900 tr/min.
- A 50°C, ajouter C.
- A température ambiante ajouter D, lorsqu'il est bien dispersé ajuster le pH avec E.
- Continuer l'agitation jusqu'à complète homogénéité de la formule.
Exemple 6 : Utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un masque de jour
La composition a la formulation suivante :
| A. | Eau Conservateur Propylène Glycol | qsp 100% 1% 5% | |
| B. | Alginate | 0,4% | |
| C. | DUB MCT5545 | (Stéarinerie Dubois) | 2% |
| TEGOSOFT GMC 6 | (Evonik Industries) | 3% | |
| TEGOSOFTTN 2 | (Evonik Industries) | 2,2% | |
| DUB PTCC | (Stéarinerie Dubois) | 3,2% | |
| MONTANE 481 VG | (Seppic) | 3% | |
| EASYNOV | (Seppic) | 3% | |
| D. | Principe actif de l'exemple 2 | 2,5% |
Le masque de jour présente un pH 5,5.
Il s'agit d'une émulsion compacte, blanche, brillante et sans odeur.
La composition peut être obtenue en mettant en oeuvre les étapes suivantes :
- Mélanger A.
- Bien disperser à 50°C sous agitation mécanique.
- Ajouter B, toujours sous agitation. Mélanger C.
- Chauffer A/B et C séparément, au bain marie, à 80°C. Emulsionner C dans A/B, sous rotor stator à 1900 tr/min. A 50°C, ajouter D.
- Laisser homogénéiser sous agitation jusqu'à complet refroidissement.
EVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE SELON L'INVENTION
Tests In vitro o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur la prolifération cellulaire
Etude de la clonogénicité
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur la clonogénicité des fibroblastes humains.
La clonogénicité se définit par la capacité d'une cellule à former une colonie. Elle donne une information importante sur le potentiel reproductif des cellules et représente ainsi un marqueur caractéristique du vieillissement (Sakashita et al., 2013 ; Hoetzer et al., 2007). En effet, plus une cellule est vieillie, moins sa capacité de clonogénicité est importante (Mine et al., 2008).
L'action du principe actif de rose bulgare selon l'invention a été étudiée sur culture de fibroblastes humains issus de donneurs âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants ». Cette étude a été réalisée par un test de clonogénicité selon le protocole opératoire suivant.
J0, ensemencement : les fibroblastes humains sont ensemencés.
Les cellules sont traitées avec l'hydrolysat de l'exemple 2 à 0,25% et 0,50%, puis incubées à 37°C.
J14, coloration : les cellules sont colorées avec une solution de crystal violet 0,5% (M/V). Lecture de la coloration : le nombre de colonies est déterminé sur chaque boite par comptage.
Les résultats obtenus sont résumés dans le Tableau 1.
| Nombre de colonies | Capacité à améliorer la clonogénicité (%) | |
| Fibroblastes âgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin | 84 | |
| Invention exemple 2 0,50% | 85 | |
| Fibroblastes âgés « mal vieillissants » | ||
| Témoin | 43 | |
| Invention exemple 2 0,25% | 47 | 10 |
| Invention exemple 2 0,50% | 68* | 61 |
Tableau 1
On constate que testé à 0,50% sur fibroblastes humains âgés « mal vieillissants », un principe actif de rose bulgare selon l'invention permet d'améliorer significativement la clonogénicité de +61%.
Etude du Ki-67
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un hydrolysat de rose bulgare selon l'invention sur la prolifération cellulaire dans un modèle de peau reconstruite réalisée à partir de de cellules âgées « mal vieillissantes » nommé (SILABSKIN® FT).
Le Ki-67 fait partie des marqueurs clés de prolifération cellulaire, il est présent au niveau du noyau des cellules prolifératives.
L'action de l'invention sur la prolifération cellulaire a été étudiée par marquage immunohistochimique du Ki-67.
Le protocole opératoire est décrit en suivant :
A JO : les kératinocytes humains âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants » sont ensemencés sur une lattice contenant respectivement des fibroblastes humains âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants » et incubés à 37°C.
A J2, J4, J7, J9, traitement : le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant un hydrolysat de rose bulgare de l'exemple 1 à 0,25%. Les SILABSKIN’' FT sont ensuite incubés à 37°C.
Jll, récupération des SILABSKIN’' FT : les SILABSKIN’' FT sont fixés, déshydratés et inclus en paraffine. Des coupes sont réalisées à l'aide d'un microtome.
L'analyse des SILABSKIN® FT est ensuite réalisée par marquage immunohistochimique selon les conditions suivantes :
-Anticorps primaire : anticorps polyclonal anti-Ki-67,
- Anticorps secondaire : anticorps anti-IgG couplé Alexa Fluor 488.
La visualisation est réalisée sur microscope couplé à un système d'analyse d'images.
La synthèse de Ki-67 est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence (couleur jaune) présente sur les SILABSKIN’' FT.
Le nombre des cellules Ki-67 positives est déterminé manuellement sur chaque image.
Les résultats sont résumés dans le Tableau 2 :
| Cellules Ki-67 positives (%) | Capacité à améliorer la synthèse de Ki-67 (%) | |
| SILABSKIN FT âgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin | 48 | |
| SILABSKIN FT âgés « mal vieillissants » | ||
| Témoin | 31 | |
| Invention exemple 1 0,25% | 45** | 82 |
Tableau 2
On constate que testé à 0,25% sur SILABSKIN” FT âgés « mal vieillissants », un principe actif de rose bulgare permet d'améliorer significativement la synthèse d'un marqueur de prolifération cellulaire, Ki-67, de 82%.
o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur la migration cellulaire
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur la migration de fibroblastes humains.
La migration cellulaire est la capacité de certaines cellules à se mouvoir. In vitro, elle est évaluée par le nombre de cellules couvrant une surface initialement vide (Kim et al., 2015 ; Lampugnani, 1999). La capacité migratoire des cellules est réduite avec l'âge (Boulter et al., 2013).
L'action du principe actif de rose bulgare selon l'invention a été étudiée sur culture de fibroblastes humains issus de donneurs âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants ».
Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant :
A J0, ensemencement :les fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C,
A J4, formation de la zone de blessure : l'insert est retiré de la chambre de culture créant la blessure. Les cellules sont traitées avec l'hydrolysat de Rosa Damascena (exemple 1) à 0,50% puis incubées à 37°C.
A J7, coloration : les cellules sont colorées avec une solution de crystal violet à 0,5% (M/V). La visualisation est réalisée avec une caméra AxioCam MRc sur microscope couplé à un système d'analyse d'images.
Le ratio de surface occupée par les cellules est calculé de façon automatique grâce à un logiciel.
Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau 3 :
| Ratio surface occupée (UA) | Migration cellulaire (%) | |
| Fibroblastes âgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin | 0,465 | |
| Invention exemple 1 0,50% | 0,461 | |
| Fibroblastes âgés « mal vieillissants » | ||
| Témoin | 0,222 | |
| Invention exemple 1 0,50% | 0,377** | 64 |
Tableau 3
On constate que testé à 0,50% sur fibroblastes humains âgés « mal vieillissants », un principe actif de rose bulgare permet d'améliorer significativement la migration cellulaire de +64%.
o Effet d'un hydrolysat de rose bulgare selon l'invention sur l'adhésion cellulaire L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un hydrolysat de rose bulgare selon l'invention compenser la perte d'adhésion dans les SILASKIN” FT âgés « mal vieillissants ». Les intégrines a2 sont des glycoprotéines transmembranaires qui jouent un rôle important dans les jonctions d'adhésion entre les kératinocytes et la jonction dermoépidermique.
L'action d'un hydrolysat de rose bulgare a été étudiée par marquage immunohistochimique d'intégrine a2.
Le protocole opératoire est décrit en suivant :
A JO : les kératinocytes humains âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants » sont ensemencés sur une lattice contenant respectivement des fibroblastes humains âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants » et incubés à 37°C.
A J2, J4, J7, J9, traitement : le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant un hydrolysat de rose bulgare de l'exemple 1 à 0,25%. Les SILABSKIN” FT sont ensuite incubés à 37°C.
A J11, récupération des SILABSKIN” FT : les SILABSKIN” FT sont fixés, déshydratés et inclus en paraffine. Des coupes sont réalisées à l'aide d'un microtome.
L'analyse des SILABSKIN® FT est ensuite réalisée par marquage immunohistochimique selon les conditions suivantes :
-Anticorps primaire : anticorps monoclonal anti-intégrine alpha2 - Anticorps secondaire : anticorps anti-IgG couplé Alexa Fluor 488
La visualisation est réalisée sur microscope couplé à un système d'analyse d'images.
La synthèse de l'intégrine a2 est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence (couleur verte) présente sur les SILABSKIN® FT.
Une analyse quantitative des images a été réalisée à l'aide d'un logiciel.
Les résultats sont résumés dans le Tableau 4 :
| Intensité de marquage d'intégrine a2 (xlO4 UA) | Capacité à améliorer la synthèse d'intégrine a2 (%) | |
| SILABSKIN FT âgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin | 756 | |
| SILABSKIN FT âgés « mal vieillissants » | ||
| Témoin | 577** | |
| Invention exemple 1 0,25% | 744** | 93 |
Tableau 4
On constate que testé à 0,25% sur SILABSKIN® FT âgés « mal vieillissants », un hydrolysat de rose bulgare permet d'améliorer significativement le marqueur d'adhésion cellulaire, intégrine a2, de 93%.
o Effet d'un hydrolysat de rose bulgare selon l'invention sur le métabolisme tissulaire
L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité d'un hydrolysat de rose bulgare selon l'invention à favoriser le métabolisme d'une peau reconstruite réalisée à partir de cellules « mal vieillissantes ».
L'action de l'invention a été étudiée sur :
les modifications morphologiques, dont l'épaisseur de l'épiderme, par coloration HES ;
la synthèse de procollagène I, précurseur du collagène I qui est un composant majeur du derme ;
la synthèse d'acide hyaluronique, glycosaminoglycane du derme nécessaire à l'établissement du réservoir hydrique de la peau.
Le protocole opératoire est décrit en suivant :
A JO : les kératinocytes humains âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants » sont ensemencés sur une lattice contenant respectivement des fibroblastes humains âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants » et incubés à 37°C.
A J2, J4, J7, J9, traitement : le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant l'exemple 1 à 0,25%. Les SILABSKIN® FT sont ensuite incubés à 37°C.
A J11, récupération des SILABSKIN® FT : les SILABSKIN® FT sont fixés, déshydratés et inclus en paraffine. Des coupes sont réalisées à l'aide d'un microtome.
L'analyse des SILABSKIN® FT est ensuite réalisée par :
- Analyse morphologique et
- Analyse immunohistochimique.
L'analyse morphologique est réalisée par coloration Hématoxyline Eosine Safran (HES) selon le procédé suivant :
- Déparaffinage en xylène,
- Hydratation,
- Coloration hémalun de Masson et éosine,
- Déshydratation,
- Montage des lames.
La visualisation est réalisée sur microscope couplé à un système d'analyse d'images. L'épaisseur des épidermes (couches cellulaires vivantes) a été mesurée sur les coupes histologiques après coloration HES.
L'analyse immunohistochimique est réalisée dans les conditions suivantes :
- Anticorps primaires :
• anticorps monoclonal anti-procollagène I, • anticorps biotinylé anti-HABP (Hyaluronic Acid Binding Protein).
- Anticorps secondaires :
• anticorps anti-IgG couplé Alexa Fluor 488, • Alexa Fluor 488 streptavidin.
La visualisation est réalisée sur microscope couplé à un système d'analyse d'images.
La synthèse des différents marqueurs étudiés est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence (couleur verte) présente sur les SILABSKIN FT.
Une analyse quantitative des images a été réalisée à l'aide d'un logiciel.
Les résultats sont résumés dans les Tableaux 5 (morphologie par coloration HES) et 6 (synthèse de collagène I) et 7 (synthèse d'acide hyaluronique) :
| Mesure de l'épaisseur de l'épiderme (pm) | Capacité à améliorer l'épaisseur de l'épiderme (%) | |
| SILABSKIN FTâgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin | 78 | |
| SILABSKIN FT âgés « mal vieillissants | » | |
| Témoin | 60 | |
| Invention exemple 1 0,25% | 78 | 100 |
Tableau 5
| Intensité de marquage de procollagène 1 (xlO5 UA) | Capacité à améliorer la synthèse de procollagène 1 (%) | |
| SILABSKIN FT âgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin 151 | ||
| SILABSKIN FT âgés « mal vieillissants » | ||
| Témoin | 118 | |
| Invention exemple 1 0,25% | 14g** | 94 |
Tableau 6
| Intensité de marquage de HABP (UA) | Capacité à améliorer la synthèse d'acide hyaluronique (%) | |
| SILABSKIN FT âgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin | 332 | |
| SILABSKIN FT câgés « mal vieillissants » | ||
| Témoin | 273^ | |
| Invention | ||
| exemple 1 | 329** | 95 |
| 0,25% |
Tableau 7
On constate que testé à 0,25% sur SILABSKIN® FT âgés « mal vieillissants », un hydrolysat de rose bulgare selon l'invention permet d'améliorer significativement :
l'épaisseur de l'épiderme de 100% ;
- les synthèses de procollagène I de 94% et d'acide hyaluronique 95%.
o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur la synthèse des marqueurs de longévité
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur la synthèse par des fibroblastes humains de protéines impliquées dans la longévité cellulaire telles que SIRT 1 et FOXO3A.
L'action du principe actif de rose bulgare selon l'invention a été étudiée sur culture de fibroblastes humains issus de donneurs âgés « bien vieillissants » ou « mal vieillissants ». Cette étude a été réalisée par Western blot, selon le protocole opératoire suivant :
A J0 : les fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2.
AJ3, traitement : les cellules sont traitées avec l'exemple là 0,25% et 0,50%, puis incubées à 37°C.
A J3, extraction : les extraits cellulaires sont récupérés à T2h pour FOXO3, puis fractionnés grâce au kit de fractionnement NE-PER : Nuclear and cytoplasmic extraction reagent et stockés à -80°C en attente du dosage par Western blot.
Les extraits cellulaires sont récupérés à T4h pour SIRT 1, puis stockés à -80°C en attente 5 du dosage par Western blot.
Une électrophorèse est réalisée sur gel précoulé.
Les protéines sont ensuite transférées sur membrane dans les conditions suivantes :
- Anticorps primaires :
• anticorps monoclonal anti-SIRT 1 · anticorps monoclonal anti-FOXO3A
- Anticorps secondaire :
• anticorps anti-IgG couplé au HRP Système de révélation :
• substrat peroxydase et solution chromogène
Les bandes sont visualisées, semi-quantifiées par densitométrie avec une caméra CCD, puis analysées à l'aide d'un logiciel.
Les résultats sont résumés dans le Tableau 8.
| Taux de SIRT 1 (UA) | Capacité à améliorer la synthèse de SIRT 1 (%) | Taux de FOXO3A (UA) | Capacité à améliorer la synthèse de FOXO3A (%) | |
| Fibroblastes âgés « bien vieillissants » | ||||
| Témoin | 1,165 | 1,755 | ||
| Invention exemple 1 0,50% | 1,372 | 1,857 | ||
| Fibroblastes âgés « mal vieillissants » | ||||
| Témoin | 0,586 | 0,934 | ||
| Invention exemple 1 0,25% | 0,799 | 37 | 1,237 | 37 |
| Invention exemple 1 0,50% | 0,890** | 52 | 1,800* | 105 |
Tableau 8
On constate que testé à 0,50% sur fibroblastes humains « mal vieillissants », un principe actif de rose bulgare selon l'invention permet d'améliorer significativement les synthèses des marqueurs de longévité :
- +52% pourSIRTl;
- +105% pour FOXO3A.
Tests In vivo
Les volontaires participant à cette étude ont été sélectionnés en croisant plusieurs critères :
- femme ;
- 45-65 ans ;
- mal vieillissante (identifié avec le modèle mathématique MDS).
Les volontaires ainsi sélectionnés ont ensuite été répartis en deux groupes de la façon suivante :
Groupe A - Placebo
Groupe de 20 volontaires d'âge compris entre 45 et 60 ans (âge moyen 53 ± 5 ans), ayant appliqué matin et soir la formule placebo en visage entier pendant 56 jours.
Groupe B - Invention
Groupe de 20 volontaires d'âge compris entre 45 et 60 ans (âge moyen 54 ± 4 ans), ayant appliqué matin et soir un hydrolysat de rose bulgare de l'exemple 2 formulé à 2,5% en émulsion en visage entier pendant 56 jours.
Les différents tests réalisés sont représentés schématiquement sur la Figure 9 :
Etude de l'hydratation cutanée Etude des rides du visage et du cou Etude du relâchement du visage Etude de l'éclat du teint Etude de la performance perçue
La composition utilisée pour les tests in vivo présente la formulation suivante :
Isononyl isononanoate (Lanol 99, Seppic) 5,0%
Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside / Arachidyl alcohol (Montanov 202, Seppic) 3,0%
Principe actif de l'exemple 2 2,5%
Cetearyl alcohol / Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2,0%
Conservateurs 0,7%
Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 (Sepigel 305, Seppic) 0,3%
Eau qsp 100%
Les volontaires ont appliqué soit le placebo, soit cette composition en visage entier pendant 56 jours matin et soir en légers massages jusqu'à pénétration. Le protocole opératoire mis en oeuvre est le suivant :
entre J-14 et JO, • Distribution d'une crème placebo à tous les volontaires.
• Applications biquotidiennes sur l'ensemble du visage.
- A JO, • Les volontaires viennent au laboratoire sans avoir appliqué de produit sur le visage le matin (ni crème, ni maquillage).
• Phase d'acclimatation de 15 minutes dans une salle contrôlée en température et hygrométrie.
• Auto-évaluation face au miroir.
• Evaluation visuelle de l'éclat du teint par les experts.
• Réalisation de photographies numériques.
• Détermination d'une zone cutanée au niveau des joues.
• Réalisation des mesures au Cornéomètre® au niveau de cette zone.
• Réalisation des mesures au Cutomètre® au niveau de cette zone.
• Réalisation d'acquisitions par microscopie confocale au niveau d'une zone proche.
• Distribution du produit (placebo ou invention), entre JO et J55, • Applications biquotidiennes du produit (placebo ou invention).
- AJ56, • Les volontaires viennent au laboratoire sans avoir appliqué de produit sur le visage le matin (ni crème, ni maquillage).
• Phase d'acclimatation de 15 minutes dans une salle contrôlée en température et hygrométrie.
• Auto-évaluation face au miroir.
• Evaluation visuelle de l'éclat du teint par les experts.
• Réalisation de photographies numériques.
• Détermination d'une zone cutanée au niveau des joues.
• Réalisation des mesures au Cornéomètre® au niveau de cette zone.
• Réalisation des mesures au Cutomètre® au niveau de cette zone.
• Réalisation d'acquisitions par microscopie confocale au niveau d'une zone proche.
L'effet du placebo et de l'invention a été évalué en étudiant le taux d'évolution entre JO et J56, traduisant la variation entre avant et après traitement.
o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur l'hydratation de la peau
L'objectif de cette étude a été d'évaluer in vivo l'effet d'un principe actif de rose bulgare formulé à 2,5% en émulsion sur l'hydratation de la peau en comparaison à un placebo. Les mesures d'hydratation de la peau ont été réalisées à l'aide d'un Cornéomètre® avant et après 56 jours d'applications biquotidiennes.
Les mesures du taux d'hydratation ont été effectuées à l'aide d'un Cornéomètre® au niveau des joues. Cet appareil est muni d'une sonde qui mesure de façon quantitative et directe, la capacitance électrique de la peau, c'est-à-dire la capacité de l'eau intercellulaire du stratum corneum à conduire les électrons. Cette mesure est reliée directement à l'état d'hydratation de la peau. La localisation des sites de mesures et leur repérage aux différents temps de la cinétique a été assurée par l'utilisation d'un masque de repérage. Les mesures ont été réalisées sur des zones symétriques au niveau des joues. Les résultats obtenus montrent une augmentation du taux d'hydratation de 14% pour les personnes traitées avec l'invention en comparaison au placebo.
L'utilisation d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur la peau participe donc bien à l'amélioration de l'hydratation cutanée.
o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur les rides de la patte d'oie
L'objectif de cette étude a été d'évaluer in vivo l'effet d'un hydrolysat de rose bulgare formulé à 2,5% en émulsion sur les rides de la patte d'oie, en comparaison à un placebo.
L'évaluation des rides de la patte d'oie a été réalisée à l'aide de photographies numériques.
Des photographies du visage ont été réalisées alors que le volontaire était installé sur un banc de repositionnement permettant de limiter ses mouvements et de maîtriser sa position aux différents temps de l'étude.
Les photographies ont été réalisées dans des conditions d'éclairage reproductibles et adaptées pour la mise en évidence des contours du bas du visage Des experts ont évalué ensuite le stade de rides de la patte d'oie de chaque photo sur une échelle de score préalablement définie, chacune des photos ayant été préalablement découpée, codée et randomisée de façon à réaliser cette évaluation totalement en aveugle. L'échelle de score des rides de la patte d'oie est représenté sur la Figure 10. L'évaluation des rides de la patte d'oie a été réalisée selon les recommandations suivantes :
- évaluation de la profondeur de la ride la plus profonde ;
- ne pas tenir compte du nombre de rides ;
- ne pas tenir compte de la longueur des rides ;
- ne pas tenir compte des cicatrices éventuelles.
Les résultats obtenus montrent une diminution du stade de rides au niveau de la patte d'oie de 13,4% pour les personnes traitées avec l'invention en comparaison au placebo. Ainsi, avec l'utilisation d'un principe actif de rose bulgare sur la peau, les rides de la patte d'oie semblent moins visibles permettant à la peau de paraître moins marquée par le temps.
o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur le relâchement du visage
L'objectif de cette étude a été d'évaluer in vivo la capacité d'un principe actif de rose bulgare formulé à 2,5% en émulsion à limiter le relâchement du visage en comparaison à un placebo.
L'étude du relâchement du visage a été étudiée après 56 jours de traitement biquotidien de la façon suivante :
Etude de l'organisation des fibres dans la matrice dermique par microscopie confocale,
Etude des propriétés biomécaniques de la peau par Cutomètre®,
Etude des contours du visage sur photographies par scorage visuel par experts.
Etude de l'organisation des fibres dons la motrice dermique
Des acquisitions ont été réalisées avant et après traitement à l'aide d'un microscope confocal. Une coupe horizontale a été réalisée au niveau du compartiment dermique à l'endroit où les fibres apparaissent nettes.
L'analyse visuelle a été réalisée à l'aide d'une échelle de score comprenant 4 stades par un jury d'experts.
Lors de son évaluation, le jury prend en compte à la fois l'aspect de la matrice dermique et celui des fibres : lorsque la matrice dermique n'est pas altérée comme dans le cas d'une peau jeune ou sur des zones protégées, le collagène apparaît sous forme de structures fibril lai res brillantes et allongées disposées à la façon d'une toile d'araignée.
L'observation d'une peau âgée ou de zones photoexposées montrent, à l'inverse, un collagène composé de fibres épaisses, grossièrement disposées, recroquevillées et fragmentées, présentant un aspect spongieux.
L'illustration de l'aspect de la matrice et des fibres est présenté sur la Figure 11.
Pour le morphotype peau jeune on constate une matrice en toile d'araignée (++) et des fibres allongées (++).
Pour le morphotype peau âgée, on constate une matrice spongieuse (++) et des fibres fragmentées (++).
L'échelle de score est présentée sur la Figure 12.
Les résultats obtenus montrent une amélioration du réseau de la matrice dermique de 36,3% avec l'invention en comparaison au placebo.
Etude des propriétés biomécaniques de la peau
L'étude des propriétés biomécaniques de la peau est réalisée à l'aide d'un Cutomètre® au niveau des joues. La peau est aspirée dans l'orifice d'une sonde par une dépression constante pendant une durée constante.
Plusieurs aspirations successives sont effectuées. La profondeur de pénétration de la peau dans la sonde est mesurée par le biais de deux prismes optiques placés à l'ouverture de la sonde (pas de friction, pas d'effet mécanique). A partir des courbes obtenues il est possible de calculer divers paramètres caractéristiques des propriétés biomécaniques de la peau.
Une courbe type obtenue au cours d'une mesure faisant intervenir 5 aspirations successives de 5 secondes. Parmi les paramètres calculés à partir des courbes obtenues, les paramètres retenus pour quantifier l'évolution des propriétés biomécaniques sous l'effet de l'invention au niveau des joues sont les suivants :
La fermeté de la peau est appréciée par le paramètre suivant :
Paramètre RO
RO = Uf
Si -RO augmente, la fermeté de la peau est plus importante.
L'élasticité de la peau est appréciée par les paramètres suivants :
Paramètre R2 : Elasticité brute (ou capacité de déformation de la peau)
R2 = Ua / Uf
Si R2 augmente, l'élasticité de la peau augmente.
La fatigabilité de la peau est appréciée par le paramètre suivant :
Paramètre R4 : dernière amplitude minimale
Si R4 diminue, « l'effet de fatigue » de la peau est moins important.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 9 ci-dessous :
| Variation / Placebo | |
| Fermeté (Paramètre -RO) | +9,4% |
| Elasticité (Paramètre R2) | +8,8% |
| Fatigabilité (Paramètre R4) | -21,1% |
Tableau 9
Ces résultats montrent qu'un hydrolysat de rose bulgare permet d'améliorer les propriété biomécaniques de la peau, en particulier il :
Améliore la fermeté de la peau
Augmente l'élasticité de la peau
Diminue significativement la fatigabilité de la peau.
Etude du relâchement du bas du visage
Des photographies ont été réalisées selon les mêmes conditions que pour l'étude de l'effet sur les rides de la patte d'oie.
Les experts ont évalué les contours du visage de chaque photo. Cette évaluation a été faite en deux temps, en évaluant deux zones principalement touchées par le relâchement du bas du visage.
Dans un premier temps, l'évaluation du relâchement au niveau de la commissure des lèvres a été réalisée selon les recommandations ci-dessous et en se basant sur l'échelle située page suivante :
- noter le relâchement / affaissement près de la commissure des lèvres ;
- ne pas tenir compte des rides ;
- ne pas tenir compte des cicatrices éventuelles.
L'échelle de score utilisée pour évaluer le relâchement au niveau de la commissure des lèvres est présentée sur la Figure 13.
Dans un second temps, les évaluateurs devaient noter le relâchement sur la partie latérale de la joue en se basant sur les recommandations suivantes :
- noter le relâchement / affaissement de l'ovale du visage au niveau de la mandibule ;
- ne pas tenir compte des rides ;
- ne pas tenir compte des cicatrices éventuelles.
L'échelle de score utilisée pour évaluer le relâchement au niveau de la partie latérale de la joue est présentée sur la Figure 14.
Chacune des photos a été préalablement découpée, codée et randomisée de façon à réaliser cette évaluation totalement en aveugle. La somme des scores obtenus pour les deux zones d'études a été effectuée afin d'obtenir une information de relâchement global du bas du visage. Une diminution de cette valeur est caractéristique d'une amélioration des contours du visage.
Les résultats obtenus montrent une amélioration des contours du visage en réduisant de 13,4% le relâchement global de cette zone.
Ainsi, en améliorant le tissu de soutien, un principe actif de rose bulgare selon l'invention contribue à renforcer les propriété biomécaniques de la peau et à limiter le relâchement cutané, notion importante dans la perception du mal vieillir.
o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur les rides du cou L'objectif de cette étude a été d'évaluer in vivo l'effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention formulé à 2,5% en émulsion sur l'amélioration du microrelief du cou par scorage visuel sur photographies numériques et en comparaison à un placebo.
Des photographies de face ont été réalisées dans des conditions standardisées telles que décrites précédemment.
Un jury composé d'experts a évalué ensuite le stade de rides du cou de chaque photo sur une échelle de score préalablement définie. Chacune des photos ayant été préalablement découpée, codée et randomisée de façon à réaliser cette évaluation totalement en aveugle.
L'échelle de score des rides du cou est présenté sur la Figure 15.
Les résultats obtenus montrent une amélioration du microrelief du cou de 16,1% avec un principe actif de rose bulgare selon l'invention en comparaison à un placebo.
o Effet d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention sur l'éclat du teint L'objectif de cette étude a été d'évaluer in vivo l'effet d'un principe actif de rose bulgare formulé à 2,5% en émulsion sur l'éclat du teint en comparaison à un placebo. L'évaluation de l'éclat du teint a été réalisée en aveugle par des experts entraînés à juger différents paramètres représentatifs de l'éclat du teint.
L'évaluation se fait à partir d'échelles de scores (de 1 à 10) et les paramètres suivants ont été retenus :
le rayonnement de la peau est caractéristique d'un teint éclatant. Plus l'intensité des accroches de lumière sur les zones saillantes du visage est importante plus la peau est lumineuse ;
la couleur rose claire permet de caractériser un teint éclatant. Plus le teint est rosé plus il est perçu comme frais ;
la couleur olive, ce paramètre est représentatif de l'effet bonne mine, si la couleur olive diminue l'effet bonne mine est plus important ;
l'état de fatigue des yeux, en effet le teint paraît plus éclatant lorsque la peau est reposée. L'évaluation de l'aspect des yeux permet d'apprécier la fatigue générale de la peau ;
l'appréciation générale de l'effet bonne mine rend compte de l'homogénéité de couleur et de sa répartition spatiale sur l'ensemble du visage.
L'évaluation de ces différents paramètres se fait sur les zones suivantes :
- pommettes ;
- front ;
- menton ;
- yeux.
Un résumé des résultats obtenus est présenté dans le Tableau 10 ci-dessous :
| Variation / Placebo (%) | |
| Rayonnement | + 7,7 |
| Couleur rose | +12,4 |
| Couleur Olive | -8,7 |
| Etat de fatigue des yeux | -12,3 |
| Effet bonne mine | +15,7 |
Tableau 10
On constate qu'un principe actif de rose bulgare utilisé sur la peau permet : d'améliorer le rayonnement de la peau , d'augmenter le couleur rose caractéristique d'un teint frais de diminuer la couleur olive, de diminuer l'état de fatigue des yeux
- d'améliorer l'aspect bonne mine du visage en contribuant ainsi à contrecarrer un des principaux critères intervenant dans la notion de mal vieillir.
o Evaluation de la performance perçue après utilisation d'un principe actif de rose bulgare selon l'invention
L'objectif de cette étude a été d'évaluer in vivo la performance d'un hydrolysat de rose 20 bulgare formulé à 2,5% en émulsion, perçue par les sujets eux-mêmes, en comparaison à un placebo.
En s'observant dans un miroir, les volontaires devaient répondre aux questions suivantes :
- Evaluez la fatigue de votre visage :
1- Pas de fatigue
2- Fatigue légère
3- Fatigue modérée
4- Fatigue importante
- Evaluez l'éclat de votre teint :
1- Très terne
2- Terne
3- Eclatant
4- Très éclatant
Cette évaluation a été réalisée dans des conditions d'éclairage standardisées avant et après 56 jours d'applications biquotidiennes.
Les résultats obtenus montrent une réduction du niveau de fatigue du visage de 29,1% et une amélioration de l'éclat du teint de 23,8%.
ESSAIS COMPARATIFS DEMONTRANT LA SPECIFITE DE L'INVENTION
Afin de démontrer l'importance des caractéristiques de l'invention, des études comparatives ont été réalisées.
L'objectif de cette étude est de comparer deux hydrolysats de roses d'espèces différentes, obtenues avec un procédé identique, pour démontrer la spécificité de l'espèce sélectionnée pour l'invention.
Les deux espèces comparées sont :
Rosa Damascena (invention), 1 lot Rosa rugosa, 2 lots
L'examen macroscopique botanique ne permet pas de discrimination possible entre les deux espèces.
Un profil HPTLC est réalisé sur des extraits méthanoliques de Rosa Damascena et Rosa rugosa selon les conditions suivantes :
Solubilisation : lg de Rose + 15ml MeOH 60°C 15' + filtration cartouche 0.45pm
Eluant : Acétate d'éthyle / MeOH/Eau (77/15/8)
Dépôts : 2μΙ par échantillon, 5μΙ par standard
Révélateur : Anisaldéhyde sulfurique (170ml MeOH + 20ml CH3C00H + 10ml H2SO4 + 1ml anis aldéhyde) - chauffage 3' 100°C.
L'examen du profil HPTLC (figure 17) montre en revanche que les deux espèces présentent des profils différents et que par conséquent elles ne contiennent pas les mêmes molécules. Les espèces de Rosa peuvent donc être différenciés.
Les poudres des fleurs de deux espèces de Rose subissent ensuite le procédé décrit dans l'exemple 1.
Les résultats sont présentés dans le Tableau 11 ci-dessous :
| Rosa damascena process de l'exemple 1 | Rosa Rugosa process de l'exemple 110 | |
| Matières Sèches | 16,2g/l | 10,4g/l |
| Protéines (Kjeldhal) | l,8g/l (11%) | l,8g/l (17,3%) |
| Sucres Totaux | 6,0g/l (37%) | 4,9g/l (47%) |
Tableau 11
On constate donc que les deux espèces de Rose ne permettent pas d'obtenir le même hydrolysats.
L'effet de l'hydrolysat de Rosa Damascena et de l'hydrolysat de Rosa rugosa a ensuite été étudié sur la migration des fibroblastes humains.
L'étude a été réalisée sur culture de fibroblastes humains issus de donneurs âgés « bien vieillissants » et « mal vieillissants ».
Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant :
A J0, ensemencement :les fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C,
A J4, formation de la zone de blessure : l'insert est retiré de la chambre de culture créant la blessure. Les cellules sont traitées avec les hydrolysats de Rosa Damascena ou de Rosa Rugosa à 0,50% puis incubées à 37°C.
A J7, coloration : les cellules sont colorées avec une solution de crystal violet à 0,5% (M/V). La visualisation est réalisée avec une caméra AxioCam MRc sur microscope couplé à un système d'analyse d'images.
Le ratio de surface occupée par les cellules est calculé de façon automatique grâce à un logiciel.
Les résultats obtenus sont présentés dans le Tableau 12 ci-dessous :
| Ratio surface occupée (UA) | Capacité à améliorer la migration cellulaire (%) | |
| Fibroblastes âgés « bien vieillissants » | ||
| Témoin | 0,425 | |
| Fibroblastes âgés « mal vieillissants » | ||
| Témoin | 0,234 | |
| Hydrolysat de Rosa damascena 0,5% | 0,356 | 64 |
| Hydrolysat de Rosa Rugosa 0,5% | 0,221 | 0 |
Tableau 12
On constate que l'hydrolysat de Rosa Rugosa ne présente aucun effet sur la migration cellulaire, contrairement à l'hydrolysat de Rosa Damascena.
L'invention est donc uniquement identifiée sur la rose bulgare.
Claims (23)
- REVENDICATIONS1. Utilisation dans une composition cosmétique à application topique, d'un principe actif obtenu à partir de Rosa damascena comme principe actif cosmétique pour améliorer l'état des peaux mal vieillissantes.
- 2. Utilisation selon la revendication 1, pour améliorer les paramètres cutanés des peaux mal vieillissantes.
- 3. Utilisation selon l'une des précédentes revendications, pour augmenter l'hydratation des peaux mal vieillissantes.
- 4. Utilisation selon l'une des précédentes revendications, pour réduire le relâchement au niveau du visage des personnes ayant une peau mal vieillissante.
- 5. Utilisation selon l'une des précédentes revendications, pour lisser les rides au niveau du cou des personnes ayant une peau mal vieillissante.
- 6. Utilisation selon l'une des précédentes revendications, pour raviver l'éclat du teint des personnes ayant une peau mal vieillissante.
- 7. Utilisation selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que le principe actif est un hydrolysat de Rosa damascena.
- 8. Utilisation selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que le •principe actif est un hydrolysat de fleur de Rosa damascena.
- 9. Principe actif cosmétique obtenu à partir de rose bulgare comprenant au moins 25% de carbohydrates en poids de matière sèche.
- 10. Principe actif cosmétique selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de Rosa damascena.
- 11. Principe actif cosmétique selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de fleur de Rosa damascena.
- 12. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 8% d'oligosaccharides de masses molaires comprises entre 360 et 6000 Da, en poids de matière sèche.
- 13. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 9 à 12, caractérisé en ce que les carbohydrates présents dans le principe actif comprennent au moins 33% en poids d'oligosaccharides de masses molaires comprises entre 360 et 6000 Da.
- 14. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 9 à 13, caractérisé en ce qu'il comprend moins de 20% de protéines en poids de matière sèche.
- 15. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 9 à 14, caractérisé en ce qu'il obtenu par hydrolyse de rose bulgare avec une carbohydrase.
- 16. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que le principe actif est un principe actif selon l'une des revendications 9 à 15.
- 17. Composition cosmétique comprenant au moins 0,25% d'un principe actif cosmétique selon l'une des revendications 9 à 15.
- 18. Composition cosmétique selon la revendication 17, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crème, lotion, lait, sérum, pommade, gel, pâte, mousse, ou sous forme solide
- 19. Procédé de traitement cosmétique pour améliorer l'état des peaux mal vieillissantes comprenant l'application sur la peau d'une composition incluant un principe actif obtenu à partir de Rosa damascena.
- 20. Procédé de traitement cosmétique selon la revendication 19 comprenant l'application sur la peau au moins une fois par jour d'une composition incluant un principe actif de Rosa damascena.
- 21. Procédé de traitement cosmétique selon l'une des revendications 19 ou 20, pour augmenter l'hydratation des peaux mal vieillissantes, et/ou réduire le relâchement au niveau du visage des personnes ayant une peau mal vieillissante, et/ou lisser les rides au niveau du cou des personnes ayant une peau mal vieillissante, et/ou raviver l'éclat du teint des personnes ayant une peau mal vieillissante.
- 22. Procédé de traitement cosmétique selon l'une des revendications 19 à 21, caractérisé en ce que le principe actif de rose bulgare est un principe actif selon l'une des revendications 9 à 15.
- 23. Procédé de traitement cosmétique selon l'une des revendications 19 à 21, caractérisé en ce que la composition est une composition selon l'une des revendications 17 ou 18.1/11
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|---|---|---|---|
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Applications Claiming Priority (2)
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR3055545B1 (fr) | 2020-02-28 |
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