FR3049461A1 - USE OF A PLANT EXTRACT OF POUTERIA LUCUMA FRUIT IN A COSMETIC COMPOSITION - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne l'utilisation dans une composition cosmétique d'au moins une quantité efficace d'un extrait du fruit de Pouteria lucuma, constitué de la peau et/ou de la pulpe, comme principe actif destiné à apporter un effet énergisant à la peau, à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané et à hydrater la peau. L'invention concerne également le procédé de préparation d'un extrait du fruit de Pouteria lucuma, constitué de la peau et/ou de la pulpe, et l'extrait obtenu par le dit procédé. L'invention concerne encore une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable une quantité efficace d'un extrait du fruit de Pouteria lucuma, constitué de la peau et/ou de la pulpe fraiche ou séchée. L'invention concerne aussi un procédé de traitement cosmétique.The invention relates to the use in a cosmetic composition of at least one effective amount of an extract of the Pouteria lucuma fruit, consisting of the skin and / or the pulp, as an active ingredient intended to provide an energizing effect on the skin. skin, to prevent and / or fight against skin aging and to moisturize the skin. The invention also relates to the process for preparing an extract of Pouteria lucuma fruit, consisting of the skin and / or the pulp, and the extract obtained by said process. The invention also relates to a cosmetic composition comprising, in a physiologically acceptable medium, an effective amount of an extract of Pouteria lucuma fruit, consisting of skin and / or fresh or dried pulp. The invention also relates to a cosmetic treatment method.
Description
UTILISATION D’UN EXTRAIT VÉGÉTAL DU FRUIT DE POUTERIA LUCUMA DANS UNE COMPOSITION COSMÉTIQUE.USE OF A PLANT EXTRACT OF POUTERIA LUCUMA FRUIT IN A COSMETIC COMPOSITION.
La présente invention se situe dans le domaine cosmétique. L’invention concerne un extrait végétal en tant que principe actif et son utilisation dans une composition cosmétique. L’invention concerne plus précisément l’utilisation d’un extrait du fruit de Pouteria lucuma comme actif cosmétique pour apporter un effet énergisant à la peau, pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané et pour hydrater et améliorer la fonction barrière de la peaurThe present invention is in the cosmetic field. The invention relates to a plant extract as an active ingredient and its use in a cosmetic composition. The invention relates more specifically to the use of an extract of the fruit of Pouteria lucuma as a cosmetic active agent to provide an energizing effect on the skin, to prevent and / or fight against skin aging and to moisturize and improve the barrier function of the skin. peaur
Dans nos sociétés, l'esthétisme et l'apparence prennent une place de plus en plus importante. Pour améliorer leur image, beaucoup de gens ont tendance à vouloir paraître jeunes le plus longtemps possible et cherchent à estomper les manifestations visibles du vieillissement de la peau. C'est pourquoi l'objectif de la présente invention est de proposer un produit cosmétique permettant de pallier aux effets néfastes du soleil et du temps sur la peau humaine.In our societies, aesthetics and appearance are becoming more and more important. To improve their image, many people tend to want to look young for as long as possible and try to fade visible manifestations of aging skin. This is why the objective of the present invention is to provide a cosmetic product that overcomes the harmful effects of the sun and weather on human skin.
Les inventeurs de la présente demande de brevet ont découvert de manière surprenante qu’un extrait de plante particulier permet, intégré dans une composition cosmétique, de procurer un effet énergisant à la peau, de lutter efficacement contre le vieillissement cutané et limiter l'apparition des effets néfastes qui en découlent et de favoriser la fonction barrière de la peau pour améliorer l’hydratation cutanée.The inventors of the present patent application have surprisingly discovered that a particular plant extract makes it possible, integrated in a cosmetic composition, to provide an energizing effect on the skin, to fight effectively against cutaneous aging and to limit the appearance of resulting adverse effects and promote the barrier function of the skin to improve skin hydration.
Pouteria lucuma (Lucuma) est un arbre de la famille des Sapotaceae, indigènes du Pérou, qui donne un fruit connu sous le nom de lucuma dans les Andes. La lucuma (le fruit) est apprécié dans les desserts, particulièrement sous forme de glace, produits laitiers ou de gâteau. La lucuma comprend une peau, un noyau et de la pulpe. C’est la pulpe qui est communément utilisée sous forme de poudre ou de tranches séchées dans les diverses compositions alimentaires.Pouteria lucuma (Lucuma) is a tree of the family Sapotaceae, indigenous to Peru, which gives a fruit known as lucuma in the Andes. Lucuma (the fruit) is appreciated in desserts, especially in the form of ice cream, dairy products or cake. The lucuma includes a skin, a nucleus and pulp. This is the pulp which is commonly used in the form of dried powder or slices in the various food compositions.
Il est connu que la lucuma est une bonne source d'hydrates de carbone, de vitamines (niacine, bêta-carotène)\ de sels minéraux (fer) et de fibres alimentaires^.It is known that lucuma is a good source of carbohydrates, vitamins (niacin, beta-carotene), mineral salts (iron) and dietary fiber.
On connaît également des demandes de brevet US20110318403 et EP2352489 un procédé de préparation d'un extrait de Pouteria lucuma, lequel procédé comprend l'extraction d'huile à partir du noyau. L'huile du noyau de Lucuma est décrite comme efficace pour induire une migration cellulaire, améliorer une régénérescence tissulaire et améliorer une cicatrisation de plaie. Ce document divulgue par conséquent que l’huile du noyau de Lucuma est utile pour l'entretien thérapeutique ou cosmétique de la peau et du cuir chevelu.Also known are patent applications US20110318403 and EP2352489, a process for preparing an extract of Pouteria lucuma, which process comprises extracting oil from the core. The Lucuma nucleus oil is described as effective in inducing cell migration, improving tissue regeneration and improving wound healing. This document discloses, therefore, that the Lucuma core oil is useful for the therapeutic or cosmetic maintenance of the skin and scalp.
Contre toute attente, les inventeurs ont constaté qu’un extrait de peau et/ou de pulpe du fruit de Lucuma dans une composition cosmétique permet efficacement d’apporter un effet énergisant à la peau, de prévenir el/ou lutter contre le vieillissement cutané et d’hydrater la peau.Unexpectedly, the inventors have found that a skin extract and / or pulp of Lucuma fruit in a cosmetic composition can effectively provide an energizing effect on the skin, prevent and / or fight against skin aging and to moisturize the skin.
La peau est un organe vital composé de plusieurs couches (derme, couches prolifératives et stratum corneum) qui recouvre toute la surface du corps et assure essentiellement une fonction de barrière vis-à-vis du milieu extérieur. Cette fonction barrière repose en particulier sur la qualité de l'épiderme qui dépend notamment de l’état du stratum corneum et de l'équilibre entre la prolifération et la différenciation des kératinocytes épidermiques.The skin is a vital organ composed of several layers (dermis, proliferative layers and stratum corneum) which covers the entire surface of the body and essentially provides a barrier function vis-à-vis the external environment. This barrier function is based in particular on the quality of the epidermis which depends in particular on the state of the stratum corneum and the balance between proliferation and differentiation of epidermal keratinocytes.
Les kératinocytes sont des cellules constituant 90% de la couche superficielle de la peau (épiderme) et des phanères (ongles, cheveux, poils). Ils synthétisent la kératine, une protéine fibreuse et insoluble dans l’eau, qui assure à la peau sa propriété d’imperméabilité et de protection extérieure. L'épiderme est divisé en quatre couches basées sur la morphologie des kératinocytes, lesquels passent progressivement de la couche basale vers les couches supérieures par différenciation cellulaire jusqu'au stratum corneum ou ils forment une couche de cellules mortes nommées squames, par apoptose. Cette couche constitue une barrière de protection et réduit la perte d'eau de l'organisme. Les kératinocytes sont en perpétuel renouvellement. Us mettent environ 1 mois pour aller de la couche basale au stratum corneum mais ce processus peut être accéléré en cas d'hyperprolifération de kératinocytes (psoriasis).Keratinocytes are cells constituting 90% of the superficial layer of the skin (epidermis) and integuments (nails, hair, hair). They synthesize keratin, a fibrous and insoluble protein in water, which gives the skin its impermeability and external protection properties. The epidermis is divided into four layers based on the morphology of the keratinocytes, which pass gradually from the basal layer to the upper layers by cell differentiation to the stratum corneum or they form a layer of dead cells called dander, by apoptosis. This layer is a protective barrier and reduces the loss of water in the body. Keratinocytes are in perpetual renewal. It takes about 1 month to go from the basal layer to the stratum corneum but this process can be accelerated in case of hyperproliferation of keratinocytes (psoriasis).
La modulation de la différenciation des kératinocytes est un processus biologique qui peut intervenir dans le traitement des manifestations du vieillissement cutané, que ce soit tant dans la fonction barrière de la peau que dans la formation des rides. Comme actif inhibant la différentiation des kératinocytes on peut citer les rétinoïdes (rétinol, acide rétinoïque entre autres) qui sont reconnus comme principes actifs cosmétiques et dermatologiques agissant contre de nombreux problèmes cutanés tels que le psoriasis, l’acné et les rides.^’"^ Cependant, les rétinoïdes induisent une inflammation de la peau incitant des laboratoires de recherche a investiguer de nouveaux actifs rétinoïde-like inhibiteurs de la différenciation des kératinocytes non inflammatoires.^The modulation of keratinocyte differentiation is a biological process that can intervene in the treatment of the manifestations of skin aging, both in the barrier function of the skin and in the formation of wrinkles. As active agents that inhibit the differentiation of keratinocytes, mention may be made of retinoids (retinol, retinoic acid, among others) which are recognized as active cosmetic and dermatological active ingredients against numerous skin problems such as psoriasis, acne and wrinkles. ^ However, retinoids induce inflammation of the skin prompting research laboratories to investigate novel retinoid-like inhibitory agents for the differentiation of noninflammatory keratinocytes.
Les fibroblastes sont des cellules présentes dans le tissu conjonctif, elles sont parfois appelées cellules de soutien. Ce sont notamment des cellules résidentes du derme qui en assurent la cohérence et la souplesse. Elles sécrètent des protéoglycanes et des glycoprotéines. Elles sécrètent notamment du collagène, de l’élastine et des fibrillines dont la fibrilline 1.Fibroblasts are cells found in connective tissue, sometimes called support cells. It is in particular resident cells of the dermis that ensure consistency and flexibility. They secrete proteoglycans and glycoproteins. They secrete in particular collagen, elastin and fibrillins including fibrillin 1.
La fibrilline 1 est une glycoprotéine qui appartient à une famille de protéines comprenant trois membres, dont leur régulation reste mal connue aujourd’hui. Elle est sécrétée à la fois par les fibroblastes et par les kératinocytes. Elle constitue l’élément majeur des microfibrilles dans les matrices extracellulaires élastiques et non élastiques. La fibrilline 1 participe donc à la formation des fibres et leurs propriétés fonctionnelles et structurales jouent un rôle primordial dans l’élasticité du tissu conjonctif, notamment au niveau de la jonction dermo-épidermique. En effet, elle permet un ancrage des cellules épidermiques aux fibres élastiques du derme.Fibrillin 1 is a glycoprotein that belongs to a family of proteins comprising three members, whose regulation remains poorly known today. It is secreted by both fibroblasts and keratinocytes. It is the major element of microfibrils in elastic and non-elastic extracellular matrices. Fibrillin 1 thus participates in the formation of fibers and their functional and structural properties play a key role in the elasticity of the connective tissue, especially at the level of the dermal-epidermal junction. Indeed, it allows an anchoring of the epidermal cells to the elastic fibers of the dermis.
Au niveau du derme, on observe avec l'âge une diminution d'activité des fibroblastes avec une baisse de leur prolifération, de biosynthèse et d'échanges avec la matrice extracellulaire, ainsi qu'une altération des fibres de soutien tant qualitative que quantitative.At the level of the dermis, we observe with age a decrease in fibroblast activity with a decrease in their proliferation, biosynthesis and exchanges with the extracellular matrix, as well as an alteration of both qualitative and quantitative support fibers.
Au niveau de la jonction dermo-épidermique apparaît un aplatissement qui entraîne une diminution de la cohésion entre ces deux zones (derme et épiderme), avec raréfaction des éléments du derme et ainsi que des fibres d'ancrage, ce qui a pour conséquence une baisse des échanges métaboliques et la formation des rides.At the level of the dermal-epidermal junction, a flattening appears which causes a decrease of the cohesion between these two zones (dermis and epidermis), with rarefaction of the elements of the dermis and as well as fibers of anchorage, which results in a decrease metabolic exchanges and the formation of wrinkles.
La fibrilline 1 est citée, parfois avec l’élastine, comme protéine impliquée dans les processus de fermeté et d’élasticité^’’, agissant dans le mécanisme anti-âge*’^’^*’’^^’^^’^'’, et est notamment utilisée comme biomarqueur de l’accélération du vieillissement par les rayons ultra-viol ets^^’^"^’*^, et/ou pour le traitement de certains processus cicatriciels comme pour les vergetures. L’activation de la synthèse de la fibrilline 1 permettrait ainsi de traiter les peaux vieillies intrinsèquement, dit génétiquement programmé ou chronologique, ou extrinsèquement, notamment dues à un stress oxydatif comme les UV, le tabac ou la pollution et de traiter les cicatrices de la peau.Fibrillin 1 is mentioned, sometimes with elastin, as a protein involved in the processes of firmness and elasticity, acting in the anti-aging mechanism. It is used in particular as a biomarker for the acceleration of aging by ultraviolet rays and / or for the treatment of certain cicatricial processes as well as for stretch marks. The synthesis of fibrillin 1 would thus make it possible to treat aged skin inherently, genetically programmed or chronological, or extrinsically, particularly due to oxidative stress such as UV, tobacco or pollution and to treat scars of the skin.
Ainsi, les fibroblastes et les kératinocytes jouent un rôle primordial dans le processus biologique de la peau notamment par la sécrétion de la fibrilline 1, pour réguler la fermeté, l’élasticité, la cohésion cellulaire et dans le processus de cicatrisation et du vieillissement de la peau.Thus, fibroblasts and keratinocytes play a primordial role in the biological process of the skin, in particular by the secretion of fibrillin 1, to regulate firmness, elasticity, cell cohesion and in the process of healing and aging of the skin. skin.
Au cours du vieillissement cutané, la peau devient sèche. Ainsi, il est très souvent constaté chez les sujets âgés, et notamment de plus de 50 ans, la manifestation d'une xérose ou d’une sécheresse des muqueuses, liée à une moindre sécrétion de sébum, à des modifications hormonales ou à des ralentissements du flux hydrique à travers l’épiderme. La peau est alors le siège de démangeaisons et de tiraillements, deux symptômes caractéristiques d'une peau sèche. Parmi les pathologies acquises se traduisant par une sécheresse de la peau, on peut citer la xérose induite par la photo-chimiothérapie et l’eczéma. Parmi les pathologies acquises provoquant une sécheresse de la bouche, ou xérostomie, on peut citer le syndrome de Sjogren ou la radiothérapie du cou. Enfin, parmi les pathologies impliquant une sécheresse des muqueuses, on peut citer les sécheresses oculaires ou vaginales.During skin aging, the skin becomes dry. Thus, it is very often found in the elderly, and in particular over 50 years, the manifestation of xerosis or dryness of the mucous membranes, related to a lower secretion of sebum, hormonal changes or slowdowns water flow through the epidermis. The skin is then the seat of itching and tugging, two characteristic symptoms of dry skin. Acquired pathologies resulting in dry skin include xerosis induced by photochemotherapy and eczema. Among the pathologies acquired causing a dry mouth, or xerostomia, mention may be made of Sjogren's syndrome or radiotherapy of the neck. Finally, among the pathologies involving dryness of the mucous membranes, mention may be made of ocular or vaginal dryness.
Pour pallier à ces problèmes de sécheresse et vieillissement de la peau, il est communément utilisé des produits par voie topique destinés à restaurer la barrière cutanée. On peut citer les agents humectants, les agents filmogènes, les molécules de type rétinoïde et les agents capables de reconstruire la barrière cutanée comme le squalène par exemple.To alleviate these problems of dryness and aging of the skin, it is commonly used topically products intended to restore the skin barrier. Mention may be made of humectants, film-forming agents, retinoid-type molecules and agents capable of reconstructing the cutaneous barrier, such as squalene, for example.
Dans la présente invention, un extrait naturel de peau et/ou de pulpe du fruit de Lucuma est avantageusement utilisé dans une composition cosmétique et permet efficacement d’apporter un effet énergisant à la peau. Il est ainsi démontré dans la présente invention qu’un extrait de Lucuma selon l’invention stimule l’activité de la chaîne respiratoire de la mitochondrie et augmente la production d’ATP (adénosine triphosphate) sans pour autant produire des radicaux libres de type ROS (Reactive Oxygen Species) connus pour causer des dommages significatifs aux cellules.In the present invention, a natural extract of skin and / or pulp of Lucuma fruit is advantageously used in a cosmetic composition and effectively provides an energizing effect on the skin. It is thus demonstrated in the present invention that a Lucuma extract according to the invention stimulates the activity of the respiratory chain of the mitochondria and increases the production of ATP (adenosine triphosphate) without producing free radicals of the ROS type. (Reactive Oxygen Species) known to cause significant cell damage.
La mitochondrie est vitale à la cellule car elle agit comme une pile et fournit l’énergie pour le fonctionnement des cellules sous forme d’ATP. L’extrait de Lucuma selon l’invention revitalise la mitochondrie et apporte une énergie renouvelée aux cellules en stimulant le taux de consommation d’oxygène et le niveau d’ATP cellulaire.The mitochondrion is vital to the cell because it acts as a battery and provides energy for cell function in the form of ATP. The Lucuma extract according to the invention revitalizes the mitochondria and brings renewed energy to the cells by stimulating the rate of oxygen consumption and the level of cellular ATP.
Il est par ailleurs démontré dans la présente invention que l’extrait de Lucuma selon l’invention permet de; - limiter le vieillissement en augmentant l’expression des protéines principales impliquées dans le phénotype du vieillissement tel que le collagène-1 et Télastine, - limiter le photo vieillissement cutané en aidant à réduire le vieillissement prématuré de la peau induit par les UV (ultra-violet) en agissant sur la fibrilline-1, - limiter Tépivieillissement en réduisant le taux de méthylation de l’ADN.It is furthermore demonstrated in the present invention that the Lucuma extract according to the invention makes it possible to; - limit aging by increasing the expression of the main proteins involved in the aging phenotype such as collagen-1 and telastine, - limit skin aging by helping to reduce the premature aging of UV-induced skin (ultra- violet) by acting on Fibrillin-1, - limit the epitope aging by reducing the methylation rate of the DNA.
Dans la présente invention, on entend par : ^ « quantité efficace » la quantité nécessaire d’un extrait de la peau et/ou de la pulpe du fruit de Pouteria lucuma pour obtenir le résultat recherché. “extrait végétal de Lucuma” ou “extrait du fruit de Lucuma” l’extrait de la peau et/ou de la pulpe de Lucuma selon l’invention. Il s’agit de l’extrait global comprenant le solvant. “L’extrait sec” ou “matière sèche” représente une partie de l’extrait végétal. L’extrait séché est l’extrait végétal ayant subi une étape de séchage. « application topique », le fait d’appliquer ou d’étaler le principe actif selon l’invention, ou une composition le contenant, à la surface de la peau, d’une muqueuse ou des phanères. « cosmétiquement acceptable», que l’extrait végétal selon l’invention, ou une composition le contenant, est approprié pour entrer en contact avec la peau ou une muqueuse sans provoquer de réactions de toxicité ou d’intolérance. « milieu physiologiquement acceptable », une solution aqueuse ou hydro alcoolique, une émulsion eau-dans-huile, une émulsion huile-dans-eau, une microémulsion, un gel aqueux, un gel anhydre, un sérum, une dispersion de vésicules, une poudre. Ce milieu physiologiquement acceptable forme ce que l'on appelle classiquement l'excipient de la composition. « vieillissement de la peau», toutes modifications de l’aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d’élasticité et/ou de tonus de la peau, la peau terne et sans éclat ou les taches de pigmentation de la peau, la décoloration des cheveux ou les taches sur les ongles, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, toute dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux rayonnements ultraviolets (UV) que l’on nomme photo-vieillissement, toute dégradation de l’ADN par méthylation de ce dernier que l’on nomme épivieillissement. « Effet énergisante à la peau » humaine, un effet ou activité augmentant le métabolisme énergétique cellulaire par stimulation de la chaîne respiratoire de la mitochondrie des cellules et augmentation de la production d’ATP.In the present invention, the term "effective amount" means the necessary amount of an extract of the skin and / or pulp of the fruit of Pouteria lucuma to achieve the desired result. "Lucuma plant extract" or "Lucuma fruit extract" means the extract of the skin and / or Lucuma pulp according to the invention. This is the global extract comprising the solvent. "The dry extract" or "dry matter" represents a part of the plant extract. The dried extract is the plant extract having undergone a drying step. "Topical application", the act of applying or spreading the active principle according to the invention, or a composition containing it, on the surface of the skin, a mucous membrane or superficial body growths. "Cosmetically acceptable", that the plant extract according to the invention, or a composition containing it, is suitable for coming into contact with the skin or mucosa without causing toxicity or intolerance reactions. "Physiologically acceptable medium" means an aqueous or hydroalcoholic solution, a water-in-oil emulsion, an oil-in-water emulsion, a microemulsion, an aqueous gel, an anhydrous gel, a serum, a dispersion of vesicles, a powder . This physiologically acceptable medium forms what is conventionally called the excipient of the composition. "Skin aging" means any changes in the external appearance of the skin and skin appendages due to aging such as, for example, wrinkles and fine lines, wilted skin, soft skin, thinned skin, lack of elasticity and / or skin tone, dull and dull skin or skin pigmentation spots, discolouration of hair or spots on the nails, but also any internal changes in the skin that do not systematically result in a modified external appearance, such as, for example, any internal degradation of the skin resulting from exposure to ultraviolet (UV) radiation that is called photo-aging, any degradation of the DNA by methylation of the latter, which is called épivieillissement. A "human energizing effect on the skin", an effect or activity that increases cellular energy metabolism by stimulating the respiratory chain of cell mitochondria and increasing the production of ATP.
La démonstration des activités de l’extrait de Lucuma selon l’invention est donnée : - pour l’activité prévention et/ou lutte contre le vieillissement, ou activité rajeunissante, dans l’exemple 5 avec les cibles collagène I, élastine et fibrilline 1. Les tableaux présentent les résultats obtenus sur ces différentes cibles. La méthylation de l’ADN a été testée également dans l’exemple 5 et les résultats sont donnés dans le tableau. - pour l’effet énergisant, dans l’exemple 6. Sont quantifiées la consommation de dioxygène (02), le niveau d’ATP cellulaire et le potentiel pro-oxydant de l’extrait de Lucuma dans les cellules vivantes. Les résultats sont donnés dans les figures lA, IB, IC et ID. - pour l’activité hydratation cutanée, dans l’exemple 7.The demonstration of the activities of the extract of Lucuma according to the invention is given: - for the activity prevention and / or fight against aging, or rejuvenating activity, in Example 5 with the targets collagen I, elastin and fibrillin 1 The tables present the results obtained on these different targets. The methylation of the DNA was also tested in Example 5 and the results are given in the table. for the energizing effect, in example 6. The dioxygen consumption (02), the level of cellular ATP and the prooxidant potential of the Lucuma extract in living cells are quantified. The results are given in FIGS. 1A, 1B, 1C and 1D. for the cutaneous hydration activity, in Example 7.
Les exemples 1 à 4 présentent différentes préparations d’un extrait de Lucuma selon l’invention.Examples 1 to 4 show different preparations of a Lucuma extract according to the invention.
Les exemples 8 à 20 sont différentes formes cosmétiques des compositions selon l’invention.Examples 8 to 20 are different cosmetic forms of the compositions according to the invention.
Ainsi, un premier objet selon l’invention concerne l’utilisation, dans une composition cosmétique, d’au moins une quantité efficace d’un extrait du fruit de Pouteria lucuma, constitué de la peau et/ou de la pulpe, comme principe actif destiné à apporter un effet énergisant à la peau, pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané et pour hydrater la peau.Thus, a first object according to the invention relates to the use, in a cosmetic composition, of at least one effective amount of an extract of the fruit of Pouteria lucuma, consisting of the skin and / or the pulp, as active principle intended to provide an energizing effect on the skin, to prevent and / or fight against skin aging and to moisturize the skin.
Dans la présente invention, la peau et la pulpe du fruit de Lucuma peuvent être utilisée seule ou en mélange et peuvent être de constitution fraiche ou sêchêe pour la mise en œuvre du procédé de préparation de l’extrait.In the present invention, the skin and pulp of the Lucuma fruit can be used alone or as a mixture and can be of fresh or dried constitution for the implementation of the method of preparation of the extract.
Dans un mode de réalisation préférentiel, l’extrait du fruit de Pouteria lucuma est un extrait obtenu à partir de la pulpe du fruit séchée.In a preferred embodiment, the fruit extract of Pouteria lucuma is an extract obtained from the dried fruit pulp.
Dans un autre mode de réalisation préférentielle selon l’invention, la quantité efficace est une teneur en extrait végétal allant lO'"^ à 5% en poids, plus préférentiellement de 10" ^ à 3% en poids, et plus préférentiellement encore de 10'^ à 3% en poids par rapport au poids total de la composition.In another preferred embodiment according to the invention, the effective amount is a vegetable extract content ranging from 10% to 5% by weight, more preferably from 10% to 3% by weight, and more preferably from 10% to 3% by weight. 3% by weight relative to the total weight of the composition.
La quantité efficace d’extrait végétal correspond à la quantité nécessaire pour obtenir le résultat recherché, à savoir, procurer un effet énergisant à la peau, améliorer l’hydratation de l’épiderme et prévenir et/ou à lutter contre les manifestations du vieillissement cutané.The effective amount of plant extract corresponds to the quantity necessary to obtain the desired result, namely, to provide an energizing effect on the skin, to improve the hydration of the epidermis and to prevent and / or fight against the manifestations of cutaneous aging. .
Un second objet selon l’invention est le procédé de préparation d’un extrait végétal constitué de la peau et/ou la pulpe du fruit de Pouteria lucuma comprenant les étapes successives suivantes : (a) dispersion et extraction dans un solvant aqueux et/ou alcoolique et/ou glycérolique et/ou glycolique de peau et/ou de pulpe de fruit de Pouteria lucuma, (b) décantation et/ou centrifugation et/ou filtration clarifiante de l’extrait obtenu suite à l’étape (a) ; (c) microfiltration de l’extrait obtenu à l’étape (b) ; (d) récupération de l’extrait de fruit de Lucuma ; (e) le cas échéant, ultrafiltration et/ou nanofiltration de l’extrait obtenu à l’étape (c) ; puis (f) séchage éventuel de l’extrait obtenu à l’étape (e) avec ou sans support de séchage.A second object according to the invention is the process for preparing a plant extract consisting of the skin and / or the fruit pulp of Pouteria lucuma comprising the following successive stages: (a) dispersion and extraction in an aqueous solvent and / or alcoholic and / or glycerol and / or glycolic skin and / or fruit pulp Pouteria lucuma, (b) decantation and / or centrifugation and / or clarifying filtration of the extract obtained following step (a); (c) microfiltering the extract obtained in step (b); (d) recovery of Lucuma fruit extract; (e) where appropriate, ultrafiltration and / or nanofiltration of the extract obtained in step (c); and then (f) optionally drying the extract obtained in step (e) with or without a drying medium.
La peau et la pulpe du fruit de Lucuma peuvent être utilisée seule ou en mélange.The skin and pulp of Lucuma fruit can be used alone or mixed.
Le procédé de préparation de l’extrait est effectué sur la peau et/ou la pulpe fraîche ou séchée du fruit de Lucuma.The process for preparing the extract is carried out on the skin and / or the fresh or dried pulp of the Lucuma fruit.
Dans un mode de réalisation préférentiel, lors de l’étape (a), on utilise de la poudre de peau et/ou pulpe du fruit de Pouteria lucuma et plus particulièrement la pulpe, dans les proportions suivantes : entre 0,1 et 20% en poids de matière sèche de poudre, et préférentiellement entre 1 et 15%, typiquement entre 5 et 10%, les pourcentages étant exprimés en poids de matière sèche par rapport au poids total mis en œuvre (poudre de pulpe + solvant). L’extraction de l’étape (a) se fait avantageusement sous agitation, classiquement ou avec ultrasons.In a preferred embodiment, during step (a), the skin powder and / or pulp of the fruit of Pouteria lucuma and more particularly the pulp are used, in the following proportions: between 0.1 and 20% by weight of powder solids, and preferably between 1 and 15%, typically between 5 and 10%, the percentages being expressed by weight of dry matter relative to the total weight used (pulp powder + solvent). The extraction of step (a) is preferably carried out with agitation, conventionally or with ultrasound.
Lors de l’étape (a), on utilise avantageusement les solvants seuls ou en mélange tels que l’eau, l’éthanol, le glycérol ou le propanediol, dans une proportion avantageusement comprise entre 10% et 90% de ces solvants dans l’eau et plus avantageusement entre 50 et 80% dans l’eau (les % sont exprimés en poids du solvant par rapport au poids total solvant+eau).In step (a), use is advantageously made of the solvents alone or as a mixture, such as water, ethanol, glycerol or propanediol, in a proportion advantageously between 10% and 90% of these solvents. water and more preferably between 50 and 80% in water (the% are expressed by weight of the solvent relative to the total weight solvent + water).
De manière plus avantageuse encore, la poudre de pulpe de fruit séchée sera utilisée. Les fruits mûrs sont désinfectés, pelés et égrainés avant d’être déshydratés à l’air chaud puis broyés ou cryobroyée à l’aide d’un broyeur tel qu’un broyeur à couteaux ou à marteaux. L’extrait de Lucuma est obtenu par extraction solide-liquide de la peau et/ou la pulpe de fruit séchée et broyée de Pouteria lucuma dans un solvant choisi dans le groupe constitué par l’eau, les alcools tels que l’éthanol, le glycérol, les glycols tels que le propanediol, et leurs mélanges tels que des mélanges binaires, dans des proportions comprises entre 0% et 100% d’eau par rapport aux autres solvants.Even more advantageously, the dried fruit pulp powder will be used. The ripe fruits are disinfected, peeled and degraded before being dehydrated with hot air and crushed or cryocreduced using a grinder such as a knife or hammer mill. The Lucuma extract is obtained by solid-liquid extraction of the skin and / or the dried and ground fruit pulp of Pouteria lucuma in a solvent selected from the group consisting of water, alcohols such as ethanol, glycerol, glycols such as propanediol, and mixtures thereof such as binary mixtures, in proportions of between 0% and 100% water relative to other solvents.
Dans un mode de réalisation préféré selon l’invention, l’extrait de Lucuma est obtenu par extraction solide-liquide de la pulpe de fruit séchée et broyée de Pouteria lucuma dans un solvant choisi dans le groupe constitué par l’eau, les alcools tels que l’éthanol, le glycérol, les glycols tels que le propanediol, et leurs mélanges tels que des mélanges binaires, plus avantageusement dans des proportions comprises entre 0% et 90% d’eau par rapport aux autres solvants.In a preferred embodiment according to the invention, the Lucuma extract is obtained by solid-liquid extraction of the dried and ground fruit pulp of Pouteria lucuma in a solvent selected from the group consisting of water, alcohols such as ethanol, glycerol, glycols such as propanediol, and mixtures thereof such as binary mixtures, more preferably in proportions of between 0% and 90% water relative to other solvents.
De manière particulièrement avantageuse, on utilise des mélanges binaires de solvant du type eau et un solvant choisi parmi l’éthanol, le glycérol ou le propanediol.Particularly advantageously, binary mixtures of water-type solvent and a solvent chosen from ethanol, glycerol or propanediol are used.
Dans un mode de réalisation très préférentiel, le solvant d’extraction est un solvant hydro-alcoolique, tel qu’un mélange eau-éthanol, et/ou hydro-glycérolique, et/ou hydro-glycolique, tel qu’un mélange eau propanediol, avantageusement dans une proportion comprise entre 30 et 90% d’alcool, et/ou de glycérol, et/ou de glycol dans l’eau.In a very preferred embodiment, the extraction solvent is a hydro-alcoholic solvent, such as a water-ethanol and / or hydro-glycerol and / or hydro-glycolic mixture, such as a propanediol-water mixture. , advantageously in a proportion of between 30 and 90% alcohol, and / or glycerol, and / or glycol in water.
Plus particulièrement, dans le cadre de l’extraction solide-liquide de la pulpe de fruit séchée de Pouteria lucuma, on introduit entre 0,1 et 20% en poids (matière sèche) de partie de plante souhaitée dans le solvant d’extraction, et préférentiellement entre 1 et 15% en poids, typiquement entre 5 et 10% en poids (les % étant exprimés en poids de la matière sèche par rapport au poids total mis en œuvre). En particulier, en présence d’éthanol, on choisit une proportion comprise entre 0 et 100% d’éthanol dans l’eau, préférentiellement entre 10 et 90% d’éthanol, et avantageusement entre 60 et 80% (les % sont exprimés en poids d’éthanol par rapport au poids total eau+éthanol).More particularly, in the context of the solid-liquid extraction of the dried fruit pulp of Pouteria lucuma, between 0.1 and 20% by weight (dry matter) of desired plant part is introduced into the extraction solvent, and preferably between 1 and 15% by weight, typically between 5 and 10% by weight (the% being expressed by weight of the dry matter relative to the total weight used). In particular, in the presence of ethanol, a proportion of between 0 and 100% of ethanol in water is chosen, preferably between 10 and 90% of ethanol, and advantageously between 60 and 80% (the% is expressed as weight of ethanol relative to the total weight of water + ethanol).
En particulier, en présence de glycérol, on choisit une proportion comprise entre 0 et 100% de glycérol dans l’eau, préférentiellement entre 30 et 90% de glycérol, et avantageusement entre 50 et 80% (les % sont exprimés en poids de glycérol par rapport au poids total eau+glycérol).In particular, in the presence of glycerol, a proportion of between 0 and 100% of glycerol in water is chosen, preferably between 30 and 90% of glycerol, and advantageously between 50 and 80% (the% is expressed by weight of glycerol). relative to the total weight of water + glycerol).
En particulier, en présence de glycol et plus particulièrement de propanediol, on choisit une proportion comprise entre 0 et 100% de propanediol dans l’eau, préférentiellement entre 10 et 90% de propanediol, et avantageusement entre 50 et 70% (les % sont exprimés en poids de propanediol par rapport au poids total eau+ propanediol).In particular, in the presence of glycol and more particularly of propanediol, a proportion of between 0 and 100% of propanediol in water is chosen, preferably between 10 and 90% of propanediol, and advantageously between 50 and 70% (the% is expressed by weight of propanediol relative to the total weight of water + propanediol).
La température d’extraction est avantageusement comprise entre 4°C et 100°C, et préférentiellement entre 10°C et 80°C, et plus particulièrement entre 20°C et 50°C. Le chauffage peut être assuré par circulation d’un fluide thermique dans une double enveloppe ou par microondes.The extraction temperature is advantageously between 4 ° C. and 100 ° C., and preferably between 10 ° C. and 80 ° C., and more particularly between 20 ° C. and 50 ° C. The heating can be provided by circulating a thermal fluid in a double jacket or microwave.
La durée d’extraction varie avantageusement de 10 minutes à 4 heures, et préférentiellement de 30 minutes à 3 heures, et plus avantageusement de 1 à 2 heures. L’extraction peut être réalisée avantageusement sous vide, à pression atmosphérique ou sous pression, préférentiellement à pression atmosphérique ou sous pression, et avantageusement à pression atmosphérique. L’extraction s’effectue toujours sous agitation permettant ainsi une dispersion et une homogénéisation du solide dans le liquide, améliorant efficacement la diffusion du soluté dans le solvant. A l’issue de l’extraction, la matière végétale résiduelle et épuisée en composés d’intérêt est avantageusement séparée de la phase liquide, par exemple par décantation, par centrifugation ou par filtration clarifiante. La phase liquide obtenue peut être microfiltrée à l’aide de médias filtrants de porosité adaptée afin d’obtenir une solution limpide et exsangue de particules solides végétales.The extraction time advantageously varies from 10 minutes to 4 hours, and preferably from 30 minutes to 3 hours, and more preferably from 1 to 2 hours. The extraction can advantageously be carried out under vacuum, at atmospheric pressure or under pressure, preferably at atmospheric pressure or under pressure, and advantageously at atmospheric pressure. The extraction is always carried out with stirring thus allowing dispersion and homogenization of the solid in the liquid, effectively improving the diffusion of the solute in the solvent. At the end of the extraction, the residual plant material that is depleted of compounds of interest is advantageously separated from the liquid phase, for example by decantation, by centrifugation or by clarifying filtration. The liquid phase obtained can be microfiltered using filter media of suitable porosity in order to obtain a limpid and bloodless solution of plant solid particles.
Ces premières étapes de séparation liquide-solide peuvent-être suivies d’étapes de purification, par exemple par filtration, ultrafiltration et/ou nanofiltration, permettant de concentrer les composés d’intérêt au dépend d’autres tels que des traces de protéines, des minéraux, ainsi que le solvant ou mélange de solvants. L’extrait obtenu pourra se présenter sous forme liquide mais également sous forme solide après une étape de séchage selon les méthodes connues de l’homme de l’art telles que Γatomisation, la lyophilisation ou la zéodratation par exemple, avec ou sans support de séchage tel que de la maltodextrine.These first liquid-solid separation steps can be followed by purification steps, for example by filtration, ultrafiltration and / or nanofiltration, to concentrate the compounds of interest at the expense of others such as trace amounts of proteins, minerals, as well as the solvent or solvent mixture. The extract obtained may be in liquid form but also in solid form after a drying step according to the methods known to those skilled in the art such as atomization, lyophilization or zeodration, for example, with or without a drying medium. such as maltodextrin.
Un troisième objet selon l’invention est l’extrait du fruit de Pouteria lucuma, constitué de la peau et/ou de la pulpe fraîche ou séchée, obtenu ou susceptible d’être obtenu par le procédé de préparation selon le second objet de l’invention. L’extrait de Lucuma, sous forme liquide ou sèche, selon l’invention comprend principalement pour 100 grammes d’extrait sec les ingrédients suivants :A third object according to the invention is the extract of the fruit of Pouteria lucuma, consisting of the skin and / or the fresh or dried pulp, obtained or obtainable by the preparation process according to the second object of the invention. invention. The extract of Lucuma, in liquid or dry form, according to the invention mainly comprises for 100 grams of dry extract the following ingredients:
Glucose : 5-40 g Fructose : 5-40 g Saccharose : 0,5-20 g Maltose : Traces Protéines : 1 g Polyphénols : 1 gGlucose: 5-40 g Fructose: 5-40 g Sucrose: 0.5-20 g Maltose: Traces Protein: 1 g Polyphenols: 1 g
Un quatrième objet selon l’invention est une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable une quantité efficace de l’extrait du fruit de Pouteria lucuma, constitué de la peau et/ou de la pulpe fraîche ou séchée, selon l’invention.A fourth object according to the invention is a cosmetic composition comprising in a physiologically acceptable medium an effective amount of the fruit extract of Pouteria lucuma, consisting of the skin and / or the fresh or dried pulp, according to the invention.
Dans un mode de réalisation préférentiel selon l’invention, la quantité efficace dans la composition cosmétique est une teneur en extrait végétal allant lO'"^ à 5 % en poids, plus préférentiellement de 10'^ à 3 % en poids, et plus préférentiellement encore de 10'* à 3 % en poids par rapport au poids total de la composition.In a preferred embodiment according to the invention, the effective amount in the cosmetic composition is a vegetable extract content ranging from 10% to 5% by weight, more preferably from 10% to 3% by weight, and more preferably still 10 '* to 3% by weight relative to the total weight of the composition.
La composition doit donc contenir un milieu cosmétiquement acceptable, c’est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, et couvrent toutes les formes cosmétiques. Ces compositions pourront notamment être sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions, gels, laits, lotions, sticks ou encore de poudres, et adaptées à une application sur la peau, les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions comprennent les excipients nécessaires à leur formulation, tels que solvants, épaississants, diluants, tensioactifs, antioxydants, colorants, conservateurs, parfums. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau.The composition must therefore contain a cosmetically acceptable medium, that is to say compatible with the skin and superficial body growths, and cover all cosmetic forms. These compositions may especially be in the form of creams, oil-in-water emulsions, or water-in-oil or multiple emulsions, solutions, suspensions, gels, milks, lotions, sticks or powders, and adapted to an application on the skin, lips and / or integuments. These compositions comprise the excipients necessary for their formulation, such as solvents, thickeners, diluents, surfactants, antioxidants, dyes, preservatives, perfumes. They can be used as a care product and / or as a make-up product for the skin.
Les compositions cosmétiques selon l’invention comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d’odeur, des actifs cosmétiques ou pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. L’INCI Dictionary & Handbook ("International Nomenclature of Cosmetic Ingrédients ISème Ed. 2010) publié par "the Personal Care Products Council, Inc.", Washington, D.C.) décrit une grande variété, sans limitation, d'ingrédients cosmétiques habituellement utilisés dans l'industrie du soin de la peau, qui conviennent pour être utilisés comme ingrédients additionnels dans les compositions selon la présente invention.The cosmetic compositions according to the invention also comprise any additive commonly used in the intended field of application and the adjuvants necessary for their formulation, such as solvents, thickeners, diluents, antioxidants, colorants, sunscreens, self-tanning agents, pigments, fillers, preservatives, perfumes, odor absorbers, cosmetic or pharmaceutical active ingredients, essential oils, vitamins, essential fatty acids, surfactants, polymers film-forming, etc. The INCI Dictionary & Handbook ("International Nomenclature of Cosmetic Ingredients ISe Ed. 2010) published by the Personal Care Products Council, Inc., Washington, DC) describes a wide variety, without limitation, of cosmetic ingredients commonly used in the care industry. of the skin, which are suitable for use as additional ingredients in the compositions according to the present invention.
Des exemples non limitatifs de ces classes d'ingrédients additionnels incluent : les agents cicatrisants, les agents anti-âge, les agents anti-rides, les agents anti-atrophie, les agents hydratants, les agents adoucissants, les agents antibactériens, les agents antiparasitaires, les agents antifongiques, les agents fongicides, les agents fongistatiques, les agents bactéricides, les agents bactériostatiques, les agents antimicrobiens, les agents anti-inflammatoires, les agents anti-prurigineux, les agents anesthésiques, les agents antiviraux, les agents kératolytiques, les agents anti-radicaux libres, les agents anti-séborrhéiques, les agents anti-pelliculaires, les agents modulant la différenciation, la prolifération ou la pigmentation cutanée, les agents accélérateurs de pénétration, les agents desquamants, les agents stimulant ou inhibant la synthèse de mélanine, les agents blanchissants, dépigmentants, ou éclaircissants, les agents propigmentants, les agents auto bronzants, les agents inhibant la NO-synthase, les agents antioxydants, les agents piégeurs de radicaux libres et/ou anti-pollution atmosphérique, les agents anti-glycation, les agents raffermissants, les agents stimulant la synthèse des macromolécules dermiques ou épidermiques et/ou les agents capables de prévenir ou inhiber leur dégradation, les agents stimulant la synthèse de collagène, les agents stimulant la synthèse d'élastine, les agents stimulant la synthèse de décorine, les agents stimulant la synthèse de laminine, les agents stimulant la synthèse de défensine, les agents stimulant la synthèse de chaperon, les agents stimulant la synthèse de d'aquaporine, les agents stimulant la synthèse d'acide hyaluronique, les agents stimulant la synthèse de lipides et de composants du stratum corneum (céramides, acides gras, ...), les agents inhibant la dégradation du collagène, les agents inhibant la dégradation de l'élastine, les agents stimulant la prolifération des fibroblastes, les agents stimulant la prolifération des kératinocytes, les agents stimulant la prolifération des adipocytes, les agents stimulant la prolifération des mélanocytes, les agents stimulant la différenciation des kératinocytes, les agents stimulant la différenciation des adipocytes, les agents inhibant l'acétylcholinestérase, les agents stimulant la synthèse des glycosaminoglycanes, les agents réparant l'ADN, les agents protégeant l'ADN, les agents anti-démangeaison, les agents pour le traitement et/ou le soin de la peau sensible, les agents raffermissants, les agents anti-vergetures, les agents astringents, les agents régulant la production du sébum, les agents dermo-relaxants, les agents adjuvants de guérison, les agents stimulant la réépithélialisation, les agents adjuvants de réépithélialisation, les facteurs de croissance de cytokine, les agents calmants, les agents anti-inflammatoires, les agents agissant sur la circulation et/ ou microcirculation capillaire, les agents stimulant l'angiogénése, les agents inhibant la perméabilité vasculaire, les agents agissant sur le métabolisme cellulaire, les agents destinés à améliorer la jonction dermo-épidermique, les agents induisant la pousse des cheveux et/ou des poils, les agents inhibant ou ralentissant la pousse des cheveux et/ou des poils, les agents myorelaxants, les agents anti-pollution et/ou anti-radical ai res, les agents stimulant la lipolyse, les agents amincissants, les agents anti-cellulite, les agents agissant sur la microcirculation, les agents agissant sur le métabolisme des cellules, les agents nettoyants, les agents de coiffage du cheveu, les stimulants de la pousse des cheveux, les écrans solaires, les écrans totaux, les agents de maquillage, les détergents, les produits pharmaceutiques, les agents émulsifiants, les émollients, les solvants organiques, les agents antiseptiques, les actifs déodorants, les milieux physiologiquement acceptables, les surfactants, les agents abrasifs, les absorbants, les composants esthétiques comme les parfums, les pigments, les teintures, colorants et colorants naturels, les huiles essentielles, les agents de toucher, les astringents cosmétiques, les agents anti-acné, les agents anti-coagulation, les agents anti-mousse, les antioxydants, les liguants, les additifs biologiques, les enzymes, les inhibiteurs enzymatiques, les inducteurs enzymatiques, les coenzymes, les agents chélatants, les extraits végétaux et dérivés de plantes, les huiles essentielles, les extraits marins, les agents venant d'un procédé de biofermentation et/ou de biotechnologie, les sels minéraux, les extraits cellulaires, les écrans solaires (les agents photoprotecteurs organiques ou minéraux qui sont actifs contre les rayons ultraviolets A et/ou B) les céramides, les peptides, les tampons, les agents de volume, les agents chélatants, les additifs chimiques, les colorants, les biocides cosmétiques, les dénaturants, les astringents médicinaux, les analgésiques externes, les agents filmogénes, comme les polymères, pour exacerber les propriétés filmogénes et la substantivité de la composition, les dérivés quaternaires, les agents augmentant la substantivité, les agents opacifiants, les ajusteurs et régulateurs de pH (ex. triethanolamine), les propellants, les agents réducteurs, les séquestrants, les agents décolorants et/ou éclaircissants de la peau, les agents conditionnant de la peau (i.e., humectants, incluant miscellanées et occlusifs), les substances retenant l'humidité, les alpha hydroxy acides, les béta hydroxy acides, les hydratants, les enzymes hydrolytiques épidermiques, les agents apaisants et/ou cicatrisants, les agents traitant la peau, les agents anti-rides, les agents capables de réduire ou traiter les poches sous les yeux, les agents exfoliants, les épaississants, les adoucissants, les polymères gélifiants, les vitamines et leurs dérivés, les agents mouillants, les agents pelants, les agents calmants, les agents curatifs de la peau, les lignanes, les conservateurs (i.e.phenoxyethanol et parabens), les anti-UV, les agents cytotoxiques, anti néoplasiques, agents modifiant la viscosité, les solvants non volatils, des agents perlants, les agents antitranspirants, les dépilatoires, vaccins, eau parfumée, agent restructurant la peau, les excipients, les charges, les minerais, les agents anti-mycobactériens, les agents anti-allergéniques, les antihistaminiques H1 ou H2, les anti-irritants, les agents stimulant le système immunitaire, les agents inhibant le système immunitaire, les agents répulsifs d'insectes, les lubrifiants, les pigmentants ou colorants, les agents hypopigmentants, les agents photo-stabilisants, et leurs mélanges, tant qu'ils sont physiquement et chimiquement compatibles avec les autres ingrédients de la composition et spécialement avec les actifs de la présente invention.Non-limiting examples of these additional ingredient classes include: healing agents, anti-aging agents, anti-wrinkle agents, anti-atrophy agents, moisturizing agents, softening agents, antibacterial agents, anti-parasitic agents , antifungal agents, fungicidal agents, fungistatic agents, bactericidal agents, bacteriostatic agents, antimicrobial agents, anti-inflammatory agents, anti-pruriginous agents, anesthetic agents, antiviral agents, keratolytic agents, anti-free radical agents, anti-seborrhoeic agents, anti-dandruff agents, agents for differentiating differentiation, proliferation or skin pigmentation, penetration enhancers, desquamating agents, agents stimulating or inhibiting melanin synthesis , whiteners, depigmenting agents, or brighteners, propigmenting agents, auto agents tanning agents, NO-synthase inhibiting agents, antioxidants, free radical scavengers and / or anti-air pollution agents, anti-glycation agents, firming agents, agents stimulating the synthesis of dermal or epidermal macromolecules and / or agents capable of preventing or inhibiting their degradation, agents stimulating collagen synthesis, elastin synthesis stimulating agents, decorin stimulating agents, laminin synthesis stimulating agents, agents stimulating the synthesis of defensin, agents stimulating chaperone synthesis, agents stimulating the synthesis of aquaporin, agents stimulating the synthesis of hyaluronic acid, agents stimulating the synthesis of lipids and components of the stratum corneum (ceramides, fatty acids,. ..), agents that inhibit collagen degradation, agents that inhibit elastin degradation, agents that stimulate proliferation fibroblasts, keratinocyte proliferation stimulating agents, adipocyte proliferation stimulating agents, melanocyte proliferating stimulating agents, keratinocyte differentiating stimulating agents, adipocyte differentiating stimulating agents, acetylcholinesterase inhibiting agents , glycosaminoglycan synthesis stimulating agents, DNA repair agents, DNA protectants, anti-itch agents, agents for the treatment and / or care of sensitive skin, firming agents, agents anti-stretch marks, astringent agents, sebum-regulating agents, dermo-relaxants, healing adjuvants, re-epithelializing agents, adjuvant re-epithelialization agents, cytokine growth factors, soothing agents , anti-inflammatory agents, agents acting on the circulation and / or microcir capillary stimulating agents, vascular permeability inhibiting agents, agents acting on cellular metabolism, agents for improving the dermal-epidermal junction, agents inducing hair growth and / or hair, agents which inhibit or slow the growth of hair and / or hair, muscle relaxants, anti-pollution and / or anti-radical agents, lipolysis stimulating agents, slimming agents, anti-cellulite agents, agents acting on the microcirculation, agents acting on cell metabolism, cleaning agents, hair styling agents, stimulants of hair growth, sunscreens, total screens, makeup agents, detergents, pharmaceutical products, emulsifying agents, emollients, organic solvents, antiseptic agents, deodorant active agents, physiologically acceptable media, surfactants, abrasives, absorbents, aesthetic components such as perfumes, pigments, dyes, natural dyes and dyes, essential oils, touching agents, cosmetic astringents, anti-acne agents, anti-acne agents -coagulation, anti-foam agents, antioxidants, leachates, biological additives, enzymes, enzyme inhibitors, enzyme inducers, coenzymes, chelating agents, plant extracts and plant derivatives, essential oils, marine extracts, agents derived from a biofermentation and / or biotechnology process, mineral salts, cell extracts, sunscreens (organic or inorganic photoprotective agents which are active against ultraviolet A and / or B rays) ceramides, peptides, buffers, volume agents, chelating agents, chemical additives, dyes, cosmetic biocides, dna sedatives, medicinal astringents, external analgesics, film-forming agents, such as polymers, to exacerbate film-forming properties and substantivity of the composition, quaternary derivatives, substantivity-enhancing agents, opacifying agents, pH adjusters and regulators (ex. triethanolamine), propellants, reducing agents, sequestering agents, bleaching and / or skin lightening agents, skin conditioning agents (ie, humectants, including miscellaneaous and occlusive agents), moisture retentive substances, alpha hydroxy acids, beta hydroxy acids, moisturizers, epidermal hydrolytic enzymes, soothing and / or healing agents, skin-treating agents, anti-wrinkle agents, agents capable of reducing or treating bags under the eyes, exfoliating agents, thickeners, softeners, gelling polymers, vitamins and their derivatives, wetting agents, peeling agents, calming agents, curative agents for the skin, lignans, preservatives (iephenoxyethanol and parabens), anti-UV, cytotoxic agents, anti-neoplastic agents, viscosity modifiers, non-volatile solvents, pearling agents, antiperspirants, depilators vaccines, scented water, skin restructuring agent, excipients, fillers, minerals, anti-mycobacterial agents, anti-allergenic agents, antihistamines H1 or H2, anti-irritants, immune stimulating agents , immune system inhibitors, insect repellents, lubricants, pigmentants or dyes, hypopigmenting agents, photostabilizers, and mixtures thereof, as long as they are physically and chemically compatible with the other ingredients of the composition and especially with the assets of the present invention.
Par ailleurs, la nature de ces ingrédients additionnels ne doit pas altérer de manière inacceptable les bénéfices des actifs de l'invention. Ces ingrédients additionnels peuvent être synthétiques ou naturels comme par exemple les extraits de plantes ou venir d'un procédé de biofermentation. Des exemples additionnels peuvent être trouvés dans l’ESiCI Dictionary & HandbookMoreover, the nature of these additional ingredients should not unacceptably alter the benefits of the assets of the invention. These additional ingredients may be synthetic or natural such as plant extracts or come from a biofermentation process. Additional examples can be found in the ESiCI Dictionary & Handbook
De tels ingrédients additionnels peuvent être choisis dans le groupe comprenant : les sucres aminés, glucosamine, D-glucosamine, N-acetyl- glucosamine, N-acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N-acetyl mannosamine, galactosamine, N-acétyl galactosamine, vitamine B3 et ses dérivés, le niacinamide, déhydro-acétate de sodium, l'acide déhydroacétique et ses sels, phytosterols, composés d'acide salicylique, hexamidines, composés dihydroxyproline de dialkanoyl, extraits et dérivés de soja, equol, isoflavones, flavonoïdes, phytantriol, famesol, géraniol, bisabolol, peptides et leurs dérivés, di -, tri -, tétra -, penta -, et hexapeptides et leurs dérivés, lys-thr-thr-lys-ser, palmitoyl-lys-thr-thr-lys-ser, camosine, composés d'acide aminé N-acyl, rétinoïdes, propionate de rétinyl, rétinol, palmitate de rétinyl, acétate de rétinyl, rétinal, acide rétinoïque, vitamines hydrosolubles, ascorbates, vitamine C, glucoside ascorbyl, palmitate ascorbyl, magnésium ascorbyl phosphate, sodium ascorbyl phosphate, vitamines et leurs sels et dérivés, provitamines et leurs sels et dérivés, ethyl panthenol, vitamine B et ses dérivés, vitamine Bl, vitamine B2, vitamine B6, vitamine B12, vitamine K et ses dérivés, acide pantothénique et ses dérivés, éther éthylique de pantothenyl, panthenol et ses dérivés, panthenol ethylique, dexpanthenol, biotine, acides aminés et leurs sels et les dérivés, acides aminés hydrosolubles, asparagine, alanine, indol, acide glutamique, vitamines insolubles dans l'eau, vitamine A, vitamine E, vitamine F , vitamine D et ses composés, mono-, di -, et triterpénoïdes, bêta-ionol, cedrol, et leurs dérivés, acides aminés insolubles dans l'eau, tyrosine, tryptamine, matériaux particulaires, hydroxytoluène butylé, hydroxyanisole butylé, allantoine, nicotinate de tocophérol, tocophérol, esters de tocophérol, palmitoyl-gly-his-lys, phytostérol, hydroxy acides, acide glycolique, acide lactique, acide lactobionique, kétoacides, acide pyruvique, acide phytique. acide lysophosphatidique, stilbenes, cinnamates, resveratrol, kinétine, zeatin, dimethylaminoethanol, peptides naturels, les peptides de soja, sels de sucres acides, gluconate de manganèse, gluconate de zinc, olamine de piroctone, 3,4,4'- trichlorocarbanilide, triclocarban, pyrithione de zinc, hydroquinone, acide kojique, acide ascorbique, magnésium ascorbyl phosphate, ascorbyl glucoside, pyridoxine, l'aloe vera, les alcools de terpène, allantoine, bisabolol, glycyrrhizinate dipotassique, acide de glycérol, de sorbitol, de pentaerythritol, de pyrrolidone et ses sels, dihydroxyacetone, erythrulose, glycéraldéhyde, tartaraldehyde, l'essence de clou de girofle, le menthol, le camphre, l'essence d'eucalyptus, eugénol, le lactate de menthyle, le distillât d'hamamélis, copolymére d'eicosene et vinyl pyrrolidone, iodopropyl butylcarbamate, un polysaccharide, un acide gras essentiel, un salicylate, un acide glycyrrhétinique, des caroténoïdes, des céramides et des pseudo-céramides, un lipide complexe, les huiles en générale d'origine naturelle telles le beurre de karité, l'huile d'abricot, l'huile d'onagre, l'huile de pruneau, l'huile de palme, l'huile de monoi, l’huile de kahai, hydroquinone, l'HEPES, la procystéine, l'O-octanoyl-6-D-maltose, le sel disodique d'acide méthyl glycine diacétique, les stéroïdes tels que la diosgénine et les dérivés de la DHEA, la DHEA déhydroépiandrostérone et/ou un précurseur ou dérivé chimique ou biologique, le N-éthylcarbonyl-4-para-aminophénol, les extraits de myrtille, les phytohormones, les extraits de levure Saccharomyces cerevisiae, les extraits d'algues, les extraits de soja, de lupin, de maïs et/ou de pois, l'alvérine et ses sels, en particulier le citrate d'alvérine, les extraits de petits houx et de marron d'inde et leurs combinaisons, un inhibiteur de métalloprotéinases, les extraits de Schinus molle.Such additional ingredients may be selected from the group consisting of: amino sugars, glucosamine, D-glucosamine, N-acetylglucosamine, N-acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N-acetyl mannosamine, galactosamine, N-acetylgalactosamine, vitamin B3 and its derivatives, niacinamide, dehydro-sodium acetate, dehydroacetic acid and its salts, phytosterols, salicylic acid compounds, hexamidines, dialkanoyl dihydroxyproline compounds, extracts and soy derivatives, equol, isoflavones, flavonoids, phytantriol, famesol, geraniol, bisabolol, peptides and their derivatives, di -, tri -, tetra -, penta -, and hexapeptides and their derivatives, lys-thr-thr-lys-ser, palmitoyl-lys-thr-thr-lys -ser, camosin, amino acid compounds N-acyl, retinoids, retinyl propionate, retinol, retinyl palmitate, retinyl acetate, retinal, retinoic acid, water-soluble vitamins, ascorbates, vitamin C, ascorbyl glucoside, ascorbyl palmitate, magnesium ascorbyl phosphate, sodium ascorbyl phosphate, vitamins and their salts and derivatives, provitamins and their salts and derivatives, ethyl panthenol, vitamin B and its derivatives, vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, vitamin B12, vitamin K and its derivatives, pantothenic acid and its derivatives, pantothenyl ethyl ether, panthenol and its derivatives, ethyl panthenol, dexpanthenol, biotin, amino acids and their salts and derivatives, water-soluble amino acids, asparagine, alanine, indol, glutamic acid, water insoluble vitamins, vitamin A, vitamin E, vitamin F, vitamin D and its compounds, mono-, di-, and triterpenoids, beta-ionol, cedrol, and their derivatives, water-insoluble amino acids, tyrosine, tryptamine, particulate materials, butylated hydroxytoluene , butylated hydroxyanisole, allantoin, tocopherol nicotinate, tocopherol, tocopherol esters, palmitoyl-gly-his-lys, phytosterol, hydroxy acids, glycolic acid, lactic acid, lactobionic acid ics, ketoacids, pyruvic acid, phytic acid. lysophosphatidic acid, stilbenes, cinnamates, resveratrol, kinetin, zeatin, dimethylaminoethanol, natural peptides, soy peptides, acid sugar salts, manganese gluconate, zinc gluconate, piroctone olamine, 3,4,4'-trichlorocarbanilide, triclocarban , zinc pyrithione, hydroquinone, kojic acid, ascorbic acid, magnesium ascorbyl phosphate, ascorbyl glucoside, pyridoxine, aloe vera, terpene alcohols, allantoin, bisabolol, dipotassium glycyrrhizinate, glycerol acid, sorbitol, pentaerythritol, pyrrolidone and its salts, dihydroxyacetone, erythrulose, glyceraldehyde, tartaraldehyde, clove essence, menthol, camphor, eucalyptus essence, eugenol, menthyl lactate, witch hazel distillate, copolymer of eicosene and vinyl pyrrolidone, iodopropyl butylcarbamate, polysaccharide, essential fatty acid, salicylate, glycyrrhetinic acid, carotenoids, ceramides and pseudo-ceramid es, a complex lipid, oils generally of natural origin such as shea butter, apricot oil, evening primrose oil, prune oil, palm oil, coconut oil monoi, kahai oil, hydroquinone, HEPES, procysteine, O-octanoyl-6-D-maltose, disodium salt of methyl glycine diacetic acid, steroids such as diosgenin and derivatives thereof. DHEA, DHEA dehydroepiandrosterone and / or a chemical or biological precursor or derivative, N-ethylcarbonyl-4-para-aminophenol, bilberry extracts, phytohormones, yeast extracts Saccharomyces cerevisiae, extracts of algae, extracts soybean, lupine, corn and / or peas, alverine and its salts, in particular alverine citrate, extracts of holly and chestnut and their combinations, a metalloproteinase inhibitor, Schinus soft extracts.
Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition cosmétique selon l’invention.In all cases, those skilled in the art will ensure that these adjuvants and their proportions are chosen in such a way as not to harm the desirable advantageous properties of the cosmetic composition according to the invention.
Un dernier objet selon l’invention est un procédé de traitement cosmétique destiné à procurer une effet énergisant, à prévenir et/ou lutter contre la sécheresse de la peau et des muqueuses, à prévenir et/ou à lutter contre les signes cutanés du vieillissement et/ou du photovieillissement, par application topique sur la peau et les muqueuses à traiter d’une composition cosmétique telle que décrite précédemment. D’autres avantages et caractéristiques de l’invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif Dans les exemples qui suivent et les figures associées, l’abréviation « Elu » signifie « extrait de Lucuma ».A last object according to the invention is a cosmetic treatment method intended to provide an energizing effect, to prevent and / or fight against the dryness of the skin and mucous membranes, to prevent and / or to fight against the cutaneous signs of aging and or photoaging, by topical application to the skin and the mucous membranes to be treated with a cosmetic composition as described above. Other advantages and characteristics of the invention will appear better on reading the examples given for illustrative and non-limiting purposes. In the examples which follow and the associated figures, the abbreviation "Elu" means "Lucuma extract".
Exemple 1 ; Préparation d’un extrait vé2étal aqueux à partir de poudre de pulpe du fruit Pouteria lucumaExample 1; Preparation of an aqueous vetasal extract from fruit pulp powder Pouteria lucuma
La poudre de pulpe de fruit de Pouteria lucuma (200 g) est placée dans un réacteur en verre, muni d’une agitation et d’un chauffage par double enveloppe en présence d’un fluide caloporteur.The fruit pulp powder of Pouteria lucuma (200 g) is placed in a glass reactor equipped with stirring and heating by jacket in the presence of a coolant.
Le solvant utilisé pour la macération est de l’eau déminéralisée (1800 g).The solvent used for the maceration is deionized water (1800 g).
La poudre de pulpe de Lucuma est dispersée dans le solvant pendant 2 heures à 30°C puis le mélange est centrifugé et le surnageant est filtré. L’extrait aqueux ainsi obtenu peut être utilisé tel quel ou évaporé au rotavapor afin d’éliminer la majeure partie du solvant, puis lyophilisé en présence de maltodextrine (50%) afin d’obtenir un solide qui sera ensuite broyé et tamisé.The Lucuma pulp powder is dispersed in the solvent for 2 hours at 30 ° C, then the mixture is centrifuged and the supernatant is filtered. The aqueous extract thus obtained can be used as such or evaporated in a rotary evaporator in order to remove most of the solvent, and then lyophilized in the presence of maltodextrin (50%) in order to obtain a solid which will then be crushed and sieved.
Il est ainsi obtenu 150 g d’extrait de pulpe de lucuma en poudre. Les teneurs massiques respectives en chaque sucre sont de 8,3 g/100 g de fructose, 11,0 g/100 g de glucose et 3,5 g/100 g de saccharose.150 g of powdered lucumin pulp extract is thus obtained. The respective mass contents of each sugar are 8.3 g / 100 g of fructose, 11.0 g / 100 g of glucose and 3.5 g / 100 g of sucrose.
Exemple 2 : Préparation d’un extrait vé2étal hvdro-alcoolique à partir de poudre de pulpe du fruit Pouteria lucumaEXAMPLE 2 Preparation of a Hydro-alcoholic Vé2étal Extract from Fruit Powder Powder Pouteria lucuma
La poudre de pulpe de fruit de Pouteria lucuma (200 g) est placée dans un réacteur en verre, muni d’une agitation et d’un chauffage par double enveloppe en présence d’un fluide caloporteur.The fruit pulp powder of Pouteria lucuma (200 g) is placed in a glass reactor equipped with stirring and heating by jacket in the presence of a coolant.
Le solvant utilisé pour la macération est un mélange eau (30%) / éthanol (70%) (1800 g).The solvent used for the maceration is a mixture water (30%) / ethanol (70%) (1800 g).
La poudre de pulpe de Lucuma est dispersée dans le solvant pendant 2 heures à 55°C puis le mélange est filtré sur Büchner afin d’éliminer le culot. Le filtrat est récupéré. L’extrait hydro alcoolique ainsi obtenu est évaporé au rotavapor afin d’éliminer le solvant.The Lucuma pulp powder is dispersed in the solvent for 2 hours at 55 ° C and then the mixture is filtered on Buchner to remove the pellet. The filtrate is recovered. The hydroalcoholic extract thus obtained is evaporated in a rotary evaporator to remove the solvent.
Il est ainsi obtenu 48 g d’extrait de pulpe de lucuma en poudre.48 g of powdered lucumin pulp extract is thus obtained.
Les teneurs massiques respectives en chaque sucre sont de 31,0 g/IOO g de fructose, 23,2 g/IOO g de glucose et 26,5 g/IOOg de saccharose.The respective mass contents of each sugar are 31.0 g / 100 g of fructose, 23.2 g / 100 g of glucose and 26.5 g / 100 g of sucrose.
Exemple 3 : Préparation d’un extrait végétal alcoolique à partir de poudre de peau du fruit Pouteria lucumaExample 3 Preparation of an Alcoholic Vegetable Extract from Fruit Skin Powder Pouteria lucuma
La poudre de peau de fruit de Pouteria lucuma (100 g) est introduite dans une cartouche en cellulose. La cartouche est placée dans un extracteur de type Soxhlet.The fruit skin powder of Pouteria lucuma (100 g) is introduced into a cellulose cartridge. The cartridge is placed in a Soxhlet extractor.
Le solvant utilisé pour l’extraction est de l’éthanol 96%, placé dans un ballon en verre (900 ml). La cartouche subit une vingtaine de cycles d’extraction au solvant. L’extrait alcoolique ainsi obtenu est évaporé au rotavapor afin d’éliminer le solvant.The solvent used for the extraction is 96% ethanol, placed in a glass flask (900 ml). The cartridge undergoes twenty cycles of solvent extraction. The alcoholic extract thus obtained is evaporated in a rotavapor to remove the solvent.
Il est ainsi obtenu 20 g d’extrait de peau du fruit en poudre de lucuma contenant 69% de sucres totaux.There is thus obtained 20 g of skin extract of lucuma powder fruit containing 69% of total sugars.
Les teneurs massiques respectives en chaque sucre sont de 23,5 g/100 g de fructose, 21,6 g/100 g de glucose et 1,3 g/100 g de saccharose.The respective mass contents of each sugar are 23.5 g / 100 g of fructose, 21.6 g / 100 g of glucose and 1.3 g / 100 g of sucrose.
Exemple 4 : Préparation d’un extrait vé2étal hydro-glvcoliaue à partir de poudre de pulpe du fruit Pouteria lucumaEXAMPLE 4 Preparation of a Hydroglycolic Vé2étal Extract from Fruit Powder Powder Pouteria lucuma
La poudre de pulpe de fruit de Pouteria lucuma (200 g) est placée dans un réacteur en verre, muni d’une agitation et d’un chauffage par double enveloppe en présence d’un fluide caloporteur.The fruit pulp powder of Pouteria lucuma (200 g) is placed in a glass reactor equipped with stirring and heating by jacket in the presence of a coolant.
Le solvant utilisé (1800 g) pour la macération est un mélange de 60% de 1,3-propanediol et 40% d’eau déminéralisée.The solvent used (1800 g) for maceration is a mixture of 60% 1,3-propanediol and 40% demineralized water.
La poudre de pulpe de Lucuma est dispersée dans le solvant pendant 2 heures à 30°C puis le mélange est séparé sur décanteur centrifuge afin d’éliminer le culot et le surnageant est récupéré puis filtré. L’extrait en milieu solvant ainsi obtenu, soit 1540 g, contient 3,73% d’extrait sec. Les teneurs massiques respectives en chaque sucre sont de 1,1g de fructose, 1,1 g de glucose et 0,5 g de saccharose pour 100 grammes d’extrait végétal liquide.The Lucuma pulp powder is dispersed in the solvent for 2 hours at 30 ° C and the mixture is separated on a centrifugal decanter to remove the pellet and the supernatant is recovered and filtered. The extract in a solvent medium thus obtained, ie 1540 g, contains 3.73% of dry extract. The respective mass contents in each sugar are 1.1 g of fructose, 1.1 g of glucose and 0.5 g of sucrose per 100 grams of liquid plant extract.
Exemple 5 : Tests démontrant l’activité anti-â2e et rajeunissante de l’extrait de LucumaExample 5: Tests demonstrating anti-A2 and rejuvenating activity of Lucuma extract
Le derme fournit à l’épiderme un support solide, c’est également son élément nourricier. Il est principalement constitué de fibroblastes et d’une matrice extracellulaire composée majoritairement de collagènes, d’élastine et d’une substance, dite substance fondamentale. Ces composants sont synthétisés par les fibroblastes. La cohésion entre l’épiderme et le derme est assurée par la jonction dermo-épidermique.The dermis provides the epidermis with a solid support, it is also its nourishing element. It consists mainly of fibroblasts and an extracellular matrix mainly composed of collagens, elastin and a substance called the fundamental substance. These components are synthesized by fibroblasts. The cohesion between the epidermis and the dermis is ensured by the dermal-epidermal junction.
Les collagènes sont les protéines majoritaires des matrices extracellulaires de la peau. A ce jour, 20 types de collagènes sont identifiés et notés de I à XX. Les collagènes majoritairement présents dans l’ensemble du derme sont les collagènes de type I et III qui forment la matrice extracellulaire de l’ensemble du derme (ce sont ces collagènes qui constituent 70-80 % du poids sec du derme). Avec le vieillissement, le derme s’aminçit et des rides apparaissent à la surface de la peau. En conséquence, compte tenu du rôle important du collagène au niveau de l’intégrité de la peau et de sa résistance aux agressions externes de type mécaniques, la stimulation de la synthèse de ces collagènes, et notamment du collagène de type I, apparaît comme un moyen efficace pour pallier les signes du vieillissement cutané (revue par Tzaphlidou M., Micron 35 (2004) 173-177). L’étude qui suit a permis d’étudier l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression du collagène I, de l’Elastine et de la Fibrilline 1, constituants essentiels de la matrice extracellulaire du derme, afin d’évaluer son activité anti-vieillissante et anti-photo-vieillissante ainsi que rajeunissante. Cette dernière activité a également été évaluée en étudiant l’effet de l’extrait de Lucuma sur la méthylation de l’ADN, cible de l’épigénétique.Collagens are the major proteins of the extracellular matrices of the skin. To date, 20 types of collagens are identified and noted from I to XX. The collagens mainly present in the entire dermis are the type I and III collagens which form the extracellular matrix of the whole dermis (these are the collagens which constitute 70-80% of the dry weight of the dermis). With aging, the dermis gets older and wrinkles appear on the surface of the skin. Consequently, in view of the important role of collagen in terms of the integrity of the skin and its resistance to mechanical external aggression, the stimulation of the synthesis of these collagens, and in particular of type I collagen, appears as a effective way to overcome the signs of skin aging (reviewed by Tzaphlidou M., Micron 35 (2004) 173-177). The following study investigated the effect of Lucuma extract on the expression of collagen I, Elastin and Fibrillin 1, essential components of the extracellular matrix of the dermis, in order to evaluate its anti-aging and anti-photo-aging as well as rejuvenating. This latter activity was also evaluated by studying the effect of Lucuma extract on the methylation of DNA, the target of epigenetics.
Au cours du vieillissement les fibres de collagène et les fibres élastiques sont altérées du fait d’une synthèse réduite et d’une dégradation accrue, ayant pour conséquence une qualité de peau amoindrie, moins tonique et en perte d’élasticité.During aging, the collagen fibers and the elastic fibers are altered due to reduced synthesis and increased degradation, resulting in reduced skin quality, less tonic and loss of elasticity.
Pour permettre de démontrer le rajeunissement cellulaire nous avons quantifié l’expression des protéines impliquées dans la structure de ces fibres au sein de cellules vieillies de manière intrinsèque (senescence réplicative) dans le cas du Collagène I et de l’Elastine, ou extrinsèque par irradiations UV répétées (photo vieillissement) dans le cas de la Fibrilline 1.To demonstrate cell rejuvenation, we quantified the expression of proteins involved in the structure of these fibers in intrinsically aged cells (replicative senescence) in the case of collagen I and elastin, or extrinsic by irradiation. UV repeated (photo aging) in the case of Fibrillin 1.
Afin de comprendre le mécanisme de réactivation de l’expression des protéines observée, nous avons procédé à une analyse de la méthylation de l’ADN sur cellules vieillies de manière intrinsèque. En effet l’une des signatures de la sénescence cellulaire est l’accumulation de zones méthylées au sein de l’ADN, au niveau des Cytosines contenues dans les dinucléotides CpG. Ceci entraine l’inactivation de promoteurs et la diminution de l’expression de certains gènes. • Evaluation préalable de la cytotoxicitéIn order to understand the mechanism of reactivation of the expression of the proteins observed, we proceeded to an analysis of the methylation of the DNA on cells aged intrinsically. Indeed one of the signatures of the cellular senescence is the accumulation of methylated zones within the DNA, at the level of the Cytosines contained in the dinucleotides CpG. This leads to the inactivation of promoters and the decrease in the expression of certain genes. • Prior evaluation of cytotoxicity
La cytotoxicité des molécules a été évaluée sur les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts). L’extrait de Lucuma utilisé dans ce test est celui obtenu de l’exemple 1 décrit précédemment.The cytotoxicity of the molecules was evaluated on NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts). The Lucuma extract used in this test is that obtained from Example 1 described above.
La cytotoxicité a été réalisée sur la concentration maximale testée soluble en solution aqueuse à 0.1% DMSO ainsi qu’à 7 dilutions de % log en % log.The cytotoxicity was performed on the maximum concentration tested soluble in 0.1% DMSO aqueous solution and 7 dilutions of% log in% log.
Le composé a été mis en contact avec les cellules pendant 24 heures. Durant les 3 dernières heures un test colorimétrique prêt à l’emploi (WSTl de Roche®) a été introduit dans le milieu.The compound was contacted with the cells for 24 hours. During the last 3 hours, a ready-to-use colorimetric test (Roche's WSTl) has been introduced into the medium.
Ce réactif contient des sels de tétrazolium, un indicateur violet. Ce réactif est clivé en formazan, un indicateur jaune, par les cellules métaboliquement actives. Le niveau de coloration jaune est donc proportionnel au nombre de cellules vivantes. La mesure de l’absorbance se fait à 450nm. Le test considère qu'une valeur inférieure à 90% du témoin indique une cytotoxicité du produit éventuelle. Cela peut aussi indiquer que l'on diminue l'activité métabolique des cellules. Une valeur inférieure à 75% indique une cytotoxicité significative .This reagent contains tetrazolium salts, a purple indicator. This reagent is cleaved into formazan, a yellow indicator, by metabolically active cells. The level of yellow coloration is therefore proportional to the number of living cells. The absorbance measurement is 450nm. The test considers that a value of less than 90% of the control indicates a cytotoxicity of the possible product. It may also indicate that the metabolic activity of the cells is decreased. A value below 75% indicates significant cytotoxicity.
Par ailleurs les cellules ont été observées au microscope pour observer et comparer leur physionomie. L’extrait de Lucuma présente une cytotoxicité à 10000 ppm (75% de cellules vivantes) et devient non cytotoxique à partir de 2000 ppm (100% de cellules vivantes)In addition, the cells were observed under a microscope to observe and compare their physiognomy. Lucuma extract exhibits cytotoxicity at 10000 ppm (75% live cells) and becomes non-cytotoxic from 2000 ppm (100% live cells)
Concentrations retenues pour être testées : L’Extrait de Lucuma est testé aux concentrations suivantes 500 - 250 - 125 ppm, correspondant respectivement à 0.05, 0.025 et 0.0125 %.Concentrations selected for testing: Lucuma extract is tested at the following concentrations 500 - 250 - 125 ppm, corresponding to 0.05, 0.025 and 0.0125% respectively.
- Cibles Collagène I- Collagen I Targets
Le Collagène I est le Collagène majoritaire qui apporte à la peau sa résistance mécanique.Collagen I is the majority collagen that gives the skin its mechanical resistance.
Cette protéine représente 90% du collagène d’un vertébré. H constitue la trame de l’os (à comparer aux armatures du béton armé), et plus généralement des tissus conjonctifs banals. Il se trouve dans les os, la peau, les tendons, la cornée et les organes internes. • Méthode d’évaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression duThis protein represents 90% of the collagen of a vertebrate. H is the frame of the bone (compared to reinforcements of reinforced concrete), and more generally common connective tissue. It is found in bones, skin, tendons, cornea and internal organs. • Method for evaluating the effect of Lucuma extract on the expression of
Collagène ICollagen I
Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ou vieillis par sénescence réplicative ont été ensemencés en plaque 96 puits et incubées 24h à 37°C, 5%C02.Normal or young Human Dermal Fibroblasts (NHDFs) aged or aged by replicative senescence were seeded in 96-well plates and incubated 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
Les cellules ont été traitées 24h en présence des produits d’essai.The cells were treated 24h in the presence of the test products.
Les cellules ont ensuite été fixées avec de la formaline et l’expression des protéines a été détectée par immunofluorescence.The cells were then fixed with formalin and the expression of the proteins was detected by immunofluorescence.
Les marquages fluorescents ont été imagés et quantifiés par microscopie automatisée (Arrayscan CellomicsTM). La fluorescence a été quantifiée par la bioapplication Compartimentai Analysis.Fluorescent markings were imaged and quantified by automated microscopy (Arrayscan CellomicsTM). Fluorescence was quantified by the Bioapplication Compartmental Analysis.
• Evaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression du Collagène I• Evaluation of the effect of Lucuma extract on the expression of Collagen I
Les résultats sont donnés dans le tableau ci-dessousThe results are given in the table below
L’extrait de Lucuma permet de réactiver l’expression de Collagène I par rapport aux cellules vieillies. • Conclusion L’extrait de Lucuma, est un ingrédient qui agit sur le collagène I, cible du vieillissement cutané, en relançant l’expression protéique par rapport à des cellules vieillies non traitées et en la rétablissant partiellement en comparaison aux témoins jeunes. - Cible Elastine L’élastine est une glycoprotéine structurale (comme la laminine et la fibronectine) entrant dans la composition de la MEC. L'élastine est une protéine de la famille des protéines fibreuses de type structural. Sécrétée par les fibroblastes essentiellement durant la période de croissance, elle possède des propriétés élastiques. Sa synthèse diminue avec l'âge et l'élastine se trouve remplacée par du collagène inextensible. Les vergetures sont un exemple visible de ce processus, qui est lié à des contraintes mécaniques. Le vieillissement cutané en est un deuxième exemple. Dans la matrice extracellulare l'élastine est synthétisée et sécrétée dans l’espace extracellulaire par les fibroblastes d'abord en proélastine, puis en tropoélastine. L’élastine est la composante majeure (jusqu’à 90 %) des fibres élastiques auxquelles s’ajoute la fibrilline. Donc, le collagène, associé à l’élastine et la fibrilline qui forment les fibres élastiques, par des liaisons transversales covalentes, sont les principaux constituants de la matrice extracellulaire. La production totale d’élastine s’arrête autour de la puberté. Après quoi, la quantité d'élastine disponible diminuera avec le temps.Lucuma extract reactivates the expression of Collagen I compared to aged cells. • Conclusion Lucuma extract is an ingredient that acts on collagen I, the target of skin aging, by reviving protein expression compared to untreated aged cells and partially restoring it compared to young controls. - Target Elastin Elastin is a structural glycoprotein (such as laminin and fibronectin) used in the composition of the ECM. Elastin is a protein of the structural fibrous protein family. Secreted by fibroblasts mainly during the growth period, it has elastic properties. Its synthesis decreases with age and elastin is replaced by inextensible collagen. Stretch marks are a visible example of this process, which is related to mechanical stresses. Skin aging is a second example. In the extracellular matrix, elastin is synthesized and secreted in the extracellular space by fibroblasts first in proelastin, then in tropoelastin. Elastin is the major component (up to 90%) of elastic fibers to which fibrillin is added. Thus, collagen, associated with elastin and fibrillin that form elastic fibers, by covalent cross-links, are the main constituents of the extracellular matrix. The total production of elastin stops around puberty. After that, the amount of elastin available will decrease over time.
La dégradation de l’élastine est liée à l’action de l’élastase, une enzyme sécrétée par les fibroblastes. L’action enzymatique de l’élastase est inhibée par l’al-antitrypsine. L'inhibition de la dégradation crée un équilibre augmentant la stabilité de l'élastine.The degradation of elastin is related to the action of elastase, an enzyme secreted by fibroblasts. The enzymatic action of elastase is inhibited by al-antitrypsin. Inhibition of degradation creates a balance that increases the stability of elastin.
Des traits distinctifs caractérisent l’élastine : l'élastine permet aux cellules de se lier et permet aux tissus biologiques de se former. Ainsi, le bon fonctionnement de la peau, des poumons, des vaisseaux sanguins, des tissus conjonctifs, de certains tendons et cartilages est étroitement lié aux caractéristiques de l’élastine. Comme son nom l’indique, l’élastine est élastique. À diamètre égal, elle est 5 fois plus élastique qu'un élastique. Elle peut s’étirer jusqu’à 150% de sa longueur au repos avant de se briser. Ainsi, elle permet aux tissus de s’étirer et de retrouver leur état initial après l’étirement, ce qui leur donne de la souplesse. L’élastine se retrouve dans le derme de la peau, celui-ci agissant en tant que soutien. Au cours du vieillissement, par exemple, la perte d’élasticité et de tonicité du derme qui ne peut plus s’opposer aux effets de contraction des muscles sous-jacents donne lieu à l’apparition des rides. Par ailleurs, l’exposition aux ultraviolets augmente la dégradation de l’élastine. • Méthode d’évaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression de l’ElastineDistinctive features characterize elastin: Elastin allows cells to bind and allows biological tissue to form. Thus, the proper functioning of the skin, lungs, blood vessels, connective tissues, certain tendons and cartilages is closely related to the characteristics of elastin. As its name suggests, elastin is elastic. At equal diameter, it is 5 times more elastic than a rubber band. It can stretch up to 150% of its length at rest before breaking. Thus, it allows the tissues to stretch and regain their initial state after stretching, which gives them flexibility. Elastin is found in the dermis of the skin, which acts as a support. During aging, for example, the loss of elasticity and tonicity of the dermis that can no longer oppose the contraction effects of the underlying muscles gives rise to the appearance of wrinkles. In addition, exposure to ultraviolet rays increases the degradation of elastin. • Method for evaluating the effect of Lucuma extract on the expression of Elastin
Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ou vieillis par sénescence réplicative ont été ensemencés en plaque 96 puits et incubées 24h à 37°C, 5%C02.Normal or young Human Dermal Fibroblasts (NHDFs) aged or aged by replicative senescence were seeded in 96-well plates and incubated 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
Les cellules ont été traitées 24h en présence des produits d’essai.The cells were treated 24h in the presence of the test products.
Les cellules ont ensuite été fixées avec de la formaline et l’expression des protéines a été détectée par immunofluorescence.The cells were then fixed with formalin and the expression of the proteins was detected by immunofluorescence.
Les marquages fluorescents ont été imagés et quantifiés par microscopie automatisée (Arrayscan CellomicsTM). La fluorescence a été quantifiée par la bioapplication Compartimentai Analysis. • Evaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression de l’Elastine Les résultats sont donnés dans le tableau ci-dessous :Fluorescent markings were imaged and quantified by automated microscopy (Arrayscan CellomicsTM). Fluorescence was quantified by the Bioapplication Compartmental Analysis. • Evaluation of the effect of Lucuma extract on the expression of Elastin The results are given in the table below:
L’extrait de Lucuma permet de réactiver l’expression de l’Elastine par rapport aux cellules vieillies. • Conclusion L’extrait de Lucuma, est un ingrédient qui agit sur l’Elastine, cible du vieillissement cutané, en relançant l’expression protéique par rapport à des cellules vieillies non traitées et en la rétablissant partiellement en comparaison aux témoins jeunes. - Cible Fibrilline 1Lucuma extract can reactivate the expression of Elastin compared to aged cells. • Conclusion Lucuma extract is an ingredient that acts on Elastin, the target of skin aging, by reviving protein expression compared to untreated aged cells and partially restoring it compared to young controls. - Target Fibrillin 1
La Fibrilline 1 est une protéine qui constitue les microfibrilles, lesquelles sont associées aux fibres élastiques et participent à leur assemblage. • Méthode d’évaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression de la Fibrilline 1Fibrillin 1 is a protein that constitutes microfibrils, which are associated with elastic fibers and participate in their assembly. • Method for evaluating the effect of Lucuma extract on the expression of Fibrillin 1
Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ou vieillis extrinsèquement par irradiations ont été ensemencés en plaque 96 puits et incubées 24h à 37°C, 5%C02.The NHDFs (Normal Human Dermal Fibroblasts) young or aged extrinsically by irradiation were inoculated in 96-well plate and incubated 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
Les cellules destinées au vieillissement extrinsèque ont été irradiées 3 fois aux UVA avec 24h entre chaque irradiation ou aux 2 fois aux UVB avec 48h entre chaque irradiation.The cells intended for extrinsic aging were irradiated 3 times with UVA with 24 hours between each irradiation or 2 times with UVB with 48 hours between each irradiation.
Les cellules ont été traitées 24h en présence des produits d’essai.The cells were treated 24h in the presence of the test products.
Les cellules ont ensuite été fixées avec de la formaline et l’expression des protéines a été détectée par immunofluorescence.The cells were then fixed with formalin and the expression of the proteins was detected by immunofluorescence.
Les marquages fluorescents ont été imagés et quantifiés par microscopie automatisée (Arrayscan CellomicsTM). La fluorescence a été quantifiée par la bioapplication Compartimentai Analysis. ♦ Evaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression de la fibrilline 1Fluorescent markings were imaged and quantified by automated microscopy (Arrayscan CellomicsTM). Fluorescence was quantified by the Bioapplication Compartmental Analysis. ♦ Evaluation of the effect of Lucuma extract on the expression of fibrillin 1
Les résultats sont donnés dans le tableau ci-dessous :The results are given in the table below:
L’extrait de Lucuma permet de réactiver l’expression de la Fibrilline 1 par rapport aux cellules vieillies. • Conclusion L’extrait de Lucuma, est un ingrédient qui agit sur la Fibrilline 1, cible du vieillissement cutané, en relançant l’expression protéique par rapport à des cellules vieillies non traitées et en la rétablissant partiellement en comparaison aux témoins jeunes.Lucuma extract reactivates the expression of Fibrillin 1 compared to aged cells. • Conclusion Lucuma extract is an ingredient that acts on Fibrillin 1, the target of skin aging, by reviving protein expression compared to untreated aged cells and partially restoring it compared to young controls.
- Cible Méthylation de l’ADN- Target DNA methylation
La méthylation est une modification des extrémités N-terminales des histones. Elle peut s’effectuer soit sur des lysines soit sur des arginines et peut se concrétiser par l'ajout d'un, de deux ou de trois groupements méthyles. Selon les résidus méthylés et le nombre de groupements ajoutés elle est associée à une activation ou une répression de la transcription. Longtemps considérée comme statique, la méthylation des histones s'avère être une modification réversible impliquée dans un processus dynamique, bien que plus stable que l'acétylation et la phosphorylation. Un nombre croissant d'histones déméthylases sont identifiés. De manière générale, ce type de modifications est antagoniste à l’acétylation, et la désacétylation des lysines doit précéder leur méthylation. Cet antagonisme entraîne la mise en place d'un certain équilibre dynamique entre les territoires hétérochromatiniens (généralement non exprimables et méthylés sur certains acides aminés clés) et euchromatiniens (généralement exprimables et acétylés). Par exemple, la Lysine 9 de l'histone H3 est connue pour être associée à une répression de la chromatine environnante lorsqu'elle est méthylée. Cette méthylation est reconnue par une protéine, HPl, qui se fixe donc sur H3 méthylée. A son tour, HPl attire la protéine Suv39, une Histone MethylTransférase, qui pourra méthyler la lysine 9 de l'histone H3 du nucléosome voisin, et ainsi de suite. On voit donc, comment, de proche en proche, les histones H3 seront méthylées et la chromatine sera condensée. Cependant, cette invasion hétérochromatinienne sera stoppée si la lysine 9 de H3 rencontrée est déjà acétylée. Ainsi se met en place un équilibre compétitif entre domaines chromatiniens exprimés et réprimés. Les modifications des queues d'histones jouent le rôle de « marques » épigénétiques qui entraînent le recrutement de différentes classes de protéines, puisque les lysines acétylées ou méthylées sont reconnues par des domaines protéiques différents. De plus, le recrutement de certains facteurs au niveau de la chromatine nécessite l’existence préalable de modifications d’histones et de protéines déjà liées. Le code des histones est donc interprété dans le contexte d’autres facteurs associés à la chromatine et c’est la combinaison d’interaction entre les histones modifiées et d’autres facteurs qui détermine si une protéine est recrutée à la chromatine. Tous les tissus des organismes sont affectés par le vieillissement. Ce processus est lié aux modifications épigénétiques telles que les changements de méthylation au niveau de résidus cytosine spécifiques de l’ADN, tel que décrit dans de nombreuses publications^'^'^\ Le rôle des modifications épigénétiques sur le vieillissement, l’accumulation de divisions cellulaires et de macromolécules détériorées contribuent à un phénotype âgé. Les évènements environnementaux et aléatoires peuvent de plus modifier ce phénotype par l’intermédiaire de mécanismes épigénétiques tels que la méthylation de l’ADN et la méthylation et l’acétylation des histones. La potentielle réversibilité des modifications épigénétiques fait d’eux des cibles attractives pour le traitement des pathologies liées au vieillissement.Methylation is a modification of the N-termini of histones. It can be carried out either on lysines or on arginines and can be concretized by the addition of one, two or three methyl groups. Depending on the methylated residues and the number of added groups, it is associated with activation or repression of the transcription. Long regarded as static, histone methylation appears to be a reversible modification involved in a dynamic process, although more stable than acetylation and phosphorylation. An increasing number of histone demethylases are identified. In general, this type of modification is antagonistic to acetylation, and the deacetylation of lysines must precede their methylation. This antagonism results in the establishment of a certain dynamic equilibrium between the heterochromatin (generally non-expressible and methylated on certain key amino acids) and euchromatin (usually expressible and acetylated) territories. For example, Lysine 9 of histone H3 is known to be associated with repression of surrounding chromatin when methylated. This methylation is recognized by a protein, HP1, which binds to methylated H3. In turn, HP1 attracts the Suv39 protein, a Histone Methyl Transferase, which can methylate the histone H3 lysine 9 of the neighboring nucleosome, and so on. So we see how, step by step, the histones H3 will be methylated and the chromatin will be condensed. However, this heterochromatin invasion will be stopped if the H3 lysine 9 encountered is already acetylated. Thus a competitive equilibrium is established between chromatin domains expressed and repressed. Changes in histone tails act as epigenetic "brands" that result in the recruitment of different classes of proteins, since acetylated or methylated lysines are recognized by different protein domains. In addition, the recruitment of certain factors at the chromatin level requires the prior existence of modifications of histones and already bound proteins. The histone code is therefore interpreted in the context of other factors associated with chromatin and it is the combination of interaction between the modified histones and other factors that determines whether a protein is recruited to chromatin. All tissues of organisms are affected by aging. This process is related to epigenetic changes such as methylation changes at cytosine residues specific to DNA, as described in many publications. The role of epigenetic modifications in aging, the accumulation of Decreased cell divisions and macromolecules contribute to an older phenotype. Environmental and random events can further modify this phenotype through epigenetic mechanisms such as DNA methylation and methylation and acetylation of histones. The potential reversibility of epigenetic modifications makes them attractive targets for the treatment of aging-related pathologies.
• Méthode d’évaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur la méthylation de l’ADN• Method for Evaluating the Effect of Lucuma Extract on DNA Methylation
Les NHDF (Normal Human Dermal Fibroblasts) jeunes ou vieillis par sénescence réplicative ont été ensemencés en plaque 96 puits et incubées 24h à 37°C, 5%C02.Normal or young Human Dermal Fibroblasts (NHDFs) aged or aged by replicative senescence were seeded in 96-well plates and incubated 24h at 37 ° C., 5% CO 2.
Les cellules ont été traitées 24h en présence des produits d’essai.The cells were treated 24h in the presence of the test products.
Les cellules ont ensuite été décollées en présence de trypsine et lysées. L’ADN génomique a été précipité à l’Ethanol.The cells were then peeled off in the presence of trypsin and lysed. Genomic DNA was precipitated with ethanol.
Le taux de méthylation de l’ADN a été dosé par ELISA en utilisant le kit Enzo : 5-Methylcytosine DNA ELISA kit. Les valeurs sont représentées à partir de 50% pour une meilleure visibilité des résultats. • Evaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur la méthylation de l’ADN Les résultats sont donnés dans le tableau ci-dessous :The methylation rate of the DNA was assayed by ELISA using the Enzo kit: 5-Methylcytosine DNA ELISA kit. The values are represented from 50% for a better visibility of the results. • Evaluation of the effect of Lucuma extract on the methylation of DNA The results are given in the table below:
L’extrait de Lucuma permet de ramener le taux de méthylation dans les NHDF vieillis par réplication à hauteur de celui observé dans les cellules jeunes à 500 et 125ppm. • Conclusion L’extrait de Lucuma, est un ingrédient qui agit sur la diminution du taux de méthylation de l’ADN, cible de l’épivieillissement, et possède donc une activité rajeunissante. - Conclusion générale sur l’activité anti-âge et rajeunissante Au cours du vieillissement les fibres de collagène et les fibres élastiques sont altérées du fait d’une synthèse réduite et d’une dégradation accrue. Pour démontrer que l’extrait de Lucuma agit sur le rajeunissement cellulaire, ont été quantifiées dans les exemples précédents l’expression des protéines impliquées dans la structure de ces fibres au sein de cellules vieillies de manière intrinsèque (senescence réplicative) dans le cas du Collagène I et de l’Elastine, ou extrinsèque par irradiations UV répétées (photo vieillissement) dans le cas de la Fibrilline 1.Lucuma extract reduces the level of methylation in replication-aged NHDF to that observed in young cells at 500 and 125 ppm. • Conclusion Lucuma extract is an ingredient that acts on the reduction of the methylation rate of the DNA, target of the epivieillissement, and thus has a rejuvenating activity. General conclusion on the anti-aging and rejuvenating activity During aging the collagen fibers and the elastic fibers are altered due to reduced synthesis and increased degradation. To demonstrate that the Lucuma extract acts on cell rejuvenation, the expression of the proteins involved in the structure of these fibers in intrinsically aged cells (replicative senescence) in the case of collagen was quantified in the previous examples. I and Elastin, or extrinsic by repeated UV irradiation (photo aging) in the case of Fibrillin 1.
Les résultats obtenus démontrent que l’extrait de Lucuma permet de relancer l’expression des 3 marqueurs.The results obtained demonstrate that the Lucuma extract can revive the expression of the 3 markers.
Dans le cadre de l’analyse de la méthylation de l’ADN, l’extrait de Lucuma présente des résultats homogènes dans cette expérience, il diminue la méthylation aux 3 concentrations testées. Cet effet donne une information sur le mode d’action de l’extrait permettant de réactiver l’expression de protéines de la matrice extracellulaire, lui conférant son effet rajeunissant. L’extrait de Lucuma est par conséquent un principe actif présentant une activité biologique anti-âge, antivieillissement et rajeunissant. H agit de manière cohérente sur 3 cibles du vieillissement cutané en relançant l’expression protéique par rapport à celle observée dans les cellules vieillies. Il présente également une activité novatrice sur l’épigénétique comme le démontre son action sur la méthylation de l’ADN au sein de cellules matures. Enfin, il démontre une action anti-âge en profondeur par son efficacité sur la synthèse des protéines de la matrice extracellulaire.As part of the analysis of DNA methylation, Lucuma extract shows homogeneous results in this experiment, it decreases methylation at the 3 concentrations tested. This effect gives information on the mode of action of the extract to reactivate the expression of proteins of the extracellular matrix, giving it its rejuvenating effect. Lucuma extract is therefore an active ingredient with a biological activity anti-aging, anti-aging and rejuvenating. H acts in a consistent manner on 3 targets of skin aging by reviving the protein expression compared to that observed in aged cells. It also has an innovative activity on epigenetics as demonstrated by its action on DNA methylation in mature cells. Finally, it demonstrates an anti-aging action in depth by its efficiency on the synthesis of proteins of the extracellular matrix.
Exemple 6 ; Evaluation de l’activité éner2isante de l’extrait de LucumaExample 6; Evaluation of the energetic activity of Lucuma extract
La présente étude a permis d’étudier l’effet de l’extrait de Lucuma à différentes concentrations, sur la balance bioénergétique mitochondriale de fibroblastes primaires humains normaux (NHDF). L’extrait de Lucuma utilisé dans l’évaluation décrite ici est celui de l’exemple 2 décrit précédemment.The present study investigated the effect of Lucuma extract at different concentrations on the mitochondrial bioenergetic balance of normal human primary fibroblasts (NHDF). The Lucuma extract used in the evaluation described here is that of Example 2 described above.
La récente compréhension que la dépréciation des mitochondries est centrale pour décrire le processus du vieillissement*’ *^ *^ a suscité un intérêt considérable dans une nouvelle approche anti-vieillissement qui implique le développement de nouvelles molécules cibles impliquées dans le dysfonctionnement des mitochondries. Dans ce but l’étude menée ici génère des outils permettant l’évaluation des ingrédients actifs présents dans l’extrait de Lucuma démontrant un impact sur l'amélioration des processus mitochondriaux impliqués dans le vieillissement de la peau.The recent understanding that the depreciation of mitochondria is central to describing the aging process has aroused considerable interest in a new anti-aging approach that involves the development of new target molecules involved in mitochondrial dysfunction. For this purpose the study conducted here generates tools for the evaluation of the active ingredients present in the Lucuma extract demonstrating an impact on the improvement of the mitochondrial processes involved in the aging of the skin.
Plusieurs analyses peuvent être effectuées de manière isolée ou en combinaison pour déterminer la viabilité cellulaire : suivi de la production d'oxygène de l'espèce, la production d'ATP, la consommation d'oxygène, la peroxydation des lipides, ainsi que l'épuisement de l’ADN mitochondrial (ADNmt). riD ri 1 ri riSeveral assays can be performed in isolation or in combination to determine cell viability: monitoring of species oxygen production, ATP production, oxygen uptake, lipid peroxidation, and depletion of mitochondrial DNA (mtDNA). riD ri 1 ri ri
Le stress oxydatif généré par des facteurs environnementaux comme les UV ’ ’ et la pollution ’ ’ ’ est une cause fondamentale du déclin progressif des fonctions de tissus associé à l'âge ’ ’ , notamment une diminution progressive de l'énergie cellulaire et du métabolisme.Oxidative stress generated by environmental factors such as UV '' and pollution '' is a fundamental cause of the gradual decline of age-related tissue functions, including a gradual decrease in cellular energy and metabolism .
Par conséquent, il est intéressant d'évaluer in vitro la capacité d’ingrédients actifs à revitaliser le métabolisme cellulaire et notamment le renouvellement de la peau, par le biais de la stimulation de la respiration cellulaire, devenue ainsi une clé dans le développement de cosmétiques nouvelle génération.Therefore, it is interesting to evaluate in vitro the ability of active ingredients to revitalize cellular metabolism and in particular the renewal of the skin, through the stimulation of cellular respiration, thus becoming a key in the development of cosmetics new generation.
Dans cet exemple sont quantifiées la consommation de dioxygène (02), le niveau d’ATP cellulaire et le potentiel pro-oxydant de l’extrait de Lucuma dans les cellules vivantes. • Evaluation préalable de la cytotoxicitéIn this example are quantified dioxygen consumption (02), cell ATP level and prooxidant potential of Lucuma extract in living cells. • Prior evaluation of cytotoxicity
La cytotoxicité des molécules a été évaluée sur des NHDF en monocouche, pré-incubés pendant 24h avec soit du solvant DMSO à 0.5%, soit avec l’extrait de Lucuma à 5 concentrations différentes (0.1, 0.5, 1.5 et 10%).The cytotoxicity of the molecules was evaluated on monolayer NHDFs, preincubated for 24 hours with either 0.5% DMSO solvent or with Lucuma extract at 5 different concentrations (0.1, 0.5, 1.5 and 10%).
La viabilité cellulaire a ensuite été mesurée par absorbance à 540 nm en utilisant le réactif MTT. Les résultats obtenus sont donnés dans la figure 1 A. L’extrait de Lucuma présente une cytotoxicité totale à 10%, moyenne à 5% et devient non cytotoxique à 0.1, 0.5 et 1%.Cell viability was then measured by absorbance at 540 nm using the MTT reagent. The results obtained are given in FIG. 1A. The Lucuma extract exhibits a total cytotoxicity at 10%, average at 5% and becomes non-cytotoxic at 0.1, 0.5 and 1%.
Concentrations retenues pour être testées :Concentrations selected for testing:
Pour la suite de l’étude l’Extrait de Lucuma est testé aux concentrations suivantes : 0.05 - 0.25 -0.5 %. - Cible MitochondrieFor the rest of the study Lucuma extract is tested at the following concentrations: 0.05 - 0.25 -0.5%. - Mitochondria target
Une mitochondrie est un organite cellulaire dont le rôle physiologique est primordial. Elle est considérée comme la « centrale énergétique » de la cellule, car c'est là que se déroulent les dernières étapes du cycle respiratoire qui convertit l'énergie des molécules organiques issues de la digestion (glucose) en énergie directement utilisable par la cellule (ΓΑΤΡ). En cas d'absence d'oxygéne la cellule utilise la fermentation dans le cytoplasme pour produire l'énergie nécessaire à son fonctionnement, mais c'est un système bien moins efficace, qui dégrade le substrat de façon incomplète. L'augmentation de la concentration en ions dans les cellules musculaires est une des raisons de la fatigue après une activité intense. En effet, ces ions changent le pH intracellulaire et modifient de fait les conditions de fonctionnement enzymatiques de la cellule qui ne peut plus travailler correctement. • Description de l’étude Mitosafe® Bioenergetic Balance Screen (BBS)A mitochondrion is a cellular organelle whose physiological role is primordial. It is considered as the "power station" of the cell, because it is there that the last stages of the respiratory cycle take place, which converts the energy of the organic molecules resulting from the digestion (glucose) into energy directly usable by the cell ( ΓΑΤΡ). In the absence of oxygen the cell uses fermentation in the cytoplasm to produce the energy necessary for its operation, but it is a much less efficient system, which degrades the substrate incompletely. Increasing the concentration of ions in muscle cells is one of the reasons for fatigue after intense activity. In fact, these ions change the intracellular pH and in fact modify the enzymatic operating conditions of the cell which can no longer work properly. • Description of the Mitosafe® Bioenergetic Balance Screen (BBS) study
La technologie Mitosafe® utilisée dans cette étude offre une alternative aux tests biochimiques actuels pour analyser et cribler des ingrédients naturels en fonction de leurs performances à l'égard cellulaire et / ou cibles mitochondriales.The Mitosafe® technology used in this study offers an alternative to current biochemical tests to analyze and screen natural ingredients based on their cellular performance and / or mitochondrial targets.
Ces dosages génèrent des résultats décrivant l'équilibre énergétique mitochondrial, l'état redox et mitochondrial en réponse à la biogenèse des composés actifs. Ds permettent d’identifier et de détecter les dysfonctionnements mitochondriaux mais aussi d'apporter rapidement des informations pertinentes sur le potentiel des composés à protéger les mitochondries des agressions et des dysfonctionnements. L’extrait de Lucuma est dilué aux concentrations de 0.05, 0.25 et 0.5% (v/v) en présence de 0.5% de DMSO et 4 essais de chaque concentration sont testés.These assays generate results describing the mitochondrial energy balance, the redox and mitochondrial state in response to the biogenesis of the active compounds. They enable the identification and detection of mitochondrial dysfunctions as well as the rapid provision of relevant information on the potential of compounds to protect mitochondria from aggressions and dysfunctions. The Lucuma extract is diluted to 0.05, 0.25 and 0.5% (v / v) in the presence of 0.5% DMSO and 4 tests of each concentration are tested.
En parallèle sont testés aussi des composés de référence, permettant de vérifier le bon fonctionnement de l’étude (contrôles positif et négatif et référence Coenzyme QIO). L'analyse Mitosecure BBS a été réalisée selon les procédures opératoires standard ME-MO-29 ("BBS Fibroblastes"). Elle consiste en la quantification multiple de la consommation de dioxygène et le niveau d'ATP cellulaire en ce qui concerne la viabilité cellulaire.In parallel are also tested reference compounds, to verify the proper functioning of the study (positive and negative controls and reference Coenzyme QIO). Mitosecure BBS analysis was performed according to the standard operating procedures ME-MO-29 ("BBS Fibroblasts"). It consists of the multiple quantification of dioxygen consumption and the level of cellular ATP with respect to cell viability.
Après lavage, les cellules sont incubées avec chaque concentration d'éléments de test pendant 120 minutes au cours de l'essai, tandis que leur consommation de dioxygène dynamique est mesurée en utilisant une sonde fluorescente. Le signal fluorescent est enregistré en utilisant un lecteur de microplaques (Varioskan -Thermo). Les cellules sont maintenues à 37 ° C au cours de la boucle cinétique. Après la mesure de la consommation de dioxygène, la viabilité cellulaire est mesurée en utilisant un colorant fluorescent pénétrant. La troisième étape consiste à mesurer le niveau de ΓΑΤΡ cellulaire en chimiluminescence. Le contrôle négatif est Tessai qui consiste à traiter les cultures avec le véhicule seul (DMSO 0,5%). Les traitements avec la roténone et le FCCP (p-trifluoromethoxyphenylhydrazone) constituent les témoins positifs sont utilisés comme une validation de l'expérience. Tous les éléments d'essai sont testés en quatre exemplaires. L’effet de l'extrait de Lucuma a été comparé à la fois au témoin négatif et à celui du composé de référence d'excitation.After washing, the cells are incubated with each concentration of test elements for 120 minutes during the test, while their dynamic oxygen consumption is measured using a fluorescent probe. The fluorescent signal is recorded using a microplate reader (Varioskan-Thermo). The cells are maintained at 37 ° C during the kinetic loop. After measuring the oxygen uptake, cell viability is measured using a penetrating fluorescent dye. The third step is to measure the level of cellular en in chemiluminescence. The negative control is Tessai which consists of treating crops with the vehicle alone (DMSO 0.5%). Treatments with rotenone and FCCP (p-trifluoromethoxyphenylhydrazone) are the positive controls used as a validation of the experiment. All test items are tested in four copies. The effect of Lucuma extract was compared to both the negative control and the excitation reference compound.
Les données sont traitées au préalable pour exprimer le potentiel cytotoxique pour chaque ingrédient actif. Les effets des ingrédients actifs sont exprimés comme un rapport par rapport au témoin négatif.The data are pretreated to express the cytotoxic potential for each active ingredient. The effects of the active ingredients are expressed as a ratio to the negative control.
Les données sont ensuite traitées pour exprimer la consommation d'02 par cellule, le niveau ATP cellulaire par cellule et le niveau de lactate extracellulaire par cellule pour chaque condition expérimentale.The data are then processed to express the O 2 consumption per cell, the cellular ATP level per cell and the extracellular lactate level per cell for each experimental condition.
Selon les procédures opératoires standard, tous les critères de validation sont remplis. Les expériences sont considérées comme validées. L'analyse du test de Student a été réalisée pour déterminer le niveau d'importance de l'amplitude des variations enregistrées dans les différents paramètres mesurés dans les conditions expérimentales testées en ce qui concerne les témoins négatifs et positifs. Toutes les données statistiques ont été générées à l'aide du logiciel SPSS. • Evaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur le taux de consommation de dioxygène (02)According to standard operating procedures, all validation criteria are met. The experiments are considered validated. The analysis of the Student's test was carried out to determine the level of importance of the amplitude of the variations recorded in the various parameters measured under the experimental conditions tested with regard to the negative and positive controls. All statistical data was generated using the SPSS software. • Evaluation of the effect of Lucuma extract on the consumption rate of oxygen (02)
Les résultats sont donnés dans la figure IB.The results are given in Figure IB.
Les NHDF sont incubés en plaque 96 puits avec soit la coenzyme QIO à 0,000086% soit l’extrait de Lucuma à 0,05, 0,25 et 0,5%, tandis que la consommation d’Oi dynamique était mesurée pendant 120 minutes. Les niveaux de consommation d'Oi sont directement réfléchis par les variations de la valeur de durée de vie de la sonde. Pour obtenir les valeurs de la consommation d’Oi par la cellule, les pentes du profil de cinétique sont enregistrées et sont calculées par cellule pour chaque puits et chaque condition expérimentale. L'analyse t-test de Student a montré des différences significatives entre les conditions expérimentales effectuées. • ConclusionNHDFs are incubated in 96-well plates with either 0.000086% coenzyme QIO or 0.05, 0.25 and 0.5% Lucuma extract, while dynamic Oi consumption is measured during 120 minutes. Consumption levels of Oi are directly reflected by changes in the lifetime value of the probe. To obtain the values of the Oi consumption by the cell, the slopes of the kinetic profile are recorded and are calculated per cell for each well and each experimental condition. Student t-test analysis showed significant differences between the experimental conditions performed. • Conclusion
En présence du composé de référence énergisant, le coenzyme QIO à 0,000086%, le taux de consommation d'02 dans les fibroblastes primaires humains a été significativement augmenté de près de 3,3 fois par rapport au contrôle négatif (p = 0,004). L’extrait de Lucuma a montré un effet en forme de cloche sur le taux de consommation d'02, augmentant de manière significative la consommation d'oxygène par rapport aux cellules non traitées. À 0,25%, l'effet de l’extrait de Lucuma était maximale, augmentant le taux de consommation d'02 de près de 4,4 fois par rapport aux cellules non traitées. Globalement, l'effet de l’extrait de Lucuma aux trois concentrations testées est comparable à celle de la coenzyme QIO à 0,000086%. Le tableau ci-dessous résume les effets des différents essais de l’extrait de Lucuma sur le taux de consommation d'oxygène.In the presence of the energizing reference compound, Coenzyme QIO at 0.000086%, the rate of O 2 consumption in human primary fibroblasts was significantly increased by nearly 3.3-fold compared to the negative control (p = 0.004). . Lucuma extract showed a bell-shaped effect on the O 2 consumption rate, significantly increasing oxygen consumption over untreated cells. At 0.25%, the effect of Lucuma extract was maximal, increasing the O 2 consumption rate by nearly 4.4 times compared to untreated cells. Overall, the effect of Lucuma extract at the three tested concentrations is comparable to that of 0.000086% Coenzyme QIO. The table below summarizes the effects of different tests of Lucuma extract on the rate of oxygen consumption.
• Evaluation de l’effet de l’extrait de Lucuma sur le niveau d’ATP cellulaire• Evaluation of the effect of Lucuma extract on cellular ATP level
Les résultats sont donnés dans la figure IC.The results are given in Figure IC.
Les NHDF sont incubés soit avec le coenzyme QIO à 0,000086% soit avec l’extrait de Lucuma à 0,05, 0,25 et 0,5% pendant 120 minutes. Le niveau d’ATP cellulaire est mesuré par chimiluminescence. Une régression linéaire est réalisée pour produire des concentrations d'ATP cellulaires en utilisant une courbe standard validée correspondante (le coefficient de corrélation était plus élevé que 0,95 (R^ = 0,99872)). L'analyse t-test de Student montre des différences significatives entre les conditions expérimentales effectuées. • ConclusionNHDFs are incubated with either 0.000086% Coenzyme QIO or 0.05, 0.25 and 0.5% Lucuma extract for 120 minutes. The level of cellular ATP is measured by chemiluminescence. Linear regression was performed to produce cellular ATP concentrations using a corresponding validated standard curve (the correlation coefficient was higher than 0.95 (R = 0.99872)). Student t-test analysis shows significant differences between the experimental conditions performed. • Conclusion
Le composé de référence, la coenzyme QIO à 0,000086%, augmente de façon significative le niveau d'ATP cellulaire de près de 1,4 fois par rapport aux cellules non traitées (p = 0,015). Dans les fibroblastes primaires humains, l'ingrédient actif de l’extrait de Lucuma à 0,05, 0,25 et 0,5%, augmente de manière significative le niveau d'ATP cellulaire de près de 1,4 fois par rapport au témoin négatif, à un niveau comparable à celui de la coenzyme QIO. Le tableau ci-dessous résume les effets des différentes concentrations de l’extrait de Lucuma sur le niveau d’ATP cellulaire.The reference compound, 0.000086% Coenzyme QIO, significantly increased the level of cellular ATP by nearly 1.4-fold compared to untreated cells (p = 0.015). In primary human fibroblasts, the active ingredient of Lucuma extract at 0.05, 0.25 and 0.5% significantly increases the level of cellular ATP by nearly 1.4-fold compared with negative control, at a level comparable to that of coenzyme QIO. The table below summarizes the effects of different concentrations of Lucuma extract on the level of cellular ATP.
• Evaluation du potentiel pro-oxydant de l’extrait de Lucuma au niveau cellulaire• Evaluation of the pro-oxidant potential of Lucuma extract at the cellular level
Le test consiste en la quantification du potentiel pro-oxydant de l’extrait de Lucuma en comparaison à une référence pro-oxydante, c’est-à-dire la mesure de la production de dérivés réactifs de l'oxygène cellulaire ((DROc) en utilisant un colorant fluorescent. L'analyse est effectuée selon les procédures opératoires standard ME-MO-22 (« DRO cellulaire dans les fibroblastes »). Les cellules sont pré-incubées avec la sonde fluorescente à 37 ° C pendant 30 minutes. Après lavage, les cellules sont incubées avec les éléments de test à des concentrations déterminées et le composé de référence pro-oxydant, H202 à 100 um. La production de DRO cellulaire dynamique est immédiatement enregistrée pendant 60 minutes. La fluorescence est enregistrée toutes les cinq minutes en utilisant un lecteur de microplaques (Varioskan-Thermo). Les cellules sont maintenues à 37 ° C au cours de la cinétique en boucle. L'analyse de l'activité pro-oxydant est multiple pour la mesure de la viabilité des cellules par spectrophotométrie. Les expériences comprennent un blanc et des contrôles négative et positif. Le contrôle négatif est constitué par les cultures traitées avec le véhicule seulement. Le positif consiste au traitement des cultures avec le composé de référence pro-oxydant : 1Ή202. L'ingrédient actif de l’extrait de Lucuma, sera testé à 0,05%, 0,25% et 0,5% (v / v), en présence de 0,5% de DMSO indépendamment du véhicule.The test consists in quantifying the prooxidant potential of the Lucuma extract in comparison with a prooxidant reference, that is to say the measurement of the production of reactive derivatives of cellular oxygen ((DROc) The analysis is performed according to the standard operating procedures ME-MO-22 ("Cellular DRO in fibroblasts") .The cells are preincubated with the fluorescent probe at 37 ° C. for 30 minutes. After washing, the cells are incubated with the test elements at specified concentrations and the prooxidant reference compound, H 2 O 2 at 100 μm Dynamic dynamic DRO production is immediately recorded for 60 minutes Fluorescence is recorded every five minutes using a microplate reader (Varioskan-Thermo) The cells are maintained at 37 ° C during loop kinetics.The analysis of the prooxidant activity is multiple for the measurement of cell viability by spectrophotometry. The experiments include a blank and negative and positive controls. The negative control consists of crops treated with the vehicle only. The positive is the treatment of cultures with the reference compound prooxidant: 1Ή202. The active ingredient of the Lucuma extract will be tested at 0.05%, 0.25% and 0.5% (v / v), in the presence of 0.5% DMSO regardless of vehicle.
Les différentes concentrations de l’extrait de Lucuma sont testées en quatre exemplaires. Leurs effets seront comparés par rapport à la fois aux témoins négatifs et positifs.The different concentrations of Lucuma extract are tested in four copies. Their effects will be compared with both negative and positive controls.
Les résultats sont donnés dans la figure ID L'analyse t-test de Student est faite pour déterminer le niveau d'importance de 1’ amplitude de variation des différents paramètres mesurés et potentiellement observés dans toutes les conditions expérimentales en ce qui concerne les témoins négatifs et positifs. Toutes les données statistiques sont générées à l'aide du logiciel SPSS. - Conclusion L'effet du contrôle positif a été validé dans les NHDF. L’H202 à 100 uM induit une augmentation de 3,4 fois significative du taux cellulaire de production de DRO par rapport aux cellules non traitées (p<0.0001). À toutes les doses testées et après une courte incubation de 1 heure, l’extrait de Lucuma n'a pas stimulé la production de DRO cellulaire dans les NHDF et a laissé ce niveau inchangé par rapport à celui des cellules non traitées. Ainsi, dans les présentes conditions expérimentales, l’extrait de Lucuma est démontré comme n’étant pas un composé pro-oxydant. - Conclusion générale sur l’activité énergisante de l’extrait de Lucuma L'étude complète a montré que l’extrait de Lucuma aux 3 concentrations testées, affiche le profil d'un composé énergisant chez les NHDF, comparable à celui du coenzyme QIO en stimulant la phosphorylation oxydative, augmentant à la fois la consommation d'oxygène et la production d’ATP, tout en ne générant pas de déchets (dérivés réactifs oxygénés) responsables de l’oxydation cellulaire. L’extrait de Lucuma selon l’invention stimule la chaîne respiratoire, stimulant ainsi la fonction énergétique de la mitochondrie, siège de la production d’ATP impliquée dans les processus cellulaires vitaux, en respectant la balance d'oxydoréduction restant ainsi équilibrée. L’extrait de Lucuma démontre ainsi une activité énergisante^^ sur la peau humaine, comparable à la coenzyme QIO.The results are given in Figure ID. Student's t-test analysis is done to determine the level of importance of the amplitude of variation of the various parameters measured and potentially observed in all the experimental conditions with respect to the negative controls. and positive. All statistical data is generated using the SPSS software. - Conclusion The effect of the positive control has been validated in NHDF. The 100 μM H 2 O 2 induced a significant 3.4-fold increase in the rate of DRO production compared to untreated cells (p <0.0001). At all doses tested and after a short incubation of 1 hour, Lucuma extract did not stimulate the production of cellular DRO in NHDFs and left this level unchanged compared to that of untreated cells. Thus, in the present experimental conditions, the Lucuma extract is demonstrated to be not a prooxidant compound. - General conclusion on the energizing activity of the Lucuma extract The complete study showed that the Lucuma extract at the 3 concentrations tested, displays the profile of an energizing compound in the NHDF, comparable to that of the coenzyme QIO in stimulating oxidative phosphorylation, increasing both oxygen consumption and ATP production, while not generating waste (oxygenated reactive derivatives) responsible for cell oxidation. The Lucuma extract according to the invention stimulates the respiratory chain, thereby stimulating the energy function of the mitochondria, the seat of the ATP production involved in the vital cellular processes, while respecting the balance of oxidation-reduction thus remaining balanced. The extract of Lucuma thus demonstrates an energizing activity ^^ on human skin, comparable to coenzyme QIO.
Exemple 7 : Evaluation de l’activité hydratante de l’extrait de Lucuma L'épiderme forme une barrière physique et perméable. Cette barrière est continuellement régénérée par la différenciation des kératinocytes, processus connu sous le nom de kératinisation. Dans l'épiderme, il y a plusieurs composants importants pour la fonction de barrière dont des protéines comme Claudine, involucrine, filaggrine agissant sur la prévention des pertes en eau,-des lipides comme les céramides contribuant aux propriétés perméables de la barrière et d'autres éléments comme l'aquaporine 3 agissant sur le transport des solutés ou la hyaluronane synthase 3 impliquée dans la synthèse d'acide hyaluronique.EXAMPLE 7 Evaluation of the Moisturizing Activity of the Lucuma Extract The epidermis forms a physical and permeable barrier. This barrier is continually regenerated by the differentiation of keratinocytes, a process known as keratinization. In the epidermis, there are several important components for barrier function including proteins such as Claudine, involucrine, filaggrine acting on the prevention of water loss, lipids such as ceramides contributing to the permeable properties of the barrier and other elements such as aquaporin 3 acting on the transport of solutes or hyaluronan synthase 3 involved in the synthesis of hyaluronic acid.
Lorsque la barrière cutanée fonctionne correctement, l'èpiderme empêche la perte d'eau.When the skin barrier is functioning properly, the epidermis prevents the loss of water.
Une étude évaluant l’effet de l’extrait de Lucuma sur l’expression de marqueurs dans des modèles de fibroblastes in vitro est ainsi menée ici sur 16 gènes spécifiques de la fonction barrière cutanée. L’extrait de Lucuma utilisé dans l’évaluation décrite ici est celui de l’exemple 2 décrit précédemment.A study evaluating the effect of Lucuma extract on the expression of markers in fibroblast models in vitro is thus conducted here on 16 genes specific for the cutaneous barrier function. The Lucuma extract used in the evaluation described here is that of Example 2 described above.
Le tableau 1 ci-dessous récapitule les gènes testés, classés par groupes en fonction de leur fonction biologique.Table 1 below summarizes the genes tested, classified by groups according to their biological function.
Tableau 1Table 1
L’étude consiste en une analyse par RT-qPCR du profil d’expression en ARNm des gènes.The study consists of RT-qPCR analysis of the gene mRNA expression profile.
Parmi eux, le gène de la filaggrine (FLG), celui de la sphyngomyéline phosphodiestérase 1 (SMPDl) ainsi que le gène de l’arachidonate lipoxygénase 12 (ALOX12).Among them, the gene filaggrin (FLG), that of sphyngomyelin phosphodiesterase 1 (SMPD1) and the arachidonate gene lipoxygenase 12 (ALOX12).
La filaggrine est la protéine localisée dans la couche granuleuse et dans la couche cornée dont la quantité est associée à l’état d’hydratation de la peau. Seul, ce marqueur peut être suivi pour évaluer l’état d’hydratation de la peau à la place d’une mesure du TEWL (Trans EpiedermalFilaggrin is the protein located in the granular layer and in the stratum corneum, the amount of which is associated with the hydration state of the skin. Only this marker can be used to evaluate the hydration state of the skin in place of a TEWL measurement (Trans Epiedermal
Water Loss). Dans des situations pathologiques où l’on observe une xérose ou sécheresse de la peau (dermatite atopique, ichtyosis vulgaris), une diminution de la profilaggrine et/ou de la fllaggrine a été détectée ’ .Selon Proksch et al, le suivi de l’expression de la filaggrine est un bon moyen de suivre la fonction barrière et/ou le niveau d’hydratation du Stratum Comeum.Water Loss). In pathological situations where xerosis or dryness of the skin (atopic dermatitis, ichthyosis vulgaris) is observed, a decrease in profilaggrin and / or flaggrin has been detected. According to Proksch et al, the follow-up of Expression of filaggrin is a good way to track the barrier function and / or hydration level of the Stratum Comeum.
La sphyngomyeline est un sphingolipide constitué d'une unité céramide liée à un résidu de choline ou d'éthanolamine par une liaison phosphodiester. Chez l'Homme, les sphingomyélines constituent environ 85 % de tous les sphingolipides et serait le seul phospholipide qui ne soit pas un phosphoglycéride.Sphyngomyelin is a sphingolipid consisting of a ceramide unit bound to a choline residue or ethanolamine by a phosphodiester bond. In humans, sphingomyelin constitutes about 85% of all sphingolipids and is the only phospholipid that is not a phosphoglyceride.
La protéine codée par ce gène SMPDl est une sphingomyélinase acide lysosomale qui convertit la sphingomyéline en céramide, molécule abondante dans les membranes cellulaires. Les céramides ne jouent pas qu'un rôle structurel dans les membranes biologiques, et peuvent également revêtir des fonctions de signalisation lipidique. Leurs actions les mieux comprises vont de la différenciation cellulaire à l'apoptose en passant par la prolifération cellulaire et la mort cellulaire programmée.The protein encoded by this SMPD1 gene is a lysosomal acid sphingomyelinase that converts sphingomyelin to ceramide, an abundant molecule in cell membranes. Ceramides do not only play a structural role in biological membranes, and may also have lipid signaling functions. Their best-understood actions range from cell differentiation to apoptosis, cell proliferation and programmed cell death.
La protéine codée par le gène SMPDl a également une activité de phospholipase C. Les défauts de ce gène sont une cause de la maladie de Niemann-Pick de type A et B, dues à un déficit en sphingomyélinase acide lysosomiale^^ aboutissant à l'accumulation de sphingomyéline, puis de cholestérol dans les monocytes, voire dans le cerveau (type A).The protein encoded by the SMPD1 gene also has phospholipase C activity. The defects of this gene are a cause of Niemann-Pick type A and B disease, due to a lysosomal acid sphingomyelinase deficiency leading to the accumulation of sphingomyelin, then cholesterol in monocytes or even in the brain (type A).
La lipoxygénase est un type de protéine enzymatique qui catalyse l'oxydation des acides gras ou autres alcènes. Il en existe de multiples sortes. L’arachidonate 12-lipoxygénase ALOX12 convertit l’acide arachidonique, acide gras polyinsaturé oméga-6 à 20 atomes de carbone, présent dans les phospholipides (notamment les phosphatidyléthanolamines, les phosphatidylcholines et les phosphatidylinositols) et constituant les membranes cellulaires de l'organisme. Cette enzyme intéragit aussi avec la kératine 5, cytokératine spécifiquement exprimée dans la couche basale de l'épiderme^^. • Matériel et méthode Kératinocytes épidermiques humain normaux (NHEK) - Type cellulaire : NHEK, Référence ^AOalternatives K341, utilisés au 3e passageLipoxygenase is a type of enzymatic protein that catalyzes the oxidation of fatty acids or other alkenes. There are many kinds. Arachidonate 12-lipoxygenase ALOX12 converts arachidonic acid, omega-6 polyunsaturated fatty acid to 20 carbon atoms, present in phospholipids (including phosphatidylethanolamines, phosphatidylcholines and phosphatidylinositols) and constituting cell membranes of the body. This enzyme also interacts with keratin 5, a cytokeratin specifically expressed in the basal layer of the epidermis. • Material and method Normal human epidermal keratinocytes (NHEK) - Cell type: NHEK, Reference ^ AOalternatives K341, used 3rd pass
- Conditions de culture : 37°C, 5% CO 2 - Milieu de culture : Kératinocyte-SFM complémenté avec- Culture conditions: 37 ° C, 5% CO 2 - Culture medium: Keratinocyte-SFM supplemented with
Epidermal Growth Factor (EGF) 0.25 ng/ml Extrait Pituitaire (EP) 25 pg/ml Gentamycine 25 pg/ml - Milieu d’essai : Kératinocyte-SFM complémenté avecEpidermal Growth Factor (EGF) 0.25 ng / ml Pituitary Extract (PE) 25 μg / ml Gentamycin 25 μg / ml - Test medium: Keratinocyte-SFM supplemented with
Gentamycine 25 pg/ml • Evaluation préalable de la cytotoxicitéGentamycin 25 μg / ml • Prior evaluation of cytotoxicity
Les kératinocytes sont ensemencés et cultivés en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu est ensuite remplacé par le milieu d’essai contenant ou non (témoin) les composés à l’essai ou la référence (chlorure de calcium à 1.5 mM) et les cellules sont incubées pendant 24 heures. Toutes les conditions sont réalisées en n=3. A la fin du traitement, les cellules sont incubées en présence de MIT (sel de tétrazolium) dont la transformation en cristaux bleus de formazan est proportionnelle à l'activité de la succinate deshydrogénase (enzyme mitochondriale). Après dissociation des cellules et solubilisation du formazan par ajout de DMSO, la densité optique (DO), représentative du nombre de cellules vivantes et de leur activité métabolique, est mesurée avec un lecteur de microplaques à 540 nm (VERSAmax, Molecular Devices).The keratinocytes are inoculated and cultured in culture medium for 24 hours. The medium is then replaced with the test medium containing or not (control) test compounds or reference (1.5 mM calcium chloride) and the cells are incubated for 24 hours. All conditions are realized in n = 3. At the end of the treatment, the cells are incubated in the presence of MIT (tetrazolium salt) whose transformation into blue crystals of formazan is proportional to the activity of succinate dehydrogenase (mitochondrial enzyme). After dissociation of the cells and solubilization of formazan by addition of DMSO, the optical density (OD), representative of the number of living cells and their metabolic activity, is measured with a microplate reader at 540 nm (VERSAmax, Molecular Devices).
Concentrations retenues pour être testées : 0.0003, 0.001 et 0.003% • Culture et traitementConcentrations selected for testing: 0.0003, 0.001 and 0.003% • Culture and processing
Les kératinocytes sont ensemencés et cultivés en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu est ensuite remplacé par le milieu d’essai contenant ou non (témoin) les composés à l’essai ou la référence CaCli (chlorure de calcium à 1.5 mM) et les cellules sont incubées pendant 24 heures. Toutes les conditions sont réalisées en n=3. A la fin de l’incubation, les surnageants de culture sont éliminés et les tapis cellulaires sont rincés avec une solution de PBS. Les plaques sont immédiatement congelées à sec à -80°C.The keratinocytes are inoculated and cultured in culture medium for 24 hours. The medium is then replaced with the test medium containing or not (control) the test compounds or reference CaCli (calcium chloride 1.5 mM) and the cells are incubated for 24 hours. All conditions are realized in n = 3. At the end of the incubation, the culture supernatants are removed and the cell mats are rinsed with PBS solution. The plates are immediately frozen dry at -80 ° C.
• Analyse de l’expression différentielle - série PCR L’expression des marqueurs est évaluée par RT-qPCR sur les ARN messagers (ARNm) extraits des tapis cellulaires de chaque traitement (les réplicats sont poolés avant l’extraction de TARN). L’analyse de l’expression des gènes est réalisée en n=2 à l’aide de 2 « série PCR » contenant 16 gènes dont 2 gènes de référence, pour la vérification du test (dits « de ménage »), dédiés à la recherche et adaptés au format « screening ». • Transcription inverse• Differential expression analysis - PCR series The expression of the markers is evaluated by RT-qPCR on the messenger RNAs (mRNA) extracted from the cell mats of each treatment (the replicates are pooled before the extraction of RNA). The analysis of gene expression is performed in n = 2 using 2 "PCR series" containing 16 genes including 2 reference genes, for the verification of the test (so-called "household"), dedicated to the research and adapted to the "screening" format. • Inverse transcription
Les ARN totaux de chaque échantillon sont extraits à l’aide de TriPure Isolation Reagent® selon le protocole préconisé par le fournisseur. La quantité et la qualité des ARNs sont évaluées par électrophorèse capillaire (Bioanalyzer 2100, Agilent). Les contrôles qualité des ARN sont présentés en annexe.The total RNAs of each sample are extracted using TriPure Isolation Reagent® according to the protocol recommended by the supplier. The quantity and quality of the RNAs are evaluated by capillary electrophoresis (Bioanalyzer 2100, Agilent). RNA quality controls are presented in the appendix.
Les traces d’ADN potentiellement contaminant sont éliminées par traitement avec le système DNA-free (Ambion). Les ADN complémentaires (ADNc) sont synthétisés par transcription inverse des ARN totaux en présence d’oligo(dT) et de l’enzyme « Transcriptor Reverse Transcriptase » (Roche). L’ADNc obtenu est quantifié par spectrophotométrie (Nanovue ; GE Healthcare), puis les quantités ADNc sont ajustées. • PCR QuantitativeTraces of potentially contaminating DNA are removed by treatment with the DNA-free system (Ambion). Complementary DNAs (cDNA) are synthesized by reverse transcription of total RNA in the presence of oligo (dT) and the enzyme "Transcriptor Reverse Transcriptase" (Roche). The cDNA obtained is quantified by spectrophotometry (Nanovue, GE Healthcare) and the cDNA amounts are adjusted. • Quantitative PCR
Les réactions de PCR (polymerase chain reactions) sont réalisées par PCR quantitative (Light Cycler ; Roche Molecular Systems Inc.) et selon les procédures recommandées par le fournisseur.PCR reactions (polymerase chain reactions) are performed by quantitative PCR (Light Cycler, Roche Molecular Systems Inc.) and according to the procedures recommended by the supplier.
Le mélange réactionnel (10 μ1 final) pour chaque échantillon contient : - 2.5 μ1 d’ADNc, - les amorces des différents marqueurs utilisés, - le mélange réactionnel contenant l’enzyme taq DNA polymérase, le marqueur SYBR Green I et du MgC12. • Traitement des données de PCR quantitativeThe reaction mixture (10 μl final) for each sample contains: - 2.5 μl of cDNA, the primers of the various markers used, the reaction mixture containing the enzyme Taq DNA polymerase, the SYBR Green I marker and MgCl 2. • Processing quantitative PCR data
Les données brutes sont transférées et traitées sous le logiciel Microsoft Excel. L’incorporation de fluorescence dans TADN amplifié est mesurée en continu au cours des cycles de PCR. Ces mesures permettent d’obtenir des courbes d’intensité de la fluorescence en fonction des cycles de PCR et d’évaluer ainsi une valeur d’expression relative (ER) pour chaque marqueur.The raw data is transferred and processed under the Microsoft Excel software. Fluorescence incorporation into the amplified DNA is measured continuously during PCR cycles. These measurements make it possible to obtain fluorescence intensity curves as a function of PCR cycles and thus to evaluate a relative expression value (ER) for each marker.
Le nombre de cycles est déterminé à partir des points de « sortie » des courbes de fluorescence. Pour un même marqueur analysé, plus un échantillon sort tard (nombre de cycles élevé), plus le nombre initial de copies de TARNm est faible.The number of cycles is determined from the "exit" points of the fluorescence curves. For the same marker analyzed, the longer a sample leaves (high number of cycles), the lower the initial number of copies of TARNm.
La valeur d’ER (expression relative) est exprimée en unités arbitraires (UA) selon la formule suivante: (l/2nombre de cycles ) x 106The value of ER (relative expression) is expressed in arbitrary units (UA) according to the following formula: (l / 2number of cycles) x 106
La série PCR « mQPA-NHEK-BARRIER-16 » contient 2 gènes de références (gènes de ménage ) utilisés pour la normalisation des données. Les gènes RPS28 (Ribosomal protein S28) et GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase), sont exprimés de façon constitutive et leur niveau d’expression n’est pas ou peu impacté par les traitements. Ainsi le niveau d’expression de chaque marqueur est comparé à la moyenne d’expression de ces 2 gènes de référence.The mQPA-NHEK-BARRIER-16 PCR series contains 2 reference genes (housekeeping genes) used for data normalization. The genes RPS28 (Ribosomal protein S28) and GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase), are constitutively expressed and their level of expression is not or only slightly impacted by the treatments. Thus, the level of expression of each marker is compared with the average expression of these 2 reference genes.
Les résultats sont donnés dans le tableau 2 suivant :The results are given in Table 2 below:
Tableau 2Table 2
L’incubation des kératinocytes épidermiques humains normaux avec la référence CaCL a augmenté l’expression des ARNm codant pour des marqueurs de la synthèse des lipides (SULT2B1 et ALOX12) et de la différenciation des kératinocytes (FLG, FVL et TGMl). Ces résultats étaient attendus et ont permis de valider l’essai. L’extrait de Lucuma, testé à 0.0003, 0.001 et 0.003%, a stimulé de façon similaire l’expression des marqueurs SMPDl et ALOX12 aux trois concentrations testées ainsi que celle de la FLG aux 2 concentrations les plus basses. • Conclusion L’extrait de Lucuma augmente l’expression des marqueurs de la synthèse des lipides et de la différentiation kératinocytaire (marqueurs liés à l’hydratation) démontrant que l’extrait de Lucuma selon l’invention améliore la fonction de barrière cutanée et ainsi améliore l’hydratation de la peau.Incubation of normal human epidermal keratinocytes with the CaCL reference increased the expression of mRNAs encoding markers of lipid synthesis (SULT2B1 and ALOX12) and keratinocyte differentiation (FLG, FVL and TGM1). These results were expected and validated the trial. Lucuma extract, tested at 0.0003, 0.001 and 0.003%, similarly stimulated the expression of the SMPD1 and ALOX12 markers at the three concentrations tested, as well as that of FLG at the two lowest concentrations. Conclusion Lucuma extract increases the expression of the markers of lipid synthesis and keratinocyte differentiation (markers related to hydration) demonstrating that the Lucuma extract according to the invention improves the skin barrier function and thus improves the skin's moisture.
Exemple 8 : Composition cosmétique - Crème de jour pour le visageExample 8 Cosmetic Composition - Day Cream for the Face
Mode opératoire:Operating mode:
Peser la phase A et laisser gonfler sans agitation pendant 30 mn. Mettre la phase A à chauffer à 75 °C au bain-marie. Peser et mélanger la phase B. Peser la phase C et mettre à chauffer à 75°C au bain-marie. Rajouter la phase B dans la phase A. Bien mélanger. Sous agitation verser la phase C dans la phase A+B. Bien homogénéiser. Rajouter la phase D, extemporanément. Rajouter la phase E, bien homogénéiser. Rajouter la phase F, bien homogénéiser.Weigh phase A and allow to swell without stirring for 30 minutes. Put phase A to heat at 75 ° C in a water bath. Weigh and mix phase B. Weigh phase C and heat to 75 ° C in a water bath. Add phase B to phase A. Mix well. With stirring for phase C in phase A + B. Well homogenize. Add phase D, extemporaneously. Add phase E, mix well. Add phase F, mix well.
Exemple 9 ; Composition cosmétique - Forme 2cl pour le visa2eExample 9; Cosmetic composition - Form 2cl for the visa2e
Mode opératoire :Operating mode:
Disperser la Phase A sous agitation. Saupoudrer TUltrez 10 dans l'eau, laisser gonfler 30 minutes. Chauffer la Phase C jusqu'à dissolution complète. Mélanger la Phase A avec la Phase B. Rajouter C dans la Phase (B+A). Ajouter la Phase D, sous agitation, dans la Phase (A+B+C). Rajouter la Phase E. Neutraliser avec la Phase F. Ajouter la Phase G et mélanger.Disperse Phase A with agitation. Sprinkle TUltrez 10 in the water, allow to swell for 30 minutes. Heat Phase C until completely dissolved. Mix Phase A with Phase B. Add C in Phase (B + A). Add Phase D, with stirring, to the Phase (A + B + C). Add Phase E. Neutralize with Phase F. Add Phase G and mix.
Exemple 10 : Composition cosmétique - Forme sérumExample 10 Cosmetic Composition - Serum Form
Mode opératoire :Operating mode:
Phase A : Saupoudrer le carbomer dans l'eau, laisser gonfler 15 minutes. Mélanger la Phase B. Verser la Phase B dans la Phase A, homogénéiser. Puis Peser la Phase C, mélanger et rajouter dans la Phase A+B, sous agitation. Laisser gonfler 1 heure. Extemporanément rajouter la Phase D dans la phase précédente sous agitation. Neutraliser avec la Phase E. Mettre sous agitation. Ensuite rajouter la Phase F. Laisser mélanger au moins 1 heure sous agitation puis rajouter la Phase G. Bien mélanger.Phase A: Sprinkle carbomer in water, allow to swell for 15 minutes. Mix Phase B. Pour Phase B into Phase A, homogenize. Then Weigh Phase C, mix and add in Phase A + B, with stirring. Allow to swell 1 hour. Extemporaneously add Phase D in the previous phase with agitation. Neutralize with Phase E. Stir. Then add Phase F. Allow to mix for at least 1 hour with stirring and then add Phase G. Mix well.
Exemple 11 : Crème de nuit pour visageExample 11: Night cream for face
Mode opératoire : Peser Phase A and laisser gonfler pendant 30 minutes. Chauffer Phase A dans un bain d’eau à 75°C ; Chauffer Phase B jusqu’à solubilisation complète. Ajouter Phase B à Phase A. Chauffer Phase C dans un bain d’eau à 75°C. Ajouter la Phase C à la Phase A+B sous agitation. Ajouter Phase D et bien homogénéiser. Neutraliser avec Phase E à 55°C. Ajouter Phase F puis Phase G et bien homogénéiser.Procedure: Weigh Phase A and let it swell for 30 minutes. Heat Phase A in a 75 ° C water bath; Heat Phase B until complete solubilization. Add Phase B to Phase A. Heat Phase C in a 75 ° C water bath. Add Phase C to Phase A + B with stirring. Add Phase D and mix well. Neutralize with Phase E at 55 ° C. Add Phase F then Phase G and mix well.
Exemple 12 : Crème pour le corps.Example 12: Cream for the body.
Mode opératoire : Peser Phase A et laisser gonfler pendant 30 minutes. Chauffer Phase A dans un bain d’eau à 75°C. Chauffer Phase B jusqu’à solubilisation complète. Ajouter Phase B à Phase A. Chauffer Phase C dans un bain d’eau à 75°C. Ajouter Phase C à Phase A+B sous agitation. Ajouter Phase D et bien homogénéiser. Neutraliser avec Phase E à 55°C. Ajouter Phase F puis Phase G et bien homogénéiser.Procedure: Weigh Phase A and let it swell for 30 minutes. Heat Phase A in a 75 ° C water bath. Heat Phase B until complete solubilization. Add Phase B to Phase A. Heat Phase C in a 75 ° C water bath. Add Phase C to Phase A + B with stirring. Add Phase D and mix well. Neutralize with Phase E at 55 ° C. Add Phase F then Phase G and mix well.
Exemple 13 : LotionExample 13: Lotion
Mode opératoire : Peser Phase A. Peser Phase B et mélanger. Ajouter Phase B à Phase A sous agitation pendant 30 minutes. Peser Phase C, mélanger jusqu’à obtenir un mélange homogène. Ajouter Phase C à Phase A+B sous agitation. Ajouter Phase au mélange précédent. Ajouter Phase E au mélange précédent sous agitation. Bien homogénéiser. Peser Phase F, mélanger et ajouter au mélange précédent. Mélanger de manière insistante.Procedure: Weigh Phase A. Weigh Phase B and mix. Add Phase B to Phase A with stirring for 30 minutes. Weigh Phase C, mix until a homogeneous mixture. Add Phase C to Phase A + B with stirring. Add Phase to the previous mixture. Add Phase E to the above mixture with stirring. Well homogenize. Weigh Phase F, mix and add to the previous mixture. Mix insistently.
Exemple 14 : Crème de jourExample 14: Day Cream
Mode opératoire : Phase A : Verser Ultrez 10 dans l’eau et laisser gonfler pendant 30 minutes. Peser Phase B et laisser fondre à 60 °C. Chauffer Phase A dans un bain d’eau à 75°C. Peser Phase C et chauffer à 75°C dans un bain d’eau. Sous agitation (Starvo v=500 t/min), ajouter Phase C à Phase A. Ajouter arbitrairement Phase B et Phase D dans Phase A+B puis y ajouter Phase E. Bien homogénéiser. Refroidir à 45°C et ajouter Phase F. A 35°C, ajouter Phase G, bien homogénéiser. Ajouter Phase H, bien homogénéiser.Procedure: Phase A: Pour Ultrez 10 into the water and allow to swell for 30 minutes. Weigh Phase B and let melt at 60 ° C. Heat Phase A in a 75 ° C water bath. Weigh Phase C and heat to 75 ° C in a water bath. While stirring (Starvo v = 500 rpm), add Phase C to Phase A. Add arbitrarily Phase B and Phase D in Phase A + B and add Phase E. Thoroughly homogenize. Cool to 45 ° C and add Phase F. At 35 ° C add Phase G, mix well. Add Phase H, mix well.
Exemple 15 : Fluide pour le corps.Example 15: Fluid for the body.
Mode opératoire : Phase A : Verser Ultrez 10 dans l’eau et laisser gonfler pendant 30 minutes. Sous agitation à hélice (300 t/min), verser Phase B et laisser gonfler pendant Ih. Ajouter Phase A dans Phase B sous agitation à hélice (300 t/min), bien homogénéiser. Peser et mettre sous agitation Phase C, peser Phase D et mélanger. Ajouter Phase C à Phase A+B. Ajouter Phase D à Phase A+B+C. Bien homogénéiser. Ajouter Phase E puis Phase F et G et enfin Phase H. pH = 6.2.Procedure: Phase A: Pour Ultrez 10 into the water and allow to swell for 30 minutes. With propeller stirring (300 rpm), pour in Phase B and allow to swell for 1 hour. Add Phase A in Phase B with propeller stirring (300 rpm), mix well. Weigh and stir Phase C, weigh Phase D and mix. Add Phase C to Phase A + B. Add Phase D to Phase A + B + C. Well homogenize. Add Phase E then Phase F and G and finally Phase H. pH = 6.2.
Exemple 16 : Crème de nuitExample 16: Night Cream
Mode opératoire : Phase A : Verser Ultrez 10 dans l’eau et laisser gonfler pendant 30 minutes. Sous agitation à hélice (300 t/min), verser Phase B et laisser gonfler pendant Ih. Ajouter Phase A dans Phase B sous agitation à hélice (300 t/min), bien homogénéiser. Peser et mettre sous agitation Phase C, peser Phase D et mélanger. Ajouter Phase C à Phase A+B sous agitation à couteau (300 t/min). Ajouter Phase D à Phase A+B+C. Bien homogénéiser. Ajouter Phase E puis Phase F et G et enfin Phase H. Bien homogénéiser.Procedure: Phase A: Pour Ultrez 10 into the water and allow to swell for 30 minutes. With propeller stirring (300 rpm), pour in Phase B and allow to swell for 1 hour. Add Phase A in Phase B with propeller stirring (300 rpm), mix well. Weigh and stir Phase C, weigh Phase D and mix. Add Phase C to Phase A + B with knife stirring (300 rpm). Add Phase D to Phase A + B + C. Well homogenize. Add Phase E then Phase F and G and finally Phase H. Mix well.
Exemple 17 : Lotion pour cheveux.Example 17: Hair lotion.
Exemple 18 : Maquillage hydratant.Example 18: Moisturizing makeup.
Exemple 19 : Baume à lèvre.Example 19 Lip Balm
Mode opératoire : Chauffer Phase A à 85°C. Mélanger Phase B et chauffer à 85°C. Ajouter doucement Phase A à Phase B sous agitation (Staro v=3000 t/min puis 1200 t/min). Ajouter Phase C préchauffée à 80°C, homogénéiser. Ajouter Phase D à 35°C. Verser.Procedure: Heat Phase A at 85 ° C. Mix Phase B and heat to 85 ° C. Gently add Phase A to Phase B with stirring (Staro v = 3000 rpm then 1200 rpm). Add Phase C preheated to 80 ° C, homogenize. Add Phase D at 35 ° C. Pay.
Exemple 20 : Spray protecteur cheveux.Example 20: Hair protection spray.
Mode opératoire : Peser et mélanger la Phase A avec un agitateur à couteau v = 300 t/min. Ajouter la Phase B, mélanger puis ajouter la Phase C. Ajuster le pH entre 5,0 et 5,5 avec la Phase D. Références bibliographiques 1. Erazo, S. G.; Escobar, A.; Olaeta, J. A.; Undurraga, P. Alimentos 1999, 24, 67-75) 2. Glorio, P.; Repo-Carrasco, R.; Velezmoro, C.; Anticona, S.; Huaranga, R.; Martinez, P.; Melgarejo, S.; Astuhuaman, L.; Huaman, N. E.; Icochea, J. C.; Pena, J. C. Rev. Soc. Quim. Peru 2008, 74, 46-56. 3. Repair of photoaged dermal matrix by topical application of a cosmetic anti-ageing product The British journal of dermatology Volume 158 Issue 3 Pages 472-477 ,2008 4. Salicyloyl-phytosphingosine: a novel agent for the repair of photoaged skin International Journal of Cosmetic Science Volume 29 Issue 4 Pages 319-329 Journal 2007 5. 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Adjust pH to 5.0-5.5 with Phase D. References 1. Erazo, S. G .; Escobar, A .; Olaeta, J. A .; Undurraga, P. Alimentos 1999, 24, 67-75) 2. Glorio, P .; Repo-Carrasco, R .; Velezmoro, C .; Anticona, S .; Huaranga, R .; Martinez, P .; Melgarejo, S .; Astuhuaman, L .; Huaman, N. E .; Icochea, J. C .; Pena, J. C. Rev. Soc. Who m. Peru 2008, 74, 46-56. 4. Salicyloyl-phytosphingosine: a novel agent for the repair of photo-skin. The International Journal of Dermatology Volume 158 Issue 3 Pages 472-477, 2008 Cosmetic Science Volume 29 Issue 4 Pages 319-329 Journal 2007 5. A cosmetic 'anti-aging' product improves photoaged skin: a double-blind, randomized controlled trial British Journal of Dermatology Volume 161 Issue2 Pages 419-426 Journal 2009 6. 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