FR3031669A1 - Systeme de delivrance avancee - Google Patents

Abstract

Procédé de traitement cosmétique ou pharmaceutique destiné à être utilisé par voie topique ou par voie orale et caractérisé en ce qu'il contient au moins deux types différents de biocapsules toutes de la taille comprise entre 10 nanomètres (nm) et 500 nanomètres (nm), toutes encapsulant les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels, toutes obtenues par extrusion haute pression au travers d'une membrane de polycarbonate à pores de 10nm à 500nm suivi d'une lyophilisation par spray drying ou non, toutes réalisées uniquement à partir de substances naturelles et toutes stables au moins deux années. Pour faciliter les explications, un tel procédé a été désigné par ADS (Advanced Delivery System) dans les exemples.

Description

3031669 La présente invention à pour objet un procédé de traitement cosmétique ou pharmaceutique destiné à être utilisé par voie topique ou par voie orale et caractérisé en ce qu'il contient au moins deux types différents de biocapsules toutes de la taille comprise entre 10 nanomètres(nm)et 500 nanomètres (nm), toutes encapsulant les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels, toutes obtenues par extrusion haute pression au travers d'une membrane de polycarbonate à pores de lOnm à 500nm suivi d'une lyophilisation par spray drying ou non, toutes réalisées uniquement à partir de substances naturelles et toutes stables au moins deux années. Cette invention concerne donc également des procédés contenant au moins trois types ou plus de biocapsules différentes et stables trois années ou plus. On sait que les capsules de taille comprise entre 10 nm et 500 nm, ou nanocapsules, peuvent être de nature très différente. La nanoencapsulation est un procédé par lequel on enferme un produit, solide, liquide ou pâteux, dans des nanoparticules. Si ces nanocapsules sont creuses (vésiculaires) on parle de nanovésicules, si elles sont pleines (matricielles) on parle de nanosphères. Leur taille varie de 1 nm à plus de 1000 nm. Ces nanocapsules peuvent 20 être biodégradables ou non. Tout l'intérêt des nanocapsules réside dans la présence d'une membrane, qui isole et protège le contenu du milieu extérieur. Selon les cas, la membrane sera détruite lors de l'utilisation pour libérer son contenu ou bien la membrane restera présente tout le long de la 25 libération du contenu, dont elle contrôlera la biodisponibilité Les principaux procédés pour réaliser l'encapsulation de substances dans des nanocapsules sont la polymérisation interfaciale, la réticulation interfaciale, l'émulsion suivie d'une évaporation ou d'une extraction du solvant, la double émulsion évaporation/extraction de 30 solvant, le spray drying, le prilling, la coacervation. Les polymères les plus utilisés pour l'encapsulation sont les dérivés des acides lactiques et glycoliques (poly(D,L-lactide-co-glycolide) (PLGA) and polylactide (PLA) polymers), l'éthyl-cellulose qui sont biodégradables. 35 Le choix final du type de technique et de la nature des constituants de la membrane dépend de l'application et des facteurs tels que la dimension particulaire, l'épaisseur de la paroi, l'imperméabilité, la stabilité thermique, la dégradabilité et la biodisponibilité. La bio-nanoencapsulation constitue un domaine particulier de la 40 nanoencapsulation. La bio-nanoencapsulation consiste à encapsuler un matériel actif d'origine biologique, dans des sphères ou des capsules de diamètre de l'ordre du nanomètre. Le matériel encapsulé peut être 2 3031669 une enzyme, un peptide, de l'ADN, des extraits végétaux, etc. avec des applications multiples dans des domaines aussi variés que la cosmétique, la pharmacie, l'agriculture, l'environnement ou l'industrie alimentaire. Une nanocapsule est d'habitude une particule sphérique 5 creuse composée de polymères ou de phospholipides (dans ce cas il est appelé nanoliposome ou nanosome) contenant une substance, un extrait ou même une émulsion à l'intérieur. La paroi ou membrane d'une nanocapsule peut être constituée d'autres matières, comme hydroxyapatite ou le silicate de calcium, de dérivés de chitine comme le 10 chitosan, de pectine mais aussi d'ADN polymérisé. Les nanocapsules, systèmes colloïdaux synthétiques de type vésiculaire, sont constituées par un noyau central, le plus souvent lipophile, dans lequel un principe actif peut être incorporé, entouré par une mince paroi de polymère. Les systèmes colloïdaux (nanocapsules, nanosphères 15 et nanoliposomes ou nanosomes) présentent des potentialités intéressantes. Les nanocapsules peuvent aujourd'hui être obtenues en faisant appel à des polymères préformés y compris d'origine naturelle ou à des polymères bien connus, déjà largement utilisés comme certains polyesters biodégradables en métabolites atoxiques (acide polyglycolique, acide polylactique, copolymères glycolique- lactique...). La publication, Zhang M, Li XH, Gong YD, Zhao NM, Zhang XF Properties and biocompatibility of chitosan films modified by blending with PEG.Biomaterials 2002; 23: 2641-2648, décrit ainsi l'intérêt du chitosan associé à du PEG utilisable dans des encapsulations. La publication, Juan Carlos Cabrera, Pierre Cambler, Pierre Van Cutsem Drug Encapsulation in Pectin Hydrogel Beads- A Systematic Study of Simulated Digestion Media. Int J Pharm Pharm Sci 3(5); 2011: 292-299 décrit l'utilisation de la pectine pour l'encapsulation.

Une nanocapsule doit être chimiquement stable, bioactive, biocompatible et capable de protéger la substance ou le matériel encapsulé contre des effets indésirables comme par exemple la dissolution dans des liquides (voir à ce sujet Belhaj N, Arnaud JP, Loing E, et a/ Development of a new resistant liposome coated with polysaccharide film for cosmetic application. J Cosmet Sci 2014 Jul-Aug; 65(4):225-38) Les nanocapsules ont une haute capacité de pénétration due à leur taille réduite. Les nanocapsules sont donc souvent utilisées pour le ciblage des substances qu'elles encapsulent. Pour permettre ce ciblage ou ce targeting la surface de la nanocapsule peut être modifiée par exemple avec des antigènes spécifiques ou des ligands. Les nanoliposomes sont un des types les plus commodes de nanocapsule. Une membrane de liposome est composée de phospholipides naturels, qui facilite leur absorption au niveau des membranes cellulaires elles 3 3031669 aussi de nature lipidique Les nanoliposomes ou nanosomes peuvent être utilisés pour l'encapsulation de substances hydrosolubles et les nanocapsules polymériques sont généralement utilisées pour mettre d'encapsuler des 5 substances liposolubles. L'objet de la présente invention concerne donc également un procédé de traitement cosmétique ou pharmaceutique destiné à être utilisé par voie topique ou par voie orale et caractérisé en ce qu'il contient au moins deux ou trois types différents de nanosomes tous de la taille comprise 10 entre 10 nm et 500nm, tous encapsulant les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels, tous réalisées uniquement à partir de substances naturelles et tous stables au moins deux années. La publication Rajan, M., & Raj, V. (2012). Encapsulation characterisation and in-vitro release ofanti-tuberculosis drug using 15 chitosan-poly ethylene glycol nanoparticles. Inter-national Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 4, 255-259 décrit bien les problèmes et limitations des nanocapsules comme les nanosomes et particulièrement la difficulté de contrôler réellement la libération ciblée des substances encapsulées accordant toute sa préférence pour 20 les nanoparticules. C'est justement en étudiant ces problèmes de libération de substances naturelles encapsulées que la demanderesse a découvert de manière tout à fait inattendue que ces problèmes de libération ciblée 25 pouvaient être résolus par l'utilisation au sein d'un même procédé de traitement de plusieurs nanocapsules de types différents encapsulant les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels. Un autre problème des capsules en général est leur stabilité dans le temps et il n'est pas rare de voir des publications relatant la 30 réalisation de capsule améliorant l'état de la technique pour la stabilité et ne dépassant pourtant pas une durée de vie de plus de 24 heures (voir à ce sujet l'article de Morton LA, Saludes JP, Yin H. Constant Pressure-Controlled Extrusion Method for the Preparation of Nano-sized Liposomes. J Vis Exp. 2012.) 35 La demanderesse décrit ci-dessous un moyen d'obtenir des préparations stables au moins deux années. Pour la clarté des explications qui suivent, il est décidé d'appeler ADS pour Advanced Delivery Système tout procédé de traitement cosmétique ou pharmaceutique destiné à être utilisé par voie topique ou 40 par voie orale caractérisé en ce qu'il contient au moins deux types différents de biocapsules toutes de la taille comprise entre 10 nm et 500 nm, toutes encapsulant les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels. Le qualificatif suivant le terme ADS décrira ces substances ou 4 3031669 ces extraits ainsi encapsulés. Cet ainsi que ADS-Bambou correspondra à une préparation de plusieurs nanocapsules (deux, trois ou plus) de types différents encapsulant toutes le même extrait de bambou. Ce procédé de traitement cosmétique ou pharmaceutique utilisable par voie topique ou 5 par voie orale est donc caractérisé en ce qu'il contient au moins deux types différents de biocapsules car réalisées à partir de substances naturelles. Ces biocapsules sont toutes de la taille comprise entre 10 nm et 500 nm. Elles encapsulent les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels et sont toutes obtenues par extrusion haute pression 10 au travers d'une membrane de polycarbonate à pores de lOnm à 500nm suivi d'une lyophilisation par spray drying ou non, les rendant ainsi stables plus de deux années. Un type de biocapsule de l'invention peut comprendre dans sa paroi une ou plusieurs molécules de type lactone destinées à cibler un récepteur 15 cellulaire et dans son centre une substance ou un extrait naturel hydrosoluble. Un autre type de biocapsule peut comprendre dans sa paroi une protéine ou plusieurs protéines se comportant comme un récepteur capable de se lier avec un ligand cellulaire ou tissulaire et dans son centre la même 20 substance ou le même extrait naturel hydrosoluble que les autres types de capsules qui lui sont associés. Un troisième type de biocapsule possible peut comprendre dans sa paroi un extrait ou une molécule provenant de fenugrec ou de livèche sélectionné pour cibler les mitochondries. Cette revendication peut 25 donc se présenter ainsi: composition cosmétique ou pharmaceutique et pour la mise en oeuvre du procédé caractérisée en ce que la cible d'une des biocapsules soit les mitochondries et la molécule ou les molécules contenues dans la paroi proviennent d'un extrait de fenugrec ou d'un extrait de livèche.

30 Un quatrième type de biocapsule possible ne contiendra elle dans sa paroi aucune protéine ou aucun lactone mais encapsulera dans son centre, comme les autres biocapsules qui lui seront associées, une ou plusieurs substances ou extraits naturels hydrosolubles sélectionnés pour être capables de se lier à des récepteurs cellulaires ou 35 nucléaires comme par exemple l'hydroxytyrosol ou l'oleuropéine, le carnosol, les di et tri terpènes comme le cafestol, le cembrene, le ferruginol, le totarol, l'acide salicylique, la quercétine ou encore des tétraspanines. Ces biocapsules peuvent même encapsuler des substances et des extraits naturels capables de se fixer sur plusieurs 40 récepteurs différents. Ces types différents de biocapsules contiennent dans leur centre une substance ou un extrait naturel hydrosoluble provenant d'une ou plusieurs des plantes de la liste suivante sans que ce soit limitatif : 5 3031669 la pastèque, l'olivier, le romarin, le bambou, le baobab, l'hibiscus, le ginseng, l'angélique, la grenade, le cassis, le haricot, le the vert et la sauge. Le fait d'associer deux, trois ou plus de types différents de biocapsules dans la même préparation permettra de manière tout à fait bénéfique d'adresser les mêmes substances ainsi encapsulées à différents compartiments cellulaires et tissulaires. Comme par exemple le cytoplasme et l'intérieur de la mitochondrie. Comme par exemple également la matrice extracellulaire et l'espace intracellulaire, comme 10 par exemple la mitochondrie et le noyau cellulaire (espace nucléaire), comme par exemple les domaines nucléaire et cytoplasmique, comme par exemple le cytoplasme et le réticulum endoplasmique, comme par exemple la membrane cellulaire et la membrane mitochondriale comme par exemple l'espace intercornéocytaire et le cytoplasme cellulaire(des 15 kératinocytes ou des cornéocytes ou des mélanocytes ou des cellules de Langerhans, ou des cellules de Merkel ou des fibroblastes ou de plusieurs de ces cellules à la fois) ou bien encore le derme et l'épiderme ou enfin le milieu extracellulaire et le milieu intracellulaire. Ce ciblage vers différents compartiments cellulaires 20 ou tissulaires peut donc concerner deux ou bien plus de deux compartiments cellulaires ou tissulaires pris dans la liste suivante : la mitochondrie, la paroi de la mitochondrie, le noyau, la membrane du noyau, l'ADN du noyau, l'ADN de la mitochondrie, le cytoplasme, le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, le peroxysome, la 25 membrane cellulaire, la matrice extracellulaire, le milieu extracellulaire, les Affls, le cytosquelette, le lysosome, les ribosomes, les porines, les translocases et les tétraspanines, le cellcoat membranaire, l'espace intercornéocytaire, le derme et l'épiderme. Ce ciblage ou cet adressage va permettre une action au niveau de 30 plusieurs compartiments cellulaires et tissulaires de biocapsules contenant dans leur centre une ou des molécules identiques toutes d'origine naturelle, provenant d'extrait végétaux mais ayant soit le même mode d'action comme par exemple une action anti-radicaux libres comme par exemple avec le glutathion, la vitamine C, l'hydroxytyrosol, 35 l'oleuropéine, l'a-tocophérol ou une action anti-âge comme avec l'acide rosmarinique, l'oleuropéine ou la carnosine ou encore une action anti-inflammatoire comme avec l'oleuropéine, l'a-pinène, le myrcène, l'acide ursolique, la quercétine, la curcumine ou les catéchines ou une action amincissante comme avec la caféine, l'acide 40 chlorogénique ou encore une action énergisante comme avec la caféine,la citrulline,les bioflavonoïdes, le limonène, les procyanidols, l'acide arachidonique, la vitamine C, l'hespéridine, la rutine, les flavones, les isoflavones et les anthocyanes, la phloridzine et les 6 3031669 épicatéchines, la malvidine,et la pétunidine ou encore une action protectrice comme avec les catéchines, l'épigallactocatéchine, le glutathion, la vitamine C, l'hydroxytyrosol, l'oleuropéine, l'alpatocophérol, l'acide rosmarinique, la carnosine, la théaflavine et les 5 isoflavones, soit plusieurs modes d'actions complémentaires pris parmi les exemples ci-dessous comme avec l'hydroxytyrosol, l'oleuropéine et la vitamine C agissant à la fois sur les radicaux libres, l'inflammation , l'anti-âge et l'énergie ou en les associant comme par exemple la caféine et la curcumine pour avoir un effet à la fois 10 amincissant et anti-inflammatoire. Il y a un grand intérêt à agir à la fois sur plusieurs compartiments cellulaires, le meilleur exemple est sans aucun doute la lutte et la protection contre les radicaux libres dont les effets délétères se manifestent dans plusieurs de ces compartiment à la fois. Naturellement, les cellules luttent contre les 15 radicaux superoxydes avec des Super-Oxyde-Dismutases (SOD) de plusieurs types différents et situées dans des compartiments différents. Chez l'être humain, il y a coexistence de trois formes de SOD. Il existe deux types de CuZn-SOD. Le premier type (SOD1) est une protéine dimérique se trouvant dans le cytoplasme et dans l'espace 20 intermembranaire mitochondrial. Le deuxième type de CuZn-SOD (SOD3) est une protéine extracellulaire tétramérique. Cette protéine a la capacité de se lier à la surface des membranes cellulaires ou dans le collagène, elle protège les cellules du stress oxydant exogène. La Mn-SOD (SOD2) est située dans la matrice mitochondriale mais également sur la paroi 25 interne des mitochondries. Cette SOD protège les mitochondries du stress oxydant généré lors de la respiration cellulaire. Le stress oxydatif et les radicaux libres affectent donc différents compartiments cellulaires. Au niveau intracellulaire, ils altèrent les fonctions de la SOD1. Au niveau des membranes cellulaires, un grand 30 stress oxydatif peut avoir pour conséquence une détérioration des membranes. Au niveau du cytoplasme et au niveau mitochondrial, le stress oxydatif généré par une surproduction de radicaux libres va altérer les SOD1 et S0D2. Les extraits naturels ayant une activité anti-oxydante neutralisent les radicaux libres et protègent ces enzymes 35 qui eux-aussi protègent contre les radicaux libres et les autres espèces activées de l'oxygène. Il y a donc tout intérêt si l'on veut avoir une action antiradicalaire complète d'agir à tous les niveaux à la fois ce que permettent de faire ces biocapsules de différents types. Au niveau mitochondrial, la présence de radicaux libres comme le 40 peroxyde d'hydrogène (H202) peut altérer la fonction mitochondriale et accélérer l'apparition des signes du vieillissement. H202 est capable de traverser la membrane de la cellule et donc peut être présent à l'intérieur et à l'extérieur de la cellule. Les liposomes contenant des 7 3031669 extraits naturels à effet antioxydant réduisent la présence des radicaux libres à l'intérieur et à l'extérieur de la cellule. Les radicaux libres peuvent aussi affecter la matrice de collagène, réduire la production des collagènes et ainsi accélérer le 5 vieillissement de la peau. En bloquant l'action des radicaux libres la peau est en partie protégée du vieillissement. De la même manière agir en même temps dans plusieurs compartiments cellulaires ou tissulaires a pour conséquence une efficacité plus importante dans l'anti-âge, ou encore pour une action anti- 10 inflammatoire ou une action amincissante ou pour une action énergisante ou encore une action protectrice. La composition contenant ces biocapsules se présente sous la forme d'une émulsion huile dans eau (HIE) ou eau dans huile (E/H), d'émulsion multiple (H/E/H, E/H/E), de microémulsion, d'émulsion à phase 15 gémellaires, d'émulsion PIT, de nano-émulsion, de pseudo-émulsion (dispersion stable de deux phases non miscibles au moyen de gélifiant), de gel aqueux, de gel gras, de gel hydro-alcoolique, de phase grasse, de suspension, de savon liquide ou solide, de solution moussante ou non, de poudre, de gel ou d'émulsion lyophilisée et pouvant se 20 présenter sans que cela soit limitatif en crèmes, liquides, pâtes, lotions, émulsions, huiles, gels, sirops, solides, poudres, masques, stick, comprimés, sprays, aérosol, gélules, sirop. Enfin ces différents procédés de traitement peuvent donc être utilisés par voie topique sous la forme d'un cosmétique et/ou par la voie orale 25 sous la forme d'un complément alimentaire et sont destinées à être utilisées conjointement, successivement, séparément ou en fonction des rythmes chronobiologiques. On va maintenant donner à titre d'exemple quelques procédés de réalisation montrant bien l'intérêt d'associer plusieurs types de 30 nanobiocapsules contenant les mêmes substances sans que ces exemples ne soient limitatifs. Rappelons que pour la clarté des explications qui suivent, il est décidé d'appeler ADS pour Advanced Delivery Système tout procédé de traitement cosmétique ou pharmaceutique destiné à être utilisé par voie topique ou par voie orale et caractérisé en ce qu'il 35 contient au moins deux types différents de biocapsules toutes de la taille comprise entre 10 nm et 500 nm, toutes encapsulant les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels. Le qualificatif suivant le terme ADS décrira ces substances ou ces extraits ainsi encapsulés. Cet ainsi que ADS-Olivier correspondra à une préparation de plusieurs 40 nanocapsules (deux, trois ou plus) de type différent encapsulant toutes le même extrait d'Olivier.

8 3031669 Exemple 1 : exemple de réalisation de nanobiocapsules de types différents. Afin de réaliser les différentes nanocapsules de la présente invention, différents mélanges de phospholipides sont utilisées.

5 Pour la fabrication de nanosomes ne contenant aucune molécule dans la bicouche lipidique, un mélange constitué uniquement de phospholipides d'origine végétale est utilisé. Ce mélange de phospholipides est dissout dans un solvant organique, par exemple un mélange chloroforme/méthanol ou chloroforme/éthanol, puis est évaporé pour 10 obtenir un film lipidique jusqu'à complète évaporation des solvants. L'hydratation du film lipidique est effectuée en ajoutant la solution contenant l'extrait végétal que l'on désire incorporer dans les liposomes. Des liposomes sont formés, constitués uniquement de phospholipides et incluent en leur centre l'extrait végétal ou la 15 substance naturelle. Pour la fabrication d'un autre type de liposome, un mélange phospholipidique incluant des lactones d'origine végétale est utilisé. Ce mélange de phospholipides et de lactones est dissout dans le solvant organique, puis évaporé pour obtenir un film lipidique incluant ces 20 lactones jusqu'à complète évaporation des solvants. L'hydratation du film lipidique est effectuée en ajoutant la solution contenant l'extrait végétal ou la substance naturelle que l'on désire incorporer dans les liposomes. Les liposomes formés sont constitués d'une bicouche de phospholipides incluant des lactones et comprennent en leur centre 25 l'extrait végétal ou la substance naturelle. Pour la fabrication d'un troisième type de liposome, un mélange phospholipidique incluant des protéines lipophiles d'origine végétale ou non est utilisé. Ce mélange de phospholipides et de protéines est dissout dans le solvant organique, puis évaporé pour obtenir un film 30 lipidique incluant des protéines jusqu' à complète évaporation des solvants. L'hydratation du film lipidique est effectuée en ajoutant la solution contenant l'extrait végétal. Les liposomes formés sont constitués d'une bicouche de phospholipides incluant des protéines et comprennent en leur centre l'extrait végétal ou la molécule naturelle.

35 Pour la fabrication d'un quatrième type de liposome, un mélange phospholipidique incluant un extrait lipophile de fenugrec ou d'un extrait de livèche est utilisé. Ce mélange de phospholipides et d'un extrait lipophile de fenugrec ou de livèche est dissout dans le solvant organique, puis évaporé pour obtenir un film lipidique incluant des 40 protéines jusqu' à complète évaporation des solvants. L'hydratation du film lipidique est effectuée en ajoutant la solution contenant l'extrait végétal. Les liposomes formés sont constitués d'une bicouche 9 3031669 de phospholipides incluant ces extraits lipophile et comprennent en leur centre l'extrait végétal ou la molécule naturelle. Chaque mélange est homogénéisé par une lente agitation. Les liposomes sont ensuite extrudés a travers une membrane de 5 polycarbonate contenant des pores de lOnm à 500nm pour obtenir un mélange homogène de nanosomes unilamellaires de taille maximale 500nm. Deux types de nanosomes réalisés séparément sont ensuite mélangés pour obtenir une combinaison de biocapsules de structure différente constituant la présente invention. Il est également possible de 10 réaliser le mélange des liposomes différents avant extrusion pour obtenir un résultat conforme au procédé de l'invention. Une association de trois ou de quatre types de nanosomes est également possible. Enfin il est possible de fabriquer deux types de nanosomes lors du même 15 procédé lorsque les molécules mélangées aux phospholipides dissouts dans le solvant sont en nombre inférieur à celui du nombre des nanosomes finaux. Ainsi il y aura à la fois des nanosomes sans autre molécule que les phospholipides dans les parois et des nanosomes avec ces molécules incluses dans les parois.

20 La même chose peut être réalisée avec des biocapsules non nanosomes. Afin d'augmenter la stabilité, le mélange de liposomes est ensuite lyophilisé en éliminant l'eau du mélange à très basse pression préférentiellement par spray drying. Exemple 2 : Etude de stabilité 25 Afin de mesurer la stabilité des nanosomes, des échantillons d'une formulation encapsulée dans les nanosomes de la présente invention ont été entreposés à température ambiante pendant 24 mois. L'apparence, la taille moyenne et le pH de la formulation ont été analysés. Le tableau démontre que les nanosomes de la présente invention sont stables lors 30 d'un stockage à température ambiante pendant au moins 24 mois. Table -Stabilité à température ambiante Spec. 0 mois 24 mois Apparence Poudre Poudre Poudre homogène homogène homogène brune brune brune Taille des 200±30 198±9.6 196±9.2 nanosames (nm) 1)}1 6.7-7.3 6.9 7 Exemple 3 : Pénétration dans différents compartiments cellulaires Dans cette étude, un ingrédient nanoencapsulé a été marqué par 35 fluorescence rouge et incubé avec des adipocytes différenciés de souris 10 3031669 3T3-Ll. La fluorescence a été trouvée au niveau de l'espace intracellulaire et est colocalisée avec les mitochondries des adipocytes et est visualisée par l'utilisation d'une sonde de fluorescence spécifique.

5 Tout d'abord, l'étiquetage de l'ingrédient a été effectué avec une sonde rouge fluorescente et la sonde libre a été séparée chromatographie liquide. Des expériences ont été effectuées dans les adipocytes afin d'obtenir par microscopie par fluorescence avec la sonde rouge l'emplacement 10 intracellulaire de l'ingrédient. On peut clairement observer un marquage rouge dans le cytoplasme des adipocytes qui provient des composants lipidiques de nanocapsules. La sonde rouge (molécule lipidique) est localisée au niveau intracellulaire et est spécialement concentrée dans la région environnante des gouttelettes lipidiques 15 (dépôts triglycéridiques des adipocytes blancs). Des études antérieures ont montré une association étroite de la mitochondrie avec les gouttelettes lipidiques par l'identification à cet emplacement de plusieurs enzymes qui sont reliées à la mitochondrie telles que la pyruvate-carboxylase, la prohibitine, et une sous-unité 20 de l'ATP synthase (Brasaemle et al. 2004; Cohen et al. 2004). La zone de contact entre les gouttelettes lipidiques et le cytoplasme des adipocytes révèle un matériau dense en électrons entourant la gouttelette lipidique et qui concentre plusieurs protéines (TIP47, adipophiline, perilipine, S3-12) et ce qu'on appelle «le cortex de 25 gouttelettes lipidiques». De nombreuses mitochondries sont intégrées dans ce matériel. Dans la deuxième partie de l'étude, une sonde fluorescente mitochondrial a été utilisé pour marquer les mitochondries dans les adipocytes et pour vérifier si l'ingrédient marqué par un label rouge 30 est colocalisé avec les mitochondries ou non. La sonde MitoTracker vert FM est essentiellement non fluorescente en solution aqueuse et devient fluorescente une fois qu'elle s'accumule dans l'environnement lipidique des mitochondries à l'intérieur de la cellule (Invitrogen). La sonde MitoTracker vert FM s'accumule préférentiellement dans les 35 mitochondries indépendamment du potentiel de membrane mitochondrial. Les résultats obtenus ici montrent que la sonde MitoTracker vert FM marque les gouttelettes lipidiques dans une zone entourant les adipocytes. Ce résultat suggère également que le marquage rouge présent est localisé dans le même espace intracellulaire que les mitochondries.

40 Exemple 4 : Efficacité Une étude a été conçue pour étudier la biodisponibilité d'un complément alimentaire contenant des extraits de pastèque riche en SOD encapsulé dans les nanocapsules de la présente invention (ADS-Pastèque). 24 11 3031669 volontaires ont été répartis par randomisation en 2 groupes. Le premier groupe a ingéré à jeun une seule dose de 250mg d'extraits naturels de plantes encapsulés dans les nanosomes de la présente invention tandis que le deuxième groupe a ingéré la même quantité sans encapsulation.

5 Des prises de sang régulièrement espacées ont été réalisées pendant 100 minutes. La capacité anti-oxydante du produit a été mesurée par la quantification de MDA (MalonDiAldehyde). Le tableau suivant présente la capacité anti-oxydante des sujets avant ingestion de la dose unique d'extraits naturels de plantes et à 30 10 minutes après ingestion. Les résultats sont présentés en pourcentage par rapport au niveau de MDA initial. Quantité de MDA ° de la quantité de MDA initial) Formulation Temps après ingestion (min) 0' 30' Extrait de pastèque 100 84.5 Extrait de ADS- Pastèque 100 77.5 Après 30 minutes, un changement dans la quantité de MDA a été observé montrant la capacité anti-oxydante des 2 formulations. La formulation contenant des liposomes a démontrée une capacité anti-oxydante plus 15 importante que la formulation sans liposomes. Ce résultat démontre que l'encapsulation dans les liposomes de la présente invention augmente la biodisponibilité des actifs notamment en protégeant ces actifs de la digestion et en augmentant leur absorption au niveau de la paroi intestinale.

20 Exemple 5 : émulsion H/E pour le visage -Huile de Silicone Volatile 10,0 g 20,0 g -Squalane -Huile de vaseline 5,0 g -Lanoline liquide 4,0 g 25 -Arlacel 165 6,0 g -Tween 60 2,0 g -Alcool cétylique 1,2 g -Acide stéarique 2,5 g -Triéthanolamine 0,1 g 30 -Propylène glycol 5,0 g -ADS-Pastèque 0,5 g -Hydroxyde de sodium 0,008g -Conservateurs 0,3 g -Eau déminéralisée qsp 100,0 g 35 Les signes du vieillissement que sont l'hydratation, les rides, la perte de fermeté et l'éclat du teint sont améliorés de manière significative. Cette émulsion peut être associée avantageusement avec 12 3031669 le complément alimentaire décrit dans l'exemple 6 de manière conjointe ou successivement. Exemple 6 : Boisson antioxydantes - ADS-Olivier 0,1-5,0 g 5 - Proto-lait 0,1-6,0 g - Jus de pommes concentre 0 1-0,7 g - Poudre de lait écrémé 0 05-0,5 g - Oligosaccharides de glucose 0 05-0,5 g - Fibres alimentaires 0 01-0,1g 10 Cette formule se présente sous forme de poudre à diluer dans de l'eau et à utiliser 2 fois par jour Exemple 7: Complément alimentaire anti-âge - ADS-Grenade 100-500 mg - Dextrine 100-400 mg 15 - Acide citrique 100-200 mg - Arômes naturels 100-200 mg - Stevia 10-60 mg - Silicate de calcium 10-50 mg - Fibres alimentaires 10-40 mg 20 - Colorants naturels 1-20 mg Cette formule se présente sous forme de poudre à diluer dans de l'eau et est à utiliser plusieurs fois par jour. Après 4 semaines d'utilisation, le collagène se dégrade moins les rides sont réduites et la fermeté de la peau est significativement améliorée. Les cheveux et 25 les ongles sont en meilleurs états. Exemple 8: Boisson anti-âge - ADS-Raisins 100-1000 mg - ADS-Thé vert 100-500 mg - Potassium 50-150 mg 30 - Dextrine 100-400 mg - Sorbitol 100-200 mg - Arômes naturels 100-200 mg - Carotènes 5-50 mg Cette formule se présente sous forme de capsule à utiliser deus à trois 35 fois par jour. Après 4 semaines d'utilisation la peau est significativement plus éclatante. Exemple 9: Complément alimentaire minceur - ADS-Haricot 200-500 mg - ADS-Romarin 100-300mg 40 - ADS-Olive 100-300 mg - ADS-Thé vert 50-100 mg - Dextrine 300-450 mg - Maltose 300-500 mg 13 3031669 - Jus de fruits 50-90 mg - Acide citrique 100-200 mg - Arômes naturels 10-20 mg Une étude contre placebo sur 60 volontaires, hommes et femmes, âgés de 5 25 à 50 ans, avec une surcharge pondérale de 5 à 15kgs, depuis au moins 6 mois, a été menée afin d'évaluer l'efficacité amincissante de ce complément alimentaire. Au 30ème jour, les résultats montrent que ce complément alimentaire pris 2 fois par jour entraîne une perte de poids moyenne de 2,96kg.

10 Exemple 10: Crème aux liposomes - Alcool cétylique 4,0 g - B-sitostérol 4,0 g - Dicétyl phosphate 0,5 g - Carbopol 981 (commercialisé par Goodrich) 0,2 g 15 - Triéthanolamine 0,2 g - Phospholipide 0,05g - ADS-Grenade 1,5 g - Eau déminéralisée qsp 100,00g ADS contenant des extraits de grenade montre des effets antioxydants. A 20 noter que ces nanocapsules sont formulées dans une crème aux liposomes. Cette formule permet aux nanosomes ainsi donc eux-mêmes encapsulés de passer sans encombre la barrière cutanée et peuvent ensuite pénétrer dans les différents espaces cellulaires de l'épiderme et du derme. Exemple 11 : Emulsion E/H 25 - Protégin (commercialisée par Goldschmidt) 19 g - Glycérine 3 g - Huile de vaseline 8 g - Sulfate de Mg 0,5 g - ADS-pastèque 3 g 30 - Eau déminéralisée qsp 100 g Cette émulsion est une excellente crème de nuit nourrissante, apaisante et réparant efficacement la peau des méfaits du stress de la journée en fonction des rythmes chronobiologiques. Exemple 12 : Emulsion gel HIE pour le corps 35 - Carbopol 981 (commercialisé par Goodrich) 0,6 g - Alcool éthylique 15 g - Huile de silicone volatile 3 g - Huile de purcellin 3 g - ADS-Pin 2 g 40 - ADS-Sauge 2 g - Parfum 0,4 g - Triéthanolamine 0,2 g - Conservateurs 0,3 g - Eau déminéralisée qsp 100 g 14 3031669 Cette émulsion gel, appliquée une fois par jour permet un éclaircissement du teint et lutte efficacement contre les taches pigmentaires. C'est également un excellent après-soleil pour ses effets anti-érythèmes.

Claims (10)

1. REVENDICATIONS1.) Composition cosmétique ou pharmaceutique destinée à être utilisée par voie topique ou par voie orale et caractérisée en ce qu'elle contient au moins deux types différents de biocapsules toutes de la taille comprise entre 10 nm et 500 nm, toutes encapsulant les mêmes substances ou les mêmes extraits naturels, toutes obtenues par extrusion haute pression au travers d'une membrane de polycarbonate à pores de lOnm à 500nm suivi d'une lyophilisation suivi d'une lyophilisation par spray drying ou non, toutes réalisées uniquement à partir de substances naturelles et toutes stables au moins deux années.
2. 2.) Composition cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'un type de biocapsule comprenne dans sa paroi une ou plusieurs molécules de type lactone destinées à cibler un récepteur cellulaire et dans son centre une substance ou un extrait naturel hydrosoluble.
3. 3.) Composition cosmétique ou pharmaceutique selon les revendications 1 et 2 caractérisée en ce qu'un autre type de biocapsule comprenne dans sa paroi une protéine ou plusieurs protéines se comportant comme un récepteur capable de se lier avec un ligand cellulaire ou tissulaire et dans son centre une substance ou un extrait naturel hydrosoluble.
4. 4.) Composition cosmétique ou pharmaceutique selon les revendications 1 à 3 caractérisée en ce que la cible d'une des biocapsules soit les mitochondries et la molécule ou les molécules contenues dans la paroi proviennent d'un extrait de fenugrec ou d'un extrait de livèche.
5. 5.) Composition cosmétique ou pharmaceutique selon les revendications 1 à 4 caractérisée en ce qu'un autre type de biocapsule ne comprenne aucune protéine ou aucune lactone dans sa paroi et contienne dans son centre une ou plusieurs substances ou un extrait naturel hydrosoluble capable de se lier à des récepteurs cellulaires ou nucléaires ou bien aussi des molécules et des extraits naturels capables de se fixer sur plusieurs récepteurs différents.
6. 6.) Composition cosmétique ou pharmaceutique selon les revendications 1 à 5 caractérisée en ce qu'un ou plusieurs types de biocapsulecontiennent dans son centre une substance ou un extrait naturel hydrosoluble provenant d' une ou plusieurs des plantes de la liste suivante sans que ce soit limitatif : la pastèque, l'olivier, le romarin, le bambou, le baobab, l'hibiscus, le ginseng, l'angélique, la grenade, le cassis, le haricot, le the vert et la sauge.
7. 7.) Composition cosmétique ou pharmaceutique selon les revendications 1 à 6 caractérisée en ce que les deux biocapsules de types différents visent différents compartiments cellulaires ou tissulaires.
8. 8.) Composition cosmétique ou pharmaceutique selon les revendications 1 à 7 caractérisée en ce que les deux biocapsules différentes contiennent dans leur centre une ou des molécules identiques toutes d'origine naturelle, provenant d'extrait végétaux mais ayant soit le même mode d'action comme par exemple une action anti-radicaux libres ou une action anti-âge, ou encore une action anti-inflammatoire ou une action amincissante ou un effet repulpant ou encore une action énergisante ou encore une action protectrice soit plusieurs modes d'actions complémentaires.
9. 9.) Composition cosmétique et pharmaceutique selon les revendications 1 à 8 caractérisée en ce que la composition contenant ces biocapsules est sous la forme d'une émulsion huile dans eau (H/E) ou eau dans huile (E/H), d'émulsion multiple (H/E/H, E/H/E), de microémulsion, d'émulsion à phase gémellaires, d'émulsion PIT, de nano-émulsion, de pseudo-émulsion (dispersion stable de deux phases non miscibles au moyen de gélifiant), de gel aqueux, de gel gras, de gel hydro-alcoolique, de phase grasse, de suspension, de savon liquide ou solide, de solution moussante ou non, de poudre, de gel ou d'émulsion lyophilisée et pouvant se présenter sans que cela soit limitatif en crèmes, liquides, pâtes, lotions, émulsions, huiles, gels, sirops, solides, poudres, masques, stick, comprimés, sprays, aérosol, gélules, sirop.
10. 10.)Composition cosmétique ou pharmaceutique selon les revendications 1 à 9 caractérisée en ce la voie topique soit un cosmétique et la voie orale soit un complément alimentaire destinées à être utilisées conjointement, successivement, séparément ou en fonction des rythmes chronobiologiques.