FR3009620A1 - Procede automatique et automate de traitement d'une pluralite de suspensions cellulaires - Google Patents
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Abstract
Ce procédé de traitement d'une pluralité de suspensions cellulaires comprend au moins les étapes suivantes : (a) chargement d'une pluralité de flacons (4) sur un plateau de réception (6), chaque flacon (4) comprenant une suspension cellulaire à analyser ; (b) chargement d'une pluralité de contenants intermédiaires (20) dans un réceptacle (18) ; (c) extraction, grâce à des moyens de pipetage (24), d'un échantillon d'une suspension cellulaire dans un flacon (4) et dépôt de cet échantillon dans un contenant intermédiaire (20) ; et (e) prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire dans un contenant intermédiaire (20) et dépôt de cet échantillon dans un contenant d'analyse (32, 36) ; les étapes (c) et (e) étant répétées pour chaque flacon (4) à analyser. Le procédé comprend en outre, entre l'étape d'extraction (c) et l'étape de prélèvement (e), une étape (d) de traitement cellulaire de l'échantillon extrait grâce à des moyens de traitement cellulaire, l'étape (d) étant répétée pour chaque flacon (4) à traiter. L'invention concerne également un automate mettant en œuvre ce procédé.
Description
Procédé automatique et automate de traitement d'une pluralité de suspensions cellulaires La présente invention concerne un procédé de traitement d'une suspension cellulaire, du type comprenant au moins les étapes suivantes : (a) chargement d'une pluralité de flacons sur un plateau de réception, chaque flacon comprenant une suspension cellulaire à analyser ; (b) chargement d'une pluralité de contenants intermédiaires dans un réceptacle ; (c) extraction, grâce à des moyens de pipetage, d'un échantillon d'une suspension cellulaire dans un flacon et dépôt de cet échantillon dans un contenant intermédiaire ; et (e) prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire dans un contenant intermédiaire et dépôt de cet échantillon dans un contenant d'analyse ; les étapes (c) et (e) étant répétées pour chaque flacon à analyser ; L'invention concerne également un automate de traitement mettant en oeuvre ce procédé. Le domaine de l'invention est celui des systèmes de traitement et d'analyse d'une suspension cellulaire, notamment des systèmes de traitement et d'analyse d'un étalement cytologique fixé. Le diagnostic cytologique recouvre les techniques de diagnostic se basant sur l'examen morphologique des cellules. Il est très bien adapté au dépistage du cancer et des lésions cancéreuses et précancéreuses, par exemple du col de l'utérus. Un automate du type précité est par exemple décrit dans le document W02011/117523. Un tel automate permet d'obtenir un dépôt cellulaire parfaitement lisible, représentatif de la zone d'intérêt, en couche mince, ceci afin d'améliorer la qualité du diagnostic.
Afin d'améliorer de manière supplémentaire la lisibilité de certaines entités spécifiques des cellules telles que les noyaux, cytoplasmes ou autres éléments constitutifs de la cellule, on cherche à procéder à la coloration ou au « marquage » de ces entités spécifiques. A cet effet, il est connu des automates permettant de colorer ou de marquer certaines zones d'intérêt des cellules. Dans de tels automates, des lames d'analyse sur lesquelles les cellules ont été déposées en vue de leur analyse ultérieure sont agencées dans un support. Le support est ensuite déplacé par l'automate, puis immergé dans plusieurs bacs de coloration et de rinçage successifs afin d'assurer la coloration des cellules. Cependant, de tels automates sont susceptibles d'entraîner une contamination croisée entre les lames d'analyse correspondant à différents patients. En effet, lors des opérations de coloration dans les bacs de coloration, certaines cellules d'une lame d'analyse donnée peuvent se détacher pour venir se recoller sur une paroi d'un bac et/ou sur une autre lame d'analyse, comme cela est décrit par exemple dans le document « Cellular contamination during automatic and manual staining of cytological smears » de W.T. Barr, D.E.B. Powell et J.B. Raffan, publié le 23 Octobre 1970 dans « J Clin Pathol. - 604-607 )>. Il est également connu des automates permettant de découpler la coloration ou le marquage des cellules de plusieurs lames d'analyse, afin de traiter de manière unitaire l'étalement cellulaire sur une lame d'analyse donnée. Un tel automate est par exemple décrit dans le document EP 0 590 506. L'automate comprend, pour chaque lame d'analyse, un puits cylindrique permettant de déposer les cellules d'un échantillon sur une lame et d'ainsi isoler les cellules de la lame des cellules des autres lames. Une aspiration du surnageant est alors effectuée au sein du puits, puis les cellules sont colorées ou marquées par un dispositif de traitement de cellules. Toutefois, du fait de l'opération d'aspiration du surnageant, un tel automate ne permet pas toujours de préparer des dépôts cellulaires en deux dimensions, l'aspiration entraînant un dépôt en trois dimensions, plus difficile à numériser. En outre, le dispositif de traitement est un dispositif classique comprenant au moins une aiguille de rinçage solidarisée à des aiguilles de coloration ou de marquage cellulaire. De ce fait, le dispositif de traitement se déplace à proximité immédiate des cellules à traiter et peut entraîner une contamination croisée des lames. L'un des buts de l'invention est de pallier ces inconvénients en proposant un procédé de traitement cellulaire permettant de diminuer le risque de contamination croisée entre les lames d'analyse tout en permettant l'obtention, sur chaque lame d'analyse, d'un dépôt de cellules parfaitement lisible et en deux dimensions.
A cet effet, l'invention a pour objet un procédé de traitement d'au moins une suspension cellulaire du type précité, comportant en outre, entre l'étape d'extraction (c) et l'étape de prélèvement (e), une étape (d) de traitement cellulaire de l'échantillon extrait grâce à des moyens de traitement cellulaire, l'étape (d) étant répétée pour chaque flacon à traiter.
Le fait d'effectuer l'étape de traitement cellulaire de l'échantillon avant l'étape de dépôt de cet échantillon dans un contenant d'analyse permet un traitement unitaire de l'échantillon, et permet d'éviter ultérieurement toute contamination croisée entre les lames. Selon d'autres caractéristiques du procédé selon l'invention : - les moyens de traitement cellulaire comprennent des moyens de coloration cellulaire et l'étape (d) de traitement cellulaire est une étape de coloration cellulaire ; - les moyens de traitement cellulaire comprennent des moyens de marquage d'un bio-marqueur cellulaire et l'étape (d) de traitement cellulaire est une étape de marquage d'un bio-marqueur cellulaire ; - les moyens de traitement cellulaire comprennent des moyens de centrifugation, et l'étape (d) de traitement cellulaire de l'échantillon extrait comporte au moins les étapes suivantes : (I) application d'un fluide de traitement à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire ; (m) centrifugation du contenant intermédiaire ; (n) élimination d'un surnageant à l'intérieur du contenant intermédiaire ; (o) application d'un fluide de rinçage à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire ; (p) centrifugation du contenant intermédiaire ; (q) élimination d'un surnageant à l'intérieur du contenant intermédiaire ; - l'étape (I) d'application d'un fluide de traitement est effectuée par injection, par les moyens de pipetage, du fluide de traitement à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire, et l'étape (d) de traitement cellulaire de l'échantillon extrait comporte en outre les étapes suivantes : (f) application d'un fluide de rinçage à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire ; (g) centrifugation du contenant intermédiaire ; (h) élimination d'un surnageant à l'intérieur du contenant intermédiaire ; les étapes (f) à (h) se déroulant avant l'étape (I) d'application d'un fluide de traitement ; - les contenants intermédiaires comprennent des unités pré-remplies avec le fluide de traitement, et l'étape (I) d'application d'un fluide de traitement à l'échantillon cellulaire est effectuée simultanément avec l'étape (c) de dépôt de cet échantillon dans le contenant intermédiaire ; - chaque contenant d'analyse comporte un puits de décantation et une lame d'analyse placée en regard du puits de décantation, le puits de décantation étant muni d'une chambre de réception placée au-dessus de la lame d'analyse, la chambre de réception présentant un fond ouvert agencé pour faire pression sur une feuille d'absorption périphérique, et le procédé comporte en outre au moins les étapes successives suivantes : (r) chargement des contenants d'analyse sur le plateau de réception ; (s) réalisation d'un étalement d'analyse cellulaire sur la lame d'analyse, l'étalement cellulaire résultant du dépôt de l'échantillon dans le puits de décantation ; l'étape (e) de prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire se déroulant entre l'étape (r) de chargement des contenants d'analyse et l'étape (s) de réalisation d'un étalement d'analyse cellulaire sur la lame d'analyse. L'invention a également pour objet un automate de traitement d'au moins une suspension cellulaire comprenant : - au moins un flacon contenant la suspension cellulaire à analyser ; - au moins un plateau de réception du flacon ; - au moins un contenant intermédiaire ; - au moins un puits de décantation de la suspension cellulaire ; - des moyens de pipetage aptes à prélever l'échantillon de la suspension cellulaire dans le flacon et à verser cet échantillon dans le contenant intermédiaire, et aptes à prélever l'échantillon de la suspension cellulaire dans le contenant intermédiaire et à verser cet échantillon dans le puits de décantation ; dans lequel l'automate comporte des moyens de traitement cellulaire de l'échantillon de la suspension cellulaire, aptes à traiter l'échantillon de la suspension cellulaire avant le dépôt de cet échantillon par les moyens de pipetage dans le puits de décantation.
Selon d'autres caractéristiques de l'automate selon l'invention : - l'automate comporte au moins un récipient de fluide de rinçage et les moyens de traitement cellulaire comprennent des moyens de centrifugation ; - l'automate comporte un bras mobile sur lequel sont fixés les moyens de pipetage et les moyens de traitement cellulaire comportent au moins un récipient de fluide de traitement, le bras mobile étant propre à déplacer les moyens de pipetage de sorte à passer au-dessus d'au moins le plateau de réception, le contenant intermédiaire, le puits de décantation et le récipient de traitement, les moyens de pipetage étant propres à prélever le fluide de traitement dans le récipient et à verser dans un contenant intermédiaire le fluide de traitement prélevé ; - l'automate est agencé pour mettre en oeuvre le procédé tel que précédemment décrit. L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui va suivre, donnée uniquement à titre d'exemple et faite en se référant aux dessins annexés, sur lesquels : - la figure 1 est une vue en coupe schématique d'un automate de traitement selon l'invention ; - la figure 2 est une vue schématique en perspective de l'automate de la figure 1 selon un premier mode de réalisation ; et - la figure 3 est une vue en coupe d'une unité pré-remplie destinée à être reçue dans l'automate de la figure 1 selon un deuxième mode de réalisation.
En référence à la figure 1, on décrit un automate 2 de traitement d'une suspension cellulaire selon un premier mode de réalisation de l'invention. L'automate 2 de traitement comprend au moins un flacon 4 contenant une suspension cellulaire à analyser, telle que par exemple une suspension cytologique fixée. Une telle suspension cytologique peut par exemple provenir d'une opération de dépistage par frottis du col de l'utérus, ou de tout autre moyen de prélèvement cellulaire à visée de dépistage et/ou de diagnostic. Cette suspension cytologique comprend en particulier des cellules. Les cellules sont ensuite plongées dans un flacon 4 contenant un fixateur et forment ainsi la suspension cellulaire.
Le fixateur, ou solution de fixation, est destiné à préserver et conserver des prélèvements ou échantillons cytologiques, comprenant des cellules, en vue de leur analyse ultérieure par un cytologiste. Par conséquent le fixateur doit conserver l'intégrité des cellules, en particulier leur morphologie, dans l'état où elles se trouvaient avant leur prélèvement.
L'automate 2 comprend en outre au moins un plateau 6 de réception portant au moins le flacon 4 contenant la suspension cellulaire à analyser et un support 8 sur lequel est disposé le plateau de réception 6. De préférence, ce flacon 4 présente les mêmes caractéristiques que celles décrites dans le document EP-2 111 300, afin de pouvoir fixer le flacon 4 sur le plateau de réception 6 et certaines caractéristiques décrites dans le document WO-2006/058989 afin de pouvoir préparer et analyser la suspension cellulaire. De plus, l'automate 2 comporte au moins un réceptacle 18 portant au moins un contenant intermédiaire 20. De préférence, l'automate 2 comporte autant de réceptacles 18 que de plateaux de réception 6, chaque réceptacle 18 portant un nombre de contenants intermédiaires 20 au moins égal au nombre de flacons 4 portés par chaque plateau de réception 6. Dans l'exemple de réalisation de la figure 2, les contenants intermédiaires 20 de l'automate 2 comportent des micro-puits 22. En variante non représentée, les contenants intermédiaires 20 de l'automate 2 peuvent comporter des cônes de centrifugation séparés ou liés entre eux.
L'automate 2 comporte en outre des moyens 24 de pipetage-distribution, appelés moyens de pipetage ou de prélèvement par la suite, c'est-à-dire permettant de prélever et/ou de verser/remplir un échantillon de la suspension cellulaire. Ces moyens 24 de pipetage s'étendent au dessus du plateau de réception 6. L'échantillon est une portion précise en volume de la suspension cellulaire contenant des éléments d'intérêts à analyser, par exemple des cellules.
Ces moyens 24 de pipetage sont mobiles de sorte à passer au-dessus de chaque flacon 4 pour effectuer un prélèvement et/ou un remplissage comme représenté par les flèches de la figure 1. Les moyens 24 de pipetage sont en outres mobiles de sorte à passer au-dessus de chaque contenant intermédiaire 20. Les moyens 24 de pipetage sont ainsi aptes à verser dans un contenant intermédiaire 20 un échantillon de la suspension cellulaire prélevé dans un flacon 4 et à prélever un échantillon d'une suspension cellulaire contenue dans un contenant intermédiaire 20, comme cela sera décrit par la suite. Par ailleurs, l'automate 2 comprend au moins un récipient contenant du fluide de rinçage, le récipient n'étant pas représenté sur les figures pour des raisons de clarté. Les moyens 24 de pipetage sont mobiles de sorte à passer au-dessus du ou de chaque récipient de rinçage, à prélever du fluide de rinçage dans ce récipient et à verser dans un contenant intermédiaire 20 le fluide de rinçage prélevé. Les moyens 24 de pipetage sont formés d'au moins une pipette 26 ou aiguille, et de préférence une pluralité de pipettes, agencées de façon parallèle afin de pourvoir prélever simultanément des échantillons dans une pluralité de flacons 4 et les préparer simultanément en vue de leur analyse. En variante non représentée, les moyens de pipetage 24 sont formés d'au moins un embout jetable de pipetage, et de préférence une pluralité d'embouts jetables. Les moyens de pipetage 24 sont fixés sur un bras robotisé mobile 27 sur l'automate 2 au-dessus du plateau 6 et du réceptacle 18. En outre, l'automate 2 comprend au moins un contenant d'analyse destiné à recevoir/contenir l'échantillon de la suspension cellulaire, prélevé dans un contenant intermédiaire 20 et versé dans ou sur le contenant d'analyse par les moyens 24 de pipetage.
Par exemple, les contenants d'analyse peuvent comporter des lames d'étalement 32, ou encore des puits d'analyse ou de décantation 36 selon le mode d'analyse choisi par le praticien. Les contenants d'analyse 32, 36 sont maintenus de façon précise et fixe sur l'automate 2.
Selon une variante non représentée, les contenants d'analyse comportent au moins un tube de prélèvement ou d'aliquotage et un support dans lequel plusieurs tubes peuvent s'insérer afin de les maintenir en position fixe. En complément, comme illustré sur les figures 1 et 2, l'automate 2 comporte un dispositif 40 de dépôt de cellules par décantation sur une lame d'analyse. Un tel dispositif 40 de dépôt de cellules par décantation sur une plaque d'analyse a déjà été décrit dans le document WO 2009/000999 et l'homme du métier pourra se référer à ce document. Ce dispositif 40 comporte au moins un puits de décantation 36 placé au dessus d'une lame d'analyse 32, et un matériau absorbant.
La suspension est versée, par les moyens de pipetage 24, dans une chambre de réception du puits de décantation 36 placée au-dessus de la lame d'analyse 32, et dont le fond est ouvert et s'étend en regard d'une zone de dépôt de cellules de la lame d'analyse 32. Le fond de la chambre est en communication fluidique avec le matériau absorbant du liquide de conservation ou fixateur afin d'absorber progressivement celui-ci et de permettre un dépôt homogène par décantation des cellules sur la zone de dépôt de cellules de la lame d'analyse 32. On obtient ainsi un dépôt cellulaire uniforme dans un temps de décantation réduit. Le matériau absorbant est partiellement comprimé par une presse de décantation 46 entre le fond de la chambre de réception et la plaque d'analyse autour de la zone de dépôt de cellules. De plus, l'automate 2 comporte des moyens 50 de traitement cellulaire de la suspension cellulaire destinés à traiter un échantillon de la suspension cellulaire contenu dans le contenant intermédiaire 20. Dans l'exemple de réalisation des figures 1 et 2, les moyens de traitement cellulaire 50 comportent des moyens 54 de centrifugation. Les moyens de centrifugation 54 sont par exemple formés d'une centrifugeuse 60, comme illustré sur les figures 1 et 2. Dans l'exemple de réalisation des figures 1 et 2, les réceptacles 18 portant les contenants intermédiaires 20 sont agencés au sein de la centrifugeuse 60. La centrifugeuse 60 est adaptée pour effectuer une centrifugation de la suspension cellulaire de chaque contenant intermédiaire 20, en vue de la séparation de la suspension cellulaire en plusieurs phases. Selon le mode de réalisation illustré sur la figure 2, les moyens de traitement cellulaire 50 comportent en outre au moins un récipient contenant un fluide de traitement, le récipient n'étant pas représenté sur les figures pour des raisons de clarté. Dans l'exemple de réalisation de la figure 2, le fluide de traitement est une solution généralement utilisée pour des colorations cellulaires telles que des colorations de noyaux, cytoplasmes ou autres éléments constitutifs de la cellule. La solution comprend au moins un colorant cellulaire. En variante, le fluide de traitement est une solution utilisée pour des marquages de bio-marqueurs cellulaires. Par bio-marqueur cellulaire on entend toute entité spécifique d'une cellule telle qu'un noyau, un cytoplasme ou un autre élément constitutif de la cellule. Dans ce cas, la solution comprend au moins un marqueur cellulaire. Dans le mode de réalisation illustré sur la figure 2, les moyens 24 de pipetage- distribution sont mobiles de sorte à passer au-dessus du ou de chaque récipient de traitement, à prélever le fluide de traitement dans ce récipient et à verser dans un contenant intermédiaire 20 le fluide de traitement prélevé. Le procédé de traitement de ces suspensions mis en oeuvre par l'automate 2 décrit précédemment va à présent être détaillé, dans le cas de la préparation de lames d'analyse 32. Au préalable, après avoir prélevé les échantillons cellulaires à traiter, le praticien transfère les échantillons cellulaires dans des flacons 4. Puis, le technicien ou utilisateur, après un temps de fixation des cellules suffisant, par exemple un temps de fixation d'au moins trente minutes, charge les flacons 4 de suspensions cellulaires sur le plateau 6 de réception ainsi qu'au moins autant de contenants d'analyse, de préférence des lames d'analyse 32.
Ensuite, il dispose la feuille absorbante sur le plateau 6 de telle sorte que chaque lame d'analyse 32 est disposée entre le plateau 6 de réception et la feuille d'absorption. Une pluralité de puits 36 de décantation sont chargés dans une presse 46. La presse 46 de décantation est installée au dessus du plateau 6 de telle sorte que chaque puits 36 de décantation est disposé au dessus d'une lame d'analyse 32, tel que décrit dans le document WO 2009/000999. Les plateaux 6 sont ensuite chargés dans l'automate 2. En parallèle ou à la suite de cette étape de chargement des plateaux 6 dans l'automate 2, le technicien ou utilisateur insère, dans chaque réceptacle 18, au moins autant de contenants intermédiaires 20 que de flacons 4 portés par chaque plateau de réception 6. Les réceptacles 18 sont ensuite chargés dans la centrifugeuse 60 de l'automate 2. Les moyens de pipetage 24 sont déplacés au dessus du flacon 4 contenant la solution cellulaire à traiter. L'aiguille ou pipette 26 des moyens de pipetage 24 réalise alors un prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire au sein du flacon 4.
Les moyens de pipetage 24 sont ensuite déplacés au dessus d'un contenant intermédiaire 20 afin de verser/déposer le prélèvement dans le contenant intermédiaire 20, autrement dit dans le micro-puits 22 dans l'exemple de réalisation de la figure 2. Un traitement cellulaire d'un échantillon d'une suspension cellulaire contenu dans un contenant intermédiaire 20 est ensuite réalisé par les moyens de traitement cellulaire 50. Dans l'exemple de réalisation de la figure 2, le traitement cellulaire est une coloration cellulaire d'une suspension cellulaire contenue dans un contenant intermédiaire 20. En variante, le traitement cellulaire est un marquage de bio-marqueurs cellulaires d'une suspension cellulaire contenu dans un contenant intermédiaire 20.
De préférence, cette dernière étape de traitement cellulaire d'un échantillon d'une suspension cellulaire se fait elle-même en onze sous-étapes, dont certaines sont facultatives. Lors d'une première sous-étape, les moyens de pipetage 24 sont déplacés au- dessus du récipient de rinçage, de sorte à prélever du fluide de rinçage dans le récipient.
Les moyens de pipetage 24 sont alors déplacés au-dessus du contenant intermédiaire 20 renfermant l'échantillon de suspension cellulaire. Lors d'une deuxième sous-étape, les moyens de pipetage 24 versent le fluide de rinçage dans le contenant intermédiaire 20 positionné au sein de la centrifugeuse 60 dans l'exemple de réalisation des figures 1 et 2.
Lors d'une troisième sous-étape, les moyens 54 de centrifugation réalisent une centrifugation de la suspension cellulaire contenue dans le contenant intermédiaire 20 en vue de la séparation de cette suspension cellulaire en plusieurs phases. Lors d'une quatrième sous-étape, les moyens de pipetage 24 sont déplacés au- dessus du contenant intermédiaire 20. Les moyens de pipetage 24 prélèvent alors un volume de la solution cellulaire, dit volume « surnageant ». Ce volume « surnageant » est ensuite versé dans un récipient non représenté. En variante, ce volume « surnageant » est extrait par inclinaison du contenant intermédiaire 20, par exemple par une inclinaison selon un angle de l'ordre de 90 degrés, cette inclinaison permettant de verser le volume « surnageant » dans un récipient non représenté. Cette étape a pour but de laver et de conserver la suspension cellulaire sélectionnée dans le contenant intermédiaire 20, en vue de son traitement. Lors d'une cinquième sous-étape, un fluide de traitement est appliqué à l'échantillon de suspension cellulaire contenu dans le contenant intermédiaire 20. Plus précisément, selon le premier mode de réalisation de l'invention, les moyens de pipetage- distribution 24 sont déplacés au-dessus des récipients de traitement, de sorte à prélever du fluide de traitement dans un récipient de traitement. Les moyens 24 de pipetage- distribution sont alors déplacés au-dessus du contenant intermédiaire 20 et versent le fluide de traitement dans le contenant intermédiaire 20. Dans l'exemple de réalisation de la figure 2, au moins une pipette 26 des moyens 24 de pipetage prélève la solution de traitement comprenant au moins un colorant ou marqueur cellulaire et verse cette solution de traitement dans le contenant intermédiaire 20. Lors d'une sixième sous-étape, les moyens 54 de centrifugation réalisent une centrifugation de la suspension cellulaire contenue dans le contenant intermédiaire 20 en vue de la séparation de cette suspension cellulaire en plusieurs phases. Lors d'une septième sous-étape, les moyens de pipetage 24 sont déplacés au- dessus du contenant intermédiaire 20. Les moyens de pipetage 24 prélèvent alors un volume « surnageant » de la solution cellulaire. Ce volume « surnageant » est ensuite versé dans un récipient non représenté. En variante, ce volume « surnageant » est extrait par inclinaison du contenant intermédiaire 20, par exemple par une inclinaison selon un angle de l'ordre de 90 degrés, cette inclinaison permettant de verser le volume « surnageant » dans un récipient non représenté. Lors d'une huitième sous-étape, les moyens de pipetage 24 sont déplacés au-dessus du récipient de rinçage, de sorte à prélever du fluide de rinçage dans le récipient. Les moyens de pipetage 24 sont alors déplacés au-dessus du contenant intermédiaire 20 renfermant l'échantillon de suspension cellulaire coloré ou marqué.
Lors d'une neuvième sous-étape, les moyens de pipetage 24 versent le fluide de rinçage dans le contenant intermédiaire 20. Lors d'une dixième sous-étape, les moyens 54 de centrifugation réalisent une centrifugation de la suspension cellulaire contenue dans le contenant intermédiaire 20 en vue de la séparation de cette suspension cellulaire en plusieurs phases.
Lors d'une onzième sous-étape, les moyens de pipetage 24 sont déplacés au- dessus du contenant intermédiaire 20. Les moyens de pipetage 24 prélèvent alors un volume « surnageant » de la solution cellulaire, puis versent ce volume « surnageant » dans un récipient non représenté. En variante, l'étape de traitement cellulaire d'un échantillon d'une suspension cellulaire ne comprend pas les deuxième, quatrième, dixième et/ou onzième sous-étapes. Un prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire traitée dans un contenant intermédiaire 20 est ensuite réalisé par les moyens 24 de pipetage-distribution. Plus précisément, les moyens de pipetage-distribution 24 sont déplacés au dessus du contenant intermédiaire 20 renfermant la solution cellulaire à analyser. L'aiguille ou pipette 26 des moyens de pipetage 24 réalise alors un prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire au sein du contenant intermédiaire 20. En variante non représentée, avant d'effectuer le prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire dans un contenant intermédiaire 20, les moyens 24 de pipetage-distribution prélèvent préalablement un volume d'une colle cellulaire contenue dans un récipient disposé à cet effet dans l'automate 2.
Les moyens de pipetage 24 sont ensuite déplacés au-dessus d'un puits 36 de décantation afin de verser/déposer le prélèvement dans la chambre de décantation et de réaliser une lame d'analyse 32 comprenant un étalement cellulaire à analyser. L'étalement cellulaire résulte du dépôt du prélèvement dans le puits de décantation tel que décrit dans le document WO 2009/000999 et auquel l'homme du métier pourra se référer. Une décantation a lieu sur la lame 32 pendant une durée par exemple sensiblement comprise entre 5 et 60 minutes, et de préférence égale à 15 minutes pour la préparation d'une lame d'analyse. Les étapes de prélèvement et de traitement de l'échantillon, et de réalisation de la lame sont répétées pour chaque flacon 4 à analyser. Grâce aux moyens de traitement cellulaire 50, l'automate selon le premier mode de réalisation de l'invention permet notamment d'effectuer des traitements de coloration cellulaire monochromatiques ou polychromatiques. L'automate selon l'invention permet en outre la réalisation et le traitement automatisés des frottis et autres prélèvements cytologiques en couche mince. Le procédé de traitement de suspensions cellulaires mis en oeuvre par l'automate 2 permet de traiter chaque échantillon de suspension cellulaire de manière unitaire, dans un contenant hermétique, assurant ainsi l'isolation de l'échantillon par rapport à l'environnement extérieur. Ceci permet de préserver l'intégrité de toutes les solutions et prélèvements cytologiques en évitant les risques de contamination croisée, notamment la contamination croisée entre les lames d'analyse. En outre, contrairement au procédé de traitement tel que celui décrit dans le document EP 0 590 506, aucune opération d'aspiration et/ou de coloration n'est effectuée sur la lame d'analyse une fois l'échantillon de suspension cellulaire déposé sur la lame.
Ceci permet d'obtenir un étalement cellulaire lisible en deux dimensions, assurant ainsi la conservation des éléments sélectionnés, ainsi que la réalisation d'une numérisation complète et satisfaisante de l'étalement cellulaire. On conçoit ainsi que le procédé de traitement cellulaire selon l'invention permet d'optimiser le traitement cellulaire qui se fait en suspension et non plus par étalement, mais aussi de diminuer les risques de contamination croisée entre les lames d'analyse, tout en permettant l'obtention, sur chaque lame d'analyse, d'un dépôt de cellules parfaitement lisible en deux dimensions pour optimiser l'étape de numérisation de la lame d'étalement traitée. De plus, il permet une standardisation, au sein d'un unique automate, des différentes étapes de préparation des échantillons, de traitement cellulaire de ces échantillons et de préparation des lames d'analyse. Ceci permet un gain d'espace et donc une diminution des coûts par rapport aux techniques de traitement traditionnelles. Les figures 1 et 3 illustrent un deuxième mode de réalisation de l'invention pour lequel les éléments analogues au premier mode de réalisation, décrit précédemment, sont repérés par des références identiques, et ne sont donc pas décrits à nouveau.
A la différence du premier mode de réalisation, les moyens de traitement cellulaire 50 ne comportent plus de récipients contenant un fluide de traitement. En outre, les contenants intermédiaires 20 ne comportent plus de micro-puits 22, mais comportent des unités 70. Chaque unité 70 est pré-remplie avec un fluide de traitement 72, comme illustré sur la figure 3. Dans l'exemple de réalisation de la figure 3, le fluide de traitement 72 est une solution comprenant au moins un colorant ou marqueur cellulaire. Le procédé de traitement de suspensions cellulaires mis en oeuvre par l'automate 2 selon le deuxième mode de réalisation est similaire à celui du premier mode de réalisation précédemment décrit. En particulier, lors de l'étape de chargement des contenants intermédiaires 20 dans chaque réceptacle 18, le technicien ou utilisateur insère, dans le réceptacle 18, les unités 70 pré-remplies. Toutefois, à la différence du procédé de traitement selon l'exemple de réalisation préférentiel du premier mode de réalisation, l'étape d'application d'un fluide de traitement à l'échantillon de suspension cellulaire est effectuée simultanément avec l'étape de dépôt de cet échantillon, par les moyens de pipetage 24, dans l'unité pré-remplie 70. En effet, lors du dépôt de l'échantillon de suspension cellulaire dans l'unité pré-remplie 70, la suspension cellulaire se mélange avec le fluide de traitement 72 contenu au fond de l'unité 70, et le traitement s'applique aux cellules d'intérêt contenues dans l'échantillon de suspension cellulaire.
Le reste du procédé de traitement selon ce deuxième mode de réalisation est analogue à celui du premier mode de réalisation, et n'est donc pas décrit plus en détail. Par rapport à l'automate selon le premier mode de réalisation, l'automate selon le deuxième mode de réalisation permet avantageusement d'effectuer moins de manipulation et d'optimiser la traçabilité de la solution de traitement utilisée.
Les autres avantages de ce deuxième mode de réalisation de l'automate de traitement sont identiques à ceux du premier mode de réalisation, et ne sont donc pas décrits à nouveau.
Claims (11)
- REVENDICATIONS1.- Procédé de traitement d'une pluralité de suspensions cellulaires comprenant au moins les étapes suivantes : (a) chargement d'une pluralité de flacons (4) sur un plateau de réception (6), chaque flacon (4) comprenant une suspension cellulaire à analyser ; (b) chargement d'une pluralité de contenants intermédiaires (20) dans un réceptacle (18) ; (c) extraction, grâce à des moyens de pipetage (24), d'un échantillon d'une suspension cellulaire dans un flacon (4) et dépôt de cet échantillon dans un contenant intermédiaire (20) ; et (e) prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire dans un contenant intermédiaire (20) et dépôt de cet échantillon dans un contenant d'analyse (32, 36) ; les étapes (c) et (e) étant répétées pour chaque flacon (4) à analyser ; ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend en outre, entre l'étape d'extraction (c) et l'étape de prélèvement (e), une étape (d) de traitement cellulaire de l'échantillon extrait grâce à des moyens de traitement cellulaire (50), l'étape (d) étant répétée pour chaque flacon (4) à traiter.
- 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les moyens de traitement cellulaire (50) comprennent des moyens de coloration cellulaire et en ce que l'étape (d) de traitement cellulaire est une étape de coloration cellulaire.
- 3.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les moyens de traitement cellulaire (50) comprennent des moyens de marquage d'un bio-marqueur cellulaire et en ce que l'étape (d) de traitement cellulaire est une étape de marquage d'un bio-marqueur cellulaire.
- 4.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les moyens de traitement cellulaire (50) comprennent des moyens de centrifugation (54), et en ce que l'étape (d) de traitement cellulaire de l'échantillon extrait comporte au moins les étapes suivantes : (I) application d'un fluide de traitement (72) à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire (20) ; (m) centrifugation du contenant intermédiaire (20) ; (n) élimination d'un surnageant à l'intérieur du contenant intermédiaire (20) ;(o) application d'un fluide de rinçage à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire (20) ; (p) centrifugation du contenant intermédiaire (20) ; (q) élimination d'un surnageant à l'intérieur du contenant intermédiaire (20).
- 5.- Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'étape (I) d'application d'un fluide de traitement est effectuée par injection, par les moyens de pipetage (24), du fluide de traitement (72) à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire (20), et en ce que l'étape (d) de traitement cellulaire de l'échantillon extrait comporte en outre les étapes suivantes : (f) application d'un fluide de rinçage à l'échantillon cellulaire à l'intérieur du contenant intermédiaire (20) ; (g) centrifugation du contenant intermédiaire (20) ; (h) élimination d'un surnageant à l'intérieur du contenant intermédiaire (20) ; les étapes (f) à (h) se déroulant avant l'étape (I) d'application d'un fluide de traitement.
- 6.- Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que les contenants intermédiaires (20) comprennent des unités (70) pré-remplies avec le fluide de traitement (72), et en ce que l'étape (I) d'application d'un fluide de traitement (72) à l'échantillon cellulaire est effectuée simultanément avec l'étape (c) de dépôt de cet échantillon dans le contenant intermédiaire (20).
- 7.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que chaque contenant d'analyse comporte un puits de décantation (36) et une lame d'analyse (32) placée en regard du puits de décantation (36), le puits de décantation (36) étant muni d'une chambre de réception placée au-dessus de la lame d'analyse (32), la chambre de réception présentant un fond ouvert agencé pour faire pression sur une feuille d'absorption périphérique, et en ce que le procédé comporte en outre au moins les étapes successives suivantes : (r) chargement des contenants d'analyse (32, 36) sur le plateau de réception (6),; (s) réalisation d'un étalement d'analyse cellulaire sur la lame d'analyse (32), l'étalement cellulaire résultant du dépôt de l'échantillon dans le puits de décantation (36) ; l'étape (e) de prélèvement d'un échantillon d'une suspension cellulaire se déroulant entre l'étape (r) de chargement des contenants d'analyse (32, 36) et l'étape (s) de réalisation d'un étalement d'analyse cellulaire sur la lame d'analyse (32).
- 8.- Automate (2) de traitement d'au moins une suspension cellulaire, comprenant : - au moins un flacon (4) contenant la suspension cellulaire à analyser ; - au moins un plateau de réception (6) du flacon (4) ; - au moins un contenant intermédiaire (20) ; - au moins un puits (36) de décantation de la suspension cellulaire ; - des moyens de pipetage (24) aptes à prélever l'échantillon de la suspension cellulaire dans le flacon (4) et à verser cet échantillon dans le contenant intermédiaire (20), et aptes à prélever l'échantillon de la suspension cellulaire dans le contenant intermédiaire (20) et à verser cet échantillon dans le puits de décantation (36) ; l'automate (2) étant caractérisé en ce qu'il comporte des moyens (50) de traitement cellulaire de l'échantillon de la suspension cellulaire, aptes à traiter l'échantillon de la suspension cellulaire avant le dépôt de cet échantillon par les moyens de pipetage (24) dans le puits de décantation (36).
- 9.- Automate (2) selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un récipient de fluide de rinçage et en ce que les moyens de traitement cellulaire (50) comprennent des moyens de centrifugation (54).
- 10.- Automate (2) selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce qu'il comporte un bras mobile (27) sur lequel sont fixés les moyens de pipetage (24) et en ce que les moyens de traitement cellulaire (50) comportent au moins un récipient de fluide de traitement, le bras mobile (27) étant propre à déplacer les moyens de pipetage (24) de sorte à passer au-dessus d'au moins le plateau de réception (6), le contenant intermédiaire (20), le puits de décantation (36) et le récipient de traitement, les moyens de pipetage (24) étant propres à prélever le fluide de traitement dans le récipient et à verser dans un contenant intermédiaire (20) le fluide de traitement prélevé. .
- 11.- Automate (2) selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisé en ce qu'il est agencé pour mettre en oeuvre le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7.
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