FR3000389A1 - Composition, useful for stimulating the synthesis of collagen fibers by cells of skin, inhibiting adipocyte differentiation and stimulating lipolysis in adipocytes, comprises extract of Jania rubens - Google Patents
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Abstract
Description
Procédé cosmétique de stimulation de la synthèse d'aquaporine 8 par application cutanée d'une composition cosmétique comprenant un extrait de Jania rubens.Cosmetic process for stimulating the synthesis of aquaporin 8 by dermal application of a cosmetic composition comprising an extract of Jania rubens.
Le domaine de l'invention est celui de la cosmétologie. Plus précisément, l'invention concerne un procédé de stimulation de l'expression de l'aquaporine 8 dans les cellules du derme humain afin de favoriser une action minceur et fermeté. La peau se divise en trois couches : l'épiderme, le derme et l'hypoderme. C'est au niveau de l'hypoderme que se situent les adipocytes, ou cellules graisseuses.The field of the invention is that of cosmetology. More specifically, the invention relates to a method for stimulating the expression of aquaporin 8 in the cells of the human dermis to promote a slimming action and firmness. The skin is divided into three layers: the epidermis, the dermis and the hypodermis. It is at the level of the hypodermis that the adipocytes, or fat cells, are located.
Les adipocytes sont organisés en lobules graisseux, séparés par des cloisons de tissu conjonctif. Lorsque les adipocytes se gorgent exagérément de graisses, les lobules augmentent de volume et poussent le derme et l'épiderme vers le haut. Cet aspect irrégulier est connu sous le nom de peau d'orange ou encore cellulite. L'épaississement de l'hypoderme va, de plus, comprimer les vaisseaux sanguins. Les toxines sont alors mal éliminées et s'accumulent au niveau du derme, créant une réaction inflammatoire. Plus précisément, la dénomination scientifique de la peau d'orange est panniculopathie oedémato-fibro-sclérotique. Ses causes peuvent être génétiques, hormonales ou encore liées à un déséquilibre entre les apports caloriques et les dépenses énergétiques. On estime que la peau d'orange concerne environ 90% des femmes occidentales âgées de plus de vingt ans. Il existe différents types de cellulite ou peau d'orange parmi lesquels on peut citer la cellulite adipeuse et la cellulite fibreuse. La cellulite adipeuse peut se loger dans les genoux, les cuisses, le ventre, les fesses et les hanches. Elle est souple au toucher et non douloureuse. La cellulite fibreuse est, en revanche, particulièrement dense et douloureuse. Quel que soit le type de cellulite, cela peut être particulièrement disgracieux et être complexant pour les sujets concernés. De nombreuses techniques ont alors été mises au point pour résoudre ce problème. On connaît bien sûr les méthodes mécaniques comme la lipoaspiration ou le palper-rouler. La lipoaspiration consiste à faire passer une sonde sous la peau de la patiente anesthésiée afin de racler pour décoller la graisse et l'aspirer. Cette méthode invasive est particulièrement douloureuse. Elle est de plus onéreuse et nécessite une intervention chirurgicale. Le palper-rouler est une méthode de massage consistant à décoller la graisse sous-cutanée pour faciliter son élimination. Qu'elle soit effectuée de manière manuelle ou mécanique, cette méthode est également douloureuse. Elle présente par ailleurs une efficacité limitée sur la cellulite fibreuse et est déconseillée aux sujets présentant une fragilité vasculaire. D'autres méthodes comme la mésothérapie, la lipolyse par ultrasons, par laser ou par injection de solution hypo-osmolaire ont également été testées. Leur efficacité est à relativiser compte tenu des effets secondaires qu'elles entraînent (douleurs, érythèmes, nécroses cutanées...). On connaît également des compositions pharmaceutiques et cosmétiques sous forme de crème, permettant de déstocker les graisses sous-cutanées. La grande majorité de ces crèmes incorporent de la caféine comme actif lipolytique. La caféine agit sur la cellulite en stimulant la lipase hormono-sensible (HSL), enzyme nécessaire à la lipolyse, et en inhibant la phosphodiestérase, enzyme qui dégrade l'AMP cyclique activant la HSL. La caféine permet donc principalement de bloquer le stockage des lipides. Par ailleurs, la plupart de ces compositions contiennent des agents nacrants permettant de renvoyer la lumière, ce qui donne de manière artificielle un aspect plus lisse et moins bosselé à la peau. Toutefois, aucune de ces compositions ne permet de rendre à la peau sa souplesse, sa fermeté et son élasticité. Il existe donc un besoin de formuler une composition cosmétique ou pharmaceutique permettant de stimuler la lipolyse afin d'éliminer la cellulite. Il est également nécessaire de faire en sorte que cette composition redonne à la peau un aspect ferme, élastique et souple. L'invention a notamment pour objectif de pallier ces inconvénients de l'art antérieur. Plus précisément, un objectif de l'invention est de fournir, dans au moins un mode de réalisation, un procédé permettant de stimuler la lipolyse.The adipocytes are organized in fatty lobules, separated by partitions of connective tissue. When the fat cells fatten excessively, the lobules increase in volume and push the dermis and the epidermis upwards. This irregular appearance is known as orange peel or cellulite. The thickening of the hypoderm will, moreover, compress the blood vessels. The toxins are then badly eliminated and accumulate in the dermis, creating an inflammatory reaction. More specifically, the scientific name of the orange peel is oedematous-fibro-sclerotic panniculopathy. Its causes can be genetic, hormonal or linked to an imbalance between calorie intake and energy expenditure. It is estimated that orange peel affects about 90% of Western women over the age of twenty. There are different types of cellulite or orange peel among which we can mention cellulite fat and fibrous cellulite. Fat cellulite can lodge in the knees, thighs, stomach, buttocks and hips. It is soft to the touch and not painful. Fibrous cellulite, on the other hand, is particularly dense and painful. Whatever the type of cellulite, this can be particularly unsightly and be complexing for the subjects concerned. Many techniques were then developed to solve this problem. Of course, we know mechanical methods such as lipoaspiration or palpate-rolling. Liposuction involves passing a probe under the skin of the anesthetized patient to scrape off the fat and aspirate it. This invasive method is particularly painful. It is more expensive and requires surgery. Palpate-rolling is a method of massage consisting in detaching the subcutaneous fat to facilitate its elimination. Whether done manually or mechanically, this method is also painful. It also has limited effectiveness on fibrous cellulite and is not recommended for subjects with vascular fragility. Other methods such as mesotherapy, lipolysis by ultrasound, laser or injection of hypo-osmolar solution were also tested. Their effectiveness is to be relativized given the side effects they cause (pain, erythema, cutaneous necrosis ...). Pharmaceutical and cosmetic compositions in the form of cream are also known, making it possible to destock the subcutaneous fats. The vast majority of these creams incorporate caffeine as a lipolytic active. Caffeine acts on cellulite by stimulating hormone-sensitive lipase (HSL), the enzyme needed for lipolysis, and inhibiting phosphodiesterase, an enzyme that degrades cyclic AMP activating HSL. Caffeine therefore mainly helps to block the storage of lipids. Moreover, most of these compositions contain pearlescent agents for returning light, which artificially gives a smoother and less bumpy appearance to the skin. However, none of these compositions makes it possible to restore the skin's suppleness, firmness and elasticity. There is therefore a need to formulate a cosmetic or pharmaceutical composition for stimulating lipolysis to eliminate cellulite. It is also necessary to ensure that this composition gives the skin a firm, elastic and supple appearance. The invention particularly aims to overcome these disadvantages of the prior art. More specifically, an object of the invention is to provide, in at least one embodiment, a method for stimulating lipolysis.
Un autre objectif de l'invention est de mettre en oeuvre, dans au moins un mode de réalisation, un procédé cosmétique permettant d'améliorer la souplesse et la fermeté de la peau. L'invention a encore pour objectif de mettre en oeuvre, dans au moins un mode de réalisation, un procédé cosmétique permettant de diminuer l'aspect peau d'orange de la cellulite. 1. Exposé de l'invention Ces objectifs, ainsi que d'autres qui apparaîtront par la suite, sont atteints à l'aide d'un procédé cosmétique de stimulation de la synthèse de fibres de collagène par les cellules du derme, d'inhibition de la différenciation des adipocytes et de la stimulation de la lipolyse. Selon l'invention, un tel procédé inclue une étape d'application sur la peau d'une composition cosmétique à visée minceur et/ou fermeté renfermant un principe actif stimulant l'expression de l'aquaporine 8. En effet, les inventeurs ont découvert de manière surprenante que la stimulation de l'expression de l'aquaporine 8 (AQP8) permettait d'agir de manière centrale en stimulant l'expression d'un ensemble de gènes, aboutissant à la lipolyse et à la différenciation des adipocytes ainsi qu'à la synthèse de fibres de collagène I par les fibroblastes. De manière générale, les aquaporines sont constituées de 6 domaines transmembranaires délimitant un canal central au sein de la membrane cellulaire. Ces protéines participent à l'homéostasie cellulaire en permettant le passage de l'eau et des petits solutés. Plus spécifiquement, l'aquaporine 8 a été initialement détectée dans les hépatocytes, le pancréas, le colon et les cellules rénales. Elle contribue au maintien du pH et de la pression osmotique cellulaire grâce à sa capacité à transporter l'urée et les ions ammonium. Plus récemment, l'expression de l'aquaporine et son rôle éventuel dans l'hydratation de l'épiderme ont été démontrés dans les kératinocytes humains (P.Y Morvan et R. Vallée, Parfums Cosmétiques Actualités (194), 2007).Another object of the invention is to implement, in at least one embodiment, a cosmetic process for improving the suppleness and firmness of the skin. The invention also aims to implement, in at least one embodiment, a cosmetic process to reduce the appearance of orange peel cellulite. 1. OBJECT OF THE INVENTION These objectives, as well as others which will appear subsequently, are achieved by means of a cosmetic process for stimulating the synthesis of collagen fibers by the dermis cells. differentiation of adipocytes and stimulation of lipolysis. According to the invention, such a method includes a step of applying to the skin a cosmetic composition for thinness and / or firmness purposes containing an active ingredient stimulating the expression of aquaporin 8. In fact, the inventors have discovered surprisingly that the stimulation of the expression of aquaporin 8 (AQP8) allowed to act in a central way by stimulating the expression of a set of genes, resulting in the lipolysis and the differentiation of adipocytes as well as to the synthesis of collagen I fibers by fibroblasts. In general, the aquaporins consist of 6 transmembrane domains delimiting a central channel within the cell membrane. These proteins participate in cellular homeostasis by allowing the passage of water and small solutes. More specifically, aquaporin 8 was initially detected in hepatocytes, pancreas, colon and renal cells. It helps maintain pH and cell osmotic pressure through its ability to carry urea and ammonium ions. More recently, the expression of aquaporin and its possible role in the hydration of the epidermis have been demonstrated in human keratinocytes (P.Y Morvan and R. Vallée, Perfumes Cosmetics News (194), 2007).
Les inventeurs ont constaté que le traitement d'adipocytes humains, prélevés chez un sujet féminin âgé de 58 ans, permettaient d'une part de limiter la maturation des adipocytes en diminuant l'expression des gènes impliqués dans la synthèse d'acide gras ou dans la différenciation des adipocytes et d'autre part, de stimuler la lipolyse aussi efficacement que la caféine. Ainsi, l'application d'une composition cosmétique comprenant un principe actif cosmétique stimulant l'expression de l'AQP8 permet de stimuler la lipolyse et donc de déstocker les graisses contenues dans les adipocytes. Elle permet également de stimuler l'expression des gènes impliqués dans la synthèse des acides gras ou dans la liaison des lipides aux protéines, ce qui a pour effet de limiter la formation de cellulite. Enfin, l'aquaporine 8 permet également de favoriser la production d' adiponectine par les adipocytes. Cette hormone est à la fois impliquée dans la régulation du métabolisme des lipides et du glucose, mais présente également un rôle anti-inflammatoire. Or, la formation de cellulite est généralement accompagnée d'une légère inflammation des tissus. Par conséquent, un procédé comprenant l'application d'une composition cosmétique sur la peau, la composition permettant de stimuler l'expression de l'AQP8, permet de combattre la cellulite en déstockant les adipocytes des graisses qu'ils contiennent tout en limitant sa reformation. Les inventeurs ont également constaté de manière plus étonnante que l'expression de l'aquaporine 8 dans les fibroblastes de la peau permettait également de favoriser la synthèse de fibres de collagènes de type I, IV et VII. Or, ces types de collagène sont impliqués respectivement dans la composition du derme, de la lame basale et les fibres d'ancrage de la jonction dermo-épidermique. Ainsi, un procédé cosmétique comprenant l'application sur la peau d'une composition dont le principe actif favorise l'expression de l'AQP8 permet en outre de redonner souplesse et fermeté à la peau en favorisant la synthèse de collagène par les fibroblastes du derme humain. Par conséquent, le procédé selon l'invention permet non seulement de combattre la cellulite et l'aspect peau d'orange, il permet également de limiter la reformation de tels phénomènes.The inventors have found that the treatment of human adipocytes, taken from a female subject aged 58, on the one hand, made it possible to limit the maturation of the adipocytes by decreasing the expression of the genes involved in the synthesis of fatty acids or in differentiation of adipocytes and secondly, to stimulate lipolysis as effectively as caffeine. Thus, the application of a cosmetic composition comprising a cosmetic active ingredient stimulating the expression of AQP8 makes it possible to stimulate lipolysis and thus to destock the fats contained in the adipocytes. It also stimulates the expression of genes involved in the synthesis of fatty acids or in the binding of lipids to proteins, which has the effect of limiting the formation of cellulite. Finally, aquaporin 8 also makes it possible to promote the production of adiponectin by adipocytes. This hormone is both involved in the regulation of lipid and glucose metabolism, but also has an anti-inflammatory role. However, the formation of cellulite is usually accompanied by a slight inflammation of the tissues. Consequently, a method comprising the application of a cosmetic composition to the skin, the composition making it possible to stimulate the expression of AQP8, makes it possible to combat cellulite by destocking the adipocytes from the fats they contain while limiting its reformation. The inventors have also found, more surprisingly, that the expression of aquaporin 8 in skin fibroblasts also made it possible to promote the synthesis of type I, IV and VII collagen fibers. However, these types of collagen are involved respectively in the composition of the dermis, the basal lamina and the anchoring fibers of the dermal-epidermal junction. Thus, a cosmetic process comprising the application to the skin of a composition whose active ingredient promotes the expression of AQP8 also makes it possible to restore suppleness and firmness to the skin by promoting the synthesis of collagen by the fibroblasts of the dermis. human. Consequently, the process according to the invention not only makes it possible to combat cellulite and the appearance of orange peel, it also makes it possible to limit the reformation of such phenomena.
De préférence, ledit principe actif est un extrait de Jania Rubens. Jania rubens est une algue rouge (Rhodophycées) appartenant aux Corallinacées. Cette algue est une espèce calcifiée, constituée de touffes dressées sur une croûte basale commune, et peut mesurer environ 2 à 3 cm de haut. Au cours de sa lente croissance, Jania rubens est capable de fixer les minéraux et les oligo-éléments de l'eau de mer mais retient également la microflore et la microfaune marines. Cependant, les inventeurs ont constaté que l'intégration d'un extrait de Jania rubens à une composition cosmétique permettait de stimuler l'expression de l'aquaporine 8. De manière avantageuse, ladite composition comprend entre 0,1% et 10% en poids d'un extrait de Jania rubens par rapport au poids total de la composition. De manière davantage préférée, ladite composition comprend entre 0,5% et 2% en poids d'extrait de Jania rubens par rapport au poids total de la composition. Ces plages de concentrations permettent à la fois de stimuler l'expression de l'aquaporine 8 de manière suffisante pour induire les effets précités sur les adipocytes et les fibroblastes humains, tout en limitant les inconvénients associés à l'utilisation de Jania rubens. En effet, Jania rubens dégage une odeur déplaisante ce qui a, jusqu'à présent, limité son utilisation en cosmétique. Dans un mode de réalisation intéressant, l'extrait de Jania rubens est un extrait aqueux ou hydroglycérique. De préférence, cet extrait est obtenu à partir d'une algue de culture. L'utilisation d'algues de culture permet d'éviter l'odeur déplaisante. Un autre aspect de l'invention concerne une composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention, ladite composition présentant une activité minceur et/ou fermeté.Preferably, said active ingredient is an extract of Jania Rubens. Jania rubens is a red alga (Rhodophyceae) belonging to Corallinaceae. This alga is a calcified species, consisting of tufts erected on a common basal crust, and can measure about 2 to 3 cm high. During its slow growth, Jania rubens is able to fix the minerals and trace elements of seawater but also retains marine microflora and microfauna. However, the inventors have found that the integration of a Jania rubens extract into a cosmetic composition makes it possible to stimulate the expression of aquaporin 8. Advantageously, said composition comprises between 0.1% and 10% by weight. an extract of Jania rubens relative to the total weight of the composition. More preferably, said composition comprises between 0.5% and 2% by weight of Jania rubens extract relative to the total weight of the composition. These ranges of concentrations make it possible both to stimulate the expression of aquaporin 8 sufficiently to induce the aforementioned effects on human adipocytes and fibroblasts, while limiting the disadvantages associated with the use of Jania rubens. Indeed, Jania rubens emits an unpleasant smell which has, so far, limited its use in cosmetics. In an interesting embodiment, the extract of Jania rubens is an aqueous or hydroglyceric extract. Preferably, this extract is obtained from a culture alga. The use of cultivated algae helps to avoid the unpleasant smell. Another aspect of the invention relates to a cosmetic composition intended to be applied to the skin for the implementation of the method according to the invention, said composition having slimming and / or firmness activity.
Avantageusement, la composition cosmétique comprend un extrait de Jania rubens. Dans un mode de réalisation préféré, ledit extrait de Jania rubens est présent en quantité comprise entre 0,1% et 10% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0,5% et 2% en poids par rapport au poids total de la composition. Cette plage de concentrations permet notamment la formulation de compositions cosmétiques efficaces et peu coûteuses. Les pourcentages massiques sont calculés de la manière suivante : Pourcentage massique (%) = (masse du composé/masse total de la solution) x 100.Advantageously, the cosmetic composition comprises an extract of Jania rubens. In a preferred embodiment, said extract of Jania rubens is present in an amount of between 0.1% and 10% by weight relative to the total weight of the composition, preferably between 0.5% and 2% by weight relative to to the total weight of the composition. This range of concentrations makes it possible in particular to formulate effective and inexpensive cosmetic compositions. Mass percentages are calculated as follows: Percentage mass (%) = (mass of compound / total mass of solution) x 100.
De préférence, laquelle ledit extrait de Jania rubens est un extrait aqueux ou hydroglycérique, ce qui facilite son incorporation dans la formulation d'une composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau. Dans un mode de réalisation avantageux, la composition selon l'invention se présente sous une forme choisie parmi un gel, une solution, une crème, une pommade, un lait, un beurre, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans huile, une émulsion triple. Ces formulations et textures sont simples à produire, et sont compatibles avec une application topique. Préférentiellement, la composition se présente sous la forme d'un gel. L'application sous forme de gel permet notamment d'administrer la composition sur des surfaces importantes de la peau, comme les jambes et le ventre, tout en apportant une sensation de fraîcheur agréable. Dans un autre mode de réalisation intéressant, la composition peut se présenter sous la forme d'une crème ou d'un lait. La texture fluide et onctueuse de la crème ou du lait permet également l'administration sur une surface importante de la peau, tout en apportant une sensation de douceur à l'utilisateur. Avantageusement, la composition selon l'invention comprend en outre au moins un additif choisi parmi les parfums, les colorants, les conservateurs, les huiles essentielles de végétaux, les extraits végétaux, de fruits ou d'algues. 2. Liste des figures D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un mode de réalisation préférentiel, donné à titre de simple exemple illustratif et non limitatif, et des dessins annexés, parmi lesquels : - la figure 1 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la régulation des gènes adipocytaires ; la figure 2 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la libération d'acide gras non estérifiés (AGNE) par des adipocytes humains ; la figure 3 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la régulation des gènes dans les fibroblastes humains ; la figure 4 est un graphique représentant les effets de l'extrait de Jania rubens sur la production de fibres de collagène par des fibroblastes humains. 3. Description d'un mode de réalisation de l'invention Le principe général de l'invention repose sur un procédé cosmétique comprenant l'application cutanée d'une composition minceur et/ou fermeté. Plus précisément, cette composition comprend un principe actif permettant de stimuler l'expression de l'aquaporine 8. En effet, les inventeurs ont découvert que cette protéine impliquée dans l'homéostasie cellulaire et le maintien du pH et de la pression osmotique semble également avoir un rôle d'une part sur les fibroblastes en stimulant la synthèse de fibres de collagène, et d'autres part sur les adipocytes en inhibant leur différenciation et en stimulant la lipolyse. Ainsi, un procédé selon l'invention permet non seulement de favoriser la dégradation de la cellulite, mais il permet également de limiter sa reformation tout en redonnant à la peau souplesse et fermeté. Par conséquent, le procédé selon l'invention permet de combattre tous les signes de la cellulite et de fournir des résultats plus durables que ceux obtenus par l'utilisation de compositions minceur actuelles. 3.1. Stimulation de l'expression de l'aquaporine 8 par un extrait de Jania Rubens sur des adipocytes et des fibroblastes humains Un extrait de Jania rubens a été préparé selon tout méthode bien connue de l'homme de l'art. Plus précisément, la culture de Jania rubens est réalisée en photobioréacteur clos dans de l'eau de mer enrichie en éléments nutritifs avec apports d'éléments nutritifs asservis à leur consommation. Les photobioréacteurs sont éclairés de manière artificielle. Toutes les cultures sont issues d'une lignée isolée et purifiée à partir d'un fragment d'algue d' lmm. En fin de culture, les algues sont récoltées par filtration et rincées à l'eau déminéralisée. Les algues sont ensuite séchées. Ces algues sèches sont extraites à température ambiante dans de l'eau déminéralisée légèrement acidifié à l'acide sulfurique dilué pour hydrolyser les parois calcifiées de l'algue. Ensuite, l'extrait aqueux obtenu est clarifié sur filtre 5p.m. Un ajout de glycérine (50% en masse) est réalisé. Enfin, l'extrait est stérilisé par filtration 0,2 lm et conditionné en ligne sous hotte à flux laminaire. Des adipocytes humains ont été préparés à partir de cellules souches mésenchymateuses humaines (Lonza) utilisées au quatrième passage et différenciées pendant 21 jours par l'ajout d'un mélange d'inducteurs connus pour induire la différenciation des cellules souches en adipocytes matures. Les cellules ont d'abord été cultivées pendant 4 jours dans du milieu de différenciation (Lonza) afin de démarrer la différenciation. Ensuite, le milieu de culture a été remplacé soit par du milieu de différenciation normal (lot non traité), soit par du milieu de différenciation normal additionné d'un extrait de Jania rubens (concentration finale à 0.1%). Les fibroblastes de derme humain ont été purifiés à partir d'explants de peau. Ils ont été ensemencés dans des plaques de culture avec un milieu de culture additionné de glutamine et de sérum de veau foetal (SVF) à une densité. Les cultures sont réalisées dans une atmosphère à 37°C, 5% CO2 et saturée en humidité. Les cellules ont d'abord été cultivées pendant 4 jours dans du milieu normal afin de laisser les cellules s'adapter. Ensuite, le milieu de culture a été remplacé soit par du milieu de culture normal (lot non traité), soit par du milieu de culture normal additionné d'un extrait de Jania rubens (concentration finale à 0.1%). Les cellules ont été cultivées pendant 24 heures supplémentaires. Au terme de ce délai, les cellules de chaque lot sont traitées en vue d'un marquage en immunofluorescence avec l'anticorps anti-aquaporine 8. Les différentes étapes du marquage sont les suivantes : rinçage des cellules dans une solution saline phosphatée (PBS), - fixation des cellules au formaldéhyde (1h30 à +4°C), rinçages avec du PBS, perméabilisation des cellules avec du Triton 0,1X (10 minutes à température ambiante), blocage des sites non spécifiques avec une solution de PBS/BSA 1% (v/p), - ajout de la solution d'anticorps primaire anti-aquaporine 8 (0,01% volumique), - incubation pendant une nuit à +4°C, - lavages au PBS, - ajout de la solution d'anticorps secondaire couplé au fluorochrome Alexa 488 (0,01% volumique), et du DAPI (0,01% volumique) pendant une heure à température ambiante, - lavages au PBS pour éliminer la fluorescence non spécifique. Les lames sont montées avec la solution de montage Fluoromont (Sigma) et observées après une nuit à +4°C. Une observation microscopique est réalisée à l'aide d'un microscope (NIKON TE300 Eclipse) équipé d'une caméra (DS CAMERA HEAD DS-2Mv, NIKON). Un cliché par puits a été pris et une évaluation semiquantitative du marquage de chaque condition a été faite grâce au logiciel Nikon-NIS Elements BR 3.00 SP4. Cette évaluation prend en compte l'intensité de la coloration exprimée en pixels, évaluée par le logiciel d'analyse d'images et rapportée à la surface des cellules. Les intensités sont exprimées en valeur absolue et sans valeur spécifique. Les résultats ont démontré que Jania rubens augmente l'expression d'AQP8 de 58% dans les fibroblastes et de 50% dans les adipocytes par rapport aux lots non traités. 3.2. Effets de l'activation de l'aquaporine 8 par Jania rubens sur la différenciation d'adipocytes humains. L'objectif de l'étude est d'évaluer l'effet de l'extrait aqueux de Jania Rubens sur la lipolyse et la différenciation d'adipocytes humains.Preferably, said Jania rubens extract is an aqueous or hydroglyceric extract, which facilitates its incorporation into the formulation of a cosmetic composition intended to be applied to the skin. In an advantageous embodiment, the composition according to the invention is in a form chosen from a gel, a solution, a cream, an ointment, a milk, a butter, an oil-in-water emulsion, a water-in-oil emulsion, a triple emulsion. These formulations and textures are simple to produce, and are compatible with topical application. Preferably, the composition is in the form of a gel. The application in the form of a gel makes it possible in particular to administer the composition on important surfaces of the skin, such as the legs and the belly, while providing a pleasant sensation of freshness. In another advantageous embodiment, the composition may be in the form of a cream or a milk. The fluid and creamy texture of the cream or milk also allows the administration on a large surface of the skin, while bringing a sensation of softness to the user. Advantageously, the composition according to the invention further comprises at least one additive chosen from perfumes, dyes, preservatives, essential oils of plants, plant extracts, fruits or algae. 2. List of Figures Other features and advantages of the invention will appear more clearly on reading the following description of a preferred embodiment, given as a simple illustrative and non-limiting example, and the accompanying drawings, among which: - Figure 1 is a graph showing the effects of the Jania rubens extract on the regulation of adipocyte genes; Figure 2 is a graph showing the effects of Jania rubens extract on the release of non-esterified fatty acids (EAFA) by human adipocytes; Figure 3 is a graph showing the effects of Jania rubens extract on gene regulation in human fibroblasts; Figure 4 is a graph showing the effects of Jania rubens extract on the production of collagen fibers by human fibroblasts. 3. DESCRIPTION OF AN EMBODIMENT OF THE INVENTION The general principle of the invention rests on a cosmetic process comprising the cutaneous application of a slimming and / or firmness composition. More specifically, this composition comprises an active principle which makes it possible to stimulate the expression of aquaporin 8. In fact, the inventors have discovered that this protein involved in cellular homeostasis and the maintenance of pH and osmotic pressure also seems to have a role on the one hand on fibroblasts by stimulating the synthesis of collagen fibers, and on the other hand on adipocytes by inhibiting their differentiation and by stimulating lipolysis. Thus, a method according to the invention not only promotes the degradation of cellulite, but it also limits its reformation while giving the skin suppleness and firmness. Therefore, the method according to the invention makes it possible to combat all the signs of cellulite and to provide more durable results than those obtained by the use of current slimming compositions. 3.1. Stimulation of Expression of Aquaporin 8 by an Extract of Jania Rubens on Human Adipocytes and Fibroblasts An extract of Jania rubens was prepared according to any method well known to those skilled in the art. Specifically, Jania rubens is grown as a closed photobioreactor in nutrient-enriched seawater with nutrient intakes for consumption. Photobioreactors are artificially illuminated. All the cultures come from an isolated line and purified from a fragment of lmm algae. At the end of the culture, the algae are harvested by filtration and rinsed with demineralised water. The algae are then dried. These dry algae are extracted at room temperature in deionized water slightly acidified with dilute sulfuric acid to hydrolyze the calcified walls of the seaweed. Then, the aqueous extract obtained is clarified on a 5 μm filter. An addition of glycerin (50% by weight) is achieved. Finally, the extract is sterilized by filtration 0.2 lm and packaged in line under a laminar flow hood. Human adipocytes were prepared from human mesenchymal stem cells (Lonza) used in the fourth passage and differentiated for 21 days by the addition of a mixture of inducers known to induce the differentiation of stem cells into mature adipocytes. The cells were first cultured for 4 days in differentiation medium (Lonza) in order to start the differentiation. Then, the culture medium was replaced either by normal differentiation medium (untreated batch) or by normal differentiation medium supplemented with an extract of Jania rubens (final concentration 0.1%). Human dermis fibroblasts were purified from skin explants. They were inoculated into culture plates with a culture medium supplemented with glutamine and fetal calf serum (FCS) at a density. The cultures are carried out in an atmosphere at 37 ° C., 5% CO 2 and saturated with moisture. The cells were first cultured for 4 days in normal medium to allow the cells to adapt. Then, the culture medium was replaced either with normal culture medium (untreated batch) or with normal culture medium supplemented with an extract of Jania rubens (final concentration at 0.1%). Cells were cultured for an additional 24 hours. At the end of this period, the cells of each batch are treated for immunofluorescence staining with the anti-aquaporin 8 antibody. The various labeling steps are as follows: rinsing the cells in a phosphate-buffered saline solution (PBS) - fixation of the cells with formaldehyde (1 h 30 at + 4 ° C.), rinsing with PBS, permeabilization of the cells with 0.1 × Triton (10 minutes at room temperature), blocking of non-specific sites with a solution of PBS / BSA 1% (v / p), - addition of the anti-aquaporin 8 primary antibody solution (0.01% by volume), - incubation overnight at + 4 ° C., - PBS washes, - addition of the solution secondary antibody coupled to fluorochrome Alexa 488 (0.01% by volume), and DAPI (0.01% by volume) for one hour at room temperature, - washings with PBS to eliminate nonspecific fluorescence. The slides are mounted with Fluoromont mounting solution (Sigma) and observed overnight at + 4 ° C. A microscopic observation is made using a microscope (NIKON TE300 Eclipse) equipped with a camera (DS CAMERA HEAD DS-2Mv, NIKON). One snapshot per well was taken and a semiquantitative assessment of each condition was made using the Nikon-NIS Elements BR 3.00 SP4 software. This evaluation takes into account the intensity of the coloration expressed in pixels, evaluated by the image analysis software and reported on the surface of the cells. The intensities are expressed in absolute value and without specific value. The results demonstrated that Jania rubens increased AQP8 expression by 58% in fibroblasts and by 50% in adipocytes compared to untreated lots. 3.2. Effects of activation of aquaporin 8 by Jania rubens on the differentiation of human adipocytes. The aim of the study is to evaluate the effect of the Jania Rubens aqueous extract on the lipolysis and differentiation of human adipocytes.
Les cellules utilisées sont des adipocytes humains différenciés à partir de cellules souches mésenchymateuses humaines (Lonza) utilisées au cinquième passage. Les cellules souches mésenchymateuses sont incubées dans du milieu de culture (Lonza) puis stimulées pendant 21 jours par un mélange d'inducteurs pour induire la différenciation des cellules souches en adipocytes matures. Au terme de ces 21 jours, le milieu est remplacé par du milieu de culture pour adipocytes contenant ou non l'extrait de Jania rubens à la concentration finale de 1%. Les adipocytes sont ainsi incubés pendant 24 heures, à 37°C. Les cellules sont ensuite récupérées pour mesurer le niveau d'expression des gènes et évaluer leur régulation sous l'influence de l'extrait aqueux de Jania rubens. L'extraction des ARN messager totaux et leur rétro-transcription en ADN complémentaire a été effectuée selon toute méthode bien connue de l'homme de l'art et notamment en suivant les protocoles fournis par les kits Qiagen. L'analyse de l'expression des gènes a été réalisée en utilisant des puces à ADN standard, dédiées à la recherche et adaptées au screening. Ces puces à ADN ont été réalisées sur support Nylon, et portent des sondes nucléiques spécifiques des marqueurs d'intérêt (Piezorray, PerkinElmer). Les résultats obtenus sont automatiquement corrigés du bruit de fond moyen présent sur chaque puce et des différences d'intensité de marquage des différentes sondes utilisées. Les niveaux d'expression des gènes sont également corrigés par l'expression des gènes ménagers (ARN18S) dont l'expression est stable, quel que soit le traitement subi par la cellule. Cette correction permet d'éliminer le biais lié à la quantité de cellules utilisées ou de matériel génétique déposé sur la puce. Enfin, les niveaux d'expression relatifs de chaque gène testé sont exprimés comme suit : Niveau d'expression d'un gène X (%) = (Expression du gène X dans les cellules traitées/ Expression du gène X dans les cellules non traitées) x 100. Le traitement des adipocytes a stimulé l'expression de nombreux gènes impliqués dans : la synthèse des acides gras : notamment des enzymes comme acetyl-CoA synthétase (ACAS), acetyl-CoA acétyltransférase (ACAT), acyl-CoA déshydrogénase (ACADS), diacylglycerol acyltransferase 2 (DGAT2), Fatty acid synthase (FAS), fatty acid transporter (FAT), la lipoprotéine lipase (LPL), l'adipose triglyceride lipase (ATGL), la long-chain-fatty-acid-CoA ligase 1 (FACL1) ; la synthèse des protéines liant les acides gras comme Acyl-CoA binding protein (DBI), adipocyte fatty acid-binding protein (FABP4) ; et la synthèse des protéines impliquées dans la différenciation des adipocytes comme l'adipophiline (ADFP), l'adiponectine (APN), la protéine adipose specific 2 (APM2) et l'aquaporine 7 (AQP7). Le graphique de la figure 1 démontre que l'extrait aqueux de Jania rubens, stimulant l'expression de l'aquaporine 8, permet notamment de stimuler de 30% par rapport au lot non traité l'expression du gène de l'adiponectine qui contrôle le métabolisme du glucose et des lipides et lutte également contre le stress oxydant. On constate également une surexpression de 39% du gène de l'aquaglycéroporine 7, responsable de la sécrétion et de la prise en charge du glycérol dans les adipocytes, évitant ainsi sa transformation en acides gras. Par ailleurs, le gène de l'adipophiline est sous exprimé dans les adipocytes traités par Jania rubens par rapport aux cellules non traitées. Or, l'adipophiline bloque l'accès des lipases aux gouttelettes lipidiques. Ainsi, la lipolyse est favorisée. De même, un traitement à Jania rubens permet de limiter l'expression de l'enzyme de la synthèse des acides gras (FAS). 3.3. Effets de l'activation de l'aquaporine 8 par Jania rubens sur la lipolyse dans les adipocytes humains. L'impact sur la lipolyse a également été quantifié par dosage des acides gras non estérifiés dans le milieu de culture d'adipocytes humains cultivés ou non en présence d'un extrait de Jania rubens. Les adipocytes humains ont été isolés à partir de tissu adipeux d'un donneur de sexe féminin, âgé de 58 ans. Le traitement a été effectué immédiatement après réception. Les fragments de tissus adipeux sont incubés pendant 30 minutes à 37°C en présence de collagénase (Sigma C6885), les adipocytes isolés sont lavés avec du tampon PB S pour obtenir une suspension d'adipocytes. Différentes conditions ont été testées : un lot non traité comme témoin négatif, un lot traité par la caféine comme témoin positif de la lipolyse à la concentration de 10-3 mol/L (soit 0,2%) ; un lot traité par l'extrait de Jania rubens à 0,5% (v /v) ; et un lot traité par l'extrait de Jania rubens à 1% (v Iv). Un mélange est préparé avec 440 ul de milieu d'essai, 100 ul de suspension d'adipocytes et 60 ul de composition testée (solutions 10x). Les mélanges sont incubés à 37°C, sous agitation, pendant 2 heures. Puis, les milieux de culture sont prélevés et les AGNE sont dosés dans des fractions de 5 ul de milieu sous- adipocytes, après centrifugation. Le dosage a été réalisé à l'aide d'un kit Wako NEFA-HR (2) selon les directives du fournisseur. Dans ces conditions expérimentales, la lipolyse basale était moyenne, soit 196 d'AGNE libérés en 2 heures. Les résultats sont présentés sur le graphique de la figure 2. Comme on peut l'observer, le traitement par la caféine a stimulé la lipolyse de 57% ce qui était attendu et valide l'expérience. Dans ces conditions expérimentales, l'extrait de Jania rubens testé à 0,5% et 1% a significativement stimulé la lipolyse basale de respectivement +63% et +62%. Par conséquent, une composition comprenant un principe actif permettant de stimuler l'expression du gène de l'aquaporine 8 permet non seulement de différencier les adipocytes mais également de stimuler la lipolyse. 3.4. Effets de Jania rubens sur les fibroblastes. Cette expérience a pour objectif d'étudier l'impact que l'extrait de Jania rubens à la concentration finale de 0,1% a sur les fibroblastes.The cells used are human adipocytes differentiated from human mesenchymal stem cells (Lonza) used in the fifth pass. The mesenchymal stem cells are incubated in culture medium (Lonza) and then stimulated for 21 days by a mixture of inducers to induce the differentiation of the stem cells into mature adipocytes. At the end of these 21 days, the medium is replaced by culture medium for adipocytes containing or not the extract of Jania rubens at the final concentration of 1%. The adipocytes are thus incubated for 24 hours at 37 ° C. The cells are then recovered to measure the level of expression of the genes and evaluate their regulation under the influence of the aqueous extract of Jania rubens. Extraction of the total messenger RNAs and their retro-transcription into complementary DNA was carried out according to any method well known to those skilled in the art and in particular by following the protocols provided by the Qiagen kits. The analysis of gene expression was performed using standard DNA microarrays, dedicated to research and adapted to screening. These DNA chips were made on nylon support, and carry specific nucleic probes markers of interest (Piezorray, PerkinElmer). The results obtained are automatically corrected for the average background noise present on each chip and differences in marking intensity of the different probes used. Gene expression levels are also corrected by the expression of housekeeping genes (ARN18S) whose expression is stable, regardless of the treatment undergone by the cell. This correction eliminates the bias related to the amount of cells used or genetic material deposited on the chip. Finally, the relative expression levels of each gene tested are expressed as follows: Level of expression of an X gene (%) = (Expression of the X gene in the treated cells / Expression of the X gene in the untreated cells) x 100. The treatment of adipocytes has stimulated the expression of many genes involved in: the synthesis of fatty acids: in particular enzymes such as acetyl-CoA synthetase (ACAS), acetyl-CoA acetyltransferase (ACAT), acyl-CoA dehydrogenase (ACADS) ), diacylglycerol acyltransferase 2 (DGAT2), fatty acid synthase (FAS), fatty acid transporter (FAT), lipoprotein lipase (LPL), adipose triglyceride lipase (ATGL), long-chain-fatty-acid-CoA ligase 1 (FACL1); the synthesis of fatty acid-binding proteins such as Acyl-CoA binding protein (DBI), adipocyte fatty acid-binding protein (FABP4); and the synthesis of proteins involved in the differentiation of adipocytes such as adipophilin (ADFP), adiponectin (APN), protein adipose specific 2 (APM2) and aquaporin 7 (AQP7). The graph in FIG. 1 demonstrates that the aqueous extract of Jania rubens, stimulating the expression of aquaporin 8, makes it possible in particular to stimulate the expression of the adiponectin gene which controls the metabolism of glucose and lipids and also fight against oxidative stress. There is also a 39% overexpression of the gene of aquaglyceroporin 7, responsible for the secretion and the management of glycerol in the adipocytes, thus avoiding its transformation into fatty acids. Furthermore, the adipophilin gene is under expressed in adipocytes treated with Jania rubens compared to untreated cells. However, adipophilin blocks the access of lipases to lipid droplets. Thus, lipolysis is favored. Similarly, treatment with Jania rubens limits the expression of the enzyme fatty acid synthesis (FAS). 3.3. Effects of activation of aquaporin 8 by Jania rubens on lipolysis in human adipocytes. The impact on lipolysis was also quantified by assaying the non-esterified fatty acids in the culture medium of human adipocytes cultured or not in the presence of an extract of Jania rubens. Human adipocytes were isolated from adipose tissue from a 58-year-old female donor. The treatment was carried out immediately after reception. The adipose tissue fragments are incubated for 30 minutes at 37 ° C in the presence of collagenase (Sigma C6885), the isolated adipocytes are washed with PB S buffer to obtain a suspension of adipocytes. Different conditions were tested: an untreated batch as a negative control, a batch treated with caffeine as a positive control of lipolysis at a concentration of 10-3 mol / L (ie 0.2%); a batch treated with the extract of Jania rubens at 0.5% (v / v); and a batch treated with Jania rubens extract at 1% (v Iv). A mixture was prepared with 440 Pl of test medium, 100 Pl of adipocyte suspension, and 60 Pl of test composition (10x solutions). The mixtures are incubated at 37 ° C. with stirring for 2 hours. Then, the culture media are removed and the NFAs are assayed in 5 μl sub-adipocyte media fractions after centrifugation. The assay was performed using a Wako NEFA-HR kit (2) according to the supplier's instructions. Under these experimental conditions, the basal lipolysis was average, ie 196 of AGNE released in 2 hours. The results are shown in the graph of Figure 2. As can be seen, the caffeine treatment stimulated lipolysis by 57% which was expected and validates the experiment. Under these experimental conditions, the extract of Jania rubens tested at 0.5% and 1% significantly stimulated basal lipolysis by respectively + 63% and + 62%. Consequently, a composition comprising an active ingredient that makes it possible to stimulate the expression of the aquaporin 8 gene makes it possible not only to differentiate adipocytes but also to stimulate lipolysis. 3.4. Effects of Jania rubens on fibroblasts. This experiment aims to study the impact that the Jania rubens extract at the final concentration of 0.1% on fibroblasts.
Les fibroblastes de derme humain ont été purifiés à partir d' explants de peau. Ils ont été ensemencés dans des plaques de culture avec un milieu de culture additionné de glutamine et de sérum de veau foetal (SVF). Les cultures sont réalisées dans une atmosphère à 37°C, 5% CO2 et saturée en humidité. Les fibroblastes sont ainsi incubés pendant 24 heures, à 37°C. Les cellules sont ensuite récupérées pour mesurer le niveau d'expression des gènes et évaluer leur régulation sous l'influence de l'extrait aqueux de Jania rubens. L'extraction des ARN messager totaux et leur rétro-transcription en ADN complémentaire a été effectuée selon toute méthode bien connue de l'homme de l'art et notamment en suivant les protocoles fournis par les kits Qiagen. L'analyse de l'expression des gènes a été réalisée en utilisant des puces à ADN standard, dédiées à la recherche et adaptées au screening. Ces puces à ADN ont été réalisées sur support Nylon, et portent des sondes nucléiques spécifiques des marqueurs d'intérêt (Piezorray, PerkinElmer).Human dermal fibroblasts were purified from skin explants. They were inoculated into culture plates with a culture medium supplemented with glutamine and fetal calf serum (FCS). The cultures are carried out in an atmosphere at 37 ° C., 5% CO 2 and saturated with moisture. The fibroblasts are thus incubated for 24 hours at 37 ° C. The cells are then recovered to measure the level of expression of the genes and evaluate their regulation under the influence of the aqueous extract of Jania rubens. Extraction of the total messenger RNAs and their retro-transcription into complementary DNA was carried out according to any method well known to those skilled in the art and in particular by following the protocols provided by the Qiagen kits. The analysis of gene expression was performed using standard DNA microarrays, dedicated to research and adapted to screening. These DNA chips were made on nylon support, and carry specific nucleic probes markers of interest (Piezorray, PerkinElmer).
Les résultats obtenus sont automatiquement corrigés du bruit de fond moyen présent sur chaque puce et des différences d'intensité de marquage des différentes sondes utilisées. Les niveaux d'expression des gènes sont également corrigés par l'expression des gènes ménagers (ARN18S) dont l'expression est stable, quel que soit le traitement subi par la cellule. Cette correction permet d'éliminer le biais lié à la quantité de cellules utilisées ou de matériel génétique déposé sur la puce. Enfin, les niveaux d'expression relatifs de chaque gène testé sont exprimés comme suit : Niveau d'expression d'un gène X (%) = (Expression du gène X dans les cellules traitées/ Expression du gène X dans les cellules non traitées) x 100. Les résultats sont présentés à la figure 3. Comme on peut le constater, le traitement des fibroblastes avec l'extrait de Jania rubens à 0,1% a principalement induit une augmentation d'expression de gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire (MEC) tels que les collagènes COL4A1 et COL7A1, des protéines d'adhésion telles que le récepteur à la fibronectine (ITGA5), des gènes impliqués dans la synthèse du collagène tels que la hyaluronan synthase (HAS2), la lysyl hydroxylase (LH1) et la Prolyl hydroxylase (P4HA2) ainsi qu'un gène impliqué dans la croissance des fibroblastes : le FGF2. Le traitement des fibroblastes avec l'extrait de Jania rubens à 0,1% stimule également la synthèse de lamine A, impliquée dans la maintenance de la cellule ainsi que dans sa différenciation. 3.5. Effets de Jania rubens sur la production de fibres de collagènes par les fibroblastes humains. Des fibroblastes de derme humain, tel qu'obtenu ci-dessus, ont été ensemencé à une densité de 180 000 cellules/ puits dans des plaques de culture et cultivés dans du milieu supplémenté en sérum de veau foetal (SVF) à 37°, 5% CO2. Les conditions expérimentales sont les suivantes : le milieu de culture des fibroblastes seul comme témoin négatif de l' expérience, le milieu de culture pour fibroblastes additionné de 20 1.1g/m1 de Vitamine C et 10 ng/ml de TGF -I3-1 comme témoin positif de l'expérience, le milieu de culture pour fibroblastes additionné de l'extrait aqueux de Jania rubens (concentration finale = 0,1% volumique), le milieu de culture pour fibroblastes additionné de l'extrait aqueux de Jania rubens (concentration finale = 0,5% volumique), - le milieu de culture pour fibroblastes additionné de l'extrait aqueux de Jania rubens (concentration finale = 1% volumique). La vitamine C (Sigma) combinée au facteur de croissance fibroblastique TGF-I31 (Sigma) ont un effet positif et prouvé sur la synthèse de fibres de collagène par les fibroblastes. Cette condition sert de témoin positif à l'expérience.The results obtained are automatically corrected for the average background noise present on each chip and differences in marking intensity of the different probes used. Gene expression levels are also corrected by the expression of housekeeping genes (ARN18S) whose expression is stable, regardless of the treatment undergone by the cell. This correction eliminates the bias related to the amount of cells used or genetic material deposited on the chip. Finally, the relative expression levels of each gene tested are expressed as follows: Level of expression of an X gene (%) = (Expression of the X gene in the treated cells / Expression of the X gene in the untreated cells) x 100. The results are shown in Figure 3. As can be seen, the treatment of fibroblasts with 0.1% Jania rubens extract mainly induced an increase in expression of genes encoding extracellular matrix (ECM) such as collagen COL4A1 and COL7A1, adhesion proteins such as the fibronectin receptor (ITGA5), genes involved in collagen synthesis such as hyaluronan synthase (HAS2), lysyl hydroxylase ( LH1) and Prolyl hydroxylase (P4HA2) as well as a gene involved in fibroblast growth: FGF2. The treatment of fibroblasts with the 0.1% Jania rubens extract also stimulates the synthesis of lamin A, involved in the maintenance of the cell as well as in its differentiation. 3.5. Effects of Jania rubens on the production of collagen fibers by human fibroblasts. Human dermal fibroblasts, as obtained above, were inoculated at a density of 180,000 cells / well in culture plates and cultured in medium supplemented with fetal calf serum (FCS) at 37 ° C. % CO2. The experimental conditions are as follows: the fibroblast culture medium alone as a negative control of the experiment, the fibroblast culture medium supplemented with 1.1 g / ml of vitamin C and 10 ng / ml of TGF-I3-1 as positive control of the experiment, the fibroblast culture medium supplemented with the aqueous extract of Jania rubens (final concentration = 0.1% by volume), the fibroblast culture medium supplemented with the aqueous extract of Jania rubens (concentration final = 0.5% by volume), - the fibroblast culture medium supplemented with the aqueous extract of Jania rubens (final concentration = 1% by volume). Vitamin C (Sigma) combined with TGF-I31 fibroblast growth factor (Sigma) has a positive and proven effect on fibroblast synthesis of collagen fibers. This condition serves as a positive witness to the experiment.
On constate, en référence à la figure 3, que le traitement par la vitamine C combinée au TGF-I31 augmente la synthèse de collagène par des fibroblastes humains par rapport aux fibroblastes en contact avec le milieu seul, comme attendu. L'exposition des fibroblastes au milieu de culture contenant l'extrait de Jania rubens à 0,1%, 0,5% et 1%, permet l'augmentation de la production de fibres de collagène de 24%, 30% et 52% respectivement. Il est donc évident que le traitement des fibroblastes par un extrait aqueux de Jania rubens permet de stimuler la synthèse de fibres de collagène par les fibroblastes de derme humain. 3.6. Exemple de composition cosmétique pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention.It can be seen, with reference to FIG. 3, that treatment with vitamin C combined with TGF-I31 increases collagen synthesis by human fibroblasts compared with fibroblasts in contact with the medium alone, as expected. Exposure of fibroblasts to the culture medium containing Jania rubens extract at 0.1%, 0.5% and 1%, allows the increase in collagen fiber production by 24%, 30% and 52% respectively. It is therefore obvious that the treatment of fibroblasts with an aqueous extract of Jania rubens makes it possible to stimulate the synthesis of collagen fibers by human dermal fibroblasts. 3.6. Example of a cosmetic composition for implementing the process according to the invention
On formule une composition amincissante et raffermissante incorporant de l'extrait aqueux de Jania rubens, selon la formulation indiquée dans le tableau 1 ci-dessous.A slimming and firming composition incorporating an aqueous extract of Jania rubens is formulated according to the formulation shown in Table 1 below.
Tableau 1 - Exemple d'une composition à visée minceur et/ou fermeté pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention. Ingrédients (Nomenclature INCI) Quantité (% massique) Eau/ Aqua 61,35 Propylène Glycol 5,00 Carbomer 0,30 Acrylates/C10-C30 Alkyl Acrylates crosspolymer 0,10 Ceteraryl Alcohol & Sodium cetearyl sulfate 5,00 Behenyl Alcohol 0,80 Caprylic / capric Triglycerides 10,00 Isohexadecane 14,00 Conservateurs 1,00 Triéthanolamine 0,45 Extrait aqueux de Jania rubens conservé avec 50% 2,00 de glycerine Une vingtaine de sujets féminins ayant de la cellulite sur les hanches et un indice de masse corporelle compris entre 23 et 27 ont chacune reçu deux compositions différentes: - une composition telle qu'indiquée au tableau 1 (groupe traité) ; et - une composition placebo dont la composition est identique à celle indiquée au tableau 1 si ce n'est qu'elle ne contient pas d'extrait de Jania rubens (groupe 15 placebo).Table 1 - Example of a composition for thinness and / or firmness for the implementation of the method according to the invention. Ingredients (INCI Nomenclature) Quantity (% by weight) Water / Aqua 61.35 Propylene Glycol 5.00 Carbomer 0.30 Acrylates / C10-C30 Alkyl Acrylates Crosspolymer 0.10 Ceteraryl Alcohol & Sodium cetearyl sulfate 5.00 Behenyl Alcohol 0.80 Caprylic / capric Triglycerides 10.00 Isohexadecane 14.00 Preservatives 1.00 Triethanolamine 0.45 Aqueous extract of Jania rubens preserved with 50% 2.00 glycerin About twenty female subjects with cellulite on the hips and a mass index 23 to 27 have each received two different compositions: a composition as indicated in Table 1 (treated group); and a placebo composition whose composition is identical to that indicated in Table 1, except that it contains no Jania rubens extract (placebo group).
Ces femmes ont appliqué deux fois par jour pendant 56 jours la composition selon l'invention sur une de leurs cuisses et la composition placébo sur l'autre cuisse, ceci afin d'éliminer les biais interindividuels qui auraient pu fausser les observations. Différents paramètres ont été évalués lors de cet essai au jour 0, au 28ème jour et au 56ème jour. Ces paramètres sont notamment la présence visuelle de cellulite, la mesure des jonctions dermo-épidermiques et de la densité dermique par DermascanTM, un questionnaire d'auto-évaluation et la prise de photographies. Le DermaScan C® 2D permet de réaliser des mesures directement in vivo, à l'aide d'un échographe haute fréquence. Le principe de la mesure est celui de l'échographie: un faisceau ultrasonore est émis par une céramique piézo-électrique. Ce faisceau est partiellement réfléchi par les interfaces séparant deux milieux d'impédance ultrasonore différente. L'échographe utilisé est muni d'une sonde de 20 MHz. La sonde est appliquée directement sur la peau. Un gel de contact permet une diffusion homogène du signal. Cette méthode permet une visualisation bidimensionnelle de la peau au niveau de l'épiderme et du derme avec une pénétration de 13 mm. Lors de la prise d'image, le tissu conjonctif, échogène, apparaît en couleur (de jaune à vert) ; les inclusions graisseuses, non-échogènes, apparaissent en noir. Une diminution de la longueur linéaire (en mm) de la jonction dermo-hypodermique traduit l'effet anti-cellulite d'un produit. Le rapport de la surface occupée par les inclusions graisseuses, à la surface totale analysée, définit la proportion de graisse présente (en %). Une diminution de ce rapport traduit une diminution des réserves de graisse sous cutanées, soit un effet désinfiltrant, une augmentation de la densité du derme. 74% des femmes ont noté une diminution de leur cellulite de 25% dès le 28ème jour et encore de 28% au 56ème jour au niveau des zones traitées par la composition selon l'invention par rapport aux zones traitées par le placébo. La mesure de la présence d'inclusions lipidiques par DermascanTM a également permis de révéler une diminution moyenne de 15% après le 56ème jour d'application, et jusqu'à 75% pour certaines femmes, grâce à l'utilisation de la composition comprenant un extrait de Jania rubens.These women applied the composition according to the invention on one of their thighs and the placebo composition on the other thigh twice a day for 56 days, in order to eliminate the interindividual biases which could have distorted the observations. Different parameters were evaluated during this test at day 0, day 28 and day 56. These parameters include the visual presence of cellulite, dermo-epidermal junction measurement and dermal density by DermascanTM, a self-assessment questionnaire and taking photographs. The DermaScan C® 2D allows measurements directly in vivo, using a high frequency ultrasound system. The principle of measurement is that of ultrasound: an ultrasonic beam is emitted by a piezoelectric ceramic. This beam is partially reflected by the interfaces separating two different ultrasound impedance media. The ultrasound system used is equipped with a 20 MHz probe. The probe is applied directly to the skin. A contact gel allows a homogeneous diffusion of the signal. This method allows a two-dimensional visualization of the skin at the level of the epidermis and the dermis with a penetration of 13 mm. When taking an image, the connective tissue, echoic, appears in color (from yellow to green); greasy, non-echogenic inclusions appear in black. A decrease in the linear length (in mm) of the dermo-hypodermic junction reflects the anti-cellulite effect of a product. The ratio of the area occupied by fat inclusions, to the total surface analyzed, defines the proportion of fat present (in%). A decrease in this ratio reflects a decrease in subcutaneous fat reserves, a disinfiltrating effect, an increase in the density of the dermis. 74% of the women noted a decrease of their cellulite of 25% from the 28th day and still 28% at the 56th day in the zones treated by the composition according to the invention compared to the areas treated with the placebo. The measurement of the presence of lipid inclusions by DermascanTM also revealed an average decrease of 15% after the 56th day of application, and up to 75% for some women, thanks to the use of the composition comprising a extract from Jania rubens.
La mesure de la longueur des jonctions dermo-épidermiques a démontré une diminution moyenne statistiquement significative (p<0,05) de 18% après le 56ème jour d'application pour les zones traitées par la composition comprenant un extrait de Jania rubens, ce qui se traduit par une peau moins relâchée et plus ferme.Measurement of the length of the dermo-epidermic junctions demonstrated a statistically significant (p <0.05) mean decrease of 18% after the 56th day of application for the zones treated with the composition comprising an extract of Jania rubens, which results in less lax and firmer skin.
Enfin l'évaluation de la densité du derme se traduit par une diminution du nombre de zones ne donnant pas de signal à l'échographie. Ces mesures ont démontré une diminution de 4% en moyenne du nombre de ces zones dès lors qu'elles sont traitées pendant 28 jours par la composition selon l'invention, et de 11% en moyenne à partir du 56ème jour (effet statistiquement significatif ; p<0,05).Finally, the evaluation of the density of the dermis results in a decrease in the number of zones that do not give a signal to ultrasound. These measurements have shown a decrease of 4% on average in the number of these zones as long as they are treated for 28 days by the composition according to the invention, and by an average of 11% from day 56 (statistically significant effect; p <0.05).
Par conséquent, un procédé comprenant une étape d'application d'une composition cosmétique comprenant un extrait de Jania rubens permet non seulement de diminuer la cellulite et d'en améliorer l'aspect mais également de raffermir les tissus et la peau.Therefore, a method comprising a step of applying a cosmetic composition comprising an extract of Jania rubens not only reduces cellulite and improves the appearance but also to firm tissue and skin.
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