FR2998178A1 - Utilisation d'un peptide derive de hmg-coa reductase pour apaiser la muqueuse buccale - Google Patents

Abstract

La présente invention se situe dans le domaine cosmétique, et plus particulièrement dans le domaine des soins et de l'hygiène de la cavité buccale. La présente invention concerne l'utilisation d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine pour protéger la muqueuse buccale des dommages causés par des agressions extérieures mécaniques et/ou chimiques. La présente invention concerne également l'utilisation d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine pour apaiser, et renforcer l'intégrité et la fonction barrière physique de la muqueuse buccale.

Description

UTILISATION D'UN PEPTIDE DERIVE DE HMG-COA REDUCTASE POUR APAISER LA MUQUEUSE BUCCALE La présente invention se situe dans le domaine cosmétique, et plus particulièrement dans le domaine des soins cosmétiques et de l'hygiène de la cavité buccale. La présente invention concerne l'utilisation d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine pour protéger la muqueuse buccale des dommages causés par des agressions extérieures mécaniques et/ou chimiques. La présente invention concerne également l'utilisation d'un peptide dérivé de la HMGCoA réductase humaine pour apaiser, protéger l'intégrité et la fonction barrière physique de la muqueuse buccale.

L'invention est également relative à l'utilisation dans une composition, d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine, en tant qu'agent actif activateur de l'expression des kératines 76, des lipides intracellulaires et des molécules des jonctions adhérentes intercellulaires.

Par la suite de la description on utilise indifféremment les termes « muqueuse buccale » et « muqueuse orale » pour se référer à l'épithélium de recouvrement de la cavité buccale. Les termes « cavité buccale » ou « cavité orale » selon l'invention englobent l'ensemble de la muqueuse orale, des glandes salivaires associées et des annexes kératiniques présentes dans la cavité buccale, en particulier les dents, les gencives, la langue, et le palais.

Toute la cavité buccale est revêtue d'une membrane muqueuse protectrice, la muqueuse buccale, qui contient de nombreux récepteurs sensoriels, notamment les récepteurs du goût de la langue. L'épithélium de la muqueuse buccale est de type pavimenteux stratifié (muqueuse buccale et de l'oesophage) et tend à se kératiniser au niveau des points de friction importante (tissu gingival et palatin). L'épithélium buccal repose sur un tissu collagène dense appelé chorion relié aux muscles sous jacents par un tissu de soutien sous muqueux, dans lequel se trouvent de nombreuses glandes salivaires accessoires, séreuses et muqueuses. La fonction première de la muqueuse buccale est de constituer une barrière entre l'environnement extérieur et le milieu intérieur pour protéger les tissus des dommages 35 mécaniques, de la pénétration des microorganismes et des matériaux toxiques. C'est la couche la plus externe de l'épithélium de la muqueuse orale qui assure cette fonction grâce à deux types de barrières: une barrière physique constituée par la muqueuse buccale, elle-même assurée grâce à la forte cohésion intercellulaire (desmosomes, jonctions adhérentes), et une barrière chimique formée par les sécrétions de la muqueuse orale (salive) qui permet de lutter contre les allergènes et les irritants et possède un rôle antibactérien. La barrière physique, est assurée par les acteurs protéiques, lipidiques et les interactions intercellulaires qui permettent de maintenir l'intégrité cellulaire de l'épithélium de la muqueuse buccale lors d'agressions extérieures mécaniques ou chimiques. Les kératines sont une famille de protéines présentes dans tous les épithéliums, qui forment les filaments intermédiaires et sont impliquées dans le maintien de l'intégrité cellulaire. Les profils d'expression des kératines dans les épithéliums stratifiés sont corrélés au programme de différenciation cellulaire. La kératine K76 est une kératine suprabasale qui apparait être spécifique à la muqueuse orale et gingivale (Bragulla et al. 2009). Les jonctions intercellulaires spécialisées participent aussi au maintien de l'intégrité de la barrière épithéliale. Les jonctions adhérentes sont des jonctions d'ancrage qui constituent des ceintures d'adhérence. Ce sont les composantes les plus apicales des jonctions épithéliales complexes et sont cruciales pour la formation et la cohésion des barrières épithéliales. Elles réunissent entre elles des cellules épithéliales adjacentes. Les jonctions jonctions adhérentes comprennent au moins quatre types de protéines transmembranaires : les Occludines, les Claudines, les molécules d'adhésion jonctionnelle et les Crumb (ou « Crb »). L'expression de la claudine-1 est pertubée dans différentes conditions de stress de la muqueuse buccale. La Claudine-1 est indispensable au maintien de l'intégrité de la barrière de l'épithélium gingival (Fujita et al., 2012). Les lipides intracellulaires, notamment les phospholipides, les sphingolipides, les acides gras et le cholestérol, sont des composants essentiels des membranes cellulaires et de la couche cornée des portions kératinisées de l'épithélium buccal et ils sont de ce fait également des composantes essentielles pour le maintien de l'intégrité des cellules. L'étape limitante de la synthèse du cholestérol, est la conversion du 3-hydroxy-3-methylglutarylCoenzyme A (HMG-CoA) en mévalonate. Cette étape est catalysée par une enzyme membranaire dénommée HMG-CoA-réductase (E.C. 1.1.1.34). Les données de séquençage du génome humain montrent qu'il existe au moins deux isoformes de HMG-CoA réductase, codées par un gène unique, localisé sur le chromosome 5 (Luskey et al., J Biol Chem., 1985 260(18), p.10271-7).

On entend par l'expression « agressions extérieures », les agressions que peut produire l'environnement de type physique et/ou mécanique. A titre d'exemple, on peut citer des agressions causées par exemple par des produits chimiques tels que le tabac, l'alcool, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les solvants, ou des agressions mécaniques, telles que les abrasions, le brossage. Ces agressions extérieures aboutissent à une altération de la fonction barrière qui se traduit par un inconfort cutané au niveau de la muqueuse orale, des phénomènes sensoriels désagréables, tels que des tiraillements ou des démangeaisons, voire des saignements, des fragilités excessives et des rougeurs.

Une bonne hygiène buccale permet d'éliminer les résidus alimentaires, les microorganismes et les composés irritants et inflammatoires de la muqueuse. Toutefois, de nombreux produits mis au point pour les soins et l'hygiène de la bouche et des dents, par exemple des dentifrices et des bains de bouche, contiennent des substances abrasives et des détergents. L'inconvénient de ces produits chimiques, par exemple du Sodium Lauryl Sulphate (SLS) ou de l'éthanol, est qu'ils produisent des irritations de la muqueuse buccale et altèrent ainsi la fonction barrière mécanique de l'épithélium buccal allant jusqu'à causer des ulcères (Moore et al., 2008 ; F. Koschier et al., 2011). Dans ce contexte, il est souhaitable de chercher à prévenir l'altération ou à rétablir la fonction barrière physique de la muqueuse buccale.

La présente invention a pour objectif de résoudre tout ou partie des inconvénients cités précédemment. Les inventeurs ont mis en évidence une activité protectrice de la fonction barrière physique de la muqueuse buccale, d'un peptide dérivé de l'enzyme 3-hydroxy3methyl-glutaryl Co-A réductase humaine (HMG-CoA réductase humaine), décrit dans la présente invention. Il a notamment été mis en évidence que ce peptide a une forte activité protectrice spécifique de la muqueuse buccale vis-à-vis des dommages causés par des stress de type chimique ou mécanique. Cette nouvelle utilisation de ce peptide, capable d'augmenter le taux d'expression de composés intracellulaires essentiels au maintien de la barrière physique et de l'intégrité des 30 cellules de la muqueuse orale permet ainsi d'ouvrir de nouvelles perspectives cosmétiques pour l'apaisement de la muqueuse buccale.

Selon un premier aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine pour protéger la muqueuse buccale des dommages causés par des agressions extérieures mécaniques et/ou chimiques. L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description. L'invention s'adresse aux mammifères en général, et plus particulièrement, aux êtres humains. Les inventeurs ont mis en évidence que le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention, lorsqu'il est appliqué sur la muqueuse buccale, a des propriétés apaisantes. Ces propriétés ont été démontrées par la mise en évidence que le peptide selon l'invention, lorsqu'il est appliqué sur la muqueuse buccale, protège cette dernière de divers agents irritants expérimentaux. L'expression « peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine» désigne tout fragment peptidique biologiquement actif dont la séquence en acides aminés est, 15 entièrement ou partiellement analogue ou homologue de la séquence peptidique de la HMGCoA réductase humaine. Préférentiellement, selon la présente invention, ledit peptide dérivé de la HMG-coA réductase, ou son dérivé biologiquement actif, est un peptide dont le nombre d'acides aminés est compris entre 4 et 15. 20 Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne l'utilisation du peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention pour protéger la fonction barrière physique de la muqueuse buccale. On entend par « renforcer la fonction barrière physique », que l'application sur la muqueuse saine du peptide selon l'invention ou d'une composition cosmétique le 25 comprenant permet d'augmenter le taux d'expression cellulaire des kératines 76, des lipides intracellulaires et des Claudines-1. Le peptide selon l'invention a une action localisée au niveau de l'épithélium de la muqueuse buccale et il permet de calmer les irritations de la muqueuse buccale provoquées par des stress de type mécaniques et/ou chimiques ou encore les inconforts. 30 Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne l'utilisation d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention pour apaiser la muqueuse buccale.

Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne l'utilisation d'un peptide selon l'invention pour maintenir l'intégrité et la morphologie des cellules de la muqueuse buccale. Selon des caractéristiques particulières, l'invention concerne l'utilisation d'un peptide bioactif selon l'invention pour stimuler l'expression de kératine, des lipides intracellulaires et des molécules des jonctions serrées intercellulaires. De manière préférée, l'invention concerne l'utilisation d'un peptide dérivé de la HMGCoA réductase humaine selon l'invention pour augmenter le taux d'expression cellulaire des kératines 76 et/ou des lipides intracellulaires et/ou des Claudines-1 intercellulaires.

Avantageusement le peptide selon l'invention permet de stimuler la production de kératine, des lipides intracellulaires et des molécules des jonctions adhérentes intercellulaires par les cellules de la muqueuse buccale, sans provoquer de réaction toxique ou allergique.

Selon une méthode particulièrement avantageuse de réalisation de l'invention, le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine possède une séquence de formule générale (I) R1-(AA)n-X1-Gly-Glu-Leu-Ser-X2-X3-(AA)p-R2 dans laquelle, X1 est l'alanine, la valine ou l'isoleucine, X2 est la leucine, l'isoleucine ou aucun acide aminé, X3 est la méthionine, la sérine, l'alanine ou aucun acide aminé, AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, R1 représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle, R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, 30 libre ou substitué par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi une chaîne alkyle de Cl à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de Cl à C4, ladite séquence de formule générale (I) pouvant comprendre des substitutions des acides aminés X1 à X3 par d'autres acides aminés chimiquement équivalents, Selon une méthode de réalisation de l'invention tout particulièrement préférée, le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine est de séquence : (SEQ ID n°1) Met-Ala-Gly-Glu-Leu-Ser-Leu-Met-Ala-Ala (SEQ ID n°2) Gly-Val-Gly-Glu-Leu-Ser-Ile-Ser-Ala (SEQ ID n°3) Ile-Gly-Glu-Leu-Ser-Leu-Ala-Ala (SEQ ID n°4) Ala-Gly-Glu-Leu-Ser (SEQ ID n°5) Ala-Gly-Glu-Leu-Ser -NH2 (SEQ ID n°6) Ile-Gly-Glu-Leu-Ser (SEQ ID n°7) Ile-Gly-Glu-Leu-Ser -NH2 Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide correspond à la séquence SEQ ID n°4. Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le peptide correspond à la 15 séquence SEQ ID n°5. L'invention concerne aussi des formes homologues de ces séquences. Le terme « homologue » désigne, selon l'invention, toute séquence peptidique identique à au moins 50%, ou de préférence au moins 80%, et encore plus préférentiellement à au moins 90% de ladite séquence peptidique, choisie parmi les séquences SEQ ID n° 1 à SEQ ID n° 7. Par 20 « séquence peptidique identique à au moins X% », on entend désigner un pourcentage d'identité entre les résidus d'acides aminés des deux séquences à comparer, obtenu après l'alignement optimal des deux séquences. L'alignement optimal est obtenu à l'aide d'algorithmes d'homologies locales tels que ceux utilisés par les logiciels informatiques BLAST P ou T BLAST N disponibles sur le site NCBI. 25 Le terme « homologue » peut également désigner un peptide qui diffère de la séquence d'un peptide de séquence SEQ ID n° 1 à SEQ ID n° 7 par la substitution d'acides aminés chimiquement équivalents, c'est-à-dire par la substitution d'un résidu par un autre possédant les mêmes caractéristiques. Ainsi, les substitutions classiques se font entre Ala, Val, Leu et Ile ; entre Ser et Thr ; entre les résidus acides Asp et Glu ; entre Asn et Gln ; et entre les 30 résidus basiques Lys et Arg ; ou entre les résidus aromatiques Phe et Tyr. Dans l'invention, le terme « acide aminé » se réfère ici à tout acide organique naturel ou non naturel ayant la formule : -NHR-CR-C(0)-O- où chaque -R est indépendamment sélectionné entre un hydrogène et un groupement alkyl ayant entre 1 et 12 atomes de carbone. Préférentiellement, au moins un groupement -R de chaque acide aminé est un hydrogène. Par le terme « alkyl », on entend ici une chaîne carbonée pouvant être linéaire ou ramifiée, substituée (mono- ou poly-) ou non-substituée ; saturée, mono-saturée (une double ou triple liaison dans la chaîne) ou poly-insaturée (deux ou plusieurs doubles liaisons, deux ou plusieurs triples liaisons, une ou plusieurs doubles liaisons et une ou plusieurs triples liaisons dans la chaîne) Le terme « peptide » désigne un enchaînement de deux ou plusieurs acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques ou par des liaisons peptidiques modifiées.

Par « peptide », il faut entendre le peptide naturel ou synthétique de l'invention tel que décrit ci-dessus, ou au moins l'un de ses fragments, qu'il soit obtenu par protéolyse ou de manière synthétique, ou encore tout peptide naturel ou synthétique dont la séquence est totalement ou partiellement constituée par la séquence du peptide précédemment décrit. De façon à améliorer la résistance à la dégradation, il peut être nécessaire d'utiliser une 15 forme protégée du peptide selon l'invention. La forme de protection doit évidemment être une forme biologiquement compatible et doit être compatible avec une utilisation dans le domaine des cosmétiques ou de la pharmacie. De nombreuses formes de protection biologiquement compatibles peuvent être envisagées. Elles sont bien connues de l'homme du métier comme, par exemple, l'acylation 20 ou l'acétylation de l'extrémité amino-terminale, ou l'amidation ou l'estérification de l'extrémité carboxy-terminale. Ainsi, l'invention concerne une composition telle que définie précédemment, caractérisée par le fait que le peptide de séquence SEQ ID n°1 à SEQ ID n°7 est sous forme protégée ou non. On peut utiliser une protection basée sur une substitution sur l'extrémité amino-terminale par un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un 25 groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle. De préférence, on utilise une protection basée sur l'amidation de la fonction hydroxyle de l'extrémité carboxy-terminale par un groupement NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de C1 à C4, ou l'estérification par un groupement alkyle. Il est également possible de protéger les deux extrémités du peptide. 30 Les dérivés de peptides concernent aussi les acides aminés et les peptides reliés entre eux par une liaison pseudo-peptidique. On entend par « liaison pseudo-peptidique », tous les types de liaisons susceptibles de remplacer les liaisons peptidiques « classiques ».

Dans le domaine des acides aminés, les molécules ont une géométrie telle, qu'elles peuvent théoriquement se présenter sous la forme d'isomères optiques différents. Il existe ainsi une conformation moléculaire de l'acide aminé (AA) qui dévie à droite le plan de polarisation de la lumière (conformation dextrogyre ou D-aa), et une conformation moléculaire de l'acide aminé (aa) qui dévie à gauche le plan de polarisation de la lumière (conformation lévogyre ou L-aa). Les acides aminés naturels sont toujours de conformation lévogyre, en conséquence, un peptide d'origine naturelle ne sera constitué que d'acides aminés de type L-aa. Cependant, la synthèse chimique en laboratoire permet de préparer des acides aminés ayant les deux conformations possibles. A partir de ce matériel de base, il est possible d'incorporer lors de la synthèse de peptide aussi bien des acides aminés sous forme d'isomères optiques dextrogyre que lévogyre. Ainsi, les acides aminés constituant le peptide selon l'invention peuvent être sous configuration L- et D- ; de manière préférentielle, les acides aminés sont sous forme L. Le peptide selon l'invention peut donc être sous forme L-, D- ou DL-.

Le peptide de formule générale (I) selon l'invention peut être obtenu soit par synthèse chimique classique (en phase solide ou en phase homogène liquide), soit par synthèse enzymatique (Kullman et al., J. Biol. Chem. 1980, 225, 8234), à partir d'acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés. Le peptide selon l'invention peut être d'origine naturelle ou synthétique.

Préférentiellement selon l'invention, le peptide est obtenu par synthèse chimique. Dans un mode de réalisation particulier, le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine est un extrait peptidique d'origine végétale ou de levure enrichi en peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention. Le peptide bioactif selon l'invention peut être obtenu par extraction de protéines d'origine végétale ou de levure, suivie d'une hydrolyse contrôlée qui libère des composés de nature peptidique, parmi lesquels se trouvent les peptides bioactifs. On peut citer, par exemple, les extraits enrichis en peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine décrits dans les demandes FR 2944526 et FR 2944446.

On entend par « extrait peptidique », un mélange de composés majoritairement représentés par des peptides ou des oligopeptides.

Le peptide selon l'invention est avantageusement solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement acceptables, tels que l'eau, le glycérol, l'éthanol, ou tout mélange de ces solvants. Le peptide dilué est ensuite stérilisé par ultrafiltration. Après cette étape de dilution, le peptide selon l'invention peut être encapsulé ou inclus dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique tels que les liposomes ou toute autre microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement adapté. Le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention peut être utilisé dans une composition cosmétique ou de soin de la cavité buccale. La composition peut comprendre une quantité d'agent actif nécessaire afin d'obtenir le résultat recherché, à savoir : protéger la muqueuse buccale des dommages causés par des agressions mécaniques ou chimiques. Selon un mode de réalisation avantageux, le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention est présent dans les compositions de l'invention à une concentration comprise entre 0,001 % et 5 % environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 % et 1 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Les compositions selon l'invention peuvent être appliquées par toute voie appropriée, 20 notamment orale ou topique sur la muqueuse buccale, et leurs formulations sont adaptées par l'homme du métier à leur application sur une surface de la cavité buccale, en particulier pour des compositions cosmétiques ou d'hygiène de la bouche. Dans des modes de réalisation particuliers, la composition selon l'invention peut être une solution liquide adaptée pour irriguer, rincer ou vaporiser ; un dentifrice tel qu'une 25 poudre, une pâte ou un gel pour les dents, un gel parodontal ; un liquide adapté à recouvrir la surface des dents (par exemple un liquide blanchissant) ; un chewing-gum ; un film ou une bande non soluble, soluble ou partiellement soluble (par exemple une bande blanchissante pour les dents) ; une composition encapsulable (par exemple une gélule) ; une lingette ; un implant, une solution de rinçage de la bouche ; une mousse : un fil dentaire ; 30 etc. . Ces compositions comprennent un milieu physiologiquement adapté selon l'invention, c'est-à-dire un milieu qui convient à une utilisation en contact avec la surface de la cavité buccale, sans risque par exemple de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité, ou encore de réponse allergique.

Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention comprend au moins un ingrédient humectant, un matériel abrasif, une base, et une quantité efficace d'un peptide selon l'invention. Pour certaines formes souhaitables conformes a l'invention, la composition orale peut être de nature solide ou se présenter sous forme de pâte, comme c'est le cas pour les poudres dentifrices, les comprimés dentifrices, les pâtes dentifrices ou les crèmes dentifrices. La base de telles préparations orales solides ou pâteuses contiennent une matière de polissage ou abrasif dentaire qui est compatible avec la composition. Des agents de polissage appropriés comprennent l'alumine hydratée, l'alumine calcinée, la silice, y compris la silice acide, neutre ou alcaline, un gel de silice hydratée, le phosphate dicalcique dihydrate, le metaphosphate de sodium ou de potassium, le phosphate tricalcique et autres phosphates, le carbonate de calcium, le silicate d'aluminium, les silicates de zirconium, le phosphate dicalcique anhydre, le pyrophosphate de calcium, l'orthophosphate de magnésium, le phosphate trimagnésique, le carbonate de calcium, l'alumine, l'alumine hydratée, le silicate d'aluminium, le silicate de zirconium, la silice, la bentonite et leurs mélanges, des matières plastiques telles qu'un polymethacrylate, la bentonite, et leurs mélanges. Des matières de polissage préférées comprennent l'alumine calcinée, l'alumine hydratée et un gel de silice hydratée. On utilise des ingrédients humectants, dans les compositions de la présente invention, pour prévenir le durcissement de la composition et son dessèchement lors de son exposition à l'air. Des exemples d'humectants sont les alcools polyhydriques tels que la glycérine, le sorbitol, le xylitol, ou les polyethyleneglycol de bas poids moléculaire. Les polyethyleneglycols utilisés comme humectants dans la présente invention ont un poids moléculaire moyen limite à 1000 kDa, par exemple d'environ 200-1000, de préférence environ 400-800, et mieux encore environ 550-650 kDa. Dans certains modes de réalisation de l'invention, un composé fournissant du fluor est présent dans la préparation orale. Ces composés peuvent être légèrement solubles dans l'eau ou complètement solubles dans l'eau. Ils sont caractérisés par leur aptitude à libérer des ions fluorure dans l'eau et par une absence pratique de réactivité avec les autres composes de la préparation orale. Parmi ces substances, on peut citer les fluorures minéraux, comme les sels solubles de métaux alcalins, de métaux alcalino-terreux et de métaux lourds, par exemple le fluorure de sodium, le fluorure de potassium, le fluorure d'ammonium, un fluorure de cuivre comme le fluorure cuivreux, le fluorure de zinc, un fluorure d'étain comme le fluorure stannique ou le chlorofluorure stanneux, le fluorure de baryum, le fluosilicate de sodium, le fluosilicate d'ammonium, le fluozirconate de sodium, le monofluophosphate de sodium, les mono- et di-fluophosphates d'aluminium et le pyrophosphate de sodium-calcium fluoré. On préfère utiliser les fluorures des métaux alcalins et de l'étain, comme le fluorure de sodium et le fluorure stanneux, le monofluophosphate de sodium et leurs mélanges. Optionnellement, les compositions décrites ici peuvent comprendre d'autres ingrédients facultatifs tels que des agents antitartres, des agents antiplaques, des polymères carboxylates anioniques, des ingrédients pour modifier la viscosité, des surfactants, des arômes, des pigments, des agents pour le traitement de la sécheresse buccale.

Dans des modes de réalisations particuliers, la composition orale selon l'invention comprend un ou plusieurs agents antitartre pour prévenir et/ou réduire la formation de calculs. Par exemple, le système antitartre peut inclure du tetrasodium pyrophosphate (TSPP) ou du sodium tripolyphosphate (STPP). Le phosphate et les sels de phosphate sont généralement utilisés sous la forme d'espèces cationiques solubles totalement ou partiellement neutralisée (par exemple potassium, sodium ou sels d'ammonium, ou une combinaison de ceux-ci). Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend une ou plusieurs sources d'ions stanneux acceptables oralement, utilisée pour, par exemple pour réduire la gingivite, la plaque dentaire, la formation de calculs ou la sensibilité des dents. Par exemple, le fluorure stanneux, et d'autres halides stanneux tels que le dihydrate de Chlorure stanneux, le pyrophosphate stanneux, des sels de carboxylate stanneux organiques tels que le formate, l'acétate, le gluconate, lactate, tartrate, oxalate, malonate et citrate, le glyoxide éthylène stanneux. Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend 25 une source d'ions Zinc acceptable oralement pour son utilisation comme antimicrobien, anticalculs et rafraichisseur d'haleine. La source d'ions Zinc comprend par exemple l'acétate, le gluconate, le citrate le glycinate, le sulfate, l'oxyde de Zinc. Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend un sialagogue acceptable oralement. Par sialagogue on entend un agent stimulant la production 30 de salive, utilisé pour réduire la sécheresse buccale. Les sialagogues adaptés comprennent les acides alimentaires tels que les acides citrique, malique, lactique, succinique, ascorbique, fumarique et tartrique.

Dans un autre mode de réalisations, la composition orale selon l'invention comprend un agent anti-plaque, par exemple, le cuivre, le magnésium ou le strontium stanneux ; les copolyols de dimethicone tels que le cétyl dimethicone copolyol; des enzymes telles que la papaïne, la glucoamylase et la glucose oxydase ; l'urée ; le lactate de calcium, les polyacrylates de strontium ; les agents chélateurs tels que les acides citriques ou tartriques et les sels de métaux alcalins. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des co-solvants acceptable oralement (éthanol, glycérol, alcool benzylique, humectant...), des épaississants, des diluants, des émulsionnants, des antioxydants, des colorants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des oligo-éléments, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales etc. Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. On utilise des agents tensioactifs organiques acceptable oralement, dans les compositions de la présente invention, pour obtenir une action prophylactique accrue, faciliter l'obtention d'une dispersion complète du peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention dans toute la cavité buccale et rendre les présentes compositions davantage acceptables du point de vue cosmétique. La substance tensioactive organique est de préférence de nature anionique, non ionique ou ampholytique et elle est de préférence utilisée comme substance détergente conférant des propriétés détersives et moussantes à la composition. Comme exemples convenables de substances tensioactives anioniques, on peut citer les monosulfates solubles dans l'eau des monoglycerides des acides gras supérieurs, comme le sel de sodium du monoglyceride monosulfate des acides gras hydrogènes de l'huile de noix de coco, les (alkyl supérieur)sulfates. comme le 1 aurylsul fate de sodium, les alkylarylsufonates comme le dodecylbenzenesulfonate de sodium, les al kyl s supérieurs sulfoacetates, les esters d'acides gras supérieurs du 1,2- dihydroxypropanesul fonate et les acyl amides aliphatiques supérieurs satures des composes aminoacides carboxyliques a chaine aliphatique courte comme ceux comportant 12 a 16 atomes de carbone dans les radicaux acide gras, alkyle ou acyle, et les substances analogues. Les amides dernièrement mentionnes sont par exemple la N-lauroylsarcosine et les sels de sodium, de potassium et d'ethanol amine de la Nlauroyl, N-myristoyl- ou Npalmitoylsarcosine qui doivent être essentiellement exempts de savon ou d'acide gras supérieur similaire. Des exemples de tensioactifs non ioniques solubles dans l'eau sont les produits de condensation de l'oxyde d'éthylène avec divers composes réactifs contenant de l'hydrogène, régissant avec l'oxyde d'éthylène et présentant de longues chaines hydrophobes (par exemple des chaines aliphatiques d 1 environ 12 a 20 atomes de carbone), ces produits de condensation ("ethoxameres") contenant des fractions polyoxyethylene hydrophiles et étant notamment des produits de condensation du poly(oxyde d'éthylène) avec les acides gras, les alcools gras, les amides gras, les polyalcools (par exemple le monostéarate de sorbitol) et le poly(oxyde de propylène). II est possible d'utiliser, un agent gélifiant non ionique (agent épaississant), y compris des gommes naturelles et synthétiques telles que l'hydroxyethylcellulose, l'hydroxymethylcellulose, la methylcellulose, etc. L'agent gélifiant préféré est l'hydroxyethyl-cellulose.

On peut aussi utiliser des sels de bicarbonates adaptés à leur utilisation sur la surface de la cavité buccale. Des sels de bicarbonate convenables sont par exemple le bicarbonate de sodium, de potassium ou d'ammonium. On peut aussi utiliser tout agent de sapidité convenable ou tout agent édulcorant approprie. Des agents de sapidité convenables sont par exemple les essences ou huiles essentielles, comme 1 essence de menthe verte, l'essence de menthe poivrée, l'essence de Wintergreen, l'essence de sassafras, l'essence de girofle, l'essence de sauge, l'essence d'eucalyptus, l'essence de marjolaine, l'essence de cannelle, l'essence de citron et l'essence d'orange, et le salicylate de méthyle. Des agents édulcorants convenables comprennent le saccharose, le lactose, le maltose, le sorbitol, le xylitol, le cyclamate de sodium, la perillartine, 1 'APM (ester méthylique de l'aspartylphenylalanine), la saccharine et analogues. Diverses autres substances peuvent être incorporées dans les préparations orales selon l'invention, par exemple des agents de blanchiment, des agents conservateurs, des silicones, des composes de la famille de la chlorophylle, et/ou des substances a base d'ammonium 30 comme l'urée, le phosphate diammonique et leurs mélanges. Ces adjuvants, lorsqu'ils sont présents, sont incorporés dans les préparations en des quantités qui ne perturbent pratiquement pas les propriétés et les caractéristiques désirées.

Il est bien entendu que le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec au moins un autre principe actif, dans une composition cosmétique, destinés à favoriser l'action du peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'invention, notamment, la prévention et/ou le traitement des désordres liés à la fonction barrière de la muqueuse buccale ou l'apaisement de la muqueuse buccale. On peut citer, de manière non limitative, des principes actifs peptidiques, par exemple le GP4GTM (FR 2 817 748, Ashland), le peptide CollaxylTM (FR 2 827 170, Ashland), le Peptide Vinci 01 Tm (FR 2 837 098, Ashland), le Peptide Vinci02TM (FR 2 841 781, Ashland), l'ATPeptideTM (FR 2 846 883, Ashland). On peut citer également, des extraits de végétaux, tels que l'extrait de lin (LipigénineTM, FR2956818, Ashland), l'extrait d'Artémia salina (FR 2 817 748, Ashland) ou encore l'extrait de levure. D'autres principes actifs adaptés comprennent des agents blanchissants, tels que le bioxyde de titane, des agents actifs parodontaux, des rafraîchisseurs de l'haleine, des agents de contrôle des odeurs. Il est possible d'utiliser également des ingrédients actifs sur la sensibilité des dents, par exemple la capsaïcine, l'eugénol, les sels de potassium ou de strontium. D'autres agents actifs utilisés sont, par exemple, des agents cicatrisants, apaisants, des agents anti-radicalaires, tels que le coenzyme Q10, les rétinoïdes, la vitamine D, la vitamine C, la vitamine B5, l'acide folique, la nicotinamide, la thiamine, la riboflavine, les bioflavonoïdes ou encore la pyridoxine. On peut citer en outre, des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques, des agents hydratants, antibactériens, antifongiques, anti-inflammatoires, anesthésiques, des agents modulants la différenciation, la pigmentation ou la dépigmentation dentaire ou cutanée, etc.

Selon un troisième aspect, l'invention consiste encore en un procédé de traitement cosmétique destiné à apaiser la muqueuse buccale, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la muqueuse buccale à traiter le peptide bioactif dérivé de la HMG-CoA selon l'invention ou une composition le comprenant.

Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples et des figures donnés à titre illustratif et non limitatif.

La Figure 1 montre sous la forme d'un histogramme le taux d'expression intracellulaire de la kératine K76, des lipides intracellulaires totaux et neutres, et de la claudine-1 sur les HOK traités avec le peptide de séquence ID n°4 à 0,25%, ou 0,5%, en comparaison avec les cellules contrôle non traitées. La Figure 2 montre sous la forme d'un histogramme le rapport de cellules HOK endommagées/cellules totales, lorsque les cellules sont prétraitées ou non par le peptide de séquence ID n°4 (0,25% ou 0,5%) puis soumises à un stress par un détergent (SDS 0,05%) ou non soumises au stress (contrôle).

La Figure 3 montre sous la forme d'un histogramme le taux d'IL-la relarguée dans le milieu de culture des épithéliums oraux reconstruits lorsque les cellules sont prétraitées ou non par le peptide de séquence ID n°4 (0,5%) puis soumises à un stress par un détergent (SDS 0,1%) ou non soumises au stress (contrôle). Exemple 1 Mise en évidence de l'effet du peptide selon l'invention sur la synthèse 15 de la kératine K76 Le but de cette étude est de déterminer si le peptide de séquence ID n°5, possède un effet sur la synthèse de la kératine K76, exprimée par la muqueuse orale. Pour cela, un immuno-marquage de cette kératine est réalisée sur des kératinocytes humains de la muqueuse orale, traités par le peptide de séquence ID n°5. 20 Protocole : Des cellules HOK (Human Oral Keratinocytes) sont traitées par une solution contenant le peptide de séquence ID n°5, pendant 2 minutes. Puis, du milieu de culture est rajouté, de manière à mimer l'effet de dilution par la salive. Après une heure, le milieu est remplacé par du milieu neuf sans actif. Ce protocole d'application est répété 2 fois par jour, 25 pendant 2 jours. Des cellules contrôle cultivées en parallèle ne reçoivent pas d'actif. Puis, la stimulation de la kératine 76 est recherchée par une technique d'immuno-marquage sur cellules. Pour cela, les cellules sont fixées et mises au contact d'un premier anticorps anti-K76 30 (guinea pig polyclonal, Progen, dilué au 1/100ème), pendant 1h30, à température ambiante et sous agitation. Puis, après rinçage, un second anticorps conjugué à un marqueur fluorescent est ajouté et incubé pendant 1 heure à l'obscurité (goat anti-guinea pig Alexa Fluor®, Invitrogen, dilution 1/1000ème). Après rinçage, les lames sont finalement montées puis observées avec un microscope à fluorescence. L'intensité de fluorescence est mesurée sur 3 clichés par le logiciel Image-Pro Analyser.

Résultats : Les résultats, illustrés par la figure 1, ont montré une augmentation significative de l'intensité de fluorescence représentative de la kératine 76, sur les HOK traités avec le peptide de séquence ID n°5, en comparaison avec les cellules contrôle (jusqu' à +26% à 0.25% de peptide de séquence ID n°5).

Conclusion : le peptide de séquence ID n°5, a montré un effet positif sur la synthèse de la kératine K76, spécifique de la muqueuse orale. Exemple 2 Mise en évidence de l'effet du peptide selon l'invention sur le taux de lipides intracellulaires: Le but de cette étude est de déterminer si le peptide de séquence ID n°5, peut exercer un effet sur le taux de lipides intracellulaires, en utilisant des cultures de kératinocytes humains de la muqueuse orale. Pour visualiser les lipides, une coloration par le Nile Red est effectuée après traitement des cellules par l'actif. Protocole : Des cellules HOK (Human Oral Keratinocytes) sont traitées par une solution contenant le peptide pendant 2 minutes. Puis, du milieu de culture est rajouté, de manière à mimer l'effet de dilution par la salive. Après une heure, le milieu est remplacé par du milieu neuf sans peptide. Ce protocole d'application est répété 2 fois par jour, pendant 2 jours. Des cellules contrôle cultivées en parallèle ne reçoivent pas de peptide. Puis, la stimulation des lipides intracellulaires est recherchée par la coloration Nile Red.

Après fixation des cellules par le paraformaldehyde, une solution de Nile Red (Sigma) est ajoutée pendant 10 minutes, à l'obscurité. Puis, après rinçage, les lames sont montées et observées avec un microscope à fluorescence. Le filtre rouge permet d'observer les lipides totaux et le filtre jaune-orangé, les lipides neutres dont le cholestérol. L'intensité de fluorescence est mesurée sur 3 clichés par le logiciel Image-Pro Analyser.

Résultats : Les résultats, illustrés par la figure 1, montrent que, après traitement par le le peptide de séquence ID n°5, le taux de lipides intracellulaires est significativement augmenté, dans les HOK, en comparaison avec les cellules contrôle. L'analyse d'image montre une augmentation des lipides totaux (+42% à 0.25 % de peptide), ainsi qu'une augmentation des lipides neutres (+64% à 0.25%). Conclusion : Le peptide le peptide de séquence ID n°5 a montré un effet positif sur le taux de lipides intracellulaires, sur des kératinocytes oraux en culture. Exemple 3 Mise en évidence de l'effet du peptide selon l'invention sur une protéine des jonctions serrées, la claudine-1 : Le but de cette étude est de déterminer si le peptide de séquence ID n°4, peut avoir un effet sur une protéine constituant les jonctions serrées, la claudine-1, étant donné l'implication de cette protéine dans ce type de jonction intercellulaire, et par conséquent, dans l'intégrité de la muqueuse orale. Protocole : Des cellules HOK (Human Oral Keratinocytes) sont traitées par une solution contenant le peptide pendant 2 minutes. Puis, du milieu de culture est rajouté, de manière à mimer l'effet de dilution par la salive. Après une heure, le milieu est remplacé par du milieu neuf sans peptide. Ce protocole d'application est répété 2 fois par jour, pendant 2 jours. Des cellules contrôle cultivées en parallèle ne reçoivent pas d'actif. Puis, la claudine-1 est détectée dans les cellules contrôle et traitées par immuno-fluorescence. Pour cela, les cellules préalablement fixées sont incubées avec un premier anticorps anti- claudine-1 (rabbit polyclonal, Abcam, dilution 1/50ème), pendant 5h, à température ambiante et sous agitation. Puis, après rinçage, un second anticorps conjugué à un marqueur fluorescent est ajouté et incubé pendant 1 heure à l'obscurité (donkey anti-rabbit Alexa Fluor®, Invitrogen, dilution 1/1000ème). Après rinçage, les lames sont finalement montées puis observées avec un microscope à fluorescence.

L'intensité de fluorescence localisée au niveau des jonctions est mesurée sur 3 clichés par le logiciel Image-Pro Analyser. Résultats : Les résultats, illustrés par la figure 1, indiquent que dans les cellules traitées par le peptide de séquence ID n°4, l'intensité de marquage de la claudine-1 au niveau des 30 jonctions cellulaires est plus intense, comparé aux cellules contrôle (pouvant atteindre + 31% à 0.25%).

Conclusion : le peptide de séquence ID n°4, permet d'augmenter l'expression de la claudine-1 dans les jonctions serrées, ce qui pourrait permettre d'aider à maintenir l'intégrité de la muqueuse orale. Exemple 4 Effet protecteur du peptide selon l'invention sur la morphologie des kératinocytes de la muqueuse orale, soumis à un stress : Le but de cette étude est de rechercher un effet protecteur du peptide de séquence ID n°5, sur les kératinocytes de la muqueuse orale soumis à un stress. Dans ce but, des kératinocytes oraux sont prétraités par le peptide, puis soumis à un stress mimant le type de stress auquel est soumise la muqueuse orale.

Deux types de stress ont été reproduits dans les conditions in vitro, le stress par un détergent (SDS) et le stress par une solution alcoolique (éthanol). Protocole : Des cellules HOK (Human Oral Keratinocytes) sont traitées par une solution contenant le peptide pendant 2 minutes. Puis, du milieu de culture est rajouté, de manière à mimer l'effet de dilution par la salive. Après une heure, le milieu est remplacé par du milieu neuf sans peptide. Ce protocole d'application est répété 2 fois par jour, pendant 2 jours. Des cellules contrôle cultivées en parallèle ne reçoivent pas de peptide. De manière à placer les cellules en condition de stress, une solution de SDS à 0.05% est mise au contact des cellules pendant 2 minutes, puis rincée, et appliquée ainsi 2 fois par jour. Le même protocole de stress a été réalisé en présence d'une solution d'éthanol à 15%. En parallèle, des cellules sont gardées en condition non stressée. Après 24h, la morphologie cellulaire est étudiée par la coloration Hématoxyline et Eosine (H&E). Les cellules endommagées sont dénombrées à l'aide du logiciel Volocity® et rapportées au nombre de cellules totales.

Résultats : Les résultats sont montrés sur la figure 2. L'application du stress SDS ou éthanol entraîne une forte augmentation du rapport cellules endommagées/cellules totales, visualisées par la coloration H&E. Lorsque le peptide de séquence ID n°5 est appliqué avant le stress, ce rapport diminue de manière significative.

Conclusion : Les effets engendrés par l'application d'une solution de SDS ou d'éthanol sur les kératinocytes oraux ont été observés principalement au niveau membranaire, et s'accompagnent d'une perte de l'intégrité cellulaire. Lorsque le peptide de séquence ID n°5 est appliqué avant le stress, la baisse des dommages cellulaires suggère que l'application de l'actif a eu pour conséquence de protéger les cellules contre ces types de stress. Exemple 5 Effet protecteur du peptide selon l'invention sur l'intégrité des fonctions serrées, mises en évidence par le marquage de la claudine-1 sur des kératinocytes de la muqueuse orale, soumis à un stress : Le but de cette étude est de démontrer si l'application d'une solution contenant le peptide de séquence ID n°4, sur des kératinocytes oraux peut contribuer à la maintenance des jonctions cellulaires, et en particulier à l'intégrité des jonctions serrées, mises en évidence par l'immuno-détection de la claudine-1.

Protocole : Des cellules HOK (Human Oral Keratinocytes) sont traitées par une solution contenant le peptide pendant 2 minutes. Puis, du milieu de culture est rajouté, de manière à mimer l'effet de dilution par la salive. Après une heure, le milieu est remplacé par du milieu neuf sans peptide. Ce protocole d'application est répété 2 fois par jour, pendant 2 jours. Des cellules contrôle cultivées en parallèle ne reçoivent pas de peptide. De manière à placer les cellules en condition de stress, une solution de SDS à 0.05% est mise au contact des cellules pendant 2 minutes, puis rincée, et appliquée ainsi 2 fois par jour. Ce protocole a aussi été réalisé en présence d'une solution d'éthanol à 15% avec un temps de contact de 30 secondes. En parallèle, des cellules sont gardées en condition non stressée. Après 24h, un marquage par immuno-fluorescence de la claudine-1, protéine des jonctions serrées, est réalisé de la manière suivante. Après fixation, les cellules sont incubées avec un premier anticorps anti-claudine-1 (rabbit polyclonal, Abcam, dilution 1/50ème), pendant 5h, à température ambiante et sous agitation. Puis, après rinçage, un second anticorps conjugué à un marqueur fluorescent est ajouté et incubé pendant 1 heure à l'obscurité (donkey anti-rabbit Alexa Fluor®, Invitrogen, dilution 1/1000ème). Après rinçage, les lames sont finalement montées puis observées avec un microscope à fluorescence. L'intensité de fluorescence localisée au niveau des jonctions est mesurée sur 3 clichés par le logiciel Image-Pro Analyser.

Résultats : L'application d'une solution contenant du SDS ou de l'éthanol entraîne une désorganisation des jonctions serrées, comme le montre l'immuno-marquage de la claudine- 1, sur les kératinocytes oraux. De plus, l'intensité de marquage de la claudine-1 apparait diminuée par le stress SDS. Lorsque les keratinocytes ont été traités par le peptide de séquence ID n°4, avant d'être exposés au stress, un maintien de l'intégrité des jonctions membranaires a été observé pour les deux types de stress, ainsi qu'une augmentation de l'intensité de marquage de la claudine-1, en comparaison avec le contrôle SDS sans prétraitement. Conclusion : En conclusion, cette étude montre que le peptide de séquence ID n°4 a contribué à maintenir l'intégrité des jonctions serrées, sur des kératinocytes oraux en condition de stress. Exemple 6 Effet protecteur du peptide selon l'invention démontré par la baisse du taux de relargne de l'interleukine-1 a, sur des kératinocytes de la muqueuse orale, soumis à un stress : Le but de cette étude est de démontrer l'effet le peptide de séquence ID n°5, sur le taux de relargage de l'interleukine-1a, cytokine pro-inflammatoire, induite par une solution de SDS ou d'éthanol, sur des kératinocytes issus de la muqueuse orale. Protocole : Des cellules HOK (Human Oral Keratinocytes) sont traitées par une solution contenant le peptide pendant 2 minutes. Puis, du milieu de culture est rajouté, de manière à mimer l'effet de dilution par la salive. Après une heure, le milieu est remplacé par du milieu neuf sans actif. Ce protocole d'application est répété 2 fois par jour, pendant 2 jours. Des cellules contrôle cultivées en parallèle ne reçoivent pas de peptide. De manière à placer les cellules en condition de stress, une solution de SDS à 0.05% est mise au contact des cellules pendant 2 minutes, puis rincée, et appliquée ainsi 2 fois par jour. Ce protocole a aussi été réalisé en présence d'une solution d'éthanol à 15% avec un temps de contact de 30 secondes. En parallèle, des cellules sont gardées en condition non stressée. Après 24h, les surnageants de culture sont prélevés et un dosage ELISA de l'IL-la est réalisé (R&D System).

Résultats : Notre modèle nous permet d'observer l'augmentation du relargage de l'interleukine-la en présence de SDS ou d'éthanol. L'application du peptide de séquence ID n°5 avant la mise au contact des cellules avec l'agent irritant a permis de réduire la quantité d'IL-la relarguée. Conclusion : L'effet protecteur du peptide de séquence ID n°5, a ainsi été mis en évidence, dans le cas où les kératinocytes oraux sont placés en présence d'un agent irritant, tel que le SDS ou l'éthanol. Exemple 7 Effet protecteur du peptide selon l'invention sur l'épithélium oral reconstruit, démontré par la baisse du taux de relargage de l'interleukine-1 a, en présence d'un stress de type détergent : Le but de cette étude est de mettre en évidence l'effet protecteur du peptide de séquence ID n°4, sur l'épithélium oral reconstruit soumis à un stress de type détergent, en évaluant le taux de relargage de l'interleukine-la. Protocole : Des épithéliums oraux reconstruits placés pendant 5 jours à l'interface air- liquide ont été utilisés. Ils ont été traités de manière topique par le peptide de séquence ID n°4, appliqué pendant 2 minutes, 2 fois par jour, pendant 2 jours. Puis une solution contenant 0.1% de SDS a été appliquée pendant 2 minutes, puis rincée, 2 fois par jour, pendant un jour. En parallèle, des épithéliums ont été gardés en condition non traitée et/ou non stressée. Le lendemain, le milieu de culture des épithéliums est prélevé puis analysé par ELISA, afin de déterminer le taux d'interleukine IL-la sécrétée.

Résultats : Les résultats sont montrés sur la figure 3. L'application d'une solution contenant du SDS a induit une augmentation du taux d'IL-la relarguée dans le milieu de culture des épithéliums oraux reconstruits. Lorsque les épithéliums oraux ont été traités par une solution contenant le peptide, le taux d'IL-la a été significativement réduit, indiquant une baisse de l'effet irritant du SDS. Conclusion : le peptide de séquence ID n°4 permet donc de réduire l'effet irritant provoqué par une solution de SDS sur l'épithélium oral en culture, permettant ainsi de protéger cet épithélium.30 Exemple 8 Effet protecteur du peptide bioactif, sur la morphologie des épithéliums gingivaux reconstruits, soumis à un stress mécanique : Le but de cette étude a été de démontrer l'effet protecteur du peptide de séquence ID n°5, sur la morphologie cellulaire, en utilisant un modèle d'épithélium gingival reconstruit soumis à un stress de type mécanique. Dans ce but, un modèle de stress mécanique a été créé en plaçant la tête d'une brosse à dent à la surface d'un épithélium gingival reconstruit et en provoquant un mouvement de la brosse, de manière à mimer le brossage.

Protocole : Des épithéliums gingivaux reconstruits placés pendant 5 jours à l'interface air-liquide ont été utilisés. Ils ont été traités de manière topique par le peptide, appliqué pendant 2 minutes, 2 fois par jour, pendant 2 jours. Puis la tête d'une brosse à dent est mise au contact des épithéliums, sous agitation pendant 2 minutes, 2 fois par jour, pendant un jour. En parallèle, des épithéliums ont été gardés en condition non traitée et/ou non stressée.

Le lendemain, les épithéliums sont découpés et utilisés pour l'analyse histologique. En particulier, de manière à visualiser la morphologie cellulaire, une coloration hématoxyline & éosine (H&E) est réalisée. Résultats : Le stress mécanique mimant le brossage a entraîné une perte de cohésion des couches superficielles de l'épithélium reconstruit, ainsi que des dommages cellulaires dans les couches basales et supra-basales. L'application d'une solution contenant le peptide de séquence ID n°5 avant le brossage a permis de préserver la structure de l'épithélium, comme le montre la réduction des dommages cellulaires et le maintien de la cohésion intercellulaire.

Conclusion : Cette étude nous a permis de démontrer l'effet protecteur du peptide bioactif sur la morphologie cellulaire, dans un modèle d'épithélium gingival reconstruit soumis à un stress mécanique, mimant le brossage.30 Exemple 9 Effet protecteur du peptide selon l'invention sur l'épithélium gingival reconstruit, démontré par la baisse du taux de relargage de l'interleukine-1 a, en présence d'un stress mécanique: Le but de cette étude est de mettre en évidence l'effet protecteur du peptide de séquence ID n°4, sur l'épithélium gingival reconstruit soumis à un stress de type mécanique, en évaluant le taux de relargage de l'interleukine-la. Protocole : Des épithéliums gingivaux reconstruits placés pendant 5 jours à l'interface air-liquide ont été utilisés. Ils ont été traités de manière topique par le peptide, appliqué pendant 2 minutes, 2 fois par jour, pendant 2 jours. Puis la tête d'une brosse à dent est mise au contact des épithéliums, sous agitation pendant 2 minutes, 2 fois par jour, pendant un jour. En parallèle, des épithéliums ont été gardés en condition non traitée et/ou non stressée. Le lendemain, le milieu de culture des épithéliums est prélevé puis analysé par ELISA, afin de déterminer le taux d'interleukine IL-la sécrétée.

Résultats : Le stress mécanique induit par l'application de la tête de brosse à dent, mimant le brossage, a induit une augmentation du taux d'IL-1 a sécrétée dans le milieu de culture des épithéliums gingivaux reconstruits. Lorsque les épithéliums gingivaux ont été traités par une solution contenant le peptide de séquence ID n°4, le taux d'IL-la a été significativement réduit, indiquant une baisse de l'irritation induite par le stress mécanique. Conclusion : le peptide de séquence ID n°4, permet donc de réduire l'effet irritant provoqué par le stress mécanique sur l'épithélium gingival en culture, permettant ainsi de protéger cet épithélium.25

Claims (10)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine pour renforcer la fonction barrière physique de la muqueuse buccale.
2. 2. Utilisation d'un peptide selon la revendication 1, pour apaiser la muqueuse buccale.
3. 3. Utilisation d'un peptide selon l'une des revendications 1 à 2, pour maintenir l'intégrité et la morphologie des cellules de la muqueuse buccale.
4. 4. Utilisation d'un peptide selon l'une des revendications 1 à 3, pour stimuler l'expression des kératines 76 et/ou des lipides intracellulaires et/ou des molécules des jonctions adhérentes intercellulaires. 15
5. 5. Utilisation d'un peptide selon l'une des revendications 1 à 4, pour protéger la muqueuse buccale des dommages causés par des agressions mécaniques et/ou chimiques.
6. 6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine possède une séquence de formule générale (I) : 20 R1-(AA)n-Xl-Gly-Glu-Leu-Ser-X2-X3-(AA)p-R2 Dans laquelle, X1 est l'alanine, la valine ou l'isoleucine, 25 X2 est la leucine, l'isoleucine ou aucun acide aminé, X3 est la méthionine, la sérine, l'alanine ou aucun acide aminé, AA représente un acide aminé quelconque, ou un de ses dérivés, et n et p sont des nombres entiers compris entre 0 et 4, R1 représente la fonction amine primaire de l'acide aminé N-terminal, libre ou 30 substituée par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi un groupement acétyle, un groupement benzoyle, un groupement tosyle ou un groupement benzyloxycarbonyle, R2 représente le groupe hydroxyle de la fonction carboxyle de l'acide aminé C-terminal, libre ou substitué par un groupement protecteur pouvant être choisi parmi une 10chaîne alkyle de Cl à C20, ou un groupement NH2, NHY ou NYY avec Y représentant une chaîne alkyle de Cl à C4, ladite séquence de formule générale (I) pouvant comprendre des substitutions des acides aminés X1 à X3 par d'autres acides aminés chimiquement équivalents,
7. 7. Utilisation d'un peptide dérivé de la HMG-CoA réductase humaine selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le peptide correspond à une des séquences suivantes : (SEQ ID n°1) Met-Ala-Gly-Glu-Leu-Ser-Leu-Met-Ala-Ala (SEQ ID n°2) Gly-Val-Gly-Glu-Leu-Ser-Ile-Ser-Ala (SEQ ID n°3) Ile-Gly-Glu-Leu-Ser-Leu-Ala-Ala (SEQ ID n°4) Ala-Gly-Glu-Leu-Ser (SEQ ID n°5) Ala-Gly-Glu-Leu-Ser -NH2 (SEQ ID n°6) Ile-Gly-Glu-Leu-Ser (SEQ ID n°7) Ile-Gly-Glu-Leu-Ser -NH2
8. 8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le peptide est utilisé dans une composition cosmétique ou de soin de la cavité buccale en une quantité représentant de 0,0001 % à 20 % du poids total de la composition, et préférentiellement en une quantité représentant de 0,05 % à 5 % du poids total de la composition.
9. 9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que la composition se présente sous une forme adaptée à l'application par voie orale topique comprenant un milieu physiologiquement adapté.
10. 10. Procédé de traitement cosmétique destiné à apaiser la muqueuse buccale, caractérisé en ce que l'on applique topiquement sur la muqueuse buccale à traiter le peptide selon l'invention ou une composition le comprenant selon l'une quelconque des revendications 1 à 9.30