FR2990132A1 - Extrait proteique de graine d'isatis tinctoria et compositions cosmetiques, dermatologiques ou pharmaceutiques le comprenant - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un extrait protéique de graine d'Isatis Tinctoria, ou graine de pastel, ainsi qu'une composition comprenant un tel extrait, et avantageusement un excipient approprié. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. L'invention a également pour objet un procédé d'extraction d'un extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, ainsi que l'extrait susceptible d'être obtenu par ledit procédé. L'invention a également trait à l'utilisation d'un tel extrait ou d'une telle composition, en particulier dans des compositions cosmétiques, pour améliorer l'aspect, la souplesse, la fermeté, l'élasticité, la densité, la texture, l'aspect lisse, et/ou l'éclat de la peau, ou encore pour prévenir, limiter ou diminuer la formation des rides, par exemple. L'invention concerne également une telle composition ou un tel extrait, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des altérations de la peau, avantageusement pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des altérations du derme, pour son utilisation pour régénérer la peau, les muqueuses ou les phanères.

Description

La présente invention concerne un extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, ou graine de pastel, ainsi qu'une composition comprenant un tel extrait, et avantageusement un excipient approprié. L'invention concerne de plus l'utilisation d'un tel extrait ou d'une telle composition, avantageusement à des fins cosmétiques, en tant qu'agent anti-âge. La peau forme la barrière physique entre l'organisme et son environnement et à ce titre assure une fonction de protection pour l'individu. La peau est constituée de plusieurs tissus, agencés en couches, qui se différencient les uns des autres par leur composition.

On distingue classiquement, de la surface de la peau vers l'intérieur du corps, l'épiderme, le derme et l'hypoderme. L'épiderme est un épithélium, constitué de plusieurs strates, qui sont segmentées dans la couche cornée, comportant principalement des kératinocytes ainsi que les mélanocytes, donnant la pigmentation de la peau et situés au-dessus de la strate germinative. Dans les coupes histologiques on peut aussi observer des cellules de Langerhans et des lymphocytes qui sont impliqués dans la réponse immunitaire secondaire. L'épiderme repose sur une couche basale, dite jonction dermoépidermique, qui assure la cohésion avec les tissus sous-jacents, dont le derme.

Le derme est un tissu conjonctif de soutient, constitué de cellules, en particulier des fibroblastes et diverses cellules du système immunitaire, et d'une matrice extracellulaire, qui comprend des macromolécules de type protéique. La matrice extracellulaire comprend en particulier des fibres de collagène, d'élastine et de fibronectine, ainsi que des protéines non fibreuses comme l'acide hyaluronique. Les fibres confèrent à la peau souplesse, élasticité et assise et sont synthétisées par les fibroblastes. La composition du derme en fibres, notamment en fibre de collagène, évolue en fonction d'un grand nombre de facteurs. Ainsi, le vieillissement, le stress, la fatigue, les agressions extérieures telles les UV, la fumée de tabac, sont susceptibles de modifier la densité en fibroblastes ou bien leur capacité à synthétiser du collagène. La diminution des fibres de collagène contribue à l'altération de l'élasticité et de l'épaisseur de la peau visible avec l'âge. La peau devient flétrie, moins tonique, moins souple, moins ferme, elle prend un aspect rugueux et terne. Les fibroblastes jouent aussi un rôle important lors de la cicatrisation, en particulier dans la phase de réparation tissulaire de la cicatrisation des lésions cutanées. La cicatrisation est un processus qui comprend la régénération des cellules épithéliales, la migration des fibroblastes et des cellules épithéliales, l'angiogenèse, la synthèse des composants de la matrice extracellulaire (GAG, fibronectine, collagène), le remodelage du tissu cicatriciel. Dans ces différents processus, le rôle des fibroblastes, en particulier dans la synthèse du collagène nécessaire à la formation du tissu cicatriciel, est déterminant. La première étape de la cicatrisation correspond à la formation d'un bourgeon charnu. Ce bourgeon charnu qui est un tissu transitoire qui se met en place après le nettoyage de la plaie et dont le but est le comblement d'une perte de substance tissulaire par le tissu fibreux. Le bourgeon charnu est constitué en partie de fibroblastes, mais aussi de myofibroblastes et de vaisseaux néoformés. Juste après le nettoyage de la plaie, le bourgeon charnu est un tissu conjonctif pauvre en collagène et en vaisseaux, et riche en fibroblastes et en cellules inflammatoires. Progressivement, ce tissu s'appauvrit en cellules inflammatoires et s'enrichit en collagène et en vaisseaux. Le réseau de capillaires au départ indifférencié devient moins dense et forme progressivement un réseau proche de la normale hiérarchisé en artérioles, capillaires et en veinules post-capillaires. Parallèlement, la perte de substance se rétracte en raison de la contraction du bourgeon charnu (propriétés contractiles des myofibroblastes). Au terme de ce processus, un tissu fibreux dense cicatriciel s'est constitué et peut se remodeler. Le tissu cicatriciel est essentiellement composé de fibres de collagène. Le remodelage de la cicatrice consiste alors en une modification de l'orientation des fibres de collagène qui tendent à se disposer selon les lignes de plus forte tension comme dans un tissu conjonctif normal.

Il existe actuellement des produits dont l'utilisation permettrait de prévenir ou de traiter les effets sur l'aspect de la peau de ces différents types d'altération du derme. Ainsi, il existe actuellement des crèmes à base de collagène dont l'application topique contribue à favoriser le processus de cicatrisation. Ces crèmes cependant présentent le désavantage d'apporter, au site de la plaie, essentiellement du collagène et non tous les éléments nécessaires à la formation de la matrice extracellulaire. Or, une quantité trop importante de collagène peut conduire à des cicatrices dites chéloïdes, dans lesquelles le tissu fibreux produit devient plus important, en volume, que la partie du tissu lésée, créant ainsi une cicatrice inesthétique. Par ailleurs, il existe des compositions cosmétiques, notamment à base de collagène, mais aussi des compositions à base d'autres composés stimulant l'activité des fibroblastes, pour améliorer l'aspect de l'épiderme, prévenir, limiter ou diminuer la formation des rides. Cependant, ces compositions connues ne répondent pas toujours aux attentes des consommateurs. Il existe donc un besoin de trouver des produits alternatifs permettant de favoriser la régénération du derme, en particulier par exemple pour améliorer l'aspect de l'épiderme, sa souplesse, sa fermeté, son élasticité, sa densité, sa texture, son aspect lisse, et/ou son éclat ou encore pour prévenir, limiter ou diminuer la formation des rides, ou encore par exemple pour favoriser le processus de cicatrisation.

Isatis Tinctoria, aussi dénommée pastel, est une plante herbacée de la famille des Brassicaceae. Cette dicotylédone bisannuelle mesure jusqu'à 120 cm de haut. Ses feuilles présentent une surface légèrement cireuse et couverte de duvet. Les fleurs de couleur jaune sont réunies par grappe. Les fruits sont des silicules ailées, de 1-2 cm de long et 3-5 mm de large, pendantes à l'extrémité de pédicules. Ils prennent une coloration violette à maturité, et renferment une graine unique de 2,5 mm sur 1 mm. La racine est pivotante et fortement ligneuse. Cette plante se développe bien sur des terrains calcaires et argilo-siliceux et bénéficiant d'un ensoleillement idéal sur le pourtour méditerranéen. Elle est originaire des zones steppiques et désertiques du Caucase, l'Asie centrale à la Sibérie orientale et en Asie occidentale (Hegi), mais se trouve maintenant dans le sud-est et aussi dans certaines parties d'Europe centrale. La période de floraison a lieu de mars à avril.

Isatis Tinctoria est connue depuis l'antiquité pour son utilisation en tant qu'agent colorant. Les feuilles de la plante, coupées au moment où elles commencent un peu à jaunir, sont réduites en pâte, macérées, et produisent, après fermentation, une matière colorante bleue. On y trouve de l'indicane, glucoside de l'indigotine. La substance extraite desséchée, se vend sous le nom de « coques de pastel ». Les graines d 'Isatis Tinctoria ont aussi été utilisées pour en extraire l'huile, riche en polyphénols et présentant des propriétés hydratantes importantes. Le procédé d'extraction de l'huile de graines d 'Isatis Tinctoria produit des quantités importantes de résidu solide, le tourteau, qui présente peu d'intérêt et n'est pas actuellement valorisé. La Demanderesse a découvert, de manière surprenante et inattendue, qu'il est possible d'obtenir à partir de graines d 'Isatis Tinctoria un extrait protéique, qui présente des propriétés cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques jamais décrites jusqu'à présent. En particulier l'extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, et les compositions qui le comprennent, possèdent la propriété de stimuler chez les fibroblastes la production de collagène.

De plus, c'est la première fois que des extraits protéiques de graines d'Isatis Tinctoria sont utilisés en tant que tels, pour leur propriétés spécifiques, notamment en vue d'améliorer l'aspect, la souplesse, la fermeté, l'élasticité, la densité, la texture, l'aspect lisse, et/ou l'éclat de la peau, ou encore pour prévenir, limiter ou diminuer la formation des rides, par exemple, ou encore comme agent anti-âge.

La présente invention concerne un extrait protéique de graine d'Isatis Tinctoria, ou graine de pastel, ainsi qu'une composition comprenant un tel extrait, et avantageusement un excipient approprié. La composition est avantageusement cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique. L'invention a également pour objet un procédé d'extraction d'un extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, ainsi que l'extrait susceptible d'être obtenu par ledit procédé.

L'invention a également trait à l'utilisation d'un tel extrait ou d'une telle composition, en particulier dans des compositions cosmétiques, pour améliorer l'aspect, la souplesse, la fermeté, l'élasticité, la densité, la texture, l'aspect lisse, et/ou l'éclat de la peau, ou encore pour prévenir, limiter ou diminuer la formation des rides, par exemple. L'invention concerne également une telle composition ou un tel extrait, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des altérations de la peau, avantageusement pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des altérations du derme, pour son utilisation pour régénérer la peau, les muqueuses ou les phanères. L'invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des muqueuses ou des phanères, en vue d'améliorer leur état ou leur aspect, comprenant l'administration d'une telle composition ou d'un tel extrait. L'invention a également pour objet une méthode de traitement cosmétique pour stimuler la régénérescence cutanée, comprenant l'administration par voie topique d'un extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria ou d'une composition comprenant un tel 30 extrait.

Selon l'invention, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 10 % de protéines totales en poids par rapport au poids total de l'extrait. Avantageusement, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 20 % de protéines totales en poids par rapport au poids total de l'extrait. De façon particulièrement avantageuse, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 30 % de protéines totales en poids par rapport au poids total de l'extrait. Selon l'invention, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 2 % de l'acide aminée glutamine, en poids par rapport au poids total de l'extrait. Avantageusement, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 4 % de l'acide aminée glutamine, en poids par rapport au poids total de l'extrait. De façon particulièrement avantageuse, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 5 % de l'acide aminée glutamine, en poids par rapport au poids total de l'extrait Selon l'invention, le procédé de préparation d'un extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria comprend les étapes suivantes : a) délipidation de graines sèches d 'Isatis Tinctoria permettant l'obtention d'un tourteau au moins partiellement délipidé, b) mise en contact du tourteau obtenu à l'étape a) avec un solvant d'extraction aqueux comprenant au moins 50 % d'eau (H20), préférentiellement entre 18°C et 22°C permettant l'obtention d'un mélange, c) séparation du mélange obtenu à l'étape b), préférentiellement par centrifugation et/ou filtration, et obtention d'une fraction A correspondant à la partie soluble du mélange et riche en protéines du type albumine, et d'une fraction B correspondant à la partie insoluble du mélange. d) mise en contact de la fraction B obtenue à l'étape c) avec un solvant d'extraction aqueux ou alcoolique, préférentiellement avec une solution aqueuse de 30 chlorure de sodium de préférence comprise entre 0,05 mol/L et 1 mol/L, préférentiellement entre 18°C et 22°C permettant l'obtention d'un mélange, e) séparation du mélange obtenu à l'étape d), préférentiellement par centrifugation, et obtention d'une fraction C correspondant à la partie soluble du mélange et riche en protéines du type globuline, et d'une fraction D correspondant à la partie insoluble du mélange, f) combinaison des fractions A et C et concentration de la combinaison obtenue en un extrait, préférentiellement sous pression réduite, et g) L'extrait obtenu à l'étape f) est lyophilisé. Selon l'invention, l'étape a) de délipidation peut être réalisée selon l'une des techniques choisies parmi le pressage, la mise en contact avec un solvant, l'extraction au moyen d'un extracteur de Soxhlet. Avantageusement, l'étape de délipidation est réalisée par pressage. Selon l'invention, les étapes de mise en contact avec un solvant d'extraction des étapes b) et/ou d) sont réalisées pendant une durée de 15 minutes à 10 heures, préférentiellement pendant une durée de 30 minutes à 5 heures, de manière avantageuse pendant une durée de 1 heure à 3 heures, de manière particulièrement avantageuse pendant une durée de 2 heures. Selon l'invention, les étapes de mise en contact avec un solvant d'extraction des étapes b) et/ou d) sont réalisées à une température comprise entre 5° et 30°C, préférentiellement entre 10° et 30°C, de manière avantageuse entre 15 et 25°C. De manière particulièrement avantageuse, les étapes de mise en contact avec un solvant d'extraction des étapes b) et/ou d) sont réalisées à une température comprise entre 18 et 22°C.

Selon l'invention, le solvant d'extraction utilisé à l'étape b) est choisi parmi les solvants aqueux ou alcooliques comprenant au moins 50 % d'eau en poids par rapport au poids total du solvant. Avantageusement, le solvant d'extraction utilisé à l'étape b) est choisi parmi les solvants aqueux ou alcooliques comprenant au moins 75 % d'eau en poids par rapport au poids total du solvant. Préférentiellement, le solvant d'extraction utilisé à l'étape b) est l'eau.

Selon l'invention, le solvant d'extraction utilisé à l'étape d) est choisi parmi les solvants aqueux ou alcooliques comprenant du chlorure de sodium. Préférentiellement, le solvant d'extraction utilisé à l'étape d) comprend du chlorure de sodium à une concentration comprise entre 0,05 mol/L et 1 mol/L. Avantageusement, le solvant d'extraction utilisé à l'étape d) comprend du chlorure de sodium à une concentration comprise entre 0,1 mol/Let 1 mol/L. De manière particulièrement avantageuse, le solvant d'extraction utilisé à l'étape d) comprend du chlorure de sodium à une concentration d'environ 0,1 mol/L.

Selon l'invention, la séparation effectuée aux étapes c) et/ou e) peut être réalisée par centrifugation, filtration, décantation par exemple. Préférentiellement, la séparation effectuée aux étapes c) et/ou e) est réalisée par centrifugation. Selon l'invention, l'extrait susceptible d'être obtenu par le procédé de préparation d'un extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria comprend au moins 10 % de protéines totales en poids par rapport au poids total de l'extrait. Avantageusement, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 20 % de protéines totales en poids par rapport au poids total de l'extrait. De façon particulièrement avantageuse, l'extrait protéique de graines d 'Isatis Tinctoria comprend au moins 30 % de protéines totales en poids par rapport au poids total de l'extrait.

La teneur en protéines totales peut être déterminée selon toute méthode connue de l'homme du métier, qui saura choisir de façon adéquate la méthode la plus appropriée, comme par exemple le dosage selon la technique de Lowry, le dosage selon la technique de Bradford, ou le dosage selon la technique de Kjeldhal.

Selon un objet de l'invention, l'extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria peut être utilisé à des fins cosmétiques, ou pour la préparation d'une composition cosmétique. L'extrait selon l'invention est avantageusement utilisé en tant que principe actif dans 30 des compositions, avantageusement pharmaceutiques, cosmétiques ou dermatologiques, avantageusement comprenant un ou plusieurs excipients appropriés.

Selon un mode de réalisation, l'extrait de graines d'Isatis Tinctoria est utilisé à raison de 0,001 % à 50 % en poids, préférentiellement à raison de 0,01 % à 5 % en poids du poids de la composition cosmétique. Avantageusement, l'extrait de graines d'Isatis Tinctoria est utilisé à raison de 0,05 % à 0.5 % en poids du poids de la composition cosmétique. Selon l'invention, La composition peut en outre comprendre au moins un autre composé actif, en plus de l'extrait protéique de graine d'Isatis Tinctoria. Avantageusement, la composition peut en outre comprendre au moins un autre composé actif à action anti-âge, conduisant à un effet complémentaire ou synergique. L'autre composé actif pouvant être compris dans la composition en plus de l'extrait protéique de graine d'Isatis Tinctoria peut être choisi parmi des composés actifs classiquement utilisés en dermatologie, pharmacologie ou cosmétique, et leurs équivalents fonctionnels. Cet autre composé actif peut être choisi parmi les huiles essentielles, les agents cicatrisant et/ou restructurant de la barrière cutanée, les actifs hydratants, les émollients, les agents favorisant la microcirculation cutanée, les agents diminuant l'inflammation, les agents anti-irritants et/ou anti-inflammatoires et/ou apaisants, les agents antioxydants, les agents anti-âge, les agents pigmentants, les agents dépigmentants ou hypopigmentants, les agents desquamants, les kératolytiques, les kératorégulateurs, les agents sébo-régulateurs, les agents modulateurs de la température, les agents lipolytique ou inhibiteur de la lipogenèse, les agents anticellulite et/ou amincissants, les filtres solaires et les mélanges de ces composés.

Plus particulièrement, les agents cicatrisants et/ou restructurants de la barrière cutanée pouvant être utilisés en association avec l'extrait de graines d'Isatis Tinctoria, sont avantageusement le panthénol (vitamine B5), l'arabinogalactane, l'oxyde de zinc, les céramides, le cholestérol, le squalane et les phospholipides.

Avantageusement, les actifs hydratants pouvant être compris dans la composition en plus de l'extrait protéique de graine de pastel sont choisi parmi l'huile de pastel, l'huile de prune de Gascogne, le beure de prune de Gascogne, l'huile de tournesol, le beurre de cacao, le beurre de karité. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition selon l'invention comprend en plus de l'extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, de l'huile de graine d 'Isatis Tinctoria, préférentiellement entre 0,01 % à 10 % en poids du poids de la composition, de façon particulièrement préférée entre 0,1 % à 5 % en poids du poids de la composition. Parmi les actifs anti-âge recommandés en association avec l'extrait selon l'invention, on peut citer en particulier le lait d'ânesse, le lyophilisat de lait d'ânesse, l'extrait de carotte, l'extrait d'hématite, l'extrait de l'Acmella oleracea, l'extrait de la partie aérienne de l'Onopordum acanthium, l'huile de bourrache ou l'extrait d'Acanthe (dénomination commerciale Gatuline, fournisseur Gatte Fosse). Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition selon l'invention comprend en plus de l'extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, du lyophilisat de lait d'ânesse, préférentiellement entre 0,01 % et 5 % en poids du poids de la composition, de façon particulièrement préférée entre 0,05 % et 2 % en poids du poids de la composition. Parmi les actifs recommandés en association avec l'extrait selon l'invention, on peut citer les extraits végétaux, en particulier : - les huiles végétales telles que l'huile de pastel, l'huile de prune de Gascogne, le beure de prune de Gascogne, l'huile de tournesol, le beurre de cacao, le beurre de karité, les huiles de soja et/ou l'huile de colza, l'huile d'avocat, l'huile de palme, l'huile de germe de blé, l'huile d'amande, l'huile de Lupin, l'huile de tournesol, ou un mélange de ces huiles ; - les peptides ou complexes d'acides aminés végétaux, en particulier les peptides de lupin, les peptides de quinoa, les peptides de soja fermenté ou non, les peptides de riz, les peptides de lin, les peptides de coton, les peptides de noix, les peptides de tomate, les peptides de fruits rouges, les peptides de prune ; utiles notamment pour leur activité hydratante et/ou émolliente (avocat), kératorégulatrice (lupin, quinoa), cicatrisante et/ou restructurante de la barrière cutanée (quinoa, soja), anti-inflammatoire et/ou anti-irritante et/ou apaisante (lupin, quinoa), anti-âge (lupin), pigmentante (riz). - Les sucres tels le miel de fleurs, en particulier le miel de fleurs de pastel. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, la composition selon l'invention comprend en plus de l'extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, du miel toutes fleurs dont pastel, préférentiellement entre 0,05% à 6% en poids du poids de la composition, de façon particulièrement préférée entre 0,1% et 3% en poids du poids de la composition. Les actifs protecteurs solaires pouvant être utilisés en association sont avantageusement des filtres ou écrans solaires UVB et/ou UVA; tels les écrans ou filtres minéraux et/ou organiques connus de l'homme du métier qui adaptera leur choix et leurs concentrations en fonction du degré de protection recherché. Selon l'invention, la composition peut comprendre, en plus d'un extrait protéique de graine d'Isatis Tinctoria, des particules exfoliantes ou gommantes, qui peuvent être d'origine minérale, végétale, organique ou synthétique, et choisies par exemple parmi les billes de polyéthylène, les billes de polyuréthane, les billes de nylon, les billes de cire, de la pierre ponce, de la poudre de noyaux de fruits, de l'alumine, des cristaux de sucre. Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l'invention comprend en Avantageusement, la composition peut en outre comprendre de la poudre de noyaux de fruits choisis parmi la poudre de noyau d'abricot, la poudre de noyau de prunes, la poudre de noyau de cerise, la poudre de noyau de pêche. Selon un mode particulièrement avantageux de l'invention, la composition selon l'invention comprend en plus de l'extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria de la poudre de noyau de prunes de Gascogne. Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales des compositions selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement pharmaceutique, en particulier dermatologique, ou cosmétique adapté à un patient comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau. En fonction du type d'administration souhaitée, la composition et/ou les composés actifs selon l'invention peuvent en outre comprendre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable, notamment dermatologiquement acceptable, ou un excipient cosmétiquement acceptable. Selon la première variante, on utilise un excipient adapté pour une administration par voie topique externe. Selon l'invention, un excipient peut être toute substance autre que le principe actif dans la composition et dont l'addition est destinée à conférer une consistance donnée, ou d'autres caractéristiques physiques particulières, au produit final, tout en évitant toute interaction, particulièrement chimique, avec le principe actif. Parmi les excipients appropriés pouvant être compris dans la composition selon l'invention, on peut citer l'eau, les alcools, les huiles végétales ou minérales, les composés synthétiques comme par exemple les silicones. La composition selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant pharmaceutique ou cosmétique connu de l'homme du métier, choisi parmi les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants par exemple. Selon la présente invention, la composition peut en outre comprendre des charges, par exemple choisie parmi le talc, mica, amidon, dérivés de silice, poudre de silicone, poudre de cire, poudres de polyéthylène. Selon l'invention, la composition peut en outre comprendre des fibres, par exemple des fibres hydrophiles, ou des fibres hydrophobes. Les fibres peuvent être choisies parmi les fibres synthétiques ou naturelles. Les fibres pouvant être comprises dans la composition selon l'invention peuvent par exemple être choisies parmi les fibres de coton, de lin, et/ou de soie.

Selon un mode de réalisation, la composition cosmétique comprenant l'extrait de graines d'Isatis Tinctoria se présente sous toutes les formes galéniques utilisées en application topique, par exemple émulsion huile dans eau, émulsion eau dans huile, émulsion multiple, solutions aqueuses ou solutions hydro-alcooliques. La composition cosmétique comprenant l'extrait de graines d'Isatis Tinctoria présente des viscosités diverses et prend différentes formes, comme par exemple gel, sérum, lait, crème, stick, lotion, pommades, mousse, liniment.

La composition comprenant un extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria est particulièrement destinée à une utilisation cosmétique ou dermatologique. La composition sera avantageusement formulée sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique. L'extrait protéique de graine d'Isatis Tinctoria, ainsi que les compositions le comprenant, possède la propriété d'augmenter la synthèse des collagènes totaux par les fibroblastes. Les altérations du derme, par exemple les lésions telles les coupures ou les brulures, mais aussi les rides, notamment les rides photo-induites, résultent de disfonctionnements ou d'atteintes de l'activité des fibroblastes (Hwang et al., Lab Anim Res. 2011 Mar;27(1):1-8.). L'invention a donc également pour objet la composition selon l'invention ou un extrait selon l'invention, pour son utilisation en tant que produit cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique. Préférentiellement, la composition selon l'invention ou un extrait selon l'invention, est utilisée dans le traitement ou la prévention des altérations de la peau, avantageusement dans le traitement ou la prévention des altérations du derme. De manière particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention ou un extrait selon l'invention, est utilisée pour stimuler la régénérescence de la peau, des muqueuses, et/ou des phanères.

On entend par troubles liés à la cicatrisation et à l'organisation cutanée, les troubles résultant des processus de cicatrisation et d'organisation cutanée de la peau telles qu'une peau relâchée, des vergetures, des dartres, des gerçures, des crevasses en particulier au niveau des seins.

La composition ou l'extrait selon l'invention est également avantageusement utilisé(e) en tant que produit cicatrisant, dans la prévention et/ou le traitement de la cicatrisation des plaies, en particulier le traitement des troubles liés à la cicatrisation et à l'organisation cutanée, et en tant qu'agent anti-âge, chronologique ou photo-induit, dans la prévention du vieillissement, et du vieillissement photo-induit. Avantageusement, la composition ou l'extrait selon l'invention est également utilisé(e) à des fins cosmétique, en particulier pour améliorer l'aspect et/ou la souplesse et/ou la fermeté et/ou l'élasticité et/ou la densité et/ou la texture et/ou l'aspect lisse et/ou l'éclat de la peau. De manière particulièrement avantageuse, la composition ou l'extrait selon l'invention est utilisé(e) pour prévenir, limiter ou diminuer la formation des rides.

Les exemples suivants sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiter la portée. DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 : Concentration de la fraction A en différents acides aminées. La concentration de chaque acide aminé est indiquée en pourcentage du poids total de l'extrait protéique. Les acides aminés sont indiqués selon la nomenclature IUPAC.

Figure 2 : Concentration de la fraction D en différents acides aminées. La concentration de chaque acide aminé est indiquée en pourcentage du poids total de l'extrait protéique. Les acides aminés sont indiqués selon la nomenclature IUPAC. Figure 3 : Concentration de l'extrait protéique de graine d'Isatis Tinctoria en différents acides aminées. La concentration de chaque acide aminé est indiquée en pourcentage du poids total de l'extrait protéique. Les acides aminés sont indiqués selon la nomenclature IUPAC. Figure 4 : Innocuité de l'extrait protéique d'Isatis Tinctoria sur des épidermes reconstitués en co-culture avec des fibroblastes. La densité optique est indiquée en ordonnée, les échantillons correspondant respectivement aux conditions témoin et aux épidermes reconstitué/fibroblastes traités avec C2 sont en ordonnés.

Figure 5 : Innocuité de l'extrait protéique d'Isatis Tinctoria sur culture de fibroblastes. La densité optique est indiquée en ordonnée, les échantillons correspondant respectivement aux conditions témoin et aux épidermes reconstitué/fibroblastes traités avec C2 sont en ordonnés. Figure 6 : Effet de l'extrait protéique d'Isatis Tinctoria sur la néosynthèse de collagène. La densité optique est indiquée en ordonnée, les échantillons correspondant respectivement au témoin et aux épidermes reconstitué/fibroblastes traités avec C2 sont en ordonnés EXEMPLES Exemple 1 : Obtention de l'extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria.

Après décorticage, des graines d'Isatis Tinctoria ont été pressées pour fournir l'huile de pastel connue pour sa teneur élevée en acides gras monoinsaturés et polyinsaturés caractéristiques des crucifères et un tourteau, résidu solide obtenu après pressage, contenant encore une partie de ces lipides.

La teneur en lipides du tourteau est évaluée à 24,2 ±5,8 % en poids par rapport au poids total du tourteau. L'enveloppe des graines oléagineuse contient par ailleurs un ensemble de protéines à 30,8±0,6 % en poids par rapport au poids total d'enveloppe de graines testées et le tourteau après pressage contient 40,0±1,5 % de protéines en poids par rapport au poids total du tourteau.

Un extrait de protéines hydrosolubles est obtenu par macération du tourteau dans l'eau. Après séparation du résidu solide, l'extrait liquide et lyophilisé. Le procédé suivant a été mis en oeuvre afin d'obtenir un extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, après décorticage des graines : a) 30 g de graines sèches d'Isatis Tinctoria ont été délipidées par pressage en monovis. b) L'huile a été séparée du tourteau entre 18 et 22 °C. c) 25 g de tourteau partiellement délipidé d'Isatis Tinctoria a été mis en contact avec 125 ml d'eau déminéralisée. d) La suspension a été agitée pendant 2 heures entre 18 et 22 °C. e) Le mélange obtenu à l'étape d) a été séparé par centrifugation. Le surnageant a été collecté après filtration et constitue la fraction A correspondant à la partie soluble du mélange et riche en protéines du type albumine (la partie insoluble du mélange est dénommée fraction B ou tourteau), Le tourteau (fraction B) issu de la séparation à l'étape e) est repris dans 10 200 ml de chlorure de sodium à 0,1 M. g) Le mélange est agité pendant 2 heures entre 18 et 22 °C. h) Le mélange obtenu à l'étape g) est séparé, de préférence par centrifugation. Le surnageant est collecté après filtration et constitue la fraction C correspondant à la partie soluble du mélange et riche en protéines du type globuline, 15 (la partie insoluble du mélange est dénommée fraction D) i) La fraction A, issue de l'étape e) et la fraction D, issue de l'étape h) sont rassemblées et concentrées sous pression réduite. Un extrait concentré est obtenu. j) L'extrait concentré est lyophilisé (7,6 g). 20 La quantité de l'extrait en protéines totales a ensuite été mesurée selon le protocole suivant : La détermination de la teneur en protéines s'effectue à partir du dosage de l'azote total par la méthode Kjeldahl. Une fois la teneur en azote total (NTK) connue, il suffit de multiplier cette valeur par le coefficient reconnu internationalement : 6,25. Chaque 25 échantillon et chaque blanc sont tripliqués. Cette analyse s'effectue en deux étapes : la minéralisation de l'échantillon grâce au bloc de minéralisation Tecator Kjeltec 2000 ; et la titration de l'ammoniac grâce au Tecator-Foss Kjeltec 2200. Les échantillons sont préparés la veille : à environ 200mg de solide ou 5 à 10 mL de liquide, 12,5mL d'H2SO4 à 98% sont ajoutés dans le tube de minéralisation. Le lendemain, deux 30 pastilles de catalyseur de CuSO4, 5H20 sont introduites dans le tube avant de minéraliser le mélange à 400°C pendant 45min à lh. Durant cette étape, la totalité de l'azote de l'échantillon est transformée en ammoniaque. Après refroidissement des tubes de minéralisation, la préparation à la titration de l'ammoniac est nécessaire. Après avoir installé un tube dans le Kjeltec 2200, cet appareil délivre 80mL d'eau distillée puis 50mL de NaOH à 40% dans le tube, et 30mL d'acide borique à 4%, ajoutée de vert de bromocrésol et de rouge de méthyle, dans un erlenmeyer. La distillation du contenu du tube permet d'entraîner à la vapeur l'ammoniac produit par l'ajout de soude. Celui-ci est piégé dans l'erlenmeyer par barbotage de cette vapeur dans la solution aqueuse d'acide borique colorée. La titration de l'ammoniac dans le distillat est réalisée par une solution d'acide chlorhydrique de 0,05 ou 0,1M, selon la teneur estimée dans l'échantillon, et la précision de mesure voulue. Le volume utilisé pour la titration est celui noté quand la solution dans l'erlenmeyer passe du bleu-vert au rose-orangé (attention, pour les blancs, ou tubes témoins, la couleur passe du rose-violacé au rose orangé). L'analyse des acides aminés a été effectuée selon le protocole suivant : L'analyse des acides aminés se fait sur une chaîne Biochrom 31 (Serlabo, France) après une étape d'hydrolyse des protéines pendant 12h avec de HC1 5,7M à 103°C dans des tubes scellés et dégazés. Après refroidissement, le pH est corrigé avec une solution de NaOH et la solution est filtré sur membrane PTFE Whatman (0.451.1m) et dilué dans une solution de citrate de sodium à pH 2.2). Le volume d'échantillon injecté sur la colonne d'échange d'ion est de 4011E). Pour l'analyse des acides aminés la séparation se fait progressivement par l'élution de solutions tamponnées de citrate de sodium à pH 2.65, 3.35, 4.25 et de borate/citrate de sodium pH 8.6 dans une colonne Ultropac résine de 81.1m. La détection se fait par dérivation de chaque amino-acide avec la nihydrine et les complexes sont détectés à 440 nm et 570 nm. Un standard externe (solution d'acides aminés, Sigma Aldrich) est utilisé pour la calibration. Le traitement des données est opéré sur le logiciel EZChrome Elite (Scientific software). Les résultats de l'analyse des acides aminés contenus dans les fractions A et D sont représenté dans le tableau 1.

Albumines (fraction A) Globulines (fraction D) Acide Teneur massique (g/100g d'extrait) Répartition en Teneur Répartition en aminé acides aminés massique acides aminés totaux (g/100g totaux d'extrait) Q ± % relatif ± Q moyen ± % relatif ± moyen moyen moyen molaire molaire Asp 2,26 0,22 8,16 0,20 2,56 0,13 8,99 0,09 Thr 0,95 0,08 3,83 0,08 1,10 0,05 4,32 0,02 Ser 1,10 0,08 5,02 0,02 1,09 0,05 4,84 0,04 Glu 6,20 0,44 20,26 0,12 5,88 0,25 18,65 0,09 Gly 1,90 0,13 12,15 0,11 2,54 0,07 15,82 0,21 Ala 1,46 0,10 7,90 0,06 1,96 0,04 10,26 0,22 Cys 0,31 0,01 1,22 0,05 0,23 0,01 0,88 0,03 Val 1,40 0,11 5,73 0,03 1,32 0,06 5,25 0,05 Met 0,12 0,08 0,38 0,22 0,11 0,02 0,33 0,05 Ile 1,00 0,08 3,65 0,04 0,88 0,05 3,13 0,07 Leu 2,07 0,18 7,57 0,09 1,63 0,11 5,81 0,16 Tyr 0,55 0,06 1,46 0,05 0,59 0,04 1,52 0,03 Phe 1,21 0,11 3,53 0,05 0,98 0,07 2,76 0,07 His 0,86 0,06 2,66 0,03 0,79 0,04 2,38 0,01 Lys 1,25 0,08 4,13 0,10 1,57 0,03 5,00 0,12 Arg 2,54 0,16 7,01 0,09 2,06 0,11 5,52 0,07 Pro 1,28 0,08 5,34 0,12 1,12 0,04 4,53 0,02 Tableau 1 : Analyse des acides aminés contenus dans les fractions A et D La teneur en protéines totales et la répartition en acides aminés de l'extrait protéique d'Isatis Tinctoria sont indiquées dans le Tableau 2. La répartition en acides aminés de l'extrait protéique d'Isatis Tinctoria est représentée dans la Figure 3.

Taux de protéine de l'extrait Quantité moyenne (g/100g) (Nx6.25) (%) 31,70 31,70 Répartition en acides aminés Quantité moyenne AA (g/100g) (%) Asp 2,33 9,12 Thr 1,03 4,04 Ser 0,90 3,54 Glu 5,82 22,79 Gly 2,23 8,73 Ala 1,71 6,69 Cys 0,25 0,97 Val 1,31 5,12 Met 0,16 0,64 Ile 0,90 3,51 Leu 1,75 6,85 Tyr 0,56 2,21 Phe 1,03 4,04 His 0,80 3,13 Lys 1,41 5,52 Arg 2,19 8,59 Pro 1,15 4,50 Tableau 2 : Teneur en protéines et acides aminés del extrait protéique Exemple 2 : Exemples de compositions selon l'invention.

Cl: Sérum anti-âge Huile de Pastel 4,00% Extrait Protéique de graines de Pastel 0,20% Lyophilisat de Lait d'ânesse 1,00% Miel de Pastel 1,00% Huile de Prune de Gascogne Beurre de Prune de Gascogne Huile de Tournesol biologique Extrait d'Acanthe glycérine, émollients, cires, émulsionnants, stabilisants, charges, conservateurs, parfum Eau qsp100% C2 : Crème de nuit anti-âge Huile de Pastel 3,00% Extrait Protéique de graines de Pastel 0,10% Lyophilisat de Lait d'ânesse 0,80% Miel de Pastel 1,00% Huile de Prune de Gascogne Beurre de Prune de Gascogne Huile de Tournesol biologique Extrait d'Acanthe Glycérine, émollients, cires, émulsionnants, stabilisants, charges, conservateurs, parfum Eau qsp100% Exemple 3 : Innocuité de l'extrait La cytotoxicité de la composition C2 a été analysée sur deux modèles expérimentaux différents : Des épidermes reconstitués SKINETHIC en co-culture avec des fibroblastes humains issus de peau de prépuce humain dans des plaques 24 puits Des cultures de fibroblastes issus de biopsie de peau humaine dans des plaques 24 puits Les deux modèles expérimentaux ont été mis en présence de 141/cm2 de composition C2, ou en absence de composition (témoin) et incubés à 37°C et 5% de CO2 pendant 24 heures. Les co-cultures épidermes reconstitués/fibroblastes ainsi que les cultures de fibroblastes seuls ont ensuite été incubées pendant 3 heures en présence 0,3 ml de Bleu de Formazan (MTT) à une concentration de 1 mg/ml. Les co-cultures épidermes reconstitués/fibroblastes ont ensuite été incubées avec 1,5 ml d'isopropanol pendant 2 heures. Le surnageant a été récupéré et la cytotoxicité a été évaluée par mesure de la densité optique à 540 nm. Les résultats sont représentés dans le tableau 3 et la figure 4. Les résultats obtenus montrent que C2 n'entraîne aucune cytotoxicité vis-à-vis des épidermes reconstitués SKINETHIC. Densité Optique (D.0) % Témoin 0,950 ± 0,04 - SERIJM ANTI-AGE GRAINE DE PASTEL 0,960 + 0,06 n.s. (10u1/cm2) Tableau 3 Les cultures de fibroblastes seuls ont ensuite été lysées avec du DMSO. Le surnageant a été récupéré et la cytotoxicité a été évaluée par mesure de la densité optique à 540 nm. Les résultats sont représentés dans le tableau 4 et la figure 5. Les résultats obtenus montrent que C2 n'entraîne aucune cytotoxicité vis-à-vis des fibroblastes humains en culture.

Densité Optique % (D.0) Témoin 0,420 ± 0,02 - SERIJM ANTI-AGE GRAINE DE 0,440 ± 0,05 n.s. PASTEL (10 ul/cm2) Tableau 4 Exemple 4 : Effet de l'extrait sur la régénération cellulaire Des épidermes reconstitués SKINETHIC en co-culture avec des fibroblastes humains issus de peau de prépuce humain ont été mis en présence de 101.11/cm2 de composition C2, ou en absence de composition (témoin) et incubés à 37°C et 5% de CO2 pendant 24 heures. Les fibroblastes ont ensuite été récupérés par centrifugation du milieu de culture, puis digestion par des collagénases (lmg/réaction) dans l'acide acétique (0,5 M) pendant 24 heures à 4°C. Les collagènes ont été précipités par NaC11M. L'évaluation de la quantité de collagènes précipités a ensuite été réalisée par mesure de l'hydroxyproline après séparation par HPLC en phase inverse. Les pics de fluorescence, après intégration, ont permis de calculer la concentration de l'hydroxyproline au niveau des cultures cellulaires.

Les résultats sont présentés dans le tableau 5 et la figure 6. Les résultats obtenus montrent que le traitement par C2 stimule significativement la néosynthèse des collagènes totaux de 22% au niveau des fibroblastes humains en culture.

Concentration % d' hydroxyproline (Ing/L) Témoin 1,56 ± 0,14 - SERIJM ANTI-AGE GRAINE DE PASTEL 1,91 ± 0,16* +22 (101.11/cm2) Tableau 5

Claims (16)

1. REVENDICATIONS1. Extrait protéique de graines d'Isatis Tinctoria, caractérisé en ce que ledit extrait comprend au moins 20 % de protéines totales en poids, avantageusement au moins 30 % de protéines totales en poids par rapport au poids total de l'extrait.
2. 2. Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend au moins 2 %, préférentiellement au moins 5 % de l'acide aminé glutamine en poids par rapport au poids total de l'extrait.
3. 3. Composition, avantageusement cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend l'extrait selon l'une des revendications 1 ou 2 et avantageusement un excipient approprié.
4. 4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce qu'elle comprend entre 0,01 % et 1 % en poids de l'extrait selon l'une des revendications 1 ou 2, par rapport au poids total de la composition.
5. 5. Composition selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre de l'huile de graine d 'Isatis Tinctoria, avantageusement entre 0,01 % à 10 % en poids du poids de la composition, encore plus avantageusement entre 0,1 % à 5 % en poids du poids de la composition.
6. 6. Composition selon l'une des revendications 4 ou 5, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre du lyophilisat de lait d'ânesse, avantageusement entre 0,01 % et 5% en poids du poids de la composition, encore plus avantageusement entre 0,05 % et 2% en poids du poids de la composition.
7. 7. Composition selon l'une des revendications 4 à 6, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre du miel toutes fleurs dont pastel, avantageusement entre 0,05 % à 6 % en poids du poids de la composition, encore plus avantageusement entre 0,1 % et 3 % en poids du poids de la composition.
8. 8. Composition selon l'une des revendications 4 à 7, caractérisée en ce qu'elle est formulée pour application topique.
9. 9. Composition selon l'une des revendications 4 à 8, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique.
10. 10. Composition selon l'une des revendications 4 à 9, caractérisée en ce qu'elle est formulée sous une des formes parmi crème, gel, lotion, émulsion eau dans l'huile, émulsion huile dans l'eau, gel aqueux, composition huileuse, sérum, lait, crème, stick, lotion, pommades, mousse, liniment.
11. 11. Composition selon l'une des revendications 4 à 10 ou extrait selon l'une des revendications 1 et 2, pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des altérations de la peau, avantageusement pour son utilisation dans le traitement ou la prévention des altérations du derme.
12. 12. Composition selon l'une des revendications 4 à 10 ou extrait selon l'une des revendications 1 ou 2, pour son utilisation pour stimuler la régénérescence de la peau, des muqueuses, et/ou des phanères.
13. 13. Composition selon l'une des revendications 4 à 10 ou extrait selon l'une des revendications 1 ou 2, pour son utilisation dans le traitement de la cicatrisation des plaies.
14. 14. Utilisation cosmétique de la composition selon l'une des revendications 4 à 10 ou de l'extrait selon l'une des revendications 1 ou 2, pour améliorer l'aspect et/ou lasouplesse et/ou la fermeté et/ou l'élasticité et/ou la densité et/ou la texture et/ou l'aspect lisse et/ou l'éclat de la peau.
15. 15. Utilisation cosmétique de la composition selon l'une des revendications 4 à 10 ou de l'extrait selon l'une des revendications 1 ou 2, pour prévenir, limiter ou diminuer la formation des rides.
16. 16. Utilisation cosmétique de la composition selon l'une des revendications 4 à 10 ou de l'extrait selon l'une des revendications 1 ou 2, à titre d'agent anti-âge.