FR2980365A1

FR2980365A1 - NANOEMULSIONS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION, AND THEIR USE AS A CONTRAST AGENT.

Info

Publication number: FR2980365A1
Application number: FR1158565A
Authority: FR
Inventors: Caroline Robic; Samy Chadel; Veronique Schmitt; Calderon Fernando Leal; Marc Port; Olivier Lambert
Original assignee: Guerbet SA
Current assignee: Guerbet SA
Priority date: 2011-09-26
Filing date: 2011-09-26
Publication date: 2013-03-29
Anticipated expiration: 2031-09-26
Also published as: FR2980365B1; WO2013045504A1

Abstract

La présente demande concerne une nanoémulsion huile dans eau comprenant : - une phase aqueuse une phase huile fluorée - un tensioactif à l'interface entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, le tensioactif formant une couche de tensioactif entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, la dite nanoémulsion comprenant en outre un agent compatibilisant formant une couche supplémentaire s'intercalant entre la phase huile fluorée et la couche de tensioactif, son procédé de préparation et son utilisation comme agent de contraste.The present application relates to an oil-in-water nanoemulsion comprising: an aqueous phase a fluorinated oil phase a surfactant at the interface between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, the surfactant forming a surfactant layer between the aqueous phase and the phase fluorinated oil, said nanoemulsion further comprising a compatibilizer forming an additional layer interposed between the fluorinated oil phase and the surfactant layer, its method of preparation and its use as a contrast agent.

Description

Nanoémulsions, leur procédé de préparation, et leur utilisation comme agent de contraste La présente invention concerne de nouvelles nanoémulsions et de nouveaux procédés de préparation de nanoémulsions, et leur utilisation comme agents de contraste notamment en IRM. Dans le domaine de l'imagerie diagnostique, un grand nombre de recherches ont concerné des nanosystèmes lipidiques de type émulsion. Typiquement les émulsions utilisées sont sous forme de vésicules préparées à l'aide de constituants lipidiques (huile en particulier) et de tensioactifs (également désignés surfactants) servant d'interface entre la phase aqueuse et le noyau lipidique de la nanogouttelette. Les émulsions lipidiques huile dans eau incorporent une phase huileuse lipophile, formant des gouttelettes en solution aqueuse. Une catégorie particulière d'émulsions décrite notamment dans W003/062198 ou US 6 676 963 est celle de nanoémulsions fluorées comprenant, intégrés à l'intérieur des vésicules lipidiques, des composés fluorés comportant des atomes de fluor F19 utilisés pour l'Imagerie de Résonance Magnétique IRM. En effet le fluor a notamment l'intérêt par rapport à l'IRM du proton d'être quasiment absent en dans les systèmes biologiques à l'état libre ce qui lui permet d'être reconnu comme une excellente sonde quantitative sous la forme fluor F19. Le coeur est formé d'une huile fluorée, et entouré d'une couche lipidique formée par un tensioactif (lécithine par exemple). Ces émulsions fluorées peuvent comprendre en outre un nombre très élevé de complexes de métaux paramagnétiques, en particulier de lanthanides, pour associer l'IRM du fluor 19F et du proton 1H. On connaît ainsi des émulsions fluorées pour IRM incorporant des chélates capables de complexer des lanthanides en particulier le gadolinium. Les chélates utilisés sont notamment des dérivés du DTPA, DOTA, DOSA, HPDO3A et autres chélates largement décrits dans l'art antérieur. Ces chélates hydrophiles sont rendus lipophiles en leur greffant une zone lipophile telle qu'un phospholipide, ce qui permet de les intégrer dans la membrane lipidique que forme le tensioactif lipidique de la composition. Plusieurs milliers (5000 à 100 000 environ) de ces complexes sont intégrés dans la membrane lipidique de ces vésicules, ce qui permet d'obtenir une relaxivité (signal IRM) élevée pour une détection de la zone physiologique étudiée et modifier le temps de relaxation du 19F. La partie hydrophile (la partie hydrophile que représente le chélate auquel est attaché un groupe lipophile de manière à prendre le chélate lipophile) est localisée à la surface externe des nanogouttelettes, en contact avec la phase aqueuse de la solution de nanogouttelettes. On connaît aussi des émulsions huile dans eau et non fluorées, comprenant des chélates de lanthanides pour l'IRM uniquement du proton. The present invention relates to new nanoemulsions and new processes for the preparation of nanoemulsions, and their use as contrast agents, especially in MRI. In the field of diagnostic imaging, a large number of studies have concerned lipid nanosystems of the emulsion type. Typically the emulsions used are in the form of vesicles prepared using lipid constituents (oil in particular) and surfactants (also called surfactants) serving as interface between the aqueous phase and the lipid core of the nanodroplet. The oil-in-water lipid emulsions incorporate a lipophilic oily phase, forming droplets in aqueous solution. A particular class of emulsions described in particular in W003 / 062198 or US 6,676,963 is that of fluorinated nanoemulsions comprising, integrated within the lipid vesicles, fluorinated compounds comprising fluorine atoms F19 used for Magnetic Resonance Imaging. MRI. Indeed fluorine has particular interest compared to the MRI of the proton to be almost absent in the biological systems in the free state which allows it to be recognized as an excellent quantitative probe in the fluorine form F19 . The core is formed of a fluorinated oil, and surrounded by a lipid layer formed by a surfactant (lecithin for example). These fluorinated emulsions may furthermore comprise a very large number of paramagnetic metal complexes, in particular lanthanides, to associate the MRI of fluorine 19F and proton 1H. Thus, fluorine emulsions for MRI incorporating chelates capable of complexing lanthanides, in particular gadolinium, are known. The chelates used are in particular derivatives of DTPA, DOTA, DOSA, HPDO3A and other chelates widely described in the prior art. These hydrophilic chelates are rendered lipophilic by grafting them with a lipophilic zone such as a phospholipid, which makes it possible to integrate them into the lipid membrane that forms the lipid surfactant of the composition. Several thousand (about 5000 to 100,000) of these complexes are integrated in the lipid membrane of these vesicles, which allows to obtain a high relaxivity (MRI signal) for a detection of the physiological zone studied and to modify the relaxation time of the 19F. The hydrophilic part (the hydrophilic part which represents the chelate to which a lipophilic group is attached so as to take the lipophilic chelate) is located on the outer surface of the nanodroplets, in contact with the aqueous phase of the nanodroplet solution. Also known are oil-in-water and non-fluorinated emulsions, including lanthanide chelates for MRI only of the proton.

En outre, afin d'obtenir un signal spécifique de zones pathologiques, par exemple associés à une surexpression d'un marqueur de ces zones (récepteurs par exemple), des molécules de ciblage (ou biovecteurs, peptide par exemple ayant une affinité pour le récepteur) ont été greffés sur les nanogouttelettes des ces émulsions fluorées. In addition, in order to obtain a specific signal of pathological zones, for example associated with overexpression of a marker of these zones (for example receptors), targeting molecules (or biovectors, for example peptide having an affinity for the receptor ) were grafted onto the nanodroplets of these fluorinated emulsions.

W003/062198 décrit en particulier l'utilisation de composés peptidomimétiques pour cibler des intégrines surexprimmées dans des zones tumorales. Pour l'incorporation à la membrane lipidique, les biovecteurs sont rendus lipophiles en les associant à des chaînes lipophiles. Toutefois, malgré des avancées prometteuses, les agents de contraste fluorés et le cas échéant vectorisés décrits n'ont pas encore démontré totalement leur efficacité clinique, et posent des difficultés notamment en matière de stabilité dans la durée. En particulier une durée de conservation de plus de 9 mois est difficile à atteindre, alors que la stabilité recherchée est d'au moins un an et de préférence de l'ordre de 2 à 3 ans. Un problème technique complexe reste l'optimisation des constituants, notamment l'huile et les surfactants. Il s'agit ici d'émulsions directes de type huile dans eau (H/E), dont la phase dispersée est lipophile et la phase continue hydrophile. La non miscibilité des deux phases a pour conséquence l'existence d'interface entre l'eau et l'huile, ce qui coûte de l'énergie au système. Cette énergie est quantifiée par la tension interfaciale notée y (énergie par unité de surface). Grâce à leur double affinité, les molécules amphiphiles utilisées comme tensioactif (ou surfactant) peuvent s'adsorber aux interfaces et ainsi diminuer la tension interfaciale. Les molécules amphiphiles particulièrement considérées ici sont des phospholipides. Lorsque de l'énergie mécanique est fournie au système, la quantité d'interface entre les deux fluides non miscibles est augmentée et l'une des deux phases est fragmentée sous forme de gouttelettes. La présence des molécules amphiphiles à l'interface va ralentir le retour à la séparation de phase (voir figure 1). Ces agents de surface peuvent être de natures différentes : tensioactif classique, polymère, phospholipide, particule... Ils induisent des répulsions stériques ou électrostatiques entre les gouttes. WO03 / 062198 describes in particular the use of peptidomimetic compounds for targeting integrins overexpressed in tumor areas. For incorporation into the lipid membrane, biovectors are rendered lipophilic by combining them with lipophilic chains. However, despite promising advances, fluorinated contrast agents and optionally vectorized described have not yet fully demonstrated their clinical effectiveness, and pose difficulties including stability over time. In particular a shelf life of more than 9 months is difficult to achieve, while the desired stability is at least one year and preferably of the order of 2 to 3 years. A complex technical problem remains the optimization of constituents, including oil and surfactants. These are direct emulsions of oil-in-water (O / W) type, the dispersed phase of which is lipophilic and the continuous hydrophilic phase. The immiscibility of the two phases results in the existence of interface between the water and the oil, which costs energy to the system. This energy is quantified by the interfacial tension denoted y (energy per unit area). Thanks to their double affinity, the amphiphilic molecules used as surfactant (or surfactant) can be adsorbed at the interfaces and thus reduce the interfacial tension. The amphiphilic molecules particularly considered here are phospholipids. When mechanical energy is supplied to the system, the amount of interface between the two immiscible fluids is increased and one of the two phases is fragmented into droplets. The presence of the amphiphilic molecules at the interface will slow down the return to phase separation (see Figure 1). These surfactants can be of different natures: conventional surfactant, polymer, phospholipid, particle ... They induce steric or electrostatic repulsions between the drops.

Généralement, les stabilisants sont des tensioactifs et ne sont pas ancrées irréversiblement à l'interface. Au dessus de la concentration micellaire critique (CMC) les molécules amphiphiles s'auto-assemblent dans la phase continue et elles adoptent des formes variées fonction de plusieurs facteurs. Il existe alors un équilibre dynamique avec échange continuel entre les molécules adsorbées à l'interface et en excès dans la phase continue. Generally, the stabilizers are surfactants and are not anchored irreversibly at the interface. Above the critical micelle concentration (CMC) amphiphilic molecules self-assemble in the continuous phase and they adopt various forms depending on several factors. There is then a dynamic equilibrium with continuous exchange between the adsorbed molecules at the interface and in excess in the continuous phase.

Il existe deux mécanismes de destruction des émulsions (déstabilisation irréversible) qui font évoluer le système vers la séparation macroscopique des phases. Ces deux instabilités sont la coalescence et le mûrissement d'Ostwald. La coalescence correspond à la rupture du film de surfactants séparant deux gouttes en contact, entraînant ainsi la fusion de celles-ci (Voir figure 2). Le mûrissement d'Ostwald est dû au transfert de la phase dispersée à travers la phase continue, des petites gouttes vers les plus grosses sous l'effet de leur différence de pression interne : la pression dans les gouttes est en effet d'autant plus grande que leur rayon est faible (loi de Laplace : PLaplace= 2y/R). Ce transfert a lieu afin d'égaliser les pressions internes (Voir figure 3). Le mûrissement d'Ostwald domine pour les gouttes de petite taille tandis que la coalescence est le mécanisme majoritaire pour les gouttes de grande taille. Lors de la déstabilisation de la nanoémulsion, l'augmentation de la taille des gouttes s'accompagne d'une diminution de la quantité d'interface eau-huile S : (S=6V/D), où V est le volume d'huile et D le diamètre des gouttelettes et d'une désorption du stablisant. Dans une émulsion, les deux mécanismes de déstabilisation ont lieu, avec murissement d'ostwald puis coalescence au cours du temps. L'objectif est de réaliser des nanoémulsions directes stables dans le temps, dont les interfaces sont recouvertes par un mélange de phospholipides naturels (PL) et de phospholipides modifiés (PLM). Le demandeur a réussi à obtenir des nanoémulsions comprenant des gouttelettes le cas échéant vectorisées : - suffisamment stables pour être produites et conservées une longue durée (plusieurs mois à plusieurs années), en particulier en limitant les problèmes de coalescence des gouttelettes lipidiques entre elles - suffisamment stables in vivo pour ne pas être dégradées - adaptées sur le plan de la pharmacocinétique - suffisamment efficaces en terme de signal pour l'imagerie clinique (IRM en particulier) chez le patient. There are two mechanisms of destruction of emulsions (irreversible destabilization) that make the system evolve towards the macroscopic phase separation. These two instabilities are the coalescence and ripening of Ostwald. The coalescence corresponds to the rupture of the film of surfactants separating two drops in contact, thus causing the fusion of these (See Figure 2). The Ostwald ripening is due to the transfer of the dispersed phase through the continuous phase, from the small drops to the larger ones under the effect of their internal pressure difference: the pressure in the drops is indeed greater. that their radius is weak (Laplace's law: PLaplace = 2y / R). This transfer takes place in order to equalize the internal pressures (See Figure 3). Ostwald ripening dominates for small drops while coalescence is the predominant mechanism for large drops. During the destabilization of the nanoemulsion, the increase in the size of the drops is accompanied by a decrease in the amount of water-oil interface S: (S = 6V / D), where V is the volume of oil and D the diameter of the droplets and desorption of the stablizer. In an emulsion, the two mechanisms of destabilization take place, with ripening of ostwald then coalescence over time. The objective is to achieve direct nanoemulsions stable over time, whose interfaces are covered by a mixture of natural phospholipids (PL) and modified phospholipids (PLM). The applicant has succeeded in obtaining nanoemulsions including droplets where appropriate vectorized: - stable enough to be produced and kept a long duration (several months to several years), in particular by limiting the problems of coalescence of the lipid droplets between them - sufficiently stable in vivo so as not to be degraded - adapted in terms of pharmacokinetics - sufficiently effective in terms of signal for clinical imaging (MRI in particular) in the patient.

A cet effet, la demande fournit des nanoémulsions huile dans l'eau comprenant une phase aqueuse et une phase huile fluorée. Au sens de la présente demande, par nanoémulsion, on entend que la taille des gouttelettes est comprise entre 1 et 1000 nm. La taille des gouttelettes est typiquement de 50 à 400 nm, avantageusement 100 à 350 nm, notamment 150 à 300 nm, en particulier 200 à 250 nm. Les gouttelettes sont également appelées « gouttes » ci-après. Les gouttelettes ont une taille suffisamment petite pour leur permettre de circuler dans les milieux biologiques sans dégradation du produit. For this purpose, the application provides oil-in-water nanoemulsions comprising an aqueous phase and a fluorinated oil phase. For the purposes of the present application, nanoemulsion means that the size of the droplets is between 1 and 1000 nm. The size of the droplets is typically 50 to 400 nm, advantageously 100 to 350 nm, in particular 150 to 300 nm, in particular 200 to 250 nm. The droplets are also called "drops" below. The droplets are small enough to allow them to circulate in biological media without degradation of the product.

Dans les nanoémulsions selon l'invention, la phase aqueuse est avantageusement de l'eau ou une solution aqueuse pharmaceutiquement acceptable telle qu'une solution saline, une solution tampon. Dans les nanoémulsions selon l'invention, pour la phase huile fluorée, toute huile fluorée appropriée peut être utilisée, en particulier les huiles fluorées déjà utilisées en imagerie médicale. L'huile fluorée est notamment un huile choisie parmi les huiles incluant des perfluorocarbones linéaires ou ramifiés, ou cycliques ou polycycliques, saturés ou insaturés, des amines tertiaires cycliques perfluorées, des perfluoro esters ou thioesters, des haloperfluorocarbones et composés connus analogues ou dérivés. In the nanoemulsions according to the invention, the aqueous phase is advantageously water or a pharmaceutically acceptable aqueous solution such as a saline solution or a buffer solution. In the nanoemulsions according to the invention, for the fluorinated oil phase, any suitable fluorinated oil may be used, in particular the fluorinated oils already used in medical imaging. The fluorinated oil is in particular an oil chosen from oils including linear or branched, cyclic or polycyclic, saturated or unsaturated perfluorocarbons, cyclic perfluorinated tertiary amines, perfluoro esters or thioesters, haloperfluorocarbons and analogous or derived known compounds.

Avantageusement au moins 60% des atomes d'hydrogène de l'huile hydrocarbonée correspondante sont remplacés par un atome de fluor. Typiquement ces huiles fluorées sont des chaînes de 2 à 16 atomes, perfluoroalkanes, bis(perfluoroalkyle)alcènes, perfluoréthers, perfluoroamines, perfluoroalkyle bromures, perfluoroalkyle chlorures. Selon des réalisations avantageuses, la nanogouttelette lipidique inclut des perfluorocarbones tels que décrits dans US 5,958,371, la nanoémulsion liquide contenant des nanogouttelettes comportant un perfluorocarbone à point d'ébullition assez élevé (par exemple entre 30 et 150 °C, de préférence entre 50 et 150°C) entouré d'un revêtement composé d'un lipide et/ou d'un surfactant. Les huiles perfluorées pour nanoémulsions de perfluorocarbone pour imagerie IRM sont rappelées notamment dans les documents US 6 676 963, US 4,927,623, US 5,077,036, US5,114,703, US5,171,755, US5,304,325, US5,350,571, US5,393,524, US5,403,575 ; notamment les huiles : perfluorooctylbromide PFOB, C8F17Br (PFOB ou perfluorobron), perfluorooctyléthane (C8F17C2H5 PFOE), perfluorodecalin FDC, perfluorooctane C8F18, perfluorodichlorooctane, bromure de perfluoro-n-octyl, perfluoroheptane, perfluorodécane Cl 0F22, perfluorododécyle bromide Cl OF22Br PFDB, perfluorocyclohexane, perfluoromorpholine, perfluorotripropylamine, perfluorotributylamine, perfluorodiméthylcyclohexane, perfluorotriméthylcyclohexane, ester de perfluorodicyclohexyl, perfluoro-n- butyltétrahydrofurane. On inclut dans la définition des huiles fluorées les huiles de formule C, F 2n+1 X, XOn F2n X, où n est un nombre entier variant de 2 à 10, X = Br, Cl ou I notamment : 1bromo-F-butane (n-C4 F9 Br), 1-bromo-F-hexane (n-C6 F13 Br), 1-bromo-Fheptane (n-C7 F15 Br), 1,4-dibromo-F-butane et 1,6-dibromo-F-hexane. On inclut aussi des composés fluorés avec des substituants chlorés par exemple: perfluorooctyl chloride (n-C8 F17 Cl), 1,8-dichloro-F-octane (n-CI C8 F16 Cl), 1,6-dichloro- F-hexane (n-CIC6 F12 Cl), et 1,4-dichloro-F-butane (n-CI C4 F8 Cl). On inclut aussi les huiles fluorées de formule C, F 2n+1 OCrn F 2m±1, C, F 2n+1 CH=CHCm F 2m+1, par exemple : C4 F9 CH=CHC4 F9 (F-44E), i-C3 F9 CH=CHC6 F13 (F- i36E), C6 F13 CH=CHC6 F13 (F-66E)) où n et m sont identiques ou différentes, et sont des entiers compris entre 2 et 12. On inclut aussi des composés polycycliques ou cycliques tels que : 010 F18 (F- decalin ou perfluorodecalin), et des mélanges de perfluoroperhydrophenanthrene et de perfluoro n-butyldecalin. On inclut aussi des amines perfluorées, telles que : F-tripropylamine ("FTPA"), Ftributylamine ("FTBA"), F-4-methyloctahydroquinolizine ("FMOQ"), F-N-methyldecahydroisoquinoline ("FMIQ"), F-N-methyldecahydroquinoline ("FHQ"), F-Ncyclohexylpyrrolidine ("FCHP"), F-2- butyltetrahydrofuran ("FC-75" or "FC-77"). Advantageously, at least 60% of the hydrogen atoms of the corresponding hydrocarbon oil are replaced by a fluorine atom. Typically these fluorinated oils are chains of 2 to 16 atoms, perfluoroalkanes, bis (perfluoroalkyl) alkenes, perfluoroethers, perfluoroamines, perfluoroalkyl bromides, perfluoroalkyl chlorides. According to advantageous embodiments, the lipid nanodroplet includes perfluorocarbons as described in US Pat. No. 5,958,371, the liquid nanoemulsion containing nanodroplets comprising a perfluorocarbon with a relatively high boiling point (for example between 30 and 150 ° C., preferably between 50 and 150 ° C. ° C) surrounded by a coating composed of a lipid and / or a surfactant. The perfluorinated oils for perfluorocarbon nanoemulsions for MRI imaging are recalled in particular in the documents US 6,676,963, US 4,927,623, US 5,077,036, US5,114,703, US5,171,755, US5,304,325, US5,350,571, US5,393,524, US5,403,575. ; in particular the oils: perfluorooctylbromide PFOB, C8F17Br (PFOB or perfluorobron), perfluorooctylethane (C8F17C2H5 PFOE), perfluorodecalin FDC, perfluorooctane C8F18, perfluorodichlorooctane, perfluoro-n-octyl bromide, perfluoroheptane, perfluorodecane Cl 0F22, perfluorododecyl bromide Cl OF22Br PFDB, perfluorocyclohexane, perfluoromorpholine, perfluorotripropylamine, perfluorotributylamine, perfluorodimethylcyclohexane, perfluorotrimethylcyclohexane, perfluorodicyclohexyl ester, perfluoro-n-butyltetrahydrofuran. Included in the definition of fluorinated oils are oils of formula C, F 2n + 1 X, XOn F 2n X, where n is an integer ranging from 2 to 10, X = Br, Cl or I in particular: 1-bromo-F-butane (n-C4 F9 Br), 1-bromo-F-hexane (n-C6 F13 Br), 1-bromo-heptane (n-C7 F15 Br), 1,4-dibromo-F-butane and 1,6- dibromo-F-hexane. Fluorinated compounds are also included with chlorinated substituents, for example: perfluorooctyl chloride (n-C8 F17 Cl), 1,8-dichloro-F-octane (n-Cl C8 F16 Cl), 1,6-dichloro-F-hexane (n-CIC6 F12 Cl), and 1,4-dichloro-F-butane (n-Cl C4 F8 Cl). Also included are fluorinated oils of formula C, F 2n + 1 OCrn F 2m ± 1, C, F 2n + 1 CH = CHCm F 2m + 1, for example: C 4 F 9 CH = CHC 4 F 9 (F-44E), i -C3 F9 CH = CHC6 F13 (F-36E), wherein C6 F13 CH = CHC6 F13 (F-66E)) where n and m are the same or different, and are integers between 2 and 12. Also included are polycyclic compounds or cyclic such as: 010 F18 (F-decalin or perfluorodecalin), and mixtures of perfluoroperhydrophenanthrene and perfluoro n-butyldecalin. Perfluorinated amines, such as: F-tripropylamine ("FTPA"), tributylamine ("FTBA"), F-4-methyloctahydroquinolizine ("FMOQ"), FN-methyldecahydroisoquinoline ("FMIQ"), FN-methyldecahydroquinoline ( "FHQ"), F-Ncyclohexylpyrrolidine ("FCHP"), F-2-butyltetrahydrofuran ("FC-75" or "FC-77").

Selon un premier aspect, l'invention concerne une nanoémulsion (également désignée composition de nanoémulsion) huile dans eau, notamment pour IRM, comprenant : - une phase aqueuse - une phase huile fluorée - un tensioactif à l'interface entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, le tensioactif formant une couche de tensioactif entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, la dite nanoémulsion comprenant en outre un agent compatibilisant formant une couche supplémentaire s'intercalant entre la phase huile fluorée et la couche de tensioactif. According to a first aspect, the invention relates to a nanoemulsion (also called nanoemulsion composition) oil in water, especially for MRI, comprising: - an aqueous phase - a fluorinated oil phase - a surfactant at the interface between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, the surfactant forming a surfactant layer between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, said nanoemulsion further comprising a compatibilizer forming an additional layer interposed between the fluorinated oil phase and the surfactant layer.

Selon des réalisations préférées, l'agent compatibilisant est une huile hydrocarbonée (non fluorée) comprenant au moins 70%, avantageusement au moins 80%, de façon avantageuse au moins 95% en poids, notamment au moins 97 %, d'acides gras saturés en C6-C18, avantageusement en C6-C14, plus avantageusement en C6-C10. According to preferred embodiments, the compatibilizing agent is a hydrocarbon-based (non-fluorinated) oil comprising at least 70%, advantageously at least 80%, advantageously at least 95% by weight, in particular at least 97%, of saturated fatty acids. C6-C18, advantageously C6-C14, more preferably C6-C10.

On entend par le terme acide gras désigner des acides carboxyliques aliphatiques présentant une chaîne carbonée d'au moins 6 atomes de carbone. Les acides gras naturels possèdent une chaîne carbonée de 4 à 28 atomes de carbone (généralement un nombre pair). On parle d'acide gras à longue chaîne pour une longueur de 14 à 22 carbones et à très longue chaîne s'il y a plus de 22 carbones. On parle au contraire d'acide gras à courte chaîne pour une longueur de 6 à 10 carbones, en particulier 8 ou 10 atomes de carbone. L'homme du métier connaît la nomenclature associée et en particulier utilise : - Cn-Cp pour désigner une fourchette d'acides gras en Cn à Cp - et Cn+Cp, le total des acides gras en Cn et des acides gras en Cp Par exemple : - les acides gras entre 14 et 18 atomes de carbone s'écrivent acides gras en C14-C18 - le total des acides gras en C16 et des acides gras en C18 s'écrit C16 +C18 Très avantageusement, l'huile hydrocarbonée comprend moins de 10%, de préférence moins de 5% d'acides gras insaturés, en particulier moins de 5%, et de préférence moins de 2%, moins de 1% d'acides gras insaturés en C14-018 ou en C14- C22. By the term fatty acid is meant aliphatic carboxylic acids having a carbon chain of at least 6 carbon atoms. Natural fatty acids have a carbon chain of 4 to 28 carbon atoms (usually an even number). Long-chain fatty acids with a length of 14 to 22 carbons and a very long chain are called if there are more than 22 carbons. On the contrary, short-chain fatty acid is used for a length of 6 to 10 carbons, in particular 8 or 10 carbon atoms. Those skilled in the art know the associated nomenclature and in particular use: - Cn-Cp to designate a range of Cn to Cp - and Cn + Cp fatty acids, the total of Cn fatty acids and Cp-fatty acids for example: - the fatty acids between 14 and 18 carbon atoms are written C14-C18 fatty acids - the total of C16 fatty acids and C18 fatty acids is written C16 + C18 Very advantageously, the hydrocarbon oil comprises less than 10%, preferably less than 5% of unsaturated fatty acids, in particular less than 5%, and preferably less than 2%, less than 1% unsaturated C14-C18 or C14-C22 fatty acids .

Par exemple l'huile est le MIGLYOL®, 0 )\---R 0 0 , OH R-0 0 \r0 R c (R = C8+ C10) >95% P03040 ou l'un des ses dérivés connus, par exemple le MIGLYOL® 810 ou MIGLYOL® 812 (caprylic/capric triglyceride), MIGLYOL® 818 (caprylic/capric/linoleic triglyceride), le MIGLYOL® 612 (glyceryl trihexanoate), d'autres dérivés MIGLYOL® propylène glycol dicaprylate dicaprate. Par exemple le Miglyol® 812 a la composition suivante : Acide Caproïque (06_0) : max 2 % Acide Caprylïque (C8_0) : 50 à 65 % Acide Caprique (Cio_o) : 30 à 45 % Acide Laurique (C12_0) : max 2 % Acide Miristique (014_0) : max 1 % Acide Linoleique (018_2) : Selon des variantes, l'huile hydrocarbonée saturée est un mélange d'huiles saturées comprenant chacune au moins 70%, de préférence au moins 80, 90, 95% d'acides gras saturés de 6 à 10 atomes de carbone. Selon des réalisations, l'huile hydrocarbonée saturée est une huile saturée comprenant au moins 70%, de préférence au moins 80, 90, 95% d'acides gras saturés de 12 à 18 atomes de carbone, ou comprenant un mélange d'huiles saturées comprenant chacune au moins 70%, de préférence au moins 80, 90, 95% d'acides gras saturés de 12 à 18 atomes de carbone. De préférence, les acides gras saturés des huiles saturée utilisées par le demandeur sont utilisés sous forme de mono, di ou triglycérides, de préférence triglycérides. De manière préférée, l'huile hydrocarbonée des nanoémulsions du demandeur comprend des acides gras saturés dans les variantes suivantes : C6-C18 > 70%, de préférence C6-C18 > 80% de préférence C6-C18 >95%, et encore de préférence C6-C18 > 98% C6-C14 > 70%, de préférence C6-C14 > 80% de préférence C6-C14 >95%, et encore de préférence C6-C14 > 98% C8+C10 > 70%, de préférence C8+C10 > 80% de préférence C8+C10 >95%, et encore de préférence C8+C10 > 98% C8 compris entre 40 et 70% de préférence 50 à 65% et/ou 010 compris entre 20 et 50% de préférence 30 à 45%, le total C8+C10 étant supérieur à 80%. Par souci de simplification, il est indiqué que la nanoémulsion comprend un tensioactif. Il est clair pour l'homme du métier qu'il s'agit d'au moins un tensioactif (par exemple un mélange de tensioactifs) formant une couche de tensioactif entre la phase huileuse et la phase aqueuse, et désigné également « tensioactifs totaux » dans la demande. Le tensioactif comprend généralement un ou plusieurs lipides amphiphiles, qui comportent une partie hydrophile et une partie lipophile. Ils sont généralement choisis parmi les composés dont la partie lipophile comprend une chaîne saturée ou insaturée, linéaire ou ramifiée, ayant de 8 à 30 atomes de carbone. Avantageusement le lipide amphiphile est un phospholipide, de préférence choisi parmi : phosphatidylcholine dioléoylphosphatidylcholine, dimyristoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylcholine, distéaroylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, sphingomyéline, phosphatidylsérine, phosphatidylinositol. La lécithine est un lipide amphiphile préféré. Le Lipoïde, par exemple E80 est aussi un lipide préféré. Le lipide amphiphile peut aussi être choisi aussi parmi les cholestérols, les lysolipides, les sphingomyélines, les tocophérols, les glucolipides, stéarylamines, les cardiolipines d'origine naturelle ou synthétique ; les molécules composées d'un acide gras couplé à un groupement hydrophile par une fonction éther ou ester tels que les esters de sorbitan comme par exemple les monooléate et monolaurate de sorbitan ; les lipides polymérisés ; les esters de sucre tels que les mono-et di-laurate, mono- et di-palmitate, mono- et distéarate de saccharose; lesdits lipides amphiphiles pouvant être utilisés seuls ou en mélanges. Avantageusement le lipide amphiphile est un lipoïde, notamment le lipoide E80. Selon un mode de réalisation particulier, tout ou partie du lipide amphiphile peut posséder une fonction réactive, telle qu'un groupe maléimide, thiol, amine, ester, oxyamine ou aldéhyde. La présence de fonctions réactives permet le greffage de composés fonctionnels au niveau de l'interface entre les nanogouttelettes et la phase aqueuse continue. For example, the oil is MIGLYOL.RTM. (R = C8 + C10)> 95% P03040 or one of its known derivatives, for example MIGLYOL® 810 or MIGLYOL® 812 (caprylic / capric triglyceride), MIGLYOL® 818 (caprylic / capric / linoleic triglyceride), MIGLYOL® 612 (glyceryl trihexanoate), other MIGLYOL® propylene glycol dicaprylate dicaprate derivatives. For example Miglyol® 812 has the following composition: Caproic acid (06_0): max 2% Caprylic acid (C8_0): 50 to 65% Caprique acid (Cio_o): 30 to 45% Lauric acid (C12_0): max 2% Acid Miristique (014_0): max 1% Linoleic acid (018_2): According to variants, the saturated hydrocarbon oil is a mixture of saturated oils each comprising at least 70%, preferably at least 80, 90, 95% of acids. saturated fats of 6 to 10 carbon atoms. According to embodiments, the saturated hydrocarbon oil is a saturated oil comprising at least 70%, preferably at least 80, 90, 95% of saturated fatty acids of 12 to 18 carbon atoms, or comprising a mixture of saturated oils. each comprising at least 70%, preferably at least 80, 90, 95% saturated fatty acids of 12 to 18 carbon atoms. Preferably, the saturated fatty acids of the saturated oils used by the applicant are used in the form of mono-, di- or triglycerides, preferably triglycerides. Preferably, the hydrocarbon oil of the applicant's nanoemulsions comprises saturated fatty acids in the following variants: C6-C18> 70%, preferably C6-C18> 80%, preferably C6-C18> 95%, and more preferably C6-C18> 98% C6-C14> 70%, preferably C6-C14> 80%, preferably C6-C14> 95%, and more preferably C6-C14> 98% C8 + C10> 70%, preferably C8 + C10> 80%, preferably C8 + C10> 95%, and more preferably C8 + C10> 98% C8 between 40 and 70%, preferably 50 to 65%, and / or 010 between 20 and 50% preferably at 45%, the total C8 + C10 being greater than 80%. For simplicity, it is stated that the nanoemulsion comprises a surfactant. It is clear to those skilled in the art that it is at least one surfactant (for example a surfactant mixture) forming a surfactant layer between the oily phase and the aqueous phase, and also referred to as "total surfactants". in the application. The surfactant generally comprises one or more amphiphilic lipids, which comprise a hydrophilic part and a lipophilic part. They are generally chosen from compounds whose lipophilic part comprises a saturated or unsaturated, linear or branched chain having from 8 to 30 carbon atoms. Advantageously, the amphiphilic lipid is a phospholipid, preferably chosen from: phosphatidylcholine dioleoylphosphatidylcholine, dimyristoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylcholine, distearoylphosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, sphingomyelin, phosphatidylserine, phosphatidylinositol. Lecithin is a preferred amphiphilic lipid. Lipoid, for example E80 is also a preferred lipid. The amphiphilic lipid may also be chosen also from cholesterols, lysolipids, sphingomyelins, tocopherols, glucolipids, stearylamines, cardiolipins of natural or synthetic origin; molecules composed of a fatty acid coupled to a hydrophilic group by an ether or ester function such as sorbitan esters such as, for example, sorbitan monooleate and monolaurate; polymerized lipids; sugar esters such as mono- and di-laurate, mono- and di-palmitate, mono- and distearate sucrose; said amphiphilic lipids may be used alone or in mixtures. Advantageously, the amphiphilic lipid is a lipoid, in particular lipoid E80. According to a particular embodiment, all or part of the amphiphilic lipid may have a reactive function, such as a maleimide, thiol, amine, ester, oxyamine or aldehyde group. The presence of reactive functions allows the grafting of functional compounds at the interface between the nanodroplets and the continuous aqueous phase.

On pourra utiliser pour la couche de tensioactif, en plus du lipide amphiphile, de manière non obligatoire, et en particulier afin d'agir sur le caractère furtif du produit dans l'organisme, des lipides pégylés c'est à dire porteurs de groupes oxyde de polyéthylène (PEG), tels que le polyéthylèneglycol/phosphatidyl-éthanolamine (PEG-PE). Par « polyéthylèneglycol » PEG, au sens de la présente demande, on désigne de façon générale, des composés comprenant une chaîne -CH2-(CH2-0-CH2)k-CH2OR3 dans laquelle k varie de 2 à 100 (par exemple 2, 4, 6, 10, 50), et R3 est choisi parmi H, alkyle ou -(CO)Alk, le terme "alkyle" ou "alk" désignant un groupe aliphatique hydrocarboné, linéaire ou ramifié, ayant environ de 1 à 6 atomes de carbone dans la chaîne. Le terme « polyéthylèneglycol » tel qu'employé ici englobe notamment les composés aminopolyéthylèneglycols, tels que des DSPE-PEG (DSPE : Distéaroyle phosphatidyle éthanolamine). On citera notamment les PEG 350, 750, 2000, 3000, 5000, modifiés par ajout de groupements amphiphiles pour s'insérer au sein de la couche de tensioactif de la nanogouttelette, notamment : -1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethylene glycol)-350] -1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethylene glycol)- 550], - 1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethylene glycol)-20 750] On utilisera notamment le lipide pégylé : 0 ) 4. H 11 o f---___0 / .0 ''N 0 _ _45 0 Dans un mode de réalisation préféré, le tensioactif comprend (ou est constitué 25 de) un mélange de lipoïde (lipide amphiphile) et de DSPE-PEG (lipide pégylé), en particulier de Lipoïd E80 et de DSPE-PEG 2000. Avantageusement la couche de tensioactif inclut au moins un ligand de ciblage amphiphile d'une zone physiologique (également appelé biovecteur), le ligand de ciblage amphiphile représentant 0,1 à 10% en mole du total de la couche de tensioactif, 30 avantageusement 0.05 à 5%, notamment 1 à 2 %. Les gouttelettes des nanoémulsions comprennent typiquement chacune un nombre de ligands de ciblage amphiphile de l'ordre de 100 à 5000, notamment 500 à 2000, ce qui permet le ciblage efficace selon l'affinité et la multivalence du ligand de ciblage. 35 Dans un mode de réalisation, le tensioactif de la nanoémulsion selon l'invention est un agent tensioactif anionique. Ainsi, l'invention concerne une nanoémulsion huile dans eau, notamment pour IRM, comprenant : - une phase aqueuse - une phase huile fluorée - un tensioactif à l'interface entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, le tensioactif étant un agent tensioactif anionique. Le demandeur a en effet constaté que l'utilisation d'au moins un agent tensioactif anionique (dont la partie hydrophile est chargée négativement, typiquement par un groupe carboxylate ou sulfonate) permet d'augmenter la stabilité de la nanoémulsion. Le tensioactif anionique est choisi parmi les tensioactifs connus et utilisables selon la Pharmacopée, notamment le SDS (dodécyle sulfate de sodium). Ce mode de réalisation est avantageux notamment dans le cas des nanoémulsions décrites dans la demande qui comprennent un agent compatibilisant formant couche entre la phase huile fluorée et la couche de tensioactif. Selon des réalisations très avantageuses, la nanoémulsion huile dans eau comprend : une phase aqueuse, représentant de préférence 29.3 à 80 % en poids de la composition, avantageusement 55 à 65%, plus avantageusement de 58 à 62%, une phase fluorée comprenant au moins une huile fluorée, représentant 19.3 à 70% en poids de la composition, avantageusement 35 à 45%, plus avantageusement 37 à 42%, un tensioactif (formant la couche de tensioactif) à l'interface entre les phases aqueuse et fluorée, un agent compatibilisant formant une couche entre la phase huile fluorée et la couche de tensioactif, la teneur totale en tensioactif en poids par rapport à l'huile étant comprise entre 3 et 15%, avantageusement entre 6 et 12 % ; la teneur totale en tensioactif en poids par rapport à la composition étant comprise entre 0.6 et 10 %, avantageusement entre 1 et 3 % ; la teneur totale en agent compatibilisant étant comprise entre 0.1 % et 5% massique par rapport à la phase aqueuse. De manière particulièrement avantageuse, les nanoémulsions du demandeur huile dans eau, notamment pour IRM, comprennent : - une phase aqueuse - une phase huile fluorée - un tensioactif à l'interface entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, la phase fluorée comprenant une première huile fluorée et au moins une deuxième huile fluorée. Le demandeur a en effet constaté qu'un mélange d'huiles fluorées permet d'augmenter la stabilité de la nanoémulsion. Avantageusement la première huile fluorée représente entre 70 et 95% massique de la phase huile fluorée et la deuxième huile fluorée représente 5 à 30% massique de la phase huile fluorée. Avantageusement les huiles fluorées sont choisies parmi les huiles fluorées décrites dans la présente demande. Très avantageusement, la première huile fluorée est le PFOB, la deuxième huile fluorée est une huile de plus longue chaîne moléculaire de préférence le perfluorohexadécane PFHD ou le perfluorodécylbromide PFDB. Par exemple le ratio est 10% massique en PFHD ou PFDB et de 90% massique en PFOB. Ce mode de réalisation est avantageux notamment dans le cas des nanoémulsions décrites dans la demande qui comprennent un agent compatibilisant formant couche entre la phase huile fluorée et la couche de tensioactif. L'invention concerne ainsi selon une réalisation une nanoémulsion huile dans eau, notamment pour IRM, comprenant : - une phase aqueuse - une phase huile fluorée - un tensioactif à l'interface entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, le tensioactif formant une couche de tensioactif entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, - la dite nanoémulsion comprenant en outre un agent compatibilisant formant une couche supplémentaire s'intercalant entre la phase huile fluorée et la couche de tensioactif, la phase fluorée comprenant une première huile fluorée et au moins une deuxième huile fluorée. Selon un autre aspect, l'invention concerne une nanoémulsion huile dans eau pour IRM comprenant : - une phase aqueuse - une phase huile fluorée - un tensioactif à l'interface entre la phase aqueuse et la phase huile fluorée, la dite nanoémulsion comprenant en outre au moins agent stabilisant choisi parmi les protéines et les polysaccharides, de préférence les protéines. Le demandeur a en effet constaté que l'utilisation d'au moins une protéine ou d'un polysaccharide permet d'augmenter la stabilité de la nanoémulsion. La protéine est choisie parmi les protéines connues et utilisables selon la Pharmacopée, notamment la caséine ou la lactoglobuline et préférentiellement la lactoglobuline. Le polysaccharide est de préférence l'amidon. De préférence la protéine ou le polysaccharide est utilisée en proportion compris entre 0.1 à 5% massique par rapport à la phase aqueuse. Dans un mode de réalisation, la nanoémulsion comprend un agent compatibilisant tel que défini ci-dessus. It may be used for the surfactant layer, in addition to the amphiphilic lipid, in a non-mandatory manner, and in particular in order to act on the stealth nature of the product in the body, pegylated lipids that is to say carriers of oxide groups polyethylene (PEG), such as polyethylene glycol / phosphatidyl ethanolamine (PEG-PE). For the purposes of the present application, the term "polyethylene glycol" PEG generally denotes compounds comprising a chain -CH 2 - (CH 2 -O-CH 2) k -CH 2 OR 3 in which k varies from 2 to 100 (for example 2, 4, 6, 10, 50), and R 3 is chosen from H, alkyl or - (CO) Alk, the term "alkyl" or "alk" denoting a linear or branched hydrocarbon aliphatic group having from about 1 to 6 atoms of carbon in the chain. The term "polyethylene glycol" as used herein includes aminopolyethylene glycol compounds, such as DSPE-PEG (DSPE: Distearoyl phosphatidyl ethanolamine). PEGs 350, 750, 2000, 3000, 5000, modified by the addition of amphiphilic groups to be inserted into the surfactant layer of the nanodroplet, include: -1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3 -Phosphoethanolamine-N- [Methoxy (Polyethylene glycol) -350] -1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N- [Methoxy (Polyethylene glycol) -550], 1,2-Distearoyl-sn- Glycero-3-Phosphoethanolamine-N- [Methoxy (Polyethylene glycol) -20,750] In particular, use will be made of pegylated lipid: ## STR2 ## In a preferred embodiment, the surfactant comprises (or consists of) a mixture of lipoid (amphiphilic lipid) and DSPE-PEG (pegylated lipid), in particular Lipoid E80 and DSPE-PEG 2000. Advantageously, the surfactant layer includes at least one amphiphilic targeting ligand of a physiological zone (also called a biovector), the amphiphilic targeting ligand representing 0.1 to 10 mol% of the total of the preferably 0.05 to 5%, especially 1 to 2%. The droplets of the nanoemulsions typically each comprise a number of amphiphilic targeting ligands of the order of 100 to 5000, in particular 500 to 2000, which allows the targeting according to the affinity and the multivalence of the targeting ligand to be effective. In one embodiment, the surfactant of the nanoemulsion according to the invention is an anionic surfactant. Thus, the invention relates to an oil-in-water nanoemulsion, especially for MRI, comprising: an aqueous phase a fluorinated oil phase a surfactant at the interface between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, the surfactant being a surfactant anionic. The applicant has indeed found that the use of at least one anionic surfactant (whose hydrophilic part is negatively charged, typically with a carboxylate or sulfonate group) makes it possible to increase the stability of the nanoemulsion. The anionic surfactant is chosen from surfactants known and usable according to the Pharmacopoeia, in particular SDS (sodium dodecyl sulphate). This embodiment is particularly advantageous in the case of the nanoemulsions described in the application which comprise a compatibilizing agent forming a layer between the fluorinated oil phase and the surfactant layer. According to very advantageous embodiments, the oil-in-water nanoemulsion comprises: an aqueous phase, preferably representing 29.3 to 80% by weight of the composition, advantageously 55 to 65%, more preferably 58 to 62%, a fluorinated phase comprising at least a fluorinated oil, representing 19.3 to 70% by weight of the composition, advantageously 35 to 45%, more preferably 37 to 42%, a surfactant (forming the surfactant layer) at the interface between the aqueous and fluorinated phases, an agent compatibilizer forming a layer between the fluorinated oil phase and the surfactant layer, the total surfactant content by weight relative to the oil being between 3 and 15%, advantageously between 6 and 12%; the total content of surfactant by weight relative to the composition being between 0.6 and 10%, advantageously between 1 and 3%; the total content of compatibilizing agent being between 0.1% and 5% by weight relative to the aqueous phase. Particularly advantageously, the nanoemulsions of the applicant oil in water, in particular for MRI, comprise: - an aqueous phase - a fluorinated oil phase - a surfactant at the interface between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, the fluorinated phase comprising a first fluorinated oil and at least one second fluorinated oil. The applicant has indeed found that a mixture of fluorinated oils increases the stability of the nanoemulsion. Advantageously, the first fluorinated oil represents between 70 and 95% by weight of the fluorinated oil phase and the second fluorinated oil represents 5 to 30% by weight of the fluorinated oil phase. Advantageously, the fluorinated oils are chosen from the fluorinated oils described in the present application. Very advantageously, the first fluorinated oil is PFOB, the second fluorinated oil is an oil with a longer molecular chain, preferably perfluorohexadecane PFHD or perfluorodecylbromide PFDB. For example, the ratio is 10% by weight in PFHD or PFDB and 90% by weight in PFOB. This embodiment is particularly advantageous in the case of the nanoemulsions described in the application which comprise a compatibilizing agent forming a layer between the fluorinated oil phase and the surfactant layer. The invention thus relates, according to one embodiment, to an oil-in-water nanoemulsion, in particular for MRI, comprising: an aqueous phase a fluorinated oil phase a surfactant at the interface between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, the surfactant forming a layer of surfactant between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, the said nanoemulsion further comprising a compatibilizer forming an additional layer interposed between the fluorinated oil phase and the surfactant layer, the fluorinated phase comprising a first fluorinated oil and at least one second fluorinated oil. According to another aspect, the invention relates to an oil-in-water nanoemulsion for MRI comprising: an aqueous phase a fluorinated oil phase a surfactant at the interface between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, said nanoemulsion further comprising at least one stabilizing agent chosen from proteins and polysaccharides, preferably proteins. The applicant has indeed found that the use of at least one protein or polysaccharide makes it possible to increase the stability of the nanoemulsion. The protein is chosen from the proteins known and usable according to the Pharmacopoeia, in particular casein or lactoglobulin and preferentially lactoglobulin. The polysaccharide is preferably starch. Preferably, the protein or the polysaccharide is used in a proportion of between 0.1 and 5% by weight relative to the aqueous phase. In one embodiment, the nanoemulsion comprises a compatibilizing agent as defined above.

Dans un mode de réalisation, la phase huileuse de la nanoémulsion comprend une première huile fluorée et au moins une deuxième huile fluorée. Dans un mode de réalisation, la nanoémulsion comprend un agent compatibilisant tel que défini ci-dessus et la phase huileuse de la nanoémulsion comprend une première huile fluorée et au moins une deuxième huile fluorée. In one embodiment, the oily phase of the nanoemulsion comprises a first fluorinated oil and at least one second fluorinated oil. In one embodiment, the nanoemulsion comprises a compatibilizing agent as defined above and the oily phase of the nanoemulsion comprises a first fluorinated oil and at least one second fluorinated oil.

Selon un autre aspect, l'invention concerne un procédé de préparation d'émulsions huile dans eau, notamment pour IRM, comprenant une phase aqueuse, une phase huile fluorée, un tensioactif à l'interface entre les phases aqueuse et lipidique, le procédé comprenant les étapes : a) mélange des constituants de la phase aqueuse, de la phase fluorée, et du tensioactif, de manière à obtenir une nanoémulsion b) au moins une étape de lavage de la nanoémulsion préparée en a). Dans des réalisations, lors de l'étape de lavage, la nanoémulsion est centrifugée afin de séparer les gouttelettes de la phase continue. L'huile étant plus lourde que l'eau, les gouttes constituent le sous-nageant opaque et visqueux, tandis que la phase continue contenant l'eau et les phospholipides forment le surnageant. Ce surnageant est remplacé par une phase continue (eau ou eau salée) sans phospholipides. Selon un autre aspect, l'invention concerne l'utilisation d'une nanoémulsion telle que définie ci-dessus ou d'une nanoémulsion susceptible d'être obtenue par le procédé tel que défini ci-dessus comme agent de contraste, notamment pour une détection par imagerie par résonance magnétique (IRM). L'invention concerne également un agent de contraste comprenant une nanoémulsion telle que définie ci-dessus ou d'une nanoémulsion susceptible d'être obtenue par le procédé tel que défini ci-dessus. Les figures annexées représentent respectivement : Figure 1 : Coupe d'une goutte d'huile stabilisée par des tensioactifs Figure 2 : schéma représentant le mécanisme de la coalescence Figure 3 : schéma représentant le mûrissement d'Ostwald Figure 4 : diamètre des gouttelettes en micromètres en fonction du poids de l'ensemble [lipoide E80 et DSPE-PEG] Figure 5 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (carré) ou du DSPE-PEG (losange) ou un mélange des deux (triangle), dans le régime pauvre dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 6 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (carré) ou du DSPE-PEG (losange) ou un mélange des deux (triangle), dans le régime pauvre dans l'eau salée (0,154M NaCI) en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 7 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (losange) ou un mélange lipoide E80 / DSPE-PEG (carré), dans le régime riche dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 8 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (losange) ou un mélange lipoide E80 / DSPE-PEG (carré), dans le régime riche dans l'eau salée (0,154M NaCI) en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 9 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (carré) ou du DSPE-PEG (losange) dans le régime pauvre en fonction du nombre de lavages dans l'eau pure (exemple II. 1) Figure 10 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (carré) ou du DSPE-PEG (losange) dans le régime pauvre en fonction du nombre de lavages dans l'eau salée (0,154M NaCI) (exemple II. 1) Figure 11 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 dans le régime riche en fonction du nombre de lavages dans l'eau (exemple II. 1) Figure 12 : taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 dans le régime riche en fonction du nombre de lavages dans l'eau salée (0,154M NaCI) (exemple II. 1) Figure 13: taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (carré) ou du DSPE-PEG (losange), dans le régime pauvre dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 14: taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (carré) ou du DSPE-PEG (losange), dans le régime pauvre dans l'eau salée (0,154M NaCI) en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 15: taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (12% massique), dans le régime riche dans l'eau pure (0,154M NaCI) en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 16: taille en nm des gouttelettes comprenant du lipoide E80 (12% massique), dans le régime riche dans l'eau salée (0,154M NaCI) en fonction du temps en jours (exemple II. 1) Figure 17: taille en nm des gouttelettes dans le régime pauvre (3% mass.) dans l'eau pure en fonction du temps en jours, les triangles représentant le système de référence. (exemple II. 1) Figure 18: taille en nm des gouttelettes dans le régime pauvre (3% mass.) dans l'eau salée (0,154M NaCI) en fonction du temps en jours, les triangles représentant le système de référence. (exemple II. 1) Figure 19: taille en nm des gouttelettes dans le régime riche (12% mass.) dans l'eau pure en fonction du temps en jours, les triangles représentant le système de référence. (exemple II. 1) Figure 20: taille en nm des gouttelettes dans le régime riche (12% mass.) dans l'eau salée (0,154M NaCI) en fonction du temps en jours, les triangles représentant le système de référence. (exemple II. 1) Figure 21: taille en nm des gouttelettes dans le régime pauvre (3% mass.) dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 2) Figure 22 taille en nm des gouttelettes dans le régime riche (12% mass.) dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 2) Figure 23 : Image de CryoTEM d'une nanoémulsion de PFOB à 20% massique stabilisé par un mélange (90/10) de Lipoide E80 et de DSPE-PEG 2000 avec 0.425% massique de Miglyol par rapport à la phase aqueuse (exemple II. 2) Figure 24: taille en nm des gouttelettes comprenant du des tensioactifs anioniques (losange), cationiques (triangles) et non-ionique (carrés) de chaînes carbonés C12, dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 3) Figure 25: taille en nm des gouttelettes comprenant de la lactoglobuline ou un mélange lipoide E80 / DSPE PEG dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 3) Figure 26: taille en nm des gouttelettes comprenant de l'amidon (losange), de la caséine (carré) ou un mélange lipoide E80 / DSPE PEG (triangle), dans l'eau pure en fonction du temps en jours (exemple II. 3) Les exemples qui suivent illustrent les modes de réalisation de l'invention. PARTIE I : Fabrication et méthode de caractérisation des nanoémulsions 1 Composés utilisés Les produits utilisés pour formuler les nanoémulsions sont les suivants : Phases dispersées : (Huiles fluorées) : perfluorooctylbromide (PFOB), perfluorohexadécane (PFHD), perfluorodécylbromide (PFDB). - Phases continues : Eau distillée ou eau salée (NaCI=0,154M). - Stabilisants : Le Phospholipide naturel Lipoid E80 (PL) issu du jaune d'ceuf, composé majoritairement de Phophatidilcholine ainsi que le phospholipide modifié pégylé DSPEPEG 2000 (PLM). Cette modification du phospholipide apporte de la furtivité à la nanoémulsion, pour que la nanoémulsion ne soit pas immédiatement évacuée par le système imunitaire. Les différentes huiles et stabilisants seront utilisés ensemble ou séparément en fonction des manipulations effectuées.According to another aspect, the invention relates to a process for preparing oil-in-water emulsions, in particular for MRI, comprising an aqueous phase, a fluorinated oil phase, a surfactant at the interface between the aqueous and lipid phases, the process comprising the steps: a) mixing the constituents of the aqueous phase, the fluorinated phase, and the surfactant, so as to obtain a nanoemulsion b) at least one washing step of the nanoemulsion prepared in a). In embodiments, during the washing step, the nanoemulsion is centrifuged in order to separate the droplets from the continuous phase. Since the oil is heavier than water, the droplets are the opaque and viscous sub-oil, while the continuous phase containing water and phospholipids form the supernatant. This supernatant is replaced by a continuous phase (water or salt water) without phospholipids. According to another aspect, the invention relates to the use of a nanoemulsion as defined above or of a nanoemulsion obtainable by the method as defined above as a contrast agent, in particular for detection. magnetic resonance imaging (MRI). The invention also relates to a contrast agent comprising a nanoemulsion as defined above or a nanoemulsion obtainable by the process as defined above. The appended figures represent respectively: FIG. 1: Section of a drop of oil stabilized by surfactants FIG. 2: diagram representing the mechanism of coalescence Figure 3: diagram representing the Ostwald ripening FIG. 4: diameter of the droplets in micrometers weight function of the set [lipoide E80 and DSPE-PEG] Figure 5: size in nm of the droplets comprising lipoid E80 (square) or DSPE-PEG (rhombic) or a mixture of both (triangle), in the diet poor in pure water as a function of time in days (example II.1) Figure 6: size in nm of the droplets comprising lipoid E80 (square) or DSPE-PEG (rhombic) or a mixture of both (triangle), in the poor salt water diet (0.154 M NaCl) as a function of time in days (example II.1) Figure 7: size in nm of the droplets comprising lipoid E80 (diamond) or a lipoidal mixture E80 / DSPE-PEG (square), in the diet rich in pure water depending on the time in days (example II. 1) Figure 8: size in nm of the droplets comprising E80 lipoide (diamond) or an E80 / DSPE-PEG lipid mixture (square), in the diet rich in salt water (0.154 M NaCl) as a function of time in days (Example II.1) FIG. 9: Size in nm of the droplets comprising lipoid E80 (square) or DSPE-PEG (rhombus) in the lean diet as a function of the number of washes in pure water (Example II.1) 10: size in nm of the droplets comprising E80 lipoid (square) or DSPE-PEG (rhombus) in the lean diet as a function of the number of washes in salt water (0.154 M NaCl) (example II.1) FIG. 11: size in nm of the droplets comprising lipoide E80 in the rich diet as a function of the number of washes in the water (example II.1) FIG 12: size in nm of the droplets comprising lipoid E80 in the rich diet according to the number of washes in salt water (0.154M NaCl) (example II.1) Figure 13: size in nm of the droplets comprising ipoid E80 (square) or DSPE-PEG (rhombus), in the diet poor in pure water as a function of time in days (Example II. 1) FIG. 14: size in nm of the droplets comprising lipoid E80 (square) or DSPE-PEG (rhombus), in the lean diet in salt water (0.154 M NaCl) as a function of time in days (Example II. 1) Figure 15: size in nm of the droplets comprising lipoide E80 (12% by weight), in the diet rich in pure water (0.154M NaCl) as a function of time in days (example II.1) Figure 16: size in nm droplets comprising lipoide E80 (12% by weight), in the diet rich in salt water (0.154 M NaCl) as a function of time in days (example II.1) FIG. 17: size in nm of the droplets in the Poor diet (3% mass.) in pure water as a function of time in days, the triangles representing the reference system. (Example II.1) Figure 18: Size in nm of the droplets in the poor diet (3% mass.) in salt water (0.154M NaCl) as a function of time in days, the triangles representing the reference system. (Example II.1) Figure 19: size in nm of the droplets in the rich diet (12% mass.) in pure water as a function of time in days, the triangles representing the reference system. (Example II.1) Figure 20: Size in nm of the droplets in the rich diet (12% mass) in salt water (0.154M NaCl) as a function of time in days, the triangles representing the reference system. (Example II.1) Figure 21: Size in nm of the droplets in the lean diet (3% by mass) in pure water as a function of time in days (Example II.2) Figure 22 Size in nm of the droplets in the rich diet (12% mass.) in pure water as a function of time in days (example II.2) Figure 23: CryoTEM image of a nanoemulsion of PFOB at 20% by weight stabilized by a mixture (90/10) of Lipoide E80 and DSPE-PEG 2000 with 0.425% by weight of Miglyol relative to the aqueous phase (Example II.2) Figure 24: Size in nm of the droplets comprising anionic surfactants (rhombic), cationic (triangles) and not -ionic (squares) of carbon chains C12, in pure water as a function of time in days (example II.3) Figure 25: size in nm of the droplets comprising lactoglobulin or a lipoidal mixture E80 / DSPE PEG in the pure water as a function of time in days (example II.3) Figure 26: size in nm of the droplets comprising starch (rhombus), ca seine (square) or lipoid mixture E80 / DSPE PEG (triangle), in pure water as a function of time in days (Example II. 3) The following examples illustrate the embodiments of the invention. PART I: Manufacture and method of characterization of nanoemulsions 1 Compounds used The products used to formulate the nanoemulsions are as follows: Distributed phases: (Fluorinated oils): perfluorooctylbromide (PFOB), perfluorohexadecane (PFHD), perfluorodecylbromide (PFDB). - Continuous phases: Distilled water or salt water (NaCl = 0.154M). Stabilizers: The natural Lipoid E80 Phospholipid (PL) from egg yolk, mainly composed of Phophatidylcholine and the modified pegylated phospholipid DSPEPEG 2000 (PLM). This modification of the phospholipid brings stealth to the nanoemulsion, so that the nanoemulsion is not immediately evacuated by the immune system. The different oils and stabilizers will be used together or separately depending on the manipulations made.

2 Fabrication et caractérisation des nanoémulsions Les phospholipides (PL) et phospholipides modifiés (PLM) sont dissous sous agitation magnétique et chauffage (45°C) dans la phase continue contenant l'eau pure ou l'eau salée. Dans un premier temps, une nanoémulsion dite grossière est formée en incorporant progressivement l'huile dans la phase aqueuse sous forte agitation à l'aide de l'Ultra-Turax Cette pré-émulsion est ensuite passée au microfluidiseur afin de diminuer la taille des gouttes. La taille moyenne des gouttes dh ainsi qu'un indicateur de la largeur de distribution des tailles de goutte (PDI) sont mesurés par la diffusion dynamique de la lumière PARTIE II : amélioration de la stabilité des nanoémulsions 11.1) Utilisation de techniques de lavage La taille des gouttes obtenues en fonction de la quantité de tensiactif (lipide amphiphile lipoide E80 et lipide pégylé DSPE-PEG) a été étudiée (figure 4). Deux régimes ont été mis en évidence : un régime pauvre en stabilisant où la taille des gouttes est déterminée par la quantité de stabilisant et ne dépend pas de l'énergie mécanique apportée au système lors de l'émulsification (zone 1), ainsi qu'un régime riche en stabilisant où la taille des gouttes dépend essentiellement de l'énergie apportée (zone 2). Il a été recherché dans un premier temps, à déterminer si les phospholipides PL et PLM ont un comportement similaire à des petites molécules de tensioactifs, c'est-à- dire s'ils s'équilibrent avec des molécules en excès dans la phase continue ou si leur adsorption est irréversible. Des nanoémulsions stabilisées uniquement par du PL ou PLM en quantité correspondant au régime pauvre d'une part et au régime riche d'autre part, dans le cas du PL, ont été formulées. Ces nanoémulsions ont été réalisées dans l'eau et dans l'eau salée. Ces six nanoémulsions ont été lavées. Lors d'un cycle de lavage, la nanoémulsion est centrifugée afin de séparer la nanoémulsion de la phase continue. L'huile étant plus lourde que l'eau, les gouttes constituent le sous-nageant opaque et visqueux, tandis que la phase continue contenant l'eau et les phospholipides (en excès dans le cas du régime riche) forment le surnageant. Ce surnageant est remplacé par une phase continue (eau ou eau salée) sans phospholipide. Après homogénéisation de l'ensemble, la taille de la nanoémulsion est mesurée. Trois types d'expériences sont reportés : les nanoémulsions sont stockées et leurs tailles sont mesurées régulièrement au cours du temps (suivi cinétique), les nanoémulsions subissent des lavages afin de favoriser la désorption (désorption forcée) et un suivi cinétique est réalisé à l'issue des lavages (figures 5 à 8). On remarque que le Lipoïd E80 se désorbe très peu de l'interface puisque la taille est quasiment invariante. En revanche, le Dspe-PEG est moins efficace pour stabiliser la nanoémulsion puisque la taille des gouttes ne cesse d'augmenter. De la même manière, le mélange des deux stabilisants correspondant au système de référence (SC67-F2 ; SC46-F3 ; SC31-F2 ; SC22-F2) présente aussi une instabilité liée à la désorption des stabilisants. Lavage - désorption Dans le régime riche comme dans le régime pauvre, les lavages n'ont pas d'effet sur la désorption des phospholipides PL et PLM. Contrairement aux molécules de tensioactifs, il n'y a pas d'équilibre entre l'interface et la phase continue. Il n'y a donc pas de désorption forcée. L'évolution de la taille des gouttes en fonction des lavages est représentée dans les figures 9 à 12. Dans le cas des molécules de tensioactifs, les lavages accélèrent la déstabilisation des nanoémulsions. Dans le cas des phospholipides, au contraire, en comparant les figures [5 à 8] et [13 à 16] on peut conclure que les lavages ont tendance à ralentir la desorption du Dspe-PEG et donc la déstabilisation de la nanoémulsion. Utilisation d'un mélange d'huiles pour éviter le mûrissement d'Ostwald Les gouttes injectables étant de petites tailles, le mécanisme de déstabilisation est vraisemblablement du au mûrissement d'Ostwald. Nous cherchons donc à le stopper. Pour cela, on incorpore une huile de plus longue chaine moléculaire en plus de la PFOB. Le ratio est 10% massique en PFHD ou PFDB et de 90% massique en PFOB. L'étude a été effectuée dans le régime pauvre ainsi que dans le régime riche en utilisant des mélanges PFOB+PFDB et PFOB+PFHD. Ces essais ont été réalisés dans l'eau et dans l'eau salée (0,154M). Un suivi cinétique par DLS de ces nanoémulsions a été fait, les résultats obtenus sont représentés dans les figures 17 à 20. Lorsque l'on compare avec le système de référence (triangle), on remarque que les mélanges d'huiles permettent de bloquer le mûrissement d'Ostwald. 11.2) Ajout d'un compatibilisant Lors de cet étude, l'amélioration de la compatibilité entre le système PL et PLM et l'interface dispersée fluorée a été recherchée. D'après les figures 21 et 22, on remarque que l'ajout d'un compatibilisant en particulier le Miglyol, améliore la stabilité de la nanoémulsion, lorsqu'on compare avec le système de référence (SC67-F1 ou SC31-F2). L'explication retenue est que le Miglyol forme une couche s'intercalant entre l'huile fluorée et les tensioactifs. Ceci a été vérifié grâce à des images de cryoTEM (figure 23). 11.3 charge de l'interface : utilisation de tensioactifs Afin d'orienter les études vers le type de stabilisant le plus approprié, les phospholipides PL et PLM ont été remplacés par des tensioactifs anioniques (losange), cationiques (triangles) et non-ionique (carrés) de chaînes carbonés C12 (figure 24). Les résultats montrent que les tensioactifs anioniques sont ceux qui stabilisent le mieux la nanoémulsion. Les tensioactifs non-ioniques et cationiques ne restent pas à l'interface et la nanoémulsion se déstabilise très vite. 11.4 utilisation de protéines Une étude a été faite en remplaçant, les phospholipides par des protéines telles que la lactoglobuline (figure 25) et la caséine (figure 26). De l'amidon qui est un polysaccharide a aussi été utilisé (figure 26). Lorsque l'on compare l'évolution cinétique de la lactoglobuline, on remarque qu'après un léger saut, la nanoémulsion est stabilisée, tandis que le système de référence évolue avec le temps. Le fait de chauffer la lactoglobuline à 90°C pendant 30 minutes, permettrait la formation de pont di-sulfure, qui aurait pour effet de figer la taille des gouttes de la nanoémulsion. La caséine et l'amidon stabilisent la nanoémulsion, puisqu'ils viennent à l'interface eau-huile. Cependant, l'amidon se désorbe très vite ; la taille des gouttes en présence de caséine à tendance à se stabiliser après une augmentation de taille sur les premiers jours. 2 Manufacture and characterization of nanoemulsions Phospholipids (PL) and modified phospholipids (PLM) are dissolved with magnetic stirring and heating (45 ° C) in the continuous phase containing pure water or salt water. In a first step, a so-called coarse nanoemulsion is formed by progressively incorporating the oil into the aqueous phase with vigorous stirring using Ultra-Turax. This pre-emulsion is then passed to the microfluidizer in order to reduce the size of the drops. . The average droplet size dh as well as an indicator of the drop size distribution width (PDI) are measured by dynamic light scattering. PART II: Improving the stability of nanoemulsions 11.1) Using washing techniques The size drops obtained as a function of the amount of surfactant (lipid amphiphilic lipid E80 and pegylated lipid DSPE-PEG) was studied (FIG. 4). Two regimes have been identified: a low stabilizer diet where the size of the drops is determined by the amount of stabilizer and does not depend on the mechanical energy supplied to the system during emulsification (zone 1), as well as a diet rich in stabilizer where the size of the drops depends essentially on the energy supplied (zone 2). It was first investigated whether phospholipids PL and PLM behave similarly to small molecules of surfactants, that is, they equilibrate with excess molecules in the continuous phase. or if their adsorption is irreversible. Nanoemulsions stabilized solely by PL or PLM in an amount corresponding to the poor diet on the one hand and the rich diet on the other hand, in the case of PL, were formulated. These nanoemulsions were made in water and salt water. These six nanoemulsions were washed. During a wash cycle, the nanoemulsion is centrifuged to separate the nanoemulsion from the continuous phase. Since the oil is heavier than water, the droplets are the opaque and viscous sub-swimming, while the continuous phase containing water and phospholipids (in excess in the case of the rich diet) form the supernatant. This supernatant is replaced by a continuous phase (water or salt water) without phospholipid. After homogenization of the whole, the size of the nanoemulsion is measured. Three types of experiments are reported: the nanoemulsions are stored and their sizes are measured regularly over time (kinetic monitoring), the nanoemulsions are washed in order to promote the desorption (forced desorption) and a kinetic monitoring is carried out at the same time. after washes (Figures 5 to 8). Note that the Lipoid E80 barely disorbs the interface since the size is almost invariant. On the other hand, Dspe-PEG is less effective for stabilizing the nanoemulsion since the size of the drops does not stop increasing. In the same way, the mixture of the two stabilizers corresponding to the reference system (SC67-F2, SC46-F3, SC31-F2, SC22-F2) also has an instability related to the desorption of the stabilizers. Washing - desorption In the rich diet as in the poor diet, washes have no effect on the desorption of PL and PLM phospholipids. Unlike surfactant molecules, there is no balance between the interface and the continuous phase. So there is no forced desorption. The evolution of the size of the drops as a function of the washes is shown in FIGS. 9 to 12. In the case of the surfactant molecules, the washes accelerate the destabilization of the nanoemulsions. In the case of phospholipids, on the contrary, by comparing Figures [5 to 8] and [13 to 16] it can be concluded that the washings tend to slow the desorption of Dspe-PEG and thus the destabilization of the nanoemulsion. Use of a mixture of oils to avoid Ostwald ripening Because the injectable drops are small, the destabilization mechanism is probably due to the Ostwald ripening. So we are trying to stop him. For this purpose, an oil of longer molecular chain is incorporated in addition to the PFOB. The ratio is 10% by weight in PFHD or PFDB and 90% by mass in PFOB. The study was carried out in the low-fat diet as well as in the rich diet using PFOB + PFDB and PFOB + PFHD blends. These tests were carried out in water and in salt water (0.154M). A kinetic tracking by DLS of these nanoemulsions has been done, the results obtained are shown in FIGS. 17 to 20. When comparing with the reference system (triangle), it is noted that the oil mixtures make it possible to block the ripening of Ostwald. 11.2) Addition of a compatibilizer In this study, the improvement of the compatibility between the PL and PLM system and the fluorinated dispersed interface was sought. From FIGS. 21 and 22, it can be seen that the addition of a compatibilizer, in particular Miglyol, improves the stability of the nanoemulsion when compared with the reference system (SC67-F1 or SC31-F2). The explanation is that Miglyol forms a layer that interposes between the fluorinated oil and the surfactants. This was verified by cryoTEM images (Figure 23). 11.3 interface load: use of surfactants In order to orient studies towards the most appropriate type of stabilizer, phospholipids PL and PLM have been replaced by anionic (rhombic), cationic (triangles) and nonionic surfactants ( squares) of carbon chains C12 (Figure 24). The results show that the anionic surfactants are the ones that best stabilize the nanoemulsion. The nonionic and cationic surfactants do not remain at the interface and the nanoemulsion destabilizes very quickly. 11.4 Protein utilization A study was done replacing phospholipids with proteins such as lactoglobulin (Figure 25) and casein (Figure 26). Starch which is a polysaccharide has also been used (Figure 26). When we compare the kinetic evolution of lactoglobulin, we note that after a slight jump, the nanoemulsion is stabilized, while the reference system evolves with time. Heating the lactoglobulin at 90 ° C for 30 minutes would allow the formation of di-sulphide bridge, which would have the effect of freezing the size of the drops of the nanoemulsion. Casein and starch stabilize the nanoemulsion, since they come to the water-oil interface. However, the starch is desorbed very quickly; the size of the drops in the presence of casein tends to stabilize after an increase in size over the first days.

Claims

REVENDICATIONS1. Nanoemulsion oil in water comprising: 5 - an aqueous phase - a fluorinated oil phase - a surfactant at the interface between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, the surfactant forming a surfactant layer between the aqueous phase and the fluorinated oil phase, Said nanoemulsion further comprising a compatibilizer forming an additional layer interposed between the fluorinated oil phase and the surfactant layer.

2. Nanoemulsion according to claim 1, characterized in that the compatibilizing agent is a non-fluorinated hydrocarbon oil comprising at least 70%, advantageously at least 80%, advantageously at least 95% by weight, in particular at least 97%, of saturated C6-C18 fatty acids.

3. Nanoemulsion according to claim 2, characterized in that the compatibilizing agent is a non-fluorinated hydrocarbon oil comprising at least 70% saturated C6-C14 fatty acids, more advantageously C6-C10.

Nanoemulsion according to claim 2, characterized in that the saturated hydrocarbon oil is a saturated oil comprising at least 70%, preferably at least 80, 90, 95% of saturated fatty acids of 12 to 18 carbon atoms, or comprising a mixture of saturated oils each comprising at least 70%, preferably at least 80, 90, 95% saturated fatty acids of 12 to 18 carbon atoms.

Nanoemulsion according to any one of Claims 1 to 4, characterized in that the fluorinated oil is an oil chosen from oils including linear or branched, cyclic or polycyclic perfluorocarbons, saturated or unsaturated, cyclic perfluorinated tertiary amines. perfluoro esters or thioesters, haloperfluorocarbons; advantageously perfluorooctylbromide PFOB, C8F17Br (PFOB or perfluorobron) perfluorooctyléthane (C8F17C2H5 PFOE) Perfluorodecalin FDC, 35 perfluorooctane C8F18, perfluorodichlorooctane bromide, perfluoro-n-octyl, perfluoroheptane, perfluorodecane C10F22, perfluorododecyl bromide C10F22Br PFDB, perfluorocyclohexane, perfluoromorpholine, perfluorotripropylamine, perfluorotributylamine, perfluorodimethylcyclohexane, perfluorotrimethylcyclohexane, perfluorodicyclohexyl ester, perfluoro-n-butyltetrahydrofuran.

6. Nanoemulsion according to any one of claims 1 to 5 characterized in that the fluorinated phase comprises a first fluorinated oil and at least a second fluorinated oil; advantageously, the first fluorinated oil represents between 70 and 95% by weight of the fluorinated oil phase and the second fluorinated oil represents 5 to 30% by weight of the fluorinated oil phase.

7. Nanoemulsion according to claim 6, characterized in that the first fluorinated oil is PFOB, the second fluorinated oil is an oil with a longer molecular chain, preferably perfluorohexadecane PFHD or perfluorodecylbromide PFDB.

8. Nanoemulsion according to any one of claims 1 to 7 characterized in that it comprises: an aqueous phase, preferably representing 29.3 to 80% by weight of the composition, preferably 55 to 65%, more preferably 58 to 62 %, a fluorinated phase comprising at least one fluorinated oil, representing 19.3 to 70% by weight of the composition, advantageously 35 to 45%, more preferably 37 to 42%, a surfactant (forming the surfactant layer) at the interface between the aqueous and fluorinated phases, a compatibilizing agent forming a layer between the fluorinated oil phase and the surfactant layer, the total content of surfactant by weight relative to the oil being between 3 and 15%, advantageously between 6 and 12% ; the total content of surfactant by weight relative to the composition being between 0.6 and 10%, advantageously between 1 and 3%; the total content of compatibilizing agent being between 0.1% and 5% by weight relative to the aqueous phase.

9. Nanoemulsion according to any one of claims 1 to 8 characterized in that the surfactant is an anionic surfactant.

10. Process for the preparation of oil-in-water nanoemulsions according to any one of claims 1 to 9 comprising an aqueous phase, a fluorinated phase, a surfactant at the interface between the aqueous and lipidic phases, the process comprising the steps of: a) mixing the constituents of the aqueous phase, the fluorinated phase, and the surfactant, so as to obtain a nanoemulsion b) at least one washing step of the nanoemulsion prepared in a).

11. Contrast agent comprising a nanoemulsion according to any one of claims 1 to 9 or a nanoemulsion obtainable by the process according to claim 10.