FR2951721A1 - Procede de synthese d'analogues de l'epicocconone - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne un procédé de synthèse totale d'analogues de l'épicocconone de formule (I) : Elle concerne également de nouveaux analogues de l'épicocconone.

Description

1 Procédé de synthèse d'analogues de l'épicocconone

DOMAINE TECHNIQUE DE L'INVENTION La présente invention concerne un procédé de synthèse d'analogues de l'épicocconone.

ART ANTERIEUR 10 L'épicocconone, ou 5,6-dihydro-3-[(1Z,4E,6E,8E)-1-hydroxy-3-oxo-1,4,6,8-décatétraényl] -6-hydroxyméthyl-9améthyl-2H-furo[3,2g][2]benzopyran-2,9-(9aH)-dione, est un composé chimique, qui a été isolé du champignon Epicoccum 15 nigrum et résolu chimiquement en 2003 par P.J. Bell et P. Karuso (« Epicocconone, a novel fluorescent compound from the fungus epicoccum nigrum » J Am Chem Soc. (2003), 125(31), 9304-5). La formule chimique de l'épicocconone est la suivante : OH 20 O OH Epicocconone

Ce produit naturel s'est révélé avoir des propriétés remarquables : sa structure chimique originale lui permet 25 de se lier de façon covalente aux fonctions amines, formant un adduit énaminique qui fluoresce dans le rouge, plus précisément autour de 600 nm, quand il est soumis à un rayonnement UV, par exemple à 395 nm ou 520 nm. Cette molécule possède donc un déplacement de Stokes 30 (différence entre la longueur d'onde d'absorption et la 2 longueur d'onde d'émission) très important, de l'ordre de 100 nm.

En outre, cette molécule possède d'autres caractéristiques intéressantes, telles qu'une petite taille (410 u (unités de masse atomique)) et une bonne solubilité à la fois dans l'eau et dans les bicouches lipidiques.

C'est entre autres pour ces raisons que l'épicocconone présente un grand intérêt dans le domaine des Sciences de la Vie. En effet, les composés fluorescents sont utilisés pour détecter et visualiser des composés ou des phénomènes biologiques. Ils sont ainsi très utiles à des fins de diagnostic, pour mettre en évidence l'activité d'un enzyme, pour visualiser des protéines aussi bien dans des matrices biologiques, par exemple in vivo, que dans d'autres milieux, par exemple en solution aqueuse, dans des gels d'électrophorèse. Ils peuvent être également attachés à des supports solides ou des anticorps monoclonaux.

L'épicocconone présente l'avantage, dans ce contexte, de se lier aux fonctions amines des protéines. L'adduit formé peut être facilement excité aux longueurs d'ondes spécifiques de 395 nm ou 520 nm, choisies spécialement pour éviter l'auto-fluorescence des protéines et qui sont les longueurs des sources lasers les plus communes. Il va en réponse émettre de la lumière à une longueur d'onde plus élevée et avec un déplacement de Stokes élevé, ce qui permet de s'affranchir du problème de recouvrement entre les longueurs d'ondes absorbées et émises. 3 Cette molécule et certains de ces analogues ont été décrits dans la demande internationale de brevet WO 01/81351. Certaines de ses applications ont déjà été décrites dans cette demande de brevet. D'autres applications sont décrites dans les demandes internationales de brevet WO 2004/085546 et WO 2007/051256. Actuellement, l'épicocconone est commercialisée sous le nom LavaPurple (anciennement Deep Purple Total Protein Stain ou Fluoroprofile) par la société GelCompany ou FluoroTechnics pour les applications en protéomique et plus généralement en biologie.

L'épicocconone actuellement disponibles sur le marché est isolée à partir d'espèces de champignons. Cette voie d'obtention biologique est par exemple décrite dans les demandes de brevets citées ci-avant. Pour s'affranchir des problèmes d'approvisionnement, de rendement et de reproductibilité liés aux procédés biologiques, il serait souhaitable de pouvoir obtenir l'épicocconone par synthèse chimique. Il serait en outre souhaitable de pouvoir aussi avoir accès à des molécules proches de celle-ci, sur le plan de leur structure et de leurs propriétés, pour élargir le spectre des molécules disponibles. Or, aucune synthèse totale de cette molécule et de ses analogues n'a jamais été présentée.

RESUME DE L'INVENTION La présente invention concerne un procédé de synthèse de composés de formule (I) (I), leurs tautomères, leurs stéréoisomères et leurs mélanges, dans laquelle R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène, un halogène, un alkyle en Cl à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, un alcényle en C2 à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, R est un hydrogène, un halogène, ou bien R représente -A-C, A désignant une liaison chimique ou un radical bivalent, linéaire ou ramifié, contenant 1 à 20 atomes de carbone, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy et un groupe oxo, et C étant un hydrogène ou un groupement monocyclique ou polycyclique, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, possédant éventuellement une ou plusieurs insaturations et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant de 1 à 10, comprenant l'étape de réaction du composé de formule (II) R3 O HO

O (II)

dans laquelle R1, R2 et R3 sont tels que définis précédemment,

avec un composé de formule (III) oxo

O~R (III) ou un dérivé silylé de celui-ci,

dans laquelle R est tel que défini précédemment, en présence d'une base. La présente invention concerne également les composés de formule (I' ) o R' leurs tautomères, leurs stéréoisomères et leurs mélanges, dans laquelle R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène, un halogène, un alkyle en Cl à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée , un alcényle en C2 à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, R' représente -A-C', A désignant une liaison chimique ou un radical bivalent, linéaire ou ramifié, contenant 1 à 20 atomes de carbone, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy et un groupe oxo, et C' étant un groupement monocyclique ou polycyclique, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs 6 7 hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, possédant éventuellement une ou plusieurs insaturations et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant de 1 à 10.

Des composés chimiques décrits dans la présente demande possèdent un ou plusieurs centres asymétriques et/ou des structures 1,3-dicétones. De façon générale, les composés de la présente invention comprennent leurs stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, leurs mélanges racémiques, et leurs tautomères.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Les composés de formule (I) ont la particularité d'avoir le squelette de l'épicocconone. Il est ici décrit la synthèse de ces composés par une voie originale reposant sur l'introduction d'acyl-furanones à partir de dioxin-4- ones.

La présente invention concerne donc le procédé de synthèse de composés de formule (I) à partir des composés de formule (II) et (III), ou un dérivé silylé de celui- ci, tels que définis précédemment. 8 Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (I) est un composé de formule (I') selon l'invention.

Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, R dans le composé de formule (I) représente un hydrogène ou un halogène.

Selon encore un autre mode de réalisation de la présente invention, R dans le composé de formule (I) représente - A-C dans lequel C est un hydrogène.

Cette réaction consiste à introduire un groupe furanone dans le composé de formule (II). Des exemples de synthèse d'acylfuranone ont été décrits à partir de R-céto-ester ou à partir de dicétènes (V. I. Tyvorskii, A. S. Kukharev, O. G. Kulinkovich, N. De Kimpe and K. A. Tehrani, « A convenient synthesis of 3-functionalized 5-alkoxymethyl- and 5-phenoxymethyl-2(5H)-furanones and their transformations into related epoxy and methylene lactones » Tetrahedron (1998), 54(9), 1801-1808 ; S. Kuwahara, M. Moriguchi, K. Miyagawa, M. Konno and O. Kodama « Synthesis and absolute configuration of syringolide 2, an elicitor from Pseudomonas syringae pv. tomato » Tetrahedron Letters (1995), 36(18), 3201-3202 ; J. L. Wood, S. Jeong, A. Salcedo and J. Jenkins « Total Syntheses Of(+)-and(-)-Syringolides 1 and 2 » Journal of organic chemistry (1995), 60(22), 286-287 ; S. Sakuda, S. Tanaka, K. Mizuno, O. Sukcharoen, T. Nihira and Y.

Yamada, « Biosynthetic studies on Virginiae butanolide A, a butyrolactone autoregulator from Streptomyces. II: Preparation of possible biosynthetic intermediates and conversion experiments in a cell-free system », Journal 9 of the Chemical Society. Perkin transactions. I: Organic and Bio-organic Chemistry (1972-1999) (1993), 19, 2308-2315 ; R. N. Lacey « Derivatives of acetoacetic acid. Part VI. A synthesis of 1 3-oxazine derivatives employing diketen » J. Chem. Soc., 1954, 845 - 849). Par contre, l'utilisation de dioxin-4-one n'a encore jamais été décrite.

Cette étape de réaction du composé de formule (II) avec la dioxin-4-one (III), ou un dérivé silylé de celle-ci, en présence d'une base est une réaction régiosélective de formation de furanone. En effet, le composé de formule (II) possède deux fonctions carbonyles en a et a' de l'hydroxyde. La réaction de cyclisation peut donc potentiellement s'effectuer sur ces deux cétones. La régiosélectivité de formation est dépendante de la substitution de la dioxin-4-one. De manière générale, la furanone est formée majoritairement en position para de la double liaison exocyclique, conduisant à l'analogue désiré. Dans le seul cas où R représente un groupement méthyle, un mélange des deux régioisomères à 50/50 est obtenu.

Typiquement, l'étape de réaction du composé de formule (II) avec la dioxin-4-one (III), ou un dérivé silylé de celle-ci, en présence d'une base peut être suivie d'une ou de plusieurs étape(s) de séparation et éventuellement de purification. La séparation peut être, par exemple, une étape de filtration, cristallisation, précipitation, distillation, extraction liquide-liquide ou de chromatographie quelle qu'elle soit. La purification peut être, par exemple, une étape de recristallisation ou une chromatographie. En particulier, le composé de formule (I) peut être purifié par une chromatographie sur colonne de silice en phase normale ou inverse ou par chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP) préparative.

Selon un mode particulier de l'invention, la réaction du composé de formule (II) avec la dioxin-4-one (III), ou un dérivé silylé de celle-ci, en présence d'une base est une réaction monotope.

Par réaction monotope, ou plus couramment appelé réaction « one-pot », on entend une réaction en plusieurs étapes successives effectuées dans le même récipient, sans isolement de produits intermédiaires. 15 La base utilisée dans cette réaction du composé de formule (II) avec la dioxin-4-one (III), ou un dérivé silylé de celle-ci, peut être choisie parmi les composés chimiques connus sous le nom de « bases au sens de 20 Lewis » : il s'agit d'espèces chimiques dont un des constituants possède un doublet ou plus d'électrons libres ou non liants sur sa couche de valence. Typiquement, la base utilisée dans cette réaction peut être choisie dans le groupe des amines tertiaires, telles 25 que la triéthylamine (de formule chimique Et3N), l'isopropyldiéthylamine (de formule chimique iPrNEt2), la diisopropyléthylamine (de formule chimique iPr2NEt), la tributylamine (de formule chimique Bu3N), la pyridine, la N-méthyl-pipéridine et la N-méthyl-morpholine, le DABCO 30 (1,4-diazabicyclo[2,2,2]octane), le DBU (1,8-diazabicyclo[5,4,O] undec-7-ène) mais aussi dans le groupe des bases inorganiques, telles que Na2CO3, K2CO3, Cs2CO3r NaHCO3 et KHCO3. 10 11 Typiquement, la réaction du composé de formule (II) avec la dioxin-4-one (III), ou un dérivé silylé de celle-ci, en présence d'une base peut être réalisée dans un solvant organique, ou dans un mélange de solvants organiques, qui peut (peuvent) par exemple être choisi(s) parmi les solvants organiques non protiques, soit apolaires, tels que le toluène, le benzène ou le xylène, soit polaires, tels que le 1,2-dichloroéthane, le diméthoxyéthane, le diméthylsulfoxyde (DMSO), la N-méthyl-2-pyrrolidone (NMP), le diméthylformamide (DMF), diméthylacétamide (DMA) dans la limite où la température d'ébullition dudit solvant est supérieure à 80°C. En outre, il est possible d'utiliser un produit desséchant, par exemple du type tamis moléculaire, dans le milieu réactionnel.

Typiquement, la réaction du composé de formule (II) avec la dioxin-4-one (III), ou un dérivé silylé de celle-ci, en présence d'une base peut être réalisée à chaud, de préférence à une température supérieure à 80°C, de manière encore plus préférée à une température comprise entre 80°C et 110°C, et à pression atmosphérique. La température de chauffe peut dépendre du solvant choisi : on préfèrera travailler à pression atmosphérique à une température inférieure à la température d'ébullition du solvant. Par exemple, si la réaction est effectuée dans du toluène, la température de la réaction peut être comprise entre 80°C et 110°C, de préférence entre 90°C et 105°C, et plus préférentiellement entre 95°C et 100°C.

La dioxin-4-one (III) peut être préparée selon les procédés connus de la littérature.

Un premier procédé connu de la littérature consiste à préparer la dioxin-4-one à partir de chlorure d'acide ou d'amides de Weinreb, par condensation de l'anion de l'acétate de tert-butyle, puis par cyclisation du 5-céto- ester obtenu en milieu acide dans l'acétone. Ce premier procédé est représenté dans le schéma réactionnel (A) ci-dessous . O O H SO CH3COOtBu O O acétone ou LDA Ac20 R Cl R N R OtBu o Schéma réactionnel A Un deuxième procédé connu de la littérature consiste à préparer la dioxin-4-one par réaction de l'anion de la méthyl-dioxin-4-one sur un électrophile de type chlorure d'acide ou amide de Weinreb. Ce deuxième procédé est représenté dans le schéma réactionnel (B) ci-dessous : ou R" Cl R"N O LDA Schéma réactionnel B

Il est également possible d'utiliser les dérivés acylbenzotriazole comme décrits par Katritzky (J. Org. Chem. (2005), 70, 4854-4856), qui sont des équivalents de chlorures d'acides.25 13 Le dérivé silylé de la dioxin-4-one (III) peut être préparé par silylation d'une dioxin-4-one, selon les procédés connus de la littérature.

Le composé de formule (II) peut être préparé selon les procédés connus de la littérature.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (II) est obtenu par réaction d'un composé de formule (IV) GpO OH (IV) ou un composé similaire, avec l'acide o-iodoxybenzoïque, en présence d'un acide choisi parmi l'acide trifluoroacétique, l'acide paratoluène sulfonique, l'acide perchlorique, l'acide chlorhydrique et l'acide acétique. De préférence, la réaction d'un composé de formule (IV) avec un acide tel que décrit ci-dessus est réalisée avec de l'acide oiodoxybenzoïque en présence d'acide trifluoroacétique.

Selon la présente invention, Gp désigne un groupe protecteur d'une fonction alcool pouvant être déprotégé en conditions acides. On appelle typiquement groupe protecteur un groupe fonctionnel introduit dans la molécule afin d'empêcher des réactions secondaires de se produire dans la suite de la synthèse et/ou pour obtenir une certaine chimiosélectivité. Gp peut être choisi parmi les groupes protecteurs des fonctions alcools pouvant être déprotégés en conditions acides connus de l'homme du métier, en particulier ceux répertoriés dans l'ouvrage « Protective Groups in Organic Synthesis » de T.W. Greene 14 et P.G.M. Wuts. Typiquement, Gp peut être choisi parmi MOM, MEM, SEM, BOM, PMBOM, Bn, PMB, TMS, TBDMS. De préférence, Gp est MOM.

MOM est l'acronyme de « méthoxyméthyle », qui correspond au radical CH3-0-CH2-. MEM est l'acronyme de « méthoxyéthyle », qui correspond au radical CH3-0-CH2-CH2-. SEM est l'acronyme de «2- ( triméthylsilyle)éthoxyméthyle », qui correspond au radical SiMe3-CH2-CH2-0-CH2-. BOM est l'acronyme de « benzyloxyméthyle », qui correspond au radical PhCH2-OCH2- PMBOM est l'acronyme de « paraméthoxy-benzyloxyméthyle », qui correspond au radical 4-OMePhCH2-OCH2- Bn est l'acronyme de « benzyle », qui correspond au radical PhCH2- PMB est l'acronyme de « paraméthoxybenzyle », qui correspond au radical 4-OMePhCH2- TMS est l'acronyme de « triméthylsilyle », qui correspond au radical Me3Si- TBDMS est l'acronyme de « tert-butyldiméthyle silyle », qui correspond au radical tBuMe2Si- Par composé similaire, on entend les composés ayant une structure semblable à celle de l'hémiacétal de formule (IV), qui est une forme d'aldéhyde masqué. Les composés similaires de l'hémiacétal de formule (IV) sont par exemple les aldéhydes libres.

En outre, les composés similaires sont aussi les composés de formule (IV) dans laquelle un ou deux groupes protecteurs Gp ont été substitués par un hydrogène. Ces composés similaires peuvent être obtenus par déprotection 15 totale ou partielle des les composés de formule (IV). La déprotection s'effectue en milieu acide, selon la nature du groupe protecteur.

Typiquement, les composés similaires de l'hémiacétal de formule (IV) sont les composés ci-dessous forme acétalique OGP OH O OH OH OGP OH OH OH forme aldéhydique L'acide o-iodoxybenzoïque, dont l'acronyme est IBX, est un dérivé de l'iode hypervalent. Il s'agit d'un composé organique oxydant utilisé traditionnellement pour oxyder les alcools en aldéhydes. L'IBX est disponible commercialement sous forme stabilisée par des acides carboxyliques tels que l'acide benzoïque ou l'acide isophtalique. Il peut également être préparé par des procédés connus de l'homme du métier, par exemple à partir d'acide 2-iodobenzoïque, de bromure de potassium et d'acide sulfurique ou à partir d'axone.

L'acide trifluoroacétique, dont l'acronyme est TFA, est un acide carboxylique fort très utilisé en chimie organique. Il est disponible commercialement, ou il peut être synthétisé par électrofluoration de l'acide acétique au moyen d'une méthode dite « méthode de Simmons ».25 16 La réaction d'un composé de formule (IV) avec de l'acide o-iodoxybenzoïque en présence d'un acide tel que décrit ci-dessus permet la déprotection des fonctions alcools protégées par les groupes Gp, puis l'oxydation des phénols obtenus.

Typiquement, la réaction du composé de formule (IV) avec de l'acide o-iodoxybenzoïque en présence d'un acide tel que décrit ci-dessus peut être réalisée dans un solvant organique, ou dans un mélange de solvants organiques, qui peut (peuvent) en particulier être choisi(s) parmi les solvants organiques chlorés, tels que le dichlorométhane.

Typiquement, la réaction du composé de formule (IV) avec de l'acide o-iodoxybenzoïque en présence d'un acide tel que décrit ci-dessus peut être réalisée à température ambiante et à pression atmosphérique.

Selon un mode particulier de l'invention, la réaction du composé de formule (IV) avec de l'acide o-iodoxybenzoïque en présence d'un acide tel que décrit ci-dessus est réalisée avec un excès d'acide. De préférence, on peut utiliser entre 2 et 50 équivalents, de manière plus préférée entre 5 et 10 équivalents d'acide par rapport au composé de formule (IV). De gros excès d'acide sont donc possibles, mais non nécessaires à la bonne marche de la réaction.

Le composé de formule (IV) peut être préparé selon les procédés connus de la littérature.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (IV) est obtenu par réaction d'un composé de formule (V) avec de l'hydrure de diisobutylaluminium.

L'hydrure de diisobutylaluminuin, dont l'acronyme est DIBAL-H, ou de manière courante simplement DIBAL, est un réactif réducteur très utilisé en chimie organique. Dans la réaction du composé de formule (V) avec de l'hydrure de diisobutylaluminium, celui-ci peut réduire la lactone du composé de formule (V) en lactol dans le composé de formule (IV). 15 Typiquement, la réaction du composé de formule (V) avec de l'hydrure de diisobutylaluminium peut être réalisée dans un solvant organique, ou dans un mélange de solvants organiques, qui peut (peuvent) en particulier être 20 choisi(s) parmi les solvants organiques, tel que le toluène, l'hexane, le benzène, le tétrahydrofuranne, et les solvants chlorés tels que le dichlorométhane.

Typiquement, la réaction du composé de formule (V) avec 25 de l'hydrure de diisobutylaluminium peut être réalisée à froid, de préférence à une température inférieure à 10°C, de manière encore plus préférée à une température de -78°C, obtenue par exemple dans de la carboglace, et à pression atmosphérique. (V) 30 18 Le composé de formule (V) peut être préparé selon les procédés connus de la littérature.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (V) est obtenu par protection des fonctions alcool d'un composé de formule (VI) OH O (VI).

Typiquement, la protection des fonctions alcool d'un composé consiste à faire réagir ledit composé, qui contient des fonctions alcool, avec un réactif protecteur, qui entraine la fixation d'un groupe protecteur sur les fonctions alcool. Le réactif protecteur est choisi en fonction du groupe protecteur désiré. Comme déjà précisé ci-avant, les groupes protecteurs utilisables ici peuvent être choisis parmi les groupes protecteurs des fonctions alcools pouvant être déprotégés en conditions acides connu de l'homme du métier, en particulier ceux répertoriés dans l'ouvrage « Protective Groups in Organic Synthesis » de T.W. Greene et P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience Edts.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (VI) peut être protégé par réaction avec du chlorométhyle-méthyle-éther, ou CMME nommé aussi MOM-Cl, qui correspond au composé CH3-0-CH2-Cl. Un autre mode de réalisation consiste à faire réagir du diméthoxyméthane en présence de P205.

Typiquement, la réaction de protection des fonctions alcool d'un composé de formule (VI) peut être réalisée 19 dans un solvant organique, ou dans un mélange de solvants organiques, qui peut (peuvent) en particulier être choisi(s) parmi les solvants organiques apolaires, tels que le toluène, l'hexane, le benzène, l'acétate d'éthyle, et les solvants chlorés, tels que le dichlorométhane.

En outre, il est possible d'ajouter une base, telle que le triéthylamine, le diisopropyléthylamine et l'hydrure de sodium dans le milieu réactionnel de la réaction de protection des fonctions alcool d'un composé de formule (VI).

Typiquement, la réaction de protection des fonctions alcool d'un composé de formule (VI) peut être réalisée selon les cas à température ambiante, à froid ou à chaud, et à pression atmosphérique.

Le composé de formule (VI) peut être préparé selon les procédés connus de la littérature. Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (VI) est obtenu par réaction d'un composé de formule (VII) OMe O (VII) 25 avec un acide de Lewis.

L'acide de Lewis utilisé comme réactif avec le composé de formule (VI) peut être choisi parmi les composés chimiques connus sous le nom d' « acide au sens de 30 Lewis » : il s'agit d'une entité chimique dont un des atomes la constituant possède une lacune électronique, ce20 20 qui la rend susceptible d'accepter un doublet d'électrons, et donc de créer une liaison covalente avec une base de Lewis. Typiquement, l'acide de Lewis utilisé dans cette réaction peut être choisi dans le groupe consistant en le trichlorure d'aluminium (acronyme A1C13), le mélange trichlorure d'aluminium/iodure de sodium, (acronyme A1C13/NaI), le tribromure de bore (acronyme BBr3), le trichlorure de bore (acronyme BC13), le mélange chlorure de triméthylsilyle/iodure de sodium, (acronyme TMSC1/NaI), le bromure de triméthylsilyle (acronyme TMSBr), l'iodure de triméthylsilyle (acronyme TMSI), l'éthanethiol (acronyle EtSH) et le benzènethiol (acronyme PhSH).

Typiquement, la réaction du composé de formule (VII) avec un acide de Lewis peut être réalisée dans un solvant organique, ou dans un mélange de solvants organiques, qui peut (peuvent) par exemple être choisi(s) parmi l'acétonitrile, le diméthylformamide, le diméthylsulfoxyde, la N-méthyl-2-pyrrolidone et les solvants chlorés tels que le dichlorométhane.

Typiquement, la réaction du composé de formule (VII) avec un acide de Lewis peut être réalisée, selon le cas, à température ambiante ou à chaud, et à pression atmosphérique. Par exemple, la réaction avec du trichlorure d'aluminium dans du dichlorométhane peut être réalisée au reflux du dichlorométhane. Si la réaction est effectuée avec des thiols, elle peut avoir lieu à chaud.

Le composé de formule (VII) peut être préparé selon les procédés connus de la littérature.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (VII) est obtenu par réaction d'un composé de formule (VIII) OMe O (VIII) dans laquelle R4 représente un groupement choisi parmi l'isopropyle, l'éthyle et le tert-butyle, en milieu acide.

Cette étape de réaction du composé de formule (VIII), qui possède une fonction alcool et une fonction amide, en milieu acide, est une lactonisation, et entraine une libération d'isopropylamine.

Typiquement, le milieu de cette réaction du composé de formule (VIII) peut être rendu acide par ajout d'un ou de plusieurs acides de Bronsted, en particulier de ceux choisis dans le groupe consistant en l'acide camphosulfonique (acronyme CSA), l'acide paratoluènesulfonique (acronyme APIS) et l'acide chlorhydrique (acronyme HC1).

Au sens de la présente invention, l'expression « en milieu acide » signifie que l'acide présent dans le milieu réactionnel est en excès par rapport au produit qui va réagir. Typiquement, la réaction du composé de formule (VIII) en milieu acide peut être réalisée avec un excès de 1,1 équivalent d'acide par rapport au composé de formule (VIII). 22 Typiquement, la réaction du composé de formule (VIII) en milieu acide peut être réalisée à température à chaud, typiquement au reflux du solvant de la réaction, et à pression atmosphérique. Le composé de formule (VIII) peut être préparé selon les procédés connus de la littérature.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, le 10 composé de formule (VIII) est obtenu par réaction d'un composé de formule (IX) OMe O dans laquelle R4 représente un groupement choisi parmi l'isopropyle, l'éthyle et le tert-butyle, 15 avec un dérivé organolithien ou un dérivé organomagnésien ou un agrégat mixte, puis par réaction avec un composé de formule (X) R2 (X) dans laquelle R1 et R2 sont tels que précédemment 20 décrits.

La réaction d'un composé de formule (IX) avec un dérivé organolithien permet d'effectuer une organolithiation du composé de formule (IX). 25 Typiquement, le dérivé organolithien peut être choisi dans le groupe consistant en le butyl-lithium (BuLi ou nBuLi), le tert-butyl-lithium (tBuLi), le sec-butyllithium (sBuLi). Typiquement, le dérivé organomagnésien 30 peut être l'isopropylmagnésium. Enfin, typiquement, R4 NH (IX) l'agrégat mixte désigne le mélange magnésien/lithien et il peut être le Bu3MgLi. Selon le dérivé organolithien ou le dérivé organomagnésien ou l'agrégat mixte utilisé, dans la réaction du composé de formule (IX) la présence d'un composé tel que la N,N,N',N'-tétraméthyléthylènediamine, dont l'acronyme est TMEDA, et dont le rôle est de former des complexes stables avec des métaux, peut être indispensable.

Dans un second temps, le dérivé lithié du composé de formule (IX) est mis en présence de l'époxyde de formule (X) pour former l'alcool correspondant. Selon la nature des substituants R1 et R2, l'époxyde de formule (X) peut être disponible commercialement ou non. Si ce n'est pas le cas, il peut être préparé selon les méthodes bien connues de l'homme du métier. Les voies de synthèses les plus courantes passent par l'oxydation des alcènes. Par exemple, un alcène judicieusement choisi peut être oxydé par le dioxygène de l'air sur un catalyseur d'argent. Une autre voie consiste à utiliser un peracide pour oxyder l'alcène judicieusement choisi. Par « alcène judicieusement choisi », on entend l'alcène possédant les substituants R1 et R2 correctement situés de manière à former après oxydation l'époxyde de formule (X) possédant les bons substituants R1 et R2.

Typiquement, les deux étapes de la réaction du composé de formule (IX) avec un dérivé organolithien, puis avec le composé de formule (X) peuvent être réalisées dans un solvant organique, ou dans un mélange de solvants organiques, qui peut (peuvent) en particulier être choisi(s) parmi les solvants organiques polaires, tels 24 que le tétrahydrofuranne et le diéthyl éther, et parmi les solvants organiques apolaires, tel que le toluène, l'hexane, le benzène.

Typiquement, les deux étapes de la réaction du composé de formule (IX) avec un dérivé organolithien, puis avec le composé de formule (X) peuvent être réalisées à température variable, à froid ou ambiante, typiquement entre -100°C et 25°C, et à pression atmosphérique.

Le composé de formule (IX) peut être préparé selon les procédés connus de la littérature.

Typiquement, un amide tel que le composé de formule (IX) peut être préparé à partir de l'acide carboxylique correspondant, ou de son chlorure d'acide ou de tout autre dérivé similaire, en présence d'une amine.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, le composé de formule (IX) est obtenu par réaction d'un composé de formule (XI) OMe avec un isocyanate de formule (XII) O iR4 N (XII) dans laquelle R4 représente un groupement choisi parmi l'isopropyle, l'éthyle et le tert-butyle,

en présence d'un acide de Lewis. Le composé de formule (XI) est le 1,3-diméthoxybenzène 30 substitué en position 2 par un groupe R3. Le 1,3- (XI) 25 diméthoxybenzène est un produit commercial. Sa substitution en position 2 par un groupe R3 peut être effectuée selon les méthodes classiques connues de l'homme du métier. Le composé de formule (XII) est un isocyanate, et est également un produit commercial.

L'acide de Lewis utilisé dans cette réaction du composé 10 de formule (XI) avec l'isocyanate de formule (XII) peut être choisi parmi les composés chimiques connus sous le nom d' « acide au sens de Lewis » tels qu'ils ont été définis précédemment. Typiquement, l'acide de Lewis utilisé dans cette réaction peut être choisi dans le 15 groupe consistant en le trichlorure d'aluminium (acronyme AlCl3) , le tribromure d'aluminium (AlBr3), le chlorure de zinc (ZnC12), le bromure de zinc (ZnBr2), l'iodure de zinc (ZnI2), le chlorure de fer (FeCl3 ou FeCl2), le bromure de fer (FeBr3 ou FeBr2), le chlorure d'étain 20 (SnCl2), le bromure d'étain (SnBr2), le triflate d'étain (Sn(OTf)2), le chlorure d'indium (InCl3), le bromure d'indium (InBr3), le triflate d'indium (In(OTf)3), les lanthanides en général, comme Sc, Hf, Y, Yb and Lu, les triflates et bis- ou tris-trifluorométhanesulfonamide 25 (NTf3)2 ou (NTf3)3 suivant le degré d'oxydation de métal et les sels de Bismuth ou Zirconium.

Typiquement, la réaction du composé de formule (XI) avec l'isocyanate de formule (XII) en présence d'un acide de 30 Lewis peut être réalisée dans un solvant organique, ou dans un mélange de solvants organiques, qui peut (peuvent) en particulier être choisi(s) parmi le toluène, l'hexane, le benzène, le xylène, le nitrobenzène, le5 nitrométhane, le dichlorométhane, le chloroforme et le 1,2-dichloroéthane.

Typiquement, la réaction du composé de formule (XI) avec l'isocyanate de formule (XII) en présence d'un acide de Lewis peut être réalisée à température ambiante et à pression atmosphérique.

En résumé, il est ici décrit un procédé de synthèse totale de composés de formule (I) correspondant au schéma réactionnel (C) suivant : OMe O NH R4 dérivé organolithien R3 NH R4 j MeO (VII) R, (X) R2 ON4 (XII) acide de Lewis MeO OMe O OMe milieu acide OH O OMe O O acide de Lewis base Schéma réactionnel C De façon générale, tous les composés chimiques intermédiaires intervenant dans le procédé de synthèse des composés de formule (I) peuvent être séparés et éventuellement purifiés. Typiquement, une ou de plusieurs étape(s) de séparation, de purification, ou les deux consécutivement peuvent être mises en oeuvre. La 27 séparation peut être, par exemple, une étape de filtration, cristallisation, précipitation, distillation, extraction liquide-liquide ou de chromatographie. La purification peut être, par exemple, une étape de recristallisation ou une chromatographie. Il est également possible d'utiliser les produits intermédiaires sans étapes de purification intermédiaire.

En outre, de façon générale, la plupart des composés chimiques intermédiaires intervenant dans le procédé de synthèse des composés de formule (I) possèdent un ou plusieurs centres asymétriques. La détermination de la configuration relative de ces composés chimiques peut être effectuée par toutes les techniques d'analyses connues de l'homme du métier. Typiquement, on peut utiliser la mesure du pouvoir rotatoire. Les étapes réactionnelles décrites peuvent conduire à des mélanges d'énantiomères ou de diastéréoisomères. L'homme du métier saura, s'il le souhaite, employer des méthodes de séparation efficaces pour séparer les mélanges d'énantiomères ou de diastéréoisomères, par exemple, colonne chromatographique sur gel de silice, purification par CLHP préparative. D'autre part, la stéréosélectivité des étapes réactionnelles peut également varier en fonction des conditions opératoires.

La Demanderesse a montré que le procédé de synthèse selon l'invention, lorsqu'il est mis en oeuvre, pouvait permettre de synthétiser des analogues d'épicocconone qui n'ont jamais été décrits auparavant.

La présente invention concerne donc également les composés de formule (I') o R' leurs tautomères, leurs stéréoisomères et leurs mélanges, dans laquelle R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène, un halogène, un alkyle en Cl à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, un alcényle en C2 à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, R' représente -A-C', A désignant une liaison chimique ou un radical bivalent, linéaire ou ramifié, contenant 1 à 20 atomes de carbone, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy et un groupe oxo, et C' étant un groupement monocyclique ou polycyclique, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs 28 29 hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, possédant éventuellement une ou plusieurs insaturations et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10.

En particulier, le groupement R' peut comprendre des cycles, ce qui n'était pas le cas de l'épicocconone elle-même et des analogues déjà décrits dans la littérature et produits à partir de l'épicocconone isolée à partir d'espèces de champignons.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène ou un alkyle en Cl à C20 ou un alcényle en Cl à C20, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy et un groupe oxo. Par exemple, R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène ou un alkyle en Cl à C6 non substitué, tel que un méthyle, un éthyle, un propyle, un n-butyle, un s-butyle et un t-butyle. Par exemple, R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène ou un méthyle.

Selon un mode de réalisation de la présente invention, R' représente -A-C' dans lequel C' est un groupement monocyclique ou polycyclique ne comportant que des atomes de carbones, possédant éventuellement une ou plusieurs 30 insaturations et pouvant éventuellement être substitué un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-O)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10.

Typiquement, C'peut être un groupement phényle, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-O)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10. De préférence, C' peut être un groupement phényle non substitué ou substitué par un groupement hydroxy, méthyloxy, éthyloxy, propyloxy, méthyloxyéthyloxyéthyloxy, méthylamino ou diméthylamino.

Typiquement, C' peut aussi être un groupement polycyclique ne comportant que des atomes de carbones, en particulier un groupement choisi parmi les groupements biphényle, naphtyle ou anthracényle, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe 31 de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10. De préférence, C' peut aussi être un groupement biphényle, naphtyle ou anthracényle non substitué ou substitué par un groupement hydroxy, méthyloxy, éthyloxy, propyloxy, méthyloxyéthyloxyéthyloxy, méthylamino ou diméthylamino.

Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, R' représente -A-C' dans lequel C' est groupement monocyclique ou polycyclique comportant un ou plusieurs hétéroatome(s) choisis parmi N, 0, S et P, possédant éventuellement une ou plusieurs insaturations et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10.

Typiquement, C' peut être un groupement monocyclique comportant un ou plusieurs hétéroatome(s) choisis parmi N, 0 et S, tel que les groupements furanyle, oxiranyle, 2H-pyranyle, 4H-pyranyle, thiophényle, pyrrolyle, pyrrolidinyle, pyrazolyle, pyrazolydinyle, imidazolyle, imidazolyle, imidazolidinyle, pyridinyle, pipéridinyle, pyrazinyle, pipérazinyle, pyrimidinyle, parathiazinyle et morpholinyle, chacun de ces groupements pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10. De préférence, C'peut être un groupement monocyclique comportant un ou plusieurs hétéroatome(s) choisis parmi N, 0 et S non substitué ou substitué par un groupement hydroxy, méthyloxy, éthyloxy, propyloxy, méthyloxyéthyloxyéthyloxy, méthylamino ou diméthylamino.

Typiquement, C' peut aussi être un groupement polycyclique comportant un ou plusieurs hétéroatome(s) choisis parmi N, 0 et S, tel que les groupements 2H-chromènyle, benzofuranyle, benzothiophényle, indolyle, purinyle, benzothiazolyle, benzimidazolyle, quinolinyle et phenothiazinyle, chacun de ces groupements pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkylamino) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10. De préférence, C'peut être un groupement polycyclique comportant un ou plusieurs hétéroatome(s) choisis parmi N, 0 et S non substitué ou substitué par un groupement hydroxy, méthyloxy, éthyloxy, propyloxy, méthyloxyéthyloxyéthyloxy, méthylamino ou diméthylamino. En outre, selon un mode de réalisation de la présente invention, R' représente -A-C' dans lequel A représente une liaison chimique. De préférence, le composé de30 33 formule (I') peut être choisi parmi les composés de formule (la) à (Ih) suivants : Formule Nom R1 R2 R3 R la O 3-benzoyl- H Me Me Ph O 6,9a-diméthyl- O 5,6-dihydro- Ô 9aH-furo[3,2- g]isochromène- 2,9-dione Ib O 3-(4- H Me Me p-OMe O méthoxybenzoyl Ph O )-6,9a- Ô diméthyl-5,6- dihydro-9aH- furo[3,2-g] isochromène- 2,9-dione ® O le O 3-(furan-2- H Me Me 2- carbonyl)- fu- 6,9a-diméthyl- ryl 5,6-dihydro- 9aH-furo[3,2- g]isochromène- 2,9-dione 0 O Ô O Id O 3-(2- H Me Me 2- 0 naphthoyl)- napht O 6,9a-diméthyl- yl Ô 5,6-dihydro- 9aH-furo[3,2- g]isochromène- 2,9-dione ® le O O 3-(4-(2-(2- H Me Me 4-(2- 0 méthoxyéthoxy) (2- Ô éthoxy)benzoyl métho O )-6,9a- xyéth ® diméthyl-5,6- oxy) furo[3,2- éthox g]dihydro-9aH- y) isochromène- phény 2,9-dione 1 If O 3-(2- H Me Me 2- O ~/ méthoxybenzoyl métho O )-6,9a- xyphé \O ® diméthyl-5,6- nyl dihydro-9aH- furo [3, 2-g] isochromène- 2,9-dione Ig O 3-(2- H Me Me 2- O Ô/ hydroxybenzoyl hydro O )-6,9a- xyphé O diméthyl-5,6- nyl HO 411e dihydro-9aH- furo - [3, 2-g] i sochromène 2,9-dione Ih O 3-(4- Me Me Me 4- O Ô/ méthoxybenzoyl métho O )-6,6,9a- xyphé ® triméthyl-5,6- nyl dihydro-9aH- furo [3, 2-g] isochromène- 2,9-dione Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, R' représente -A-C' dans lequel A est un radical bivalent, linéaire ou ramifié, contenant 1 à 20 atomes de carbone, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy et un groupe oxo. De préférence, A est un radical bivalent linéaire ou ramifié contenant 1 à 5 atomes de carbone comportant zéro, une ou deux insaturations, et étant non substitué ou étant subtitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un groupe hydroxy et un groupe oxo. De façon encore plus préférée, A comprend une structure 1,3-dicétones qui est sous la forme cétoénolique.

De préférence, le composé de formule (I') peut être 5 choisi parmi les composés de formule (Ii) ou (lm) suivants . Ii O O (Z)-3-(3- H Me Me 2-(4- O Ô/ O~ hydroxy-3-(4- méthox O méthoxyphényl) yphény HO acryloyl)- 1)-2- 6,9a-diméthyl- hydrox 5,6-dihydro- y- 9aH-furo éthény [3,2-g] 1 isochromène- 2,9-dione Ij O O (Z)-3-(3- Me Me Me 2-(4- 0 O, hydroxy-3-(4- méthox O , Ô méthoxyphényl) yphény O acryloyl)- 1)-2- HO 6,6,9a- hydrox triméthyl-5,6- Y- dihydro-9aH- éthény furo 1 [3, 2-g] isochromène- 2,9-dione Ik O O (Z)-3-(3- Me Me Me 2- 0 hydroxy-3- phényl Ô phénylacryloyl -2- O )-6,6,9a- hydrox HO triméthyl-5,6- y- dihydro-9aH- éthény furo[3,2-g] 1 isochromène- 2,9-dione Il O O 3-(3-(4- Me Me Me 2-[1- 0 O, méthoxyphényl) (4- Ô -2-méthyl-3- méth- O oxopropanoyl)- oxyphé O 6,6,9a- nyl)- ® triméthyl-5,6- 1-oxo- dihydro-9aH- 2- furo[3,2-g] méthyl isochromène- ) 2,9-dione propyl Im O 6,6,9a- Me Me Me 2-(1- S/ O triméthyl-3- phényl (2-méthyl-3- -1- oxo-3- oxo-2- phénylpropanoy méthyl O 1)-5,6- ) O dihydro-9aH- propyl furisochromène- 3furo ,2- 2,9-dione De préférence, le composé de formule (I') est choisi parmi les composés de formule (Ii), (Ij) et (Ik).

Par rapport à un procédé passant par l'isolement de l'épicocconone à partir d'espèces de champignons, le procédé de synthèse de composés de formule (I) tels que décrit précédemment selon l'invention présente l'avantage d'être simple et adaptable à la synthèse d'une très grande variété d'analogues de l'épicocconone.

Le fait de pouvoir choisir avec une grande liberté et une grande simplicité la nature des substituants R1, R2, R3 et R est un atout : par exemple, la modification de ces substituants par rapport à l'épicocconone permet de moduler les longueurs d'onde d'émission et d'absorption du composé. Il est donc possible d'obtenir un composé dans lequel le déplacement de Stokes (différence entre la longueur d'onde d'absorption et la longueur d'onde d'émission) est équivalent ou supérieur à celui de l'épicocconone naturelle.

Les composés obtenus selon le procédé de synthèse des composés de formule (I) selon l'invention, et les composés de formule (I') selon l'invention, ont la particularité de posséder le squelette de l'épicocconone, et, de manière préférée, lesdits composés sont les 37 analogues de l'épicocconone. Les analogues de l'épicocconone peuvent posséder les mêmes propriétés intéressantes que la molécule naturelle. Ainsi, les analogues de l'épicocconone selon l'invention peuvent avoir les mêmes utilisations que l'épicocconone elle-même. Certaines de ces utilisations ont déjà été décrites en détails dans les demandes internationales de brevet WO 01/81351, WO 2004/085546 et WO 2007/051256, et dans les publications suivantes : - J. A. Mackintosh, H.-Y. Choi, S.-H. Bae, D. A. Veal, P. J. Bell, B. C. Ferrari, D. D. Van Dyk, N. M. Verrills, Y.-K. Paik, and P. Karuso, « A fluorescent natural product for ultra sensitive detection of proteins in onedimensional and two-dimensional gel electrophoresis », Proteomics (2003), 3(12), 2273-2288. - D. R. Coghlan, J. A. Mackintosh and P. Karuso, « Mechanism of Reversible Fluorescent Staining of Protein with Epicocconone », Organic Letters (2005), 7(12), 240 1-2404. - J. A. Mackintosh, D. A. Veal and P. Karuso, « Fluoroprofile, a fluorescence-based assay for rapid and sensitive quantitation of proteins in solution » Proteomics (2005), 5(18), 4673-4677. - H.-Y. Choi, D. A. Veal and P. Karuso, « Epicocconone, a new cell-permeable long Stokes' shift fluorescent stain for live cell imaging and multiplexing », Journal of Fluorescence (2006), 16(4), 475-482. - C. M. Nock, M. S. Ball, I. R. White, J. M. Skehel, L. Bill and P. Karuso, « Mass spectrometric compatibility of Deep Purple and SYPRO Ruby total protein stains for highthroughput proteomics using large-format two-dimensional gel electrophoresis », Rapid Communications in Mass Spectrometry (2008), 22(6), 88 1-886. - P. Karuso, A. S. Crawford, D. A. Veal, G. B. I. Scott, and H.-Y. Choi, « Real-Time Fluorescence Monitoring of Tryptic Digestion in Proteomics », Journal of Proteome Research (2008), 7(1), 361-366.

La présente invention concerne aussi l'utilisation d'un composé obtenu selon le procédé de synthèse des composés de formule (I) selon l'invention, ou d'un composé de formule (I') selon l'invention, en tant que colorant ou marqueur fluorescent.

Selon un mode de réalisation, cette utilisation intervient dans une technique de coloration, de marquage et/ou de détection de molécules organiques.

Les analogues de l'épicocconone de formule (I) et (I') ne sont pas, de préférence, fluorescents en solution aqueuse, mais ils peuvent être capable d'interagir avec un composé organique pour produire une coloration fluorescente intense.

Selon un mode de réalisation, les analogues de l'épicocconone de formule (I) et (I') interagissent avec les protéines pour produire un adduit fluorescent qui peut être excité sous un rayonnement UV standard, dont la longueur d'onde est compris entre 300 et 560 nm. Sous excitation, l'adduit fluorescent peut émettre un rayonnement dont la longueur d'onde appartient à une large plage de valeurs, permettant à l'adduit protéique d'être détecté (voir schéma réactionnel D).

RNH2 o RouR' RouR' Adduit protéique fluorescent Ainsi, la présente invention concerne aussi une méthode de marquage fluorescent d'une molécule organique comprenant la mise en contact d'un composé obtenu selon le procédé de synthèse des composés de formule (I) selon l'invention, ou d'un composé de formule (I') selon l'invention, avec ladite molécule organique de manière à lier de façon covalente ledit composé sur ladite molécule organique.

Selon un mode de réalisation préféré, ladite molécule organique peut être choisie parmi une protéine, un peptide, un sucre, un acide nucléique, une molécule constituant la paroi d'une cellule et un détergent, ou la molécule organique est comprise dans un anticorps ou dans une cellule.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples non limitatifs et purement illustratifs qui vont suivre. EXEMPLES

Exemple 1 : Synthèse des intermédiaires réactionnels 1) Synthèse de la N-isopropyl-2,4-diméthoxy-3- Analogue d'épicocconone non fluorescent Schéma réactionnel D 30 méthylbenzamide (IX) (IX) Dans un ballon séché sous argon, 3,04 g (20 mmole, léq) de diméthoxytoluène et 2,80g (21 mmole, 1,05 éq) d'A1C13 sont mis en solution dans 20 mL de CH2C12. 2,36 mL (25mmol, 1,25 éq) d'isopropylisocyanate sont alors ajoutés au milieu réactionnel à température ambiante. Après 10H, la réaction est hydrolysée à 0°C par addition d'une solution saturée de NH4C1.

Après extraction au CH2C12, la phase organique est lavée par une solution d'HCl 1N puis par une solution saturée de NaHCO3. La phase organique est alors séchée par MgSO4r filtrée et concentrée sous vide. Suite à une purification par chromatographie sur silice en utilisant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (8 : 2), 4.50 g (95%) d'amide (IX) sont obtenus.

Analyses . 1H RMN (300 MHz, CDC13) 5 ppm : 1,25 (d, J = 6,5 Hz, 6H, 2 x CH3), 2,15 (s, 3H, CH3), 3,73 (s, 3H, CH3), 3,86 (s, 3H, CH3), 4,26-4,37 (m, 1H, CH), 6,72 (d, J = 8,7 Hz, 1H, CHar) , 7,68 (d, J = 5,6 Hz, 1H, NH), 7,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H, CHar) 3C RMN (75 MHz, CDC13) 5 ppm : 9,1, 23,2, 41,4, 56,0, 61,5, 106,7, 119,4, 119,8, 130,2, 157,5, 161,3, 164,8.

2) Synthèse de la 6-(2-hydroxypropyl)-N-isopropyl-2,4- diméthoxy-3-méthylbenzamide (VIIIa) (VIIIa) Dans un ballon séché sous argon, 4,74 g (20 mmol, 1 éq ) d'amide (IX) et 6,1 mL (40 mmole, 2 éq) de TMEDA sont mis en solution dans 200mL de THF. Le milieu est alors placé à -78°C. 33,9 mL (44 mmole, 2,2 éq) de t-BuLi (1.3M en solution dans l'hexane) sont alors ajoutés et la solution est immédiatement réchauffée jusqu'à -15°C. Une fois la coloration rouge/orangée apparue, le milieu est refroidit à -78°C. 1,43 mL (20 mmole, 1 éq) d'oxyde de propylène sont alors ajoutés goutte à goutte. Une fois l'addition terminée, le milieu est réchauffé rapidement jusqu'à - 10°C. La solution est ensuite lentement ramenée à température ambiante en 1h30. Un deuxième ajout d'oxyde de propylène (1 eq.) est effectué si nécessaire (contrôle de la conversion par CCM). Après 30 minutes, la réaction est hydrolysée par ajout de 100 mL d'eau.

Après extraction au CH2C12 la phase organique est lavée par une solution saturée de NH4C1 puis par une solution saturée de NaHCO3. La phase organique est alors séchée par MgSO4r filtrée et concentrée sous vide. Suite à une purification par chromatographie sur silice en utilisant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (7 : 3), 5,9 g (82 %) d'amidoalcool (VIIIa) sont obtenus.

Analyses . H RMN (300 MHz, CDC13) ô ppm : 1,22-1,31 (3d, 9H, CH3), 2,10 (s, 3H, CH3), 2,71 (dd, J = 8,4 Hz et J = 13,5 Hz, 1H, CH), 2,80 (dd, J = 13,6 Hz et J = 3,6 Hz, 1H, CH), 41 H3 CO OCH3 O HN OH 42 3, 70 (s, 3H, CH3), 3,83 (s, 3H, CH3), 3,99 (se, 1H, CH), 4,17-4,33 (m, 1H, CH), 4,98 (s, 1H, 0-H), 6,26 (d, J = 8 Hz, 1H, NùH), 6,57 (s, 1H, CHar)• 3C RMN (75 MHz, CDC13) ô ppm : 8, 9, 22, 7, 23, 0, 24, 7, 5 42, 2, 43, 1, 55, 9, 62, 1, 69, 0, 108, 6, 118, 3, 123, 2, 138, 2, 156, 2, 159, 5, 167, 7.

3) Synthèse de la 6-(2-hydroxy-2-méthylpropyl)-N-isopropyl-2,4-diméthoxy-3-méthylbenzamide (VIIIb) OMeO 10 OH (VIIIb) Mode opératoire similaire à (VIIIa). Rdt = 75 %

Analyses: H RMN (300MHz, CDC13) ô ppm : 1,24 (d, J = 6,57 Hz, 6H, 15 CH3), 1,30 (s, 6H, CH3), 2,10 (s, 3H, CH3), 2,79 (s, 2H, CH2), 3,70 (s, 3H, CH3), 3,83 (s, 3H, CH3), 4,24-4,31 (m, 1H, CH), 5,68 (s, 1H, OH), 6,25 (d, J = 7.35 Hz, 1H, NH), 6,48 (s, 1H, CHar) 3C RMN (300MHz, CDC13) ô ppm : 8, 7, 22, 6, 30, 4, 42, 0, 20 46, 7, 55, 8, 62, 0, 69, 3, 110, 0, 118, 3, 123, 1, 137, 2, 156,2, 158,9, 167,8.

4) Synthèse de la 6,8-diméthoxy-3,7-diméthylisochroman-1- one (VIIa) (VIIa) 25 Dans un ballon séché sous argon, 4,05 g (14 mmoles, 1 éq) d'amidoalcool (VIIIa) et 3,68 g de CSA (15,4 mmoles, 1,1 43 éq) sont mis en solution dans 150mL de toluène. Le toluène est alors porté à reflux. Au bout de deux heures, la réaction est hydrolysée par 50 mL de H20.

Après extraction à l'acétate d'éthyle, la phase organique est lavée par une solution saturée de NH4C1 puis par une solution saturée de NaHCO3. La phase organique est alors séchée sur MgSO4r filtrée et concentrée sous vide. Le produit est alors précipité dans un volume minimum de cyclohexane. 3,02 g (92%) de lactone (VIIa) sont obtenus.

Analyses . H RMN (300 MHz, CDC13) 5 ppm : 1,47 (d, J = 6Hz, 3H, CH3), 2,13 (s, 3H, CH3), 2,71 (dd, J = 3,4 Hz et J = 15,8 Hz, 1H, CH), 2,80 (dd, J = 10,6 Hz et J = 16,2 Hz, 1H, CH), 3,85 (s, 3H, CH3), 3,87 (s, 3H, CH3), 4,48-4.59 (m, 1H, CH), 6,44 (s, 1H, CH). 13C RMN (75 MHz, CDC13) 5 ppm : 8,6, 20,8, 36,3, 55,8, 61,6, 73,9, 104,6, 110,7, 120,3, 140,4, 161,4, 162,4, 162,8.

5) Synthèse de la 6,8-diméthoxy-3,3,7- triméthylisochroman-1-one (VIIb) OCHO (VIIb) Mode opératoire similaire à (VIIa), Rdt = 75 %

Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,34 (s, 6H, CH3), 2,07 (s, 3H, CH3), 2,86 (s, 2H, CH2), 3,76 (s, 3H, CH3), 3,82 (s, 3H, CH3), 6,40 (s, 1H, CHar) 44 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 8, 5, 27, 1, 40, 6, 55, 7, 61, 4, 79, 0, 105, 3, 110, 5, 120, 1, 139, 1, 161, 1, 162, 1, 162, 4. 6) Synthèse de la 6,8-dihydroxy-3,7-diméthylisochroman-1- one (VIa) OH O(VIa) Dans un ballon séché sous argon, 3,02 (13 mmoles, 1 éq) de lactone (VIIa) et 17,33 g de AlC13 (130 mmoles, 10 éq) sont mis en solution dans 200 mL de dichlorométhane. Le solvant est alors porté à reflux. Au bout de 16 heures, la réaction est hydrolysée par 200 mL de HC1 1N à 0°C.

Après séparation de la phase organique, la phase aqueuse est réextraite par 2 x 100mL de AcOEt. La phase organique est alors séchée sur MgSO4r filtrée et évaporée sous vide. 2.71 g (100%) produit pur sont alors obtenus après précipitation dans la quantité minimale de dichlorométhane.

Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,24 (d, J = 6,27 Hz, 3H, CH3), 2,12 (s, 3H, CH3), 2,80-2,85 (m, 2H, CH2), 4,60-4,71 (m, 1H, CH), 5,43 (s, 1H, OH), 6,20 (s, 1H, CHar), 11,48 25 (s, 1H, OH). 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 7, 7, 21, 1, 34, 9, 76, 0, 101,8, 105,9, 110,9, 138,4, 160,3, 162,6, 170,6.

7) Synthèse de la 6,8-dihydroxy-3,3,7- 30 triméthylisochroman-1-one (VIb) OH O (VIb) Mode opératoire similaire à (VIa). Rdt = 78 % H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,40 (s, 6H, CH3), 2,01 (s, 3H, CH3), 2,91 (s, 1H, OH), 11,60 (s, 13C RMN (300MHz, 101,9, 107,8, 110,9, 139,4, 163,0, 163,4, 171,3. 8) Synthèse de la 6,8-bis(méthoxyméthyloxy)-3,7-diméthylisochroman-1-one (Va) O (Va) Dans un ballon séché sous argon, 2,6 g (12,7 mmoles, 1 éq) de diphénol (VIa) sont mis en solution dans 250 mL de THF. 660 mg de NaH (65 mmoles, 5 eq) ainsi que 14,8 mL d'une solution de MOMC1 à une concentration de 2,1N dans le toluène (31 mmoles, 3 éq) sont ajoutés à température ambiante. Au bout de 30 minutes, la réaction est hydrolysée par ajout de 50 mL de H20.

Après ajout de 100 mL d'une solution saturée de NH4C1, la phase aqueuse est extraite par 2 x 100 mL d'acétate d'éthyle. La phase organique est ensuite lavée par 100 mL d'une solution saturée de NaCl. La phase organique est alors séchée sur MgSO4r filtrée et concentrée sous vide. Suite à une purification par chromatographie sur silice en utilisant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (65 : 35), 3.08 g (98%) de lactone (Va) sont obtenus. 2H, CH2), 6,26 (s, 1H, CHar) , 7,76 (s, 1H, OH). CDC13) 5 ppm : 8, 4, 27, 9, 39, 8, 83, 2, Analyses . 1H RMN (300MHz, CDC13) ô ppm : 1,24 (d, J = 6,39 Hz, 3H, CH3), 2,20 (s, 3H, CH3), 2,84 (m, 2H, CH2), 3,48 (s, 3H, CH3), 3,60 (s, 3H, CH3), 4,54 (s, 1H, CH), 5,06 (dd, J = 6,6 Hz, 1H, CH), 5,13 (dd, J = 6,6 Hz, 1H, CH), 5,22 (dd, J = 6,8 Hz, 2H, CH2), 6,70 (s, 1H, CHar) 13C RMN (300MHz, CDC13) ô ppm : 9, 8, 21, 0, 36, 5, 56, 7, 57, 9, 74, 4, 94, 4, 101, 7, 108, 1, 111, 5, 121, 6, 140, 4, 159,6, 160,1, 163,5.

9) Synthèse de la 6,8-bis(méthoxyméthyloxy)-3,3,7- triméthylisochroman-1-one (Vb) 46 (Vb) Mode opératoire similaire à (Va). Rdt = 75 % 6H, CH3), 2,12 (s, 3H, CH3), 3,50 (s, 2H, CH2), 6,61 (s, Analyses: H RMN (300MHz, CDC13) ô ppm : 1,31 (s, 3H, CH3), 2,82 (s, 2H, CH2), 3,39 (s, 20 3H, CH3), 5,00 (s, 2H, CH2), 5,15 (s, 1H, CHar)

C RMN (300MHz, CDC13) ô ppm : 9, 3, 26, 7, 40, 3, 56, 2, 57, 4, 79, 1, 94, 0, 101, 3, 108, 5, 110, 9, 121, 0, 138, 7, 158,9, 159,8, 162,3. 25 10) Synthèse de la 6,8-bis(méthoxyméthyloxy)-3,7-diméthylisochroman-1-ol (IVa) (IVa) Dans un ballon séché sous argon, 588 mg de lactone (Va) (2 mmoles, 1 éq) sont mis en solution dans 20 mL toluène dans un ballon de 50 mL. A -78°C, 3,1 mL d'une solution de DIBAl-H à 0,87 M dans le toluène (2,6 mmoles, 1,3 éq) sont additionnés. Au bout de 1 heure, la réaction est hydrolysée par ajout de 50 mL de H20.

Le produit est extrait du milieu réactionnel par 50 mL de AcOEt et un autre lavage par HC1 1N est effectué. Deux lavages par une solution saturée de NaCl sont ensuite effectués et la phase organique est séchée sur MgSO4r filtrée et réduite sous vide. 592 mg (100%) de lactol (Iva) sont obtenus sans aucune purification.

Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,34 (d, J = 6,21 Hz, 3H, CH3), 2,14 (s, 3H, CH3), 2,61 (m, 2H, CH2), 3,47 (s, 3H, CH3), 3,61 (s, 3H, CH3), 3,62 (d, J = 2,8 Hz, OH), 4,40- 4,47 (s, 1H, CH), 5,03 (dd, J = 2,5 Hz, 2H, CH2), 5,18 (s, 2H, CH2), 5,17 (d, J = 2,85 Hz, 1H, CH), 6,65 (s, 1H, CHar) 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 10,2, 21,6, 35,8, 56,4, 57,8, 63,2, 89,3, 94,8, 100,2, 110,13, 118,8, 123,3, 133, 5, 154, 8, 156, 4.

11) Synthèse du 6,8-bis(méthoxyméthyloxy)-3,3,7- triméthylisochroman-1-ol (IVb) (IVb) Mode opératoire similaire à (Iva). Rdt = 99 %

Analyses: H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,23 (s, 3H, CH3), 1,47 (s, 3H, CH3), 2,2 (s, 3H, CH3), 2,65 (d, J = 15,5 Hz , 1H, CH), 2,65 (d, J = 15,5 Hz, 1H, CH), 3,49 (s, 3H, CH3), 3,61 (s, 3H, CH3), 4,13 (s, 1H, OH), 5,01-5,07 (dd, J = 2,7 Hz, 2H, CH2), 5,19 (s, 2H, CH2), 6,24 (d, 1H, CH), 6,69 (s, 1H, CHar)

12) Synthèse de la 7-hydroxy-3,7-diméthyl-3,4-dihydro-7H- isochromène-6,8-dione (IIa) O (IIa) Dans un ballon séché sous argon, 253 mg (0,85 mmol, 1 éq) de lactol (IVa) sont mis en solution dans 10 mL de dichlorométhane à température ambiante. 0,45 mL (6,0 mmoles, 7 éq) de TFA sont additionnés ainsi que 0,95 mg (3,4 mmoles, 4 éq) de IBX.

Après 3h, la suspension est filtrée sur fritté. Le filtrat est évaporé. Le résidu est alors purifié par chromatograhie sur silice en utilisant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (graduellement de 90/10 à 20/80). 118 mg (67 %) d'alcool (IIa) sont alors obtenus sous forme d'un mélange de diastéréoisomères.

Analyses .

H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,46-1,53 (m, 6H, CH3), 2,59-2,82 (m, 2H, CH2), 3,76 (se, 1H, OH), 4,36-4,43 (m, 1H, CH), 5,76 ( s, 1H, CH), 7,83 (s, 1H, CH). 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 20,1, 20,2, 28,9, 29,2, 5 35, 0, 35, 1, 75, 39, 75, 40, 83, 2, 83, 4, 110, 9, 115, 9, 116,4, 147,2, 147,6, 160,7, 195,2, 195,6, 197,5, 197,0.

13) Synthèse de la 7-hydroxy-3,3,7-triméthyl-3,4-dihydro- 7H-isochromène-6,8-dione (IIb) O (IIb) Mode opératoire similaire à (IIa) mais en partant de (IVb). Rdt = 44 %

Analyses . 15 1H RMN (300MHz, CD3CN) 5 ppm : 1,36 (s, 6H, H), 1,49 (s, 3H, CH3), 2,66 (s, 2H, CH2), 4,05 (se, 1H, OH), 5,78 (s, 1H, CH), 7, 75 (s, 1H, CH). 13C RMN (300MHz, CD3CN) 5 ppm : 25, 9, 26, 5, 28, 9, 39, 67, 81, 1, 83, 2, 109, 6, 116, 6, 147, 0, 159, 2, 195, 2, 197, 7. 20 Exemple 2 : Procédure générale de préparation des composés (I)

Pour les composés (Ia)-(Ih) . 25 Dans un ballon de 25 mL séché sous argon, (1 éq) de (IIa) ou (IIb) sont mis en solution dans 10 mL de toluène. 2 équivalents de Et3N sont additionnés ainsi que 1,5 équivalents de dioxinone de formule : 10 50 Des dioxinones portant des groupes R différents ont été utilisées pour synthétiser les composés (Ia) à (Ih) ci-après, de formule générale : Au bout de 2h de réaction à 100°C (température interne), la réaction est refoidie à température ambiante et hydrolysée par ajout de 25 mL de HC1 1N.

Le produit est extrait du milieu réactionnel par 25 mL de AcOEt et la phase organique est lavée par 25 mL d'HCl 1N. La phase organique est alors séchée sur MgSO4r filtrée et concentrée sous vide. Le produit (I) est alors purifié par chromatographie sur gel de silice en utilisant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle.

Les produits sont généralement obtenus sous forme d'un mélange de diastéréoisomères généralement non séparables par colonne chromatographique sur gel de silice.

Pour les composés (Ii)-(Im) : Le protocole expérimental est le même que celui mis en oeuvre pour la synthèse des composés (Ia)-(Ih), sauf que la dioxinone est utilisée sous sa forme énol silylé. Le protocole permettant de transformer la dioxinone en son dérivé silylé est décrit ci-dessous.

Des dioxinones portant des groupes R différents ont été utilisées pour synthétiser les composés (Ii) à (Im). 51 Dans un ballon séché sous argon, (1,3 mmoles, 1 éq) de dioxinone sont mis en solution dans 10 mL de CH2C12. 3,9 mmoles (3éq) de triéthylamine sont additionnés ainsi que 2 mmoles (1,5 éq) de triflate de t-butyldiméthylsilane.

Au bout de 1 h, la réaction est hydrolysée par ajout de mL d'une solution saturée de NaHCO3.

Le produit est extrait du milieu réactionnel par 50 mL de AcOEt et on effectue deux lavages par 100 mL d'une 10 solution saturée NH4C1 et enfin deux lavages par 50 mL d'une solution saturée de NaCl. La phase organique est alors séchée sur MgSO4r filtrée et réduite sous vide. Après une purification par chromatographie sur gel de silice en utilisant un mélange cyclohexane/acétate d'éthyle (graduellement 95/05 à 90/10), la dioxinone silylée est obtenue.

a) 3-benzoyl-6,9a-diméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2- g]isochromène-2,9-dione (Ia) (R1=H, R2=Me, R=Ph) Analyses: H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,47 (d, J = 6,4 Hz, 3H, CH3), 1,75 (s, 3H, CH3), 2,67 (ddd, J = 3,1-10,5 et 16,6 Hz, 1H, CH), 2,78 (dd, J = 3,6 et 16,6 Hz, 1H, CH), 4,33 (m, 1H, CH), 6,50 (s, 1H, CH), 7,45 (t, J = 7,4 Hz, 2H, CHar) , 7,57 (t, J = 7,5 Hz, 1H, CHar) , 7,82 (s, 1H, CH), 7,83 (d, J = 6,9 Hz, 2H, CHar) . (Ia) 52 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 19, 9, 27, 6, 35, 3, 86, 8, 110,8, 111,4, 119,69, 128,4, 129,6, 133,8, 136,3, 141,9, 160, 2, 168, 1, 169, 7, 188, 9, 189,3. b) 3-(4-méthoxybenzoyl)-6,9a-diméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g] isochromène-2,9-dione (Ib) (R1=H, R2=Me, R=p-OMePh) O Rdt = 62 % Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,46 (d, J = 6,4 Hz, 2,1H, CH3), 1,47 (d, J = 6,4 Hz, 0,9H, CH3), 1,74 (s, 2,1H, CH3), 1,74 (s, 0,9H, CH3), 2,56 (ddd, J = 1,8 - 11,1 et 15 17,0 Hz, 0,3H, CH), 2,67 (ddd, J = 1,1 - 10,6 et 16,4 Hz, 0,7H, CH), 2,76 (dd, J = 3,4 et 16,7 Hz, 1H, CH), 3,87 (s, 3H, CH3), 4,35 (m, 0,7H, CH), 4,42 (m, 0,3H, CH), 6,48 (s, 1H, CH), 6,92 (d, J = 8,9 Hz, 2H, CHar) , 7,81 (s, 0,7H, CH), 7,84 (s, 0.3H, CH), 7,84 (d, J = 9 Hz, 2H, 20 CHar) 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 20,1 (2C), 27,6, 28,0, 34, 7, 35, 5, 55,7 (2C), 75,5 (2C), 87,0 (2C), 110, 7, 111,0, 111,7, 111,8, 113,8 (2C), 113,9 (2C), 119,72, 120,6, 129,4, 129,5, 132,3 (4C), 141,4, 141,7, 160,07, 25 160,12, 164,40, 164,44, 168,4, 168,6, 168,9, 169,9, 187,2, 187,3, 189,6, 190,3. (Ib)10 c) 3-(furan-2-carbonyl)-6,9a-diméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g] isochromène-2,9-dione (Ic) (R1=H, R2=Me, R=2-furyl) O Rdt = 90 %

Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,49 (d, J = 6,4 Hz, 3H, CH3), 1,72 (s, 1,8H, CH3), 1,79 (s, 1,2H, CH3), 2,60 (dd, J = 11,1 et 17,1 Hz, 0,4H, CH), 2,70 (dd, J = 10,7 et 16,2 Hz, 0,6H, CH), 2,82 (dd, J = 2,8 et 16,4 Hz, 1H, CH), 4,33 (m, 0,6H, CH), 4,41 (m, 0,4H, CH), 6,58 (s, 1H, CH), 6,75 (s, 1H, CHar) , 7,60 (s, 1H, CHar) , 7,68 (s, 1H, CHar) , 7,82 (s, 0, 6H, CH), 7,85 (s, 0, 4H, CH). 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 20, 0, 20, 1, 27, 7, 28, 1, 34, 8, 35, 5, 75, 57, 75, 63, 86, 98, 87, 00, 111, 1, 111, 5, 111,6, 111,8, 112,9 (2C), 118,0, 119,2, 122,4, 122,5, 142,4, 142,9, 148,1, 148,2, 151,57, 151,62, 160,4 (2C), 167, 8, 168, 0, 171, 1, 172, 1, 174, 56, 174, 63, 189, 5, 190, 2. d) 3-(2-naphthoyl)-6,9a-diméthyl-5,6-dihydro-9aH- furo[3,2-g]isochromène-2,9-dione (Id) (R1=H, R2=Me, R=2-naphtyl) O (Ic) (Id) Rdt = 62 %.

Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,45 (d, J = 6,2 Hz, 1,5H, CH3), 1,46 (d, J = 6,2 Hz, 1,5H, CH3), 1,79 (s, 1,5H, CH3), 1,85 (s, 1,5H, CH3), 2,55 (dd, J = 10,7 et 16,6 Hz, 0,5H, CH), 2,66 (dd, J = 10,9 et 16,8 Hz, 0,5H, CH), 2,76 (d, J = 16,6 Hz, 0,5H, CH), 2,77 (d, J = 16,8 Hz, 0,5H, CH), 4,32 (m, 0,5H, CH), 4,42 (m, 0,5H, CH), 6,51 (s, 0,5H, CH), 6,53 (s, 0,5H, CH), 7,51-7,63 (m, 2H, CHar), 7,83-7,95 (m, 5H, 4CHar+1CH) , 7,84 (s, 1H, CHar) 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 20, 0, 20, 1, 27, 7, 28, 1, 34, 7, 35, 4, 75,5 (2C), 87,1 (2C), 110, 7, 111, 0, 111, 7, 111,8, 119,3, 120,2, 124,68, 124,72, 127,0 (2C), 127,9 (2C), 128,5 (2C), 129,0 (2C), 130,0 (2C), 132,3 (2C), 132,4 (2C), 133,85, 133,94, 136,1 (2C), 142,0, 142,3, 160,3 (2C), 168,3, 168,4, 169,7, 170,6, 188,86, 188,9, 189,6, 190,2.

e) 3-(4-(2-(2-méthoxyéthoxy)éthoxy)benzoyl)-6,9a- diméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g]isochromène-2,9-dione (Ie) (R1=H, R2=Me, R=4-(2-(2-méthoxyéthoxy)éthoxy)phényl) O Rdt = 15 % Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,47 (d, J = 6,4 Hz, 3H, CH3), 1,74 (s, 3H, CH3), 2,67 (dd, J= 10,6 et 16,4 Hz, O\~\ O' (1e) 5425 1H, CH), 2, 78 (dd, J= 3,8 et 16,5 Hz, 1H, CH), 3,39 (s, 3H, CH3), 3,57 (dd, J = 2,8 Hz et 4,9 Hz ,2H, CH2), 3,71 (t, J= 2,9 Hz et 4,9 Hz, 2H, CH2), 3,87 (t, J= 4,5 Hz, 2H, CH2), 4,21 (t, J = 4,5 Hz, 2H, CH2), 4,31 (m, 1H, CH), 6,46 (s, 1H, CH), 6,94 (d, J = 8,9 Hz, 2H, CHar), 7,82 (s, 1H, CH), 7,83 (d, J= 8,9 Hz, 2H, CHar) 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 19,0, 26,5, 34,3, 58,1, 69, 8, 70, 9, 74, 3, 85, 8, 109, 9, 110, 5, 113, 3, 4, 131, 2, 140, 2, 158, 9, 162, 5, 167, 4, 167, 7, 5.

f) 3-(2-méthoxybenzoyl)-6,9a-diméthyl-5,6-dihydro- 9aH-furo[3,2-g]isochromène-2,9-dione (If) (R1=H, R2=Me, R=2-méthoxyphényl O Rdt = 27 % Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,48 (d, J = 6,2 Hz, 3H, 20 CH3), 1,70 (s, 3H, CH3), 2,69 (dd, J = 10,9 et 16,2 Hz, 1H, CH), 2,83 (dd, J= 3,2 et 16,4 Hz, 1H, CH), 3,76 (s, 3H, CH3), 4,35 (m, 1H, CH), 6,75 (s, 1H, CH), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H, Cf-1,J, 7,02 (t, J= 7,4 Hz, 2H, CHar), 7,47 (t, J= 7,9 Hz, 2H, CHar), 7,54 (t, J= 7,6 Hz, 1H, Cf-1,J, 25 7,80 (s, 1H, CH). 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 20, 3, 27, 7, 35, 7, 56, 0, 75, 7, 86, 5, 111, 7, 111, 98, 112, 03, 121, 2, 122, 0, 128, 2, 130,6, 134,6, 141,6, 159,3, 159,9, 167,3, 168,3, 189,0, 190,2. 66, 6, 68, 5, 119, 5, 128, 186, 1, 188, g) 3-(2-hydroxybenzoyl)-6,9a-diméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g] isochromène-2,9-dione (Ig) (R1=H, R2=Me, R=2-hydroxyphényl) O Dans un ballon séché sous argon, 36 mg (0,1 mmole, 1 éq) de dérivé (If) et 100 mg (0,8 mmole, 8 éq) de A1C13 sont dissous dans 20 mL de dichlorométhane. Au bout de 1h30 heure, la réaction est hydrolysée par 50 mL de HC1 1N à 10 0°C.

Après séparation de la phase organique, la phase aqueuse est réextraite par 2 x 100mL de AcOEt. La phase organique est alors séchée sur MgSO4r filtrée et évaporée sous 15 vide. 2,71 g (100%) produit pur sont alors obtenus après précipitation dans la quantité minimale de dichlorométhane. 30 mg (85 %) de pro-fluorophore (Ig) sont obtenus.

20 Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,49 (d, J = 6,4 Hz, 3H, CH3), 1,77 (s, 3H, CH3), 2,69 (dd, J = 10,6 et 16,4 Hz, 1H, CH), 2,79 (dd, J = 3,6 et 16,8 Hz, 1H, CH), 4,35 (m, 1H, CH), 6,35 (s, 1H, CH), 6,91 (t, J = 7,9 Hz, 1H, 25 CHar) , 7,02 (d, J = 8,1 Hz, 1H, CHar) , 7,53 (t, J = 7,2 Hz, 1H, CHar) , 7,61 (d, J = 8,1 Hz, 1H, CHar) , 7,85 (s, 1H, CH), 11,82 (s, 1H, OH). 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 20, 2, 27, 7, 35, 5, 75, 7, 87, 3, 110, 3, 111, 5, 118, 5, 119, 4, 119, 5, 119, 9, 132, 8, 137, 9, 142, 1, 160, 7, 163, 3, 168, 0, 168, 3, 189, 3, 193,2.

h) 3-(4-méthoxybenzoyl)-6,6,9a-triméthyl-5,6- dihydro-9aH-furo[3,2-g]isochromène-2,9-dione (Ih) (R1=Me R2=Me, R=4-méthoxyphényl) O Rdt = 86 %

Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,36 (s, 3H, CH3), 1,42 (s, 3H, CH3), 1,76 (s, 3H, CH3), 2,57 (q, J = 16,58-26,37 Hz, 2H, CH2), 3,86 (s, 3H, CH3), 6,47 (s, 1H, CH), 6,91 (d, J 15 = 9,05 Hz, 2H, CHar) , 7,74 (s, 1H, CH), 7,82 (d, J = 8,85 Hz, 2H, CHar) 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 26, 3, 26, 4, 27, 9, 39, 8, 55, 7, 81, 2, 87, 0, 110, 6, 111, 4, 113, 8, 119, 9, 129, 4, 132, 3, 141, 4, 158, 8, 164, 4, 168, 5, 169, 3, 187, 2, 189,8. 20 i) (Z)-3-(3-hydroxy-3-(4-méthoxyphényl)acryloyl)- 6,9a-diméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g]isochromène-2,9-dione (Ii) (R1=H R2=Me, R=2-(4-méthoxyphényl)-2-hydroxy- 25 éthényl) 10 (Ih) O Rdt = 12 %

Analyses .

H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,49 (d, J = 6,4 Hz, 1,8H, CH3), 1,50 (d, J = 6,4 Hz, 1,2H, CH3), 1,69 (s, 1,2H, CH3), 1,76 (s, 1,8H, CH3), 2,65 (ddd, J = 1,7 - 10,73 et 17,0 Hz, 0,6H, CH), 2,73 (ddd, J = 1,5 - 11,1 et 16,8 Hz, 0,4H, CH), 2,87 (dd, J = 2,8 et 17,1 Hz, 1H, CH), 3,88 (s, 3H, CH3), 4,35 (m, 0,4H, CH), 4,45 (m, 0,6H, CH), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H, CHar) , 7,07 (s, 0,4H, CH), 7,09 (s, 0,6H, CH), 7,44 (s, 1H, CH), 7,81 (s, 0,4H, CH), 7,84 (s, 0, 6H, CH), 8,00 (d, J = 8,9 Hz, 2H, CHar) . 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm :20,2, 20,4, 27,9, 28,3, 35, 1, 35, 9, 55,9 (2C), 75, 79, 75, 84, 86,7 (2C), 97, 1, 97,14, 111,9, 112,0, 113,0, 113,4, 114,3 (4C), 114,6, 115,4, 128,8 (2C), 130,41 (2C), 130,44 (2C), 141,1, 141, 4, 160, 1, 160, 2, 164, 09, 164, 13, 166, 9, 167, 9, 168, 6, 168,7, 173,0 (2C), 189,9, 190,5, 190,57, 190,64. j) (Z)-3-(3-hydroxy-3-(4-méthoxyphényl)acryloyl)- 6,6,9a-triméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g]isochromène- 2,9-dione (Ij) (Rl=Me, R2=Me, R=2-(4-méthoxyphényl)-2-hydroxy- éthényl) O Rdt = 15 %

Analyses .

H RMN (300MHz, CDC13) b ppm 1,39 (s, 3H, CH3), 1,42 (s, 3H, CH3), 1,72 (s, 3H, CH3), 2,73 (d, J = 6,78 Hz, 2H, CH2), 3,88 (s, 3H, CH3), 6,94 (d, J= 9,03 Hz, 2H, CHar), 7,10 (s, 1H, CH), 7,45 (s, 1H, CH), 7,75 (s, 1H, CH), 7,99 (d, J= 8,85 Hz, 2H, CHar) 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 26, 2, 26, 6, 28, 0, 40, 1, 86, 5, 96, 9, 110, 7, 113, 6, 114, 1, 114, 7, 140,9, 158,8, 163,9, 167,3, 168,5, 172,6,

k) (Z)-3-(3-hydroxy-3-phénylacryloyl)-6,6,9a- triméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g]isochromène-2,9dione (Ik) (Rl=Me, R2=Me, R=2-phényl-2-hydroxy-éthényl) O O 55, 7, 81, 3, 128,6, 130,2, 189, 9, 190, 4. (Ik) Rdt = 39 % Analyses . 60 1H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,40 (s, 3H, CH3), 1,46 (s, 3H, CH3), 1,73 (s, 3H, CH3), 2,71 (d, J = 16,6 Hz, 1H, 81, 4, 86, 5, 133,2, 135,2, 10 190, 5. CH), 2,78 (d, J = 16,6 Hz, 1H, CH), 7,11 (s, 1H, CH), 7,46 (t, J = 7,2 Hz, 2H, CHar) , 7,50 (s, 1H, CH), 7,55 (t, J = 7,2 Hz, 1H, CHar) , 7,76 (s, 1H, CH), 8,00 (d, J = 7,4 Hz, 2H, CHar) 3C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 26,2, 26,5, 28,0, 40,1, 97, 3, 110, 7, 113, 5, 114, 6, 127, 9, 128, 8, 141,4, 159,0, 168,1, 168,3, 174,4, 189,8, 1) 3-(3-(4-méthoxyphényl)-2-méthyl-3-oxopropanoyl)- 6,6,9a-triméthyl-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g]isochromène-2,9-dione (Il) 15 (R1=Me, R2=Me, R=2-[1-(4-méthoxyphényl)-1-oxo-2- méthyl)propyl) Rdt = 25 %

20 Analyses . H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,40 (m, 9H, 3 x CH3), 1,69 (s, 3H, CH3), 2,70 (d, J = 3,21 Hz, 2H, CH2), 3,86 (s, 3H, CH3), 5,47 (q, J = 6,96 et 13,71 Hz, 1H, CH), 6,92 (d, J = 8,85 Hz, 2H, CHar), 7,09 (s, 1H, CH), 7,76 (s, 25 1H, CH), 7,93 (d, J = 8,85 Hz, 2H, CHar) 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 13,5, 26,3, 26,6, 28,4, 40, 0, 52, 3, 55, 6, 81, 6, 86, 6, 110, 8, 112, 8, 114, 1, 115, 9, 128, 7, 131, 2, 144, 4, 159, 7, 163, 8, 169, 1, 172, 9, 189, 5, 193,7, 197,3.

m) 6,6,9a-triméthyl-3-(2-méthyl-3-oxo-3- phénylpropanoyl)-5,6-dihydro-9aH-furo[3,2-g]isochromène-2,9-dione (Im) (R1=Me, R2=Me, R=2-(1-phényl-l-oxo-2-méthyl)propyl) O Rdt = 29 % Analyses: H RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 1,40-1,45 (m, 9H, CH3), 1,69 (d, J = 3,21 Hz, 3H, CH3), 2,72 (s, 2H, CH2), 5,45-5,61 (m, 1H, CH), 7,09 (s, 1H, CH), 7,45-7,57 (m, 3H, 15 CHar) , 7, 76 (s, 1H, CHar) , 7,95-8,00 (m, 2H, CHar) 13C RMN (300MHz, CDC13) 5 ppm : 13,0, 13,3, 26,3, 26,4, 26, 5, 28, 3, 28, 4, 40, 0, 52, 6, 52, 7, 81, 58, 81, 61, 86, 7, 86, 8, 110, 6, 110, 7, 112, 8, 113, 0, 115, 6, 115, 9, 128, 9, 133, 4, 135, 7, 135, 8, 144, 1, 144, 6, 159, 6, 159, 8, 169, 15, 20 169, 21, 172, 7, 173, 1, 189, 5, 189, 7, 193, 5, 193, 6, 198, 7, 199,2.

Exemple 3 : Absorption et émission des composés (la) à (Im) et de leurs adduits Appareillage : Acétonitrile : VWR qualité HPLC Micropipette : 5pL, 10 p L, 200 p L, 1000 p L, (Im) 25 62 Eppendorf : Safe look tube PCR Cuve UV : Varian -Quartz 10 mm d'épaisseur Cuve Fluorescence : Hellma -Quartz 10 mm d'épaisseur Vortex : Bender & Hobein - Genie 2 Centrifugeuse : Baky Bug Spectrophotomètre d'absorbance : Varian - Cary 50 scan Spectrophotomètre de fluorescence : Varian - Cary Eclipse Bain thermostaté : Varian - Cary single cell peltier accesory

Solution mère : Environ exactement 1 à 2 mg de composé la-Im sont pesés dans un tube eppendorf de 1,5 mL. Les solutions mères sont alors préparées par addition de 1 mL exactement d'acétonitrile et les tubes eppendorf sont alors conservés à l'abri de la lumière.

Absorbance et fluorescence avec des adduits avec la butylamine : Absorbance : 30 pL de solution mère sont placés dans un tube eppendorf de 1,5 mL. A température ambiante, 10 pL (ou 30 pL dans le cas de Ik) d'une solution de butylamine à 0,15 M/acétonitrile sont ajoutés et le milieu est agité par vortex puis centrifugé. Après dilution à 1 mL par ajout de 960 pL d'acétonitrile (ou 940 pL dans le cas de Ik), la solution limpide est transférée dans une cuvette UV puis complétée par 2 mL d'acétonitrile. L'analyse est alors effectuée après réalisation d'un spectre « blanc » avec une solution d'acétonitrile pure.

Fluorescence : 63 Deux protocoles ont étés mis en place pour les tests de fluorescence. - Pour les composés Ii-Ik : 125 IL de la solution précédente (solution d'absorbance) sont dilués à 1,25 mL par ajout de 1125 IL d'acétonitrile dans une cuvette de fluorescence. L'analyse est alors effectuée sur le spectrophotomètre de fluorescence par excitation aux longueurs d'onde respectives maximales d'absorption. -Pour les composés la-Ih et Il-Im : 1250 IL de la solution précédente (absorbance) sont placés dans une cuvette de fluorescence. L'analyse est alors effectuée sur le spectrophotomètre de fluorescence par excitation aux longueurs d'onde maximales respectives d'absorption.

Table UV et fluorescence des dérivés bioconjugués de Ia-Im avec la butylamine. BuNH2 acétonitrile O R la - Im fluorescent bioconjugué molécule bioconjuguée (BuNH2) dans CH3CN composé À UV À flua A Intensité (À initial (nm) excitation Stokes normalisée à (nm) 50 pM la 351/472 585 113 98 (exc 472) lb 351/452 586 134 205 (exc 452) le 352/465 593 128 193 (exc 465) Id 351/464 570 106 173 (exc 464) le 349/453 590 137 120 (exc 453) If 351/469 589 120 147 (exc 469) 57 Ig 350/463 9463) 134 32 (exc Ih 354/460 590 130 155 (exc 460) Ii 366/497 596 99 3020 (exc 497) Ij 366/505 603 98 3988 (exc 505) Ik 365/512 606 94 4157 (exc 512) Il 350/498 588 90 264 (exc 498) Im 351/489 591 102 202 (exc 489) épicocconone 388/515 610 95 3950 (exc 515)

Claims (12)

1. REVENDICATIONS1. Procédé de synthèse de composés de formule (I) (I), leurs tautomères, leurs stéréoisomères et leurs mélanges, dans laquelle R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène, un 10 halogène, un alkyle en Cl à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un 15 halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, un alcényle en C2 à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un 20 ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, R est un hydrogène, un halogène, 25 ou bien R représente -A-C, A désignant une liaison chimique ou un radical bivalent, linéaire ou ramifié, contenant 1 à 20 atomes de carbone, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, et pouvant 30 comporter une ou plusieurs insaturations, et pouvant5 66 éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy et un groupe oxo, et C étant un hydrogène ou un groupement monocyclique ou polycyclique, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, possédant éventuellement une ou plusieurs insaturations et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-0)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à 10, comprenant l'étape de réaction du composé de formule (II) (II) dans laquelle R1, R2 et R3 sont tels que définis 20 précédemment, avec un composé de formule (III) oxo o~R (III) ou un dérivé silylé de celui-ci, dans laquelle R est tel que défini précédemment, 25 en présence d'une base.
2. 2. Procédé de synthèse selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé de formule (II) est obtenu par réaction d'un composé de formule (IV) GpO OH ou un composé similaire, avec l'acide o-iodoxybenzoïque, en présence d'un acide choisi parmi l'acide trifluoroacétique, l'acide paratoluène sulfonique, l'acide perchlorique, l'acide chlorhydrique et l'acide acétique. De préférence, la réaction d'un composé de formule (IV) avec un acide tel que décrit ci-dessus est réalisée avec de l'acide oiodoxybenzoïque en présence d'acide trifluoroacétique.
3. 3. Procédé de synthèse selon la revendication 2, caractérisé en ce que le composé de formule (IV) est obtenu par réaction d'un composé de formule (V) avec de l'hydrure de diisobutylaluminium
4. 4. Procédé de synthèse selon la revendication 3, caractérisé en ce que le composé de formule (V) est obtenu par protection des fonctions alcool d'un composé de formule (VI) (IV) (V) OH O (VI).25 68
5. 5. Procédé de synthèse selon la revendication 4, caractérisé en ce que le composé de formule (VI) est obtenu par réaction d'un composé de formule (VII) OMe O avec un acide de Lewis. (VII)
6. 6. Procédé de synthèse selon la revendication 5, caractérisé en ce que le composé de formule (VII) est obtenu par réaction d'un composé de formule (VIII) OMe O (VIII) dans laquelle R4 représente un groupement choisi parmi l'isopropyle, l'éthyle et le tert-butyle, en milieu acide.
7. 7. Procédé de synthèse selon la revendication 6, caractérisé en ce que le composé de formule (VIII) est obtenu par réaction d'un composé de formule (IX) OMe O dans laquelle R4 représente un groupement choisi parmi 20 l'isopropyle, l'éthyle et le tert-butyle, avec un dérivé organolithien ou un dérivé organomagnésien ou un agrégat mixte, puis par réaction avec un composé de formule (X) R4 NH (IX)R2 (X) dans laquelle R1 et R2 sont tels que précédemment décrits
8. 8. Procédé de synthèse selon la revendication 7, 5 caractérisé en ce que le composé de formule (IX) est obtenu par réaction d'un composé de formule (XI) OMe avec un isocyanate de formule (XII) O~ iR4 N (XII) 10 dans laquelle R4 représente un groupement choisi parmi l'isopropyle, l'éthyle et le tert-butyle, en présence d'un acide de Lewis.
9. 9. Composés de formule (I') O 15 R' leurs tautomères, leurs stéréoisomères et leurs mélanges, dans laquelle R1, R2 et R3 sont chacun indépendamment un hydrogène, un 20 halogène, un alkyle en Cl à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un 25 halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, (XI) 70 un alcényle en C2 à C20, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy, oxo, amino, amido, éther, ester et urée, R' représente -A-C', A désignant une liaison chimique ou un radical bivalent, linéaire ou ramifié, contenant 1 à 20 atomes de carbone, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, et pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un groupe hydroxy et un groupe oxo, et C' étant un groupement monocyclique ou polycyclique, pouvant éventuellement comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi 0, N, S et P, possédant éventuellement une ou plusieurs insaturations et pouvant éventuellement être substitué par un ou plusieurs substituants identiques ou différents choisis parmi un halogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alcényle linéaire ou ramifié, un groupe hydroxy, oxo, amino, alkylamino, imino, alkylimino, énamine, acyle, alkyloxy, alcényloxy, alcynyloxy, aryle, hétéroaryle et un groupe de type poly(alkyloxy) de formule -0-([alkyle en Cl à C4]-O)n-(alkyle en Cl à C4), n valant 1 à10.
10. 10. Utilisation d'un composé obtenu selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, ou d'un composé de formule (I') selon la revendication 9, en tant que colorant ou marqueur fluorescent. 71
11. 11. Méthode de marquage fluorescent d'une molécule organique comprenant l'étape de la mise en contact d'un composé obtenu selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, ou d'un composé de formule (I') selon la revendication 9, avec ladite molécule organique de manière à lier de façon covalente ledit composé sur ladite molécule organique.
12. 12. Méthode de marquage selon la revendication 11, caractérisé en ce que ladite molécule organique est choisie parmi une protéine, un peptide, un sucre, un acide nucléique, une molécule constituant la paroi d'une cellule et un détergent, ou la molécule organique est comprise dans un anticorps ou dans une cellule.